CN111440810A

CN111440810A - 飞蝗V-ATPase-V0结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用

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Publication number: CN111440810A
Application number: CN202010243760.0A
Authority: CN
Inventors: 张建珍; 刘晓健; 梁晓宇; 史学凯
Original assignee: Shanxi University
Current assignee: Shanxi University
Priority date: 2020-03-31
Filing date: 2020-03-31
Publication date: 2020-07-24
Anticipated expiration: 2040-03-31
Also published as: CN111440810B

Abstract

本发明公开了飞蝗V‑ATPase‑V0结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用，所述飞蝗V‑ATPase‑V0结构域基因包括飞蝗V‑ATPase‑a、V‑ATPase‑c、V‑ATPase‑c”、V‑ATPase‑d和V‑ATPase‑e基因，具体为通过生物信息学方法，从飞蝗转录组数据库中获取V‑ATPase‑V0结构域中各基因，分别对其进行克隆测序后获得各基因全长cDNA序列，核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：21所示；基于上述各基因序列，通过PCR方法分别获得V‑ATPase‑a、V‑ATPase‑c、V‑ATPase‑c”、V‑ATPase‑d和V‑ATPase‑e基因片段，由所述基因片段分别合成对应的dsRNA，分别将合成的dsRNA注射进入飞蝗体腔后可以特异性沉默靶标基因，从而使飞蝗生长发育受阻导致死亡，致死率达到74.6％‑96.8％。由于本发明的特异性及高效的致死率，对于害虫防治具有重要意义，可以为害虫防治提供新的途径。

Description

飞蝗V-ATPase-V0结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术及农业害虫防治领域，具体涉及飞蝗V-ATPase-V0结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用。

背景技术

飞蝗Locusta migratoria，是一种洲际性的农业害虫，主要分布于亚、欧、非、澳四大洲。它具有暴发性、群集性和迁飞性的特点，一旦发生，不仅涉及面广，而且来势凶猛，致灾严重。目前在蝗虫防治工作中，仍以化学杀虫剂为主要手段，化学杀虫剂的大量使用，不仅容易导致昆虫产生抗药性，并且给生态环境带来严重污染，对人类的健康也构成威胁，因此研发绿色新型农药对我国防治蝗虫工作具有重要意义。

RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA分子引起的特异性转录后基因沉默的现象，自2006年获得诺贝尔奖以来，RNAi技术一直跻身于科技前沿。RNAi不仅是研究基因功能的有力工具，同时在害虫防治方面也具有极大潜力。通过RNAi进行害虫防治具有如下特点：1)杀虫具有专一性，对非靶标生物无杀伤作用；2)RNA在自然界极易降解，无残留；3)对环境无毒无害，相对安全。目前国际上已将RNAi技术称为***杀虫剂核心技术。由美国孟山都公司研发的表达玉米根叶甲Snf7基因dsRNA的RNAi转基因玉米(MON87411)已经获得美国农业部(USDA)和环保署(EPA)批准，即将开展商业化应用。实验表明这种转基因玉米不仅可以有效杀死玉米根甲虫且对蜜蜂等非靶标生物没有明显毒性作用。筛选和鉴定对害虫生长发育至关重要的基因是应用RNAi技术开发新型杀虫剂的关键环节，因为不是所有的dsRNA都能有效的沉默靶基因的表达，也不是所有的dsRNA都能杀死害虫。

V-ATPase(Vacuolar-type ATPase)，一种H⁺通道蛋白，其广泛存在于原核和真核生物的内涵体、溶酶体等多种细胞器膜及某些特殊细胞的质膜上，调节细胞内外环境的pH，对维持生物体正常生命活动至关重要。V-ATPase是一类高度保守的复合酶，由胞外的V1结构域和跨膜的V0结构域组装而成，其中，V1结构域由A、B、C、D、E、F、G、H大亚基组成，负责ATP的水解；V0结构域由a,c,c',c",d,e组成(c'存在于酵母细胞中)，行使质子转运功能。目前未见针对飞蝗V-ATPase-V0结构域基因(V-ATPase-a、V-ATPase-c、V-ATPase-c"、V-ATPase-d、V-ATPase-e)的相关研究。本发明首次证实分别注射上述飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA至3龄若虫后出现74.6％-96.8％致死现象。因此，V-ATPase-V0结构域基因可作为基于RNAi的害虫防治技术的高致死靶标基因。

发明内容

针对上述现有技术现状，本发明的目的是提供飞蝗V-ATPase-V0结构域基因、基因片段及其dsRNA在致死飞蝗中的应用。

本发明提供飞蝗V-ATPase-V0结构域基因，包括以下基因：

飞蝗V-ATPase-a基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，核苷酸长度为2532bp；氨基酸序列为SEQ ID NO：2，序列长度为843个氨基酸；

飞蝗V-ATPase-c基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：6，核苷酸长度为474bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：7，序列长度为157个氨基酸；

飞蝗V-ATPase-c”基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：11，核苷酸长度为627bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：12，序列长度为208个氨基酸；

飞蝗V-ATPase-d基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：16，核苷酸长度为1047bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：17，序列长度为348个氨基酸；

飞蝗V-ATPase-e基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：21，核苷酸长度为255bp；氨基酸序列是SEQ ID NO：22，序列长度为84个氨基酸。

本发明提供的一种飞蝗V-ATPase-V0结构域基因片段，包括以下基因片段：

V-ATPase-a基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：3；

V-ATPase-c基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：8；

V-ATPase-c”基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：13；

V-ATPase-d基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：18；

V-ATPase-e基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：23。

本发明提供的一种飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA，包括以下dsRNA：

由飞蝗V-ATPase-a基因片段SEQ ID NO：3合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-c基因片段SEQ ID NO：8合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-c”基因片段SEQ ID NO：13合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-d基因片段SEQ ID NO：18合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-e基因片段SEQ ID NO：23合成的dsRNA。

本发明提供飞蝗V-ATPase-V0结构域基因dsRNA在害虫防治中的应用，基于飞蝗V-ATPase-V0结构域中包含的飞蝗V-ATPase-a、V-ATPase-c、V-ATPase-c”、V-ATPase-d、V-ATPase-e基因，对于其中每一个基因，通过primer premier 5.0软件设计针对该基因的含有T7启动子的上游引物和下游引物，通过PCR扩增获得两端为T7启动子的DNA模板。按照HiScribe^TMT7 High Yield RNA Synthesis Kit(NEW ENGLAND

Inc.)试剂盒说明体外转录合成相应的dsRNA。通过微量注射器分别将每一个合成的dsRNA注射进入3龄飞蝗体腔内。结果表明：

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-a基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致81％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-c基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致96.8％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-c”基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致96.8％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-d基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致74.6％的死亡。

注射dsRNA后飞蝗V-ATPase-e基因的mRNA表达显著降低，飞蝗出现生长发育受阻并导致90.5％的死亡。

其中，在飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA的合成中，基于不同的基因，设计的上游引物和下游引物如下所示：

飞蝗V-ATPase-a基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；

飞蝗V-ATPase-c基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；

飞蝗V-ATPase-c”基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：14和SEQ IDNO：15；

飞蝗V-ATPase-d基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20；

飞蝗V-ATPase-e基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1、由于本发明的飞蝗V-ATPase-V0结构域基因片段合成的dsRNA特异性及高效的致死率，对于害虫防治具有重要的现实意义，可以为害虫防治提供新的途径。

2、本发明的dsRNA易于合成，方便制备成喷洒式杀虫剂或饵剂，具有较好的推广应用价值。

附图说明

图1为注射LmV-ATPase-a基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-a)至3龄飞蝗后对LmV-ATPase-a基因mRNA表达的影响；dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-a为处理组，β-actin为内参基因。其中***P<0.001。

图2为注射LmV-ATPase-a基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-a)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响；左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：3合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-a的处理组。处理组飞蝗蜕皮至5龄后，在蜕皮至成虫前陆续死亡。

图3为注射LmV-ATPase-c基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-c)至3龄飞蝗后对LmV-ATPase-c基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-c为处理组，β-actin为内参基因。其中**P<0.01。

图4为注射LmV-ATPase-c基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-c)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：8合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-c的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1到2天死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡。

图5为注射LmV-ATPase-c”基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-c”)至3龄飞蝗后对LmV-ATPase-c”基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-c”为处理组，β-actin为内参基因。其中***P<0.001。

图6为注射LmV-ATPase-c”基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-c”)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：13合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-c”的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1到2天死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡。3为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡。

图7为注射LmV-ATPase-d基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-d)至3龄飞蝗后对LmV-ATPase-d基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-d为处理组，β-actin为内参基因。其中***P<0.001。

图8为注射LmV-ATPase-d基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-d)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：18合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-d的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1-2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡。3为飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡。

图9为注射LmV-ATPase-e基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-e)至3龄飞蝗后对LmV-ATPase-e基因mRNA表达的影响。dsGFP为对照，dsLmV-ATPase-e为处理组，β-actin为内参基因。其中**P<0.01。

图10为注射LmV-ATPase-e基因的dsRNA(dsLmV-ATPase-e)至3龄飞蝗后对其生长发育的影响。左侧为注射dsGFP的对照，右侧为注射SEQ ID NO：23合成的dsRNA，即dsLmV-ATPase-e的处理组。其中，1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1到2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡。

具体实施方式

下面结合附图并通过具体实施例来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述具体实施方式仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

飞蝗V-ATPase-V0结构域基因，包括以下基因：

飞蝗V-ATPase-a基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1；

飞蝗V-ATPase-c基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：6；

飞蝗V-ATPase-c”基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：11；

飞蝗V-ATPase-d基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：16；

飞蝗V-ATPase-e基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：21。

实施例1：飞蝗V-ATPase-V0结构域中各基因及基因片段的获得

1)飞蝗V-ATPase-V0结构域中各基因的获得

飞蝗V-ATPase-V0结构域基因包括飞蝗V-ATPase-a、飞蝗V-ATPase-c、飞蝗V-ATPase-c”、飞蝗V-ATPase-d、飞蝗V-ATPase-e共5个基因。

基于飞蝗的转录组数据库，采用生物信息学方法对飞蝗V-ATPase-a、飞蝗V-ATPase-c、飞蝗V-ATPase-c”、飞蝗V-ATPase-d、飞蝗V-ATPase-e基因进行搜索，获得飞蝗V-ATPase-a基因(LmV-ATPase-a)序列，飞蝗V-ATPase-c基因(LmV-ATPase-c)序列，飞蝗V-ATPase-c”基因(LmV-ATPase-c”)序列，飞蝗V-ATPase-d基因(LmV-ATPase-d)序列，飞蝗V-ATPase-e基因(LmV-ATPase-e)序列。

采用primerpremier 5.0软件分别设计各自的上下游引物用于验证上述获得的各序列，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。选取生长健康，大小一致雌雄各半的3龄飞蝗若虫4头，在体式显微镜下将其体壁快速解剖下来，并冷冻于液氮中。依照TaKaRaRNAiso Plus试剂盒提取RNA，采用Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)试剂按照说明书将所提RNA反转录成第一链cDNA，以此cDNA为模板，结合设计的各个基因的上下游引物，通过PCR扩增LmV-ATPase-a基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-c基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-c”基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-d基因cDNA全长序列，LmV-ATPase-e基因cDNA全长序列。将得到的各个产物分别进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，并送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，结果为：

飞蝗V-ATPase-a基因序列为SEQ ID NO：1，核苷酸长度为2532bp；

飞蝗V-ATPase-c基因序列为SEQ ID NO：6，核苷酸长度为474bp；

飞蝗V-ATPase-c”基因序列为SEQ ID NO：11，核苷酸长度为627bp；

飞蝗V-ATPase-d基因序列为SEQ ID NO：16，核苷酸长度为1047bp；

飞蝗V-ATPase-e基因序列为SEQ ID NO：21，核苷酸长度为255bp。

2)飞蝗V-ATPase-V0结构域中各基因的氨基酸序列分析

通过ExPaSy在线软件分别对已获LmV-ATPase-a、LmV-ATPase-c、LmV-ATPase-c”、LmV-ATPase-d、LmV-ATPase-e基因的核苷酸序列进行翻译，预测各基因的开放阅读框编码、分子量和等电点，结果如下：

LmV-ATPase-a基因的开放阅读框编码843个氨基酸，分子量为96KDa，等电点为6.04；

LmV-ATPase-c基因的开放阅读框编码157个氨基酸，分子量为16KDa，等电点为7.98；

LmV-ATPase-c”基因的开放阅读框编码208个氨基酸，分子量为21.7KDa，等电点为8.87；

LmV-ATPase-d基因的开放阅读框编码348个氨基酸，分子量为39.6KDa，等电点为4.93；

LmV-ATPase-e基因的开放阅读框编码84个氨基酸，分子量为93KDa，等电点为9.35。

3)飞蝗V-ATPase-V0结构域中各基因片段的获得

根据SEQ ID NO：1的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：4，下游引物序列为SEQ ID NO：5，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：1的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-a基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：3。

根据SEQ ID NO：6的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：9，下游引物序列为SEQ ID NO：10，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：6的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-c基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：8。

根据SEQ ID NO：11的核苷酸序列，采用primerpremier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：14，下游引物序列为SEQ ID NO：15，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：11的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-c”基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：13。

根据SEQ ID NO：16的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：19，下游引物序列为SEQ ID NO：20，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：16的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-d基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：18。

根据SEQ ID NO：21的核苷酸序列，采用primer premier 5.0软件设计特异性引物，上游引物序列为SEQ ID NO：24，下游引物序列为SEQ ID NO：25，所有引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以含有SEQ ID NO：21的质粒为模板，PCR扩增获得飞蝗V-ATPase-e基因片段，将得到的产物进行纯化、克隆转化到大肠杆菌中，送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，其序列为SEQ ID NO：23。

实施例2：飞蝗V-ATPase-V0结构域中各基因特异性dsRNA合成

分别以实施例1中获得的SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：23的基因片段为模板，经Gel Extraction Kit(OMEGA)试剂盒纯化后按照HiScribe^TMT7 High YieldRNA Synthesis Kit(NEW ENGLAND

Inc.)试剂盒说明体外转录合成相应的dsRNA。使用NANODROP 2000(Thermo scientific)进行定量，使其终浓度达到2μg/μL。保存于-80℃超级低温冰箱备用。

实施例3：飞蝗V-ATPase-V0结构域中各基因dsRNA致死飞蝗实验

1)飞蝗V-ATPase-V0结构域各基因dsRNA的注射

选取生长健康、大小一致共72头3龄第1天若虫进行LmV-ATPase-a基因dsRNA(dsLmV-ATPase-a)的注射。将合成的dsLmV-ATPase-a使用微量注射器将3μL(6μg dsLmV-ATPase-a)轻轻注射进入若虫侧腹部的二、三腹节之间。同时注射相同量的dsGFP至对照组。将注射dsRNA后飞蝗置于人工气候箱中饲养(光照：黑暗时间＝14h:10h，温度30±2℃，湿度60％)，每天饲喂新鲜小麦幼苗和麦麸。

V-ATPase-c基因dsRNA(dsLmV-ATPase-c)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-a基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

V-ATPase-c”基因dsRNA(dsLmV-ATPase-c”)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-a基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

V-ATPase-d基因dsRNA(dsLmV-ATPase-d)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-a基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

V-ATPase-e基因dsRNA(dsLmV-ATPase-e)的注射方法以及注射飞蝗数量与V-ATPase-a基因dsRNA的相同。对照组为注射相同量的dsGFP。

2)飞蝗V-ATPase-V0结构域各基因沉默效率检测

分别收集注射dsGFP的对照组和注射dsLmV-ATPase-a、dsLmV-ATPase-c、dsLmV-ATPase-c”、dsLmV-ATPase-d和dsLmV-ATPase-e的处理组24h这一时间点的若虫进行总RNA提取，对照和注射V-ATPase-V0结构域各基因dsRNA组均为3个生物学重复，每个生物学重复3头试虫，并反转录成第一链cDNA，采用RT-qPCR方法分别检测各个靶标基因(LmV-ATPase-a、LmV-ATPase-c、dsLmV-ATPase-c”、LmV-ATPase-d和LmV-ATPase-e)和内参基因(β-actin)的相对表达量，从而对其沉默效率进行计算。RT-qPCR反应体系及程序参考

GreenRealtime PCRMaster Mix(TOYOBO)说明书。结果表明，与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-a组试虫LmV-ATPase-a基因表达显著降低，***P<0.001(图1)，注射dsLmV-ATPase-c组试虫LmV-ATPase-c基因表达显著降低，**P<0.01(图3)，注射dsLmV-ATPase-c”组试虫LmV-ATPase-c”基因表达显著降低，***P<0.001(图5)，注射dsLmV-ATPase-d组试虫LmV-ATPase-d基因表达显著降低，***P<0.001(图7)，注射dsLmV-ATPase-e组试虫LmV-ATPase-e基因表达显著降低，**P<0.001(图9)。

3)注射V-ATPase-V0结构域各基因dsRNA后3龄若虫表型观察

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-a后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-a后飞蝗，死亡率达到81％，表型如下：处理组可正常发育至5龄，当对照组7天蜕皮为成虫时，处理组飞蝗蜕皮至5龄后，在蜕皮至成虫前陆续死亡，结果如图2所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-c后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-c后飞蝗，死亡率达到96.8％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1到2天死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡，结果如图4所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-c”后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-c”后飞蝗，死亡率达到96.8％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1到2天死亡；2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡。3为处理组飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡，结果如图6所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-d后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-d后飞蝗，死亡率达到74.6％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1-2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡。3为飞蝗3龄蜕4龄后1-2天死亡，结果如图8所示。

3龄若虫注射dsLmV-ATPase-e后，对照组虫体在第5天全部成功蜕皮至4龄，且蜕皮后虫体发育状态良好。与对照组比较，注射dsLmV-ATPase-e后飞蝗，死亡率达到90.5％，表型如下：1为处理组飞蝗3龄蜕4龄前1到2天死亡。2为处理组飞蝗3龄蜕4龄时脊线开裂背部弓起并死亡，结果如图10所示。

综上所述，飞蝗V-ATPase-V0结构域基因片段包括的飞蝗V-ATPase-a、飞蝗V-ATPase-c、飞蝗V-ATPase-c”、飞蝗V-ATPase-d和飞蝗V-ATPase-e的基因片段，由各基因片段合成的dsRNA，分别注射进入飞蝗体腔后可以特异性沉默靶标基因，从而使飞蝗生长发育受阻导致死亡，致死率达到74.6％-96.8％。因此，飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA应用于飞蝗防治中，具体实现方法为：将所述dsRNA制备成喷洒式杀虫剂，或者dsRNA制备成饵剂，或者将dsRNA转入飞蝗摄食植物体。任选其中一种或几种dsRNA制备成喷洒式杀虫剂，或者dsRNA制备成饵剂，或者将dsRNA转入飞蝗摄食植物体，应用于飞蝗防治中。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

LmV-ATPase-a SEQ ID NO：1

atggggtctttattcagaagtgaagaaatggcattgtgtcagctgtttcttcagagtgaagcagcgtatgcatgtgtttcggaattgggagaactaggattggtccagtttcgtgatttgaatccagatgttaatgcatttcaaaggaaatttgtcaacgaagtcagaaggtgtgacgagatggagcgaaagctacgttacctggagaaagaaattcggaaggatggcatcccgatgttggacaccggcgagagtcctgaggcccctcagccgagggagatgatagacttggaggcaacatttgagaagctagagaatgagttaagtgaagtaaaccagaatgcagaagccctgaaacggaacttcctcgaactcacagaactgaaacacatcttgaggaagacccaagtgttcttcgacgagcacgaggggggagcaaacgcgaccgagtcaatgacgcgggccctcataagcgatgactctatcgcccggcaggcgccctcggggcccgtccagctcgggtttgtagctggtgtcattctaagagaacgcatcccagctttcgagcgaatgctgtggagagcgtgccgcggaaatgtttttctccggcaggcggaaatagaaacgcctctcgaagacccgtctaatggggatgcagtctacaaatcggtattcatcatcttcttccaaggagaccagctgaagacgagggtgaagaagatctgcgagggcttccgcgccactctgtacccgtgccccgaggctccggcagaccgccgcgagatggccatgggtgtcatgactaggatcgaagatctcaacacagtgctggggcagacgcaagaccatcgccatcgtgttcttgtggctgctgccaaaaacataaagaactggtttattaaagtgcgaaagataaaagcgatctactttacattgaaccttttcaacctggatgtaacacagaagtgtttgattgcagaatgttgggttcctcttctggacttggagaccatacaactcgcacttcgccgtggcacggaacgcagtggcagttcagtgcctccgattctgaatcggatgcaaacgtttgaggatcctcctacatataacagaacaaataagtttactagtgcattccaaactttagtggacgcatatggagttgccagctatagggaagtcaatccagcaccttataccatcatcacatttccatttctgtttgctgtaatgtttggagatactgggcatggccttattatggctttatttggattctggatggtgctgaaggagaagccacttgctgctaaaaagtcggacagtgatatatggaatatcttcttcggtggtagatatgtcgtgctgcttatgggtctgttttccatgtatacgggtctaatctacaatgatgttttctcaaagtcattgaatatatttggctcgtattggaaggtggagtacaacatgtcgacattaaggacaaataaagaactacagctagatcctgcaaaagaatttttgcaatacccgtatccatttggaatggatccagtatggcagctggctgaaaataaaattatcttcatgaactcttacaagatgaagatttcgatcattcttggggtgatacacatgctgtttggagttctcttgagcctttggaatcacttgtatttcaaaaattccattaacatcatatgcgagttcgtcccacagataattttcttggtttttctgttcctctacatgtgtatcttgatgtttgtaaaatgggtgaactatggaccaacatttgacttcacaatgggccctgcatgtgcaccatcaattttaatcacttttatcaatatggtgctgttcaaaggtagtgttcctccaaaaggttgtgatgaattcatgtttagtggacagaaaggcttgcaaagattctttgtggttcttgctctcctgtgcattccttggatgcttcttgcgaaacctatagtgttgataatgaggcaccggaaagctcaccaaccgctttcgagtcatcctgtacctgcagagaatggcatggatgcggaggtgggatcgatgtctggcacggtgcaaaaggagactacagaagggccacctgcaccgcagagcagcgaagaccacgatctgggagaaatcttcatccatcagggcatacacacgatagagtacgtgctcggctccgtctcgcacactgcttcgtacctacgactgtgggcgctgtcgttggctcacgcacagctgtcggaggtgctgtggagcatggtgatgaagaacggcctggtagtggagggctgggctggtggctttgccctctggatggtgttcgctttctgggccgtgctgaccgtcggcatcctggtgctgatggagggactgtctgcgttcctccacacactgcgacttcactgggtggagttccagagtaaattctactctggtgtaggatactcattccagccattctcgtttgaaaccatcctggattctgcatcacattcagctgaggattaa

LmV-ATPase-a SEQ ID NO：2

MGSLFRSEEMALCQLFLQSEAAYACVSELGELGLVQFRDLNPDVNAFQRKFVNEVRRCDEMERKLRYLEKEIRKDGIPMLDTGESPEAPQPREMIDLEATFEKLENELSEVNQNAEALKRNFLELTELKHILRKTQVFFDEHEGGANATESMTRALISDDSIARQAPSGPVQLGFVAGVILRERIPAFERMLWRACRGNVFLRQAEIETPLEDPSNGDAVYKSVFIIFFQGDQLKTRVKKICEGFRATLYPCPEAPADRREMAMGVMTRIEDLNTVLGQTQDHRHRVLVAAAKNIKNWFIKVRKIKAIYFTLNLFNLDVTQKCLIAECWVPLLDLETIQLALRRGTERSGSSVPPILNRMQTFEDPPTYNRTNKFTSAFQTLVDAYGVASYREVNPAPYTIITFPFLFAVMFGDTGHGLIMALFGFWMVLKEKPLAAKKSDSDIWNIFFGGRYVVLLMGLFSMYTGLIYNDVFSKSLNIFGSYWKVEYNMSTLRTNKELQLDPAKEFLQYPYPFGMDPVWQLAENKIIFMNSYKMKISIILGVIHMLFGVLLSLWNHLYFKNSINIICEFVPQIIFLVFLFLYMCILMFVKWVNYGPTFDFTMGPACAPSILITFINMVLFKGSVPPKGCDEFMFSGQKGLQRFFVVLALLCIPWMLLAKPIVLIMRHRKAHQPLSSHPVPAENGMDAEVGSMSGTVQKETTEGPPAPQSSEDHDLGEIFIHQGIHTIEYVLGSVSHTASYLRLWALSLAHAQLSEVLWSMVMKNGLVVEGWAGGFALWMVFAFWAVLTVGILVLMEGLSAFLHTLRLHWVEFQSKFYSGVGYSFQPFSFETILDSASHSAED

LmV-ATPase-a SEQ ID NO：3

gtgctgaaggagaagccacttgctgctaaaaagtcggacagtgatatatggaatatcttcttcggtggtagatatgtcgtgctgcttatgggtctgttttccatgtatacgggtctaatctacaatgatgttttctcaaagtcattgaatatatttggctcgtattggaaggtggagtacaacatgtcgacattaaggacaaataaagaactacagctagatcctgcaaaagaatttttgcaatacccgtatccatttggaatggatccagtatggcagctggctgaaaataaaattatcttcatgaactcttacaagatgaagatttcgatcattcttggggtgatacacatgctgtttggagttctcttgagcctttggaatcacttgtatttcaaaaattccattaacatcatatgcgagttcgtcccacagataattttcttggtttttctgttcctctacatgtgtatcttgatgtttgtaaaatgggtgaactatggaccaacatttg

LmV-ATPase-a SEQ ID NO：4

taatacgactcactataggggtgctgaaggagaagccac

LmV-ATPase-a SEQ ID NO：5

taatacgactcactatagggcaaatgttggtccatagttc

LmV-ATPase-c SEQ ID NO：6

atggcgttaccagaagatcgtccgatctacggccctttctttggagtaatgggggctgcatctgcaataattttcagctctctgggagcagcatacggaactgcgaagtccggtacaggtattgcagcgatgtctgtaatgcgaccagagctgattatgaagtctataatccccgttgtcatggctggtatcatcgcaatttacggcttggtcgtagcagtattgatagcaggagctctcgaggagcccgccacctacagtttatttaagggatttgtccacttgggggcaggattggccgtcggatttagcgggcttgcagcaggatttgctattggcattgtaggtgatgctggagtcagaggaactgctcaacaaccacgtctctttgtaggaatgattttgattctcattttcgctgaggtgttaggtctttacggacttattgttgctatctacttgtataccaaataa

LmV-ATPase-c SEQ ID NO：7

MALPEDRPIYGPFFGVMGAASAIIFSSLGAAYGTAKSGTGIAAMSVMRPELIMKSIIPVVMAGIIAIYGLVVAVLIAGALEEPATYSLFKGFVHLGAGLAVGFSGLAAGFAIGIVGDAGVRGTAQQPRLFVGMILILIFAEVLGLYGLIVAIYLYTK

LmV-ATPase-c SEQ ID NO：8

agctctctgggagcagcatacggaactgcgaagtccggtacaggtattgcagcgatgtctgtaatgcgaccagagctgattatgaagtctataatccccgttgtcatggctggtatcatcgcaatttacggcttggtcgtagcagtattgatagcaggagctctcgaggagcccgccacctacagtttatttaagggatttgtccacttgggggcaggattggccgtcggatttagcgggcttgcagcaggatttgctattggcattgtaggtgatgctggagtcagaggaactgc

LmV-ATPase-c SEQ ID NO：9

taatacgactcactatagggagctctctgggagcagcata

LmV-ATPase-c SEQ ID NO：10

taatacgactcactataggggcagttcctctgactccagc

LmV-ATPase-c”SEQ ID NO：11

atgaggtacggtttggggtacacttttctagcgacgctttcgtctgcagtgactataatagtcctttattatgtccttacgggaaaaggagaaaggataagttttggctggttccttgcggagactagcccatacatgtgggcaacagttggtgttggattggctgtttctctgtcagtggtaggagctgcattaggcattcatacaacgggagtcagtatcattggcggtggtgtgaaggcacctagaatcaaaacaaagaacttgatatccgtcattttctgtgaagctgttgcaatctatggtctcattactgcaattgttctttctgggatgttagagaacttcagttgggacgccgttcagaataatattgacttgaaaggccagaattggttttctggttacataatgtttggtgctgggttaagtgttggattagttaaccttttctgtggaattgcagttggaattgtgggatctggtgctgcactagcagatgctgccaactcagcgttatttgtcaagatcttgatcgttgaaatttttggaagtgctattggactgtttggactcattgttggaatttatatgactgccaaagtgaaaatgggagacaagcagtaa

LmV-ATPase-c”SEQ ID NO：12

MRYGLGYTFLATLSSAVTIIVLYYVLTGKGERISFGWFLAETSPYMWATVGVGLAVSLSVVGAALGIHTTGVSIIGGGVKAPRIKTKNLISVIFCEAVAIYGLITAIVLSGMLENFSWDAVQNNIDLKGQNWFSGYIMFGAGLSVGLVNLFCGIAVGIVGSGAALADAANSALFVKILIVEIFGSAIGLFGLIVGIYMTAKVKMGDKQ

LmV-ATPase-c”SEQ ID NO：13

ctagcgacgctttcgtctgcagtgactataatagtcctttattatgtccttacgggaaaaggagaaaggataagttttggctggttccttgcggagactagcccatacatgtgggcaacagttggtgttggattggctgtttctctgtcagtggtaggagctgcattaggcattcatacaacgggagtcagtatcattggcggtggtgtgaaggcacctagaatcaaaacaaagaacttgatatccgtcattttctgtgaagctgttgcaatctatggtctcattactgcaattgttctttctgggatgttagagaacttcagttgggacgccgttcagaataatattgacttgaaaggccagaattggttttctggttacataatgtttggtgctgggttaagtgttggattagttaaccttttctgtggaattgcagttggaattgtgggatctggtgc

LmV-ATPase-c”SEQ ID NO：14

taatacgactcactatagggctagcgacgctttcgtctg

LmV-ATPase-c”SEQ ID NO：15

taatacgactcactataggggcaccagatcccacaattc

LmV-ATPase-d SEQ ID NO：16

atgattggttgtatgttcaatattgatgctggttacttggaaggattgtgtagaggtttcaagtgtggtattttaaaacaagccgattacttgaacttggttcaatgtgaaactcttgaagatcttaagttacatcttcagggtacagattacgggagctttttagcaaatgagccaagtccactacaagtgtctgtgattgatgataagcttagagaaaaattggttatcgaatttcagcacatgagacatcatgcagttgagccattgtctacatttctggactatataacgtacagctacatgatagataacatcattcttcttatcactggaactttacaccagcgaccaatatcagaattgattccaaaatgtcatccactgggaagttttgagcaaatggaggcaattcatgttgcagcaacacctgcagaactatacagtgcagttttggttgacacaccacttgctcccttctttgtggactgcatcagtgaacaagatcttgatgagatgaatatagaaataatacggaataccctgtacaaggcatacttagaagcattctactctttctgcaaagaacttggtggaacaacagctgacactatgtgtgaaattctcgcttttgaagcagacagaagagcaattattattacaataaattcatttggcaccgaattaacaaaggatgatcgtgcaaaactgtatcctcgttgtggaaaactacatcctgatggtctagctgctttggcacgtgcggatgactatgaacaagtaaaagctgttgctgaatactatgctgaatacagtgctttatttgaaggtgcaggtaacaacccaggagagaaaacactagaggacaaattcttcgaacatgaggtacgattgaatgtgaatgcatttttacaacagttccactttggtgtattctactcatacttgaaactgaaggaacaagaatgccgtaacattgtatggattgcagaatgtgttgcccaaaaacacagggcaaaaattgacaactacattcccatattctga

LmV-ATPase-d SEQ ID NO：17

MIGCMFNIDAGYLEGLCRGFKCGILKQADYLNLVQCETLEDLKLHLQGTDYGSFLANEPSPLQVSVIDDKLREKLVIEFQHMRHHAVEPLSTFLDYITYSYMIDNIILLITGTLHQRPISELIPKCHPLGSFEQMEAIHVAATPAELYSAVLVDTPLAPFFVDCISEQDLDEMNIEIIRNTLYKAYLEAFYSFCKELGGTTADTMCEILAFEADRRAIIITINSFGTELTKDDRAKLYPRCGKLHPDGLAALARADDYEQVKAVAEYYAEYSALFEGAGNNPGEKTLEDKFFEHEVRLNVNAFLQQFHFGVFYSYLKLKEQECRNIVWIAECVAQKHRAKIDNYIPIF

LmV-ATPase-d SEQ ID NO：18

cgggagctttttagcaaatgagccaagtccactacaagtgtctgtgattgatgataagcttagagaaaaattggttatcgaatttcagcacatgagacatcatgcagttgagccattgtctacatttctggactatataacgtacagctacatgatagataacatcattcttcttatcactggaactttacaccagcgaccaatatcagaattgattccaaaatgtcatccactgggaagttttgagcaaatggaggcaattcatgttgcagcaacacctgcagaactatacagtgcagttttggttgacacaccacttgctcccttctttgtggactgcatcagtgaacaagatcttgatgagatgaatatagaaataatacggaataccctgtacaaggcatacttagaagcattctactctttctgcaaagaacttggtggaacaacagctga

LmV-ATPase-d SEQ ID NO：19

taatacgactcactatagggcgggagctttttagcaaatg

LmV-ATPase-d SEQ ID NO：20

taatacgactcactatagggtcagctgttgttccaccaag

LmV-ATPase-e SEQ ID NO：21

atgggagccgcagctacgcctattattatatttactgccctatggggcgttgttggaattgtgttaccttttatagtgcctaaaggccccaacagaggggtgctgcaagttgtattgatgctgacagctgcaacatgttggctcttctggttatgttgttatatggctcaaatgaatcctttgattggccctaaaattacaaacacaactcttgcgattatgtccagggaatggagtaactataaaccagcctaa

LmV-ATPase-e SEQ ID NO：22

MGAAATPIIIFTALWGVVGIVLPFIVPKGPNRGVLQVVLMLTAATCWLFWLCCYMAQMNPLIGPKITNTTLAIMSREWSNYKPA

LmV-ATPase-e SEQ ID NO：23

ccgcagctacgcctattattatatttactgccctatggggcgttgttggaattgtgttaccttttatagtgcctaaaggccccaacagaggggtgctgcaagttgtattgatgctgacagctgcaacatgttggctcttctggttatgttgttatatggctcaaatgaatcctttgattggccctaaaattacaaacacaactcttgcgattatgtccagggaatg

LmV-ATPase-e SEQ ID NO：24

taatacgactcactatagggccgcagctacgcctattatt

LmV-ATPase-e SEQ ID NO：25

taatacgactcactatagggcattccctggacataatcgc

序列表

<110> 山西大学

<120> 飞蝗V-ATPase-V0结构域基因及其dsRNA在害虫防治中的应用

<160> 25

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2532

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 1

atggggtctt tattcagaag tgaagaaatg gcattgtgtc agctgtttct tcagagtgaa 60

gcagcgtatg catgtgtttc ggaattggga gaactaggat tggtccagtt tcgtgatttg 120

aatccagatg ttaatgcatt tcaaaggaaa tttgtcaacg aagtcagaag gtgtgacgag 180

atggagcgaa agctacgtta cctggagaaa gaaattcgga aggatggcat cccgatgttg 240

gacaccggcg agagtcctga ggcccctcag ccgagggaga tgatagactt ggaggcaaca 300

tttgagaagc tagagaatga gttaagtgaa gtaaaccaga atgcagaagc cctgaaacgg 360

aacttcctcg aactcacaga actgaaacac atcttgagga agacccaagt gttcttcgac 420

gagcacgagg ggggagcaaa cgcgaccgag tcaatgacgc gggccctcat aagcgatgac 480

tctatcgccc ggcaggcgcc ctcggggccc gtccagctcg ggtttgtagc tggtgtcatt 540

ctaagagaac gcatcccagc tttcgagcga atgctgtgga gagcgtgccg cggaaatgtt 600

tttctccggc aggcggaaat agaaacgcct ctcgaagacc cgtctaatgg ggatgcagtc 660

tacaaatcgg tattcatcat cttcttccaa ggagaccagc tgaagacgag ggtgaagaag 720

atctgcgagg gcttccgcgc cactctgtac ccgtgccccg aggctccggc agaccgccgc 780

gagatggcca tgggtgtcat gactaggatc gaagatctca acacagtgct ggggcagacg 840

caagaccatc gccatcgtgt tcttgtggct gctgccaaaa acataaagaa ctggtttatt 900

aaagtgcgaa agataaaagc gatctacttt acattgaacc ttttcaacct ggatgtaaca 960

cagaagtgtt tgattgcaga atgttgggtt cctcttctgg acttggagac catacaactc 1020

gcacttcgcc gtggcacgga acgcagtggc agttcagtgc ctccgattct gaatcggatg 1080

caaacgtttg aggatcctcc tacatataac agaacaaata agtttactag tgcattccaa 1140

actttagtgg acgcatatgg agttgccagc tatagggaag tcaatccagc accttatacc 1200

atcatcacat ttccatttct gtttgctgta atgtttggag atactgggca tggccttatt 1260

atggctttat ttggattctg gatggtgctg aaggagaagc cacttgctgc taaaaagtcg 1320

gacagtgata tatggaatat cttcttcggt ggtagatatg tcgtgctgct tatgggtctg 1380

ttttccatgt atacgggtct aatctacaat gatgttttct caaagtcatt gaatatattt 1440

ggctcgtatt ggaaggtgga gtacaacatg tcgacattaa ggacaaataa agaactacag 1500

ctagatcctg caaaagaatt tttgcaatac ccgtatccat ttggaatgga tccagtatgg 1560

cagctggctg aaaataaaat tatcttcatg aactcttaca agatgaagat ttcgatcatt 1620

cttggggtga tacacatgct gtttggagtt ctcttgagcc tttggaatca cttgtatttc 1680

aaaaattcca ttaacatcat atgcgagttc gtcccacaga taattttctt ggtttttctg 1740

ttcctctaca tgtgtatctt gatgtttgta aaatgggtga actatggacc aacatttgac 1800

ttcacaatgg gccctgcatg tgcaccatca attttaatca cttttatcaa tatggtgctg 1860

ttcaaaggta gtgttcctcc aaaaggttgt gatgaattca tgtttagtgg acagaaaggc 1920

ttgcaaagat tctttgtggt tcttgctctc ctgtgcattc cttggatgct tcttgcgaaa 1980

cctatagtgt tgataatgag gcaccggaaa gctcaccaac cgctttcgag tcatcctgta 2040

cctgcagaga atggcatgga tgcggaggtg ggatcgatgt ctggcacggt gcaaaaggag 2100

actacagaag ggccacctgc accgcagagc agcgaagacc acgatctggg agaaatcttc 2160

atccatcagg gcatacacac gatagagtac gtgctcggct ccgtctcgca cactgcttcg 2220

tacctacgac tgtgggcgct gtcgttggct cacgcacagc tgtcggaggt gctgtggagc 2280

atggtgatga agaacggcct ggtagtggag ggctgggctg gtggctttgc cctctggatg 2340

gtgttcgctt tctgggccgt gctgaccgtc ggcatcctgg tgctgatgga gggactgtct 2400

gcgttcctcc acacactgcg acttcactgg gtggagttcc agagtaaatt ctactctggt 2460

gtaggatact cattccagcc attctcgttt gaaaccatcc tggattctgc atcacattca 2520

gctgaggatt aa 2532

<210> 2

<211> 843

<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 2

Met Gly Ser Leu Phe Arg Ser Glu Glu Met Ala Leu Cys Gln Leu Phe

1 5 10 15

Leu Gln Ser Glu Ala Ala Tyr Ala Cys Val Ser Glu Leu Gly Glu Leu

20 25 30

Gly Leu Val Gln Phe Arg Asp Leu Asn Pro Asp Val Asn Ala Phe Gln

35 40 45

Arg Lys Phe Val Asn Glu Val Arg Arg Cys Asp Glu Met Glu Arg Lys

50 55 60

Leu Arg Tyr Leu Glu Lys Glu Ile Arg Lys Asp Gly Ile Pro Met Leu

65 70 75 80

Asp Thr Gly Glu Ser Pro Glu Ala Pro Gln Pro Arg Glu Met Ile Asp

85 90 95

Leu Glu Ala Thr Phe Glu Lys Leu Glu Asn Glu Leu Ser Glu Val Asn

100 105 110

Gln Asn Ala Glu Ala Leu Lys Arg Asn Phe Leu Glu Leu Thr Glu Leu

115 120 125

Lys His Ile Leu Arg Lys Thr Gln Val Phe Phe Asp Glu His Glu Gly

130 135 140

Gly Ala Asn Ala Thr Glu Ser Met Thr Arg Ala Leu Ile Ser Asp Asp

145 150 155 160

Ser Ile Ala Arg Gln Ala Pro Ser Gly Pro Val Gln Leu Gly Phe Val

165 170 175

Ala Gly Val Ile Leu Arg Glu Arg Ile Pro Ala Phe Glu Arg Met Leu

180 185 190

Trp Arg Ala Cys Arg Gly Asn Val Phe Leu Arg Gln Ala Glu Ile Glu

195 200 205

Thr Pro Leu Glu Asp Pro Ser Asn Gly Asp Ala Val Tyr Lys Ser Val

210 215 220

Phe Ile Ile Phe Phe Gln Gly Asp Gln Leu Lys Thr Arg Val Lys Lys

225 230 235 240

Ile Cys Glu Gly Phe Arg Ala Thr Leu Tyr Pro Cys Pro Glu Ala Pro

245 250 255

Ala Asp Arg Arg Glu Met Ala Met Gly Val Met Thr Arg Ile Glu Asp

260 265 270

Leu Asn Thr Val Leu Gly Gln Thr Gln Asp His Arg His Arg Val Leu

275 280 285

Val Ala Ala Ala Lys Asn Ile Lys Asn Trp Phe Ile Lys Val Arg Lys

290 295 300

Ile Lys Ala Ile Tyr Phe Thr Leu Asn Leu Phe Asn Leu Asp Val Thr

305 310 315 320

Gln Lys Cys Leu Ile Ala Glu Cys Trp Val Pro Leu Leu Asp Leu Glu

325 330 335

Thr Ile Gln Leu Ala Leu Arg Arg Gly Thr Glu Arg Ser Gly Ser Ser

340 345 350

Val Pro Pro Ile Leu Asn Arg Met Gln Thr Phe Glu Asp Pro Pro Thr

355 360 365

Tyr Asn Arg Thr Asn Lys Phe Thr Ser Ala Phe Gln Thr Leu Val Asp

370 375 380

Ala Tyr Gly Val Ala Ser Tyr Arg Glu Val Asn Pro Ala Pro Tyr Thr

385 390 395 400

Ile Ile Thr Phe Pro Phe Leu Phe Ala Val Met Phe Gly Asp Thr Gly

405 410 415

His Gly Leu Ile Met Ala Leu Phe Gly Phe Trp Met Val Leu Lys Glu

420 425 430

Lys Pro Leu Ala Ala Lys Lys Ser Asp Ser Asp Ile Trp Asn Ile Phe

435 440 445

Phe Gly Gly Arg Tyr Val Val Leu Leu Met Gly Leu Phe Ser Met Tyr

450 455 460

Thr Gly Leu Ile Tyr Asn Asp Val Phe Ser Lys Ser Leu Asn Ile Phe

465 470 475 480

Gly Ser Tyr Trp Lys Val Glu Tyr Asn Met Ser Thr Leu Arg Thr Asn

485 490 495

Lys Glu Leu Gln Leu Asp Pro Ala Lys Glu Phe Leu Gln Tyr Pro Tyr

500 505 510

Pro Phe Gly Met Asp Pro Val Trp Gln Leu Ala Glu Asn Lys Ile Ile

515 520 525

Phe Met Asn Ser Tyr Lys Met Lys Ile Ser Ile Ile Leu Gly Val Ile

530 535 540

His Met Leu Phe Gly Val Leu Leu Ser Leu Trp Asn His Leu Tyr Phe

545 550 555 560

Lys Asn Ser Ile Asn Ile Ile Cys Glu Phe Val Pro Gln Ile Ile Phe

565 570 575

Leu Val Phe Leu Phe Leu Tyr Met Cys Ile Leu Met Phe Val Lys Trp

580 585 590

Val Asn Tyr Gly Pro Thr Phe Asp Phe Thr Met Gly Pro Ala Cys Ala

595 600 605

Pro Ser Ile Leu Ile Thr Phe Ile Asn Met Val Leu Phe Lys Gly Ser

610 615 620

Val Pro Pro Lys Gly Cys Asp Glu Phe Met Phe Ser Gly Gln Lys Gly

625 630 635 640

Leu Gln Arg Phe Phe Val Val Leu Ala Leu Leu Cys Ile Pro Trp Met

645 650 655

Leu Leu Ala Lys Pro Ile Val Leu Ile Met Arg His Arg Lys Ala His

660 665 670

Gln Pro Leu Ser Ser His Pro Val Pro Ala Glu Asn Gly Met Asp Ala

675 680 685

Glu Val Gly Ser Met Ser Gly Thr Val Gln Lys Glu Thr Thr Glu Gly

690 695 700

Pro Pro Ala Pro Gln Ser Ser Glu Asp His Asp Leu Gly Glu Ile Phe

705 710 715 720

Ile His Gln Gly Ile His Thr Ile Glu Tyr Val Leu Gly Ser Val Ser

725 730 735

His Thr Ala Ser Tyr Leu Arg Leu Trp Ala Leu Ser Leu Ala His Ala

740 745 750

Gln Leu Ser Glu Val Leu Trp Ser Met Val Met Lys Asn Gly Leu Val

755 760 765

Val Glu Gly Trp Ala Gly Gly Phe Ala Leu Trp Met Val Phe Ala Phe

770 775 780

Trp Ala Val Leu Thr Val Gly Ile Leu Val Leu Met Glu Gly Leu Ser

785 790 795 800

Ala Phe Leu His Thr Leu Arg Leu His Trp Val Glu Phe Gln Ser Lys

805 810 815

Phe Tyr Ser Gly Val Gly Tyr Ser Phe Gln Pro Phe Ser Phe Glu Thr

820 825 830

Ile Leu Asp Ser Ala Ser His Ser Ala Glu Asp

835 840

<210> 3

<211> 514

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 3

gtgctgaagg agaagccact tgctgctaaa aagtcggaca gtgatatatg gaatatcttc 60

ttcggtggta gatatgtcgt gctgcttatg ggtctgtttt ccatgtatac gggtctaatc 120

tacaatgatg ttttctcaaa gtcattgaat atatttggct cgtattggaa ggtggagtac 180

aacatgtcga cattaaggac aaataaagaa ctacagctag atcctgcaaa agaatttttg 240

caatacccgt atccatttgg aatggatcca gtatggcagc tggctgaaaa taaaattatc 300

ttcatgaact cttacaagat gaagatttcg atcattcttg gggtgataca catgctgttt 360

ggagttctct tgagcctttg gaatcacttg tatttcaaaa attccattaa catcatatgc 420

gagttcgtcc cacagataat tttcttggtt tttctgttcc tctacatgtg tatcttgatg 480

tttgtaaaat gggtgaacta tggaccaaca tttg 514

<210> 4

<211> 39

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 4

taatacgact cactataggg gtgctgaagg agaagccac 39

<210> 5

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 5

taatacgact cactataggg caaatgttgg tccatagttc 40

<210> 6

<211> 474

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 6

atggcgttac cagaagatcg tccgatctac ggccctttct ttggagtaat gggggctgca 60

tctgcaataa ttttcagctc tctgggagca gcatacggaa ctgcgaagtc cggtacaggt 120

attgcagcga tgtctgtaat gcgaccagag ctgattatga agtctataat ccccgttgtc 180

atggctggta tcatcgcaat ttacggcttg gtcgtagcag tattgatagc aggagctctc 240

gaggagcccg ccacctacag tttatttaag ggatttgtcc acttgggggc aggattggcc 300

gtcggattta gcgggcttgc agcaggattt gctattggca ttgtaggtga tgctggagtc 360

agaggaactg ctcaacaacc acgtctcttt gtaggaatga ttttgattct cattttcgct 420

gaggtgttag gtctttacgg acttattgtt gctatctact tgtataccaa ataa 474

<210> 7

<211> 157

<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 7

Met Ala Leu Pro Glu Asp Arg Pro Ile Tyr Gly Pro Phe Phe Gly Val

1 5 10 15

Met Gly Ala Ala Ser Ala Ile Ile Phe Ser Ser Leu Gly Ala Ala Tyr

20 25 30

Gly Thr Ala Lys Ser Gly Thr Gly Ile Ala Ala Met Ser Val Met Arg

35 40 45

Pro Glu Leu Ile Met Lys Ser Ile Ile Pro Val Val Met Ala Gly Ile

50 55 60

Ile Ala Ile Tyr Gly Leu Val Val Ala Val Leu Ile Ala Gly Ala Leu

65 70 75 80

Glu Glu Pro Ala Thr Tyr Ser Leu Phe Lys Gly Phe Val His Leu Gly

85 90 95

Ala Gly Leu Ala Val Gly Phe Ser Gly Leu Ala Ala Gly Phe Ala Ile

100 105 110

Gly Ile Val Gly Asp Ala Gly Val Arg Gly Thr Ala Gln Gln Pro Arg

115 120 125

Leu Phe Val Gly Met Ile Leu Ile Leu Ile Phe Ala Glu Val Leu Gly

130 135 140

Leu Tyr Gly Leu Ile Val Ala Ile Tyr Leu Tyr Thr Lys

145 150 155

<210> 8

<211> 296

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 8

agctctctgg gagcagcata cggaactgcg aagtccggta caggtattgc agcgatgtct 60

gtaatgcgac cagagctgat tatgaagtct ataatccccg ttgtcatggc tggtatcatc 120

gcaatttacg gcttggtcgt agcagtattg atagcaggag ctctcgagga gcccgccacc 180

tacagtttat ttaagggatt tgtccacttg ggggcaggat tggccgtcgg atttagcggg 240

cttgcagcag gatttgctat tggcattgta ggtgatgctg gagtcagagg aactgc 296

<210> 9

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 9

taatacgact cactataggg agctctctgg gagcagcata 40

<210> 10

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 10

taatacgact cactataggg gcagttcctc tgactccagc 40

<210> 11

<211> 627

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 11

atgaggtacg gtttggggta cacttttcta gcgacgcttt cgtctgcagt gactataata 60

gtcctttatt atgtccttac gggaaaagga gaaaggataa gttttggctg gttccttgcg 120

gagactagcc catacatgtg ggcaacagtt ggtgttggat tggctgtttc tctgtcagtg 180

gtaggagctg cattaggcat tcatacaacg ggagtcagta tcattggcgg tggtgtgaag 240

gcacctagaa tcaaaacaaa gaacttgata tccgtcattt tctgtgaagc tgttgcaatc 300

tatggtctca ttactgcaat tgttctttct gggatgttag agaacttcag ttgggacgcc 360

gttcagaata atattgactt gaaaggccag aattggtttt ctggttacat aatgtttggt 420

gctgggttaa gtgttggatt agttaacctt ttctgtggaa ttgcagttgg aattgtggga 480

tctggtgctg cactagcaga tgctgccaac tcagcgttat ttgtcaagat cttgatcgtt 540

gaaatttttg gaagtgctat tggactgttt ggactcattg ttggaattta tatgactgcc 600

aaagtgaaaa tgggagacaa gcagtaa 627

<210> 12

<211> 208

<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 12

Met Arg Tyr Gly Leu Gly Tyr Thr Phe Leu Ala Thr Leu Ser Ser Ala

1 5 10 15

Val Thr Ile Ile Val Leu Tyr Tyr Val Leu Thr Gly Lys Gly Glu Arg

20 25 30

Ile Ser Phe Gly Trp Phe Leu Ala Glu Thr Ser Pro Tyr Met Trp Ala

35 40 45

Thr Val Gly Val Gly Leu Ala Val Ser Leu Ser Val Val Gly Ala Ala

50 55 60

Leu Gly Ile His Thr Thr Gly Val Ser Ile Ile Gly Gly Gly Val Lys

65 70 75 80

Ala Pro Arg Ile Lys Thr Lys Asn Leu Ile Ser Val Ile Phe Cys Glu

85 90 95

Ala Val Ala Ile Tyr Gly Leu Ile Thr Ala Ile Val Leu Ser Gly Met

100 105 110

Leu Glu Asn Phe Ser Trp Asp Ala Val Gln Asn Asn Ile Asp Leu Lys

115 120 125

Gly Gln Asn Trp Phe Ser Gly Tyr Ile Met Phe Gly Ala Gly Leu Ser

130 135 140

Val Gly Leu Val Asn Leu Phe Cys Gly Ile Ala Val Gly Ile Val Gly

145 150 155 160

Ser Gly Ala Ala Leu Ala Asp Ala Ala Asn Ser Ala Leu Phe Val Lys

165 170 175

Ile Leu Ile Val Glu Ile Phe Gly Ser Ala Ile Gly Leu Phe Gly Leu

180 185 190

Ile Val Gly Ile Tyr Met Thr Ala Lys Val Lys Met Gly Asp Lys Gln

195 200 205

<210> 13

<211> 461

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 13

ctagcgacgc tttcgtctgc agtgactata atagtccttt attatgtcct tacgggaaaa 60

ggagaaagga taagttttgg ctggttcctt gcggagacta gcccatacat gtgggcaaca 120

gttggtgttg gattggctgt ttctctgtca gtggtaggag ctgcattagg cattcataca 180

acgggagtca gtatcattgg cggtggtgtg aaggcaccta gaatcaaaac aaagaacttg 240

atatccgtca ttttctgtga agctgttgca atctatggtc tcattactgc aattgttctt 300

tctgggatgt tagagaactt cagttgggac gccgttcaga ataatattga cttgaaaggc 360

cagaattggt tttctggtta cataatgttt ggtgctgggt taagtgttgg attagttaac 420

cttttctgtg gaattgcagt tggaattgtg ggatctggtg c 461

<210> 14

<211> 39

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 14

taatacgact cactataggg ctagcgacgc tttcgtctg 39

<210> 15

<211> 39

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 15

taatacgact cactataggg gcaccagatc ccacaattc 39

<210> 16

<211> 1047

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 16

atgattggtt gtatgttcaa tattgatgct ggttacttgg aaggattgtg tagaggtttc 60

aagtgtggta ttttaaaaca agccgattac ttgaacttgg ttcaatgtga aactcttgaa 120

gatcttaagt tacatcttca gggtacagat tacgggagct ttttagcaaa tgagccaagt 180

ccactacaag tgtctgtgat tgatgataag cttagagaaa aattggttat cgaatttcag 240

cacatgagac atcatgcagt tgagccattg tctacatttc tggactatat aacgtacagc 300

tacatgatag ataacatcat tcttcttatc actggaactt tacaccagcg accaatatca 360

gaattgattc caaaatgtca tccactggga agttttgagc aaatggaggc aattcatgtt 420

gcagcaacac ctgcagaact atacagtgca gttttggttg acacaccact tgctcccttc 480

tttgtggact gcatcagtga acaagatctt gatgagatga atatagaaat aatacggaat 540

accctgtaca aggcatactt agaagcattc tactctttct gcaaagaact tggtggaaca 600

acagctgaca ctatgtgtga aattctcgct tttgaagcag acagaagagc aattattatt 660

acaataaatt catttggcac cgaattaaca aaggatgatc gtgcaaaact gtatcctcgt 720

tgtggaaaac tacatcctga tggtctagct gctttggcac gtgcggatga ctatgaacaa 780

gtaaaagctg ttgctgaata ctatgctgaa tacagtgctt tatttgaagg tgcaggtaac 840

aacccaggag agaaaacact agaggacaaa ttcttcgaac atgaggtacg attgaatgtg 900

aatgcatttt tacaacagtt ccactttggt gtattctact catacttgaa actgaaggaa 960

caagaatgcc gtaacattgt atggattgca gaatgtgttg cccaaaaaca cagggcaaaa 1020

attgacaact acattcccat attctga 1047

<210> 17

<211> 348

<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 17

Met Ile Gly Cys Met Phe Asn Ile Asp Ala Gly Tyr Leu Glu Gly Leu

1 5 10 15

Cys Arg Gly Phe Lys Cys Gly Ile Leu Lys Gln Ala Asp Tyr Leu Asn

20 25 30

Leu Val Gln Cys Glu Thr Leu Glu Asp Leu Lys Leu His Leu Gln Gly

35 40 45

Thr Asp Tyr Gly Ser Phe Leu Ala Asn Glu Pro Ser Pro Leu Gln Val

50 55 60

Ser Val Ile Asp Asp Lys Leu Arg Glu Lys Leu Val Ile Glu Phe Gln

65 70 75 80

His Met Arg His His Ala Val Glu Pro Leu Ser Thr Phe Leu Asp Tyr

85 90 95

Ile Thr Tyr Ser Tyr Met Ile Asp Asn Ile Ile Leu Leu Ile Thr Gly

100 105 110

Thr Leu His Gln Arg Pro Ile Ser Glu Leu Ile Pro Lys Cys His Pro

115 120 125

Leu Gly Ser Phe Glu Gln Met Glu Ala Ile His Val Ala Ala Thr Pro

130 135 140

Ala Glu Leu Tyr Ser Ala Val Leu Val Asp Thr Pro Leu Ala Pro Phe

145 150 155 160

Phe Val Asp Cys Ile Ser Glu Gln Asp Leu Asp Glu Met Asn Ile Glu

165 170 175

Ile Ile Arg Asn Thr Leu Tyr Lys Ala Tyr Leu Glu Ala Phe Tyr Ser

180 185 190

Phe Cys Lys Glu Leu Gly Gly Thr Thr Ala Asp Thr Met Cys Glu Ile

195 200 205

Leu Ala Phe Glu Ala Asp Arg Arg Ala Ile Ile Ile Thr Ile Asn Ser

210 215 220

Phe Gly Thr Glu Leu Thr Lys Asp Asp Arg Ala Lys Leu Tyr Pro Arg

225 230 235 240

Cys Gly Lys Leu His Pro Asp Gly Leu Ala Ala Leu Ala Arg Ala Asp

245 250 255

Asp Tyr Glu Gln Val Lys Ala Val Ala Glu Tyr Tyr Ala Glu Tyr Ser

260 265 270

Ala Leu Phe Glu Gly Ala Gly Asn Asn Pro Gly Glu Lys Thr Leu Glu

275 280 285

Asp Lys Phe Phe Glu His Glu Val Arg Leu Asn Val Asn Ala Phe Leu

290 295 300

Gln Gln Phe His Phe Gly Val Phe Tyr Ser Tyr Leu Lys Leu Lys Glu

305 310 315 320

Gln Glu Cys Arg Asn Ile Val Trp Ile Ala Glu Cys Val Ala Gln Lys

325 330 335

His Arg Ala Lys Ile Asp Asn Tyr Ile Pro Ile Phe

340 345

<210> 18

<211> 456

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 18

cgggagcttt ttagcaaatg agccaagtcc actacaagtg tctgtgattg atgataagct 60

tagagaaaaa ttggttatcg aatttcagca catgagacat catgcagttg agccattgtc 120

tacatttctg gactatataa cgtacagcta catgatagat aacatcattc ttcttatcac 180

tggaacttta caccagcgac caatatcaga attgattcca aaatgtcatc cactgggaag 240

ttttgagcaa atggaggcaa ttcatgttgc agcaacacct gcagaactat acagtgcagt 300

tttggttgac acaccacttg ctcccttctt tgtggactgc atcagtgaac aagatcttga 360

tgagatgaat atagaaataa tacggaatac cctgtacaag gcatacttag aagcattcta 420

ctctttctgc aaagaacttg gtggaacaac agctga 456

<210> 19

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 19

taatacgact cactataggg cgggagcttt ttagcaaatg 40

<210> 20

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 20

taatacgact cactataggg tcagctgttg ttccaccaag 40

<210> 21

<211> 255

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 21

atgggagccg cagctacgcc tattattata tttactgccc tatggggcgt tgttggaatt 60

gtgttacctt ttatagtgcc taaaggcccc aacagagggg tgctgcaagt tgtattgatg 120

ctgacagctg caacatgttg gctcttctgg ttatgttgtt atatggctca aatgaatcct 180

ttgattggcc ctaaaattac aaacacaact cttgcgatta tgtccaggga atggagtaac 240

tataaaccag cctaa 255

<210> 22

<211> 84

<212> PRT

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 22

Met Gly Ala Ala Ala Thr Pro Ile Ile Ile Phe Thr Ala Leu Trp Gly

1 5 10 15

Val Val Gly Ile Val Leu Pro Phe Ile Val Pro Lys Gly Pro Asn Arg

20 25 30

Gly Val Leu Gln Val Val Leu Met Leu Thr Ala Ala Thr Cys Trp Leu

35 40 45

Phe Trp Leu Cys Cys Tyr Met Ala Gln Met Asn Pro Leu Ile Gly Pro

50 55 60

Lys Ile Thr Asn Thr Thr Leu Ala Ile Met Ser Arg Glu Trp Ser Asn

65 70 75 80

Tyr Lys Pro Ala

<210> 23

<211> 226

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 23

ccgcagctac gcctattatt atatttactg ccctatgggg cgttgttgga attgtgttac 60

cttttatagt gcctaaaggc cccaacagag gggtgctgca agttgtattg atgctgacag 120

ctgcaacatg ttggctcttc tggttatgtt gttatatggc tcaaatgaat cctttgattg 180

gccctaaaat tacaaacaca actcttgcga ttatgtccag ggaatg 226

<210> 24

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 24

taatacgact cactataggg ccgcagctac gcctattatt 40

<210> 25

<211> 40

<212> DNA

<213> 飞蝗(Locusta migratoria)

<400> 25

taatacgact cactataggg cattccctgg acataatcgc 40

Claims

1.飞蝗V-ATPase-V0结构域基因，其特征是：包括以下基因：

飞蝗V-ATPase-a基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1；

飞蝗V-ATPase-c基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：6；

飞蝗V-ATPase-c”基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：11；

飞蝗V-ATPase-d基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：16；

飞蝗V-ATPase-e基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：21。

2.飞蝗V-ATPase-V0结构域基因片段，其特征是：包括以下基因片段：

飞蝗V-ATPase-a基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：3；

飞蝗V-ATPase-c基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：8；

飞蝗V-ATPase-c”基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：13；

飞蝗V-ATPase-d基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：18；

飞蝗V-ATPase-e基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO：23。

3.飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA，其特征是：包括以下dsRNA：

由飞蝗V-ATPase-a基因片段SEQ ID NO：3合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-c基因片段SEQ ID NO：8合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-c”基因片段SEQ ID NO：13合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-d基因片段SEQ ID NO：18合成的dsRNA；

由飞蝗V-ATPase-e基因片段SEQ ID NO：23合成的dsRNA。

4.飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA的合成方法，其特征是：分别以含有飞蝗V-ATPase-a基因SEQ ID NO：1、V-ATPase-c基因SEQ ID NO：6、V-ATPase-c”基因SEQ ID NO：11、V-ATPase-d基因SEQ ID NO：16、V-ATPase-e基因SEQ ID NO：21的质粒为模板，对应基因的上游引物和下游引物，PCR扩增获得两端为T7启动子的DNA模板，按照HiScribe^TMT7 HighYield RNA Synthesis Kit试剂盒说明体外转录合成相应的dsRNA。

5.如权利要求4所述的飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA的合成方法，其特征是：

所述飞蝗V-ATPase-a基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；

所述飞蝗V-ATPase-c基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；

所述飞蝗V-ATPase-c”基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：14和SEQ IDNO：15；

所述飞蝗V-ATPase-d基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20；

所述飞蝗V-ATPase-e基因的上游引物和下游引物分别为：SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25。

6.飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA在害虫防治中的应用，其特征是：所述飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA应用于飞蝗防治中，所述dsRNA制备成喷洒式杀虫剂或饵剂，或者将dsRNA转入飞蝗摄食植物体。

7.如权利要求6所述的飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA在害虫防治中的应用，其特征是：所述飞蝗V-ATPase-V0结构域基因的dsRNA包括V-ATPase-a基因、V-ATPase-c基因、V-ATPase-c”基因、V-ATPase-d基因、V-ATPase-e基因的dsRNA，任选其中一种或几种dsRNA制备成喷洒式杀虫剂或饵剂，或者将dsRNA转入飞蝗摄食植物体，应用于飞蝗防治中。