CN111308064A - 一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法及在白介素6检测中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法,将抗体与荧光微球偶联得到抗体‑荧光微球偶联物,将抗体‑荧光微球偶联物再次与荧光微球偶联,得到的增强型抗体‑荧光微球偶联物作为免疫层析标记物。该方法通过将已标记好的抗体‑荧光微球偶联物再次偶联,使同一个抗体能携带更多的荧光微球,大大提升检测线上的荧光物质强度,提高试剂灵敏度。本发明还公开该方法白介素6检测中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及免疫层析技术领域,具体涉及一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法及在白介素6检测中的应用。
背景技术
免疫层析技术,也称测流免疫法(Lateral flow immunoassay),起源于上世纪80年代,是建立在层析膜上以抗原抗体特异性反应为基础的免疫检测技术,以其快捷简便、间隔低廉、灵敏度高等优势而广泛运用于并于病原体检测、食品安全测量、环境监测等方面,其中以胶体金免疫层析技术发展最为成熟,但多局限于定性或半定量检测。伴随着材料科学和生物工程技术的蓬勃发展,新型荧光层析技术已逐渐在定量检测领域站稳脚跟。在当前的荧光层析研究中,提升荧光物质标记灵敏度是提升产品性能的关键点。
当前的抗体-荧光微球偶联一般采用化学偶联,先将微球表面基团(一般是羧基)活化,加入抗体,抗体的氨基与活化后的羧基结合,固定至微球表面,再使用惰性蛋白(一般是BSA)进行将微球表面空位进行封闭。荧光层析的标记灵敏度低是普遍存在的痛点。灵敏度由捕获在检测线上的荧光物质强度所决定,而现有的抗体-荧光微球偶联技术,通常都是很多个抗体对应一个荧光微球,因此检测线在捕获抗体-荧光微球偶联物时,捕获很多抗体才能有一个荧光微球的荧光强度。
IL-6主要由巨噬细胞、T细胞、B细胞等多种细胞产生,是一种多功能的细胞因子,调节免疫应答、血细胞生成、组织损伤时的急性时相反应、炎症反应等。在心脑血管疾病、肾脏疾病、肿瘤、关节炎、创伤、感染等疾病发生时,IL-6水平增高。IL-6上升的水平与疾病的活动期、肿瘤的发展变化、排斥反应程度以及治疗效果都密切相关。因此,对病人体液中IL-6水平的检测可反映患者的病情变化。罗氏白介素6检测试剂盒参考值范围<7pg/ml,最低检出限<2pg/ml,是一个对试剂灵敏度要求很高的项目。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明公开一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法,该方法通过将已标记好的抗体-荧光微球偶联物再次偶联,使同一个抗体能携带更多的荧光微球,大大提升检测线上的荧光物质强度,提高试剂灵敏度。本发明还公开该方法白介素6检测中的应用。
本发明通过下述技术方案实现:
一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法,将抗体与荧光微球偶联得到抗体-荧光微球偶联物,将抗体-荧光微球偶联物再次与荧光微球偶联,得到的增强型抗体-荧光微球偶联物作为免疫层析标记物。
现有的抗体-荧光微球偶联技术,通常都是很多个抗体对应一个荧光微球,因此检测线在捕获抗体-荧光微球复合物时,捕获很多抗体才能有一个荧光微球的荧光强度。
本发明通过将已标记好的抗体-荧光微球复合物再次偶联,使同一个抗体能携带更多的荧光微球,大大提升检测线上的荧光物质强度,提高试剂灵敏度。
一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,标记物的制备方法如下:
(1)将抗IL-6单克隆抗体(抗IL-6单克隆抗体1)与荧光微球偶联,得到IL-6抗体-荧光微球偶联物;
(2)将IL-6抗体-荧光微球偶联物再次与荧光微球偶联,得到增强型IL-6抗体-荧光微球偶联物。
其中,步骤(1)中,IL-6抗体-荧光微球偶联物的制备方法如下:
(11)取出荧光微球放入离心管中离心,沉降、去除上清;
(12)向沉降物中加入偶联缓冲液,混匀,然后加入EDC溶液、sulfo-NHS溶液混匀、孵育;
(13)将步骤(12)的溶液离心,沉降、去除上清,再加入偶联缓冲液混匀;
(14)加入抗IL-6单克隆抗体,混匀,室温下用孵育,得到IL-6抗体-荧光微球偶联物。
进一步的,步骤(2)中,增强型IL-6抗体-荧光微球偶联物的制备方法如下:
(21)重复步骤(11)、(12),处理后的荧光微球与已经偶联孵育完成的IL-6抗体-荧光微球偶联物等比例混合,室温下孵育;
(22)孵育完毕后离心,沉降、去除上清,然后加入封闭液混匀,孵育;
(23)最后离心、沉降、去除上清,加入保存液混匀。
进一步的,白介素6检测在荧光层析检测试纸条上进行,荧光层析检测试纸条包括基板和基板上依次衔接的样品垫、标记物垫、层析膜和吸水垫,所述标记物垫为玻纤垫,所述层析膜为硝酸纤维素膜。
进一步的,所述玻纤垫经过如下处理:
将处理液喷涂于玻纤垫一侧,然后将增强型IL-6抗体-荧光微球偶联物和兔IgG-荧光微球偶联物的混合液喷涂于玻纤另一侧,37℃烘干。
进一步的,所述硝酸纤维素膜经过如下处理:将另一种抗IL-6抗体(抗IL-6单克隆抗体2),使用稀释液稀释至1mg/mL,划线于纤维素膜上一侧作为检测线;将羊抗兔IgG使用稀释液稀释至0.5mg/mL,划线于纤维素膜上作为质控线,37℃烘干24h。
本发明与现有技术相比,具有如下的优点和有益效果:
1、本发明一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法,通过将已标记好的抗体-荧光微球复合物再次偶联,使同一个抗体能携带更多的荧光微球,大大提升检测线上的荧光物质强度,提高试剂灵敏度;
2、本发明一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,将已标记好的IL-6抗体-荧光微球复合物再次偶联,得到增强型IL-6抗体-荧光微球复合物,使同一个IL-6抗体能携带更多的荧光微球,大大提升检测线上的荧光信号强度,提高试剂灵敏度和检测灵敏度。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解,构成本申请的一部分,并不构成对本发明实施例的限定。在附图中:
图2为本发明IL-6检测结果示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白,下面结合实施例和附图,对本发明作进一步的详细说明,本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明,并不作为对本发明的限定。
实施例1
一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,标记物的制备方法如下:
1.取出500ul荧光微球(1%浓度W/V,绿色荧光-激发475nm-发射525nM)放入离心管中。
2.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min,使微球沉降,去除上清。
3.加入500ul偶联缓冲液(50mM MES ph6.0),混匀。
4.加入20ul EDC溶液(200mM),20ul sulfo-NHS溶液(200mM),混匀,并在转盘混匀器上孵育30min。
5.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min,使微球沉降,去除上清。
6.加入500ul偶联缓冲液(50mM MES ph6.0),混匀后加入0.1mg抗IL-6单克隆抗体,混匀,室温下用转盘混匀器孵育1h。
7.重复步骤1-4.
8.将用EDC、NHS处理后的荧光微球与已经偶联孵育完成的荧光微球等比例混合,室温下用转盘混匀器孵育1h。
9.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min,使微球沉降,去除上清。
10.加入封闭液(1%BSA水溶液),混匀,室温下用转盘混匀器孵育1h。
11.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min,使微球沉降,去除上清。
12.加入500ul保存液(1%BSA,1%蔗糖,Tirs-HCl ph 9.0),混匀,产物如图1所示。
实施例2
一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,标记物的制备方法如下:
1.取出500ul荧光微球(1%浓度W/V,绿色荧光-激发475nm-发射525nM)放入离心管中。
2.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min,使微球沉降,去除上清。
3.加入500ul偶联缓冲液(50mM MES ph6.0),混匀。
4.加入20ul EDC溶液(200mM),20ul sulfo-NHS溶液(200mM),混匀,并在转盘混匀器上孵育30min。
5.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min,使微球沉降,去除上清。
6.加入500ul偶联缓冲液(50mM MES ph6.0),混匀后加入0.1mg抗IL-6单克隆抗体,混匀,室温下用转盘混匀器孵育1h。
7.重复步骤1-4.
8.将用EDC、NHS处理后的荧光微球与已经偶联孵育完成的荧光微球等比例混合,室温下用转盘混匀器孵育1h。
9.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min,使微球沉降,去除上清。
10.加入封闭液(1%BSA水溶液),混匀,室温下用转盘混匀器孵育1h。
11.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min,使微球沉降,去除上清。
12.加入500ul保存液(1%BSA,1%蔗糖,Tirs-HCl ph 9.0),混匀。
实施例3
白介素6(IL-6)荧光层析检测试纸条的制备:
荧光层析检测试纸条包括基板和基板上依次衔接的样品垫、标记物垫、层析膜和吸水垫,所述标记物垫为玻纤垫,所述层析膜为硝酸纤维素膜。
基板采用PVC板,样品垫、标记物垫、层析膜和吸水垫间粘贴部分相互重合2mm,组装并斩切后成为4mm宽的试纸条,装入卡壳,封装在铝箔袋中。
具体步骤如下:
1.玻纤垫的制备:将玻纤裁切为3*3cm的规格,使用喷金仪将处理液(阻断剂10%,吐温20 0.5%,抗红细胞抗体1%,50mM PBS ph 7.2)喷涂于玻纤一侧,喷量4ul/cm;将前述增强型IL-6抗体-荧光微球偶联物和兔IgG-荧光微球偶联物的混合液(20:1)喷涂于玻纤另一侧;37℃烘干24h。
2.硝酸纤维素膜的制备:将另一种抗IL-6抗体,使用稀释液(5%蔗糖,50mM PBSph7.5)稀释至1mg/mL,划线于纤维素膜上一侧作为检测线;将羊抗兔IgG使用稀释液(5%蔗糖,50mM PBS ph7.5)稀释至0.5mg/mL,划线于纤维素膜上作为质控线;划膜量1ul/cm,37℃烘干24h。
3.将PVC基板上贴好吸水垫、制备好的玻纤垫,硝酸纤维素膜,斩切为4mm宽的试纸条,装入卡壳,封装至铝箔袋。
实施例4
本实施例与实施例3的区别仅在于:标记物采用IL-6抗体-荧光微球偶联物。
将4种不同IL-6浓度的样本和IL-6检测试纸条恢复至室温,每种样本分为两组,分别采用实施例3、4的IL-6检测试纸条检测,具体检测方法为:
取75ul样本加入至200ul稀释液(50mM PBS ph7.2)中,混匀,取75ul加入至试纸条样品垫中,15min后使用荧光检测仪读取结果。
结果如图2和下表所示:
由上表和图2可知,实施例3试纸条的检测灵敏度远高于实施例4试纸条。即采用本发明的加强型抗体-荧光微球偶联物检测IL-6,灵敏度显著高于传统抗体-荧光微球偶联物。
以上所述的具体实施方式,对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施方式而已,并不用于限定本发明的保护范围,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法,其特征在于,将抗体与荧光微球偶联得到抗体-荧光微球偶联物,将抗体-荧光微球偶联物再次与荧光微球偶联,得到增强型抗体-荧光微球偶联物。
2.一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,其特征在于,标记物的制备方法如下:
(1)将抗IL-6单克隆抗体与荧光微球偶联,得到IL-6抗体-荧光微球偶联物;
(2)将IL-6抗体-荧光微球偶联物再次与荧光微球偶联,得到增强型IL-6抗体-荧光微球偶联物。
3.根据权利要求2所述的一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,其特征在于,步骤(1)中,IL-6抗体-荧光微球偶联物的制备方法如下:
(11)取出荧光微球放入离心管中离心,沉降、去除上清;
(12)向沉降物中加入偶联缓冲液,混匀,然后加入EDC溶液、sulfo-NHS溶液混匀、孵育;
(13)将步骤(12)的溶液离心,沉降、去除上清,再加入偶联缓冲液混匀;
(14)加入抗IL-6单克隆抗体,混匀,室温下用孵育,得到IL-6抗体-荧光微球偶联物。
4.根据权利要求3所述的一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,其特征在于,步骤(2)中,增强型IL-6抗体-荧光微球偶联物的制备方法如下:
(21)重复步骤(11)、(12),处理后的荧光微球与已经偶联孵育完成的IL-6抗体-荧光微球偶联物等比例混合,室温下孵育;
(22)孵育完毕后离心,沉降、去除上清,然后加入封闭液混匀,孵育;
(23)最后离心、沉降、去除上清,加入保存液混匀。
5.根据权利要求2所述的一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,其特征在于,白介素6检测在荧光层析检测试纸条上进行,荧光层析检测试纸条包括基板和基板上依次衔接的样品垫、标记物垫、层析膜和吸水垫,所述标记物垫为玻纤垫,所述层析膜为硝酸纤维素膜。
6.根据权利要求5所述的一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,其特征在于,所述玻纤垫经过如下处理:
将处理液喷涂于玻纤垫一侧,然后将增强型IL-6抗体-荧光微球偶联物和兔IgG-荧光微球偶联物的混合液喷涂于玻纤另一侧,37℃烘干。
7.根据权利要求6所述的一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用,其特征在于,所述硝酸纤维素膜经过如下处理:将另一种抗IL-6抗体,使用稀释液稀释至1mg/mL,划线于硝酸纤维素膜上一侧作为检测线;将羊抗兔IgG使用稀释液稀释至0.5mg/mL,划线于硝酸纤维素膜上作为质控线,37℃烘干24h。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112175080A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-01-05 | 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 | 抗人白介素-6高亲和力兔单克隆抗体及应用 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0916951A1 (fr) * | 1997-09-18 | 1999-05-19 | Immunotech | Procédé d'étalonnage d'un système de dosage de type ligand - anti ligand |
CN102565382A (zh) * | 2012-01-06 | 2012-07-11 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法 |
CN103197074A (zh) * | 2013-04-22 | 2013-07-10 | 北京润博福得生物科技发展有限公司 | 基于近红外荧光纳米微球标记物的免疫层析定量检测试剂 |
CN105158482A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-12-16 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | C反应蛋白荧光免疫层析法检测试剂盒 |
CN106189362A (zh) * | 2015-05-28 | 2016-12-07 | 美天施生物科技有限责任公司 | 基于荧光染料在支化聚醚骨架上的多聚的明亮荧色物 |
CN107942045A (zh) * | 2017-11-03 | 2018-04-20 | 江苏师范大学 | 一种单个纳米颗粒水平上的夹心式均相免疫分析方法 |
CN108918479A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-11-30 | 苏州遵道生物科技有限公司 | 定量检测白细胞介素-6的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法 |
CN109374903A (zh) * | 2018-10-08 | 2019-02-22 | 杭州康知生物科技有限公司 | 一种超灵敏il-6荧光免疫层析测定试剂盒及测定方法 |
US20190204311A1 (en) * | 2017-12-13 | 2019-07-04 | Immundiagnostik AG, Bensheim, GERMANY | Method of measuring auto-antibodies in bodily fluids |
-
2020
- 2020-02-27 CN CN202010124553.3A patent/CN111308064B/zh active Active
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0916951A1 (fr) * | 1997-09-18 | 1999-05-19 | Immunotech | Procédé d'étalonnage d'un système de dosage de type ligand - anti ligand |
CN102565382A (zh) * | 2012-01-06 | 2012-07-11 | 苏州浩欧博生物医药有限公司 | 一种检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法 |
CN103197074A (zh) * | 2013-04-22 | 2013-07-10 | 北京润博福得生物科技发展有限公司 | 基于近红外荧光纳米微球标记物的免疫层析定量检测试剂 |
CN106189362A (zh) * | 2015-05-28 | 2016-12-07 | 美天施生物科技有限责任公司 | 基于荧光染料在支化聚醚骨架上的多聚的明亮荧色物 |
CN105158482A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-12-16 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | C反应蛋白荧光免疫层析法检测试剂盒 |
CN107942045A (zh) * | 2017-11-03 | 2018-04-20 | 江苏师范大学 | 一种单个纳米颗粒水平上的夹心式均相免疫分析方法 |
US20190204311A1 (en) * | 2017-12-13 | 2019-07-04 | Immundiagnostik AG, Bensheim, GERMANY | Method of measuring auto-antibodies in bodily fluids |
CN108918479A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-11-30 | 苏州遵道生物科技有限公司 | 定量检测白细胞介素-6的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法 |
CN109374903A (zh) * | 2018-10-08 | 2019-02-22 | 杭州康知生物科技有限公司 | 一种超灵敏il-6荧光免疫层析测定试剂盒及测定方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112175080A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-01-05 | 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 | 抗人白介素-6高亲和力兔单克隆抗体及应用 |
CN112175080B (zh) * | 2020-10-22 | 2021-05-25 | 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 | 抗人白介素-6高亲和力兔单克隆抗体及应用 |
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Publication number | Publication date |
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