CN111235033A - 一种益生菌油类保存工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种益生菌油类保存工艺，具体包括以下步骤：S1、菌体收集：将培养至对数生长期益生菌的菌种悬浮液放置在离心机中进行离心处理，收集菌体，本发明涉及微生物技术领域。该益生菌油类保存工艺，通过S1、菌体收集：将培养至对数生长期益生菌的菌种悬浮液放置在离心机中进行离心处理，收集菌体，离心温度为30－38℃，离心转速为500－2000转/分钟，离心时间为30‑50分钟，S2、物质添加：将步骤S1中收集到的菌体放置在玻璃锥形瓶中，将复合油采用真空技术进行脱水处理，在菌体中加入配置出来的复合油，利用复合油带有的强抗氧化性对菌体可以起到更加有效的保护效果，提高益生菌在保存时间较长后的存活率。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体为一种益生菌油类保存工艺。
背景技术
益生菌是通过定殖在人体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物，通过调节宿主黏膜与***免疫功能或通过调节肠道内菌群平衡，促进营养吸收保持肠道健康的作用，从而产生有利于宿主健康作用的单微生物或组成明确的混合微生物，益生菌通过改善肠道微生物平衡，从而对宿主施加有益影响的微生物添加物，研究发现，益生菌在调节肠道菌群结构，增强机体免疫力，降低胆固醇，消除致癌因子等方面都有很大的生理功效，同时对糖尿病，高血压，高血脂等一些疾病的防治有重要的意义，而且，如今面对环境问题，生活方式以及食品卫生问题给人们健康带来的隐患，益生菌在维持健康，减少患病危险等方面都有巨大的潜力，这使得益生菌在食品、生物医药制品等多种领域得到了越来越广泛的应用。
现有技术中对于益生菌的保存工艺还尚不完善，传统的低温菌种保藏法虽对大多数菌种普遍适用，但需要添加相应的化学保护剂，如甘油和二甲基亚砜等，菌种活力易受到影响，杂菌污染几率大，益生菌经过长时间的保存后存活率较低，因此我们提出一种新的益生菌油类保存工艺，可以使益生菌保存更久，并且益生菌的存活率较高。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种益生菌油类保存工艺，解决了传统的低温菌种保藏法虽对大多数菌种普遍适用，但需要添加相应的化学保护剂，如甘油和二甲基亚砜等，菌种活力易受到影响，杂菌污染几率大，益生菌经过长时间保存后存活率较低的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种益生菌油类保存工艺，具体包括以下步骤：
S1、菌体收集：将培养至对数生长期益生菌的菌种悬浮液放置在离心机中进行离心处理，收集菌体，离心温度为30－38℃，离心转速为500－2000 转/分钟，离心时间为30-50分钟；
S2、物质添加：将步骤S1中收集到的菌体放置在玻璃锥形瓶中，将复合油采用真空技术进行脱水处理，再将脱水处理后的复合油放入存储容器中，将玻璃锥形瓶中的菌体注入存储容器中，利用存储容器中的复合油包裹住菌体，复合油与菌体的菌壁吸附，将菌体与外界隔绝，最后利用石蜡对玻璃锥形瓶的瓶口进行密封；
S3、低温保存：将玻璃锥形瓶在3℃至5℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-2℃至-4℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-8℃至-10℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-14℃至-16℃存放6-10小时，最后将玻璃锥形瓶在-20℃至 -25℃进行保存。
优选的，所述复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯80-90份、茶多酚1-3份和有机溶剂5-7份。
优选的，所述复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯80份、茶多酚1份和有机溶剂5份。
优选的，所述复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯90份、茶多酚3份和有机溶剂7份。
优选的，所述复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯85份、茶多酚2份和有机溶剂6份。
优选的，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或多种组合，其中乙醇为有机溶剂的优选方案。
优选的，所述茶多酚与有机溶剂进行混合，利用超声分散机使茶多酚与有机溶剂混合均匀。
优选的，所述茶多酚与有机溶剂的混合液加入中链甘油三酸酯中，利用玻璃搅拌棒对混合液进行搅拌，搅拌速度为200r/min，搅拌时间为3分钟。
(三)有益效果
本发明提供了一种益生菌油类保存工艺。与现有技术相比具备以下有益效果：
(1)、该益生菌油类保存工艺，通过S1、菌体收集：将培养至对数生长期益生菌的菌种悬浮液放置在离心机中进行离心处理，收集菌体，离心温度为30－38℃，离心转速为500－2000转/分钟，离心时间为30-50分钟，S2、物质添加：将步骤S1中收集到的菌体放置在玻璃锥形瓶中，将复合油采用真空技术进行脱水处理，再将脱水处理后的复合油放入存储容器中，将玻璃锥形瓶中的菌体注入存储容器中，利用存储容器中的复合油包裹住菌体，复合油与菌体的菌壁吸附，将菌体与外界隔绝，最后利用石蜡对玻璃锥形瓶的瓶口进行密封，S3、低温保存：将玻璃锥形瓶在3℃至5℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-2℃至-4℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-8℃至-10℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-14℃至-16℃存放6-10小时，最后将玻璃锥形瓶在-20℃至-25℃进行保存，在菌体中加入配置出来的复合油，利用复合油带有的强抗氧化性对菌体可以起到更加有效的保护效果，提高益生菌在保存时间较长后的存活率。
(2)、该益生菌油类保存工艺，通过S1、菌体收集：将培养至对数生长期益生菌的菌种悬浮液放置在离心机中进行离心处理，收集菌体，离心温度为30－38℃，离心转速为500－2000转/分钟，离心时间为30-50分钟，S2、物质添加：将步骤S1中收集到的菌体放置在玻璃锥形瓶中，将复合油采用真空技术进行脱水处理，再将脱水处理后的复合油放入存储容器中，将玻璃锥形瓶中的菌体注入存储容器中，利用存储容器中的复合油包裹住菌体，复合油与菌体的菌壁吸附，将菌体与外界隔绝，最后利用石蜡对玻璃锥形瓶的瓶口进行密封，S3、低温保存：将玻璃锥形瓶在3℃至5℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-2℃至-4℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-8℃至-10℃存放 6-10小时，将玻璃锥形瓶在-14℃至-16℃存放6-10小时，最后将玻璃锥形瓶在-20℃至-25℃进行保存，利用递减的温度保存，可以有效地提高益生菌在保存时候的存活率，保证了菌种活力不易受到低温的影响。
(3)、该益生菌油类保存工艺，通过复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯80-90份、茶多酚1-3份和有机溶剂5-7份，有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或多种组合，其中乙醇为有机溶剂的优选方案，茶多酚与有机溶剂进行混合，利用超声分散机使茶多酚与有机溶剂混合均匀，茶多酚与有机溶剂的混合液加入中链甘油三酸酯中，利用玻璃搅拌棒对混合液进行搅拌，搅拌速度为200r/min，搅拌时间为3分钟，利用在中链甘油三酸酯中加入茶多酚，大大的提高了复合油的抗氧化性，从而保证了复合油对益生菌保护效果。
附图说明
图1为本发明益生菌油类保存工艺的流程图；
图2为本发明对比实验数据统计表图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-2，本发明实施例提供三种技术方案：一种益生菌油类保存工艺，具体包括以下实施例：
实施例1
S1、菌体收集：将培养至对数生长期益生菌的菌种悬浮液放置在离心机中进行离心处理，收集菌体，离心温度为30℃，离心转速为500转/分钟，离心时间为30分钟；
S2、物质添加：将步骤S1中收集到的菌体放置在玻璃锥形瓶中，将复合油采用真空技术进行脱水处理，再将脱水处理后的复合油放入存储容器中，将玻璃锥形瓶中的菌体注入存储容器中，利用存储容器中的复合油包裹住菌体，复合油与菌体的菌壁吸附，将菌体与外界隔绝，最后利用石蜡对玻璃锥形瓶的瓶口进行密封，其中复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯80 份、茶多酚1份和有机溶剂5份，1份茶多酚与5份有机溶剂进行混合，利用超声分散机使1份茶多酚与5份有机溶剂混合均匀，将1份茶多酚与5份有机溶剂的混合液加入80份中链甘油三酸酯中，利用玻璃搅拌棒对混合液进行搅拌，搅拌速度为200r/min，搅拌时间为3分钟；
S3、低温保存：将玻璃锥形瓶在3℃存放6小时，将玻璃锥形瓶在-2℃存放6小时，将玻璃锥形瓶在-8℃存放6小时，将玻璃锥形瓶在-14℃存放6小时，最后将玻璃锥形瓶在-20℃进行保存。
实施例2
S1、菌体收集：将培养至对数生长期益生菌的菌种悬浮液放置在离心机中进行离心处理，收集菌体，离心温度为38℃，离心转速为2000转/分钟，离心时间为50分钟；
S2、物质添加：将步骤S1中收集到的菌体放置在玻璃锥形瓶中，将复合油采用真空技术进行脱水处理，再将脱水处理后的复合油放入存储容器中，将玻璃锥形瓶中的菌体注入存储容器中，利用存储容器中的复合油包裹住菌体，复合油与菌体的菌壁吸附，将菌体与外界隔绝，最后利用石蜡对玻璃锥形瓶的瓶口进行密封，其中复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯90 份、茶多酚3份和有机溶剂7份，3份茶多酚与7份有机溶剂进行混合，利用超声分散机使3份茶多酚与7份有机溶剂混合均匀，将3份茶多酚与7份有机溶剂的混合液加入90份中链甘油三酸酯中，利用玻璃搅拌棒对混合液进行搅拌，搅拌速度为200r/min，搅拌时间为3分钟；
S3、低温保存：将玻璃锥形瓶在5℃存放10小时，将玻璃锥形瓶在-4℃存放10小时，将玻璃锥形瓶在-10℃存放10小时，将玻璃锥形瓶在-16℃存放10 小时，最后将玻璃锥形瓶在-25℃进行保存。
实施例3
S1、菌体收集：将培养至对数生长期益生菌的菌种悬浮液放置在离心机中进行离心处理，收集菌体，离心温度为34℃，离心转速为1250转/分钟，离心时间为40分钟；
S2、物质添加：将步骤S1中收集到的菌体放置在玻璃锥形瓶中，将复合油采用真空技术进行脱水处理，再将脱水处理后的复合油放入存储容器中，将玻璃锥形瓶中的菌体注入存储容器中，利用存储容器中的复合油包裹住菌体，复合油与菌体的菌壁吸附，将菌体与外界隔绝，最后利用石蜡对玻璃锥形瓶的瓶口进行密封，其中复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯85 份、茶多酚2份和有机溶剂6份，2份茶多酚与6份有机溶剂进行混合，利用超声分散机使2份茶多酚与6份有机溶剂混合均匀，将2份茶多酚与6份有机溶剂的混合液加入85份中链甘油三酸酯中，利用玻璃搅拌棒对混合液进行搅拌，搅拌速度为200r/min，搅拌时间为3分钟；
S3、低温保存：将玻璃锥形瓶在4℃存放8小时，将玻璃锥形瓶在-3℃存放8小时，将玻璃锥形瓶在-9℃存放8小时，将玻璃锥形瓶在-15℃存放8小时，最后将玻璃锥形瓶在-23℃进行保存。
对比实验
某益生菌培养研究实验室，分别选取实施例1-3中保存的益生菌进行活性和存活率的对比实验，由图1可知，实施例1中保存的益生菌活性为6.5，存活率为86％，实施例2中保存的益生菌活性为6.9，存活率为89％，实施例3 中保存的益生菌活性为7.7，存活率为93％，本发明中实施例3中保存的益生菌活性与存活率均高于实施例1和实施例2，为优选方案，利用实施例3中的益生菌保存工艺，可以较大程度上提高益生菌在经过长时间保存后的活性以及存活率。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种益生菌油类保存工艺，其特征在于：具体包括以下步骤：
S1、菌体收集：将培养至对数生长期益生菌的菌种悬浮液放置在离心机中进行离心处理，收集菌体，离心温度为30－38℃，离心转速为500－2000转/分钟，离心时间为30-50分钟；
S2、物质添加：将步骤S1中收集到的菌体放置在玻璃锥形瓶中，将复合油采用真空技术进行脱水处理，再将脱水处理后的复合油放入存储容器中，将玻璃锥形瓶中的菌体注入存储容器中，利用存储容器中的复合油包裹住菌体，复合油与菌体的菌壁吸附，将菌体与外界隔绝，最后利用石蜡对玻璃锥形瓶的瓶口进行密封；
S3、低温保存：将玻璃锥形瓶在3℃至5℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-2℃至-4℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-8℃至-10℃存放6-10小时，将玻璃锥形瓶在-14℃至-16℃存放6-10小时，最后将玻璃锥形瓶在-20℃至-25℃进行保存。
2.根据权利要求1所述的一种益生菌油类保存工艺，其特征在于：所述复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯80-90份、茶多酚1-3份和有机溶剂5-7份。
3.根据权利要求2所述的一种益生菌油类保存工艺，其特征在于：所述复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯80份、茶多酚1份和有机溶剂5份。
4.根据权利要求2所述的一种益生菌油类保存工艺，其特征在于：所述复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯90份、茶多酚3份和有机溶剂7份。
5.根据权利要求2所述的一种益生菌油类保存工艺，其特征在于：所述复合油原料按重量份比包括：中链甘油三酸酯85份、茶多酚2份和有机溶剂6份。
6.根据权利要求2-5任意一项所述的一种益生菌油类保存工艺，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或多种组合，其中乙醇为有机溶剂的优选方案。
7.根据权利要求2-5任意一项所述的一种益生菌油类保存工艺，其特征在于：所述茶多酚与有机溶剂进行混合，利用超声分散机使茶多酚与有机溶剂混合均匀。
8.根据权利要求2-5任意一项所述的一种益生菌油类保存工艺，其特征在于：所述茶多酚与有机溶剂的混合液加入中链甘油三酸酯中，利用玻璃搅拌棒对混合液进行搅拌，搅拌速度为200r/min，搅拌时间为3分钟。
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