CN111499619A - 一种治疗肝纤维化的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种苯并吡喃类化合物，其具有对于肝纤维化良好的治疗作用。本发明化合物可显著降低肝纤维化大鼠的TGF‑β1、α‑SMA mRNA的表达，显著减轻肝纤维化程度，表现出对于肝纤维化的良好治疗作用。

Description

一种治疗肝纤维化的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药化学领域，具体地，本发明涉及一种用于治疗肝纤维化的药物。本发明还涉及所述药物的用途及其制备方法。

背景技术

肝纤维化是一个病理生理过程，是指由各种致病因子所致肝内***异常增生。任何肝脏损伤在肝脏修复愈合的过程中都有肝纤维化的过程，如果损伤因素长期不能去除，纤维化的过程长期持续就会发展成肝硬化，甚至会发展为肝癌，对患者的健康产生严重威胁。

肝星状细胞(Hepatic Stellate Cell，HSC)在肝纤维化形成中起了关键作用。各种病因引起的肝损伤导致HSC激活，活化的HSC增殖加速，并合成分泌大量的细胞外基质(Extracellular Matrix，ECM)沉积于肝脏，形成纤维化。HSC被激活后，从静止的富含维生素A的状态呈现高度纤维化(肌成纤维细胞)表型。活化的HSC的收缩力增加归因于细胞骨架蛋白和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。α-SMA的表达被用作HSC激活的标志物。

转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1)是主要的促纤维化细胞因子，TGF-β1通路是激活HSC促进ECM生成的主要途径(WALTON K L,et al.TargetingTGF-β mediated SMAD signaling for the prevention of fibrosis[J].Frontiers inpharmacology,2017,8:461)。而ECM的合成与降解平衡受基质金属蛋白酶(MatrixMetalloproteinases，MMPs)和其抑制剂TIMPs的控制，MMP蛋白促进ECM降解，TIMP蛋白通过抑制MMP的活性进而抑制ECM降解(HEMMANN S,

GRAF,RODERFELD M,etal.Expression of MMPs and TIMPs in liver fibrosis-a systematic review withspecial emphasis on anti-fibrotic strategies.Journal of Hepatology,2007,46(5):955-975)。TGF-β1的过表达可抑制MMPs表达，促进TIMPs表达，进而导致ECM沉积，加剧肝纤维的形成(王乐等.调控TGF-β1/Smads信号通路抗肝纤维化的中药有效成分研究进展.中国中药杂志,2019,44(4):666-674)。因此调控TGF-β1信号通路对逆转肝纤维化的发生发展有重要作用(MIYAZAWA K,et al.Two major Smad pathways in TGF-βsuperfamilysignalling.Genes to Cells,2002,7(12):1191-1204)。

苯并吡喃类化合物是广泛存在于天然产物和药物分子中的一类具有药物活性的杂环化合物，研究较多的有黄酮、异黄酮等(董社英等.香豆素衍生物合成研究进展.化学世界，2009(8):494-497)。苯并吡喃类化合物种类繁多，根据母核上的取代基种类和位置的不同，有很多种不同的药理活性，例如可治疗肝病、肿瘤，可抑菌、抗氧化等。JP5349800B2公开了一种苯并吡喃类化合物及其在治疗肝病特别是肝纤维化方面的应用，WO2016072946A1公开了另一种苯并吡喃类化合物及其在治疗纤维化方面的应用，但是，它们都存在治疗效果不佳、毒副作用大等问题。

本申请为了克服现有技术存在的上述问题，提供了一种新颖的苯并吡喃类化合物，其具有对于肝纤维化良好的治疗作用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种对于肝纤维化具有良好治疗作用的药物。

在一个实施方案中，本发明提供了一种苯并吡喃类化合物，其具有式I所示的结构：

在式I中：

R₁选自氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；

R_a、R_b各自独立地选自C1-C6烷基、C1-4烷氧基C1-C4烷基、C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基，或者R_a、R_b与其所连接的N原子一起形成5或6元杂环烷基；

R₂-R₅各自独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、C6-C14芳基，其中，所述C6-C14芳基任选被卤素、C1-C4烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基中的一个或更多个取代。

本发明的式I所示的化合物还包括其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物。

在另一个实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包含本发明所述的式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，以及药学上可接受的辅剂、载体或赋形剂。

在又一个实施方案中，本发明提供式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物在制备药物中的应用，所述药物用于治疗肝纤维化。

有益效果

试验结果表明，本发明化合物可显著降低肝纤维化大鼠的TGF-β1、α-SMAmRNA的表达，显著减轻肝纤维化程度，表现出对于肝纤维化的良好治疗作用。

具体实施方式

在下文中更详细地描述了本发明以有助于对本发明的理解。

应当理解的是，在说明书和权利要求书中使用的术语或词语不应当理解为具有在字典中限定的含义，而应理解为在以下原则的基础上具有与其在本发明上下文中的含义一致的含义：术语的概念可以适当地由发明人为了对本发明的最佳说明而限定。

如本文所述，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

如本文所述，术语“烷基”是指具有1至10个碳原子、优选1至6个碳原子、更优选1至4个碳原子的单价饱和脂族烃基。该术语包括直链和支链烃基，优选包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和新戊基等。

如本文所述，术语“芳基”是指具有单个环(例如苯基)或多个稠合环(例如萘基或蒽基)的6至14个，优选6至10个碳原子的芳族碳环基团，所述的稠环可以是或不是芳族的，条件是连接点在芳族碳原子上。该术语包括苯基和萘基等。

如本文所述，术语“杂环烷基”是指在环内具有1至10个碳原子和1至4个选自氧、氮和硫的杂原子的3至14元优选3至6元最优选5或6元的饱和环状基团。该术语包括吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、哌啶基、高哌啶基、***啉基、硫代***啉基、哌嗪基或高哌嗪基等。

如本文所述，术语“化合物”是指本文所公开的通式、这些通式的任何亚属所包含的化合物以及和具有通式和亚属通式的任何特定化合物，包括其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物。

如本文所述，术语“立体异构体”是指包含一个或多个立体中心的手性不同的化合物。立体异构体包括对映异构体和非对映异构体。

如本文所述，术语“药学上可接受的盐”是指衍生自本领域已知的多种有机和无机抗衡离子的盐，代表性的药学上可接受的盐包括但不限于：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、醋酸盐、丁酸盐、己二酸盐、庚酸盐、己酸盐、马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、天冬氨酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、环戊烷丙酸盐、乙磺酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐和对甲苯磺酸盐。

如本文所述，术语“前药”表示能够在体内转化为活性化合物的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前药可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前药的有苯酯类、脂肪族酯类、酰氧基甲基酯类、碳酸酯、氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。

如本文所述，术语“溶剂化物”是指与化学计量或非化学计量量的溶剂结合的那些化合物。优选的溶剂是挥发性的、无毒的和/或以痕量对人施用是可接受的。适宜的溶剂化物包括水。

本发明提供了一种式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物：

在式I中：

R₁选自氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；

R_a、R_b各自独立地选自C1-C6烷基、C1-4烷氧基C1-C4烷基、C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基，或者R_a、R_b与其所连接的N原子一起形成5或6元杂环烷基；

R₂-R₅各自独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、C6-C14芳基，其中，所述C6-C14芳基任选被卤素、C1-C4烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基中的一个或更多个取代。

在本发明的一个实施方案中，所述R₁选自氢。

在本发明的一个实施方案中，所述R_a、R_b各自独立地选自C1-C4烷基。

在本发明的一个实施方案中，所述R_a选自C1-C6烷基，所述R_b选自C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基。

在本发明的一个实施方案中，所述R_a、R_b与其所连接的N原子一起形成哌啶基或***啉基。

在本发明的一个实施方案中，所述R₂-R₅各自独立地选自氢、卤素、硝基、C1-C6烷基。

在本发明的一个实施方案中，所述R₂-R₅各自独立地选自氢、F、硝基、C1-C4烷基。

本发明优选以下化合物：

此外，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明所述的式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，以及药学上可接受的辅剂、载体或赋形剂。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括但不限于：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性辅剂、载体或赋形剂，其包括：(a)填料，例如，淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和***胶；(c)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(d)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；和(e)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂，例如，柠檬酸、酒石酸、乳酸等有机酸，磷酸、盐酸等无机酸，氢氧化钠、氢氧化钙等氢氧化碱，三乙醇胺、二乙醇胺、二异丙醇胺等胺类。此外，还可根据需要使用除臭剂、分散剂、保存剂、香料等。

可注射制剂、例如无菌注射水性或油性混悬液可按照已知技术、利用适当的分散剂或润湿剂和助悬剂配制。无菌注射制剂还可以是在无毒胃肠外可接受稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬液。可使用的载体和溶剂是水和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的非挥发油也通常用作溶剂或悬浮介质。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明化合物将通过起类似效用的药剂的公认施用方式中的任何一种以治疗有效量施用。可将本发明化合物以单个每日剂量形式给药，或每日总剂量可分成每日两次、三次或四次剂量给药。

对于本发明来说，合适的剂量水平通常为约0.001至100mg每kg患者体重每天，其可以单剂量或多剂量施用。优选地，剂量水平为约0.01至约25mg/kg每天；更优选地，约0.05至约10mg/kg每天。合适的剂量水平可以是约0.01至25mg/kg每天、约0.05至10mg/kg每天或约0.1至5mg/kg每天。在该范围内，剂量可以是0.005至0.05、0.05至0.5或0.5至5.0mg/kg每天。对于口服施用，制剂优选地以片剂形式提供，所述片剂包含1.0至1000毫克活性成分，特别是1.0、3.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分，用于对待治疗患者的剂量的症状调整。化合物可以每天1至4次的治疗方案施用，优选地每天一次或每天两次。

应理解，用于任何特定患者的具体剂量水平将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途径、排出速率、药物组合以及进行治疗的特定疾病的严重程度。用于给定情况的治疗有效量可通过常规实验容易地确定，且在普通临床医生的技能和判断内。

本发明还涉及制备药物组合物的工艺，所述药物组合物包含本发明所述的式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，以及药学上可接受的辅剂、载体或赋形剂，该工艺包括混合各种成分。包含本发明化合物的药物组合物，可以在例如环境温度和大气压下混合来制备。

本发明涉及一种式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物的用途。

本发明式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物可显著降低肝纤维化大鼠的TGF-β1、α-SMAmRNA的表达，显著减轻肝纤维化程度，表现出对于肝纤维化的良好治疗作用。因此，本发明式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物适合用于治疗肝纤维化。

在一个实施方案中，本发明提供所述的式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗肝纤维化。

本发明又一方面涉及式I所示的化合物的制备、分离和纯化的方法。

一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到，除非有进一步的说明，其中取代基的定义如式I所示的化合物中所示，所述方法包括：

步骤1

在有机碱、钯催化剂、铜催化剂的存在下，使式II所示的化合物与三甲基硅基乙炔反应以得到式III所示的化合物；

步骤2

在有机碱、钯催化剂、铜催化剂的存在下，使式III所示的化合物与式IV所示的化合物反应以得到式V所示的化合物；

步骤3

在碱的存在下，使式V所示的化合物水解成式VI所示的化合物；步骤4

在碱、缩合剂的存在下，使式VI所示的化合物与式VII所示的化合物反应以得到式I所示的化合物；

其中，R选自C1-4烷基，X选自氯或溴。

在一个实施方案中，步骤1和2所述的有机碱包括三乙胺、三甲胺、二异丙基乙基胺、吡啶。

在一个实施方案中，步骤1和2所述的钯催化剂包括PdCl₂、Pd(PPh₃)₄、Pd(PPh₃)₂Cl₂。

在一个实施方案中，步骤1和2所述的铜催化剂包括CuI、CuCl、Cu₂O。

在一个实施方案中，步骤3所述的碱包括NaOH、KOH、NaOMe、NaOEt、KOMe、KOEt。

在一个实施方案中，步骤4所述的碱包括Na₂CO₃、K₂CO₃、三乙胺、三甲胺、二异丙基乙基胺、吡啶。

在一个实施方案中，步骤4所述的缩合剂包括PyBOP、PyAOP、HBTU、TBTU。

本发明化合物可以用合成领域技术人员熟知的许多方法来制备。本发明化合物可以例如使用下面列出的反应和技术连同合成有机化学领域已知的方法或本领域技术人员所理解的其变体来制备。优选的方法包括但不限于下面描述的那些方法。反应在适用于所用试剂和材料且适用于要实现的转化的溶剂中进行。此外，在下面描述的合成方法中，应理解所有建议的反应条件(包括溶剂、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后处理程序的选择)都选择为该反应的标准条件，这应该被有机合成领域技术人员容易确认。并非所有落入给定类别的化合物可以与某些所述方法中需要的某些反应条件相容。对与反应条件相容的取代基的这些限制将对于本领域技术人员而言是显而易见的，并且可使用替代方法。

实施例1：6-((7-氟-6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-N,N-二甲基色满-4-甲酰胺(化合物1)

步骤1：将6-碘色满-4-甲酸甲酯(31.81g,100mmol)溶于乙酸乙酯(280mL)中，加入Pd(PPh₃)₂Cl₂(0.70g,1mmol)、CuI(0.19g,1mmol)和三乙胺(30ml)，氮气保护下降温至0℃，搅拌30min。然后加入三甲基硅基乙炔(TMSA,15ml)，升温至70℃保持12h。将反应液冷却后过滤，滤液减压浓缩，以环己烷/二氯甲烷(v/v＝3/1)为洗脱剂进行柱层析，得到6-乙炔基色满-4-甲酸甲酯(17.08g，79.0％)。ESI-MS：217[M+H]⁺

步骤2：将6-乙炔基色满-4-甲酸甲酯(10.81g,50mmol)溶于NMP(150mL)中，加入3-溴-7-氟-6-甲基-1H-吲哚(11.40g,50mmol)，Pd(PPh₃)₂Cl₂(0.35g,0.5mmol)、CuI(0.095g,0.5mmol)和三乙胺(15ml)，氮气保护下升温至80℃搅拌过夜后，将反应液冷却并过滤后导入H₂O(1L)中，滤出固体，乙醇重结晶得到6-((7-氟-6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸甲酯(13.70g，75.4％)。ESI-MS：364[M+H]⁺

步骤3：6-((7-氟-6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸甲酯(10.90g,30mmol)溶于乙醇(120mL)中，加入NaOH(2.4g，60mmol)，回流搅拌过夜。冷却至室温，加入1％HCl调节pH到4。滤出析出的固体，水洗，甲醇重结晶得到6-((7-氟-6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸(9.86g，94.2％)。ESI-MS：350[M+H]⁺

步骤4：将6-((7-氟-6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸(0.70g,2mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，加入二甲胺盐酸盐(0.16g，2mmol)、二异丙基乙基胺(1.09g,10mmol)和PyBOP(0.62g,1.2mmol)，室温搅拌过夜。减压蒸除溶剂，用乙酸乙酯(20ml)溶解后用水洗涤3次，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂。用石油醚/二氯甲烷(v/v＝5/1)进行柱层析，再在乙醇中重结晶，得到白色固体的标题化合物(0.47g，62.0％)。

ESI-MS：377[M+H]⁺

元素分析：理论值C,73.39；H,5.62；F,5.05；N,7.44；O,8.50

实测值C,73.02；H,5.37；F,5.15；N,7.65；O,8.81

氢谱(400MHz，DMSO-d6)δ8.01(s,1H),7.75(d,1H,J＝7.5Hz),7.44(d,1H,J＝7.5Hz),7.32(s,1H),6.92(d,1H,J＝7.5Hz),6.73(d,1H,J＝7.5Hz),4.13-4.30(m,2H),3.60(t,1H,J＝7.0Hz),2.90(s,6H),2.33(s,3H),2.15-2.42(m,2H)。

实施例2：N-(2-(二甲氨基)乙基)-N-甲基-6-((7-氟-6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)色满-4-甲酰胺(化合物2)

将实施例1步骤3制备得到的6-((7-氟-6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸(0.70g,2mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，加入N,N,N'-三甲基乙二胺双盐酸盐(0.35g，2mmol)、二异丙基乙基胺(1.09g,10mmol)和PyBOP(0.62g,1.2mmol)，室温搅拌过夜。减压蒸除溶剂，用乙酸乙酯(20ml)溶解后用水洗涤3次，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂。用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝10/1)进行柱层析，再在乙醇中重结晶，得到灰白色固体的标题化合物(0.51g，58.3％)。

ESI-MS：434[M+H]⁺

元素分析：理论值C,72.03；H,6.51；F,4.38；N,9.69；O,7.38

实测值C,72.14；H,6.76；F,4.22；N,9.80；O,7.08

氢谱(400MHz，DMSO-d6)δ8.01(s,1H),7.75(d,1H,J＝7.5Hz),7.44(d,1H,J＝7.5Hz),7.32(s,1H),6.92(d,1H,J＝7.5Hz),6.73(t,1H,J＝7.5Hz),4.13-4.30(m,2H),3.60(t,1H,J＝7.0Hz),2.85(s,3H),2.72(t,2H,J＝7.1Hz),2.65(s,6H),2.58(t,2H,J＝7.1Hz),2.33(s,3H),2.15-2.42(m,2H)。

实施例3：6-((6-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-N,N-二甲基色满-4-甲酰胺(化合物3)

步骤1：将实施例1步骤1制得的6-乙炔基色满-4-甲酸甲酯(10.81g,50mmol)溶于NMP(150mL)中，加入3-溴-6-甲基-5-硝基-1H-吲哚(11.40g,50mmol)，Pd(PPh₃)₂Cl₂(0.35g,0.5mmol)、CuI(0.095g,0.5mmol)和三乙胺(15ml)，氮气保护下升温至85℃搅拌过夜后，将反应液冷却并过滤后导入H₂O(1L)中，滤出固体，甲醇重结晶得到6-((6-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸甲酯(14.17g，72.6％)。ESI-MS：391[M+H]⁺

步骤2：6-((6-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸甲酯(11.71g,30mmol)溶于乙醇(120mL)中，加入NaOH(2.4g，60mmol)，回流搅拌过夜。冷却至室温，加入1％HCl调节pH到4。滤出析出的固体，水洗，重结晶得到6-((6-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸(10.87g，96.3％)。ESI-MS：377[M+H]⁺

步骤3：6-((6-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸(0.75g,2mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，加入二甲胺盐酸盐(0.16g，2mmol)、二异丙基乙基胺(1.09g,10mmol)和PyBOP(0.62g,1.2mmol)，室温搅拌过夜。减压蒸除溶剂，用氯仿(25ml)溶解后用水洗涤3次，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂。用石油醚/氯仿(v/v＝8/1)进行柱层析，再在甲醇中重结晶，得到亮白色固体的标题化合物(0.56g，69.3％)。

ESI-MS：404[M+H]⁺

元素分析：理论值C,68.47；H,5.25；N,10.42；O,15.86

实测值C,68.11；H,5.45；N,10.33；O,16.11

氢谱(400MHz，DMSO-d6)δ8.42(s,1H),8.01(s,1H),7.75(s,1H),7.44(d,1H,J＝7.5Hz),7.38(s,1H),6.91(d,1H,J＝7.5Hz),4.10-4.27(m,2H),3.60(t,1H,J＝7.0Hz),2.90(s,6H),2.33(s,3H),2.14-2.41(m,2H)。

实施例4：N-(2-(二甲氨基)乙基)-N-甲基-6-((6-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)色满-4-甲酰胺(化合物4)

将实施例3步骤2制备得到的6-((6-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸(0.75g,2mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，加入N,N,N'-三甲基乙二胺双盐酸盐(0.35g，2mmol)、二异丙基乙基胺(1.09g,10mmol)和PyBOP(0.62g,1.2mmol)，室温搅拌过夜。减压蒸除溶剂，用氯仿(25ml)溶解后用水洗涤3次，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂。用环乙烷/乙酸乙酯(v/v＝7/1)进行柱层析，再在乙醇中重结晶，得到白色固体的标题化合物(0.51g，58.3％)。

ESI-MS：461[M+H]⁺

元素分析：理论值C,67.81；H,6.13；N,12.17；O,13.90

实测值C,67.62；H,6.27；N,12.08；O,14.03

氢谱(400MHz，DMSO-d6)δ8.41(s,1H),7.99(s,1H),7.74(s,1H),7.44(d,1H,J＝7.5Hz),7.38(s,1H),6.92(d,1H,J＝7.5Hz),4.13-4.30(m,2H),3.60(t,1H,J＝7.0Hz),2.84(s,3H),2.70(t,2H,J＝7.1Hz),2.64(s,6H),2.57(t,2H,J＝7.1Hz),2.34(s,3H),2.15-2.41(m,2H)。

实施例5：(6-((6-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)色满-4-基)(***啉基)甲酮(化合物5)

将实施例3步骤2制备得到的6-((6-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)乙炔基)-色满-4-甲酸(0.75g,2mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，加入***啉盐酸盐(0.25g，2mmol)、二异丙基乙基胺(1.09g,10mmol)和PyBOP(0.62g,1.2mmol)，室温搅拌过夜。减压蒸除溶剂，用甲苯(25ml)溶解后用水洗涤3次，无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂。用正乙烷/乙酸乙酯(v/v＝8/1)进行柱层析，再在甲醇中重结晶，得到浅白色固体的标题化合物(0.63g，70.5％)。

ESI-MS：446[M+H]⁺

元素分析：理论值C,67.41；H,5.20；N,9.43；O,17.96

实测值C,67.88；H,5.10；N,9.37；O,17.65

氢谱(400MHz，DMSO-d6)δ8.41(s,1H),8.00(s,1H),7.75(s,1H),7.43(d,1H,J＝7.5Hz),7.38(s,1H),6.95(d,1H,J＝7.5Hz),4.13-4.30(m,2H),3.58-3.67(m,5H),3.45-3.49(m,4H),2.35(s,3H),2.14-2.40(m,2H)。

试验例：本发明化合物对肝纤维化的治疗作用

选用SPF级雄性SD大鼠(体质量200±20g)52只，预留10只做对照，其余大鼠于皮下注射50％CCl₄(与橄榄油1∶1混合)稀释液2ml/kg，对照组给予同体积的橄榄油，2次/周，连续8周。第8周后，麻醉后脱颈处死大鼠2只，取右肝组织进行病理切片检查，大鼠肝细胞肿胀，部分肝细胞变性、坏死，纤维***增生，增生的纤维组织将肝组织分成广泛的假小叶，提示造模成功。

40只造模成功的大鼠按体质量随机分为模型组、给药组(化合物1组、化合物4组、化合物5组)，每组10只。给药组皮下注射1次/d对应药物，给药剂量30mg/kg，共给药4周。对照组及模型组给予同体积的生理盐水。末次给药12h后，麻醉后脱颈处死大鼠，取肝左叶，称取适量肝组织，加入9倍体积的生理盐水，在冰浴中机械匀浆。4℃，3000r/min，离心10min后取上清液备用。用RT-PCR法测定TGF-β1、α-SMA mRNA的表达，GAPDH作为内参，引物序列见表1。

表1 RT-PCR引物序列

另外，取大鼠的肝右叶进行固定、包埋，行苏木精-伊红染色和Masson纤维胶原染色，随后进行肝组织病理学检查，按照2000年西安全国病毒性肝炎病理诊断标准对肝组织纤维化进行分级。肝纤维化分为5个阶段：1、正常组织，汇管区内有极少量正常的纤维***，0分；2、小叶中央静脉、汇管区周围胶原纤维增生，小叶中央静脉及门静脉有少量纤维束延伸，无纤维间隔形成，小叶结构仍保存，1分；3、中央静脉和门静脉区纤维向周围延伸，形成不完全间隔，小叶结构大部分保存，2分；4、胶原纤维大量增生，少量菲薄的完全间隔形成，小叶结构破坏，3分；5、完全间隔增厚，假小叶形成，4分。

结果：

1、RT-PCR结果分析显示，与正常组比较，模型组大鼠的TGF-β1、α-SMA的表达显著升高；与模型组比较，化合物1组、化合物4组、化合物5组给药4周后能显著降低TGF-β1、α-SMA的表达，显著减缓CCl₄肝纤维化模型大鼠肝损伤进程。

表2对大鼠TGF-β1、α-SMA表达的影响

注：a：相对表达，以模型组测量值为1.00计算其余各组的相对表达量；

与正常组相比，^*P<0.01，^**P<0.005；与模型组相比，^#P<0.01，^##P<0.005

2、肝纤维化程度分级结果表明，与正常组比较，模型组肝纤维化程度及分级显著增加；与模型组比较，化合物1组、化合物4组、化合物5组给药4周后可以显著减轻肝纤维化程度及分级，提示本发明化合物处理4周后起到了很好的治疗效果。

表3对大鼠肝纤维化分期积分的影响

注：a：与正常组相比；b：与模型组相比

以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。

Claims (10)

1.一种式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物：

在式I中：

R₁选自氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；

R_a、R_b各自独立地选自C1-C6烷基、C1-4烷氧基C1-C4烷基、C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基，或者R_a、R_b与其所连接的N原子一起形成5或6元杂环烷基；

R₂-R₅各自独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、C6-C14芳基，其中，所述C6-C14芳基任选被卤素、C1-C4烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基中的一个或更多个取代。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R_a、R_b各自独立地选自C1-C4烷基。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R_a选自C1-C6烷基，所述R_b选自C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基。

4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R_a、R_b与其所连接的N原子一起形成哌啶基或***啉基。

5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R₂-R₅各自独立地选自氢、卤素、硝基、C1-C6烷基。

6.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自：

7.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，以及药学上可接受的辅剂、载体或赋形剂。

8.根据权利要求1所述的式I所示的化合物，其立体异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗肝纤维化。

9.根据权利要求1中所述的式I所示的化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤1

在有机碱、钯催化剂、铜催化剂的存在下，使式II所示的化合物与三甲基硅基乙炔反应以得到式III所示的化合物；

步骤2

在有机碱、钯催化剂、铜催化剂的存在下，使式III所示的化合物与式IV所示的化合物反应以得到式V所示的化合物；

步骤3

在碱的存在下，使式V所示的化合物水解成式VI所示的化合物；

步骤4

在碱、缩合剂的存在下，使式VI所示的化合物与式VII所示的化合物反应以得到式I所示的化合物；

其中，R选自C1-4烷基，X选自氯或溴。

10.根据权利要求9所述的式I所示的化合物的制备方法，其特征在于，步骤1和2所述的有机碱包括三乙胺、三甲胺、二异丙基乙基胺、吡啶，

步骤1和2所述的钯催化剂包括PdCl₂、Pd(PPh₃)₄、Pd(PPh₃)₂Cl₂，

步骤1和2所述的铜催化剂包括CuI、CuCl、Cu₂O，

步骤3所述的碱包括NaOH、KOH、NaOMe、NaOEt、KOMe、KOEt，

步骤4所述的碱包括Na₂CO₃、K₂CO₃、三乙胺、三甲胺、二异丙基乙基胺、吡啶，

步骤4所述的缩合剂包括PyBOP、PyAOP、HBTU、TBTU。