CN111060616A - 一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法 - Google Patents

一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111060616A
CN111060616A CN201911299172.2A CN201911299172A CN111060616A CN 111060616 A CN111060616 A CN 111060616A CN 201911299172 A CN201911299172 A CN 201911299172A CN 111060616 A CN111060616 A CN 111060616A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mobile phase
valsartan
impurities
detecting
nitrosamine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201911299172.2A
Other languages
English (en)
Inventor
杨佳佳
秦秋明
贾梦虹
李美玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Microspectrum Chemical Technology Service Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Microspectrum Chemical Technology Service Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Microspectrum Chemical Technology Service Co Ltd filed Critical Shanghai Microspectrum Chemical Technology Service Co Ltd
Priority to CN201911299172.2A priority Critical patent/CN111060616A/zh
Publication of CN111060616A publication Critical patent/CN111060616A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
    • G01N30/724—Nebulising, aerosol formation or ionisation
    • G01N30/7266—Nebulising, aerosol formation or ionisation by electric field, e.g. electrospray
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明涉及化学检测分析技术领域，具体涉及一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法。一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品处理：将样品加入溶剂后超声、离心，取上清液，得到待测溶液；(2)溶液配制：配置标准溶液；(3)检测：采用液相色谱和质谱对步骤(1)、(2)中所得溶液进行检测分析。本发明提供的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法准确度高、重现性好、灵敏度高。

Description

一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法
技术领域
本发明涉及化学检测分析技术领域，具体涉及一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法。
背景技术
亚硝胺是强致癌物，是最重要的化学致癌物之一，是四大食品污染物之一。食物、化妆品、啤酒、香烟中都含有亚硝胺。
目前，亚硝胺类杂质的检测方法主要为气相色谱质谱法、液相色谱法质谱法、气相色谱热能分析仪法，主要应用于食品、饮用水和化妆品行业，国内外对药品中亚硝胺类杂质检测方法的研究报道较少。而且，现有的检测方法中，往往难以同时满足重复性、准确度、线性以及灵敏度等方面的要求。
因此，本发明致力于提供一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，该方法具有准确度高、重复性好、灵敏度高等优点。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，包括以下步骤：
(1)样品处理：将样品加入溶剂后超声、离心，取上清液，得到待测溶液；
(2)溶液配制：配置标准溶液；
(3)检测：采用液相色谱和质谱对步骤(1)、(2)中所得溶液进行检测分析。
作为一种优选的技术方案，步骤(1)中，所述溶剂选自二氯甲烷、甲醇、乙腈、乙酸乙酯、乙醇、正己烷中的一种或多种。
作为一种优选的技术方案，所述溶剂中，二氯甲烷、甲醇的体积比为(1-3)： 1。
作为一种优选的技术方案，步骤(1)中，所述样品的平均粒径为200-230 目。
作为一种优选的技术方案，步骤(3)中，所述液相色谱的流动相A相为乙酸水溶液。
作为一种优选的技术方案，步骤(3)中，所述液相色谱的流动相B相为甲酸和甲醇的混合物。
作为一种优选的技术方案，步骤(3)中，所述液相色谱的梯度洗脱条件为：
0-3min：流动相A为98％→30％，流动相B为2％→70％；
3-3.2min：流动相A为30％→28％，流动相B为70％→72％；
3.2-4min：流动相A为28％→28％，流动相B为72％→72％；
4-4.2min：流动相A为28％→0％，流动相B为72％→100％；
4.2-5.5min：流动相A为0％→0％，流动相B为100％→100％；
5.5-5.6min：流动相A为0％→98％，流动相B为100％→2％；
5.6-8min：流动相A为98％→98％，流动相B为2％→2％。
作为一种优选的技术方案，步骤(3)中，所述质谱的离子源类型为电轰击离子源。
作为一种优选的技术方案，所述质谱的电轰击离子源参数如下：电子能量： 50eV，灯丝发射电流：50-80μA。
作为一种优选的技术方案，所述质谱的分析采用MRM模式。
有益效果：本发明提供的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，采用合适的溶剂对缬沙坦制剂进行处理，提高了检测方法的准确度；通过对液相色谱条件、质谱参数等进行精心设置，提高了检测的准确度以及灵敏度；同时，由于样品的特殊处理、液相色谱条件的设置、质谱参数的设置之间相互协同，本发明提供的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法准确度高、重复性好、灵敏度高。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明提供技术方案中的技术特征作进一步清楚、完整的描述，并非对其保护范围的限制。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
本发明中的词语“优选的”、“更优选的”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本发明的范围之外。
本发明提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，包括以下步骤：
(1)样品处理：将样品加入溶剂后超声、离心，取上清液，得到待测溶液；
(2)溶液配制：配置标准溶液；
(3)检测：采用液相色谱和质谱对步骤(1)、(2)中所得溶液进行检测分析。
本发明所述缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质为N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N- 亚硝基二乙胺(NDEA)。
所述N-亚硝基二甲胺的CAS号为62-75-9。
所述N-亚硝基二乙胺的CAS号为55-18-5。
由于缬沙坦制剂中除了含有主要活性成分缬沙坦之外，还含有微晶纤维素、交联聚维酮、聚维酮、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁、明胶、十二烷基硫酸钠、氧化铁和二氧化钛等多种辅助成分，因此在提取过程中，各组分之间通过物理、化学等多种机理共同作用，使得目标成分的溶出和提取受到干扰，从而影响了检测方法的准确度。为了对缬沙坦制剂中的NDMA和NDEA进行更准确地识别和分析，需要对缬沙坦制剂进行有效预处理。
样品处理
本发明所述样品处理包括以下步骤：将样品加入溶剂后超声、离心，取上清液，得到待测溶液。
所述样品为缬沙坦制剂，本发明对所述样品没有特别的限制。
在一种实施方式中，所述溶剂选自二氯甲烷、甲醇、乙腈、乙酸乙酯、乙醇、正己烷中的一种或多种。
在一种优选的实施方式中，所述溶剂为二氯甲烷、甲醇。
在一种实施方式中，所述二氯甲烷、甲醇的体积比为(1-3)：1。
在一种优选的实施方式中，所述二氯甲烷、甲醇的体积比为2：1。
在一种实施方式中，所述样品的平均粒径为200-230目。
在一种优选的实施方式中，所述样品的平均粒径为220目。
在一种实施方式中，所述超声时间为10-20min。
在一种优选的实施方式中，所述超声时间为15min。
在一种实施方式中，所述超声温度为37-40℃。
在一种优选的实施方式中，所述超声温度为38℃。
在一种实施方式中，所述样品与溶剂的质量体积比为(0.8-1.2)：1mg/mL。
在一种优选的实施方式中，所述样品与溶剂的质量体积比为1：1mg/mL。
本申请中发明人发现，所述二氯甲烷和甲醇的比例为(1-3)：1，超声温度为37-40℃时，能够提高检测方法的准确度。可能是由于二氯甲烷和甲醇形成的体系，在37-40℃下，形成许多空穴，这些空穴迅速胀大和闭合，闭合时产生高达几千大气压的瞬间压力，使液体微粒间发生猛烈的撞击作用。溶剂分子克服周围分子间的引力进入药物内部，同时削弱其他辅助成分(例如明胶)与NDMA、 NDEA的相互作用力，提高了NDMA和NDEA的提取效率，使得检测方法的准确度得以提高。
此外，申请人发现，当粉料粒径或超声时间控制不当时，反而会降低检测方法的准确度，其原因是由于一方面，当粉料粒径过大时，由于破坏程度或分散能力不佳，使得目标成分的溶出和提取减少；另一方面，当粉料粒径过小时，由于体系中大分子链重新发生缠结，相互作用增强，也会造成目标成分的提取率降低。
溶液配制
外标工作液
在一种优选的实施方式中，所述外标工作液的配制包括以下步骤：用甲醇分别将N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)配制成外标工作液，其浓度均为200μg/mL。
标准溶液
在一种优选的实施方式中，所述标准溶液的配制包括以下步骤：将上述所得外标工作液等体积混合，并用甲醇向下依次稀释两倍，制得系列浓度梯度的标准溶液，分别标记为C1-C10，具体见表1。
表1标准溶液中各目标化合物的浓度(ng/mL)
Figure RE-GDA0002398386200000041
Figure RE-GDA0002398386200000051
标准溶液储备溶液，指的是具有准确已知浓度的试剂溶液，配制标准储备溶液的目的是为了便于定量分析，用标准溶液绘制工作曲线或作计算标准，从而对目标化合物进行定量分析。
检测
液相色谱条件
在一种优选的实施方式中，所述液相色谱柱的规格为ACQUITY UPLC T3 (1.8μm×2.1mm×50mm)。
在一种优选的实施方式中，所述液相色谱的流动相A相为乙酸水溶液。
在一种优选的实施方式中，所述乙酸水溶液中乙酸所占的体积百分数为 0.05％-0.2％。
在一种更优选的实施方式中，所述乙酸水溶液中乙酸所占的体积百分数为0.1％。
在一种优选的实施方式中，所述液相色谱的流动相B相为甲酸和甲醇的混合物。
在一种优选的实施方式中，所述甲酸和甲醇的混合物中甲酸所占的体积百分数为0.05％-0.2％。
在一种更优选的实施方式中，所述甲酸和甲醇的混合物中甲酸所占的体积百分数为0.1％。
在一种优选的实施方式中，所述液相色谱的梯度洗脱条件为：
0-3min：流动相A为98％→30％，流动相B为2％→70％；
3-3.2min：流动相A为30％→28％，流动相B为70％→72％；
3.2-4min：流动相A为28％→28％，流动相B为72％→72％；
4-4.2min：流动相A为28％→0％，流动相B为72％→100％；
4.2-5.5min：流动相A为0％→0％，流动相B为100％→100％；
5.5-5.6min：流动相A为0％→98％，流动相B为100％→2％；
5.6-8min：流动相A为98％→98％，流动相B为2％→2％。
本申请选用ACQUITY UPLC T3(1.8μm×2.1mm×50mm)色谱柱，其填充颗粒为高强度硅胶颗粒，能够与100％水性流动相兼容，可有效保留和分离极性水溶性较好的有机分子，从而提高了检测方法的准确度。
然而，发明人意料不到地发现，选用流动相A为0.05％-0.2％乙酸/水，流动相B为0.05％-0.2％甲酸/甲醇；且控制不同时间段A和B的体积比，还能提高检测方法的灵敏度。猜测原因可能是由于，选用0.05％-0.2％乙酸/水和0.05％-0.2％甲酸/甲醇为流动相时，一方面选用合适的流动相有助于分离更多的干扰物质，得到目标化合物，使得回收率提高，进而提高了检测方法的准确度；另一方面，亚硝胺易与流动相中的甲酸、乙酸等形成[M+H]+正离子，合适的酸度能进一步促进离子化；其次，特定的流动相配合色谱柱，在一定的梯度条件下，可大大提高目标化合物与干扰物质的分离速度以及分离度，特别是能够很好降低NMBA 对NDMA的影响，从而提高了检测方法的灵敏度。
质谱条件
在一种优选的实施方式中，所述质谱的离子源类型为电轰击离子源。
在一种优选的实施方式中，所述质谱的电轰击离子源参数如下：电子能量： 50eV，灯丝发射电流：50-80μA。
在一种更优选的实施方式中，所述质谱的电轰击离子源参数如下：电子能量：50eV，灯丝发射电流：60μA。
在一种优选的实施方式中，所述质谱的分析采用MRM模式。
在一种优选的实施方式种，所述质谱的电轰击离子源参数还包括：离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；定量离子：NDMA：m/z＝74， NDEA：m/z＝102；溶剂延迟：4min。
本申请中发明人采用电轰击离子源(EI)，利用一定能量的电子直接作用于样品分子，使其电离，且效率高，有助于质谱仪获得高灵敏度和高分辨率。通过离子源温度、四级杆温度、传输线温度等参数通过相互协同作用，一方面提高了设备的信噪比，减少了噪声的影响，使得信号具有较高的稳定性；另一方面，提高了离子化效率，且在合适的质荷比条件下，使得定量离子受到的干扰最小，能够更加准确地进行定性定量分析。
本申请人发现，当电子能量：50eV；灯丝发射电流：50-80μA时，能够进一步提高检测方法的准确度和重复性，猜测是因为：灯丝产生的电子通过电离室两侧的狭缝进入电离室，在电离室内与待测物质发生碰撞，当电子能量为50eV；灯丝发射电流为50-80μA时，能够获得信号强度好的特征碎片离子峰，方便进行特征峰和目标化合物的匹配。而当使用70eV的电离能，由于大于待测组分中部分有机化合物的电离电位，会使很多的分子离子进一步裂解，形成广义的碎片离子，各种物质的分子离子和碎片离子存在重叠现象，导致谱图解析困难。
在测试过程中，由于会受到复杂基质效应的影响，使得离子信号受到抑制作用，往往会由于杂质的干扰而得出假阳性的结果，从而会降低检测方法的准确度。本申请中发明人发现，色谱流动相中的H+、-OH-、-COOH-以及通过溶剂引入的 Cl-等会对待测物的离子化产生一定的影响，对于不同体系的流动相，由于洗脱方式和洗脱条件的不同，使得待测物的碎裂途径以及各个碎片离子的丰度之间存在一定的差异，从而会对目标化合物的检测和分析造成一定的影响。本申请中发明人通过精心设计流动相的物质以及洗脱条件，再加上质谱参数的设定，削弱了基质效应，可有效排除假阳性的测试结果，进一步提高了检测方法的准确度。
在下文中，通过实施例对本发明进行更详细地描述，但应理解，这些实施例仅仅是示例的而非限制性的。另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售的。
实施例
实施例1
本发明的实施例1提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，包括以下步骤：
(1)样品处理：将样品加入溶剂后超声、离心，取上清液，得到待测溶液；
(2)溶液配制：配置标准溶液；
(3)检测：采用液相色谱和质谱对步骤(1)、(2)中所得溶液进行检测分析。
所述缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质为N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)。
步骤(1)中，所述溶剂为二氯甲烷、甲醇。
所述二氯甲烷、甲醇的体积比为2：1。
步骤(1)中，所述样品的平均粒径为220目。
步骤(1)中，所述超声时间为15min。
步骤(1)中，所述超声温度为38℃。
步骤(1)中，所述样品与溶剂的质量体积比为1：1mg/mL。
步骤(2)中，所述外标工作液的配制包括以下步骤：用甲醇分别将N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)配制成外标工作液，其浓度均为200μg/mL。
步骤(2)中，所述标准溶液的配制包括以下步骤：将上述所得外标工作液等体积混合，并用甲醇向下依次稀释两倍，制得系列浓度梯度的标准溶液，分别标记为C1-C10，具体见表1。
表1标准溶液中各目标化合物的浓度(ng/mL)
目标化合物 NDMA NDEA
C1 200000 200000
C2 100000 100000
C3 50000 50000
C4 25000 25000
C5 12500 12500
C6 6250 6250
C7 3125 3125
C8 1562.5 1562.5
C9 781.25 781.25
C10 390.625 390.625
步骤(3)中，所述液相色谱的条件为：
a)液相色谱柱的的规格为ACQUITY UPLC T3(1.8μm×2.1mm×50mm)；
b)流动相A相为乙酸水溶液，乙酸水溶液中乙酸所占的体积百分数为0.1％；
c)流动相B相为甲酸和甲醇的混合物，甲酸和甲醇的混合物中甲酸所占的体积百分数为0.1％；
d)梯度洗脱条件为：
0-3min：流动相A为98％→30％，流动相B为2％→70％；
3-3.2min：流动相A为30％→28％，流动相B为70％→72％；
3.2-4min：流动相A为28％→28％，流动相B为72％→72％；
4-4.2min：流动相A为28％→0％，流动相B为72％→100％；
4.2-5.5min：流动相A为0％→0％，流动相B为100％→100％；
5.5-5.6min：流动相A为0％→98％，流动相B为100％→2％；
5.6-8min：流动相A为98％→98％，流动相B为2％→2％。
步骤(3)中所述质谱的条件为：离子源类型为电轰击离子源，电子能量： 50eV，灯丝发射电流：60μA，质谱的分析采用MRM模式；离子源温度：220℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：230℃；定量离子：NDMA：m/z＝74，NDEA： m/z＝102；溶剂延迟：4min。
实施例2
本发明的实施例2提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述溶剂为二氯甲烷。
实施例3
本发明的实施例3提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述溶剂为甲醇。
实施例4
本发明的实施例4提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述溶剂为二氯甲烷和乙腈的混合物，二氯甲烷、乙腈的体积比为2：1。
实施例5
本发明的实施例5提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述溶剂为甲醇和乙酸乙酯的混合物，乙酸乙酯、甲醇的体积比为2：1。
实施例6
本发明的实施例6提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述溶剂为乙腈和乙酸乙酯的混合物，乙腈、乙酸乙酯的体积比为2：1。
实施例7
本发明的实施例7提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述二氯甲烷、甲醇的体积比为0.5：1。
实施例8
本发明的实施例8提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述二氯甲烷、甲醇的体积比为5：1。
实施例9
本发明的实施例9提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述超声温度为30℃。
实施例10
本发明的实施例10提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述超声温度为45℃。
实施例11
本发明的实施例11提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述样品的平均粒径为150目。
实施例12
本发明的实施例12提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(1)中，所述样品的平均粒径为300目。
实施例13
本发明的实施例13提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(3)中，所述流动相A相为乙酸水溶液，乙酸水溶液中乙酸所占的体积百分数为0.5％。
实施例14
本发明的实施例14提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(3)中，所述流动相A相为乙酸水溶液，乙酸水溶液中乙酸所占的体积百分数为0.02％。
实施例15
本发明的实施例15提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(3)中，所述流动相B相为甲酸和甲醇的混合物，甲酸和甲醇的混合物中甲酸所占的体积百分数为0.5％。
实施例16
本发明的实施例16提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(3)中，所述流动相B相为甲酸和甲醇的混合物，甲酸和甲醇的混合物中甲酸所占的体积百分数为0.02％。
实施例17
本发明的实施例17提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(3)中，所述液相色谱的梯度洗脱条件为：
0-3.2min：流动相A为98％→28％，流动相B为2％→72％；
3.2-4.2min：流动相A为28％→0％，流动相B为72％→100％；
4.2-5.6min：流动相A为0％→98％，流动相B为100％→2％；
5.6-8min：流动相A为98％→98％，流动相B为2％→2％。
实施例18
本发明的实施例18提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(3)中，所述质谱的离子源类型为电轰击离子源，电子能量为70eV。
实施例19
本发明的实施例19提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(3)中，所述质谱的离子源类型为电轰击离子源，电子能量为30eV。
实施例20
本发明的实施例20提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(3)中，所述质谱的离子源类型为电轰击离子源，电子能量为50eV，灯丝发射电流为40μA。
实施例21
本发明的实施例21提供了一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，步骤(3)中，所述质谱的离子源类型为电轰击离子源，电子能量为50eV，灯丝发射电流为90μA。
性能评估
1、定量限检测
精密称定NDMA和NDEA各适量，置于同一量瓶中，用甲醇溶解并稀释，分别按照实施例1-17所述的检测方法，以大于10倍信噪比的浓度为定量限，其中回收率测定三次取平均值。结果见表2。
表2实施例1-17的定量限检测结果
Figure RE-GDA0002398386200000121
Figure RE-GDA0002398386200000131
2、准确度检测
精密称定NDMA和NDEA各适量，置于同一量瓶中，用甲醇溶解并稀释成 NDMA和NDEA浓度各为0.1μg/ml的溶液，得到对照品溶液；取200ml待测溶液浓缩至2ml，置于10mL量瓶中，加入1ml对照品溶液后，再用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，然后分别按照实施例1-17所述的检测方法进行检测分析，计算回收率和RSD，其中回收率测定六次取平均值。结果见表3。
表3实施例1-17的准确度检测结果
Figure RE-GDA0002398386200000132
3、线性检测
按照实施例1所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，取标准储备溶液进样分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算线性方程和相关系数。结果见表4。
表4实施例1的线性检测结果
化合物 线性方程 相关系数
NDMA y＝6.49*10<sup>4</sup>x+24.68 R＝0.999
NDEA y＝2.07*10<sup>5</sup>x+42.23 R＝0.999
实施例1所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，能够获得信号强度较好的特征碎片离子峰，噪音比较小，基线较准；而实施例19、20所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，没有出现明显的质谱峰；实施例 18、21所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，噪音比较大，基线漂移。
由上述结果可知，本发明提供的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，NDMA和NDEA的最低定量浓度均为0.01μg/ml，回收率为99-102％，标准相对偏差不超过4％，相关系数大于0.99。该方法准确度高，重现性好，灵敏度高。
前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。

Claims (10)

1.一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样品处理：将样品加入溶剂后超声、离心，取上清液，得到待测溶液；
(2)溶液配制：配置标准溶液；
(3)检测：采用液相色谱和质谱对步骤(1)、(2)中所得溶液进行检测分析。
2.如权利要求1所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述溶剂选自二氯甲烷、甲醇、乙腈、乙酸乙酯、乙醇、正己烷中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，所述溶剂中，二氯甲烷、甲醇的体积比为(1-3)：1。
4.如权利要求1所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述样品的平均粒径为200-230目。
5.如权利要求1所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述液相色谱的流动相A相为乙酸水溶液。
6.如权利要求1所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述液相色谱的流动相B相为甲酸和甲醇的混合物。
7.如权利要求1所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述液相色谱的梯度洗脱条件为：
0-3min：流动相A为98％→30％，流动相B为2％→70％；
3-3.2min：流动相A为30％→28％，流动相B为70％→72％；
3.2-4min：流动相A为28％→28％，流动相B为72％→72％；
4-4.2min：流动相A为28％→0％，流动相B为72％→100％；
4.2-5.5min：流动相A为0％→0％，流动相B为100％→100％；
5.5-5.6min：流动相A为0％→98％，流动相B为100％→2％；
5.6-8min：流动相A为98％→98％，流动相B为2％→2％。
8.如权利要求1所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述质谱的离子源类型为电轰击离子源。
9.如权利要求8所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，所述质谱的电轰击离子源参数如下：电子能量：50eV，灯丝发射电流：50-80μA。
10.如权利要求1所述的用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法，其特征在于，所述质谱的分析采用MRM模式。
CN201911299172.2A 2019-12-17 2019-12-17 一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法 Withdrawn CN111060616A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911299172.2A CN111060616A (zh) 2019-12-17 2019-12-17 一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911299172.2A CN111060616A (zh) 2019-12-17 2019-12-17 一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111060616A true CN111060616A (zh) 2020-04-24

Family

ID=70301211

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911299172.2A Withdrawn CN111060616A (zh) 2019-12-17 2019-12-17 一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111060616A (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111537634A (zh) * 2020-04-30 2020-08-14 湖南师范大学 一种替丁类药物中ndma含量的检测方法
CN112710763A (zh) * 2021-01-06 2021-04-27 湖南威特制药股份有限公司 一种hplc法检测尼扎替丁中n-亚硝基二甲胺的方法
CN113009005A (zh) * 2020-12-18 2021-06-22 珠海润都制药股份有限公司 一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法
CN113624894A (zh) * 2021-10-13 2021-11-09 广州国标检验检测有限公司 一种比阿培南中亚硝胺类杂质的检测方法
CN114397374A (zh) * 2021-12-09 2022-04-26 石家庄四药有限公司 一种恩他卡朋原料或其制剂中n-亚硝基二甲胺与n-亚硝基二乙胺的检测方法
CN114487142A (zh) * 2020-11-11 2022-05-13 江苏天士力帝益药业有限公司 替莫唑胺中n-亚硝基二甲胺和n-亚硝基二乙胺的残留量测定

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006027231A1 (en) * 2004-09-07 2006-03-16 Ingenium Pharmaceuticals Ag Methods for the production of improved live stocks and disease models for therapeutic research
CN109761924A (zh) * 2019-02-26 2019-05-17 安徽美诺华药物化学有限公司 一种改进的缬沙坦反应混合液的后处理方法
CN110274977A (zh) * 2019-08-06 2019-09-24 南通市产品质量监督检验所 一种食品中n-亚硝胺类化合物的检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006027231A1 (en) * 2004-09-07 2006-03-16 Ingenium Pharmaceuticals Ag Methods for the production of improved live stocks and disease models for therapeutic research
CN109761924A (zh) * 2019-02-26 2019-05-17 安徽美诺华药物化学有限公司 一种改进的缬沙坦反应混合液的后处理方法
CN110274977A (zh) * 2019-08-06 2019-09-24 南通市产品质量监督检验所 一种食品中n-亚硝胺类化合物的检测方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
OLIVER EL-ATMA等: "Method for the determination of NDMA and NDEA by LC-MS/MS in Sartan containing film coated tablets", 《WWW.EDQM.EU/SITES/DEFAULT/FILES/METHOD_FOR_THE_DETERMINATION_OF_NDMA_AND_NDEA_BY_LC-MS-MS_IN_SARTAN_CONTAINING_FILM_COATED_TABLETS.PDF》 *
OLIVER EL-ATMA等: "Method for the determination of NDMA and NDEA by LC-MS/MS in Sartans (drug substance and film coated tablets)", 《WWW.EDQM.EU/SITES/DEFAULT/FILES/METHOD_FOR_THE_DETERMINATION_OF_NDMA_AND_NDEA_BY_LC-MS-MS_IN_SARTAN_CONTAINING_FILM_COATED_TABLETS.PDF》 *
罗茜等: "超高效液相色谱串联质谱快速测定饮用水中9种N-亚硝胺的新方法", 《中国科学:化学》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111537634A (zh) * 2020-04-30 2020-08-14 湖南师范大学 一种替丁类药物中ndma含量的检测方法
CN111537634B (zh) * 2020-04-30 2022-05-27 湖南师范大学 一种替丁类药物中ndma含量的检测方法
CN114487142A (zh) * 2020-11-11 2022-05-13 江苏天士力帝益药业有限公司 替莫唑胺中n-亚硝基二甲胺和n-亚硝基二乙胺的残留量测定
CN113009005A (zh) * 2020-12-18 2021-06-22 珠海润都制药股份有限公司 一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法
CN113009005B (zh) * 2020-12-18 2022-05-10 珠海润都制药股份有限公司 一种盐酸去甲乌药碱中亚硝胺类化合物的检测方法
CN112710763A (zh) * 2021-01-06 2021-04-27 湖南威特制药股份有限公司 一种hplc法检测尼扎替丁中n-亚硝基二甲胺的方法
CN113624894A (zh) * 2021-10-13 2021-11-09 广州国标检验检测有限公司 一种比阿培南中亚硝胺类杂质的检测方法
CN114397374A (zh) * 2021-12-09 2022-04-26 石家庄四药有限公司 一种恩他卡朋原料或其制剂中n-亚硝基二甲胺与n-亚硝基二乙胺的检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111060616A (zh) 一种用于缬沙坦制剂中亚硝胺类杂质的检测方法
Rajski et al. Large pesticide multiresidue screening method by liquid chromatography-Orbitrap mass spectrometry in full scan mode applied to fruit and vegetables
Tan et al. Determination of aflatoxins in food using liquid chromatography coupled with electrospray ionization quadrupole time of flight mass spectrometry (LC-ESI-QTOF-MS/MS)
Ray et al. Molecular ions and protonated molecules observed in the atmospheric solids analysis probe analysis of steroids
del Mar Gómez-Ramos et al. The evaluation of matrix effects in pesticide multi-residue methods via matrix fingerprinting using liquid chromatography electrospray high-resolution mass spectrometry
Kuang et al. Simultaneous quantification of mycotoxins and pesticide residues in ginseng with one-step extraction using ultra-high performance liquid chromatography–electrospray ionization tandem mass spectrometry
Martínez-Villalba et al. Analysis of amprolium by hydrophilic interaction liquid chromatography–tandem mass spectrometry
ZHANG et al. Ambient ionization-paper spray ionization and its application
Oellig et al. Planar solid phase extraction clean-up and microliter-flow injection analysis–time-of-flight mass spectrometry for multi-residue screening of pesticides in food
US10809259B2 (en) Protocol for preconcentration and quantification of microcystins using LC-MS
Guo et al. Development and validation of a liquid chromatographic/tandem mass spectrometric method for determination of chlortetracycline, oxytetracycline, tetracycline, and doxycycline in animal feeds
Quan et al. Determining eight biogenic amines in surface water using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
Caixach et al. Liquid chromatography–mass spectrometry
Picó et al. Rapid and sensitive ultra-high-pressure liquid chromatography–quadrupole time-of-flight mass spectrometry for the quantification of amitraz and identification of its degradation products in fruits
CN109459484A (zh) 一种基于纳米材料的小分子样品的质谱分析方法
Qin et al. Quantitative determination of dipyridamole in human plasma by high‐performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry and its application to a pharmacokinetic study
Xu et al. Effects of chromatographic conditions and mass spectrometric parameters on the ionization and fragmentation of triterpene saponins of Ilex asprella in liquid chromatography–mass spectrometry analysis
Caban et al. The application of isotopically labeled analogues for the determination of small organic compounds by GC/MS with selected ion monitoring
Aviram et al. Determination of underivatized amino acids in microsamples of a yeast nutritional supplement by LC-MS following microwave assisted acid hydrolysis
CN108982703B (zh) 一种多酚类物质的液质联用检测方法
CN114965812B (zh) 一种同时测定畜禽肉中的15种季铵盐类消毒剂残留的方法
Amelin et al. Determination of neonicotinoid insecticides in natural waters by high-resolution time-of-flight mass spectrometry with direct electrospray ionization of samples
CN111323502A (zh) 一种用于缬沙坦制剂中未知杂质的检测方法
CN104931637A (zh) 一种生物样本中peg含量的测定方法
US10436794B1 (en) Protocol for preconcentration and quantification of microcystins using LC-MS

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20200424