CN111363752B - 一种橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b及其应用。本发明通过对HbSGT1b基因转化拟南芥进行该基因的功能研究，验证了转基因拟南芥具有恢复提早开花的能力。该基因可用于橡胶树和其他作物的白粉病抗性和成花发育转基因研究中。本发明与橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因来自橡胶树，不会产生基因漂移，对环境影响较小，为提高植物抗病性和开花发育提供新的基因资源。

Description

一种橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b及其应用
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b及其应用。
背景技术
橡胶树(Hevea brasiliensis)在生长发育的过程中经常会受到各种生物和非生物胁迫的影响。由半知菌类粉孢属白粉菌(Oidium heveae Steinmmann)引起的橡胶树白粉病是一种常见的真菌性胁迫病害，在全球各个植胶区均有发现，主要侵染橡胶树的各幼嫩组织，使橡胶树叶片感病甚至造成大面积落叶现象，对天然橡胶的产量造成了很大影响。
SGT1(SKP1 G-2等位基因抑制子)的结构在所有真核生物中都高度保守。研究发现在植物、人和酵母中，SGT1蛋白质都是由5个结构域组成的：SGT1特异性基序(SGS)，四肽重复结构域(TPR)，两个不保守区(VR1和VR2)和CS基序(Azevedo et al.,2002)。在植物中SGT1与各种蛋白质之间存在相互作用，包括分子伴侣(HSP70，HSP90)和某些SCF泛素连接酶。其中SGT1在蛋白质折叠、蛋白质结构稳定性以及抗病性方面发挥作用，已有研究者发现SGT1参与了大麦对于白粉菌的抗病过程。SGT1中的CS基序与HSP90的ATPase结构域结合。通过两基因的互作调节NB-LRR型R蛋白的稳定性。SGT1可以通过SGS结构域与HSP70相互作用。CS基序还可以与RAR1的CHORD-II结构域结合，SGT1、HSP90和RAR1三者的结合可以提高R蛋白的稳定性以及调控部分R蛋白的抗性。SGT1的SGS基序在与MLA1的LRR结构域的结合过程中起到调节作用。SGT1与SCF泛素连接酶复合体之间存在相互作用，参与了蛋白降解的过程。SGT1与热休克蛋白的保守相互作用表明SGT1在分子伴侣介导的蛋白质的装配和不同蛋白质复合物的形成调节中发挥作用。然而，橡胶树中SGT1基因家族成员的结构与功能尚不清楚。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b及其编码蛋白。
本发明的另一目的在于提供HbSGT1b基因在抗橡胶树白粉病中的应用；
本发明的第三目的在于提供HbSGT1b基因在促进植物花发育中的应用。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：本发明从巴西橡胶树品种热研73397叶片中克隆获得橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b基因，其cDNA序列为以下(1)～(4)中任意所述的序列：
(1)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；
(2)如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；
(3)在严格条件下与SEQ ID NO:1所示序列杂交且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；其中，所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜；
(4)与(1)、(2)或(3)的核苷酸序列具有90％以上同源性且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列。
测序结果表明，橡胶树HbSGT1b基因全长1161bp，其ORF区长度为1068bp，编码355个氨基酸，所述基因编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。等电点为5.34，亲水性平均值为-0.507。通过对HbSGT1b基因的生物信息学分析和受白粉菌侵染处理的表达模式判断，该基因参与橡胶树等植物白粉病和发育途径。
本发明还提供含有所述橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因的表达盒。
本发明还提供含有所述橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因的载体。
携带有所述目的基因的表达载体可通过使用Ti质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电穿孔等常规生物技术方法导入植物细胞中(Weissbach，1998，Method forPlant Molecular Biology VIII，Academy Press，New York，第411-463页；Geiserson和Corey，1998，Plant Molecular Biology，2nd Edition)。
本发明还提供含有所述橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因的工程菌、转基因细胞系。
本发明还提供所述橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因在提高植物(例如，拟南芥、橡胶树等)抗白粉病和开花发育能力中的应用。
本发明还提供所述蛋白在制备抗橡胶树白粉病药物中的应用。
本发明还提供所述橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因在制备转基因植物中的应用。
本发明还提供一种转基因植株的构建方法，包括以下步骤：
(1)提取橡胶树叶片中的总RNA，反转录得到cDNA第一链；
(2)以cDNA第一链为模板，HbSGT1b-F和HbSGT1b-R为引物，所述引物HbSGT1b-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，HbSGT1b-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，具体为：
HbSGT1b-F：5′-TACACTCTATTCTCTTAGCCCAAGC-3′
HbSGT1b-R：5′-AACCCTAGAAGAGCAAAAATCTGAC-3′
通过PCR扩增反应获得白粉病抗性相关HbSGT1b基因的cDNA序列，并将其cDNA片段连接至pMD18-T载体中并转化大肠杆菌DH5α菌株中进行克隆和测序验证，测序验证正确的质粒命名为HbSGT1b-18T；
(3)以HbSGT1b-18T质粒为模板，HbSGT1b-EcoRI-F和HbSGT1b-BamHI-R为引物扩增HbSGT1b基因的ORF(序列如SEQ ID NO:9所示)，所述HbSGT1b-EcoRI-F的核苷酸序列如SEQID NO:5所示，HbSGT1b-BamHI-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，具体为：
HbSGT1b-EcoRI-F：5′-GGAATTCATGGCCAGCGAGTTGG-3′(下划线为EcoRI酶切位点)
HbSGT1b-BamHI-R：5′-CGGGATCCATATTCCCATTTGTTC-3′(下划线为BamHI酶切位点)
扩增产物经EcoRI和BamHI双酶切后连接至经相同酶切后的表达载体，利用电击法将带有HbSGT1b基因ORF的质粒转化农杆菌GV3101菌株；
(4)利用转基因技术将带有HbSGT1b基因的农杆菌转化目标植物拟南芥Col-0，获得转基因稳定遗传植株。
本发明进一步提供橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因的荧光定量PCR检测引物，引物HbSGT1b-QF的序列如SEQ ID NO:7所示，引物HbSGT1b-QR的序列如SEQ ID NO:8所示，具体为：
HbSGT1b-QF：5′-TGTTCCACTGAGTGCTACAC-3′
HbSGT1b-QR：5′-CCAGGGACATTGATGGTAAC-3′
分别检测橡胶树胶乳、花、树皮、茎和叶片五种组织，经过白粉病侵染后橡胶树叶片HbSGT1b基因的表达情况，结果表明，HbSGT1b基因在花中表达量最高，在白粉菌不同侵染级别叶片下调表达，在白粉菌侵染后6h表达量最高，随后下降。
本发明具有以下优点：本发明通过对HbSGT1b基因转化拟南芥进行该基因的功能研究，验证了转基因拟南芥具有恢复提早开花的能力。该基因可用于橡胶树和其他作物的白粉病抗性和成花发育转基因研究中。本发明与橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因来自橡胶树，不会产生基因漂移，对环境影响较小，为提高植物抗病性和开花发育提供新的基因资源。
附图说明
图1为本发明实施例1中HbSGT1b与大麦HvSGT1、拟南芥AtSGT1a、AtSGT1b、酿酒酵母ScSGT1和水稻OsSGT1保守区的氨基酸序列同源性比对结果；
图2为本发明实施例2中利用荧光定量PCR检测橡胶树不同组织、不同白粉病侵染叶片级别和白粉菌不同侵染时间处理后，HbSGT1b基因的表达情况；
图3为本发明实施例3中野生型(Col-0)和HbSGT1b转基因拟南芥株系的表型比较。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述：若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。
实施例1：橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因的克隆
利用RT-PCR技术从巴西橡胶树品种热研7-33-97叶片中克隆获得橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b基因，具体方法如下：
1、提取橡胶树叶片中的总RNA，反转录得到cDNA第一链。
2、以cDNA第一链为模板，HbSGT1b-F和HbSGT1b-R为引物，通过PCR扩增反应获得白粉病抗性相关HbSGT1b基因的cDNA序列。
引物序列如下：
HbSGT1b-F：5′-TACACTCTATTCTCTTAGCCCAAGC-3′
HbSGT1b-R：5′-AACCCTAGAAGAGCAAAAATCTGAC-3′
使用2×Taq PCR MasterMix(天根生化)进行PCR扩增，反应体系为：cDNA模板2μL，引物F、R(10μmol/L)各1μL，2×PCR MasterMix 25μL，加ddH2O至50μL。
PCR扩增程序为：94℃变性3min；94℃变性30s，55℃退火50s，72℃延伸2min，共35个循环；最后72℃延伸10min。
3、扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳后，切下目的片段，凝胶回收纯化，并克隆到pMD18-T载体上，经菌落PCR检测，送上海立菲生物技术有限公司进行测序验证，测序验证正确的质粒命名为HbSGT1b-18T。测序结果表明，橡胶树白粉病抗性相关HbSGT1b属于植物SGT1家族成员，HbSGT1b基因cDNA序列(SEQ ID NO:1)为1161bp；其ORF(开放阅读框)为1068bp(SEQ ID NO:3)，编码由355个氨基酸组成的蛋白HbSGT1b(SEQ ID NO:2)。
HbSGT1b与与大麦HvSGT1、拟南芥AtSGT1a、AtSGT1b、酿酒酵母ScSGT1和水稻OsSGT1保守区的氨基酸序列同源性比对结果见附图1。
实施例2：HbSGT1b基因在橡胶树不同组织、受不同白粉病侵染叶片级别和白粉菌不同侵染时间处理表达分析
采用荧光定量PCR方法检测橡胶树胶乳、花、树皮、茎和叶片五种组织，经过不同白粉病侵染叶片级别和白粉菌不同侵染时间处理表达情况。
组织采样：海南大学儋州教学基地采集橡胶树品种Reyan73397成龄无乙烯刺激的开割树采集其胶乳、树皮、根、茎、叶、花相关组织。
不同白粉病侵染叶片级别：海南大学儋州教学基地采集橡胶树品种Reyan73397白粉病病级0、1、3、5和7级叶片。
白粉菌侵染处理：选取长势一致无病害无外伤的橡胶树Reyan73397芽接苗稳定期叶片，隔离一周后，将白粉菌(HO-73)涂抹到橡胶树芽接苗嫩叶上，对照组与实验组隔离白粉菌。接种后在0、0.1、1、3、6、12、24、48、72h随机采集3片实验组叶片，对照组同步采样。
根据HbSGT1b基因序列设计如下荧光定量PCR检测引物：
HbSGT1b-QF：5′-TGTTCCACTGAGTGCTACAC-3′(序列如SEQ ID NO:7所示)
HbSGT1b-QR：5′-CCAGGGACATTGATGGTAAC-3′(序列如SEQ ID NO:8所示)
HbACTIN-F：5′-GATGTGGATATCAGGAAGGA-3′(序列如SEQ ID NO:10所示)
HbACTIN-R：5′-CATACTGCTTGGAGCAAGA-3′(序列如SEQ ID NO:11所示)
以HbACTIN(GenBank登录号：HO004792)为内参基因。使用BioRad公司的CFX-96荧光定量PCR仪进行荧光定量PCR，反应程序为：95℃预变性30s；94℃5s，60℃20s，72℃20s，进行45个循环。扩增结束后绘制熔解曲线，从50℃逐渐升温至95℃，升温速度0.2℃/s，全过程检测荧光信号。HbSGT1b基因的表达量采用公式Qt＝2-Ct(HbACTIN)-Ct(HbSGT1b)计算，Ct表示每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。
荧光定量PCR检测结果表明，结果表明，HbSGT1b基因在花中表达量最高，在白粉菌不同侵染级别叶片下调表达，在白粉菌侵染后6h表达量最高，随后下降，见附图2。
实施例3：转HbSGT1b基因拟南芥植株的获得及表型鉴定
以实施例1制备的HbSGT1b-18T质粒为模板，HbSGT1b-EcoRI-F：5′-GGAATTCATGGCCAGCGAGTTGG-3′(下划线为EcoRI酶切位点)与HbSGT1b-BamHI-R：5′-CGGGATCCATATTCCCATTTGTTC-3′(下划线为BamHI酶切位点)为引物，扩增HbSGT1b基因的ORF，扩增产物经HindIII和BamHI双酶切后连接至经相同酶切后的表达载体，构建好的重组质粒命名为HbSGT1b-OE-GFP，利用电击法将重组质粒HbSGT1b-OE-GFP转化农杆菌GV3101菌株；通过农杆菌介导法将HbSGT1b基因转化到野生型拟南芥植株Col-0和atsgt1b突变体中进行过表达，对转基因阳性植物进行鉴定，对含目标基因的T3代阳性植株进行筛选及表型分析，结果表明过表达HbSGT1b基因的转基因拟南芥可以部分缓解atsgt1b突变体提早开花表型，为HbSGT1b基因在其他植物上的应用提供良好的基础，见图3。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都涵盖在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 海南大学
<120> 一种橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b及其应用
<130> 1
<160> 11
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1161
<212> DNA
<213> 橡胶树(未知)
<400> 1
tacactctat tctcttagcc caagcttcaa caatggccag cgagttggct gagaaggcaa 60
aagaagcaat catcgatgat gatttcgaac tggccttgga tttatattcc aaagccatcg 120
aattggaccc caccaacgct gattacttcg ccgaccgagc tcaggcctat attaaactca 180
ataacttcac tgaggccgtt gctgatgcta acaaggctat tgagttggct tcttcgtttg 240
ccaaggcata tttgcgtaaa ggtactgcct gtatgaagct tgaagaatat catacagcca 300
agagagccct tgaaatcggt gcatctttgg ctccagatga ttccagattt accaagttga 360
tcaaagaatg tgatctgcac atagcagagg agttttatga tcaaaggaag tccttggcac 420
caaatgttcc actgagtgct acacctgcat ctgttggttc ctgtaagaat gaaacaatct 480
cttcagaaaa accaaaatac agacatgaat actaccagaa gccagaggaa gtggttttaa 540
caatttttgc aaagggcatt acagcagaaa atgtcacagt tgattttggt gaacaaattc 600
tcagtgttac catcaatgtc cctggtgaag atacatatca ttttcaacct caattgtttg 660
gaaaaatatt acctgatagg agcaaatatc aagtattgtc aaccaagatt gaaatccatc 720
ttgcaaaagc tgaagttatt aactggacat ctcttgaata ctgcaaggga attatagtcc 780
cgcagaaaat aaatgtgtca tcagttggat ctcgaaggcc ttcatatcca tcttcaaaat 840
caagagcaaa agattgggat aagttggaag cccaagtgaa gagcgaggaa agagatgaga 900
agctagatgg tgatgcagct ttgaacaagt tattcaggga catttaccaa aatgcagatg 960
acaacatgag aagggctatg accaaatctt ttgtggagtc aagcgggacg gtactttcaa 1020
ctgactggaa agaagtgggt tcaaagaagg tagaaggtag tgctccagag ggtatggtaa 1080
tgaacaaatg ggaatattga tctagtgcac cagtctgatt atgtaatgcc tgcaatgtca 1140
gatttttgct cttctagggt t 1161
<210> 2
<211> 355
<212> PRT
<213> 橡胶树(未知)
<400> 2
Met Ala Ser Glu Leu Ala Glu Lys Ala Lys Glu Ala Ile Ile Asp Asp
1 5 10 15
Asp Phe Glu Leu Ala Leu Asp Leu Tyr Ser Lys Ala Ile Glu Leu Asp
20 25 30
Pro Thr Asn Ala Asp Tyr Phe Ala Asp Arg Ala Gln Ala Tyr Ile Lys
35 40 45
Leu Asn Asn Phe Thr Glu Ala Val Ala Asp Ala Asn Lys Ala Ile Glu
50 55 60
Leu Ala Ser Ser Phe Ala Lys Ala Tyr Leu Arg Lys Gly Thr Ala Cys
65 70 75 80
Met Lys Leu Glu Glu Tyr His Thr Ala Lys Arg Ala Leu Glu Ile Gly
85 90 95
Ala Ser Leu Ala Pro Asp Asp Ser Arg Phe Thr Lys Leu Ile Lys Glu
100 105 110
Cys Asp Leu His Ile Ala Glu Glu Phe Tyr Asp Gln Arg Lys Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Asn Val Pro Leu Ser Ala Thr Pro Ala Ser Val Gly Ser Cys
130 135 140
Lys Asn Glu Thr Ile Ser Ser Glu Lys Pro Lys Tyr Arg His Glu Tyr
145 150 155 160
Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Val Val Leu Thr Ile Phe Ala Lys Gly Ile
165 170 175
Thr Ala Glu Asn Val Thr Val Asp Phe Gly Glu Gln Ile Leu Ser Val
180 185 190
Thr Ile Asn Val Pro Gly Glu Asp Thr Tyr His Phe Gln Pro Gln Leu
195 200 205
Phe Gly Lys Ile Leu Pro Asp Arg Ser Lys Tyr Gln Val Leu Ser Thr
210 215 220
Lys Ile Glu Ile His Leu Ala Lys Ala Glu Val Ile Asn Trp Thr Ser
225 230 235 240
Leu Glu Tyr Cys Lys Gly Ile Ile Val Pro Gln Lys Ile Asn Val Ser
245 250 255
Ser Val Gly Ser Arg Arg Pro Ser Tyr Pro Ser Ser Lys Ser Arg Ala
260 265 270
Lys Asp Trp Asp Lys Leu Glu Ala Gln Val Lys Ser Glu Glu Arg Asp
275 280 285
Glu Lys Leu Asp Gly Asp Ala Ala Leu Asn Lys Leu Phe Arg Asp Ile
290 295 300
Tyr Gln Asn Ala Asp Asp Asn Met Arg Arg Ala Met Thr Lys Ser Phe
305 310 315 320
Val Glu Ser Ser Gly Thr Val Leu Ser Thr Asp Trp Lys Glu Val Gly
325 330 335
Ser Lys Lys Val Glu Gly Ser Ala Pro Glu Gly Met Val Met Asn Lys
340 345 350
Trp Glu Tyr
355
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 3
tacactctat tctcttagcc caagc 25
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 4
aaccctagaa gagcaaaaat ctgac 25
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 5
ggaattcatg gccagcgagt tgg 23
<210> 6
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 6
cgggatccat attcccattt gttc 24
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 7
tgttccactg agtgctacac 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 8
ccagggacat tgatggtaac 20
<210> 9
<211> 1068
<212> DNA
<213> 橡胶树(未知)
<400> 9
atggccagcg agttggctga gaaggcaaaa gaagcaatca tcgatgatga tttcgaactg 60
gccttggatt tatattccaa agccatcgaa ttggacccca ccaacgctga ttacttcgcc 120
gaccgagctc aggcctatat taaactcaat aacttcactg aggccgttgc tgatgctaac 180
aaggctattg agttggcttc ttcgtttgcc aaggcatatt tgcgtaaagg tactgcctgt 240
atgaagcttg aagaatatca tacagccaag agagcccttg aaatcggtgc atctttggct 300
ccagatgatt ccagatttac caagttgatc aaagaatgtg atctgcacat agcagaggag 360
ttttatgatc aaaggaagtc cttggcacca aatgttccac tgagtgctac acctgcatct 420
gttggttcct gtaagaatga aacaatctct tcagaaaaac caaaatacag acatgaatac 480
taccagaagc cagaggaagt ggttttaaca atttttgcaa agggcattac agcagaaaat 540
gtcacagttg attttggtga acaaattctc agtgttacca tcaatgtccc tggtgaagat 600
acatatcatt ttcaacctca attgtttgga aaaatattac ctgataggag caaatatcaa 660
gtattgtcaa ccaagattga aatccatctt gcaaaagctg aagttattaa ctggacatct 720
cttgaatact gcaagggaat tatagtcccg cagaaaataa atgtgtcatc agttggatct 780
cgaaggcctt catatccatc ttcaaaatca agagcaaaag attgggataa gttggaagcc 840
caagtgaaga gcgaggaaag agatgagaag ctagatggtg atgcagcttt gaacaagtta 900
ttcagggaca tttaccaaaa tgcagatgac aacatgagaa gggctatgac caaatctttt 960
gtggagtcaa gcgggacggt actttcaact gactggaaag aagtgggttc aaagaaggta 1020
gaaggtagtg ctccagaggg tatggtaatg aacaaatggg aatattga 1068
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 10
gatgtggata tcaggaagga 20
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 11
catactgctt ggagcaaga 19

Claims (5)

1.橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b在抑制拟南芥atsgt1b突变体的提早开花中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b，其cDNA序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，转HbSGT1b基因拟南芥atsgt1b突变体植株的构建方法包括以下步骤：
S1. 提取橡胶树叶片中的总RNA，反转录得到cDNA第一链；
S2. 以cDNA第一链为模板，HbSGT1-F和HbSGT1-R为引物，通过PCR扩增反应获得橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b基因的cDNA序列；
其中，所述引物HbSGT1b-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，HbSGT1b-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
S3. 利用电击法将带有HbSGT1b基因cDNA序列的质粒转化农杆菌；
其中，以引物HbSGT1b-EcoRI-F和HbSGT1b- BamHI-R扩增HbSGT1b基因的ORF，所述HbSGT1b-EcoRI-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，HbSGT1b- BamHI-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；
S4. 利用转基因技术将带有转化质粒的农杆菌转化目标植物拟南芥atsgt1b突变体，获得转基因稳定遗传植株。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述橡胶树白粉病抗性相关基因HbSGT1b的荧光定量PCR检测引物HbSGT1b-QF的序列如SEQ ID NO:7所示，引物HbSGT1b-QR的序列如SEQ ID NO:8所示。
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