CN111467469A

CN111467469A - 小柴胡颗粒联合抗生素在临床上的新用途

Info

Publication number: CN111467469A
Application number: CN202010431646.0A
Authority: CN
Inventors: 刘宏; 江志强; 张俊华; 郑如文; 徐煜耀; 毕聪; 何逸禧; 杜海泳
Original assignee: Guangzhou Baiyunshan Guanghua Pharmacy Co ltd
Current assignee: Guangzhou Baiyunshan Guanghua Pharmacy Co ltd
Priority date: 2020-05-20
Filing date: 2020-05-20
Publication date: 2020-07-31

Abstract

本发明涉及了小柴胡颗粒在临床上的新应用。小柴胡颗粒、或小柴胡颗粒联合阿米卡星在制备防治耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染的药物中的应用。本发明发现小柴胡颗粒能够联合抗生素中的阿米卡星提高对CRKP的抗菌效果，具有增敏作用，可作为天然的抗生素增敏剂。小柴胡颗粒与阿米卡星联合使用可加强于临床对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染的治疗，特别是对CRKP导致的细菌性肺炎具有很好的抗菌效果和增敏作用。

Description

小柴胡颗粒联合抗生素在临床上的新用途

技术领域

本发明属中成药领域，涉及一种中药组合物—小柴胡颗粒联合抗生素的新用途。

背景技术

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae，KP)是革兰阴性杆菌，广泛分布于自然界的水和土壤中，是人类鼻咽部和肠道常居菌，也是常见的条件致病菌，可引起人类肺炎、脑膜炎、泌尿***感染、脓毒症等各种感染性疾病，是医院感染的重要病原菌之一。耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella Pneumoniae，CRKP)能产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)。ESBLs由质粒介导的能水解氧亚氨基-β内酰胺类和单酰环类抗生素的β-内酰胺酶，可以催化青霉素类药物、头孢菌素类药物、单环β-内酰胺类药物的水解，并能使CRKP对氟喹诺酮类药物、氨基糖苷类药物、磺胺类药物形成交叉耐药。此外，质粒可在菌株间转移和传播，因此给临床抗感染治疗带来很大困难，受到国内外学者广泛关注。对于已经产生抗生素耐药的细菌，中药具有逆转其耐药性的机制，包括清除耐药质粒、抑制β-内酰胺酶、抑制耐药菌外排泵、抑制细菌生物被膜的形成以及基因突变等。因此，使用中药联合抗菌药物进行耐药菌感染的治疗研究受到了越来越多国内外学者的重视。阿米卡星(AMK)、亚胺培南(IPM)、左氧氟沙星(LVF)、头孢哌酮-舒巴坦(SCF)是抗肺炎克雷伯菌感染的常用药物。阿米卡星是氨基糖苷类抗生素,主要针对的是革兰氏阴性杆菌，如大肠杆菌、克雷伯菌属、肠杆菌，主要抗菌机制是阻碍细菌蛋白质的合成。亚胺培南为具有碳青霉烯环的硫霉素类抗菌药，是一种广谱的β内酰胺类抗生素，其作用类似青霉素类，可抑制细胞壁合成。左氧氟沙星是第三代氟喹诺酮类抗菌药物，该药具有广谱抗菌活性,杀菌能力强,尤其合适于革兰氏阴性菌的感染。头孢哌酮-舒巴坦是抗生素类的复方制剂，头孢哌酮是三代头孢菌素类药物，具有广谱和强大的抗菌作用，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有比较好的治疗作用，由于ESBLs可以分解头孢哌酮，故临床上常与可以抑制内酰胺酶的舒巴坦联用，起到增加头孢哌酮抗菌作用的效果。目前很多抗生素药物，对于耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌也容易逐步产生耐药性，因此，寻求可以联合抗菌药物治疗CRKP感染的中药，具有十分重要的现实意义与实用价值。

小柴胡颗粒系依据东汉医圣张仲景名著《伤寒杂病论》千古名方“小柴胡汤”研制而成的纯中药制剂，是治疗感冒、流感及各种变异流感等伤寒疫症的主方，其为由柴胡、黄芩、半夏(姜制)、党参、生姜、甘草、大枣七个药味按照“君臣佐使”组方而制成的颗粒型中成药制剂。小柴胡颗粒以扶正祛邪，调和阴阳为目的，可有效提高人体抵抗力和免疫力，对感冒、流感等病毒的防控疗效显著。目前，还尚未有明确小柴胡颗粒能够治疗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染的报道，至于其是否可以联合抗生素共同抑制CRKP应用于临床，虽然有报道提及可以联合抗生素使用，但是如何使用，机理以及哪些与抗生素联合使用才能真正有效，对哪种疾病有效，鉴于疾病治疗的复杂性，目前并不清楚。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种中药组合物-小柴胡颗粒在临床上的新用途。

本发明开发小柴胡颗粒在临床使用上的新用途，将小柴胡颗粒与抗生素共同用于临床治疗CRKP感染，旨在实现延缓细菌耐药性、抗生素协同增敏效果。

实现上述目的技术方案包括如下。

一种中药组合物在制备防治感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌所致疾病的药物中的应用，所述中药组合物的活性成分的重量份组成为：柴胡150±5份、黄芩56±5份、姜半夏56±3份、党参56±3份、生姜56±3份、甘草56±3份、大枣56±3份。

一种中药组合物联合阿米卡星在制备防治感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌所致疾病的药物中的应用，所述中药组合物的活性成分的重量份组成为：柴胡150±5份、黄芩56±5份、姜半夏56±3份、党参56±3份、生姜56±3份、甘草56±3份、大枣56±3份。

一种预防和/或治疗感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌所致疾病的联合用药物，包括中药组合物和阿米卡星，所述中药组合物与所述抗生素分别成为独立的给药单元，或所述中药组合物与所述抗生素共同形成组合的给药单元；所述中药组合物的活性成分的重量份组成为：柴胡150±5份、黄芩56±5份、姜半夏56±3份、党参56±3份、生姜56±3份、甘草56±3份、大枣56±3份。

在其中一些优选的实施例中，耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌所致疾病可以是肺炎、脑膜炎、泌尿***炎症、脓毒症、皮肤炎症等各种感染性疾病，本发明优选所致疾病是肺炎。

在其中一些优选的实施例中，所述中药组合物的活性成分的重量份组成为：柴胡150份、黄芩56份、姜半夏56份、党参56份、生姜56份、甘草56份、大枣56份。

在其中一些优选的实施例中，所述中药组合物是小柴胡颗粒。

本发明还提供了小柴胡颗粒作为阿米卡星的增敏剂在制备防治耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌导致的肺炎的药物中应用。

本发明的发明人发现小柴胡颗粒，在众多抗生素中，能够联合阿米卡星(AMK)提高对CRKP的抗菌效果，能够显著改善CRKP感染的肺部损伤，具有增敏作用，可作为天然的抗生素增敏剂。小柴胡颗粒与阿米卡星(AMK)联合使用可加强临床上对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染的治疗，能够显著降低CRKP感染的肺部细菌数量，特别是对CRKP导致的细菌性肺炎具有很好的抗菌效果和增敏作用。

附图说明

图1是本发明实施例2小柴胡颗粒与AMK、IPM、LVF、SCF联用对CRKP感染大鼠肺湿干比率柱形图。

图2是本发明实施例2小柴胡颗粒与AMK、IPM、LVF、SCF联用对CRKP感染大鼠肺指数柱形图。

图3是本发明实施例2小柴胡颗粒与AMK、IPM、LVF、SCF联用对CRKP感染大鼠肺指数抑制率柱形图。

图4是本发明实施例2小柴胡颗粒与AMK、IPM、LVF、SCF联用对CRKP感染大鼠细菌计数柱形图。

具体实施方式

本发明下列实施例未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。

本发明的术语包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或组分，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或组分。

在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明公开内容的理解更加透彻全面。

本发明所述小柴胡颗粒的活性成分为：柴胡150±5份、黄芩56±5份、姜半夏56±3份、党参56±3份、生姜56±3份、甘草56±3份、大枣56±3份。

以下实施例中的小柴胡颗粒由广州白云山光华制药出售，其活性成分具体组成为：柴胡150g、黄芩56g、姜半夏56g、党参56g、生姜56g、甘草56g、大枣56g，制剂为颗粒剂。因辅料蔗糖可导致抗菌试验产生假阳性结果，故本研究以小柴胡颗粒(无糖版)用于后续试验。

实施例1

实施例1：小柴胡颗粒与AMK、IPM、LVF、SCF体外联合抗CRKP考察。通过采用试管二倍稀释法进行实验，测定小柴胡颗粒药液和四种抗生素对CRKP的最小抑菌浓度(MIC)，再采用棋盘法测定各联合用药MIC，考察小柴胡颗粒溶液对AMK、IPM、LVF、SCF抗CRKP的增敏作用。

1.实验材料：

1.1受试药物：小柴胡颗粒(无糖，广州白云山光华制药股份有限公司)。

1.2对照药物：阿米卡星(AMK)、亚胺培南(IPM)、左氧氟沙星(LVF)、头孢哌酮-舒巴坦(SCF)。

1.3实验菌株：

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP，M1)临床分离菌株、肺炎克雷伯菌标准株(ATCC700603)，均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物室提供，经中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物室检测确认其耐药性。

2.实验方法：

2.1药品分组与制备

取小柴胡颗粒样品，在无菌操作条件下以生理盐水配制成相当于生药1000mg/mL的药液，以一次性无菌0.22μm微孔过滤器滤去杂质和细菌，备用。AMK、IPM、LVF、SCF在无菌条件下制备成终浓度为5120μg/mL的母液，4℃冰箱避光保存，备用。

2.2小柴胡颗粒与AMK、IPM、LVF、SCF单用对CRKP的最低抑菌浓度(MIC)测定

参照CLSI标准(第九版)，采用试管二倍稀释法进行测定。详见表1、表2。取无菌华氏管11支，编号1-11。在1号管中加入MH液体培养基1.8mL或1.6mL、2-11管各加1mL；1号管中加入小柴胡颗粒药液0.2mL或抗生素0.4mL，混匀后取1mL加入2号管中，依次稀释至9号管，吸出1mL弃去，作为含药培养基对照，10号管为肉汤无菌生长对照，11号管为细菌正常生长对照管；除9、10号管外，其余各管均接种CRKP l.0×105CFU/mL。于35℃培养24h取出，观察细菌生长情况，无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为最低抑菌浓度(MIC)。

表1试管二倍稀释法测定小柴胡颗粒药液单用稀释度

表2试管二倍稀释法测定抗生素单用稀释度

2.3小柴胡颗粒对AMK、IPM、LVF、SCF抗CRKP增敏作用考察

参照美国国立临床试验标准化委员会(CCLS)推荐的棋盘稀释法操作。制备系列浓度的含药液体培养基，根据各药物对CRKP的MIC(表3)，将小柴胡颗粒药液、AMK、IPM、LVF、SCF分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释，其中小柴胡颗粒药液6个稀释度，抗生素6个稀释度见表4。保持每列抗生素浓度不变，每行小柴胡颗粒药液浓度不变，接种于96孔无菌培养板内，除空白对照外，依次向每孔中加入各菌悬液，调整菌悬液浓度为l.0×105CFU/mL。密封，轻轻混匀，置于37℃培养箱中培养24h，观察培养基浑浊程度，无沉淀出现的最大稀释度的药物浓度作为该菌对试验药的MIC。通过计算部分抑菌指数FIC来评价小柴胡颗粒与抗生素联合抗菌的相互作用。FIC≤0.5表示两种药呈现协同作用；0.5<FIC≤1表示两种药呈现相加作用；1<FIC≤2表示两种药无相互作用；FIC>2表示两种药呈现拮抗作用。根据无菌生长孔找出小柴胡颗粒和抗生素的最佳浓度配比，最终评价小柴胡颗粒对抗生素增敏作用的药效。FIC计算公式如下：

表3小柴胡颗粒药液、抗生素单用MIC(n＝6)

表4棋盘稀释法测定小柴胡颗粒药液与抗生素联用MIC

2.4实验结果

小柴胡颗粒与抗生素联用抗CRKP的MIC及FIC结果见表5。结果表明，小柴胡颗粒与AMK联用均表现出明显的协同作用，与IPM、LVF、SCF联用无相明显的相互作用，也未出现拮抗作用。结果表明小柴胡颗粒与抗生素联合AMK使用治疗CRKP感染时可提高抗菌效果，具有对抗生素的增敏作用。

表5小柴胡颗粒药液与抗生素联用MIC及FIC值(n＝6)

实施例2：小柴胡颗粒联合AMK、IPM、LVF、SCF对大鼠CRKP感染肺炎的作用考察。

通过采用CRKP感染的肺炎大鼠模型进行实验，考察小柴胡颗粒与AMK、IPM、LVF、SCF联用对CRKP感染大鼠肺炎的改善作用，发现小柴胡颗粒对抗生素抗CRKP的增敏作用。

1.3实验菌株：

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP，M1)临床分离菌株，由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物室提供，经中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物室检测确认其耐药性。

1.4试验动物：SPF级SD大鼠，雄性，体质量200～250g，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号SYXK(粤)2019－0185。在实验动物适应新环境一周后开始实验，并在实验过程中采取适当的方法减轻对动物的伤害。

2.实验方法：

2.1SD大鼠分组与治疗

SD大鼠220只，随机分为空白对照组、模型组、AMK组(10mg·kg-1，临床人体等效剂量)、IPM组(35mg·kg-1，临床人体等效剂量)、LVF组(7mg·kg-1，临床人体等效剂量)、SCF组(75mg·kg-1，临床人体等效剂量)、小柴胡颗粒组(5.4g/kg，临床人体等效剂量)、小柴胡颗粒+AMK组、小柴胡颗粒+IPM组、小柴胡颗粒+LVF组、小柴胡颗粒+SCF组，共11组，每组20只(其中10只用于细菌计数)，大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，除空白对照组外，鼻部缓缓滴入约1×109CFU·mL-1CRKP-M1 30μL，分2次接种，保持直立***20s，以确保菌液顺利进入肺部组织。空白对照组用等量生理盐水滴鼻。感染4h后，空白对照组和模型组予以等体积生理盐水灌胃，实验组给予相应的药物灌胃，每天灌胃1次，连续治疗7天。

3评价指标

通过肺湿干比率、肺指数、肺指数抑制率、细菌计数评价小柴胡颗粒联合AMK、IPM、LVF、SCF对大鼠CRKP感染肺炎的作用。

3.1肺湿干比率、肺指数与肺指数抑制率

感染后第7天，每组取10只大鼠剖杀，剖杀前禁食不禁水12h以上。腋下动脉放血处死后取出鼠肺，放在盛有9g/L生理盐水的培养皿中洗净表面血液，并用吸水纸吸干表面水分后称重，即为肺湿质量。做好标记放到65℃烘箱烘干至恒重，即为肺干质量。肺湿干比率、肺指数与肺指数抑制率计算公式：肺湿干比率＝肺湿质量(g)/肺干质量(g)；肺指数＝肺质量(g)/体重(g)×100％；肺指数抑制率＝(模型对照组平均肺指数-实验组平均肺指数)/模型对照组平均肺指数×100％。数据处理方法：平均值±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析；采用SPSS 22.0软件处理数据。结果见表6、图1、图2、图3。

表6小柴胡颗粒联合AMK、IPM、LVF、SCF对CRKP感染大鼠肺湿干比率、肺指数与肺指数抑制率的作用(n＝10)

注：与空白对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，

**P<0.01；联合用药组与对应抗生素单独用药组比较，^P<0.05，^^P<0.013.2细菌计数

感染后第7天，每组剩余10只大鼠处死，取双肺，PBS冲洗3次，置匀浆器中加入2mLPBS研磨15min，制成肺组织匀浆。采用10倍比稀释肺组织匀浆，依次取各浓度100uL接种MH琼脂培养基上，37℃恒温孵育24h，选取菌落在20～200个之间的平板进行菌落计数。数据处理方法：平均值±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析；采用SPSS 22.0软件处理数据。结果见表7、图4。表7小柴胡颗粒联合SCF、AMK、LVF、IPM对CRKP感染大鼠的细菌计数(n＝10)

编号	组别	细菌计数(Bacterial count CFU·100μL-1)
			1	空白对照组	—
2	模型组	18.0±2.41##
			3	AMK药物组	9.8±1.38**
4	IPM药物组	10.4±1.56**
			5	LVF药物组	11.1±1.41**
6	SCF药物组	10.3±1.58**
			7	小柴胡颗粒组	13.9±1.35**
8	小柴胡颗粒+AMK组	5.6±1.40**^^
			9	小柴胡颗粒+IPM组	10.7±1.39**
10	小柴胡颗粒+LVF组	10.6±1.31**
			11	小柴胡颗粒+SCF组	9.7±1.60**

**P<0.01；联合用药组与对应抗生素单独用药组比较，^P<0.05，^^P<0.014.实验结论：

大鼠肺指数值与肺湿干比率越大，表示肺炎越严重。由表6、图1、图2、图3可知，小柴胡颗粒与AMK联合用药可显著增强治疗效果，改善肺部损伤，且优于小柴胡颗粒及AMK单独用药效果；小柴胡颗粒与IPM、LVF、SCF联合用药并无增强治疗效果，作用与小柴胡颗粒及IPM、LVF、SCF单独用要效果相当。结果表明，小柴胡颗粒联合AMK能够显著改善CRKP感染的肺部损伤，即发现小柴胡颗粒对抗生素AMK具有增敏作用。

大鼠肺部细菌计数结果越少，表示药物的治疗效果越好。由表7、图4可知，小柴胡颗粒与AMK联合用药可显著增强治疗效果，降低肺部细菌数量，且优于小柴胡颗粒及AMK单独用药效果；小柴胡颗粒与IPM、LVF、SCF联合用药并无明显增强治疗效果，作用与小柴胡颗粒及IPM、LVF、SCF单独用要效果相当。结果表明，小柴胡颗粒联合AMK能够显著降低CRKP感染的肺部细菌数量，即发现小柴胡颗粒对抗生素AMK具有增敏作用。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种中药组合物在制备防治感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌所致疾病的药物中的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分的重量份组成为：柴胡150±5份、黄芩56±5份、姜半夏56±3份、党参56±3份、生姜56±3份、甘草56±3份、大枣56±3份。

2.一种中药组合物联合阿米卡星在制备防治感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌所致疾病的药物中的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分的重量份组成为：柴胡150±5份、黄芩56±5份、姜半夏56±3份、党参56±3份、生姜56±3份、甘草56±3份、大枣56±3份。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述疾病是肺炎。

4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分的重量份组成为：柴胡150份、黄芩56份、姜半夏56份、党参56份、生姜56份、甘草56份、大枣56份。

5.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的剂型是颗粒剂。

6.一种预防和/或治疗感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌所致疾病的联合用药物，其特征在于，包括中药组合物和阿米卡星，所述中药组合物与所述阿米卡星分别成为独立的给药单元，或所述中药组合物与所述抗生素共同形成组合的给药单元；所述中药组合物的活性成分的重量份组成为：柴胡150±5份、黄芩56±5份、姜半夏56±3份、党参56±3份、生姜56±3份、甘草56±3份、大枣56±3份。

7.根据权利要求6所述的联合用药物，其特征在于，所述中药组合物的活性成分的重量份组成为：柴胡150份、黄芩56份、姜半夏56份、党参56份、生姜56份、甘草56份、大枣56份。

8.根据权利要求6所述的联合用药物，其特征在于，所述中药组合物是小柴胡颗粒。

9.小柴胡颗粒作为阿米卡星的增敏剂在制备防治耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌所致疾病的药物中应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述疾病为肺炎。