CN111349581A - 一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用 - Google Patents

一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明改变涉及嗜酸乳杆菌技术领域，从健壮猪的粪便中分离纯化出原始嗜乳酸杆菌、利用高氨氮比的固体养猪废水培养基对分离纯化的原始嗜乳酸杆菌进行培养，挑选固体养猪废水培养基上成活的单菌落接种于种子培养基上培养得到种子液，将种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释得到菌悬液、将菌悬液涂布于固体养猪废水培养基上分别连续传代培养，筛选出抗逆性强的优势菌株接种于营养培养液，进行发酵培养，获得嗜酸乳杆菌的菌悬液；本发明培育的嗜酸乳杆菌的菌悬液用于喂养猪，能够增强猪的免疫力，降低腹泻等；选育方法简单高效，能够选育出发酵培养活力强，保藏期长的嗜酸乳杆菌，用于改善猪的肠道微环境，增强猪的免疫力。

Description

一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用
技术领域
本发明涉及嗜酸乳酸菌技术领域，具体为一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用。
背景技术
目前，在畜牧业中使用抗生素是个普遍的现象，在饲料中添加抗生素，可以预防动物疾病，提高生产性能，但抗生素长期使用容易造成致病菌的耐药性以及动物肠道菌群失衡。在畜牧业中寻找抗生素替代物意义巨大，微生物制剂是一种很好的替代品。其中，嗜酸乳杆菌具有调节肠道菌群、增强机体免疫力及帮助消化和吸收等生理作用，其作为绿色无害的饲料添加剂的应用已收到广泛的关注。
由于乳酸杆菌不耐受胃酸、胆汁酸等低pH的环境，以及人工发酵制得菌体活力较低，保藏期较短，从而限制了乳酸菌得生产和应用。选育耐受性强及生产活力高得优势菌株具有很大得市场空间及应用价值。
养猪废水具有较高浓度的生物需氧量(BOD5)、化学需氧量(CODCr)、总单(NH3-N)以及总磷(TP)，一般的微生物难以在其中生长，嗜酸乳杆菌作为肠道微生物之一，可以适应一定浓度的养猪废水环境，利于高浓度的养猪废水理论上可以筛选获得在猪肠道中适应性强及活性高的优势菌株。
菌株得选育通常采取物理和化学诱变得方法，例如紫外诱变、等离子诱变、甲基磺酸乙酯(EMS)、亚硝基胍(NTG)等诱变剂诱变等。常规的筛选包括流式细胞仪筛选法、低pH筛选法、高温筛选法等。这些方法存在毒性大，效率低等问题。
基于此，本发明设计了一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用，以解决上述问题。
发明内容
嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus已于2016年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号CCTCC NO:CCTCC M2016139。
本发明的目的在于提供一种嗜酸乳酸菌的选育及其应用，以解决提供一株活性高、保质期长的嗜酸乳杆菌突变菌株，该菌株在发酵后可长期稳定保藏，饲养猪后，可起到提高猪消化吸收能力、免疫力及预防疾病等作用的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种嗜酸乳杆菌的选育方法，包括如下步骤：
从健壮猪的粪便中分离纯化出原始嗜乳酸杆菌；
利用高氨氮比的固体养猪废水培养基对分离纯化的原始嗜乳酸杆菌进行培养，挑选固体养猪废水培养基上成活的单菌落；
将所得单菌落接种于种子培养基上培养得到种子液，将种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释得到菌悬液；
将菌悬液涂布于固体养猪废水培养基上；
选择固体养猪废水培养基上成活的单菌落，分别连续传代培养，培养基仍为固体养猪废水培养基；
筛选出抗逆性强的优势菌株接种于营养培养液，进行发酵培养，获得嗜酸乳杆菌的菌悬液。
优选的，固体养猪废水培养基对分离纯化的嗜乳酸杆菌进行培养环境为 37-40℃下活化10-15h，单菌落接种于种子培养基上培养环境为37℃下摇床培养10-15h得到种子液，种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释至106-108cfu 得到菌悬液。
优选的，单菌落进行50-100次的连续传代培养，挑选生长代谢活性及抗逆性强的优势菌株。
优选的，采用发酵罐培养，初始发酵液的体积为发酵罐体积的45-55％，向发酵罐中流加糖液或含营养培养液的糖液。
优选的，发酵过程中控制培养基的流速，使发酵罐中培养液的总糖浓度维持在1-2wt％。
优选的，采用的营养液中质量百分比含无水乙酸钠0.3-0.5％、柠檬酸二铵0.2-0.3％、磷酸氢二钾0.2-0.3％、七水硫酸镁0.05-0.10％、硫酸锰0.01-0.02％、番茄汁0.5-0.6％，发酵温度为37-40℃，发酵培养时间为24-30h。
优选的，向发酵罐中通入氮气，通气比为0.1-0.2vvm，搅拌转速为 50-60r/min，罐压维持在0.03-0.05MPa。
优选的，所述嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus已于2016年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号CCTCC NO:CCTCC M 2016139，保藏地址为中国武汉大学。
一种高氨氮比固体养猪废水培养基的制备方法，包括以下步骤：
将养猪废水进行过滤，旋转蒸干浓缩，添加0.5％-0.8％(w/v)的猪胆盐，用氢离子浓度为6-8mol/L的酸液调节pH至2.0-3.5，于115-130℃下反应 30-90min，得到高氨氮比的养猪废水液，加入1-2％(w/v)的琼脂糖制成固体养猪废水培养基。
一种利用嗜酸乳酸杆菌饲养猪的方法，将嗜酸乳杆菌的菌悬液用于饲料添加或者餐后直接喂养猪。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明培育的嗜酸乳杆菌的菌悬液用于喂养猪，能够增强猪的免疫力，降低腹泻等。本发明的选育方法简单高效，能够选育出发酵培养活力强，保藏期长的嗜酸乳杆菌，用于改善猪的肠道微环境，增强猪的免疫力。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例：
发酵结束后获得的菌液可以直接用于喂养猪，或参入饲料中使用。
发酵结束后获得的菌液还可离心获得菌泥，冻干或喷雾保藏使用。
1、本发明提供一种嗜酸乳杆菌的选育方法，包括如下步骤：
(1)从健康猪的粪便中分离获得一株嗜酸乳杆菌；
(2)制备嗜酸乳杆菌初始菌体的菌悬液；
(3)将菌悬液涂布于固体养猪废水培养基上培养；
固体养猪废水培养基包括养猪废水浓缩液、糖、盐分和琼脂；养猪废水的浓度使菌体的死亡率高于95％；
养猪废水是指养猪废水原液或养猪废水浓缩液，添加0.5％-0.8％(w/v) 的猪胆盐，用氢离子浓度为6-8mol/L的酸液调节pH至2.0-3.5，于115-130℃下反应30-90min，得到高氨氮比的养猪废水液；其中，加1-2％(w/v)的琼脂糖制成固体养猪废水培养基。
(1)挑选固体养猪废水培养基上成活的单菌落，分别传代，选择能够稳定传代且生产活力高的菌株。
根据本发明的选育方法，步骤(1)中的嗜酸乳杆菌可以为市售的任何嗜酸乳杆菌菌体，优选为生产活力高，保质期长的嗜酸乳杆菌菌体。
根据本发明的选育方法，步骤(2)中制备嗜酸乳杆菌初始菌体的菌悬液是：取保存的嗜酸乳杆菌试管斜面，在无菌室中用无菌生理盐水冲洗后，接种于内装50mL培养基的250mL三角瓶中，37-40℃下培养18-24h，得到上述嗜酸乳杆菌的种子悬液。试管斜面培养基组成为：葡萄糖1-2％，蛋白胨0.5-1％，牛肉膏0.5-1％，酵母膏0.5-1％，无水乙酸钠0.3-0.5％，柠檬酸二铵0.2-0.3％，磷酸氢二钾0.2-0.3％，七水硫酸镁0.05-0.10％，硫酸锰0.01-0.02％，吐温 0.05-0.1％，琼脂1.5-2％。液体培养基组成为：葡萄糖1-2％，蛋白胨0.5-1％，牛肉膏0.5-1％，酵母膏0.5-1％，无水乙酸钠0.3-0.5％，柠檬酸二铵0.2-0.3％，磷酸氢二钾0.2-0.3％，七水硫酸镁0.05-0.10％，硫酸锰0.01-0.02％，吐温 0.05-0.1％。采用上述种子液培养基嗜酸乳杆菌增殖速度快，活性高，涂布于养猪废水固体培养基时更容易存活和繁殖。
根据本发明的选育方法，步骤(2)中，的菌悬液浓度为106-108cfu。
根据本发明的选育方法，步骤(2)中，的养猪废水是指未经污水处理前的养猪厂中污水池中污水，经0.45微米过滤膜过滤或8000r/min离心5min，再调pH所得；的酸液可以是硫酸、盐酸、硝酸、乙酸中的至少一种，更优选为硫酸和乙酸(1:1，v:v)。
2、本发明提供一种嗜酸乳杆菌的高密度发酵方法，包括如下步骤：
(1)制备种子液；
(2)利用1000L发酵罐补料发酵；
根据本发明的嗜酸乳杆菌的高密度发酵方法，步骤(1)中制备嗜酸乳杆菌种子液是：取保存的嗜酸乳杆菌试管斜面，在无菌室中用无菌生理盐水冲洗后，接种于内装500mL培养基的3L三角瓶中，37-40℃下培养10-15h，得到上述嗜酸乳杆菌的一级种子液；将一级种子液接种于含50L培养液的100L 发酵罐中，37-40℃下培养10-15h，得到上述嗜酸乳杆菌的二级种子液；将二级种子液接种于含500L培养液的1000L发酵罐中，37-40℃下培养24-30h，得到上述嗜酸乳杆菌的发酵液。发酵培养基组成为：葡萄糖1-2％，蛋白胨 0.5-1％，牛肉膏0.5-1％，酵母膏0.5-1％，无水乙酸钠0.3-0.5％，柠檬酸二铵 0.2-0.3％，磷酸氢二钾0.2-0.3％，七水硫酸镁0.05-0.10％，硫酸锰0.01-0.02％，吐温0.05-0.1％。
根据本发明的嗜酸乳杆菌的高密度发酵方法，步骤(2)中的补料发酵是指，当发酵液的初始糖消耗时，向发酵液中流加一定浓度的糖液或含营养成分的糖液，糖液的成分可为蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、糖蜜的至少一种成分，优选葡萄糖，更优选为糖蜜；流加糖液浓度为40％-60％，营养成分为无水乙酸钠0.3-0.5％，柠檬酸二铵0.2-0.3％，磷酸氢二钾0.2-0.3％，七水硫酸镁0.05-0.10％，硫酸锰0.01-0.02％，0.5-0.6％的番茄汁。
根据本发明的嗜酸乳杆菌的高密度发酵方法，步骤(2)中的补料发酵是指向发酵罐中通入氮气，通气比为0.1-0.2vvm，使罐压维持在0.03-0.05Mpa，搅拌转速为50-60r/min。
3、本发明提供一种嗜酸乳杆菌的饲养猪的方法，包括如下步骤：
(1)动物分组与管理；
(2)项目测定；
根据本发明的嗜酸乳杆菌的饲养猪的方法，步骤(1)试验在养猪场进行，将120头(体重40±0.5kg)健康的断奶仔猪随机分成4组：第一组，基础日粮对照(CK)，餐后喂食干净的自来水500ml；第二组，基础日粮，餐后喂食新鲜的发酵液500ml；第三组，基础日粮，餐后喂食保藏六个月的发酵液500ml；第四组，基础日粮，餐后喂食保藏12个月的发酵液500ml；各实验组发酵液发酵结束时活菌浓度相当。
根据本发明的嗜酸乳杆菌的饲养猪的方法，步骤(2)项目测定是指对实验猪仔进行实验前和实验结束后的称重，并按重量结算饲料，计算日采食量、日增重量以及料肉比。
根据本发明的嗜酸乳杆菌的饲养猪的方法，步骤(2)项目测定是指对实验猪仔直肠内的新鲜内容物进行分离和培养，测得直肠内容物中乳酸杆菌和大肠杆菌的数量。
根据本发明的嗜酸乳杆菌的饲养猪的方法，步骤(2)项目测定是指每日观察仔猪排粪情况，记录腹泻个体数及腹泻次数，最后以组为单位计算腹泻率。试验结束前3天，各组随机收集3个正常粪便样品，测定粪便中大肠杆菌数量。
腹泻率＝(腹泻仔猪数×腹泻天数)/(试验猪头数×试验天数)。
具体实施方式：
下面结合具体实施例对本发明作进一步得说明，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1
选育嗜酸乳杆菌的方法，包括如下步骤：
(1)从健康的成年猪的粪便中分离得到一株嗜酸乳杆菌，将其划线于平板固体养猪废水培养基上，于37℃下活化10-15h，得到单菌落；将所得的单菌落接种于种子培养基上，于37℃下摇床培养10-15h，装液量为50/250mL，摇床转速为150r/min，得到种子液；所得的种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释至106-108cfu，得到菌悬液。
(2)将菌悬液涂布于固体养猪废水培养基上，40℃培养2天。
(3)选择固体养猪废水培养基上成活的单菌落，分布传代培养，培养基仍为固体养猪废水培养基。
(4)选着能够稳定传代5代以上的菌株，置于发酵培养基中培养，温度为37℃，发酵周期为24h，摇床转速为150r/min，测定发酵菌浓。
实施例2
嗜酸乳杆菌的高密度发酵，包括如下步骤：
(1)将嗜酸乳杆菌接种于种子培养基中，37℃下恒温培养10-15h，摇床转速150r/min；得到一级种子液，将一级种子液以1vt％的接种量接种于50L发酵培养液的100L发酵罐中，37℃，150r/min，0.1-0.2vvm通氮气保压至 0.03-0.05Mpa，pH用氨水控制至4.0±0.1，培养10-15h获得二级种子液；将二级种子液以1vt％的接种量接种于500L发酵培养液的1000L发酵罐中， 37℃，50r/min，0.1-0.2vvm通氮气保压至0.03-0.05Mpa，pH用氨水控制至4.0 ±0.1，培养24-30h获得发酵菌液。
(2)发酵过程根据发酵液糖耗情况进行补料，当糖基本耗完时，流加营养糖液，使发酵培养基的残糖浓度控制在1-2％。
实施例3
猪的体重为40±0.5kg。
嗜酸乳杆菌的饲养猪的方法，包括如下步骤：
(1)选取120头断奶猪仔，分成4组，每组30头；
(2)第一组为对照组，每日喂养基础日粮，餐后喂500mL干净的自来水。
(3)第二组每日喂养基础日粮，餐后喂500mL新鲜的发酵培养液(一周内)。
(4)第三组每日喂养基础日粮，餐后喂500mL保存6个月的发酵培养液。
(5)第四组每日喂养基础日粮，餐后喂500mL保存12个月的发酵培养液。
(6)计算日采食量、日增重、料肉比、直肠中微生物数量及腹泻率。
试验例1
实施例1中，步骤(2)培养后菌体的致死率见表1。
表1
Figure RE-RE-GDA0002460483160000071
试验例2
实施例1选育得到的多个菌株中，得到抗逆性强，活力高的嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus，该菌遗传性状及活力突出，申请人已将其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2016139。
试验3
初始菌Lactobacillus acidophilus与突变菌Lactobacillus acidophilusCCTCC NO.摇瓶水平试验：
(1)将初始菌Lactobacillus acidophilus与突变菌Lactobacillus acidophilusCCTCC NO.分别接种于种子培养基中，于37℃培养10-15h，摇床转速 150r/min，装液量为50mL/250mL，得到种子液，种子培养基配方为：葡萄糖 2％，蛋白蛋1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，柠檬酸钠0.2％，K2HPO4 0.2％， pH6.0；
(2)将上述种子液移种于发酵培养基，接种量为1vt％，于37℃培养24h，摇床转速150r/min，装液量为50mL/250mL，得到种子液，发酵培养基配方为：葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，无水乙酸钠0.3％，柠檬酸二铵0.3％，磷酸氢二钾0.3％，七水硫酸镁0.10％，硫酸锰0.02％，吐温0.1％， CaCl2 0.1％，pH6.0；
(3)将发酵液分别用无菌生理盐水稀释涂布于固体种子培养基，其配方为：葡萄糖2％，蛋白蛋1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，柠檬酸钠0.2％，K2HPO4 0.2％，琼脂2％，pH6.0，计算cfu；
(4)初始菌Lactobacillus acidophilus经摇瓶发酵后活菌数为2.1× 108cfu/mL，突变菌Lactobacillus acidophilus CCTCC NO.经摇瓶发酵后活菌数为3.1×109cfu/mL。
试验例3
突变菌Lactobacillus acidophilus CCTCC NO.发酵罐水平试验：
(1)将突变菌Lactobacillus acidophilus CCTCC NO.接种于种子培养基中，于37℃培养10-15h，摇床转速150r/min，装液量为500mL/3L，得到一级种子液，种子培养基配方为：葡萄糖2％，蛋白蛋1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，柠檬酸钠0.2％，K2HPO4 0.2％，pH6.0；
(2)将上述种子液移种于50L发酵培养基，接种量为1vt％，于37℃培养15h，转速150r/min，装液量为50L/100L，得到二级种子液；
(3)将上述种子液移种于500L发酵培养基，接种量为1vt％，于37℃培养24h，转速50r/min，装液量为500L/1000L，得到发酵液，发酵培养基配方为：葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，番茄汁0.5％，无水乙酸钠0.3％，柠檬酸二铵0.3％，磷酸氢二钾0.3％，七水硫酸镁0.10％，硫酸锰0.02％，吐温0.1％，CaCl2 0.1％。发酵前4/5时间用氨水维持为pH6.0，后 1/5时间不再控制pH，发酵过程根据发酵液残糖流加营养糖液，使发酵残糖为1-2％。流加糖液浓度为40％-60％，营养成分为无水乙酸钠0.3％，柠檬酸二铵0.2％，磷酸氢二钾0.2％，七水硫酸镁0.10％，硫酸锰0.01％，1％的番茄汁；
(4)将发酵液用无菌生理盐水稀释涂布于固体种子培养基，其配方为：葡萄糖2％，蛋白蛋1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，柠檬酸钠0.2％，K2HPO4 0.2％，琼脂2％，pH6.0，计算cfu；
(5)突变菌Lactobacillus acidophilus CCTCC NO.经发酵罐发酵后活菌数为5.6×1010cfu/mL。
试验例3
发酵罐发酵所得Lactobacillus acidophilus CCTCC NO.菌液喂养断奶猪仔的生长性能试验：
(1)将发酵后所得的Lactobacillus acidophilus CCTCC NO.菌液直接喂养断奶猪仔，每日晚餐后半小时时喂养500mL，对照组喂养干净的自来水500mL，试验期28天，得断奶猪仔的生长性能表2：
表2
Figure RE-RE-GDA0002460483160000091
Figure RE-RE-GDA0002460483160000101
(2)取上述喂养后的各试验组中体重相当的健康猪仔的直肠新鲜内容物，涂布培养于固体种子培养基，其配方为：葡萄糖2％，蛋白蛋1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，柠檬酸钠0.2％，K2HPO4 0.2％，琼脂2％，pH6.0，计算乳酸杆菌和大肠杆菌cfu以及记录各组断奶猪仔腹泻率，腹泻率＝(腹泻仔猪数×腹泻天数)/(试验猪头数×试验天数)。试验结果见表3：
表3
Figure RE-RE-GDA0002460483160000102
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (10)

1.一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)从健壮猪的粪便中分离纯化出原始嗜乳酸杆菌；
(2)利用高氨氮比的固体养猪废水培养基对分离纯化的原始嗜乳酸杆菌进行培养，挑选固体养猪废水培养基上成活的单菌落；
(3)将所得单菌落接种于种子培养基上培养得到种子液，将种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释得到菌悬液；
(4)将菌悬液涂布于固体养猪废水培养基上；
(5)选择固体养猪废水培养基上成活的单菌落，分别连续传代培养，培养基仍为固体养猪废水培养基；
(6)筛选出抗逆性强的优势菌株接种于营养培养液，进行发酵培养，获得嗜酸乳杆菌的菌悬液。
2.根据权利要求1所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(2)的培养环境为37-40℃下活化10-15h；步骤(3)种子培养基按质量比含有葡萄糖1-2％、蛋白胨0.5-1％、牛肉膏0.5-1％、酵母膏0.5-1％、无水乙酸钠0.3-0.5％、柠檬酸二铵0.2-0.3％、磷酸氢二钾0.2-0.3％、七水硫酸镁0.05-0.10％、硫酸锰0.01-0.02％、吐温0.05-0.1％，37-40℃下摇床培养18-24h得到种子液，种子液用无菌生理盐水洗涤重悬，稀释至106-108cfu得到菌悬液。
3.根据权利要求1所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(5)得到的单菌落，进行50-100次的连续传代培养，挑选生长代谢活性及抗逆性强的优势菌株。
4.根据权利要求1所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(6)中，采用发酵罐培养，初始发酵液的体积为发酵罐体积的45-55％，向发酵罐中流加糖液或含营养成分的糖液，糖液浓度为40％-60％糖液，营养成按质量百分比含无水乙酸钠0.3-0.5％、柠檬酸二铵0.2-0.3％、磷酸氢二钾0.2-0.3％、七水硫酸镁0.05-0.10％、硫酸锰0.01-0.02％、番茄汁0.5-0.6％。
5.根据权利要求4所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(3)中，发酵过程中控制培养基的流速，使发酵罐中培养液的总糖浓度维持在1-2wt％。
6.根据权利要求5所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(6)中，采用的营养培养液中按质量比包括葡萄糖1-2％、蛋白胨0.5-1％、牛肉膏0.5-1％、酵母膏0.5-1％、无水乙酸钠0.3-0.5％、柠檬酸二铵0.2-0.3％、磷酸氢二钾0.2-0.3％、七水硫酸镁0.05-0.10％、硫酸锰0.01-0.02％、吐温0.05-0.1％，发酵温度为37-40℃，发酵培养时间为24-30h。
7.根据权利要求6所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：步骤(3)中，向发酵罐中通入氮气，通气比为0.1-0.2vvm，搅拌转速为50-60r/min，罐压维持在0.03-0.05MPa。
8.根据权利要求1-7任一项所述一种嗜酸乳杆菌的选育方法，其特征在于：所述嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus已于2016年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号CCTCC NO:CCTCC M 2016139。
9.一种高氨氮比固体养猪废水培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
将养猪废水进行过滤，旋转蒸干浓缩，添加0.5％-0.8％(w/v)的猪胆盐，用氢离子浓度为6-8mol/L的酸液调节pH至2.0-3.5，于115-130℃下反应30-90min，得到高氨氮比的养猪废水液，加入1-2％(w/v)的琼脂糖制成固体养猪废水培养基。
10.一种利用嗜酸乳酸杆菌饲养猪的方法，其特征在于：将嗜酸乳杆菌的菌悬液用于饲料添加或者餐后直接喂养猪。
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