CN111557893A - 一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，包括提取充质干细胞、培育充质干细胞、提取干细胞外泌体、面膜材料制备、合成面膜。本发明的有益效果是：避免了运输过程中的感染等意外，同时也避免了互相感染的问题，通过两次过滤和提前杀菌来确保该面膜在生产过程中原料的完整性和高纯度，提高面膜具有的功能，白芨，川穹，紫草在负压条件下研磨粉碎确保白芨，川穹，紫草等原材料研磨充分，且不会被温度破坏其活性，保证面膜的功能完全，方便制备与备用，混合化学溶液保证原料的充分混合，且确保材料的活性，不会丢失，且使得各种原料都能发挥其作用，提高使用人员的吸收效率，使得保养物质更容易渗透被吸收。

Description

一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法
技术领域
本发明涉及一种干细胞外泌体研究方法，具体为一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，属于干细胞应用技术领域。
背景技术
外泌体是由胞吐作用释放到细胞外的纳米级外脂质双层囊泡，可存在于多种类型的细胞外体液中，如血液、尿液、羊水、唾液、脑脊液甚至母乳，研究发现，外泌体中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞，从而改变其它细胞的功能，如：外泌体参与神经元通信、抗原呈递、免疫反应、器官发育和生殖等基本的生理过程的调控，还参与调控癌症进展、心血管疾病、炎症、神经退行性疾病、病毒感染和朊病毒传播等病理过程。
间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)是干细胞家族的重要成员，是中胚层来源的非造血细胞。其来源丰富，可由胎盘、乳牙、脂肪、骨髓、骨小架、骨膜、骨骼肌、皮肤、外周血和脐带等组织器官中分离得到，MSCs可分泌多种生长因子(如表皮生长因子、血管内皮生长因子、胶原蛋白和纤维粘连蛋白等)及炎性因子(干扰素γ、白细胞介素9及肿瘤坏死因子α等)，在抑制皮肤老化、紧致肌肤、辅助脂肪移植、促进毛发再生等诸多抗衰老方面均有较显著的效果。
近年来，干细胞在紧致皮肤的化妆品中的应用也成为了研究的热点，尤其面膜上的应用较为广泛，但是现有的大多数面膜，人脸对其内的物质吸收不到位，导致面膜效果并不明显，且现有的部分含有干细胞外泌体的面膜在制作时物质混合不均匀或者除菌不彻底，都容易导致面膜的效用下降。
发明内容
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的：一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，包括以下步骤：
步骤一、提取充质干细胞，利用血液中提取的成体充质干细胞进行无血清培养；
步骤二、培育充质干细胞，将提取的充质干细胞放入无血清培养基中培养，并在培养基中加入血清普代物，L-谷氮酸酰胺，脱氧核糖核昔，FGF和TGF-B；
其中，无血清培养基中血清曾代物的体积分数为15-20％，L-谷気酸酰胺的浓度为280-300ng/mol，脱氧核糖核昔的浓度为l0-20ng/mol，成纤维细胞生长因子的浓度为15-25ng/mol，转化生长因子・B的浓度为15-25ng/mol，维生素B5的浓度为3-5ng/mol，维生素B12的浓度为0.02ng/mol。
步骤三、提取干细胞外泌体，收集培养基中的上清液，釆用0.2-0. 22md的无菌过滤器对收集得到的混合液进行初次过滤，再用滤膜进行二次过滤，然后经过浓缩、冷冻干燥后，制得干细胞外泌体冻干粉；
步骤四、面膜材料制备，将白芨，川穹，紫草研磨粉碎，并加入重量2倍的甲醇混合溶液进行充分的搅拌得到初步混合液，留待后用，再将甜杏仁油、十二甲基环六硅氧烷、大豆异黄酮、甘硼酸二甲和蛋黄卵磷脂溶于丙三醇溶液进行完全溶解得到混合溶液，再将五元胜肽、羟乙基纤维素钠、鲸蜡硬脂醇依次加入到混合溶液内进行溶解，得到新的化学混合溶液进行保存。
步骤五、合成面膜，将干细胞外泌体冻干粉溶解与步骤四所得的混合溶液内，并加入抗菌剂、乳化剂和活性剂，用磁力棒进行搅拌，调节溶液ph值到6-7，并将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤一中，在提取充质干细胞时，利用输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，经过滤网过滤留下所需的MSC液体，流出到培养基上，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤三中，滤膜采用无菌滤网，其网孔直径为0.5mm，无菌过滤器和滤膜在使用前用紫外线照射进行消毒杀菌。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤四中，白芨，川穹，紫草在负压条件下研磨粉碎，所得的初步混合溶液用冷风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度在-10℃-10℃，粉碎物表面温度控制在-20℃—-10℃，研磨时间40-50min，并进行过滤浓缩。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤四中，混合化学溶液在真空环境下进行加热至60-70℃，并将五元胜肽、羟乙基纤维素钠、鲸蜡硬脂醇加入后得到新的化学混合溶液进行震荡分散处理20-30min。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤五中，将步骤三和步骤四所得的原料进行混合，并搅拌均匀，高压均质处理15min，静置10-15h。
本发明的有益效果是：该含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法设计合理：
1、在提取充质干细胞时，利用输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，经过滤网过滤留下所需的MSC液体，流出到培养基上，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基，避免了运输过程中的感染等意外，同时也避免了互相感染的问题；
2、滤膜采用无菌滤网，其网孔直径为0.5mm，无菌过滤器和滤膜在使用前用紫外线照射进行消毒杀菌，通过两次过滤和提前杀菌来确保该面膜在生产过程中原料的完整性和高纯度，提高面膜具有的功能；
3、白芨，川穹，紫草在负压条件下研磨粉碎，所得的初步混合溶液用冷风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度在-10℃-10℃，粉碎物表面温度控制在-20℃—-10℃，研磨时间40-50min，并进行过滤浓缩，确保白芨，川穹，紫草等原材料研磨充分，且不会被温度破坏其活性，保证面膜的功能完全，方便制备与备用；
4、混合化学溶液在真空环境下进行加热至60-70℃，并将五元胜肽、羟乙基纤维素钠、鲸蜡硬脂醇加入后得到新的化学混合溶液进行震荡分散处理20-30min，保证原料的充分混合，且确保材料的活性，不会丢失，且使得各种原料都能发挥其作用，提高使用人员的吸收效率，使得保养物质更容易渗透被吸收。
5、将步骤三和步骤四所得的原料进行混合，并搅拌均匀，高压均质处理15min，静置10-15h，使得该面膜上的各种成分混合均匀且方便使用者对面膜上的保养物质进行充分的吸收，提高面膜的作用效果。
附图说明
图1为本发明流程结构示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，包括以下步骤：
步骤一、提取充质干细胞，利用血液中提取的成体充质干细胞进行无血清培养；
步骤二、培育充质干细胞，将提取的充质干细胞放入无血清培养基中培养，并在培养基中加入血清普代物，L-谷氮酸酰胺，脱氧核糖核昔，FGF和TGF-B；
其中，无血清培养基中血清曾代物的体积分数为15-20％，L-谷気酸酰胺的浓度为280-300ng/mol，脱氧核糖核昔的浓度为l0-20ng/mol，成纤维细胞生长因子的浓度为15-25ng/mol，转化生长因子・B的浓度为15-25ng/mol，维生素B5的浓度为3-5ng/mol，维生素B12的浓度为0.02ng/mol。
步骤三、提取干细胞外泌体，收集培养基中的上清液，釆用0.2-0. 22md的无菌过滤器对收集得到的混合液进行初次过滤，再用滤膜进行二次过滤，然后经过浓缩、冷冻干燥后，制得干细胞外泌体冻干粉；
步骤四、面膜材料制备，将白芨，川穹，紫草研磨粉碎，并加入重量2倍的甲醇混合溶液进行充分的搅拌得到初步混合液，留待后用，再将甜杏仁油、十二甲基环六硅氧烷、大豆异黄酮、甘硼酸二甲和蛋黄卵磷脂溶于丙三醇溶液进行完全溶解得到混合溶液，再将五元胜肽、羟乙基纤维素钠、鲸蜡硬脂醇依次加入到混合溶液内进行溶解，得到新的化学混合溶液进行保存。
步骤五、合成面膜，将干细胞外泌体冻干粉溶解与步骤四所得的混合溶液内，并加入抗菌剂、乳化剂和活性剂，用磁力棒进行搅拌，调节溶液ph值到6-7，并将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。
进一步的，在本发明实施例中，所述步骤一中，在提取充质干细胞时，利用输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，经过滤网过滤留下所需的MSC液体，流出到培养基上，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基，避免了运输过程中的感染等意外，同时也避免了互相感染的问题。
进一步的，在本发明实施例中，所述步骤三中，滤膜采用无菌滤网，其网孔直径为0.5mm，无菌过滤器和滤膜在使用前用紫外线照射进行消毒杀菌，通过两次过滤和提前杀菌来确保该面膜在生产过程中原料的完整性和高纯度，提高面膜具有的功能。
进一步的，在本发明实施例中，所述步骤三中，白芨，川穹，紫草在负压条件下研磨粉碎，所得的初步混合溶液用冷风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度在-10℃-10℃，粉碎物表面温度控制在-20℃—-10℃，研磨时间40-50min，并进行过滤浓缩，确保白芨，川穹，紫草等原材料研磨充分，且不会被温度破坏其活性，保证面膜的功能完全，方便制备与备用。
进一步的，在本发明实施例中，所述步骤四中，混合化学溶液在真空环境下进行加热至60-70℃，并将五元胜肽、羟乙基纤维素钠、鲸蜡硬脂醇加入后得到新的化学混合溶液进行震荡分散处理20-30min，保证原料的充分混合，且确保材料的活性，不会丢失，且使得各种原料都能发挥其作用，提高使用人员的吸收效率，使得保养物质更容易渗透被吸收。
进一步的，在本发明实施例中，所述步骤五中，将步骤三和步骤四所得的原料进行混合，并搅拌均匀，高压均质处理15min，静置10-15h，使得该面膜上的各种成分混合均匀且方便使用者对面膜上的保养物质进行充分的吸收，提高面膜的作用效果。
工作原理：在使用该含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法时，通过提取培养充质干细胞以制备干细胞冻干粉留待备用，然后将白芨，川穹，紫草研磨粉碎，并加入重量2倍的甲醇混合溶液进行充分的搅拌得到初步混合液，留待后用，再将甜杏仁油、十二甲基环六硅氧烷、大豆异黄酮、甘硼酸二甲和蛋黄卵磷脂溶于丙三醇溶液进行完全溶解得到混合溶液，再将五元胜肽、羟乙基纤维素钠、鲸蜡硬脂醇依次加入到混合溶液内进行溶解，得到新的化学混合溶液进行保存，将三者混合加入抗菌剂、乳化剂和活性剂，用磁力棒进行搅拌，调节溶液ph值到6-7，并将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (6)

1.一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、提取充质干细胞，利用血液中提取的成体充质干细胞进行无血清培养；
步骤二、培育充质干细胞，将提取的充质干细胞放入无血清培养基中培养，并在培养基中加入血清普代物，L-谷氮酸酰胺，脱氧核糖核昔，FGF和TGF-B；
其中，无血清培养基中血清曾代物的体积分数为15-20％，L-谷気酸酰胺的浓度为280-300ng/mol，脱氧核糖核昔的浓度为l0-20ng/mol，成纤维细胞生长因子的浓度为15-25ng/mol，转化生长因子・B的浓度为15-25ng/mol，维生素B5的浓度为3-5ng/mol，维生素B12的浓度为0.02ng/mol；
步骤三、提取干细胞外泌体，收集培养基中的上清液，釆用0.2-0. 22md的无菌过滤器对收集得到的混合液进行初次过滤，再用滤膜进行二次过滤，然后经过浓缩、冷冻干燥后，制得干细胞外泌体冻干粉；
步骤四、面膜材料制备，将白芨，川穹，紫草研磨粉碎，并加入重量2倍的甲醇混合溶液进行充分的搅拌得到初步混合液，留待后用，再将甜杏仁油、十二甲基环六硅氧烷、大豆异黄酮、甘硼酸二甲和蛋黄卵磷脂溶于丙三醇溶液进行完全溶解得到混合溶液，再将五元胜肽、羟乙基纤维素钠、鲸蜡硬脂醇依次加入到混合溶液内进行溶解，得到新的化学混合溶液进行保存；
步骤五、合成面膜，将干细胞外泌体冻干粉溶解与步骤四所得的混合溶液内，并加入抗菌剂、乳化剂和活性剂，用磁力棒进行搅拌，调节溶液ph值到6-7，并将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。
2.根据权利要求1所述的一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，其特征在于：所述步骤一中，在提取充质干细胞时，利用输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，经过滤网过滤留下所需的MSC液体，流出到培养基上，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基。
3.根据权利要求1所述的一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，其特征在于：所述步骤三中，滤膜采用无菌滤网，其网孔直径为0.5mm，无菌过滤器和滤膜在使用前用紫外线照射进行消毒杀菌。
4.根据权利要求1所述的一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，其特征在于：所述步骤四中，白芨，川穹，紫草在负压条件下研磨粉碎，所得的初步混合溶液用冷风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度在-10℃-10℃，粉碎物表面温度控制在-20℃—-10℃，研磨时间40-50min，并进行过滤浓缩。
5.根据权利要求1所述的一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，其特征在于：所述步骤四中，混合化学溶液在真空环境下进行加热至60-70℃，并将五元胜肽、羟乙基纤维素钠、鲸蜡硬脂醇加入后得到新的化学混合溶液进行震荡分散处理20-30min。
6.根据权利要求1所述的一种含有干细胞外泌体成分的面膜制备方法，其特征在于：所述步骤五中，将步骤三和步骤四所得的原料进行混合，并搅拌均匀，高压均质处理15min，静置10-15h。
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