CN111437284B - 一种七叶皂苷钠药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含有七叶皂苷钠的药物组合物及其制备方法,提供了一种含量比例合适、药效好、毒性低、刺激性低的七叶皂苷钠的药物组合物及其制备方法,其中七叶皂苷钠药物组合物中七叶皂苷钠A和七叶皂苷钠B的含量之为55%‑70%。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法,具体涉及一种含有七叶皂苷钠的药物组合物及其制备方法。
背景技术
七叶皂苷为七叶树科植物七叶树或Aesculus hippocastanum L.的果实提取物,主要含有七叶皂苷A、B、C、D四种主要成分,具有消炎、抗渗出、增加静脉张力、改善血液循环以及纠正脑功能失常等作用。
现有研究已发现,不同产地、不同年份、不同采摘时间均会影响七叶皂苷的含量。考察不同产地的娑罗子,发现七叶皂苷A和七叶皂苷B含量有显著区别【高效液相色谱法测定不同产地娑罗子中β-七叶皂苷含量.边静静.中药材.第35卷第8期2012年8月.1218-1230.】。娑罗子在开花结果后的生长过程中,随着含量的不断增加,其成分比例也是在不断变化【娑罗子生长期成分分析研究.李世旭.齐鲁药事.2012Vol.31,No.3.147-154.】。
现行七叶皂苷钠国家质量标准【WS1-XG-003-99】中规定:七叶皂苷中含七叶皂苷A和七叶皂苷B应分别为25.0%-45.0%和20.0%-35.0%,即七叶皂苷A和七叶皂苷B(以下简称七叶皂苷钠A/B)含量之和只要在45.0%-80.0%之间即满足标准要求。但七叶皂苷A/B含量不同可能药效、药物刺激性和毒性也会不同,当七叶皂苷AB/CD比例为8:2和7:3时,七叶皂苷虽然具有较强的抗炎作用但也有较高的刺激性和毒性,七叶皂苷AB/CD比例为6:4时,七叶皂苷具有一定的抗炎活性和较低的刺激性和毒性,AB/CD比例为5:5的七叶皂苷钠具有很弱的抗炎作用和血管刺激性,因此在七叶皂苷钠的生产制备过程中,应该对AB和CD的比例进行控制,以得到既具有较高有效性也具有较低刺激性和毒性的制剂【不同AB/CD比例的七叶皂苷钠和EF组分的有效性、安全性研究.程巨灿等.2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集.2011-11-04.】。
CN102659897A公开了一种七叶皂苷钠的制备方法,将娑罗子粉与体积百分比为10%的乙醇溶液混合浸泡1小时、提取2小时,将所述提取后并经离心操作的滤液加入层析柱吸附,流速为200ml/min~300ml/min,用醋酐鉴别,当流出液近红色时停止吸附并洗涤后,用95%乙醇溶液洗脱,流速80ml/min~100ml/min,当流出液用醋酐鉴别显红色时开始收集,当醋酐鉴别近黄色时停止收集,合并收集液并经纯化分离、烘包干燥后制得七叶皂苷钠。根据专利说明书所公开内容可知,七叶皂苷A含量为41-45%,七叶皂苷B含量为33-35%,七叶皂苷A、B含量之和接近质量标准的上限。虽然抗炎效果可能更好、但毒性和刺激性可能也会很大。该专利在层析过程中需要操作人员根据醋酐颜色变化来判断吸附和收集的起止时间,容易产生人为误差,影响产品质量及收率,难以保证产品的批间一致性。
CN104402963A公开了一种七叶皂苷钠的制备方法:以娑罗子为原料用30%-70%乙醇溶液进行提取,收集提取液经高速离心后用截留分子量为10000-15000道尔顿的超滤膜过滤;将滤液回收提取溶剂并加水溶解,然后上大孔树脂柱吸附,依次用纯水、20%-40%乙醇溶液、50%-70%乙醇溶液洗脱,收集50%-70%乙醇溶液的洗脱液;将收集到的洗脱液减压回收溶剂至无醇味,加水溶解,过聚酰胺树脂柱,收集流出液,再以10-30%乙醇溶液洗脱;将洗脱液与流出液合并减压浓缩成浸膏,按浸膏体积的0.5-2倍加水溶解,用0.5-5%的氢氧化钠溶液调节pH值至8-11,再按水溶液体积的0.5-2倍加丙酮,搅拌,析出白色沉淀,过滤沉淀,干燥,即得。根据专利说明书所公开内容可知,该专利提供的制备方法所得的七叶皂苷A含量为30-40%,七叶皂苷B含量为15-20%,七叶皂苷A和B的含量和接近质量标准的下限,可能抗炎效果不明显。
发明内容
本发明人通过大量研究,提供了一种一定比例的七叶皂苷钠的药物组合物及其制备方法。
本发明提供的一种七叶皂苷钠药物组合物,其中七叶皂苷A和七叶皂苷B含量之和为55%-70%,优选为55%-65%,更优选为56-60%。
本发明提供的七叶皂苷钠药物组合物中,其特征为:将娑罗子提取、洗脱,调节pH至5.3-5.7后浓缩,浓缩液用氯仿萃取,弃去氯仿层;上清液调节pH值至2.3-2.7加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤得萃取液;精制、脱色浓缩、结晶干燥即得。
本发明提供的七叶皂苷钠药物组合物中,其特征为:
(1)提取:娑罗子采用30%-50%乙醇浸泡提取、过滤得提取液;
(2)洗脱:提取液调pH至2-3后加入D101大孔树脂层析柱,20-40%乙醇洗涤2-3.5倍柱体积,95%乙醇洗脱2-3.5倍柱体积,收集洗脱液;
(3)浓缩:洗脱液调节pH至5.3-5.7后,依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;
(4)萃取:浓缩液用氯仿萃取,弃去氯仿层收集上清液;上清液补加纯化水,调节pH值至2.3-2.7,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩得萃取液;
(5)精制:萃取液用乙醇稀释后调pH至5.3-5.7后上C100 Na型阳离子交换树脂柱,收集流出液;
(6)脱色浓缩:活性炭对流出液进行脱色后调pH至6.0-6.3,减压浓缩至粘稠状;
(7)结晶干燥。
本发明提供的七叶皂苷钠药物组合物中,其特征为:
(1)提取:娑罗子采用30-50%乙醇浸泡12-16小时后提取三次,每次提取4-5小时,合并三次提取液并过滤得最终提取液;浸泡和提取的温度控制在15-35℃;
(2)洗脱:提取液调pH至2-3后加入D101大孔树脂层析柱,用20-40%乙醇、控制流速0.6~1.2BV/h洗涤2-3.5倍柱体积弃去,再用95%乙醇溶液、控制流速0.4-0.8BV/h洗脱2-3.5倍柱体积,收集洗脱液;
(3)浓缩:洗脱液调节pH至5.3-5.7后,依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;
(4)萃取:测定浓缩液中七叶皂苷ABCD的质量,按照七叶皂苷ABCD质量计算用25倍质量的甲醇水溶液稀释后,加0.25倍稀释后溶液体积的氯仿萃取,静置12小时后弃去氯仿层,收集上清液;上清液补加纯化水,用硫酸调节pH值至2.3-2.7,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩;其中,甲醇水溶液中甲醇与水的质量比为16.5:20;
(5)精制:用80%乙醇稀释至20倍浓缩液中七叶皂苷ABCD质量的体积,氢氧化钠调pH至5.3-5.7后上C100 Na型阳离子交换树脂柱,收集流出液;
(6)脱色浓缩:30-50℃下加活性炭对流出液进行脱色后用氢氧化钠调pH至6.0-6.3,加入无水乙醇减压浓缩至粘稠状;
(7)结晶干燥:浓缩液加入4-8倍的无水乙醇溶析结晶,干燥即得七叶皂苷钠成品。
本发明提供的七叶皂苷钠药物组合物中,其特征为:
(1)提取:娑罗子采用7-8倍体积的50%乙醇浸泡12小时后提取三次,每次提取4-5小时,合并三次提取液并过滤得最终提取液;浸泡和提取的温度控制在30℃;
(2)洗脱:提取液调pH至2.3-2.7后加入D101大孔树脂层析柱,用30%乙醇、控制流速0.8~1.0BV/h洗涤2.7-3.3倍树脂体积弃去,再用95%乙醇、控制流速0.6-0.65BV/h洗脱2.7-3.3倍树脂体积,收集洗脱液;
(3)浓缩:洗脱液调节pH至5.4-5.6后,取样测定洗脱液中七叶皂苷ABCD的质量,依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;
(4)萃取:按照洗脱液中七叶皂苷ABCD质量计算用25倍质量的甲醇水溶液稀释后,加0.25倍稀释后溶液体积的氯仿萃取,静置12小时后弃去氯仿层,收集上清液;上清液补加纯化水,用硫酸调节pH值至2.4-2.6,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩;其中,甲醇水溶液中甲醇与水的质量比为16.5:20;
(5)精制:用80%乙醇稀释至20倍洗脱液中七叶皂苷ABCD质量的体积,氢氧化钠调pH至5.4-5.6后上C100 Na型阳离子交换树脂柱,收集流出液;
(6)脱色浓缩:35-40℃下加活性炭对流出液进行脱色后用氢氧化钠调pH至6.0-6.3,加入无水乙醇减压浓缩至粘稠状;
(7)结晶干燥:浓缩液加入6倍的无水乙醇溶析结晶,干燥即得七叶皂苷钠成品。
本发明中所述的乙醇浓度均为体积百分比浓度。
本发明提供了一种七叶皂苷钠药物组合物,其中七叶皂苷钠是采用上述方法制备得到。
本发明提供的七叶皂苷钠药物组合物可以以注射剂、片剂、凝胶剂、鼻喷剂、膏剂、滴眼剂等剂型形式存在,优选以注射剂剂型存在。
本发明提供的七叶皂苷钠药物组合物在制备治疗脑水肿、创伤、手术所致肿胀、静脉回流障碍性疾病等的药物中的用途。
本申请人通过大量的实验研究,通过在原料制备过程中不断调整溶液中的pH值,确定采用洗脱液体积来判断收集的起点和终点,控制各工艺中溶剂浓度、洗脱速度及时间等,得到具有特定比例的七叶皂苷钠组合物,在确保抗炎效果的同时具有较低的刺激性和毒性等有益效果。并且,在浓缩前调节提取液pH,及进行两次萃取,使得制备得到的七叶皂苷钠在制备注射剂产品时,具有良好的通透性,不易堵塞滤芯,有利于工业化大生产,提高生产效率,降低生产成本。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明加以进一步的说明,但不以任何形式限制本发明。
制备例1:七叶皂苷钠的制备
干燥娑罗子粉300kg采用8倍体积的50%乙醇浸泡12小时后,一次提取4小时,再加入5倍50%乙醇,二次提取5小时,三次提取条件与二次提取相同,合并三次提取液并过滤得最终提取液,其中浸泡和提取的温度控制在25℃;
提取液调pH至2.3后加入D101大孔树脂层析柱,用30%乙醇、控制流速1.0BV/h洗涤2.7倍树脂体积弃去,再用95%乙醇、控制流速0.6-0.65BV/h洗脱2.7倍树脂体积,收集洗脱液;
洗脱液调节pH至5.3后,取样测定洗脱液中七叶皂苷ABCD的质量,依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;
按照洗脱液中七叶皂苷ABCD质量计算,用25倍质量的甲醇水溶液稀释后,加0.25倍稀释后溶液体积的氯仿萃取,静置12小时后弃去氯仿层,收集上清液;上清液补加纯化水,用硫酸调节pH值至2.3,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩,其中甲醇水溶液中甲醇与水的质量比为16.5:20;
用80%乙醇稀释至20倍洗脱液中七叶皂苷ABCD质量的体积,用氢氧化钠调pH至5.3后上C100 Na型阳离子交换树脂柱,收集流出液;
35℃下加活性炭对流出液进行脱色后,用氢氧化钠调pH至6.2,加入无水乙醇减压浓缩至粘稠状;
浓缩液加入7倍的无水乙醇溶析结晶,干燥即得七叶皂苷钠成品。
按照七叶皂苷钠的国家药品标准(WS1-XG-003-99)检测,七叶皂苷A含量为33.4%,七叶皂苷B含量为26.1%。
制备例2:七叶皂苷钠的制备
干燥娑罗子粉300kg采用8倍体积的50%乙醇浸泡12小时后,一次提取4小时,再加入7倍50%乙醇,二次提取5小时,三次提取条件与二次提取相同,合并三次提取液并过滤得最终提取液,其中浸泡和提取的温度控制在30℃;
提取液调pH至2.5后加入D101大孔树脂层析柱,用30%乙醇、控制流速0.9BV/h洗涤3倍树脂体积弃去,再用95%乙醇、控制流速0.6-0.65BV/h洗脱3倍树脂体积,收集洗脱液;
洗脱液调节pH至5.5后,取样测定洗脱液中七叶皂苷ABCD的质量,依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;
按照洗脱液中七叶皂苷ABCD质量计算,用25倍质量的甲醇水溶液稀释后,加0.25倍稀释后溶液体积的氯仿萃取,静置12小时后弃去氯仿层,收集上清液;上清液补加纯化水,用硫酸调节pH值至2.5,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩,其中甲醇水溶液中甲醇与水的质量比为16.5:20;
用80%乙醇稀释至20倍浓缩液中七叶皂苷ABCD质量的体积,用氢氧化钠调pH至5.5后上C100 Na型阳离子交换树脂柱,收集流出液;
37℃下加活性炭对流出液进行脱色后,用氢氧化钠调pH至6.0,加入无水乙醇减压浓缩至粘稠状;
浓缩液加入6倍的无水乙醇溶析结晶,干燥即得七叶皂苷钠成品。
按照七叶皂苷钠的国家药品标准(WS1-XG-003-99)检测,七叶皂苷A含量为34.9%,七叶皂苷B含量为26.6%。
制备例3:七叶皂苷钠的制备
干燥娑罗子粉300kg采用8倍体积的50%乙醇浸泡12小时后,一次提取4小时,再加入5倍50%乙醇,二次提取5小时,三次提取条件与二次提取相同,合并三次提取液并过滤得最终提取液,其中浸泡和提取的温度控制在30℃;
提取液调pH至2.7后加入D101大孔树脂层析柱,用30%乙醇、控制流速0.8BV/h洗涤3.3倍树脂体积弃去,再用95%乙醇、控制流速0.6-0.65BV/h洗脱3.3倍树脂体积,收集洗脱液;
洗脱液调节pH至5.7后,取样测定洗脱液中七叶皂苷ABCD的质量,依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;
按照洗脱液中七叶皂苷ABCD质量计算,用25倍质量的甲醇水溶液稀释后,加0.25倍稀释后溶液体积的氯仿萃取,静置12小时后弃去氯仿层,收集上清液;上清液补加纯化水,用硫酸调节pH值至2.7,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩,其中甲醇水溶液中甲醇与水的质量比为16.5:20;
用80%乙醇稀释至20倍洗脱液中七叶皂苷ABCD质量的体积,用氢氧化钠调pH至5.7后上C100 Na型阳离子交换树脂柱,收集流出液;
40℃下加活性炭对流出液进行脱色后,用氢氧化钠调pH至6.3,加入无水乙醇减压浓缩至粘稠状;
浓缩液加入8倍的无水乙醇溶析结晶,干燥即得七叶皂苷钠成品。
按照七叶皂苷钠的国家药品标准(WS1-XG-003-99)检测,七叶皂苷A含量为34.3%,七叶皂苷B含量为25.9%。
试验例1:不同制备方法所得七叶皂苷钠配制注射液时滤芯通透性比较供试品的制备:
干燥娑罗子颗粒300kg采用8倍体积的50%乙醇浸泡12小时后,一次提取4小时,再加入7倍50%乙醇,二次提取5小时,三次提取条件与二次提取相同,合并三次提取液并过滤得最终提取液,其中浸泡和提取的温度控制在30℃;
提取液调pH至2.5后加入D101大孔树脂层析柱,用30%乙醇、控制流速0.9BV/h洗涤3倍树脂体积弃去,再用95%乙醇、控制流速0.6-0.65BV/h洗脱3倍树脂体积,收集洗脱液;
洗脱液调节pH至5.5后,取样测定洗脱液中七叶皂苷ABCD的质量,依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;
按照洗脱液中七叶皂苷ABCD质量计算,用25倍质量的甲醇水溶液稀释后,加0.25倍稀释后溶液体积的氯仿萃取,静置12小时后弃去氯仿层,收集上清液;上清液补加纯化水,用硫酸调节pH值至2.5,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩,其中甲醇水溶液中甲醇与水的质量比为16.5:20;
用80%乙醇稀释至20倍浓缩液中七叶皂苷ABCD质量的体积,用氢氧化钠调pH至5.5后上C100 Na型阳离子交换树脂柱,收集流出液;
37℃下加活性炭对流出液进行脱色后,用氢氧化钠调pH至6.0,加入无水乙醇减压浓缩至粘稠状;
浓缩液加入6倍的无水乙醇溶析结晶,干燥即得七叶皂苷钠成品。
对照品的制备:
除浓缩和萃取工序外,其他步骤同供试品的制备方法,其中浓缩及萃取工序采用如下工艺:取供试品相同工艺的洗脱液,测定洗脱液中七叶皂苷ABCD的质量,洗脱液依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;按照洗脱液中七叶皂苷ABCD质量计算,用25倍质量的甲醇水溶液稀释后,其中甲醇水溶液中甲醇与水的质量比为16.5:20,用硫酸调节pH值至2.5,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩。
2、试验过程及结果:
分别取不同规模的对照品及供试品进行过滤实验,试验过程及结果如下:
(1)分别取干燥后七叶皂苷钠对照品纯品100g和供试品纯品100g,分别溶于20L注射用水中,配制成七叶皂苷钠溶液,再分别加压0.08~0.10Mpa下过0.22μm一级10英寸PVDF滤芯全部过滤完成,分别测量过滤速度,过滤过程观察滤芯的通透性,结果见表1所示:
表1:
结果分析:
根据表1结果可知:对照品溶液过滤速度明显较慢,滤芯压差偏大,并且流速随时间推移逐渐降低。
(2)分别取干燥后七叶皂苷钠对照品纯品755g和供试品纯品755g,分别溶于151L注射用水中,配制成七叶皂苷钠溶液,再分别加压0.08-0.10Mpa下过0.22μm 10英寸一级PVDF滤芯,其中供试品溶液在15分钟内全部过滤完成,对照品溶液在6分钟时完全堵塞滤芯,分别测量过滤速度,每5min记录参数,其中结果如表2所示:
表2
结果分析:
根据表2结果可知,在放大产品规模时,供试品溶液在15分钟内全部过滤完成,而对照品溶液在6分钟时滤芯已经完全堵塞,剩余大部分药液无法实现过滤。
试验例2七叶皂苷钠多个批次中七叶皂苷A、B含量
参照制备例2制备多批次七叶皂苷钠原料,检测每批次七叶皂苷A和七叶皂苷B的含量。
检测方法
色谱条件:
反相高效液相色谱法,色谱柱为ZORB-AX Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)(美国Agilent公司生产),乙腈-磷酸(取85%磷酸5.5mL,用水稀释至1000mL)(33:67)为流动相,流速为1.0mL·min-1,调节PH值为2.1;检测波长为220nm,理论塔板数按七叶皂苷A计为8000,七叶皂苷和七叶皂苷B的分离度为2.1。
供试品溶液制备:
取本品适量,加甲醇溶解并稀释成每1ml含2.5mg的溶液作为供试品溶液。
对照品溶液制备:
取七叶皂苷钠对照品适量,以甲醇溶液溶解并稀释成每1ml含2.5mg的溶液作为对照品溶液。
测定法:
取对照品溶液20μl注入到液相色谱仪中,另取供试品溶液20μl注入到液相色谱仪中,七叶皂苷钠样品与对照品的色谱图中皆有4个主成分峰,以出峰前后顺序分别为七叶皂苷A、七叶皂苷B、七叶皂苷C和七叶皂苷D,测定二个样品的七叶皂苷A和七叶皂苷B的峰面积,用外标法计算七叶皂苷A和七叶皂苷B的含量如下表3所示:
表3不同批次中七叶皂苷钠中七叶皂苷A和七叶皂苷B的含量
结果分析:
由上述检测结果可知:所得七叶皂苷钠批间差异较小,多批次制备的七叶皂苷钠中七叶皂苷A、B含量基本保持一致,利用该制备方法制得的七叶皂苷钠做成制剂,具有较好的抗炎效果,较低的刺激性和毒性。
Claims (2)
1.一种七叶皂苷钠药物组合物,其中七叶皂苷钠A和七叶皂苷钠B含量之和为55%-70%,其特征为:七叶皂苷钠的制备方法为(1)提取:娑罗子采用30-50%乙醇浸泡12-16小时后提取三次,每次提取4-5小时,合并三次提取液并过滤得最终提取液;浸泡和提取的温度控制在15-35℃;(2)洗脱:提取液调pH至2-3后加入D101大孔树脂层析柱,用20-40%乙醇、控制流速0.6~1.2BV/h洗涤2-3.5倍柱体积弃去,再用95%乙醇溶液、控制流速0.4-0.8BV/h洗脱2-3.5倍柱体积,收集洗脱液;(3)浓缩:洗脱液调节pH至5.3-5.7后,依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;(4)萃取:测定浓缩液中七叶皂苷ABCD的质量,按照七叶皂苷ABCD质量计算用25倍质量的甲醇水溶液稀释后,加0.25倍稀释后溶液体积的氯仿萃取,静置12小时后弃去氯仿层,收集上清液;上清液补加纯化水,用硫酸调节pH值至2.3-2.7,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩;其中,甲醇水溶液中甲醇与水的质量比为16.5:20;(5)精制:用80%乙醇稀释至20倍浓缩液中七叶皂苷ABCD质量的体积,氢氧化钠调pH至5.3-5.7后上C100 Na型阳离子交换树脂柱,收集流出液;(6)脱色浓缩:30-50℃下加活性炭对流出液进行脱色后用氢氧化钠调pH至6.0-6.3,加入无水乙醇减压浓缩至粘稠状;(7)结晶干燥:浓缩液加入4-8倍的无水乙醇溶析结晶,干燥即得七叶皂苷钠成品。
2.根据权利要求1所述的七叶皂苷钠药物组合物,其特征为:七叶皂苷钠的制备方法为(1)提取:娑罗子采用7-8倍体积的50%乙醇浸泡12小时后提取三次,每次提取4-5小时,合并三次提取液并过滤得最终提取液;浸泡和提取的温度控制在30℃;(2)洗脱:提取液调pH至2.3-2.7后加入D101大孔树脂层析柱,用30%乙醇、控制流速0.8~1.0BV/h洗涤2.7-3.3倍树脂体积弃去,再用95%乙醇、控制流速0.6-0.65BV/h洗脱2.7-3.3倍树脂体积,收集洗脱液;(3)浓缩:洗脱液调节pH至5.4-5.6后,取样测定洗脱液中七叶皂苷ABCD的质量,依次加入无水乙醇和甲醇减压浓缩得浓缩液;(4)萃取:按照洗脱液中七叶皂苷ABCD质量计算用25倍质量的甲醇水溶液稀释后,加0.25倍稀释后溶液体积的氯仿萃取,静置12小时后弃去氯仿层,收集上清液;上清液补加纯化水,用硫酸调节pH值至2.4-2.6,加氯仿萃取,收集氯仿层;洗涤,加入95%乙醇减压浓缩;其中,甲醇水溶液中甲醇与水的质量比为16.5:20;(5)精制:用80%乙醇稀释至20倍洗脱液中七叶皂苷ABCD质量的体积,氢氧化钠调pH至5.4-5.6后上C100 Na型阳离子交换树脂柱,收集流出液;(6)脱色浓缩:35-40℃下加活性炭对流出液进行脱色后用氢氧化钠调pH至6.0-6.3,加入无水乙醇减压浓缩至粘稠状;(7)结晶干燥:浓缩液加入6倍的无水乙醇溶析结晶,干燥即得七叶皂苷钠成品。
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