CN111603501B - 一种用于原发性肝癌的中药组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于原发性肝癌的中药组合物及其应用。所述中药组合物包括如下重量份的药材：银杏叶1‑30份，木蝴蝶1‑20份，苦参1‑20份，甘草1‑10份。药理试验表明，本发明所述的中药组合物对人肝癌(Hep 3B和Huh7)移植瘤的生长均有显著的抑制作用。

Description

一种用于原发性肝癌的中药组合物及其应用

技术领域

本发明属于中医药和医药学技术领域，具体涉及一种用于原发性肝癌的中药组合物及其应用。

背景技术

原发性肝癌(Primary Carcinoma of Liver,PLC)是指发生于肝细胞或肝内胆管细胞的恶性癌肿，其中肝细胞癌占原发性肝癌中的绝大多数。原发性肝癌是我国乃至世界上最常见、最具有危害性的恶性肿瘤之一。近年来原发性肝癌的发病率在全球范围内均有增加趋势，其发病率和死亡率居恶性肿瘤的第5位和第3位。

现代医学治疗原发性肝癌主要根据肝癌的分期选择治疗方案，治疗主要包括：手术治疗(肝切除术、肝移植术)、消融治疗、肝动脉栓塞化疗(TACE)、分子靶向药物治疗、抗病毒治疗及生物治疗、放射治疗、综合化疗，以及近年来发展迅速的免疫、基因、内分泌等多种生物技术；其中手术治疗是首选也是最有效的方法。由于起病隐匿，相当一部分原发性肝癌患者被发现时已丧失手术机会。而且即使获得根治性切除，5年内仍有60％～70％的病人出现转移复发。因此，非手术的药物治疗对于不能手术以及手术后的肝癌患者都是重要的治疗手段。针对原发性肝癌的药物也一直是医药研究热点。

原发性肝癌在中医中属于“癥瘕、积聚、臌胀、积证、痃癖、肥气”等范畴。多数医家认为其最重要、最基本的病机主要为虚损生积、毒瘀内结，多是因为正气内虚、感受邪毒、情志怫郁、饮食损伤、素有旧疾等因素，使脏腑功能失调,气血津液运行失常,产生气滞、血瘀、痰浊、湿浊、热毒等病理变化,蕴结于脏腑,相互搏结,日久积渐而成的一类本虚标实的恶性疾病。

针对肝癌患者本虚标实、虚实错杂的特点，中医治疗肝癌多采用扶正祛邪、标本兼治的原则。治标之法常用疏肝理气、活血化瘀、清热利湿、泻火解毒、消积散结等法；治本之法常用健脾益气、养血柔肝、滋补阴液等法。如公开号CN 104399012A的中国发明专利申请公开了一种用于原发性肝癌辅助治疗的中药组合物，由下列重量份的中药原料制备而成：黄芩20-30份，白芍20-30份，浙贝母25-40份，柴胡20-35份，牡丹皮20-30份，焦栀子20-30份，茯苓15-25份，白术15-25份，厚朴15-25份，陈皮12-24份，苦杏仁12-24份，郁金25-40份，甘草6-12份。再如公开号CN 102302663A的中国发明专利申请也公开了一种治疗原发性肝癌的中药组合物，由麝香10-30g，牛黄25-50g，浙贝母30-60g，穿山甲30-60g，人参20-50g，西洋参25-60g，三七35-55g，延胡索30-60g作原料制成。上述两种组合物都体现了活血散瘀清热通络、益气养阴柔肝的治则和组方原则。

虽然药物研究和临床工作者都致力于肝癌治疗药物的研究和开发，但是，据世界卫生组织国际癌症研究署发布的2015年全球癌症报告显示，全球肝癌死亡人数约为75.1万，我国每年约有38.3万人死于肝癌，占全球肝癌死亡总数的51％。因此，临床上原发性肝癌的治疗需求远未得到满足。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种用于治疗原发性肝癌的药物组合物。该中药组合物组方思路新颖，组成简单；初步实验显示其对人肝癌细胞株(Hep 3B和Huh7)移植瘤的生长均有显著的抑制作用，提示其能够用于治疗原发性肝癌。

为了达到上述技术效果，本发明采用了如下的技术方案：

一种用于原发性肝癌的中药组合物，原料包括如下重量份的药材：

银杏叶1-30份，木蝴蝶1-20份，苦参1-20份，甘草1-10份。

优选地，所述用于原发性肝癌的中药组合物，原料包括如下重量份的药材：

银杏叶10-25份，木蝴蝶5-15份，苦参5-15份，甘草2-8份。

更优选地，所述用于原发性肝癌的中药组合物，原料包括如下重量份的药材：

银杏叶20份，木蝴蝶12份，苦参12份，甘草5份。

作为一种优选的实施方式，本发明提供的用于原发性肝癌的中药组合物，原料由银杏叶、木蝴蝶、苦参、甘草组成，各药材的重量份如上所定义。

本发明还有一个目的在于提供一种药物，包括上述中药组合物，还可以包括或不包括药学上可以接受的辅料。

所述药物是临床上可以接受的任意一种制剂，优选为口服制剂，选自汤剂、散剂、胶囊剂、片剂、蜜丸剂、水蜜丸剂、水丸剂、浓缩丸剂、糊丸剂、蜡丸剂、颗粒剂、口服液或滴丸剂，更优选为汤剂或颗粒剂。

本发明的第三个目的在于提供上述药物的制备方法，包括按照所述重量份准备各药材，按照本领域常规方法，加入或不加入药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂。

此外，本发明还提供上述中药组合物、上述药物或按照上述制备方法制备的药物在制备治疗肝癌，尤其是原发性肝癌的药物中的应用。

本发明所述的组合物及其制备的药物可以用于不能手术切除的原发性肝癌的治疗，也可以用于原发性肝癌手术后的治疗，以及手术后复发的肝癌的治疗。

本发明所述药学上可以接受的辅料，包括但不限于(1)稀释剂，例如淀粉、糖粉、糊精、乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸氢钙、药用碳酸钙等)、甘露醇等、植物油、聚乙二醇等；(2)粘合剂，例如蒸馏水、乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素和乙基纤维素、羟丙甲纤维素等；(3)崩解剂，例如干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠等；(4)润滑剂，例如硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇类、月桂醇硫酸镁等；(5)溶剂，例如水、乙醇溶液等。

在本说明书中，各组分的“重量份”表示的是各成分之间的用量配比关系，而非实际的质量单位。根据实际情况，单位重量份可以是任意质量，如1重量份可以是1g、500g或1kg，甚至可以是15g、30g等。

银杏叶为银杏科植物银杏(Ginkgo biloba L.)的干燥叶，味甘、苦、涩，性平，归心、肺经，具有活血化瘀、通络止痛、敛肺平喘、化浊降脂的功效，用于瘀血阻络、胸痹心痛、中风偏瘫、肺虚咳喘、高脂血症。以银杏叶提取物为活性成分的银杏叶片主治瘀血阻络所致的胸痹心痛，中风，半身不遂，舌强语謇；冠心病稳定型心绞痛、脑梗死见上述证候者。

木蝴蝶为紫葳科植物木蝴蝶(Oroxylum indicum(Linn.)Kurz)的干燥成熟种子，味苦、甘，性凉，有清肺利咽、疏肝和胃之功效，常用于肺热咳嗽、喉痹、音哑、肝胃气痛。

苦参为豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait.)的干燥根，味苦，性寒，有清热燥湿、杀虫、利尿之功，用于热痢、便血、黄疸尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤瘙痒、疥癣麻风，外治滴虫性***炎。

甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、胀果甘草(Glycyrrhizainflata Bat.)或光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)的干燥根和根茎；性甘，味平，归心、肺、脾、胃经；具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药之功效；常用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，以及缓解药物毒性、烈性。

上述四味药材种，银杏叶为君药，起到活血化瘀、通络止痛的作用；辅以木蝴蝶和苦参，二药均有清热之功；再佐以甘草补脾益气，清热解毒，缓急止痛，调和诸药。以上诸药合用，共奏活血通络，清热化瘀，舒肝和胃之功。

上述四味药材中，苦参因其具有清热之功，甘草能调和诸药，而出现在一些治疗肝癌的中药组合物中。如“背景技术”部分提及的公开号CN 104399012A的中国发明专利申请公开的包括甘草的中药组合物。再如公开号CN109381679A(公开日2019年2月26日)的中国发明专利申请，公开了一种防治肝癌前病变及肝癌的药物组合物，以桑寄生、生黄芪、丹参、郁金、苦参、莪术、马鞭草、鹅去氧胆酸为原料药。银杏叶和木蝴蝶均较少应用于治疗肝癌，尤其是作为君药和臣药配伍用于肝癌的治疗更是未见报道。因此，本发明所述的治疗原发性肝癌的中药组合物组方新颖，虽仅四味，但是对人肝癌细胞株(Hep 3B和Huh7)移植瘤的生长均有显著的抑制作用，因此，提示本发明所述的中药组合物可以用于治疗原发性肝癌。

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。

实施例1一种用于原发性肝癌的中药组合物

本实施例的所述中药组合物的原料组成为(1份＝1kg)：

银杏叶20份，木蝴蝶12份，苦参12份，甘草5份。

实施例2一种用于原发性肝癌的中药组合物

本实施例的所述中药组合物的原料组成为(1份＝1kg)：

银杏叶15份，木蝴蝶10份，苦参10份，甘草5份。

实施例3一种用于原发性肝癌的中药组合物

本实施例的所述中药组合物的原料组成为(1份＝1kg)：

银杏叶25份，木蝴蝶15份，苦参15份，甘草5份。

实施例4一种胶囊剂

取实施例1的中药组合物，混合后碾成细粉，过100目筛，装入胶囊，0.4g生药/粒，即得。

用量用法：每日三次，每次服用2-4粒，温水送服。

实施例5一种颗粒剂

取实施例2的中药组合物，混合后碾成细粉，过200目筛，加入适量糊精做填充剂，制粒、压制成颗粒剂，6g/袋，分装，即得。

用量用法：每日三次，每次10g，温水送服。

实施例6一种片剂

取实施例3的中药组合物，混合后碾成细粉，过80-100目筛，加糊精直接压制成片剂，0.3g生药/片，即得。

用量用法：每日三次，每次2-4片，温水送服。

实施例7一种蜜丸剂

取实施例1的中药组合物，混合后碾成细粉，过60-100目筛，加入适当炼蜜后，按照常规方法制备成小蜜丸剂，3g/10丸，即得。

用量用法：每日三次，每次3克，温水送服。

实施例8一种汤剂

按照如下质量称取各药材：

银杏叶20g，木蝴蝶12g，苦参12g，甘草5g。

各味药材混合，加入5～10倍重量的水，加热沸腾后煎煮25分钟，乘热过滤；药渣加入5～10倍重量的水，加热至沸腾，煎煮20～30分钟，乘热过滤，合并两次的药液，即得。分2～3次，1日内服完。

实验例药效学实验

1.材料

1.1实验药物：

(1)中药组合物：

①颗粒1(本发明中药组合物：银杏叶15g，木蝴蝶10g，苦参10g，甘草5g)，淡黄色粉末；颗粒2(对照中药组合物1：银杏叶15g，木蝴蝶10g，苦参10g)，淡黄色粉末；颗粒3(对照中药组合物2：银杏叶15g，木蝴蝶10g，甘草5g)，由中国中医科学院临床基础研究所提供，均按照实施例5中的方法制备，于2019年11月21日接收，阴凉柜干燥保存。临用前用养鱼用水配成20mg/mL溶液。

②顺铂，淡黄色粉末，批号为k1520124，阿拉丁试剂(上海)有限公司，阴凉保存。临用时用DMSO配制成15mg/mL母液。

1.2实验动物

①野生型AB品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，共330尾，每实验组为30尾，年龄为3dpf，用于本发明中药组合物的最大检测浓度(MTC)测定。

②野生型AB品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，共600尾，每实验组为30尾，年龄为2dpf，用于本发明中药组合物抗原发性肝癌作用评价。

饲养于28℃的养鱼用水中(水质：每1L反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为480～510μS/cm；pH为6.9～7.2；硬度为53.7～71.6mg/L CaCO3)，实验动物使用许可证号为：SYXK(浙)2012-0171。饲养管理符合国际AAALAC认证的要求。

1.3实验仪器：

①解剖显微镜(SZX7，OLYMPUS，Japan)；

②CCD相机(VertA1，上海土森视觉科技有限公司，China)；

③显微注射仪(IM300，NARISHIGE，Japan)；

④电动聚焦连续变倍荧光显微镜(AZ100，Nikon，Japan)；

⑤精密电子天平(CP214，OHAUS，America)；

⑥6孔板(Nest Biotech，Shanghai，China)。

2.方法

(1)浓度组别

(2)模型制作

用绿色荧光染料标记人肝癌(Hep 3B和Huh7)细胞，以显微注射的方式移植到斑马鱼卵黄囊内，每尾移植约200个细胞，建立斑马鱼人肝癌移植模型。

(3)实验方法

①MTC的测定

随机选取330尾3dpf野生型AB品系斑马鱼于六孔板中，每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼，分别水溶给予本发明中药组合物的药物浓度为100、250、500、1000和2000μg/mL浓度，同时设置正常对照组，每孔(实验组)容量为3mL。35℃培养箱培养至5dpf，统计斑马鱼的死亡情况，根据斑马鱼毒性反应和死亡情况确定本发明中药组合物对正常斑马鱼的MTC。

②评价本发明中药组合物对肝癌(Hep 3B和Huh7)生长抑制作用

使用绿色荧光染料分别标记人肝癌(Hep 3B和Huh7)细胞，以显微注射的方式移植到2dpf野生型AB品系斑马鱼卵黄囊内，每尾移植约200个细胞，建立斑马鱼人肝癌移植模型；将注射人肝癌细胞的斑马鱼放置35℃培养至3dpf。3dpf时，在显微镜下挑选出移植瘤一致性较好的斑马鱼，随机分配至6孔板中，每孔30尾，每孔养鱼水容量为3mL。分别水溶给予本发明中药组合物(颗粒1)、对照中药组合物1(颗粒2)和对照中药组合物2(颗粒3)27.8、83.3和250μg/mL浓度，阳性对照组水溶给予顺铂15μg/mL浓度，同时设置模型对照组。35℃培养箱处理至5dpf，每个实验组随机选择10尾斑马鱼在荧光显微镜下进行观察、拍照并保存图片；利用尼康NIS-Elements D 4.30.00高级图像处理软件进行图像分析，计算斑马鱼移植瘤荧光强度(S)，以荧光强度的统计分析结果评价本发明中药组合物对斑马鱼人肝癌生长抑制作用。统计学处理结果用mean±SE表示，对斑马鱼肿瘤生长的抑制作用计算公式如下：

统计学分析采用单因素方差分析和Dunnett’s T检验，p<0.05表明具有显著性差异，提供具有代表性的实验图谱。

(4)实验结果

①MTC的测定

本发明中药组合物在500μg/mL浓度诱发正常斑马鱼不超过10％的死亡和明显的毒性，在250μg/mL浓度不诱发肿瘤模型斑马鱼的死亡和毒性表型，因此，确定本发明中药组合物斑马鱼人肝癌生长抑制作用的MTC为250μg/mL。详见表1。

表1.本发明中药组合物处理正常斑马鱼后“浓度-致死性”结果(n＝30)

②本发明中药组合物对Hep 3B移植瘤的抑制作用

顺铂15μg/mL浓度斑马鱼Hep 3B移植瘤荧光强度为110365像素，与模型对照组(271643像素)比较有显著性差异(p<0.001)，肿瘤生长抑制作用为59％，表明阳性对照药可显著抑制Hep 3B移植瘤生长。

本发明中药组合物(颗粒1)27.8、83.3和250μg/mL浓度组斑马鱼Hep 3B移植瘤荧光强度分别为144134、109757和67956像素，与模型对照组(271643像素)比较均有极显著性差异(分别地，p＝0.001，p<0.001和p<0.001)，肿瘤生长抑制作用分别为47％、60％和75％。详见表2。

对照中药组合物1(颗粒2)27.8、83.3和250μg/mL浓度组斑马鱼Hep3B移植瘤荧光强度分别为187433、154836和138537像素，与模型对照组(271643像素)比较均p<0.001，肿瘤生长抑制作用分别为31％、43％和49％。虽然颗粒2各剂量组与模型组比较都有显著差异(p<0.01)，但抑瘤率均显著低于相同浓度的本发明中药组合物(均p<0.05)，说明本发明中药组合物(颗粒1)对斑马鱼Hep 3B移植瘤的抑制作用明显强于对照中药组合物1(颗粒2)。详见表2。

对照中药组合物2(颗粒3)27.8、83.3和250μg/mL浓度组斑马鱼Hep3B移植瘤荧光强度分别为173851、152120和146687像素，与模型对照组(271643像素)比较均p<0.001，肿瘤生长抑制作用分别为36％、44％和46％。与颗粒2类似，虽然颗粒3各剂量组与模型组比较都有显著差异(p<0.01)，但抑瘤率也均显著低于相同浓度的本发明中药组合物(均p<0.05)，说明本发明中药组合物(颗粒1)对斑马鱼Hep 3B移植瘤的抑制作用也明显强于对照中药组合物2(颗粒3)。详见表2。

表2.本发明中药组合物对斑马鱼Hep 3B移植瘤的抑制作用(n＝10)

注：与模型对照组比较，**p<0.01，***p≤0.001；与颗粒1相同剂量组比较，^#p<0.05。

③本发明中药组合物对Huh7移植瘤的抑制作用

顺铂15μg/mL浓度斑马鱼Huh7移植瘤荧光强度为89116像素，与模型对照组(258484像素)比较p<0.001，肿瘤生长抑制作用为66％，表明阳性对照药可显著抑制Huh7移植瘤生长。

本发明中药组合物(颗粒1)27.8、83.3和250μg/mL浓度组斑马鱼Huh7移植瘤荧光强度分别为130408、114757和107326像素，与模型对照组(258484像素)比较均有极显著性差异(分别地，p＝0.001，p<0.001和p<0.001)，肿瘤生长抑制作用分别为50％、56％和58％。表明本发明中药组合物对斑马鱼Huh7移植瘤的生长均有显著的抑制作用。详见表3。

对照中药组合物1(颗粒2)27.8、83.3和250μg/mL浓度组斑马鱼Huh7移植瘤荧光强度分别为180938、168014和165429像素，与模型对照组(258484像素)比较均p<0.001，肿瘤生长抑制作用分别为30％、35％和36％。虽然颗粒2各剂量组与模型组比较都有显著差异(p<0.01)，但抑瘤率均显著低于相同浓度的本发明中药组合物(均p<0.05)，说明本发明中药组合物(颗粒1)对斑马鱼Huh7移植瘤的抑制作用明显强于对照中药组合物1(颗粒2)。详见表3。

对照中药组合物2(颗粒3)27.8、83.3和250μg/mL浓度组斑马鱼Huh7移植瘤荧光强度分别为173184、162844和149920像素，与模型对照组(258484像素)比较均p<0.001，肿瘤生长抑制作用分别为33％、37％和42％。虽然颗粒3各剂量组与模型组比较都有显著差异(p<0.01)，但抑瘤率均显著低于相同浓度的本发明中药组合物(均p<0.05)，说明本发明中药组合物(颗粒1)对斑马鱼Huh7移植瘤的抑制作用明显强于对照中药组合物2(颗粒3)。详见表3。

表3.本发明中药组合物对斑马鱼Huh7移植瘤的抑制作用(n＝10)

与模型对照组比较，**p<0.01，***p≤0.001；与颗粒1相同剂量组比较，^#p<0.05。

总之，本发明提供了一种可以用于原发性肝癌的中药组合物。该组合物包括银杏叶、木蝴蝶、苦参和甘草，诸药合用，共奏活血通络，清热化瘀，舒肝和胃之功。药理实验证明本发明的中药组合物对人肝癌(Hep 3B和Huh7)移植瘤的生长均有显著的抑制作用。本发明为原发性肝癌患者以及医生提供了新的临床治疗选择。

Claims (9)

1.一种用于原发性肝癌的中药组合物，原料由如下重量份的药材组成：

银杏叶10-25份，木蝴蝶5-15份，苦参5-15份，甘草2-8份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的原料由如下重量份的药材组成：

银杏叶20份，木蝴蝶12份，苦参12份，甘草5份。

3.一种药物，包括权利要求1或2所述的中药组合物，还包括或不包括药学上可以接受的辅料。

4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述药物是临床上可以接受的任意一种制剂。

5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，所述制剂为口服制剂。

6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述口服制剂选自汤剂、散剂、胶囊剂、片剂、蜜丸剂、水蜜丸剂、水丸剂、浓缩丸剂、糊丸剂、蜡丸剂、颗粒剂、口服液或滴丸剂中的一种或多种。

7.权利要求3至6中任一项所述的药物的制备方法，包括按照所述重量份准备各药材，按照本领域常规方法，加入或不加入药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂。

8.权利要求1或2所述的中药组合物、权利要求3至6中任一项所述的药物或按照权利要求7所述的制备方法制备的药物在制备治疗肝癌的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述肝癌为原发性肝癌。