CN111233950A

CN111233950A - 一种从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法

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Publication number: CN111233950A
Application number: CN202010056794.9A
Authority: CN
Inventors: 贺玉婷; 易宇阳; 唐美玉; 王文甲; 曹慧璋
Original assignee: Hunan Langlin Biological Resources Co ltd
Current assignee: Hunan Langlin Biological Resources Co ltd
Priority date: 2020-01-17
Filing date: 2020-01-17
Publication date: 2020-06-05
Anticipated expiration: 2040-01-17
Also published as: CN111233950B

Abstract

一种从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，包括以下步骤：1）原料灭酶处理，高度酒精回流提取；2）浓缩至无醇味，离心；3）过大孔树脂，梯度洗脱，收集目标段洗脱液；4）目标段洗脱液脱色，浓缩过滤，调PH至2‑5，过聚酰胺树脂，梯度洗脱，得到三段目标段洗脱液；5）将目标段洗脱液分别浓缩、升温、冷却析出结晶，真空干燥即得绿原酸、咖啡酸、菊苣酸、松果菊甙。采用本发明不仅能够制备纯度高的咖啡酸衍生物，含量可达80%，还能同时制备绿原酸、咖啡酸、松果菊甙以及菊苣酸，收率可达88%以上，且能够实现工业化生产；工艺安全可靠且对环境友好。

Description

一种从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法

技术领域

本发明属于中药分离制备技术领域，主要涉及一种从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法。

技术背景

紫锥菊的主要成分包括咖啡酸衍生物(绿原酸、咖啡酸、松果菊甙、菊苣酸)、烷基酰胺类和多糖，具有很好的药理活性。目前已有紫锥菊提取物供应，但是其中菊苣酸的含量与咖啡酸衍生物(绿原酸、咖啡酸、松果菊甙、菊苣酸)的含量均比较低，一般都只有4％左右，这种低含量提取物限制了紫锥菊提取物的进一步开发利用。Nigel B.Perry等人[J.Agric.Food Chem，2001，49(4):1702-1706]利用制备色谱制得了纯度95％的菊苣酸对照品。但是制备色谱设备要求高、不易放大生产，成本高，试剂有毒害，故只能用于生产标准品，而不能够进行工业化生产。现有技术中还没有能从紫锥菊中同时提取纯化绿原酸、咖啡酸、松果菊甙、菊苣酸的工艺。

紫锥菊咖啡酸衍生物比较复杂，主要由绿原酸、咖啡酸、松果菊甙、菊苣酸成分组成。菊苣酸晶体呈丝状，针型，其分子式C₂₂H₁₈O₁₂,分子量为474.37，菊苣酸易溶于乙醇、甲醇和丙酮，微溶于乙酸乙醋和***，不溶于石油醚、苯和氯仿，菊苣酸易溶于热水，但在温度为25℃时，仅有0.5％可溶；松果菊甙分子式为C₃₅H₄₆O₂₀,分子量为786.73，白色无定形粉末，易溶于甲醇、乙醇等极性溶剂，不溶于石油醚等非极性溶剂，溶于碱和冰醋酸、吡啶，微溶于一般的有机溶媒，不溶于水；咖啡酸分子式为C₉H₈O₄，为黄色结晶，从浓溶液析出晶体不含结晶水，从稀溶液析出晶体含一分子结晶水，微溶于冷水，易溶于热水、冷乙醇、乙酸乙酯；绿原酸分子式C₁₆H₁₈O₉,半水合物为白色或微黄色针状结晶,绿原酸在25℃时水中溶解度约为4％，易溶于乙醇、丙酮、甲醇等极性溶剂，微溶于乙酸乙醋，难溶于氯仿、***、苯等亲脂性有机溶剂。

CN1587251A公开了一种从紫锥菊中提取高纯度的菊苣酸的工艺，其工艺特点是采用氯仿对紫锥菊进行处理，用甲醇提取，提取后再用乙酸乙酯进行三次萃取，最后于乙腈反相色谱柱进行纯化，得到高纯度的菊苣酸产品。该工艺使用了对环境和人体有危害的氯仿和甲醇，在菊苣酸产品中容易残留，且乙腈反相色谱柱价格昂贵，生产效率较低，成本昂贵。CN1473602A公开了一种紫锥菊的提取制备工艺，包括乙醇回流提取、除杂、浓缩、真空干燥、上柱等步骤。其存在以下不足之处：①提取液直接进行微滤处理，容易造成微滤膜堵塞，且生产效率低，不适宜大生产。②浓缩所得浸膏，进行减压干燥，由于菊苣酸等多酚类成分耐热性不好，长时间的受热造成菊苣酸损失较多，导致最终得到的提取物中菊苣酸含量不高。CN1957961A公开了一种紫锥菊提取物的制备方法，原料采用的是新鲜状态的紫锥菊全草，经提取，浓缩得紫锥菊提取物。该方法存在以下不足之处：①制备工艺以紫锥菊鲜药材为研究对象，虽然紫锥菊鲜品菊苣酸含量较高，但紫锥菊提取物的生产受季节限制，紫锥菊提取物的药源问题限制了其工业化生产。②其工艺生产的主要是以菊苣酸含量为指标，而药材中咖啡酸、松果菊甙、绿原酸成分未考虑，一定程度造成了药材资源的浪费。③制备工艺中药材用高浓度乙醇提取2次，药渣中吸附有大量乙醇，而未见处理，其生产的紫锥菊提取物成本较高。CN101367728B采用市售3-5％的紫锥菊提取物为原料，加水溶解过滤，加酸调节pH为1-4，过大孔吸附树脂纯化，并依次用三种不同梯度的洗脱液洗脱，收集6-45柱体积洗脱液为单咖啡酰酒石酸，收集60-100柱体积的洗脱液为菊苣酸；经减压蒸干后通过重结晶得到纯度大于95％的单咖啡酰酒石酸和菊苣酸产品。该方法存在以下不足之处：①制备工艺以紫锥菊提取物为研究对象，增加了工业化生产的成本。②其洗脱溶剂容量过大，不方便大批量生产。③有效成分只分离了菊苣酸与单咖啡酒石酸，未考虑绿原酸和松果菊甙等。

上述方法目前存在的不足是未充分利用药材中的有效成分，造成资源浪费，其次制备的高含量的产品所使用的设备昂贵，不能实现工业化生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，所得咖啡酸衍生物含量高，且能同时分离纯化绿原酸、咖啡酸、松果菊甙、菊苣酸，制备成本低，安全且对环境友好。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，包括以下步骤：

1)准备紫锥菊原料，在提取罐中先加入相当于紫锥菊原料重量3-5倍的酸水，升温至60-100℃，投入紫锥菊原料，搅拌保温5-30min(进行灭酶处理)；再加入相当于紫锥菊原料重量5-8倍的体积浓度为80-95％的高浓度乙醇水溶液(此处加入高浓度乙醇水溶液，与酸水混合，成为较低浓度的乙醇水溶液)，保温0.5-2h，将料液放出；再往料渣中加入相当于紫锥菊原料重量8-12倍的体积浓度为40-60％的乙醇水溶液，回流提取或75-85℃保温提取1-2次，每次提取时间0.5-2h，过滤；收集所有料液，得提取液；

提取次数太少，不利于充分提取出原料中的有效成份；提取次数太多，对有效成份的提取有限，提取溶剂的成本高，并且提取液中的杂质含量也会增加。

2)将步骤1)所得提取液减压浓缩至无醇味，并控制溶质总质量浓度为10-15wt％，离心，清液备用；

3)将步骤2)获得的清液，以1-2BV/h的流速过非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂，依次采用1-2BV纯水、1-3BV体积浓度10-30％的乙醇水溶液、2-4BV体积浓度50-80％的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度50-80％的乙醇水溶液洗脱液，即为高含量咖啡酸衍生物洗脱液；

4)将步骤3)所得的高含量咖啡酸衍生物洗脱液，加入相当于洗脱液中溶质质量2-5wt％的活性炭，然后在60-70℃减压浓缩至无醇味，趁热离心，得滤液；

本步骤中所述溶质为咖啡酸衍生物，包括绿原酸、咖啡酸、松果菊甙、菊苣酸；

5)将步骤4)所得的滤液调pH至2-5(优选用盐酸调pH)，过聚酰胺树脂，依次采用纯水以及第一段、第二段、第三段不同浓度的乙醇水溶液进行洗脱，第一段为体积浓度25％-35％的乙醇水溶液，第二段为体积浓度50％-60％的乙醇水溶液，第三段为体积浓度70％-80％的乙醇水溶液；

第一段洗脱液为绿原酸洗脱液，减压浓缩至绿原酸质量含量为30％-40％，升温至85-90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得绿原酸；

第二段洗脱液为咖啡酸和松果菊甙混合物洗脱液，减压浓缩至咖啡酸和松果菊甙混合物质量含量为30％-40％，升温至85-90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得咖啡酸；将液态减压浓缩，再真空干燥，即得松果菊甙；

第三段洗脱液为菊苣酸洗脱液，减压浓缩至菊苣酸质量含量为30％-40％，升温至85-90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得菊苣酸。

进一步，步骤1)中，灭酶处理之前将紫锥菊原料破碎。

进一步，步骤1)中，酸水为易挥发性酸的水溶液。优选其pH为2-5。易挥发性酸优选盐酸。多酚氧化酶的存活条件为适宜的温度(30-50℃)、适宜的pH(6-7)、充足的底物，在过酸或者过碱的条件下均会失活，但是需要提取的有效成分为有机酸，过碱的条件下，受热易水解。造成有效成分的损失。所以选择适当的酸性加高温协同灭酶，同时也能提高树脂的吸附量。

进一步，步骤3)中，所述非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂为LX-20大孔树脂、LX-60大孔树脂、XDA-6大孔树脂等中的至少一种。

研究表明，若采用极性大孔树脂，分离效果差，产品收率和纯度都会降低；采用非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂，产品收率和纯度都会提高；而采用LX-20大孔树脂、LX-60大孔树脂或XDA-6大孔树脂，效果最好，产品收率和纯度能得到较大的提高。

进一步，步骤5)中，第一段乙醇水溶液的体积为2-3BV，第二段乙醇水溶液的体积为1-2BV，第三段乙醇水溶液的体积为1.5-2.5BV。

进一步，步骤5)中，纯水的体积为1-2BV。

进一步，各步骤中含乙醇的溶液都可以回收乙醇。

本发明以紫锥菊为原料，灭酶处理后采用乙醇水溶液回流提取，将大孔树脂纯化与聚酰胺树脂分离技术相结合，制备高含量的咖啡酸衍生物。

本发明具有如下优点：

1.采用高温酸水保温处理原料可以破坏多酚氧化酶，降低有效成分在提取过程中发生降解的现象，且使用的酸为易挥发性酸，不影响有效成分的得率；

2.由于紫锥菊含有烷基酰胺类、叶绿素等成分，且咖啡酸衍生物易溶于乙醇等有机溶剂中，采用低浓度的乙醇水溶液提取，能够有效地防止极性小的杂质被提取出来，不仅能达到一定的提纯效果，还能够达到一定的脱色效果；

3.通过初纯化去除极性较大的杂质(糖蛋白、多糖等)，二次纯化分离通过调整洗脱溶剂的极性，可同时制备高纯度的绿原酸、咖啡酸、松果菊甙、菊苣酸，利用有效成分不溶于水、易溶于热水等特性，使其浓缩至一定固含浓度后，升温助溶，再冷却结晶，能够使有效成分结晶析出，达到进一步纯化的效果；

4.该工艺过程可操作性强，成本低，适合工业化生产，且生产安全可靠，对环境友好。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步的说明。

本说明书中，除另有说明，所述乙醇水溶液的浓度为其中乙醇的体积浓度，其他所述百分比为质量百分比。

实施例1

本实施例包括以下步骤：

1)称取紫锥菊原料100kg破碎备用，在提取罐中先加入相当于紫锥菊原料重量4倍的酸水(酸水为盐酸，调pH＝2)，升温至60℃，投入紫锥菊原料，搅拌保温30min，再加入相当于紫锥菊原料重量5倍的体积浓度为95％的乙醇水溶液，保温回流1h，将料液放出；再往料渣中加入相当于紫锥菊原料重量10倍的体积浓度为50％的乙醇水溶液，保温回流提取1.5h，过滤；收集所有料液，得提取液；

2)将步骤1)所得提取液减压浓缩至无醇味，并控制溶质总质量浓度为10wt％，离心，清液备用；

3)将步骤2)获得的清液，以1BV/h的流速过LX-60大孔树脂，依次采用2BV的纯水、3BV体积浓度20％的乙醇水溶液、4BV体积浓度为80％的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度80％的乙醇水溶液洗脱液，即为高含量咖啡酸衍生物洗脱液；

4)将步骤3)所得的高含量咖啡酸衍生物洗脱液，加入相当于洗脱液中溶质质量5％的活性炭，然后在60℃减压浓缩至无醇味，趁热离心，得滤液；

5)将步骤4)所得的滤液调pH至2(用盐酸调pH)，过聚酰胺树脂分离纯化，依次用2BV纯水、2BV体积浓度为25％的乙醇水溶液(第一段)、1BV体积浓度为50％的乙醇水溶液(第二段)、2.5BV体积浓度为的70％的乙醇水溶液(第三段)洗脱；

第一段洗脱液为绿原酸洗脱液，减压浓缩至绿原酸质量含量为40％，升温至85℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得绿原酸；

第二段洗脱液为咖啡酸和松果菊甙混合物洗脱液，减压浓缩至咖啡酸和松果菊甙混合物质量含量为40％，升温至85℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得咖啡酸；将液态减压浓缩，再真空干燥，即得松果菊甙；

第三段洗脱液为菊苣酸洗脱液，减压浓缩至菊苣酸质量含量为40％，升温至85℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得菊苣酸。

经HPLC分析检测，绿原酸含量为88.57wt％(0.15Kg)、咖啡酸含量为91.25wt％(0.96Kg)、松果菊甙含量为85.76wt％(0.019KG)、菊苣酸含量为93.21wt％(1.94Kg)，总多酚提取率达到88.44wt％。

实施例2

本实施例包括以下步骤：

1)称取紫锥菊原料100kg破碎备用，在提取罐中先加入相当于紫锥菊原料重量4倍的酸水(酸水为盐酸，调pH＝5)，升温至100℃，投入紫锥菊原料，搅拌保温5min，再加入相当于紫锥菊原料重量6倍的体积浓度为95％的乙醇水溶液，保温回流1h，将料液放出；再往料渣中加入相当于紫锥菊原料重量10倍的体积浓度为60％乙醇水溶液，保温回流提取1.5h，过滤；收集所有料液，得提取液；

2)将步骤1)所得提取液减压浓缩至无醇味，并控制溶质总质量浓度为15％，离心，清液备用；

3)将步骤2)获得的清液，以2BV/h的流速过LX-20大孔树脂，依次用2BV的纯水、1BV体积浓度10％的乙醇水溶液、4BV体积浓度50％的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度50％的乙醇水溶液洗脱液，即为高含量咖啡酸衍生物洗脱液；

4)将步骤3)所得的高含量咖啡酸衍生物洗脱液，加入相当于洗脱液中溶质质量2％的活性炭，然后在70℃减压浓缩至无醇味，趁热离心，得滤液；

5)将步骤4)所得的滤液用盐酸调pH至5，过聚酰胺树脂分离纯化，依次用1BV纯水、3BV体积浓度为30％的乙醇水溶液(第一段)、2BV体积浓度为60％的乙醇水溶液(第二段)、1.5BV体积浓度为80％的乙醇水溶液(第三段)洗脱；

第一段洗脱液为绿原酸洗脱液，减压浓缩至绿原酸质量含量为30％，升温至90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得绿原酸；

第二段洗脱液为咖啡酸和松果菊甙混合物洗脱液，减压浓缩至咖啡酸和松果菊甙混合物质量含量为30％，升温至90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得咖啡酸；将液态减压浓缩，再真空干燥，即得松果菊甙；

第三段洗脱液为菊苣酸洗脱液，减压浓缩至菊苣酸质量含量为30％，升温至90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得菊苣酸。

经HPLC分析检测，绿原酸含量为88.77wt％(0.15KG)、咖啡酸含量为91.53wt％(0.98KG)、松果菊甙含量为87.31wt％(0.019KG)、菊苣酸含量为92.21wt％(2.00KG)，总多酚提取率达到90.32％。

实施例3

本实施例包括以下步骤：

1)称取紫锥菊原料100kg破碎备用，在提取罐中先加入相当于紫锥菊原料重量4倍的酸水(酸水为盐酸，调pH＝3)，升温至90℃，投入紫锥菊原料，搅拌保温15min，再加入相当于紫锥菊原料重量6倍的体积浓度为85％的乙醇水溶液，保温回流1h，将料液放出；再往料渣中加入相当于紫锥菊原料重量10倍的体积浓度为50％乙醇水溶液，保温回流提取1.5h，过滤；收集所有料液，得提取液；

3)将步骤2)获得的清液，以1BV/h的流速过XDA-6大孔树脂，依次用2BV的纯水、2BV体积浓度20％的乙醇水溶液、3BV体积浓度70％的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度70％的乙醇水溶液洗脱液，即为高含量咖啡酸衍生物洗脱液；

4)将步骤3)所得的高含量咖啡酸衍生物洗脱液，加入相当于洗脱液中溶质质量2％的活性炭，65℃减压浓缩至无醇味，趁热离心，得滤液；本步骤中所述溶质为咖啡酸衍生物，包括绿原酸、咖啡酸、松果菊甙、菊苣酸；

5)将步骤4)所得的滤液用盐酸调pH至5，过聚酰胺树脂，依次用1BV纯水、2.5BV体积浓度为35％的乙醇水溶液(第一段)、1.5BV体积浓度为55％的乙醇水溶液(第二段)、2BV体积浓度为75％的乙醇水溶液(第三段)洗脱。

第一段洗脱液为绿原酸洗脱液，减压浓缩至绿原酸质量含量为40％，升温至90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得绿原酸；

第二段洗脱液为咖啡酸和松果菊甙混合物洗脱液，减压浓缩至咖啡酸和松果菊甙混合物质量含量为40％，升温至90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得咖啡酸；将液态减压浓缩，再真空干燥，即得松果菊甙；

第三段洗脱液为菊苣酸洗脱液，减压浓缩至菊苣酸质量含量为40％，升温至90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得菊苣酸。

经HPLC分析检测，绿原酸含量为90.55wt％(0.15KG)、咖啡酸含量为91.59wt％(0.99KG)、松果菊甙含量为89.21wt％(0.019KG)、菊苣酸含量为93.50wt％(2.00KG)，总多酚提取率达到91.26wt％。

对比例1

本对比例，除未进行灭酶处理外，即没有步骤(1)中的“在提取罐中先加入相当于紫锥菊原料重量4倍的酸水(酸水为盐酸，调pH＝2)，升温至60℃，投入紫锥菊原料，搅拌保温30min，”操作，直接将紫锥菊原料投入提取罐中，其他参数与实施例1相同。

本对比例所得产品，经HPLC分析检测，绿原酸含量为84.88wt％(0.14Kg)、咖啡酸含量为87.69wt％(0.90Kg)、松果菊甙含量为80.22wt％(0.018KG)、菊苣酸含量为88.53wt％(1.83Kg)，总多酚提取率达到79.14wt％。

对比例2

本对比例，除灭酶处理使用的酸为VC外，其他参数与实施例1相同。

本对比例所得产品，经HPLC分析检测，绿原酸含量为85.02wt％(0.14Kg)、咖啡酸含量为87.77wt％(0.92Kg)、松果菊甙含量为80.25wt％(0.019KG)、菊苣酸含量为88.91wt％(1.87Kg)，总多酚提取率达到81.33wt％。

对比例3

本对比例，除步骤3)初纯化使用AB-8树脂(弱极性树脂)外，其他参数与实施例1相同。

本对比例所得产品，经HPLC分析检测，绿原酸含量为84.98wt％(0.15Kg)、咖啡酸含量为86.88wt％(0.94Kg)、松果菊甙含量为80.54wt％(0.019KG)、菊苣酸含量为89.21wt％(1.88Kg)，总多酚提取率达到82.16wt％。

对比例4

本对比例，除步骤3)初纯化使用NKA-2树脂(极性树脂)外，其他参数与实施例1相同。

本对比例所得产品，经HPLC分析检测，绿原酸含量为83.25wt％(0.146Kg)、咖啡酸含量为87.44wt％(0.90Kg)、松果菊甙含量为80.46wt％(0.018KG)、菊苣酸含量为87.92wt％(1.85Kg)，总多酚提取率达到79.52wt％。

Claims

1.一种从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）准备紫锥菊原料，在提取罐中先加入酸水，升温，投入紫锥菊原料，搅拌保温进行灭酶处理；再加入体积浓度为80-95%的高浓度乙醇水溶液，保温，将料液放出；再往料渣中加入体积浓度为40-60%的乙醇水溶液，回流提取或保温提取，过滤；收集所有料液，得提取液；

2）将步骤1）所得提取液减压浓缩至无醇味，离心，清液备用；

3）将步骤2）获得的清液，过非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂，依次采用纯水、体积浓度10-30%的乙醇水溶液、体积浓度50-80%的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度50-80%的乙醇水溶液洗脱液，即为高含量咖啡酸衍生物洗脱液；

4）将步骤3）所得的高含量咖啡酸衍生物洗脱液，加入活性炭，然后减压浓缩至无醇味，离心，得滤液；

5）将步骤4）所得的滤液调pH至2-5，过聚酰胺树脂，依次采用纯水以及第一段、第二段、第三段不同浓度的乙醇水溶液进行洗脱，第一段为体积浓度25%-35%的乙醇水溶液，第二段为体积浓度50%-60%的乙醇水溶液，第三段为体积浓度70%-80%的乙醇水溶液；

第一段洗脱液为绿原酸洗脱液，减压浓缩，升温至85-90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态干燥，即得绿原酸；

第二段洗脱液为咖啡酸和松果菊甙混合物洗脱液，减压浓缩，升温至85-90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态干燥，即得咖啡酸；将液态减压浓缩，干燥，即得松果菊甙；

第三段洗脱液为菊苣酸洗脱液，减压浓缩，升温至85-90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态干燥，即得菊苣酸。

2.根据权利要求1所述的从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）准备紫锥菊原料，在提取罐中先加入相当于紫锥菊原料重量3-5倍的酸水，升温至60-100℃，投入紫锥菊原料，搅拌保温5-30min进行灭酶处理；再加入相当于紫锥菊原料重量5-8倍的体积浓度为80-95%的高浓度乙醇水溶液，保温0.5-2h，将料液放出；再往料渣中加入相当于紫锥菊原料重量8-12倍的体积浓度为40-60%的乙醇水溶液，回流提取或75-85℃保温提取1-2次，每次提取时间0.5-2h，过滤；收集所有料液，得提取液；

2）将步骤1）所得提取液减压浓缩至无醇味，并控制溶质总质量浓度为10-15wt%，离心，清液备用；

3）将步骤2）获得的清液，以1-2BV/h的流速过非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂，依次采用1-2BV纯水、1-3BV体积浓度10-30%的乙醇水溶液、2-4BV体积浓度50-80%的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度50-80%的乙醇水溶液洗脱液，即为高含量咖啡酸衍生物洗脱液；

4）将步骤3）所得的高含量咖啡酸衍生物洗脱液，加入相当于洗脱液中溶质质量2-5wt%的活性炭，然后在60-70℃减压浓缩至无醇味，趁热离心，得滤液；

第一段洗脱液为绿原酸洗脱液，减压浓缩至绿原酸质量含量为30%-40%，升温至85-90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得绿原酸；

第二段洗脱液为咖啡酸和松果菊甙混合物洗脱液，减压浓缩至咖啡酸和松果菊甙混合物质量含量为30%-40%，升温至85-90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得咖啡酸；将液态减压浓缩，再真空干燥，即得松果菊甙；

第三段洗脱液为菊苣酸洗脱液，减压浓缩至菊苣酸质量含量为30%-40%，升温至85-90℃，再冷却析出结晶，固液分离，将固态真空干燥，即得菊苣酸。

3.根据权利要求1或2所述的从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，步骤1）中，灭酶处理之前将紫锥菊原料破碎。

4.根据权利要求1或2所述的从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，步骤1）中，酸水为易挥发性酸的水溶液。

5.根据权利要求4所述的从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，易挥发性酸为盐酸。

6.根据权利要求1或2所述的从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，步骤1）中，酸水pH为2-5。

7.根据权利要求1或2所述的从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，步骤3）中，所述非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂为LX-20大孔树脂、LX-60大孔树脂、XDA-6大孔树脂中的至少一种。

8.根据权利要求1或2所述的从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，步骤5）中，第一段乙醇水溶液的体积为2-3BV，第二段乙醇水溶液的体积为1-2BV，第三段乙醇水溶液的体积为1.5-2.5BV。

9.根据权利要求1或2所述的从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，步骤5）中，纯水的体积为1-2BV。

10.根据权利要求1或2所述的从紫锥菊中提取咖啡酸衍生物的方法，其特征在于，步骤5）中，用盐酸调滤液的pH。