CN111398486A - 一种快速确定气相色谱串联质谱动态多反应监测模式分析方法中采集时间窗口的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种利用保留指数快速确定气相色谱串联质谱动态多反应监测模式(dMRM)分析方法中采集时间窗口的方法,属于烟草香味成分检测技术领域,其特征在于:根据各目标化合物上次的实测保留时间及其相邻正构烷烃上次及本次的实测保留时间预测目标化合物本次的保留时间,从而准确快速创建dMRM方法中各目标化合物的时间窗口。本发明具有快速、便捷、准确的优点,大大减少了保留时间校正的工作量。
Description
技术领域
本发明属于烟草香味成分检测技术领域,具体涉及一种快速确定气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)动态多反应监测模式(dMRM)分析方法中采集时间窗口的方法。
背景技术
烟草香味成分包括醛、酮、醇、酚、酸、醚、酯、内酯、烯、吡啶、吡咯、吡嗪等多类挥发、半挥发性成分。这些成分的含量水平和相互比例对烟叶和卷烟的风格、品质具有关键影响,是影响烟草香气质、香气量及香型的重要化学组分。随着分析技术的进步,香味成分对于烟叶感官品质的影响受到越来越多的关注。然而香味成分性质的差异性和烟草基质的复杂性决定了对其关键香味成分的分析研究富有挑战性。目前多采用气相色谱-质谱法(GC-MS)结合通用型商业谱库进行烟草香味成分分析,受样品基质干扰、GC-MS灵敏度不足等分析方法问题制约,能准确定性的化合物数量极为有限,既往研究覆盖的烟叶香味成分不足一百种。气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)具有灵敏度高、检出限低、定性准确、抗干扰能力强的特点,可以将在色谱分离过程不能完全分开的具有不同母离子的共流出物通过设置动态多反应监测模式(dMRM)将其分离。和GC-MS方法相比可分析化合物范围更广、数量更多,可达六百余种;每个化合物都选择优化了相应的定量离子对和定性离子对,无需标准谱库检索,化合物的定性更准确;且方法灵敏度更高、精密度和重复性更好。
dMRM模式的定性依据是目标物的保留时间和特征离子对信息,通过在目标物保留时间处扫描特征离子对获得目标物信息,其扫描范围是以每个目标物的准确保留时间为中心分别创建的时间窗口,即仪器仅在各目标物保留时间前后一段时间内扫描其特征离子对。在超多靶标分析方法中,大量时间窗口互相重叠、堆积会导致每对离子对的驻留时间缩短,采集的色谱峰数据点减少,甚至会导致无法采集数据。因此,为了保证色谱峰有足够的数据点且每对离子对有足够的驻留时间,一般会尽可能的缩小各化合物的时间窗口。在多靶标dMRM方法实验室日常检测中,仪器常规维护(如更换或切割色谱柱)后或方法在不同仪器间转移时,目标物的保留时间会发生改变,时常出现目标物保留时间偏离出时间窗口而无法采集数据的情况,此时,需要重新确定各目标物的保留时间来创建新的时间窗口。由于多靶标dMRM方法目标物众多(几百种),且目标物之间保留时间重叠,若采用传统方法,即全扫描模式确定各目标物的准确保留时间,则需要首先对目标物进行分组进样检测(分组原则是组内各化合物能较好分离,一般十几至二十几个化合物一组),然后再通过谱库检索定性,最后获得各化合物的保留时间,该实验过程及数据处理需要花费大量时间。本发明利用各化合物的保留指数可以快速、便捷、准确的获得各目标物的准确保留时间,大大减少了保留时间校正的工作量。
保留指数(Retention index,RI)的概念由KOVATS在1958年提出。保留指数表示物质在固定液上的保留行为,当固定相确定时,物质的保留指数与柱温成线性相关且毛细管色谱柱的极性越小保留指数的重现性越好。即当色谱条件确定时,目标物的保留指数为与其保留时间有关的常数。保留指数是以一系列紧密相连的正构烷烃的测定结果做尺度来表述物质的保留行为,可由下式表示:式中:RI表示目标化合物的保留指数,z为目标化合物流出前相邻正构烷烃的碳原子数,t(x)、t(z)、t(z+1)分别为目标化合物及目标化合物流出前、后相邻正构烷烃的保留时间。由于各化合物保留指数不变,上述公式中部分在仪器维护前后也不变。由于保留指数具有良好的稳定性,且保留指数与保留时间之间又存在一一对应的关系,在多靶标GC-MS/MS方法中,利用保留指数可以快速调整目标物的扫描时间窗口。以往研究中保留指数多被运用于GC-MS分析方法中在数据库检索的基础上辅助定性分析目标成分,而利用保留指数确定多靶标GC-MS/MS方法采集时间窗口的研究尚未见报道。鉴于以上问题,本发明探究了保留指数在确定GC-MS/MS方法采集时间窗口中的应用,为烟草香味成分的快速分析提供了参考。
发明内容
本发明的目的旨在利用保留指数的概念对目标化合物在不同色谱条件下的保留时间进行预测,进而快速确定GC-MS/MS动态多反应监测模式(dMRM)中各化合物的采集时间窗口的方法。该方法快速、准确、易操作,可大大缩减多靶标GC-MS/MS方法中保留时间确定的工作量。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:一种快速确定气相色谱串联质谱动态多反应监测模式分析方法中采集时间窗口的方法,每次对仪器进行维护(如切割、更换色谱柱后)后对目标化合物的保留时间进行预测时,首先采用相同的程序升温条件获取本次正构烷烃系列的实测保留时间,然后用各目标化合物维护前的实测保留时间及其相邻正构烷烃维护前及本次的实测保留时间计算出各目标化合物本次的预测保留时间,再以预测保留时间±0.3min创建时间窗口建立dMRM方法,用其对目标化合物混合工作液进行检测,获得各目标化合物的实测保留时间,最后将各目标化合物的实测保留时间导入dMRM方法即可。具体步骤如下:
(1)采用相同的程序升温条件对正构烷烃混合标准工作液进行全扫描(FullScan)分析,获取正构烷烃系列本次的实测保留时间;
(2)然后将各目标化合物维护前的实测保留时间及其相邻正构烷烃维护前及本次的实测保留时间带入以下公式,计算获得各目标化合物本次的预测保留时间;
式中:t(x)为目标化合物本次的预测保留时间
t(x)’为目标化合物维护前的实测保留时间
t(z)为目标化合物流出前相邻正构烷烃本次的实测保留时间
t(z+1)为目标化合物流出后相邻正构烷烃本次的实测保留时间
t(z)’为目标化合物流出前相邻正构烷烃维护前的实测保留时间
t(z+1)’为目标化合物流出后相邻正构烷烃维护前的实测保留时间
(3)以预测保留时间±0.3min创建时间窗口建立dMRM方法,用该dMRM方法对目标化合物混合工作液进行检测,获得各目标化合物的实测保留时间;
(4)将各目标化合物的实测保留时间导入dMRM方法即可。
本发明中,所述的目标化合物为烟草香味成分,包括醛、酮、醇、酚、烃、醚、酯、内酯、吡啶、吡嗪等多类挥发、半挥发的香味成分。
本发明中,所述正构烷烃混合标准工作液为C8~C28或C7~C30或C7~C40,优选C8~C28,浓度为5mg/L,配制溶剂为正己烷或二氯甲烷。
本发明中,检测时的GC-MS/MS分析条件如下:
气相色谱条件:色谱柱:弹性石英毛细管色谱柱,固定相为50%苯基-甲基聚硅氧烷,规格60m×0.25mm×0.25μm,进样口端串联预柱,规格5m×0.25mm;进样口温度:290℃;进样量:1μL;进样方式:不分流进样,不分流时间1min;载气:氦气,恒流模式,流速1.5mL/min;程序升温:初始温度50℃,保持3min,以2℃/min升至290℃,保持5min。
质谱条件:电离模式:电子轰击电离,电离能70eV;灯丝电流:35μA;离子源温度:280℃;四级杆温度:150℃;传输线温度:280℃;Q2碰撞气:氮气,纯度99.999%,流量1.5mL/min;淬灭气:氦气,纯度为99.999%,流量2.25mL/min;扫描方式:多反应监测(MRM)模式。
与现有技术相比,本发明方法具有如下优良效果:
由于多靶标dMRM方法目标物众多(几百种),且目标物之间保留时间重叠,若采用传统方法,即全扫描模式确定各目标物的准确保留时间,则需要首先对目标物进行分组进样检测(分组原则是组内各化合物能较好分离,一般十几至二十几个化合物一组),然后再通过谱库检索定性,最后获得各化合物的保留时间,该实验过程及数据处理需要花费大量时间。本发明利用各化合物的保留指数可以快速、便捷、准确的获得各目标物的准确保留时间,大大减少了保留时间校正的工作量。
附图说明
图1:241种烟草香味成分基质匹配混合标准溶液的总离子流图。
具体实施方式
本发明以下结合实例做进一步描述,但并不是限制本发明。
实例1:
RI在GC-MS/MS分析动态多反应监测(dMRM)模式时间窗口校正中的应用。
dMRM模式通过在目标物保留时间处扫描特征离子对获得目标物信息,其扫描范围是以每个目标物的准确保留时间为中心分别创建的时间窗口。在超多靶标分析方法中,大量时间窗口互相重叠、堆积会导致每对离子对的驻留时间缩短,使采集的色谱峰数据点减少,甚至会导致无法采集数据。因此,为了保证色谱峰有足够的数据点且每对离子对有足够的驻留时间,一般会尽可能地缩小时间窗口,如本方法各目标物时间窗口仅为0.6min,即仪器仅在各目标物保留时间前后0.3min内扫描其特征离子对。在多靶标dMRM方法实验室日常检测中,仪器常规维护(如更换或切割色谱柱)后或方法不同仪器间转移时,目标物的保留时间会发生漂移,时常出现目标物色谱峰偏移出时间窗口而无法采集数据的情况,从而影响方法的定性定量结果。由于目标物众多且保留时间的重叠干扰,若采用全扫描模式确定各目标物准确保留时间则需要分组进样检测,实验过程及数据处理花费时间长。本发明中利用保留指数可以快速、便捷、准确地获得各目标物的准确保留时间,大大减少保留时间校正的工作量。
GC-MS/MS分析条件如下:
气相色谱条件:色谱柱:弹性石英毛细管色谱柱,固定相为50%苯基-甲基聚硅氧烷,规格60m×0.25mm×0.25μm,进样口端串联预柱(5m×0.25mm);进样口温度:290℃;进样量:1μL;进样方式:不分流进样,不分流时间1min;载气:氦气,恒流模式,流速1.5mL/min;程序升温:初始温度50℃,保持3min,以2℃/min升至290℃,保持5min。
质谱条件:电离模式:电子轰击电离,电离能70eV;灯丝电流:35μA;离子源温度:280℃;四级杆温度:150℃;传输线温度:280℃;Q2碰撞气:氮气(纯度99.999%),流量1.5mL/min;淬灭气:氦气(纯度为99.999%),流量2.25mL/min;扫描方式:多反应监测(MRM)模式。
具体校正方法如下:
(1)采用相同的程序升温条件对正构烷烃混合标准工作液进行全扫描(FullScan)分析,获取正构烷烃系列本次的实测保留时间;
(2)然后将各目标物维护前的实测保留时间及其相邻正构烷烃维护前及本次的实测保留时间带入以下公式,计算获得烟草香味成分本次的预测保留时间;
式中:t(x)为目标化合物本次的预测保留时间
t(x)’为目标化合物维护前的实测保留时间
t(z)为目标化合物流出前相邻正构烷烃本次的实测保留时间
t(z+1)为目标化合物流出后相邻正构烷烃本次的实测保留时间
t(z)’为目标化合物流出前相邻正构烷烃维护前的实测保留时间
t(z+1)’为目标化合物流出后相邻正构烷烃维护前的实测保留时间
(3)以预测保留时间±0.3min创建时间窗口建立dMRM方法,用该dMRM方法对目标物混合工作液进行检测,获得各目标物的实测保留时间;
(4)将各目标物的实测保留时间导入dMRM方法即可。
根据预测保留时间所创建的时间窗口能否覆盖目标物的准确保留时间是判定该方法是否可行的关键。各目标物的预测保留时间及实测保留时间差值见表1。结果表明,241种目标物预测保留时间与实测保留时间的时间差皆小于0.3min(本实验中以预测保留时间±0.3min创建时间窗口),其中232种目标物的时间差在0.05min之内、9种目标物的时间差在0.05~0.1min之内。各目标物准确保留时间皆在根据预测保留时间所创建的时间窗口范围内。实验结果证明了利用保留指数快速确定目标物保留时间的可行性。该策略可以有效缩短实验室日常维护工作时长,解决保留时间校正工作量大、耗时长的突出问题;并且运用该策略可以在无标准品的情况下建立烟草香味成分的dMRM分析方法。
表1 241种目标物的预测保留时间和实测保留时间差异
Claims (6)
1.一种快速确定气相色谱串联质谱动态多反应监测模式分析方法中采集时间窗口的方法,其特征在于:每次对仪器进行维护后对目标化合物的保留时间进行预测时,首先采用相同的程序升温条件获取本次正构烷烃系列的实测保留时间,然后用各目标化合物维护前的实测保留时间及其相邻正构烷烃维护前及本次的实测保留时间计算出各目标化合物本次的预测保留时间,再以预测保留时间±0.3min创建时间窗口建立dMRM方法,用其对目标化合物混合工作液进行检测,获得各目标化合物的实测保留时间,最后将各目标化合物的实测保留时间导入dMRM方法即可。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:具体步骤如下:
(1)采用相同的程序升温条件对正构烷烃混合标准工作液进行全扫描(Full Scan)分析,获取正构烷烃系列本次的实测保留时间;
(2)然后将各目标化合物维护前的实测保留时间及其相邻正构烷烃维护前及本次的实测保留时间带入以下公式,计算获得各目标化合物本次的预测保留时间;
式中:t(x)为目标化合物本次的预测保留时间
t(x)’为目标化合物维护前的实测保留时间
t(z)为目标化合物流出前相邻正构烷烃本次的实测保留时间
t(z+1)为目标化合物流出后相邻正构烷烃本次的实测保留时间
t(z)’为目标化合物流出前相邻正构烷烃维护前的实测保留时间
t(z+1)’为目标化合物流出后相邻正构烷烃维护前的实测保留时间
(3)以预测保留时间±0.3min创建时间窗口建立dMRM方法,用该dMRM方法对目标物混合工作液进行检测,获得各目标化合物的实测保留时间;
(4)将各目标化合物的实测保留时间导入dMRM方法即可。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述的维护是指切割或更换色谱柱。
4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述的目标化合物为烟草香味成分,包括醛、酮、醇、酚、烃、醚、酯、内酯、吡啶、吡嗪等多类挥发、半挥发的香味成分。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述正构烷烃混合标准工作液为C8~C28或C7~C30或C7~C40,优选C8~C28,浓度为5mg/L,配制溶剂为正己烷或二氯甲烷。
6.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:检测时的GC-MS/MS分析条件如下:
气相色谱条件:色谱柱:弹性石英毛细管色谱柱,固定相为50%苯基-甲基聚硅氧烷,规格60m×0.25mm×0.25μm,进样口端串联预柱,规格5m×0.25mm;进样口温度:290℃;进样量:1μL;进样方式:不分流进样,不分流时间1min;载气:氦气,恒流模式,流速1.5mL/min;程序升温:初始温度50℃,保持3min,以2℃/min升至290℃,保持5min。
质谱条件:电离模式:电子轰击电离,电离能70eV;灯丝电流:35μA;离子源温度:280℃;四级杆温度:150℃;传输线温度:280℃;Q2碰撞气:氮气,纯度99.999%,流量1.5mL/min;淬灭气:氦气,纯度为99.999%,流量2.25mL/min;扫描方式:多反应监测(MRM)模式。
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