CN111323502A - 一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物杂质检测的技术领域，具体涉及一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法。本发明公开了一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，包括以下步骤：S1.将缬沙坦粉碎，用200～230目筛筛出粉料；S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.6‑1.2mL包括N,N‑二甲基甲酰胺、异丙醇、水至少一种组分的溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS‑GC/MS进行检测，其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N‑甲基‑N‑亚硝基甲胺。

Description

一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法
技术领域
本发明属于药物杂质检测的技术领域，具体涉及一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法。
背景技术
目前，亚硝胺类杂质的检测方法主要为气相色谱质谱法、液相色谱法质谱法、气相色谱热能分析仪法，主要应用于食品、饮用水和化妆品行业，国内外对药品中亚硝胺类杂质检测方法的研究报道较少。而且，现有的检测方法中，通常需要对样品作比较复杂的预处理，会存在样品基质对分析的干扰，往往难以同时满足重复性、准确度、线性以及灵敏度等方面的要求。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明的第一个方面提供了一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1.将缬沙坦粉碎，用200～230目筛筛出粉料；
S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.6-1.2mL包括N,N-二甲基甲酰胺、异丙醇、水至少一种组分的溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S2包括：取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.6-1.2mL包括N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
作为一种优选的技术方案，所述N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1： (2-4)。
作为一种优选的技术方案，所述HS测试条件为：顶空加热箱温度：140℃；定量环温度：150℃；传输线温度：150℃；平衡温度：70-80℃；进样时间：1.0min；平衡保持时间：15min；填充压力：15psi。
作为一种优选的技术方案，所述HS测试条件为：顶空加热箱温度：140℃；定量环温度：150℃；传输线温度：150℃；平衡温度：75℃；进样时间：1.0min；平衡保持时间：15min；填充压力：15psi。
作为一种优选的技术方案，所述气相色谱中固定相为：氰丙基苯基5-7％、甲基聚硅氧烷93-95％。
作为一种优选的技术方案，所述气相色谱中固定相为：氰丙基苯基6％、甲基聚硅氧烷94％。
作为一种优选的技术方案，所述气相色谱条件为：
进样口温度：240℃；流速：0.8-1.2mL/min；
分流模式：分流比为5：1；
程序升温：起始温度70℃，保持4min，以2-4℃/min升至100℃，保持1min，再以8-12℃/min升至240℃，保持3.5min。
作为一种优选的技术方案，所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量：40-60eV；灯丝发射电流：60-80μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃。
作为一种优选的技术方案，所述质谱检测中：定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺：m/z＝74，二乙基亚硝胺：m/z＝102。
有益效果：本发明所述检测方法对缬沙坦中的二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺的检测具有高效性、准确性、重复性和灵敏性。
具体实施方式
为了下面的详细描述的目的，应当理解，本发明可采用各种替代的变化和步骤顺序，除非明确规定相反。此外，除了在任何操作实例中，或者以其他方式指出的情况下，表示例如说明书和权利要求中使用的成分的量的所有数字应被理解为在所有情况下被术语“约”修饰。因此，除非相反指出，否则在以下说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是根据本发明所要获得的期望性能而变化的近似值。至少并不是试图将等同原则的适用限制在权利要求的范围内，每个数值参数至少应该根据报告的有效数字的个数并通过应用普通舍入技术来解释。
尽管阐述本发明的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但是具体实例中列出的数值尽可能精确地报告。然而，任何数值固有地包含由其各自测试测量中发现的标准偏差必然产生的某些误差。
当本文中公开一个数值范围时，上述范围视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。例如，从“1至 10”的指定范围应视为包括最小值1与最大值10之间的任何及所有的子范围。范围1至10的示例性子范围包括但不限于1至6.1、3.5至7.8、5.5至10等。
为了解决上述问题，本发明提供了一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1.将缬沙坦粉碎，用200～230目筛筛出粉料；
S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.6-1.2mL包括N,N-二甲基甲酰胺、异丙醇、水至少一种组分的溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺。
步骤S1
所述缬沙坦，又叫丙戊沙坦，盐酸氨溴索杂质D，N-戊酰基-N-[[2'-(1H-四氮唑-5-基)[1,1'-联苯]-4-基]甲基]-L-缬氨酸，是一款血管紧张素II受体拮抗剂抗高血压类药物，该药物是起到使血管紧张素Ⅱ的I型(AT1)受体封闭，血管紧张素Ⅱ血浆水平升高，刺激未封闭的AT2受体，同时抗衡AT1受体的作用，从而达到扩张血管降低血压的效果。
本申请人发现，选用200～230目筛对缬沙坦进行筛选时，使得粉料粒子具有一定的粒径，使其在溶剂中具有合适的扩散速度；在顶空瓶中加入一定量粉料，能够确保进样器中含有合适的目标化合物，减少其它杂质所产生的干扰。
步骤S2
作为一种优选的实施方式，所述步骤S2包括：取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.6-1.2mL包括N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
作为一种更优选的实施方式，所述步骤S2包括：取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.9mL包括N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
所述N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：(2-4)。
所述“HS-GC/MS”指顶空气相色谱-质谱。
作为一种优选的实施方式，所述HS测试条件为：顶空加热箱温度：140℃；定量环温度：150℃；传输线温度：150℃；平衡温度：70-80℃；进样时间：1.0min；平衡保持时间：15min；填充压力：15psi。
作为一种更优选的实施方式，所述HS测试条件为：顶空加热箱温度：140℃；定量环温度：150℃；传输线温度：150℃；平衡温度：75℃；进样时间：1.0min；平衡保持时间：15min；填充压力：15psi。
本申请人发现，由于缬沙坦制剂中除了含有主要活性成分缬沙坦之外，还含有微晶纤维素、交联聚维酮、聚维酮、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁、明胶、十二烷基硫酸钠、氧化铁和二氧化钛等多种辅助成分，因此在提取过程中，各组分之间通过物理、化学等多种机理共同作用，使得目标成分的溶出和提取受到干扰，从而影响了检测方法的准确度。
我国2000版药典已经采用顶空气相色谱法分析药品中残留的有机溶剂，但是，更完善的顶空技术还存在很多问题，其主要问题之一是现在还没有恰当的样品溶剂选择规律。
本申请中发明人发现，将所得的粉料0.3g，加入0.6-1.2mL的N,N-二甲基甲酰胺与异丙醇的混合溶剂，并控制平衡温度为70-80℃，平衡保持时间为15min 时，能够提高检测方法的回收率、准确度等。可能是由于顶空体系是动态平衡， N,N-二甲基甲酰胺与异丙醇形成的溶液影响了二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺离开药物和进入溶剂的分子移动速度；当顶空平衡温度低于70摄氏度时，分子移动速度慢，顶空体系难以达到动态平衡。所述N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：(2-4)时，促进了药物中待测组分溶出，而且异丙醇亲水的羟基和疏水的烷基弥补了N,N-二甲基甲酰胺极性疏水溶剂的不足，使得气液两相可以快速达到扩散平衡稳定状态。
同时，变化其中任何一个参数，都会影响测试结果，当平衡温度过高、平衡时间过长时，体系中一些性质不稳定的挥发性成分发生热分解、氧化等副反应，造成顶空气体的压力过高，使得气密性降低；另一方面，当平衡温度过低、平衡时间过短时，目标化合物难以完全扩散或挥发，造成其浓度过低，也会降低检测方法的准确度。N,N-二甲基甲酰胺较多时，强烈的分子间作用力将待测组分牢牢的吸附在溶剂中，也难以使气液两相达到扩散平衡。在影响因素众多且结果无法预估的复杂条件下，本申请人潜心研究出以上参数。
作为一种优选的实施方式，所述气相色谱中固定相为：氰丙基苯基5-7％、甲基聚硅氧烷93-95％。
作为更一种优选的实施方式，所述气相色谱中固定相为：氰丙基苯基6％、甲基聚硅氧烷94％。
所述气相色谱中色谱柱规格为：DB-624(30m×250μm×1.4μm)。
聚硅氧烷是目前常用的固定相，标准的聚硅氧烷是由许多单个的硅氧烷链接而成，每个硅原子与两个功能基团相连，这些功能基团的类型和数量决定了色谱柱固定相的性质。若有其他取代基取代甲基时，所述取代基的数量由一个百分数表示。
作为一种优选的实施方式，所述气相色谱条件为：
进样口温度：240℃；流速：0.8-1.2mL/min；
分流模式：分流比为5：1；
程序升温：起始温度70℃，保持4min，以2-4℃/min升至100℃，保持1min，再以8-12℃/min升至240℃，保持3.5min；
载气：高纯度氦气(99.999％)。
作为一种更优选的实施方式，所述气相色谱条件为：
进样口温度：240℃；流速：1.0mL/min；
分流模式：分流比为5：1；
程序升温：起始温度70℃，保持4min，以3℃/min升至100℃，保持1min，再以10℃/min升至240℃，保持3.5min；
载气：高纯度氦气(99.999％)。
本申请人发现当采用程序升温：起始温度70℃，保持4min，以2-4℃/min升至100℃，保持1min，再以8-12℃/min升至240℃，保持3.5min，能提高检测方法的灵敏度。猜测原因可能是由于，选用合适的程序升温，有利于提高待测样品的分离速度和分离度，减少杂质在检测器中的扩散，抑制了杂质峰的干扰，使其得到尖锐的色谱峰，且在合适的分流比条件下，可有效避免色谱柱过载的现象，抑制了拖尾峰的产生，使得分离效果进一步改善，从而提高了检测方法的灵敏度。
本申请人还发现，当所述色谱柱的固定相组成包括氰丙基苯和甲基聚硅氧烷，特别是氰丙基苯基5-7％、甲基聚硅氧烷93-95％时，还能进一步提高检测方法的准确度、重复性、定量限。猜测原因是：氰丙基苯基接枝聚硅氧烷，侧链苯环较为分散，产生离域共轭大π键，通过严格控制升温速率，使得固定相与待测组分之间产生不同的诱导偶极力和色散力，从而起到了很好的分离效果，特别是 N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸与二乙基亚硝胺之间的分离，从而能够更准确的进行检测。
作为一种优选的实施方式，所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量：40-60eV；灯丝发射电流：60-80μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；
所述质谱检测中：定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺：m/z＝74，二乙基亚硝胺：m/z＝102。
作为一种更优选的实施方式，所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量：50eV；灯丝发射电流：70μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺： m/z＝74，二乙基亚硝胺：m/z＝102；溶剂延迟：4min。
本申请中发明人采用电轰击离子源(EI)，利用一定能量的电子直接作用于样品分子，使其电离，且效率高，有助于质谱仪获得高灵敏度和高分辨率。通过离子源温度、四级杆温度、传输线温度等参数通过相互协同作用，一方面提高了设备的信噪比，减少了噪声的影响，使得信号具有较高的稳定性；另一方面，提高了离子化效率，且在合适的质荷比条件下，使得定量离子受到的干扰最小，能够更加准确地进行定性定量分析。
特别是，本申请人还发现，当电子能量：50eV；灯丝发射电流：60-80μA时，能够进一步提高检测方法的准确度，猜测是因为：灯丝产生的电子通过电离室两侧的狭缝进入电离室，在电离室内与待测物质发生碰撞，当电子能量为50eV；灯丝发射电流为60-80μA时，能够获得信号强度好的特征碎片离子峰，方便进行特征峰和目标化合物的匹配。
当使用70eV的电离能，由于大于待测组分中部分有机化合物的电离电位，会使很多的分子离子进一步裂解，形成广义的碎片离子，各种物质的分子离子和碎片离子存在重叠现象，导致谱图解析困难。
通过检索NIST 2011在线质谱数据库，核对质谱匹配度并参考相关文献资料，找出二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺的特征峰，采用峰面积归一法计算其各自的相对含量。
作为一种优选的实施方式，所述检测方法还包括：配制未知杂质的系列标准溶液，用于所述未知杂质的定量。
所述标准溶液可以是内标溶液、也可以是外标溶液。
本申请中，所述二乙基亚硝胺、N-甲基-N-亚硝基甲胺系列标准溶液的配制方法为：
取二乙基亚硝胺、N-甲基-N-亚硝基甲胺，用溶剂(N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)溶解稀释至100mL，摇匀，得到二乙基亚硝胺和N-甲基 -N-亚硝基甲胺浓度均为100μg/mL的混合标准储备溶液。
用溶剂(N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)将混合标准储备溶液稀释成0.05、0.1、0.2、0.3、0.4μg/mL系列浓度的标准曲线。
所述二乙基亚硝胺简称NDEA，所述N-甲基-N-亚硝基甲胺简称NDMA。
下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售得到的。
实施例
实施例1
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1.将缬沙坦粉碎，用200目筛筛出粉料；
S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.9mL溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺。
其中，步骤S2中，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶剂，所述N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3。
所述HS测试条件为：顶空加热箱温度：140℃；定量环温度：150℃；传输线温度：150℃；平衡温度：75℃；进样时间：1.0min；平衡保持时间：15min；填充压力：15psi。
所述气相色谱中固定相为：氰丙基苯基6％、甲基聚硅氧烷94％，规格为： DB-624(30m×250μm×1.4μm)。
所述气相色谱条件为：
进样口温度：240℃；流速：1.0mL/min；
分流模式：分流比为5：1；
程序升温：起始温度70℃，保持4min，以3℃/min升至100℃，保持1min，再以10℃/min升至240℃，保持3.5min；
载气：高纯度氦气(99.999％)。
所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量： 50eV；灯丝发射电流：70μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺：m/z＝74，二乙基亚硝胺： m/z＝102；溶剂延迟：4min。
配制所述二乙基亚硝胺、N-甲基-N-亚硝基甲胺系列标准溶液进行定量分析，所述二乙基亚硝胺、N-甲基-N-亚硝基甲胺系列标准溶液的配制方法为：
取二乙基亚硝胺、N-甲基-N-亚硝基甲胺各10.0mg，用溶剂(N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)溶解稀释至100mL，摇匀，作为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺的混合标准储备溶液，浓度为100μg/mL。
用溶剂(N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)将混合标准储备溶液稀释成0.05、0.1、0.2、0.3、0.4μg/mL系列浓度的标准曲线。
实施例2
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1.将缬沙坦粉碎，用230目筛筛出粉料；
S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.6mL溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺。
其中，步骤S2中，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶剂，所述N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3。
所述HS测试条件、气相色谱条件同实施例1。
所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量： 50eV；灯丝发射电流：60μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺：m/z＝74，二乙基亚硝胺： m/z＝102；溶剂延迟：4min。
实施例3
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1.将缬沙坦粉碎，用200目筛筛出粉料；
S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入1.2mL溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺。
其中，步骤S2中，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶剂，所述N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3。
所述HS测试条件、气相色谱条件同实施例1。
所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量： 50eV；灯丝发射电流：80μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺：m/z＝74，二乙基亚硝胺： m/z＝102；溶剂延迟：4min。
实施例4
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1.将缬沙坦粉碎，用200目筛筛出粉料；
S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.9mL溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺。
其中，步骤S2中，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶剂，所述N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：6。
所述HS测试条件、气相色谱条件、质谱测试条件同实施例1。
实施例5
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1.将缬沙坦粉碎，用200目筛筛出粉料；
S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.9mL溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺。
其中，步骤S2中，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶剂，所述N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：0.5。
所述HS测试条件、气相色谱条件、质谱测试条件同实施例1。
实施例6
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，具体步骤同实施例1，不同点在于，所述HS测试条件为：顶空加热箱温度：140℃；定量环温度：150℃；传输线温度：150℃；平衡温度：50℃；进样时间：1.0min；平衡保持时间：15min；填充压力：15psi。
实施例7
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，具体步骤同实施例1，不同点在于，所述气相色谱中固定相为：氰丙基苯基14％、甲基聚硅氧烷86％，购买于，济南赛畅科学仪器有限公司，货号053164。
实施例8
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，具体步骤同实施例1，不同点在于，所述气相色谱中固定相为：氰丙基25％-苯基25％-甲基聚硅氧烷50％，型号CP-Sil 43CB、品牌安捷伦。
实施例9
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，具体步骤同实施例1，不同点在于，所述气相色谱条件为：
进样口温度：240℃；流速：1.0mL/min；
分流模式：分流比为5：1；
程序升温：起始温度70℃，保持4min，以8℃/min升至100℃，保持1min，再以10℃/min升至240℃，保持3.5min。
实施例10
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，具体步骤同实施例1，不同点在于，所述气相色谱条件为：
进样口温度：240℃；流速：1.0mL/min；
分流模式：分流比为5：1；
程序升温：起始温度70℃，保持4min，以1℃/min升至100℃，保持1min，再以10℃/min升至240℃，保持3.5min。
实施例11
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，具体步骤同实施例1，不同点在于，所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量： 70eV；灯丝发射电流：20μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺：m/z＝74，二乙基亚硝胺： m/z＝102；溶剂延迟：4min。
实施例12
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，具体步骤同实施例1，不同点在于，所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量： 50eV；灯丝发射电流：20μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺：m/z＝74，二乙基亚硝胺： m/z＝102；溶剂延迟：4min。
实施例13
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，具体步骤同实施例1，不同点在于，所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量： 50eV；灯丝发射电流：100μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺：m/z＝74，二乙基亚硝胺： m/z＝102；溶剂延迟：4min。
实施例14
一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，包括以下步骤：
S1.将缬沙坦粉碎，用200目筛筛出粉料；
S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.9mL溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺。
其中，步骤S2中，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯的混合溶剂，所述N,N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯的体积比为1：3。
所述HS测试条件、气相色谱条件、质谱测试条件同实施例1。
性能测试
对实施例所述的检测方法进行方法学验证；
所述TIC谱图中：二乙基亚硝胺出峰位置为12.8、N-甲基-N-亚硝基甲胺出峰位置为9.8。
实施例1-3、6-14的相关溶液配制如下：
(1)配制空白对照溶液
量取2ml溶剂(N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)置所述顶空瓶中，作为所述空白对照溶液；
(2)配制样品母液
将缬沙坦粉碎，用200目筛筛出粉料；将所得的粉料0.3g中，加入0.9mL 溶剂(N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)。
(3)配制样品溶液
取样品母液2mL于10mL容量瓶中，用溶剂(N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)定容。
(4)配制准确度溶液
取样品母液2mL于10mL容量瓶中，加入混合标准储备溶液20μL，用溶剂 (N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)定容。同法平行制备共6份准确度溶液。二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺加标浓度为0.2μg/mL。
(5)配制定量限溶液
取样品母液2mL于10mL容量瓶中，加入混合标准储备溶液10μL，用溶剂 (N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)定容。同法平行制备共6份定量限溶液。二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺加标浓度为0.1μg/mL。
(6)配制重复性溶液
取样品母液2mL于10mL容量瓶中，加入混合标准储备溶液20μL，用溶剂 (N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)定容。同法平行制备共6份重复性溶液。二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺加标浓度为0.2μg/mL。
(7)混合标准储备溶液
配制所述二乙基亚硝胺、N-甲基-N-亚硝基甲胺系列标准溶液进行定量分析，所述二乙基亚硝胺、N-甲基-N-亚硝基甲胺系列标准溶液的配制方法为：
取二乙基亚硝胺、N-甲基-N-亚硝基甲胺各10.0mg，用溶剂(N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：3)溶解稀释至100mL，摇匀，作为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺的混合标准储备溶液，浓度为100μg/mL。
实施例4、5的相关溶液配制同上，不同点在于：实施例4中的溶剂为N,N- 二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：6的混合溶剂，实施例5中的溶剂为N,N- 二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：0.5的混合溶剂。
测试结果见下表。
表1实施例1标准溶液线性相关性
Figure RE-GDA0002497696000000131
表2各实施例准确度、重复性、定量限浓度检测
Figure RE-GDA0002497696000000132
Figure RE-GDA0002497696000000141
实施例12没有出现明显的质谱定性峰，实施例11、13的基线不规则漂移，影响定性。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对发明作其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或更改为等同变化的等效实施例，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改，等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将缬沙坦粉碎，用200～230目筛筛出粉料；
S2.取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.6-1.2mL包括N,N-二甲基甲酰胺、异丙醇、水至少一种组分的溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测，
其中，所述未知杂质为二乙基亚硝胺和N-甲基-N-亚硝基甲胺。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S2包括：取步骤S1所得的粉料0.3g，加入0.6-1.2mL包括N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的混合溶剂，放入20mL顶空瓶中密封，用HS-GC/MS进行检测。
3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述N,N-二甲基甲酰胺和异丙醇的体积比为1：(2-4)。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述HS测试条件为：顶空加热箱温度：140℃；定量环温度：150℃；传输线温度：150℃；平衡温度：70-80℃；进样时间：1.0min；平衡保持时间：15min；填充压力：15psi。
5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述HS测试条件为：顶空加热箱温度：140℃；定量环温度：150℃；传输线温度：150℃；平衡温度：75℃；进样时间：1.0min；平衡保持时间：15min；填充压力：15psi。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述气相色谱中固定相为：氰丙基苯基5-7％、甲基聚硅氧烷93-95％。
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述气相色谱中固定相为：氰丙基苯基6％、甲基聚硅氧烷94％。
8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述气相色谱条件为：
进样口温度：240℃；流速：0.8-1.2mL/min；
分流模式：分流比为5：1；
程序升温：起始温度70℃，保持4min，以2-4℃/min升至100℃，保持1min，再以8-12℃/min升至240℃，保持3.5min。
9.如权利要求1-8任一项所述的检测方法，其特征在于，所述质谱的测试条件为：离子源类型：EI；扫描模式：MRM；电子能量：40-60eV；灯丝发射电流：60-80μA；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃。
10.如权利要求1-8任一项所述的检测方法，其特征在于，所述质谱检测中：定量离子：N-甲基-N-亚硝基甲胺：m/z＝74，二乙基亚硝胺：m/z＝102。
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