CN111201438A - 与和细胞疗法相关的毒性有关的制品和方法 - Google Patents

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T·艾伯森
R·拉森
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Abstract

提供了与细胞疗法一起用于治疗疾病或病症，例如癌症，包括用于预测和治疗毒性的方法和制品。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，如严重神经毒性或严重CRS。所述方法通常包括通过测定来自受试者的生物样品来检测标记，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，以确定所述受试者是否有产生所述毒性的风险，所述毒性是如神经毒性或CRS或者严重神经毒性或严重CRS。在一些实施方案中，所述方法和制品还包括用于测定所述生物样品的试剂和用于确定所述生物样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目的说明书。

Description

与和细胞疗法相关的毒性有关的制品和方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年6月2日提交的标题为“与和细胞疗法相关的毒性有关的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS RELATED TO TOXICITY ASSOCIATED WITH CELLTHERAPY)”的美国临时申请号62/514,762和2017年6月5日提交的标题为“与和细胞疗法相关的毒性有关的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS RELATED TOTOXICITY ASSOCIATED WITH CELL THERAPY)”的美国临时申请号62/515,526的优先权，将所述临时申请的内容通过引用以其整体并入。
通过引用并入序列表
本申请是与电子格式的序列表一起提交的。所述序列表作为2018年5月8日创建的标题为735042012040SeqList.TXT的文件提供，其大小为38,592字节。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入。
技术领域
本公开文本提供了与细胞疗法一起用于治疗疾病或病症，例如癌症，包括用于预测和治疗毒性的方法和制品。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，如严重神经毒性或严重CRS。所述方法通常包括通过测定来自受试者的生物样品来检测标记，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，以确定所述受试者是否有产生所述毒性的风险，所述毒性是如神经毒性或CRS或者严重神经毒性或严重CRS。在一些实施方案中，所述方法和制品还包括用于测定所述生物样品的试剂和用于确定所述生物样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目的说明书。
背景技术
有多种方法可用于使用表达重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))的工程化细胞进行过继细胞疗法。需要改进的方法，例如以增加安全性和/或降低受试者对所给予细胞的毒性风险。提供了满足此类需求的方法、组合物和制品。
发明内容
本文提供了一种制品，其含有能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂以及用于使用所述试剂来测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。在一些实施方案中，所述生物样品是单采术样品。在一些实施方案中，所述细胞群是或含有单核细胞。在一些实施方案中，所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或含有CD14+骨髓细胞。在一些任何此类实施方案中，所述标记是人的，任选地是人CD14。
在一些实施方案中，所述标记是骨髓细胞标记，如人骨髓细胞标记，如单核细胞标记，例如人单核细胞标记。在一些方面，所述单核细胞标记是存在于任选地人或健康个体中的全部或大多数单核细胞或大多数单核细胞群上(例如，存在于其表面)的标记。在一些方面，所述单核细胞标记不存在于或通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上，例如不存在于淋巴细胞上和/或不表达于嗜中性粒细胞上。在一些方面，所述单核细胞标记是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。
在一些任何此类实施方案中，所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。在一些任何此类实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
在一些任何此类实施方案中，所述生物样品是或获得自血液、血浆或血清样品。在一些例子中，所述生物样品是或获得自单采术或白细胞单采术样品。
在一些任何此类实施方案中，所述制品还含有所述细胞疗法和/或还含有与所述细胞疗法进行的治疗一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。在一些任何此类实施方案中，所述制品还含有用于治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于给予治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性。在一些特定实施方案中，所述神经毒性是严重神经毒性(例如，3级或更高的神经毒性)。
在一些任何此类实施方案中，所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗；和/或向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
在一些任何此类实施方案中，所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。在一些任何此类实施方案中，所述说明书进一步规定向所述受试者给予所述细胞疗法，并且其中所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平：所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
在一些任何此类实施方案中，所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。在一些任何此类实施方案中，所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％。
提供了一种含有细胞疗法的制品，所述细胞疗法任选地含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以及用于给予所述T细胞疗法的说明书，其中：(A)所述说明书或文献进一步规定，所述给予是根据或基于生物样品中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果来进行，任选地所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；和/或(B)所述说明书或文献进一步规定了所述治疗的一个或多个具体方面或者进行有待与所述给予联合地进行的一种或多种干预，任选地基于在给予所述细胞疗法后在来自所述受试者的生物样品中评估的参数和/或产生毒性或毒性结果的风险评估水平，其中(i)所述参数是或包含所述受试者的细胞、样品或组织中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平，或者(ii)所述风险评估水平是基于所述受试者的细胞、样品或组织中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平。
在所描述的制品的一些实施方案中，(B)中的所述进一步规定包括规定在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述基因工程化细胞(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗；和/或规定向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或规定在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。在一些实施方案中，所述说明书进一步规定了所述参数或评估风险的水平。
在一些方面，(A)中的所述评估包括检测，其任选地包括使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。
在一些实施方案中，所述细胞群是或含有单核细胞。在一些例子中，所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或含有CD14+骨髓细胞。在一些方面，所述标记是人的，任选地是人CD14。
在一些任何此类实施方案中，所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。在一些实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
在一些任何此类实施方案中，所述生物样品是或获得自血液、血浆或血清样品。在一些例子中，所述生物样品是或获得自单采术或白细胞单采术样品。
在一些任何此类实施方案中，所述制品还含有用于检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述试剂，和/或还含有与用于检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述试剂一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。在一些任何此类实施方案中，所述制品还含有用于治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于给予治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。
在一些任何此类实施方案中，用于给予所述细胞疗法的说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平：在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述基因工程化细胞(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗；和/或向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
在一些任何此类实施方案中，用于给予所述细胞疗法的说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。在一些实施方案中，所述说明书进一步规定向所述受试者给予所述细胞疗法，并且其中所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平：在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前不给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
在一些任何此类实施方案中，所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。在一些实施方案中，所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％。
提供了一种制品，其含有能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂以及用于根据或基于生物样品中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述药剂的说明书。在一些实施方案中，所述评估包括检测，其任选地包括使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述骨髓标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。
在一些任何此类实施方案中，所述说明书规定，在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时将给予所述药剂，和/或还含有与所述细胞疗法进行的治疗一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。
在一些任何此类实施方案中，所述生物样品在给予所述药剂或细胞疗法之前从所述受试者获得。在一些实施方案中，所述细胞群是或含有单核细胞。在一些实施方案中，所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或含有CD14+骨髓细胞。在一些实施方案中，所述标记是人的，任选地是人CD14。
在一些任何此类实施方案中，所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。在一些实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
在一些任何此类实施方案中，所述生物样品是或获得自血液、血浆或血清样品。在一些例子中，所述生物样品是或获得自单采术或白细胞单采术样品。
在一些任何此类实施方案中，所述制品还含有用于检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述试剂，和/或还含有与用于检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述试剂一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。在一些实施方案中，所述制品还含有所述细胞疗法和/或还含有与所述细胞疗法进行的治疗一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。
在一些实施方案中，用于给予所述药剂的说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则向所述受试者给予所述药剂。在一些情况下，所述说明书进一步规定了向所述受试者给予细胞疗法，其中所述药剂的给予将在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时进行。
在一些任何此类实施方案中，用于给予所述药剂的说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比低于所述阈值水平，则向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中所述说明书规定，在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予所述细胞疗法。
在一些任何此类实施方案中，所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。在一些实施方案中，所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％。在一些任何此类实施方案中，对细胞骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述测定或评估包括流式细胞术。
在一些任何此类实施方案中，所述毒性包括神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，任选地1级或更高的神经毒性或CRS。在一些情况下，所述毒性包括严重神经毒性和/或包括2级或更高的神经毒性、3级或更高的神经毒性、至少延长的3级神经毒性或者处于或高于4级或5级神经毒性；和/或所述毒性包括严重CRS和/或包括2级或更高或者3级或更高的CRS。在一些例子中，所述毒性与脑水肿相关。
在一些任何此类实施方案中，所述药剂或其他治疗剂是或包括以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的药剂。在一些情况下，所述拮抗剂或抑制剂是或含有选自以下的药剂：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。在一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。
在一些任何此类实施方案中，所述药剂或其他治疗是或含有选自以下的药剂：托珠单抗(tocilizumab)、司妥昔单抗(siltuximab)、克莱赞珠单抗(clazakizumab)、萨瑞鲁单抗(sarilumab)、奥洛珠单抗(olokizumab)(CDP6038)、艾西莫单抗(elsilimomab)、ALD518/BMS-945429、司鲁库单抗(sirukumab)(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。在一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或含有托珠单抗。在一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或含有司妥昔单抗。在一些例子中，所述类固醇是或包括***。
在一些任何此类实施方案中，能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性结合CSF-1，特异性结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)激活，激活CB2受体，和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)，或者上调微小RNA-124(miR-124)。在一些方面，能够阻止、阻断或降低小胶质细胞激活或功能的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。在一些例子中，所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、***素(任选地WIN55或212-2)、静脉注射免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗(emactuzumab)、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。
在一些实施方案中，所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。在一些方面，所述抑制剂选自：PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003或是其抗原结合片段；或任何前述项的组合。在一些特定例子中，所述抑制剂是PLX-3397。
在一些任何此类实施方案中，所述重组受体特异性结合至与所述疾病或病症相关的或在与所述疾病或病症相关的病变环境的细胞中表达的抗原。在一些实施方案中，所述疾病或病症是癌症。在一些实施方案中，所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在一些例子中，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在一些任何此类实施方案中，所述抗原是或包括B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CA9，也称为G250或CAIX)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、CD19、CD20、CD22、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、III型表皮生长因子受体突变体(EGFR vIII)、叶酸结合蛋白(FBP)、Fc受体样5(FCRL5，也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、人高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、IL-22受体α(IL-22Rα或IL-22R-α)、IL-13受体α2(IL-13Rα2或IL-13R-α2)、激酶***区受体(kdr)、κ轻链、富含亮氨酸重复序列蛋白家族成员8A(Leucine Rich Repeat Containing8Family Member A，LRRC8A)、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、黑素瘤优先表达抗原(PRAME)、存活素、TAG72、B7-H3、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CD171、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、叶酸受体-α、CD44v6、CD44v7/8、αvβ6整合素(avb6整合素)、8H9、神经细胞粘附分子(NCAM)、血管内皮生长因子受体(VEGF受体或VEGFR)、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、NKG2D配体、双抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素(MSLN)、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、***特异性抗原、***干细胞抗原(PSCA)、***特异性膜抗原(PSMA)、自然杀伤细胞2族成员D(natural killer group 2 member D，NKG2D)配体、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、黑色素A(MART-1)、糖蛋白100(gp100)、癌胚胎抗原、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ-异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)、癌胚抗原(CEA)、***受体、孕酮受体、CD123、CD133、c-Met、O-乙酰化GD2(OGD2)、L1-CAM的CE7表位、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD138、病原体特异性或病原体表达的抗原。
在一些任何此类实施方案中，所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。在一些实施方案中，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些情况下，所述CAR含有特异性结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和含有ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域含有CD3-ζ(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR还含有共刺激信号传导区域，其任选地含有CD28或4-1BB的信号传导结构域。
在一些任何此类实施方案中，所述工程化细胞包括T细胞，任选地CD4+和/或CD8+。在一些情况下，所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
在一些任何此类实施方案中，与产生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或含有少于或少于约5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如少于或少于约2.5x 107个、少于或少于约1.0x 107个、少于或少于约5.0x 106个、少于或少于约1.0x 106个、少于或少于约5.0x 105个或者少于或少于约1x 105个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。在一些实施方案中，与产生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或含有从或从约1x 105至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如1x 105至2.5x 107个、1x 105至1.0x 107个、1x 105至5.0x 106个、1x 105至1.0x 106个、1.0x 105至5.0x 105个、5.0x 105至5x 107个、5x 105至2.5x 107个、5x 105至1.0x 107个、5x 105至5.0x 106个、5x 105至1.0x 106个、1.0x 106至5x 107个、1x 106至2.5x 107个、1x 106至1.0x 107个、1x106至5.0x 106个、5.0x 106至5x 107个、5x 106至2.5x 107个、5x 106至1.0x 107个、1.0x107至5x 107个、1x 107至2.5x 107个或者2.5x 107至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
在一些任何此类实施方案中，所述试剂被可检测地标记，任选地被荧光标记。
还提供了一种选择受试者进行治疗的方法，所述方法包括(a)使生物样品与能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记或对骨髓标记的表达呈阳性的细胞的试剂接触，其中所述生物样品来自作为用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地含有包含一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物；并且所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包括所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及(b)选择受试者进行治疗，在所述受试者中(i)所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，从而鉴定出有对所述细胞疗法产生毒性的风险的受试者；或(ii)所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平。在一些实施方案中，所述生物样品是单采术样品。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性。
在一些方面，选择所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平的受试者以向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予将在开始向所述受试者给予所述细胞疗法之前、在其一天、两天或三天内、与其同时和/或在其之后第一次发热时给予；和/或选择所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平的受试者以向所述受试者以降低的剂量或以在给予细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或选择所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平的受试者以在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
在一些实施方案中，选择所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平的受试者，并且所述方法还包括向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予在开始向所述受试者给予所述细胞疗法之前、在其一天、两天或三天内、与其同时和/或在其之后第一次发热时进行；和/或向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予细胞疗法；和/或向所述受试者给予细胞疗法或一定剂量的细胞疗法的基因工程化细胞，所述剂量在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关；和/或在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予细胞疗法。
在一些实施方案中，选择所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平的受试者以：任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予细胞疗法；向所述受试者给予细胞疗法，其中所述细胞疗法不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下给予细胞疗法。
在一些实施方案中，选择所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平的受试者，并且所述方法还包括任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。在一些例子中，选择所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目的受试者，并且所述方法还包括向所述受试者给予所述细胞疗法，其中所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
提供了一种治疗方法，其包括测定生物样品的骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平，其中所述生物样品来自作为任选地用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以治疗疾病或病症；以及根据或基于所述测定的结果，向所述受试者给予所述细胞疗法和任选地能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗。
还提供了一种治疗方法，其包括根据或基于来自受试者的生物样品的骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者对所述群体的细胞表达的标记呈阳性或对骨髓标记的表达呈阳性的细胞的表达水平的测定的结果，向所述受试者给予(i)细胞疗法，其任选地包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以治疗所述受试者的疾病或病症，以及任选地(ii)能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗，其中所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得。在一些实施方案中，所述测定包括检测，其任选地包括使所述样品与能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述骨髓标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目和/或骨髓细胞群的细胞的百分比或数目。
在一些实施方案中，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平：在开始向所述受试者给予所述细胞疗法之前、在其一天、两天或三天内、与其同时和/或在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的所述药剂或其他治疗；和/或向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
在一些实施方案中，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平：所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
本文提供了一种评估神经毒性风险的方法，其包括测定来自受试者的单采术样品的骨髓细胞群的细胞或者对所述群体的细胞表达的标记呈阳性或对骨髓标记的表达呈阳性的细胞的存在或百分比或数目；以及根据或基于所述测定的结果，确定所述受试者在给予细胞疗法后是否有产生神经毒性或严重神经毒性的风险，所述细胞疗法包含含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物以治疗所述受试者的疾病或病症，其中所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，并且所述单采术样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述单采术样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。在一些实施方案中，如果所述样品中对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则将所述受试者评估为有产生神经毒性或严重神经毒性的风险。在一些方面，如果将所述受试者评估为有产生神经毒性或严重神经毒性的风险，则所述方法还包括在给予所述细胞疗法之后监测所述受试者的除发热以外的神经毒性体征或症状的出现；在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的所述药剂或其他治疗；向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
在一些实施方案中，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则将所述受试者评估为不怀疑有或不太可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险。在一些实施方案中，如果将所述受试者评估为不怀疑有或不太可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险，则在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的神经毒性体征或症状出现之前不向所述受试者进一步给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述神经毒性产生的药剂或治疗；或者所述方法还包括在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法。
本文提供了一种在给予细胞疗法之后监测受试者的方法，所述方法包括观察给予细胞疗法的受试者的除发热以外的神经毒性或严重神经毒性的体征或症状的出现，其中所述受试者是已经被确定为有或可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险的受试者，如基于将单采术样品中骨髓细胞群的细胞或者对所述群体的细胞表达的标记呈阳性或对骨髓标记的表达呈阳性的细胞的存在或百分比或数目测定为等于或高于阈值水平所确定的，所述单采术样品已经在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述单采术样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞，其中所述细胞疗法含有包含一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物以治疗所述受试者的疾病或病症。在一些实施方案中，在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下或在所述受试者在所述观察期或所述观察期的一部分期间住在医院的情况下已经向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在所述受试者没有被确定为有风险的情况下，在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
提供了一种预防性治疗的方法，其包括向受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗，其中所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以治疗疾病或病症；并且根据或基于来自受试者的生物样品的骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的测定的结果已经将所述受试者鉴定为有产生毒性的风险，所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不含有所述重组受体和/或所述工程化细胞。在一些实施方案中，所述生物样品是单采术样品。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性。
在一些情形中，所述测定包括检测，其任选地包括使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。在一些实施方案中，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则向所述受试者给予所述药剂。
在一些实施方案中，在开始向所述受试者给予所述细胞疗法之前、在其一天、两天或三天内、与其同时和/或在其之后第一次发热时给予所述药剂。
在一些实施方案中，所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均或均值百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均或均值百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。在一些实施方案中，所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。
在一些实施方案中，所述百分比是在所述样品中总白细胞或总CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群的或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比，或者是在所述样品中总白细胞或CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群的或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。在一些情况下，所述生物样品是单采术样品。在一些进一步的实施方案中，所述单采术样品是白细胞单采术样品。在一些此类实施方案中，所述百分比是在所述样品中总白细胞或总CD45+细胞或其存活细胞中对CD14呈表面阳性或对另一种单核细胞标记呈表面阳性的细胞的百分比。在一些实施方案中，所述单核细胞标记是如下标记，其存在于例如人中的单核细胞群的全部或大多数单核细胞上，或者其通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上，例如不存在于淋巴细胞上和/或不表达于嗜中性粒细胞上。在一些方面，所述单核细胞标记是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。
在一些任何此类实施方案中，所述细胞(例如骨髓细胞)群是或含有单核细胞。在一些实施方案中，所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或含有CD14+骨髓细胞。在一些方面，所述标记是人的，任选地是人CD14。在一些实施方案中，所述骨髓标记是CD14，或者所述骨髓细胞群是CD14+，并且所述百分比是在所述样品中总存活白细胞或总存活CD45+细胞中CD14+细胞的百分比。在一些例子中，所述阈值水平是在所述单采术样品中总存活白细胞或总存活CD45+细胞中CD14+细胞的百分比，其中所述百分比为或为约45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。
在一些实施方案中，所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。在一些实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述生物样品是或获得自血液、血浆或血清样品。在一些例子中，所述生物样品是或获得自单采术或白细胞单采术样品。在一些实施方案中，对细胞骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述测定或评估包括流式细胞术。
本文提供了一种监测受试者的方法，其包括在给予所述细胞疗法之后监测受试者的除发热以外的神经毒性体征或症状的出现，其中已经评估了所述受试者的神经毒性风险，并且来自所述受试者的单采术样品的评估结果指示对CD14呈阳性的活白细胞的百分比等于或高于阈值水平，其中所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包含表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以治疗疾病或病症。在一些实施方案中，所述方法还包括在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗；向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。在一些情况下，所述CD14是人CD14。
在一些实施方案中，所述测定包括检测，其任选地包括接触能够直接或间接检测CD14的试剂，以及确定所述单采术样品中对CD14呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。在一些情形中，所述试剂是特异性结合至CD14的结合分子。在一些实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
在一些任何此类实施方案中，所述毒性包括神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，任选地1级或更高的神经毒性或CRS。在一些方面，所述毒性包括严重神经毒性和/或包括2级或更高的神经毒性、3级或更高的神经毒性、至少延长的3级神经毒性或者处于或高于4级或5级神经毒性；和/或所述毒性包括严重CRS和/或包括2级或更高或者3级或更高的CRS。在一些实施方案中，所述神经毒性是严重神经毒性或者是3级或更高的神经毒性。在一些情况下，所述毒性与脑水肿相关。
在一些任何此类实施方案中，所述药剂或其他治疗剂是或包括以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的药剂。在一些情况下，所述拮抗剂或抑制剂是或含有选自以下的药剂：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
在一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。在一些例子中，所述药剂或其他治疗是或含有选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克莱赞珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛珠单抗(CDP6038)、艾西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司鲁库单抗(CNTO136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。在一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或含有托珠单抗。在一些方面，所述药剂或其他治疗是或含有司妥昔单抗。在一些情形中，所述类固醇是或含有***。
在一些实施方案中，能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性结合CSF-1，特异性结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)激活，激活CB2受体，和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)，或者上调微小RNA-124(miR-124)。在一些情况下，能够阻止、阻断或降低小胶质细胞激活或功能的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。在一些实施方案中，所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、***素(任选地WIN55或212-2)、静脉注射免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。
在一些实施方案中，所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。在一些实施方案中，所述抑制剂选自：PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003或是其抗原结合片段；或任何前述项的组合。在一些特定例子中，所述抑制剂是PLX-3397。
在一些任何此类实施方案中，所述重组受体特异性结合至与所述疾病或病症相关的或在与所述疾病或病症相关的病变环境的细胞中表达的抗原。在一些方面，所述疾病或病症是癌症。在一些情况下，所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在一些例子中，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施方案中，所述重组受体特异性结合与所述疾病或病症相关的或者表达或存在于所述疾病或病症的细胞上的抗原。
在一些任何此类实施方案中，所述抗原是或包括B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CA9，也称为G250或CAIX)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、CD19、CD20、CD22、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、III型表皮生长因子受体突变体(EGFR vIII)、叶酸结合蛋白(FBP)、Fc受体样5(FCRL5，也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、人高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、IL-22受体α(IL-22Rα或IL-22R-α)、IL-13受体α2(IL-13Rα2或IL-13R-α2)、激酶***区受体(kdr)、κ轻链、富含亮氨酸重复序列蛋白家族成员8A(LRRC8A)、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、黑素瘤优先表达抗原(PRAME)、存活素、TAG72、B7-H3、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CD171、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、叶酸受体-α、CD44v6、CD44v7/8、αvβ6整合素(avb6整合素)、8H9、神经细胞粘附分子(NCAM)、血管内皮生长因子受体(VEGF受体或VEGFR)、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、NKG2D配体、双抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素(MSLN)、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、***特异性抗原、***干细胞抗原(PSCA)、***特异性膜抗原(PSMA)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、黑色素A(MART-1)、糖蛋白100(gp100)、癌胚胎抗原、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ-异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)、癌胚抗原(CEA)、***受体、孕酮受体、CD123、CD133、c-Met、O-乙酰化GD2(OGD2)、L1-CAM的CE7表位、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD138、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，所述受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，所述抗原是或包括CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。
在一些实施方案中，所述抗原是或包括病原体特异性或病原体表达的抗原。在一些实施方案中，所述抗原是病毒抗原(如来自HIV、HCV、HBV等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。
在一些实施方案中，所述重组受体特异性结合至由治疗剂包含的标签，所述治疗剂特异性靶向所述疾病或病症或者所述疾病或病症的细胞，已经或将向所述受试者给予所述标签。
在一些实施方案中，所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。在一些实施方案中，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些情况下，所述CAR含有特异性结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和含有ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域含有CD3-ζ(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR还含有共刺激信号传导区域，其任选地含有CD28或4-1BB的信号传导结构域。
在一些任何此类实施方案中，所述工程化细胞包括T细胞，任选地CD4+和/或CD8+ T细胞。在一些情形中，所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予从或从约1x 105至1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x105至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)或者从或从约1x 106至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予不超过1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
在一些任何此类实施方案中，与产生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或含有少于或少于约5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如少于或少于约2.5x 107个、少于或少于约1.0x 107个、少于或少于约5.0x 106个、少于或少于约1.0x 106个、少于或少于约5.0x 105个或者少于或少于约1x 105个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。在一些实施方案中，与产生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或含有从或从约1x 105至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如1x 105至2.5x 107个、1x 105至1.0x 107个、1x 105至5.0x 106个、1x 105至1.0x 106个、1.0x 105至5.0x 105个、5.0x 105至5x 107个、5x 105至2.5x 107个、5x 105至1.0x 107个、5x 105至5.0x 106个、5x 105至1.0x 106个、1.0x 106至5x 107个、1x 106至2.5x 107个、1x 106至1.0x 107个、1x106至5.0x 106个、5.0x 106至5x 107个、5x 106至2.5x 107个、5x 106至1.0x 107个、1.0x107至5x 107个、1x 107至2.5x 107个或者2.5x 107至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
在一些任何此类实施方案中，所述工程化细胞对所述受试者是自体的。在一些实施方案中，所述工程化细胞对所述受试者是同种异体的。在一些情况下，所述试剂被可检测地标记，任选地被荧光标记。
本文提供了所提供的任何制品，其中所述说明书规定了进行本文所提供的任何方法。
附图说明
图1A示出了展示受试者的白细胞单采术样品中CD14+单核细胞的百分比的图。示出了未产生神经毒性的受试者(左)与产生神经毒性的受试者(右)的数据。
图1B示出了展示受试者的白细胞单采术样品中CD14+单核细胞的百分比的图。示出了未产生神经毒性的受试者(左)与产生3级或更高的神经毒性的受试者(右)的数据。
图2示出了经历过实验室异常和在≥20％受试者中发生的TEAE的受试者的百分比。*：一次多器官衰竭的5级AE，与研究治疗无关，并且是由于淋巴瘤进展所致；
Figure BDA0002379202310000231
一次弥漫性肺泡损伤的5级AE，研究者评估为与氟达拉滨、环磷酰胺和CAR T细胞疗法有关，在第23天发生于如下受试者中，所述受试者拒绝针对进行性呼吸衰竭进行机械通气，同时患嗜中性粒细胞减少症，使用生长因子以及广谱抗生素和抗真菌药。
图3是描绘所观察到的至CRS和神经毒性发作的时间的Kaplan meier曲线。
图4A和图4B描绘了经治疗受试者的亚组之间的反应率。
图5A和5B示出了受试者的完整和核心群组的反应(CR/PR、CR或PR)持续时间和总体存活。
图6A示出了在不同剂量水平下，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+T细胞的药代动力学。
图6B示出了在反应者与无反应者之间，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+ T细胞的药代动力学。
图6C示出了在产生或未产生任何神经毒性的受试者中，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+ T细胞的药代动力学。
图7示出了在给予CAR+ T细胞之前，在受试者血清中测量的分析物水平，以及与神经毒性产生的相关性。
图8示出了这样的图，其标绘了无进展时间(月)并指示最佳总体反应和反应持久性，以及在用含有表达CAR-T的CD4+和CD8+ T细胞的抗CD19细胞疗法治疗的NHL受试者的完整群组和核心群组内在单独受试者中随时间观察到的单独临床结果。a：患者在第1个月时达到BOR，除非另有说明；b：在2名患者中观察到CNS由淋巴瘤累及的完全消退；c：一名患者在疾病进展时进行活检后再扩增。
图9A示出了展示受试者的单采术样品中CD45+细胞的CD14+单核细胞的百分比的图。示出了未产生神经毒性的受试者(左)与产生神经毒性的受试者(右)的数据。
图9B示出了展示受试者的单采术样品中CD45+细胞的CD14+单核细胞的百分比的图。示出了未产生神经毒性的受试者(左)与产生3级或更高的神经毒性的受试者(右)的数据。
具体实施方式
本文提供了用于与细胞疗法(例如CAR+ T细胞)和/或治疗毒性的药剂结合使用(包括与过继细胞疗法结合用作伴随诊断剂和/或用于与过继细胞疗法结合的预防性治疗方法中)的涉及试剂的制品、试剂盒和方法，所述试剂能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记。在一些实施方案中，所提供的制品和方法与在给予细胞疗法(如CAR+ T细胞疗法)的受试者中降低产生毒性(如严重毒性，例如严重神经毒性)的风险相关。
在一些实施方案中，所述细胞疗法是或包含肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或表达重组受体的细胞疗法(任选地T细胞疗法)，其任选地是表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞疗法。因此，在一些实施方案中，所述免疫疗法涉及给予如下组合物，其含有多个肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、表达重组受体(如TCR或嵌合抗原受体)的多个细胞(如T细胞，例如工程化T细胞)。在一些实施方案中，重组受体是TCR。在一些情况下，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
过继细胞疗法(包括涉及给予表达对目标疾病或障碍具有特异性的嵌合受体的细胞的那些(所述嵌合受体是如嵌合抗原受体(CAR)和/或其他重组抗原受体)，以及其他过继免疫细胞疗法和过继T细胞疗法)可以有效治疗癌症和其他疾病和障碍。在某些背景下，过继细胞疗法的可行途径可能并不总是完全令人满意。在一些背景下，最佳功效可以取决于所给予的细胞的以下能力：识别并结合至靶标(例如，靶抗原)，运输、定位至并成功进入受试者、肿瘤和其环境内的适当部位，被激活，扩增，发挥各种效应子功能(包括细胞毒性杀伤和分泌各种因子(如细胞因子))，持续(包括长期)存在，分化、转变或参与重编程为某些表型状态(如效应子、长期记忆、较低分化和效应子状态)，在清除和再暴露于靶配体或抗原后提供有效且稳健的回忆反应，以及避免或减少消耗、无反应性、终末分化和/或分化为抑制状态。
用于治疗或改善毒性的某些可用的方法可能并不总是完全令人满意。许多此类途径集中于例如靶向毒性的下游效应(如通过细胞因子阻断)，和/或递送药剂如高剂量类固醇，所述药剂也可能消除或损害所给予的细胞的功能。另外，此类方法通常仅在检测到毒性的体征或症状时才涉及给予此类干预，在一些情况下，所述毒性的体征或症状可能在受试者中出现严重毒性时出现。在细胞疗法之前，也可能无法预测受试者是否有毒性风险。这些其他途径中的许多也不防止可能与过继细胞疗法相关的其他形式的毒性，如神经毒性。在一些情况下，仅在受试者出现毒性的体征或症状后才给予此类疗法。在一些情况下，这是在此类症状严重的时候，并且因此可能需要甚至更严厉或更极端的治疗(例如更高的剂量或增加的给予频率)来改善或治疗所述毒性。
某些替代性途径的使用不会为此类问题提供满意的解决方案。例如，如下方法可能不令人满意，其不考虑风险或在风险阈值过低的情况下包括对给予治疗(如细胞疗法)的全部或大子集的受试者进行治疗(例如，大于最终将产生毒性或者等于或高于其某一风险水平的受试者子集)。例如，向受试者给予细胞疗法以及用于改善或预防毒性的药剂或疗法(例如类固醇)。例如，此类方法可能不令人满意，其中在给予细胞的同时、或在给予细胞之后但在体征或症状或者严重体征或症状出现之前(至少没有出现适当的风险评估水平)的时间窗内给予治疗。例如，并非给予细胞疗法的所有受试者都将会或确实会产生毒性结果，或者会产生需要干预的这种毒性结果。因此，在一些背景下，此类替代方案将涉及不必要地治疗可能不需要这种治疗的某些受试者。另外，在一些情况下，此类药剂和疗法(例如类固醇)它们本身与毒性副作用相关。在较高剂量或频率(其中需要给予所述药剂或疗法或用所述药剂或疗法治疗以便治疗或改善可能由细胞疗法引起的毒性的严重性)下，此类副作用可能甚至更大。此外，在一些情况下，用于治疗毒性的药剂或疗法可能限制细胞疗法的功效，如作为细胞疗法的一部分提供的在细胞上表达的嵌合受体(例如CAR)的功效(Sentman(2013)Immunotherapy,5:10)。
所提供的制品和方法相对于解决、预测和治疗或预防毒性结果风险的可用方法和替代解决方案具有优势。所提供的试剂可以与细胞疗法一起用作伴随诊断剂，如治疗性细胞组合物，其包含表达重组受体的基因工程化细胞以治疗疾病或病症。
在一些实施方案中，所提供的方法和制品是基于以下观察结果：在随后给予细胞治疗(如含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物的细胞疗法)的受试者的生物样品(例如单采术或白细胞单采术)中表达骨髓细胞标记(例如CD14)的细胞的百分比与产生毒性的风险相关联。所提供的制品和方法涉及能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂。在一些实施方案中，提供了使用所述试剂测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。
在一些实施方案中，所述方法或制品用于评估与潜在毒性相关联的标记(例如表达于骨髓细胞群上)，所述毒性可能与某些疗法(在给予受试者时)相关。在一些实施方案中，所述方法和制品可用于确定基于细胞的疗法和/或降低或改善毒性的药剂的给予和剂量。在一些实施方案中，所述细胞疗法是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或表达重组受体的细胞疗法(任选地T细胞疗法)，其任选地是表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞疗法。在一些实施方案中，所述重组受体是TCR。在一些情况下，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述方法还涉及给予淋巴细胞清除疗法。
具体而言，在一些实施方案中，所提供的制品或方法与通常只鉴定被预测为有产生毒性(如与细胞疗法有关的毒性)的风险或高于产生毒性(如与细胞疗法有关的毒性)的特定阈值风险水平的受试者相关。因此，在一些实施方案中，所提供的方法允许仅在更可能产生毒性的受试者子集中对产生毒性结果的风险进行干预。在许多情况下，这避免了在所有将给予细胞疗法的受试者中治疗毒性，如果许多受试者将永远不会产生毒性和/或本身会导致严重的副作用，则如上所述可能不需要这种治疗。
另外，在一些实施方案中，所提供的方法还提供了与以下特征相关的优势：可以通过在给予治疗(如细胞疗法)之前检测来自受试者的血液样品中的标记来预测产生毒性(如神经毒性(例如严重神经毒性))的风险。因此，在一些情况下，被预测为有和/或更有可能有产生毒性(例如CRS或神经毒性，如严重CRS或严重神经毒性)的风险的那些受试者可以及早接受干预或者可以接受预防性治疗。在一些情况下，所述方法或制品允许受试者通常在已经产生否则将导致干预治疗的毒性(例如严重毒性)的体征或症状之前接受用于治疗、预防、延迟或减弱毒性产生的药剂或治疗。在一些情况下，早期干预毒性结果的治疗或毒性结果的可能性的能力可能意味着可以给予降低的剂量的用于治疗或改善毒性的药剂和/或可以给予降低的给予频率的这种药剂或疗法。
在一些实施方案中，对在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)呈阳性的细胞的存在或百分比高于阈值水平指示所述受试者可能需要预防性治疗以改善毒性和/或应当以最小化或降低毒性风险的方式给药或给予表达重组受体的细胞。因此，如本文所述的此类标记可以用于预测方法中，以鉴定可能或更可能对细胞疗法产生毒性的受试者，以便能够较早地干预受试者的治疗，以降低后来的严重毒性。此类方法可以为干预提供合理的策略，从而促进过继细胞疗法(如CAR-T细胞疗法)的安全有效的临床应用。
在一些实施方案中，所述制品或方法包括能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)的试剂。在一些实施方案中，提供了使用所述试剂测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。在一些实施方案中，所述制品可以可替代地或还包括用于治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于给予治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。
在一些实施方案中，所述制品含有能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)的试剂，并且提供了测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者。
还提供了一种制品，其包含含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物的细胞疗法以及用于根据或基于生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记(例如CD14)的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述细胞疗法的说明书。在一些实施方案中，所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。
还提供了一种制品，其含有能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂以及用于根据或基于生物样品中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述药剂的说明书。
在一些实施方案中，所述评估包括检测，其任选地包括使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述骨髓标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。在一些情况下，所述细胞群是或含有单核细胞。
在所述制品的一些实施方案中，还提供了说明书。所述说明书规定例如，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗。
在一些情况下，所述说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法。另外，在一些实施方案中，所述说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
在一些实施方案中，所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予细胞疗法。
还提供了用于选择受试者进行治疗的方法，其包括使生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)与能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)的试剂接触。在所述方法的一些实施方案中，所述生物样品来自作为用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物，并且所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。在一些实施方案中，所述方法还包括选择受试者，在所述受试者中，所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，从而鉴定出有对所述细胞疗法产生毒性的风险的受试者，或者所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平。所述方法还包括选择受试者，在所述受试者中，所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，从而鉴定出有对所述细胞疗法产生毒性的风险的受试者；或者所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平。
在一些实施方案中，如果对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则在给予包含所述基因工程化细胞的治疗性细胞组合物之前和/或与其同时给予能够治疗、预防、延迟或减弱毒性产生的所述药剂或其他治疗；和/或向所述受试者给予所述疗性细胞组合物的一定剂量的基因工程化细胞，所述剂量与产生毒性的风险无关或与在给予包含所述基因工程化细胞的治疗性细胞组合物的大多数受试者中产生毒性的风险无关；和/或在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予包含基因工程化细胞的所述治疗性细胞组合物，任选地其中在门诊基础上将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
除非另有定义，否则本文使用的所有领域术语、符号和其他技术和科学术语或用辞旨在具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于参考而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含的此类定义不一定应当被解释为表示与本领域通常理解的实质性差异。
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本文使用的章节标题只是出于组织的目的，而不应解释为限制所描述的主题。
I.用于检测骨髓细胞或在骨髓细胞上表达的标记的试剂
本文提供了制品，其含有能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上(如单核细胞群上)表达的标记(例如CD14)的试剂。在一些实施方案中，提供了使用所述试剂测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。在一些实施方案中，所述生物样品是单采术样品。还提供了一种制品，其包含含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物的细胞疗法以及用于根据或基于生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记(例如CD14)的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述细胞疗法的说明书。在一些实施方案中，所述百分比是在所述样品中总白细胞或总CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。在一些情况下，所述百分比是在所述样品中总白细胞或CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。在一些例子中，所述百分比是总白细胞或CD45+细胞中CD14+细胞的百分比。在一些实施方案中，所述细胞对CD14呈表面阳性。
在一些方面，所述细胞群是或含有单核细胞。在一些实施方案中，所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。在一些实施方案中，所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或包含CD14+骨髓细胞。在一些情况下，所述标记是人的，任选地是人CD14。还提供了用于选择受试者进行治疗的方法，其包括使生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)与能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)的所述试剂接触。
A.样品
在一些实施方案中，所述生物样品在接受细胞疗法之前从受试者或一组受试者获得，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。例如，所述生物样品来自作为用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物，并且所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。在一些情况下，所述生物样品是或获得自血液、血浆或血清样品。例如，所述生物样品是或获得自单采术或白细胞单采术样品。在一些实施方案中，所述样品富集单核细胞。在一些情况下，所述样品从白细胞单采术收集***获得。在一些实施方案中，所述单采术或白细胞单采术样品来自所述细胞疗法自其中工程化的同一样品。
在一些实施方案中，所述样品来自患有疾病或病症的受试者。例如，所述疾病或病症是癌症。在一些情况下，所述受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。在一些实施方案中，所述疾病或病症是肿瘤，如实体瘤、淋巴瘤、白血病、血液肿瘤、转移性肿瘤或其他癌症或肿瘤类型。在一些特定例子中，所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
在一些实施方案中，所述癌症或增殖性疾病是B细胞恶性肿瘤或血液恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述癌症或增殖性疾病是成淋巴细胞性白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。在一些实施方案中，所述癌症是CLL。在一些实施方案中，所述方法可以用于治疗骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。在一些实施方案中，所述方法可以用于治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、急性髓性白血病(AML)或骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤(MM))。在一些实施方案中，所述方法可以用于治疗NHL或DBCBL。
B.检测方法
本文提供了制品以及所述制品的用途，所述制品含有能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)的试剂。在一些实施方案中，还提供了使用所述试剂测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。在使用所述制品的一些实施方案中，在开始给予所述工程化细胞之前，检测对骨髓细胞群具有特异性的标记或者在骨髓细胞群上表达或由其表达的标记长达2天、长达7天、长达14天、长达21天、长达28天、长达35天或长达40天。
在一些实施方案中，使用所述制品包括检测在骨髓细胞群或其一部分上表达的标记(例如CD14)。所检测的标记可以在骨髓细胞表面上或在骨髓细胞群中表达。在一些例子中，它在单核细胞上表达。在一些实施方案中，所述标记是骨髓细胞标记，如人骨髓细胞标记，如单核细胞标记，例如人单核细胞标记。在一些方面，所述单核细胞标记是存在于任选地人或健康个体中的全部或大多数单核细胞或大多数单核细胞群上(例如，存在于其表面)的标记。在一些方面，所述单核细胞标记不存在于或通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上，例如不存在于淋巴细胞上和/或不表达于嗜中性粒细胞上。在一些方面，所述单核细胞标记是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。在一些实施方案中，所述标记是骨髓细胞标记和/或所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或包含CD14+骨髓细胞。在一些情况下，所述CD14被膜结合或表达于细胞表面上。在一些实施方案中，所述CD14是人CD14。在一些实施方案中，所述CD14包含SEQ ID NO:27-28中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27-28具有至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记的所述试剂结合所述标记(例如CD14)。在一些情况下，对细胞骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述测定或评估是使用流式细胞术。在一些情况下，所述试剂是结合CD14的可溶性蛋白质。例如，在一些实施方案中，细菌脂多糖(LPS)可以用于结合和检测CD14。在一些实施方案中，所述CD14检测抗体选自ab45870(Abcam)、HCD14(Biolegend)、M5E2(Biolegend)、
Figure BDA0002379202310000331
(Bio-Rad)和MAB3832(R&D Systems)。
本文的术语“抗体”是以最广义使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、单链抗体片段(包括单链可变片段(scFv))和单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体(peptibody)、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体(heteroconjugate antibody)、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scFv、串联三-scFv。除非另有说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能性抗体片段。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD)的抗体。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，所述抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scFv。
单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。
抗体片段可以通过多种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，所述抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可以不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的片段。在一些方面，所述抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是如下抗体，其中所有或基本上所有CDR氨基酸残基源自非人CDR并且所有或基本上所有FR氨基酸残基源自人FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指所述非人抗体的变体，其经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，衍生出CDR残基的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
所提供的抗体包括人抗体。“人抗体”是具有对应于人或人细胞或者利用人抗体库或其他人抗体编码序列(包括人抗体文库)的非人来源产生的抗体的氨基酸序列的抗体。所述术语不包括包含非人抗原结合区的非人抗体的人源化形式，如所有或基本上所有CDR都是非人的那些。
人抗体可以通过向转基因动物给予免疫原来制备，所述转基因动物已被修饰以响应抗原攻击产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有人免疫球蛋白基因座的全部或一部分，其置换内源免疫球蛋白基因座，或者其存在于染色体外或随机整合至动物染色体中。在此类转基因动物中，通常已经使内源免疫球蛋白基因座失活。人抗体也可以源自人抗体文库，包括噬菌体展示和无细胞文库，其含有源自人库的抗体编码序列。
所提供的抗体包括单克隆抗体，包括单克隆抗体片段。如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质抗体的群体(即，构成所述群体的单独抗体是相同的，但含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的产生期间产生的可能变体除外，此类变体通常以少量存在)获得或在所述群体内的抗体。与通常包含针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单个表位。所述术语不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于从杂交瘤产生、重组DNA方法、噬菌体展示和其他抗体展示方法。
还提供了抗体免疫缀合物，其包含针对附着于标签的在骨髓细胞群上表达的标记的抗体，所述标签可以间接或直接产生可检测的信号。这些抗体免疫缀合物可以用于研究或诊断应用。所述标签优选地能够直接或间接地产生可检测的信号。例如，所述标签可以是不透射线的或放射性同位素，如3H、14C、32P、35S、123I、125I、131I；荧光(荧光团)或化学发光(发色团)化合物，如异硫氰酸荧光素、罗丹明或萤光素；酶，如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶；成像剂；或金属离子。在一些实施方案中，所述标签是用于闪烁扫描研究的放射性原子，例如99Tc或123I，或用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，MRI)的旋转标签，如锆-89、碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。锆-89可以与多种金属螯合剂络合并与抗体缀合，例如用于PET成像(WO 2011/056983)。
在一些实施方案中，所述抗体免疫缀合物是间接可检测的。例如，对针对在骨髓细胞群免疫缀合物上表达的标记的抗体具有特异性并含有可检测标签的二抗可以用于检测所述抗体免疫缀合物。
在一些实施方案中，可以通过多种已知测定来鉴定能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)的抗体，针对所述抗体的物理/化学特性和/或生物学活性对所述抗体进行筛选或表征。在一个方面，例如通过已知方法测试所述抗体的抗原结合活性，所述方法是例如免疫测定、ELISA、蛋白质印迹和/或流式细胞术测定，包括基于细胞的结合测定。II.治疗或改善毒性症状的干预或药剂
所提供的制品或方法与能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或其他治疗结合使用，或者涉及或包括所述一种或多种药剂或其他治疗。在一些情况下，所述毒性包括神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，任选地1级或更高的神经毒性或CRS。在一些实施方案中，所述毒性包括严重神经毒性和/或包含2级或更高的神经毒性、3级或更高的神经毒性、至少延长的3级神经毒性或者处于或高于4级或5级神经毒性；和/或所述毒性包含严重CRS和/或包含2级或更高或者3级或更高的CRS。在一些实施方案中，所述毒性是严重神经毒性(例如3级或更高的神经毒性)。在一些特定例子中，所述毒性与脑水肿相关。
A.毒性
1.神经毒性
在一些实施方案中，所述疗法引起的毒性结果或症状与神经毒性相关。在一些实施方案中，所述疗法引起的毒性结果或症状与严重神经毒性(例如3级或更高的神经毒性)相关。在一些实施方案中，与神经毒性的临床风险相关的症状包括意识模糊、谵妄、表达性失语、迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫样活动、癫痫(任选地如通过脑电图[EEG]证实)、β淀粉样蛋白(Aβ)水平升高、谷氨酸水平升高和氧自由基水平升高。在一些实施方案中，基于严重性对神经毒性进行分级(例如，使用1-5级量表(参见例如Guido Cavaletti&Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)；美国国家癌症研究所—常见毒性标准第4.03版(NCI-CTCAE v4.03))。在一些情况下，所述神经毒性是严重神经毒性和/或所述神经毒性是3级或更高的神经毒性。在一些实施方案中，所述毒性结果或症状与3级、4级或5级神经毒性相关。
在一些情况下，神经症状可能是sCRS的最早症状。在一些实施方案中，观察到神经症状在细胞疗法输注后5至7天开始。在一些实施方案中，神经***变化的持续时间可能在3至19天的范围内。在一些情况下，在sCRS的其他症状消退后，会发生神经***变化的恢复。在一些实施方案中，通过用抗IL-6和/或一种或多种类固醇治疗不会加速神经***变化的消退时间或程度。
如本文所用，如果在给予后受试者展示出如下限制自理(例如洗澡、穿衣和脱衣、进食、如厕、服药)的症状，则认为所述受试者响应于或继发于细胞疗法或其一剂细胞的给予而产生“严重神经毒性”：1)外周运动神经病的症状，包括外周运动神经的炎症或退化；2)外周感觉神经病的症状，包括外周感觉神经的炎症或退化、感觉迟钝(如感官知觉失真)，导致异常和不愉快的感觉、神经痛(如沿着神经或一组神经的剧烈疼痛感)，和/或感觉异常如感觉神经元的功能性紊乱，导致在没有刺激的情况下刺痛、麻木、压迫、冷和温的异常皮肤感觉。在一些实施方案中，严重神经毒性包括3级或更高的神经毒性，如表1中所示。
Figure BDA0002379202310000361
Figure BDA0002379202310000371
在一些实施方案中，与其他方法相比，所述方法减轻与CNS结果或神经毒性相关的症状。例如，与通过不给予所述抑制剂的其他方法治疗的受试者相比，根据本发明方法治疗的受试者可能缺乏可检测的神经毒性症状和/或具有减轻的神经毒性症状，如四肢无力或麻木、丧失记忆、视力和/或智力、无法控制的强迫性和/或强制性行为、妄想、头痛、认知和行为问题(包括丧失运动控制、认知恶化和自主神经***功能障碍以及性功能障碍)。在一些实施方案中，根据本发明方法治疗的受试者可能具有与外周运动神经病、外周感觉神经病、感觉迟钝、神经痛或感觉异常相关的症状减轻。
在一些实施方案中，所述方法减轻与神经毒性相关的结果，包括对神经***和/或脑的损伤，如神经元的死亡。在一些方面，所述方法降低与神经毒性相关的因子(如β淀粉样蛋白(Aβ)、谷氨酸和氧自由基)的水平。在一些实施方案中，所述症状或结果是与神经毒性共同出现的脑水肿。在一些情况下，脑水肿涉及血脑屏障功能和或紧密连接完整性的改变。
在一些实施方案中，与其他方法相比，给予所述药剂减轻与神经毒性相关的症状。例如，与不接受所述药剂或在受试者出现神经毒性的躯体症状时接受所述药剂的受试者相比，用所述抑制剂治疗的受试者可能具有减轻的神经毒性症状，如四肢无力或麻木、丧失记忆、视力和/或智力、无法控制的强迫性和/或强制性行为、妄想、头痛、认知和行为问题(包括丧失运动控制、认知恶化和自主神经***功能障碍以及性功能障碍)。在一些实施方案中，根据本发明方法用所述药剂治疗的受试者可能具有与外周运动神经病、外周感觉神经病、感觉迟钝、神经痛或感觉异常相关的症状减轻。
所述毒性结果或症状是以下中的一种或多种：意识模糊、谵妄、表达性失语、迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫样活动、癫痫(任选地如通过脑电图[EEG]证实)、脑水肿、β淀粉样蛋白(Aβ)水平升高、谷氨酸水平升高、和氧自由基水平升高、脑病、言语困难、震颤、舞蹈手足徐动症、限制自理的症状、外周运动神经病的症状、外周感觉神经病的症状及其组合。
在一些实施方案中，与在不存在所述药剂的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法的方法相比，在直至或直至约开始给予所述治疗剂(例如细胞疗法)后第7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天的当天在所述受试者中神经毒性的毒性结果或症状不可检测或者减轻。在一些方面，神经毒性的所述毒性结果或症状减轻大于50％、60％、70％、80％、90％或更多。
在一些方面，与毒性相关的所述体征或症状包括例如严重神经毒性，包括意识模糊、谵妄、表达性失语、迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫样活动、癫痫(如通过脑电图[EEG]证实)、脑病、言语困难、震颤、舞蹈手足徐动症、限制自理的症状、外周运动神经病的症状、外周感觉神经病的症状或其组合。在一些情况下，与毒性(例如，严重神经毒性)相关的所述体征或症状与3级、4级或5级神经毒性相关。在一些实施方案中，与毒性(例如，严重神经毒性)相关的所述体征或症状在细胞疗法后大于或大于约或约5天、在细胞疗法后大于或大于约或约6天或者在细胞疗法后大于或大于约或约7天出现。
在一些实施方案中，与在受试者表现出神经毒性的体征或症状之后治疗严重神经毒性的受试者相比和/或与在给予所述细胞疗法之后大于5天、大于6天或大于7天治疗严重神经毒性的受试者相比，所述方法改善神经毒性(例如，严重神经毒性)和/或减轻严重神经毒性的体征或症状。在一些情况下，所治疗的受试者不表现出3级或更高的神经毒性，或者大多数所治疗的受试者不表现出3级或更高的神经毒性。
2.细胞因子释放综合征
在一些实施方案中，所述毒性结果或症状与细胞因子释放综合征(CRS)相关。在一些实施方案中，所述CRS是严重CRS和/或所述CRS是3级或更高的CRS。在一些情况下，所述毒性结果或症状是以下中的一种或多种：发热、低血压、缺氧、神经***紊乱或者炎性细胞因子或C反应蛋白(CRP)血清水平升高。在一些实施方案中，与在不存在所述药剂的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法的方法相比，在直至或直至约开始给予所述细胞疗法后第7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天的当天在所述受试者中CRS的所述毒性结果或症状不可检测或者减轻。在一些实施方案中，CRS减轻大于50％、60％、70％、80％、90％或更多。
在一些方面，疗法(如细胞疗法)的所述毒性结果是细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)或者与细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)相关或者指示细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)。在一些情况下，在过继T细胞疗法和向受试者给予其他生物制品后可能发生CRS，例如sCRS。参见Davila等人,Sci Transl Med 6,224ra25(2014)；Brentjens等人,Sci.Transl.Med.5,177ra38(2013)；Grupp等人,N.Engl.J.Med.368,1509–1518(2013)；和Kochenderfer等人,Blood 119,2709–2720(2012)；Xu等人,Cancer Letters343(2014)172-78。
通常，CRS由例如通过T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和/或巨噬细胞介导的过度的全身免疫应答引起。此类细胞可以释放大量炎性介质，如细胞因子和趋化因子。细胞因子可能引发急性炎症应答和/或诱导内皮器官损伤，所述内皮器官损伤可能导致微血管渗漏、心力衰竭或死亡。严重危及生命的CRS可能导致肺浸润和肺损伤、肾衰竭或弥散性血管内凝血。其他严重危及生命的毒性可以包括心脏毒性、呼吸窘迫、神经毒性和/或肝衰竭。
CRS的结果、体征和症状是已知的，并且包括本文所述的那些。在一些实施方案中，在特定剂量方案或给予影响或不影响给定的CRS相关的结果、体征或症状的情况下，可以指定特定结果、体征和症状和/或其量或程度。
在给予表达CAR的细胞的背景下，CRS(如严重CRS)通常在输注表达CAR的细胞之后6-20天发生。参见Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。在一些情况下，CRS在CAR T细胞输注后少于6天或超过20天发生。CRS的发生率和时间可能与在输注时的基线细胞因子水平或肿瘤负荷有关。通常，CRS包括干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和/或白细胞介素(IL)-2的血清水平升高。可能在CRS中快速诱导的其他细胞因子是IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10。
已经研发出CRS标准，其似乎与CRS的发作相关联，以预测哪些患者更可能有发生sCRS的风险(参见Davilla等人Science translational medicine.2014；6(224):224ra25)。因素包括发热、缺氧、低血压、神经***改变、炎性细胞因子血清水平升高，如一组七种细胞因子(IFNγ、IL-5、IL-6、IL-10、Flt-3L、曲动蛋白和GM-CSF)，这七种细胞因子的治疗诱导的升高可以与治疗前肿瘤负荷和sCRS症状相关联。关于CRS的诊断和管理的其他指南是已知的(参见例如，Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95)。在一些实施方案中，反映CRS等级的标准是下表2中详述的那些标准。
Figure BDA0002379202310000401
如本文所用，受试者被认为响应于或继发于细胞疗法或其一剂细胞的给予而产生“严重CRS”(“sCRS”)，如果在给予后所述受试者展示出：(1)至少38摄氏度的发热至少三天；(2)细胞因子升高，其包括(a)与紧跟着给予后的水平相比，下组七种细胞因子中至少两种的最大倍数变化为至少75倍：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、曲动蛋白和IL-5和/或(b)与紧跟着给予后的水平相比，下组七种细胞因子中的至少一种的最大倍数变化为至少250倍：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、曲动蛋白和IL-5；以及(c)至少一种毒性临床症状，如低血压(需要至少一次静脉内血管活性加压药)或缺氧(PO2<90％)或一种或多种神经障碍(包括精神状态改变、迟钝和/或癫痫)。在一些实施方案中，严重CRS包括3级或更高等级的CRS。
在一些实施方案中，与严重CRS或3级CRS相关的结果包括以下中的一种或多种：持续发热例如指定温度的发热(例如大于或大于约38摄氏度)两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或至少连续三天；大于或大于约38摄氏度的发热；与至少两种细胞因子(例如，下组中的至少两种，所述组由干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、曲动蛋白和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα)组成)的治疗前水平相比细胞因子升高，如最大倍数变化例如为至少或至少约75倍，或至少一种这样的细胞因子的最大倍数变化例如为至少或至少约250倍；和/或至少一种毒性临床体征如低血压(例如，如通过至少一次静脉内血管活性加压药测量的)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于或低于约90％)；和/或一种或多种神经障碍(包括精神状态改变、迟钝和癫痫)。
在一些实施方案中，严重CRS包括以下的组合：(1)持续发热(至少38摄氏度的发热至少三天)和(2)CRP的血清水平为至少或至少约20mg/dL。在一些实施方案中，严重CRS包括需要使用两种或更多种血管加压药的低血压或需要机械通气的呼吸衰竭。
在一些实施方案中，所述受试者表现出发热，并且在一些方面，在所述受试者表现出这种发热和/或表现出或已经表现出发热持续特定时间段时对所述受试者进行治疗。
在一些实施方案中，将所述受试者的发热表征为所述受试者的体温等于或高于某一阈值温度或水平(或在所述阈值温度或水平下测量)。在一些方面，所述阈值温度是与至少低度发热、与至少中度发热和/或与至少高度发热相关的温度。在一些实施方案中，所述阈值温度是特定的温度或范围。例如，所述阈值温度可以为或为约38、39、40、41或42摄氏度，和/或可以是为或为约38摄氏度至为或为约39摄氏度的范围、为或为约39摄氏度至为或为约40摄氏度的范围、为或为约40摄氏度至为或为约41度的范围或者为或为约41摄氏度至为或为约42摄氏度的范围。
在一些实施方案中，所述发热是持续发热；在一些方面，在已经确定受试者患有持续发热时，如在这样的确定或在具有诱导毒性的潜力的初始疗法(如靶向疾病的疗法)之后第一次这样的确定的一、二、三、四、五、六或更少小时内，对所述受试者进行治疗。
在一些实施方案中，所述受试者患有和/或被确定为或认为患有持续发热，如果他或她表现出等于或高于所述相关阈值温度的发热，并且在所述受试者的发热或体温不波动约或不波动超过约1℃，并且通常不波动约或不波动超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃的情况下。通常在给定的时间段内(如在24小时、12小时、8小时、6小时、3小时或1小时的时间段内，其可以从发热的最初体征或高于指示阈值的第一个温度开始测量)测量波动高于或等于某一量的这种不存在。例如，在一些实施方案中，受试者被认为或被确定为表现出持续发热，如果他或她表现出至少或至少约38或39摄氏度的发热，其在6小时的时间内、在8小时的时间内、或在12小时的时间内、或在24小时的时间内在温度上波动不超过或不超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃。
在一些实施方案中，所述受试者患有和/或被确定为或认为患有持续发热，如果他或她表现出等于或高于所述相关阈值温度的发热，并且在指定治疗(如旨在降低发热的治疗，如退热药)之后所述受试者的发热或体温不降低，或者不降低或不降低超过指定量(例如，不降低超过1℃，并且通常不波动约或不波动超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃)的情况下。退热药可以包括降低发热的任何药剂，例如化合物、组合物或成分，如已知具有退热作用的许多药剂中的一种，如NSAID(如布洛芬、萘普生、酮洛芬和尼美舒利)、水杨酸盐(如阿司匹林、水杨酸胆碱、水杨酸镁和水杨酸钠)、扑热息痛、对乙酰氨基酚、安乃近、萘丁美酮、Phenaxone、安替比林、解热药。在一些实施方案中，所述退热药是对乙酰氨基酚。在一些实施方案中，它是或包含布洛芬或阿司匹林。例如，受试者被认为患有持续发热，如果他或她表现出或被确定为表现出至少或至少约38或39摄氏度的发热，其在6小时的时间内、在8小时的时间内、或在12小时的时间内、或在24小时的时间内不降低或者不降低超过或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，或者不降低或不降低约1％、2％、3％、4％或5％，即使在用退热药(如泰诺)治疗后。在一些实施方案中，所述退热药的剂量是通常在这样的受试者中有效降低发热或特定类型的发热(如与细菌或病毒感染(例如，局部或全身感染)相关的发热)的剂量。
在一些实施方案中，通过评估指示CRS的生物标记来确定CRS的改善，所述生物标记包括血清因子和炎性细胞因子，如IFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-6、IL-10、IL-1β、IL-8、IL-2、MIP-1、Flt-3L、曲动蛋白和IL-5。在一些实施方案中，在给予所述细胞疗法时和/或在给予所述细胞疗法后进行CRS生物标记的评估或监测。
在一些方面，检测所述生物标记包括进行体外测定。在一些实施方案中，所述体外测定是免疫测定、基于适体的测定、组织学或细胞学测定或mRNA表达水平测定。在一些实施方案中，通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印迹、免疫沉淀、放射免疫测定(RIA)、免疫染色、流式细胞术测定、表面等离子体共振(SPR)、化学发光测定、侧流免疫测定、抑制测定或亲合力测定来检测所述一种或多种生物标记各自的一种或多种的一个或多个参数。
在一些实施方案中，使用特异性结合至少一种生物标记的结合试剂确定所述一种或多种生物标记中至少一种的参数。在一些情况下，所述结合试剂是抗体或其抗原结合片段、适体或核酸探针。
B.干预
在一些例子中，在给予包含所述基因工程化细胞的治疗性细胞组合物之前和/或与其同时给予能够治疗、预防、延迟或减弱毒性产生的所述药剂或其他治疗。在一些例子中，在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时给予能够治疗、预防、延迟或减弱毒性产生的所述药剂或其他治疗。
根据或基于生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记(例如CD14)的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述药剂或治疗。例如，所述评估包括检测，如通过使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。在一些实施方案中，基于所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目确定阈值水平。在一些方面，所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％。在一些情况下，所述阈值水平是所述生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。在一些实施方案中，所述百分比是在所述样品中总白细胞或总CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。在一些情况下，所述百分比是在所述样品中总白细胞或CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。在一些例子中，所述百分比是总白细胞或CD45+细胞中CD14+细胞的百分比。
在一些情况下，所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。
在一些实施方案中，提供了用于选择受试者进行治疗的方法，其包括使生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)与能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)的试剂接触。在所述方法的一些实施方案中，所述生物样品来自作为用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物，并且所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。在一些实施方案中，所述方法还包括选择受试者，在所述受试者中，所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于所描述的阈值水平，从而鉴定出有对所述细胞疗法产生毒性的风险的受试者，或者所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平。
在一些实施方案中，所述方法允许选择受试者以给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予将在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时给予。
在一些实施方案中，能够治疗、预防、延迟或减弱毒性产生的所述药剂(例如，毒性靶向剂)或治疗是类固醇，是细胞因子受体(如IL-6受体、CD122受体(IL-2Rβ受体)或CCR2)的拮抗剂或抑制剂，或者是细胞因子(如IL-6、MCP-1、IL-10、IFN-γ、IL-8或IL-18)的抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是细胞因子受体和/或细胞因子(如TGF-β)的激动剂。在一些实施方案中，所述药剂(例如，激动剂、拮抗剂或抑制剂)是抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，可以将流体推注用作干预，如用于治疗与CRS相关的低血压。在一些实施方案中，目标血球容积水平>24％。在一些实施方案中，所述干预包括使用具有血液或血浆过滤的吸收性树脂技术。在一些情况下，所述干预包括透析、血浆置换或类似技术。在一些实施方案中，可以使用血管加压药(vassopressor)或对乙酰氨基酚。
在一些实施方案中，所述药剂可以与所述疗法(如用于过继细胞疗法的细胞)依次、间歇或同时或在相同组合物中给予。例如，可以在给予所述免疫疗法和/或细胞疗法之前、期间、同时或之后给予所述药剂。
在一些实施方案中，所述药剂是在如本文所述的时间并根据所提供的方法给予。在一些实施方案中，在开始所述免疫疗法和/或细胞疗法后3、4、5、6、7、8、9或10天内(如少于或不超过3、4、5、6、7、8、9或10天)的时间给予所述毒性靶向剂。在一些实施方案中，在开始给予所述免疫疗法和/或细胞疗法后，在或在约1天、2天或3天内给予所述毒性靶向剂。
在一些实施方案中，在开始给予所述免疫疗法和/或细胞疗法后，在受试者不表现出2级或更高的CRS或者2级或更高的神经毒性时向所述受试者给予所述药剂(例如，毒性靶向剂)。在一些方面，在开始给予所述免疫疗法和/或细胞疗法后，在所述受试者不表现出严重CRS或严重神经毒性时给予所述毒性靶向剂。因此，在开始给予所述免疫疗法和/或细胞疗法与所述毒性靶向剂之间，所述受试者是不表现出2级或更高的CRS(如严重CRS)和/或不表现出2级或更高的神经毒性(如严重神经毒性)的受试者。
表3中描述了用于治疗或改善毒性(如严重CRS(sCRS))的干预的非限制性例子。在一些实施方案中，所述干预包括托珠单抗或所描述的其他毒性靶向剂，其可以在所述受试者有高于或约38℃或者高于或高于约39℃的持续或持久发热时。在一些实施方案中，在干预之前，所述受试者发热持续超过10小时、超过12小时、超过16小时或超过24小时。
Figure BDA0002379202310000461
在一些情况下，所述药剂或治疗是单独给予，或作为组合物或配制品(如药物组合物或配制品)的一部分给予，如本文所述。因此，单独的或作为药物组合物的一部分的药剂可以静脉内或口服给予，或者通过任何其他可接受的已知给予途径或如本文所述来给予。
在一些实施方案中，与在已经产生或已经诊断出2级或更高的CRS或神经毒性之后(如在严重(例如，3级或更高的)CRS之后或在严重(例如，3级或更高的)神经毒性之后)(例如在已经出现3级或更高的CRS或神经毒性的体征或症状之后)用所述药剂治疗受试者的方法中所述药剂的剂量或其频率相比，在剂量方案中药剂的剂量或所述药剂的剂量频率有所降低。在一些实施方案中，与在给予所述免疫疗法和/或细胞疗法之后大于3天、4天、5天、6天、1周、2周、三周或更长时间治疗受试者的CRS或神经毒性的方法中所述药剂的剂量或其频率相比，在剂量方案中药剂的剂量或所述药剂的剂量频率有所降低。在一些实施方案中，所述剂量降低大于或大于约1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多倍。在一些实施方案中，所述剂量降低大于或约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些实施方案中，给药频率降低，如每日剂量的数目减少或者给药的天数减少。
C.毒性靶向剂
在一些实施方案中，治疗和/或预防、延迟或减弱对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性的产生或产生对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性的风险的所述药剂(例如，毒性靶向剂)是类固醇(例如，皮质类固醇)。皮质类固醇通常包括糖皮质激素和盐皮质激素。
任何皮质类固醇(例如，糖皮质激素)可以用于本文提供的方法中。在一些实施方案中，糖皮质激素包括合成和非合成的糖皮质激素。示例性糖皮质激素包括但不限于：阿氯米松(alclomethasone)、阿尔孕酮(algestone)、倍氯米松(beclomethasone)(例如二丙酸倍氯米松)、倍他米松(betamethasone)(例如倍他米松17-戊酸酯、倍他米松醋酸钠、倍他米松磷酸钠、倍他米松戊酸酯)、布***(budesonide)、氯倍他索(clobetasol)(例如丙酸氯倍他索)、氯倍他松(clobetasone)、氯可托龙(clocortolone)(例如氯可托龙新戊酸酯)、氯泼尼醇(cloprednol)、皮质酮、可的松(cortisone)和氢化可的松(hydrocortisone)(例如醋酸氢化可的松)、可的伐唑(cortivazol)、地夫可特(deflazacort)、***(desonide)、去羟米松(desoximethasone)、***(dexamethasone)(例如***21-磷酸酯、醋酸***、***磷酸钠)、二氟拉松(diflorasone)(例如二氟拉松二醋酸酯)、二氟可龙(diflucortolone)、二氟泼尼酯(difluprednate)、甘草次酸(enoxolone)、氟扎可特(fluazacort)、氟氯奈德(flucloronide)、氟氢可的松(fludrocortisone)(例如醋酸氟氢可的松)、氟米松(flumethasone)(例如特戊酸氟米松)、氟尼缩松(flunisolide)、氟轻松(fluocinolone)(例如丙酮化氟轻松)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟可丁(fluocortin)、氟可龙(fluocortolone)、氟米龙(fluorometholone)(例如醋酸氟米龙)、氟培龙(fluperolone)(例如醋酸氟培龙)、氟泼尼定(fluprednidene)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、丙酮缩氟氢羟龙(flurandrenolide)、氟替卡松(fluticasone)(例如丙酸氟替卡松)、福莫可他(formocortal)、氯氟舒松(halcinonide)、卤倍他索(halobetasol)、卤米松(halometasone)、卤***(halopredone)、氢可他酯(hydrocortamate)、氢化可的松(例如氢化可的松21-丁酸酯、氢化可的松醋丙酯、醋酸氢化可的松、氢化可的松丁丙酸酯、丁酸氢化可的松、氢化可的松环戊丙酸酯、氢化可的松半琥珀酸酯、氢化可的松丙丁酸酯、磷酸氢化可的松钠、氢化可的松琥珀酸钠、戊酸氢化可的松)、依碳酸氯替泼诺(loteprednol etabonate)、马泼尼酮(mazipredone)、甲羟松(medrysone)、甲***(meprednisone)、甲基***龙(乙丙酸甲基***龙、醋酸甲基***龙、半琥珀酸甲基***龙、甲基***龙琥珀酸钠)、莫米松(mometasone)(如糠酸莫米松)、帕拉米松(如醋酸帕拉米松)、泼尼卡酯(prednicarbate)、***龙(prednisolone)(例如***龙25-二乙氨基乙酸酯、***龙磷酸钠、***龙21-半琥珀酸盐、醋酸***龙；***龙法尼酯、***龙半琥珀酸盐、***龙-21(β-D-葡萄糖醛酸苷)、间磺苯甲酸***龙、***龙司替酸酯、***龙叔丁乙酸酯、四氢邻苯二甲酸***龙)、***(prednisone)、***龙戊酸酯(prednival)、泼尼立定(prednylidene)、利美索龙(rimexolone)、替可的松(tixocortol)、曲安西龙(triamcinolone)(例如曲安奈德(triamcinolone acetonide)、苯曲安奈德(triamcinolone benetonide)、己曲安奈德(triamcinolone hexacetonide)、曲安奈德21-棕榈酸酯、醋酸曲安西龙)。这些糖皮质激素及其盐详细论述于例如以下文献中：Remington's Pharmaceutical Sciences,A.Osol编辑,Mack Pub.Co.,Easton,Pa.(第16版1980)。
在一些例子中，所述糖皮质激素选自可的松、***、氢化可的松、甲基***龙、***龙和***。在一个特定例子中，所述糖皮质激素是***。
在一些实施方案中，所述药剂是皮质类固醇并且以对治疗、改善或减少对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的一种或多种症状是治疗有效的量给予。在一些实施方案中，改善或成功治疗的指示物包括确定未能在毒性分级量表(例如CRS或神经毒性分级量表)上显示相关得分(如小于3的得分)，或在如本文所讨论的分级量表上的分级或严重性的变化(如从4分到3分的变化或者从4分到2、1或0分的变化)。
在一些方面，所述皮质类固醇是以治疗有效剂量提供。治疗有效浓度可以通过在已知的体外或体内(例如动物模型)***中进行测试，凭经验确定。例如，可以通过标准临床技术来确定被给予以改善对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状或副作用的所选择的皮质类固醇的量。此外，可以采用动物模型来帮助确定最佳剂量范围。可以凭经验确定的精确剂量可以取决于具体的治疗制剂、方案和给药时间表、给予途径和疾病的严重性。
可以按有效改善与毒性(如与CRS或神经毒性)相关的一种或多种症状的任何量给予所述皮质类固醇。可以将所述皮质类固醇(例如，糖皮质激素)例如以每剂如下量给予70kg成人受试者：在等于或约0.1与100mg、0.1至80mg、0.1至60mg、0.1至40mg、0.1至30mg、0.1至20mg、0.1至15mg、0.1至10mg、0.1至5mg、0.2至40mg、0.2至30mg、0.2至20mg、0.2至15mg、0.2至10mg、0.2至5mg、0.4至40mg、0.4至30mg、0.4至20mg、0.4至15mg、0.4至10mg、0.4至5mg、0.4至4mg、1至20mg、1至15mg或1至10mg之间。通常，将所述皮质类固醇(如糖皮质激素)以如下量给予普通成人受试者：每剂在等于或约0.4与20mg之间，例如为或为约0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.75mg、0.8mg、0.9mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg或20mg。
在一些实施方案中，可以将所述皮质类固醇例如以如下剂量给予通常体重为约70kg至75kg的普通成人受试者：为或为约0.001mg/kg(受试者)、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg、0.015mg/kg、0.02mg/kg、0.025mg/kg、0.03mg/kg、0.035mg/kg、0.04mg/kg、0.045mg/kg、0.05mg/kg、0.055mg/kg、0.06mg/kg、0.065mg/kg、0.07mg/kg、0.075mg/kg、0.08mg/kg、0.085mg/kg、0.09mg/kg、0.095mg/kg、0.1mg/kg、0.15mg/kg、0.2mg/kg、0.25mg/kg、0.30mg/kg、0.35mg/kg、0.40mg/kg、0.45mg/kg、0.50mg/kg、0.55mg/kg、0.60mg/kg、0.65mg/kg、0.70mg/kg、0.75mg/kg、0.80mg/kg、0.85mg/kg、0.90mg/kg、0.95mg/kg、1mg/kg、1.05mg/kg、1.1mg/kg、1.15mg/kg、1.20mg/kg、1.25mg/kg、1.3mg/kg、1.35mg/kg或1.4mg/kg。
可以将所述皮质类固醇或糖皮质激素(例如***)按以下途径给予：口服(片剂、液体或液体浓缩物)(PO)、静脉内(IV)、肌肉内或通过任何其他已知途径或本文所述的途径(例如，关于药物配制品)。在一些方面，将所述皮质类固醇作为推注给予，并且在其他方面，可以将其在一定时间段内给予。
在一些方面，可以将所述糖皮质激素在超过一天的时间段内给予，如在两天内、在3天内或者在4天或更多天内。在一些实施方案中，可以将所述皮质类固醇每天一次、每天两次或者每天三次或更多次给予。例如，在一些例子中，可以将所述皮质类固醇(例如，***)每天两次以10mg(或等效量)IV给予，持续三天。
在一些实施方案中，将皮质类固醇(例如，糖皮质激素)的剂量以每次治疗连续降低的剂量给予。因此，在一些此类治疗方案中，皮质类固醇的剂量是逐渐减少的。例如，可以将所述皮质类固醇以4mg的初始剂量(或等效剂量，如关于***)给予，并且在每次连续给予时可以降低剂量，使得下一次给予的剂量为3mg，下一次给予为2mg，并且下一次给予为1mg。
通常，所给予的皮质类固醇的剂量取决于特定的皮质类固醇，因为不同皮质类固醇之间存在效力差异。通常应理解，药物的效力不同，并且剂量可以因此而变化，以获得同等的效果。表4示出了各种糖皮质激素和给予途径的在效力方面的等效性。临床给药中的等效效力是熟知的。有关等效类固醇给药(以非时间治疗方式)的信息可以参见1999年3月的British National Formulary(BNF)37。
Figure BDA0002379202310000501
Figure BDA0002379202310000511
因此，在一些实施方案中，将所述类固醇按以下等效剂量量来给予：从或从约1.0mg至20mg***/天，如1.0mg至15mg***/天、1.0mg至10mg***/天、2.0mg至8mg***/天或2.0mg至6.0mg***/天，每个都包含端值。在一些情况下，将所述类固醇以为或为约4mg或者为或为约8mg***/天的等效剂量给予。
在一些实施方案中，如果在用托珠单抗治疗后持续发热，则给予所述类固醇。例如，在一些实施方案中，在继续发热的情况下，将***以最多每6-12小时5-10mg的剂量口服或静脉内给予。在一些实施方案中，将托珠单抗与补氧同时给予或在补氧后给予。
在一些实施方案中，所述药剂是小胶质细胞活性的抑制剂。在一些实施方案中，所述抑制剂的给予调节小神经胶质细胞的活性。在一些实施方案中，所述抑制剂是抑制小神经胶质细胞中的信号传导通路的活性的拮抗剂。在一些实施方案中，所述小神经胶质细胞抑制剂影响小神经胶质细胞的体内平衡、存活和/或增殖。在一些实施方案中，所述抑制剂靶向CSF1R信号传导通路。在一些实施方案中，所述抑制剂是CSF1R的抑制剂。在一些实施方案中，所述抑制剂是小分子。在一些情况下，所述抑制剂是抗体。
在一些方面，给予所述抑制剂产生一种或多种选自以下的效应：小神经胶质细胞体内平衡和生存力的改变、小胶质细胞增殖的减少或阻断、小胶质细胞的减少或消除、小神经胶质细胞激活的降低、来自小神经胶质细胞的一氧化氮产生的减少、小神经胶质细胞中一氧化氮合酶活性的降低、或受小神经胶质细胞激活影响的对运动神经元的保护。在一些实施方案中，与即将开始给予所述抑制剂之前相比，所述药剂改变CSF1R抑制的血清或血液生物标记的水平，或者降低尿液胶原蛋白1型交联N-端肽(NTX)的水平。在一些实施方案中，给予所述药剂短暂抑制小神经胶质细胞活性的活性，和/或其中对小神经胶质细胞活性的抑制不是永久性的。在一些实施方案中，给予所述药剂短暂抑制CSF1R的活性，和/或其中对CSF1R活性的抑制不是永久性的。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。在一些实施方案中，所述方法涉及给予小神经胶质细胞活性的抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是抑制小神经胶质细胞中信号传导通路的活性的拮抗剂。在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂影响小神经胶质细胞的体内平衡、存活和/或增殖。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性结合CSF-1，特异性结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)激活，激活CB2受体和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)，上调微小RNA-124(miR-124)，抑制小神经胶质细胞中的一氧化氮产生，抑制一氧化氮合酶，或者激活转录因子NRF2(也称为核因子(红细胞系衍生的2)样2或NFE2L2)。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂靶向CSF1(也称为巨噬细胞集落刺激因子MCSF)。在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂影响MCSF刺激的M-CSF受体的磷酸化(Pryer等人Proc Am Assoc Cancer Res,AACR Abstract nr DDT02-2(2009))。在一些情况下，降低小胶质细胞活性的所述药剂是MCS110(国际专利申请公开号WO 2014001802；临床试验研究记录号：A1 NCT00757757；NCT02807844；NCT02435680；NCT01643850)。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是靶向CSF1通路的小分子。在一些实施方案中，所述药剂是结合CSF1R的小分子。在一些实施方案中，所述药剂是通过与ATP竞争结合CSF1R激酶而抑制CSF1R激酶活性的小分子。在一些实施方案中，所述药剂是抑制CFS1R受体激活的小分子。在一些情况下，CSF-1配体与CSF1R的结合受到抑制。在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是美国专利申请公开号US 20160032248中描述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，所述药剂是选自PLX-3397、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、PLX73086(AC-708)、DCC-3014、AZD6495、GW2580、Ki20227、BLZ945、PLX647、PLX5622的小分子抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是描述于以下文献中的任何抑制剂：Conway等人,Proc Natl Acad Sci U S A,102(44):16078-83(2005)；Dagher等人,Journal of Neuroinflammation,12:139(2015)；Ohno等人,Mol Cancer Ther.5(11):2634-43(2006)；von Tresckow等人,Clin Cancer Res.,21(8)(2015)；Manthey等人MolCancer Ther.(8(11):3151-61(2009)；Pyonteck等人,Nat Med.19(10):1264–1272(2013)；Haegel等人,Cancer Res AACR Abstract nr 288(2015)；Smith等人,Cancer Res AACRAbstract nr 4889(2016)；临床试验研究记录号：NCT01525602；NCT02734433；NCT02777710；NCT01804530；NCT01597739；NCT01572519；NCT01054014；NCT01316822；NCT02880371；NCT02673736；国际专利申请公开号WO 2008063888A2、WO 2006009755A2；美国专利申请公开号US 20110044998、US 2014/0065141和US 2015/0119267。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是4-((2-(((1R,2R)-2-羟基环己基)氨基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶甲酰胺(BLZ945)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000531
其中R1是烷基吡唑或烷基甲酰胺，并且R2是羟基环烷基
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是5-((5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)甲基)-N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)吡啶-2-胺,N-[5-[(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)甲基]-2-吡啶基]-6-(三氟甲基)-3-吡啶甲胺)(PLX 3397)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是5-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基甲基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-2-吡啶胺二盐酸盐(PLX647)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000532
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000541
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US7893075中描述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是4-氰基-N-[2-(1-环己烯-1-基)-4-[1-[(二甲基氨基)乙酰基]-4-哌啶基]苯基]-1H-咪唑-2-甲酰胺单盐酸盐(JNJ28312141)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000542
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US7645755中描述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是1H-咪唑-2-甲酰胺,5-氰基-N-(2-(4,4-二甲基-1-环己烯-1-基)-6-(四氢-2,2,6,6-四甲基-2H-吡喃-4-基)-3-吡啶基)-,4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸N-(2-(4,4-二甲基环己-1-烯基)-6-(2,2,6,6-四甲基四氢吡喃-4-基)吡啶-3-基)酰胺,4-氰基-N-(2-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-6-(2,2,6,6-四甲基-四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-1H-咪唑-2-甲酰胺(JNJ-40346527)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000543
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000551
或其药学上可接受的盐(国际专利申请公开号WO 2009099553)。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是4-(2,4-二氟苯胺基)-7-乙氧基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-3-甲酰胺(AZD6495)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000552
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞活性的所述药剂是N-{4-[(6,7-二甲氧基-4-喹啉基)氧基]-2-甲氧基苯基}-N0-[1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]脲(Ki20227)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000553
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂是靶向CSF1通路的抗体。在一些实施方案中，所述药剂是结合CSF1R的抗体。在一些实施方案中，所述抗CSF1R抗体阻断CSF1R二聚化。在一些实施方案中，所述抗CSF1R抗体阻断由结构域D4和D5形成的CSF1R二聚化界面(Ries等人Cancer Cell 25(6):846-59(2014))。在一些情况下，所述药剂选自艾马珠单抗(RG7155；RO5509554)、卡比拉珠单抗(Cabiralizumab)(FPA-008)、LY-3022855(IMC-CS4)、AMG-820、TG-3003、MCS110、H27K15、12-2D6、2-4A5(Rovida和Sbarba,J Clin CellImmunol.6:6(2015)；临床试验研究记录号：NCT02760797；NCT01494688；NCT02323191；NCT01962337；NCT02471716；NCT02526017；NCT01346358；NCT02265536；NCT01444404；NCT02713529；NCT00757757；NCT02807844；NCT02435680；NCT01643850)。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂是四环素抗生素。例如，所述药剂影响小胶质细胞中的IL-1b、IL-6、TNF-α或iNOS浓度(
Figure BDA0002379202310000561
等人PNAS 95(26):15769-15774(1998)；临床试验研究记录号：NCT01120899)。在一些实施方案中，所述药剂是阿片样物质拮抗剂(Younger等人Pain Med.10(4):663-672(2009))。在一些实施方案中，所述药剂减少谷氨酸能神经传递(美国专利号5,527,814)。在一些实施方案中，所述药剂调节NFkB信号传导(Valera等人J.Neuroinflammation 12:93(2015)；临床试验研究记录号：NCT00231140)。在一些实施方案中，所述药剂靶向***素受体(Ramírez等人J.Neurosci 25(8):1904-13(2005))。在一些实施方案中，所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、利鲁唑、来那度胺和***素(任选地WIN55或212-2)。
据信在一些情况下，来自小神经胶质细胞的一氧化氮产生导致或增加神经毒性。在一些实施方案中，所述药剂调节或抑制来自小神经胶质细胞的一氧化氮产生。在一些实施方案中，所述药剂抑制一氧化氮合酶(NOS)。在一些实施方案中，所述NOS抑制剂是Ronopterin(VAS-203)，也称为4-氨基-四氢生物蝶呤(4-ABH4)。在一些实施方案中，所述NOS抑制剂是辛顿司他(cindunistat)、A-84643、ONO-1714、L-NOARG、NCX-456、VAS-2381、GW-273629、NXN-462、CKD-712、KD-7040或胍基乙基二硫化物。在一些实施方案中，所述药剂是
Figure BDA0002379202310000562
等人,Cell Stem Cell.2012年11月2日；11(5):620-32中描述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，所述药剂阻断T细胞运输，如向中枢神经***的运输。在一些实施方案中，阻断T细胞运输可以减少或阻止免疫细胞穿过血管壁进入中枢神经***，包括穿过血脑屏障。在一些情况下，激活的抗原特异性T细胞在CNS中重新激活后产生促炎性细胞因子，包括IFN-γ和TNF，从而导致常驻细胞(如小神经胶质细胞和星形胶质细胞)激活。参见
Figure BDA0002379202310000563
等人,Neurology.2009年6月2日；72(22):1922–1930。因此，在一些实施方案中，例如通过阻断运输和/或抑制此类细胞穿过血脑屏障的能力将激活的T细胞与小胶质细胞隔离可以减少或消除小胶质细胞激活。在一些实施方案中，所述药剂抑制免疫细胞(包括T细胞)上的粘附分子。在一些实施方案中，所述药剂抑制整合素。在一些实施方案中，所述整合素是α-4整合素。在一些实施方案中，所述药剂是那他珠单抗
Figure BDA0002379202310000572
在一些实施方案中，所述药剂调节细胞表面受体。在一些实施方案中，所述药剂调节鞘氨醇-1-磷酸(S1P)受体，如S1PR1或S1PR5。在一些实施方案中，所述药剂导致细胞受体(如鞘氨醇-1-磷酸(S1P)受体，如S1PR1或S1PR5)的内化。在一些实施方案中，所述药剂是芬戈莫德
Figure BDA0002379202310000573
或奥扎莫德(ozanimod)(RPC-1063)。
据信转录因子NRF2例如通过打开在其启动子区中含有顺式作用元件的基因来调节抗氧化反应。这种元件的例子包括抗氧化反应元件(ARE)。在一些实施方案中，所述药剂激活NRF2。在一些实施方案中，激活小胶质细胞中的NRF2降低小胶质细胞对IFN和LPS的反应性。在一些实施方案中，激活NRF2抑制、减缓或减少脱髓鞘、轴突丢失、神经元死亡和/或少突胶质细胞死亡。在一些实施方案中，所述药剂上调NRF2调节的细胞的细胞保护通路。在一些实施方案中，激活NRF2的所述药剂是富马酸二甲酯
Figure BDA0002379202310000574
在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号8,399,514中描述的任何抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是
Figure BDA0002379202310000575
等人,Cell Stem Cell.2012年11月2日；11(5):620-32中描述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂是(4S,4aS,5aR,12aS)-4,7-双(二甲基氨基)-3,10,12,12a-四羟基-1,11-二氧代-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八氢并四苯-2-甲酰胺(米诺环素)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利申请公开号US20100190755中描述的任何化合物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000571
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂是3-(7-氨基-3-氧代-1H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(来那度胺)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000581
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂是(4R,4aS,7aR,12bS)-4a,9-二羟基-3-丙-2-烯基-2,4,5,6,7a,13-六氢-1H-4,12-甲醇苯并呋喃并[3,2-e]异喹啉-7-酮(纳洛酮)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US 8247425中描述的任何化合物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000582
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂是2-氨基-6-(三氟甲氧基)苯并噻唑,6-(三氟甲氧基)苯并[d]噻唑-2-胺或6-(三氟甲氧基)-1,3-苯并噻唑-2-胺(利鲁唑)或其药学上可接受的盐或其衍生物，如美国专利号US 5527814中所述。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000583
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂是小神经胶质细胞中信号传导通路的调节剂。在一些情况下，所述药剂降低小神经胶质细胞信号传导。在一些实施方案中，所述药剂是GM-CSF(CSF2)抑制剂。在其他实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂是离子通道阻断剂。在一些特定实施方案中，所述药剂是钙通道阻断剂。例如，在一些特定例子中，所述药剂是二氢吡啶钙通道阻断剂。在一些实施方案中，所述药剂是微小RNA抑制剂。例如，所述药剂靶向miR-155。在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂选自MOR103、尼莫地平、IVIg和LNA-抗miR-155(Butoxsky等人Ann Neurol.,77(1):75-99(2015)和Sanz等人,Br J Pharmacol.167(8):1702–1711(2012)；Winter等人,Ann Clin andTransl Neurol.2328-9503(2016)；临床试验研究记录号：NCT01517282、NCT00750867)。
在一些实施方案中，降低小胶质细胞激活的所述药剂是3-(2-甲氧基乙基)5-丙-2-基2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸酯(尼莫地平)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US 3799934中描述的任何抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
Figure BDA0002379202310000591
或其药学上可接受的盐。
在一些情况下，将降低小胶质细胞激活的所述药剂以仅影响中枢神经***和/或不影响肿瘤相关巨噬细胞的形式给予。在一些实施方案中，所述药剂促进小神经胶质细胞休眠，但不消除或减少小神经胶质细胞的数目。在一些实施方案中，所述方法涉及抑制特别是脑中的小神经胶质细胞活性，如Ponomarev等人,Nature Medicine,(1):64–70(2011)中所述。
降低小胶质细胞激活的示例性药剂以及用于给予此类药剂的示例性给药方案示于下表5中。
Figure BDA0002379202310000592
Figure BDA0002379202310000601
Figure BDA0002379202310000611
D.其他药剂
在一些实施方案中，治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状的所述药剂或其他治疗是靶向细胞因子的药剂或其他治疗，例如是细胞因子的拮抗剂或抑制剂，所述细胞因子是例如转化生长因子β(TGFβ)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、IL-2、MIP1β(CCL4)、TNFα、IL-1、干扰素γ(IFN-γ)或单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)。在一些实施方案中，治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状的所述药剂是靶向(例如抑制或是其拮抗剂)细胞因子受体的药剂，所述细胞因子受体是例如IL-6受体(IL-6R)、IL-2受体(IL-2R/CD25)、MCP-1(CCL2)受体(CCR2或CCR4)、TGF-β受体(TGF-βI、II或III)、IFN-γ受体(IFNGR)、MIP1β受体(例如，CCR5)、TNFα受体(例如，TNFR1)、IL-1受体(IL1-Rα/IL-1Rβ)或IL-10受体(IL-10R)。
可以通过标准临床技术来确定治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状的所选择的药剂被给予以改善对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状或副作用的量。示例性的不良事件包括但不限于丙氨酸氨基转移酶的增加、天冬氨酸氨基转移酶的增加、寒战、发热型嗜中性粒细胞减少症、头痛、低血压、左心室功能障碍、脑病、脑积水、癫痫发作和/或震颤。
在一些实施方案中，将所述药剂按以下剂量量来给予：从或从约30mg至5000mg，如50mg至1000mg、50mg至500mg、50mg至200mg、50mg至100mg、100mg至1000mg、100mg至500mg、100mg至200mg、200mg至1000mg、200mg至500mg或500mg至1000mg。
在一些实施方案中，将所述药剂按以下剂量来给予：从或从约0.5mg/kg至100mg/kg，如从或从约1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至25mg/kg、1mg/kg至10mg/kg、1mg/kg至5mg/kg、5mg/kg至100mg/kg、5mg/kg至50mg/kg、5mg/kg至25mg/kg、5mg/kg至10mg/kg、10mg/kg至100mg/kg、10mg/kg至50mg/kg、10mg/kg至25mg/kg、25mg/kg至100mg/kg、25mg/kg至50mg/kg至50mg/kg至100mg/kg。在一些实施方案中，将所述药剂按以下剂量量来给予：从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg，每个都包含端值。在一些方面，将所述药剂按以下剂量量来给予：至少或至少约或约1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg、8mg/kg、10mg/kg或更多。在一些实施方案中，将所述药剂以4mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
在一些实施方案中，所述药剂是通过注射来给予，例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下注射(subconjectval injection)、结膜下注射(subconjuntival injection)、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、球后注射、球周注射或后近巩膜(posteriorjuxtascleral)递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内给予以及(如果需要用于局部治疗的话)病灶内给予。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。
在一些实施方案中，所述药剂的量以约或大约每天两次、每天、每隔一天、每周三次、每周、每隔一周或每个月一次来给予。
在一些实施方案中，所述药剂是作为组合物或配制品(例如如下文所述的药物组合物或配制品)的一部分给予。因此，在一些情况下，如下所述给予包含所述药剂的组合物。在其他方面，所述药剂是单独给予，并且例如关于组合物和配制品，可以通过任何已知的可接受的给予途径或通过本文所述的途径来给予。
在一些实施方案中，治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状的所述药剂是抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述药剂是托珠单抗、司妥昔单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛珠单抗(CDP6038)、艾西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301或FM101。
在一些实施方案中，所述药剂是IL-6或IL-6受体(IL-6R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和IL-6活性的抗体，如结合至IL-6或IL-6R的抗体或抗原结合片段。例如，在一些实施方案中，所述药剂是或包含抗IL-6R抗体托珠单抗(阿特利珠单抗(atlizumab))或萨瑞鲁单抗。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号8,562,991中描述的抗IL-6R抗体。在一些情况下，靶向IL-6的所述药剂是抗IL-6抗体，如司妥昔单抗、艾西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301、FM101或奥洛珠单抗(CDP6038)。在一些方面，所述药剂可以通过抑制配体-受体相互作用来中和IL-6活性。这种通用型途径的可行性已经用针对白细胞介素-1的天然存在受体拮抗剂来证明。参见Harmurn,C.H.等人,Nature(1990)343:336-340。在一些方面，所述IL-6/IL-6R拮抗剂或抑制剂是IL-6突变蛋白，如美国专利号5591827中描述的IL-6突变蛋白。在一些实施方案中，作为IL-6/IL-6R的拮抗剂或抑制剂的所述药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是托珠单抗。在一些实施方案中，将托珠单抗根据所提供的方法作为早期干预来给予，剂量从或从约1mg/kg至12mg/kg，如为或为约4mg/kg、8mg/kg或10mg/kg。在一些实施方案中，将托珠单抗通过静脉内输注来给予。在一些实施方案中，给予托珠单抗用于持续10小时的高于39℃的持续发热，所述发热对于对乙酰氨基酚无反应。在一些实施方案中，如果在初始剂量48小时后症状复发，则提供托珠单抗的第二次给予。
在一些实施方案中，所述药剂是TGF-β或TGF-β受体(例如，TGF-β受体I、II或III)的激动剂或刺激剂。在一些方面，所述药剂是增加TGF-β活性的抗体，如结合至TGF-β或其一种受体的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，作为TGF-β和/或其受体的激动剂或刺激剂的所述药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是MCP-1(CCL2)或MCP-1受体(例如，MCP-1受体CCR2或CCR4)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和MCP-1活性的抗体，如结合MCP-1或其一种受体(CCR2或CCR4)的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述MCP-1拮抗剂或抑制剂是描述于以下文献中的任一种：Gong等人J Exp Med.1997年7月7日；186(1):131–137或Shahrara等人J Immunol 2008；180:3447-3456。在一些实施方案中，作为MCP-1和/或其受体(CCR2或CCR4)的拮抗剂或抑制剂的所述药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是IFN-γ或IFN-γ受体(IFNGR)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和IFN-γ活性的抗体，如结合至IFN-γ或其受体(IFNGR)的抗体或抗原结合片段。在一些方面，所述IFN-γ中和抗体是描述于以下文献中的任一种：Dobber等人Cell Immunol.1995年2月；160(2):185-92或Ozmen等人J Immunol.1993年4月1日；150(7):2698-705。在一些实施方案中，作为IFN-γ/IFNGR的拮抗剂或抑制剂的所述药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是IL-10或IL-10受体(IL-10R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和IL-10活性的抗体，如结合至IL-10或IL-10R的抗体或抗原结合片段。在一些方面，所述IL-10中和抗体是描述于以下文献中的任一种：Dobber等人CellImmunol.1995年2月；160(2):185-92或Hunter等人J Immunol.2005年6月1日；174(11):7368-75。在一些实施方案中，作为IL-10/IL-10R的拮抗剂或抑制剂的所述药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是IL-1或IL-1受体(IL-1R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是IL-1受体拮抗剂，其是IL-1R的修饰形式，如阿那白滞素(anakinra)(参见例如，Fleischmann等人,(2006)Annals of the rheumatic diseases.65(8):1006–12)。在一些方面，所述药剂是中和IL-1活性的抗体，如结合至IL-1或IL-1R的抗体或抗原结合片段，如卡那单抗(canakinumab)(也参见EP 2277543)。在一些实施方案中，作为IL-1/IL-1R的拮抗剂或抑制剂的所述药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是肿瘤坏死因子(TNF)或肿瘤坏死因子受体(TNFR)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是阻断TNF活性的抗体，如结合至TNF(如TNFα)或其受体(TNFR，例如TNFRp55或TNFRp75)的抗体或抗原结合片段。在一些方面，所述药剂选自英夫利昔、阿达木单抗、聚乙二醇化赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、戈利木单抗和依那西普。在一些实施方案中，作为TNF/TNFR的拮抗剂或抑制剂的所述药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。在一些实施方案中，所述药剂是影响TNF的小分子，如来那度胺(参见例如，Muller等人(1999)Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters.9(11):1625)。
在一些实施方案中，所述药剂是通过Janus激酶(JAK)和两个信号传导子及转录激活子(STAT)信号传导级联进行的信号传导的拮抗剂或抑制剂。JAK/STAT蛋白是细胞因子和细胞因子受体信号传导的常见组分。在一些实施方案中，作为JAK/STAT的拮抗剂或抑制剂的所述药剂例如为鲁索替尼(参见例如，Mesa等人(2012)Nature Reviews Drug Discovery.11(2):103-104)、托法替尼(也称为Xeljanz、Jakvinus tasocitinib和CP-690550)、巴瑞替尼(也称为LY-3009104、INCB-28050)、非戈替尼(Filgotinib)(G-146034、GLPG-0634)、甘多替尼(Gandotinib)(LY-2784544)、来他替尼(CEP-701)、莫美罗替尼(Momelotinib)(GS-0387、CYT-387)、帕克替尼(Pacritinib)(SB1518)和乌帕替尼(Upadacitinib)(ABT-494)。在一些实施方案中，所述药剂是小分子、蛋白质或肽或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是激酶抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)的抑制剂。在一些实施方案中，所述抑制剂是或包含依鲁替尼或阿卡替尼(acalabrutinib)(参见例如，Barrett等人,ASH58th Annual Meeting San Diego,CA 2016年12月3日-6日,Abstract 654；Ruella等人,ASH 58th Annual Meeting San Diego,CA2016年12月3日-6日,Abstract 2159)。在一些实施方案中，所述药剂是如以下美国专利号中所述的抑制剂：7,514,444；8,008,309；8,476,284；8,497,277；8,697,711；8,703,780；8,735,403；8,754,090；8,754,091；8.957,079；8,999,999；9,125,889；9,181,257；或9,296,753。
在一些实施方案中，可以使用装置(如使用血液或血浆过滤的吸收性树脂技术)降低细胞因子的水平。在一些实施方案中，用于降低细胞因子水平的所述装置是物理细胞因子吸收器，如体外细胞因子吸收器。在一些实施方案中，物理细胞因子吸收器可以用于以离体的体外方式从血流消除细胞因子。在一些实施方案中，所述药剂是多孔聚合物。在一些实施方案中，所述药剂是CytoSorb(参见例如，Basu等人Indian J Crit Care Med.(2014)18(12):822–824)。
III.细胞疗法和工程化细胞
在一些实施方案中，根据所提供的方法和制品使用的所述细胞疗法(例如T细胞疗法)包括给予含有表达重组受体的工程化细胞的治疗性细胞组合物，所述重组受体被设计用于识别和/或特异性结合至与所述疾病或病症相关的分子并引起应答，如在与此类分子结合后针对此类分子的免疫应答。在一些实施方案中，所述制品包含含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物的细胞疗法以及用于根据或基于生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记(例如CD14)的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述细胞疗法的说明书。所述受体可以包括嵌合受体(例如，嵌合抗原受体(CAR))和其他转基因抗原受体(包括转基因T细胞受体(TCR))。
在一些实施方案中，所述细胞含有或经工程化以含有工程化受体(例如工程化抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR))或T细胞受体(TCR)。还提供了此类细胞群、含有此类细胞和/或富集此类细胞的组合物，如其中富集或选择某种类型的细胞如T细胞或CD8+或CD4+细胞。所述组合物包括用于给予(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供了用于向受试者(例如，患者)给予所述细胞和组合物的治疗方法。
因此，在一些实施方案中，所述细胞包括经由基因工程引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，通过以下方式完成基因转移：首先刺激细胞，如通过将其与诱导反应(如增殖、存活和/或激活)的刺激物进行组合，例如如通过细胞因子或激活标记的表达测量的，然后转导激活的细胞，并且在培养物中扩增至足以用于临床应用的数目。
A.重组受体
所述细胞通常表达重组受体如抗原受体(包括功能性非TCR抗原受体，例如嵌合抗原受体(CAR))和其他抗原结合受体如转基因T细胞受体(TCR)。所述受体还包括其他嵌合受体。
1.嵌合抗原受体(CAR)
在一些实施方案中，提供了工程化细胞(如T细胞)，其表达对特定抗原(或标记或配体)具有特异性的CAR，所述特定抗原是例如在特定细胞类型的表面上表达的抗原。在一些实施方案中，所述抗原是多肽。在一些实施方案中，它是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶向细胞或组织相比，所述抗原在所述疾病或病症的细胞(例如，肿瘤细胞或致病细胞)上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，所述抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。
在特定实施方案中，所述重组受体(如嵌合受体)含有细胞内信号传导区域，所述细胞内信号传导区域包括胞质信号传导结构域(也可互换地称为细胞内信号传导结构域)，如能够在T细胞中诱导初级激活信号的胞质(细胞内)区域，例如T细胞受体(TCR)组分的胞质信号传导结构域(例如CD3-ζ(CD3ζ)链的ζ链的胞质信号传导结构域或其功能变体或信号传导部分)；和/或所述细胞内信号传导区域包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。
在一些实施方案中，所述嵌合受体还含有特异性结合至配体(例如抗原)抗原的细胞外配体结合结构域。在一些实施方案中，所述嵌合受体是CAR，其含有特异性结合至抗原的细胞外抗原识别结构域。在一些实施方案中，所述配体(如抗原)是在细胞表面上表达的蛋白质。在一些实施方案中，所述CAR是TCR样CAR，并且所述抗原是加工过的肽抗原，如细胞内蛋白的肽抗原，其与TCR一样在主要组织相容性复合物(MHC)分子的背景下在细胞表面上被识别。
示例性抗原受体(包括CAR)以及将此类受体工程化并引入细胞中的方法包括例如国际专利申请公开号WO 200014257、WO 2013126726、WO 2012/129514、WO 2014031687、WO2013/166321、WO 2013/071154、WO 2013/123061；美国专利申请公开号US 2002131960、US2013287748、US 20130149337；美国专利号：6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118；以及欧洲专利申请号EP2537416中描述的那些，和/或Sadelain等人,Cancer Discov.2013年4月；3(4):388-398；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Turtle等人,Curr.Opin.Immunol.,2012年10月；24(5):633-39；Wu等人,Cancer,2012年3月18(2):160-75描述的那些。在一些方面，所述抗原受体包括如美国专利号7,446,190中描述的CAR，以及国际专利申请公开号WO/2014055668 A1中描述的那些。CAR的例子包括如在任何上述出版物中披露的CAR，所述出版物是例如WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190、美国专利号8,389,282；Kochenderfer等人,2013,Nature Reviews Clinical Oncology,10,267-276(2013)；Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；以及Brentjens等人,Sci Transl Med.2013 5(177)。还参见WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190和美国专利号8,389,282。
在一些实施方案中，所述CAR被构建为具有对特定抗原(或标记或配体)的特异性，所述特定抗原是例如在过继疗法靶向的特定细胞类型中表达的抗原(例如，癌症标记)和/或旨在诱导衰减应答的抗原(如在正常或未患病细胞类型上表达的抗原)。因此，所述CAR通常在其细胞外部分中包括一种或多种抗原结合分子，如一种或多种抗原结合片段、结构域或部分，或者一种或多种抗体可变结构域，和/或抗体分子。在一些实施方案中，所述CAR包括抗体分子的一个或多个抗原结合部分，如源自单克隆抗体(mAb)的可变重链(VH)和可变轻链(VL)的单链抗体片段(scFv)。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分作为重组受体(如抗原受体)的一部分在细胞上表达。所述抗原受体包括功能性非TCR抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)。通常，含有针对肽-MHC复合物展现出TCR样特异性的抗体或抗原结合片段的CAR也可以称为TCR样CAR。在一些实施方案中，在一些方面，对TCR样CAR的MHC-肽复合物具有特异性的所述细胞外抗原结合结构域通过接头和/或一个或多个跨膜结构域与一种或多种细胞内信号传导组分连接。在一些实施方案中，此类分子通常可以通过天然抗原受体(如TCR)模拟或接近信号，并且任选地通过这种受体与共刺激受体组合模拟或接近信号。
在一些实施方案中，所述重组受体(如嵌合受体(例如CAR))包括与抗原(或配体)结合(如特异性结合)的配体结合结构域。所述嵌合受体靶向的抗原包括在经由过继细胞疗法靶向的疾病、病症或细胞类型的背景下表达的抗原。所述疾病和病症包括增殖性、肿瘤性和恶性疾病和障碍，包括癌症和肿瘤，包括血液癌、免疫***癌症，如淋巴瘤、白血病和/或骨髓瘤，如B型白血病、T型白血病和骨髓性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，所述抗原(或配体)是多肽。在一些实施方案中，它是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，如与正常或非靶向细胞或组织相比，所述抗原(或配体)在所述疾病或病症的细胞(例如，肿瘤或致病细胞)上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，所述抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。
在一些实施方案中，所述CAR含有抗体或抗原结合片段(例如scFv)，其特异性识别在细胞表面上表达的抗原(如完整抗原)。
在一些实施方案中，所述抗原(或配体)是肿瘤抗原或癌症标记。在一些实施方案中，所述抗原(或配体)是或包括受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CA9，也称为G250或CAIX)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、CD19、CD20、CD22、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、III型表皮生长因子受体突变体(EGFR vIII)、叶酸结合蛋白(FBP)、Fc受体样5(FCRL5，也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、人高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、IL-22受体α(IL-22Rα或IL-22R-α)、IL-13受体α2(IL-13Rα2或IL-13R-α2)、激酶***区受体(kdr)、κ轻链、富含亮氨酸重复序列蛋白家族成员8A(LRRC8A)、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、黑素瘤优先表达抗原(PRAME)、存活素、TAG72、B7-H3、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CD171、人白细胞抗原A1(HLA-AI)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、叶酸受体-α、CD44v6、CD44v7/8、αvβ6整合素(avb6整合素)、8H9、神经细胞粘附分子(NCAM)、血管内皮生长因子受体(VEGF受体或VEGFR)、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、NKG2D配体、双抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素(MSLN)、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、***特异性抗原、***干细胞抗原(PSCA)、***特异性膜抗原(PSMA)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、黑色素A(MART-1)、糖蛋白100(gp100)、癌胚胎抗原、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ-异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)、癌胚抗原(CEA)、***受体、孕酮受体、CD123、CD133、c-Met、O-乙酰化GD2(OGD2)、L1-CAM的CE7表位、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD138、病原体特异性或病原体表达的抗原、和与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，所述受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，所述受体靶向的抗原是CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。
在一些实施方案中，所述抗原是病原体特异性抗原。在一些实施方案中，所述抗原是病毒抗原(如来自HIV、HCV、HBV等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。
在一些实施方案中，所述CAR含有TCR样抗体，如抗体或抗原结合片段(例如scFv)，其特异性识别作为MHC-肽复合物存在于细胞表面上的细胞内抗原(如肿瘤相关抗原)。在一些实施方案中，识别MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以作为重组受体(如抗原受体)的一部分在细胞上表达。所述抗原受体包括功能性非TCR抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)。通常，含有针对肽-MHC复合物展现出TCR样特异性的抗体或抗原结合片段的CAR也可以称为TCR样CAR。
在一些实施方案中，所述scFv源自FMC63。FMC63是指针对表达人源CD19的Nalm-1和-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.等人(1987).Leucocyte typing III.302)。所述FMC63抗体包含分别在SEQ ID NO:43和44中所示的CDRH1和H2、和在SEQ ID NO:45或59中所示的CDRH3、和在SEQ ID NO:40中所示的CDRL1、和在SEQ ID NO:41或60中所示的CDR L2、和在SEQ ID NO:42或61中所示的CDR L3。所述FMC63抗体包含含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，所述svFv包含含有SEQ ID NO:40中所示的CDRLl、SEQ ID NO:41或60中所示的CDRL2和SEQ ID NO:42或61中所示的CDRL3的可变轻链，和/或含有SEQ ID NO:43中所示的CDRH1、SEQ ID NO:44中所示的CDRH2和SEQ ID NO:45或59中所示的CDRH3的可变重链。在一些实施方案中，所述scFv包含SEQ ID NO:46中所示的FMC63的可变重链区和SEQ ID NO:47中所示的FMC63的可变轻链区。在一些实施方案中，所述可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，所述接头如SEQ ID NO:29中所示。在一些实施方案中，所述scFv依次包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，所述scFv依次包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，所述svFc由SEQ ID NO:30中所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:30展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列编码。在一些实施方案中，所述scFv包含SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:48展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，所述scFv源自SJ25C1。SJ25C1是指针对表达人源CD19的Nalm-1和-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.等人(1987).Leucocyte typing III.302)。所述SJ25C1抗体包含分别在SEQ ID NO:52-54中所示的CDRH1、H2和H3，以及分别在SEQ IDNO:49-51中所示的CDRL1、L2和L3序列。所述SJ25C1抗体包含含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，所述svFv包含含有SEQ ID NO:49中所示的CDRLl、SEQ ID NO:50中所示的CDRL2和SEQID NO:51中所示的CDRL3的可变轻链，和/或含有SEQ ID NO:52中所示的CDRH1、SEQ ID NO:53中所示的CDRH2和SEQ ID NO:54中所示的CDRH3的可变重链。在一些实施方案中，所述scFv包含SEQ ID NO:55中所示的SJ25C1的可变重链区和SEQ ID NO:56中所示的SJ25C1的可变轻链区。在一些实施方案中，所述可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，所述接头如SEQ ID NO:57所示。在一些实施方案中，所述scFv依次包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，所述scFv依次包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，所述scFv包含SEQID NO:58中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:58展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。提及“主要组织相容性复合物”(MHC)是指含有多态性肽结合位点或结合沟的蛋白质，通常是糖蛋白，在一些情况下，所述蛋白质可以与多肽的肽抗原(包括由细胞机构处理的肽抗原)复合。在一些情况下，MHC分子可以在细胞表面上展示或表达，包括作为与肽的复合物，即MHC-肽复合物，用于呈递具有T细胞上的抗原受体(如TCR或TCR样抗体)可识别的构象的抗原。通常，MHC I类分子是异二聚体，其具有跨越α链的膜，在一些情况下具有三个α结构域和非共价缔合的β2微球蛋白。通常，MHC II类分子由两种跨膜糖蛋白α和β组成，两者通常都跨越膜。MHC分子可以包括MHC的有效部分，其含有抗原结合位点或用于结合肽的位点以及由适当抗原受体识别所需的序列。在一些实施方案中，MHC I类分子将源自胞质溶胶的肽递送至细胞表面，其中MHC-肽复合物由T细胞(如通常是CD8+ T细胞，但是在一些情况下是CD4+ T细胞)识别。在一些实施方案中，MHC II类分子将源自囊泡***的肽递送至细胞表面，其中所述肽通常由CD4+ T细胞识别。通常，MHC分子由一组连锁基因座编码，其在小鼠中统称为H-2并且在人中统称为人白细胞抗原(HLA)。因此，通常人MHC也可以称为人白细胞抗原(HLA)。
术语“MHC-肽复合物”或“肽-MHC复合物”或其变体是指肽抗原与MHC分子的复合物或缔合物，例如通常通过所述肽在MHC分子的结合沟或裂缝中的非共价相互作用来形成。在一些实施方案中，所述MHC-肽复合物存在或展示于细胞表面上。在一些实施方案中，所述MHC-肽复合物可以由抗原受体(如TCR、TCR样CAR或其抗原结合部分)特异性地识别。
在一些实施方案中，多肽的肽(如肽抗原或表位)可以与MHC分子缔合，例如用于由抗原受体识别。通常，所述肽源自或基于较长生物分子(如多肽或蛋白质)的片段。在一些实施方案中，所述肽的长度通常为约8至约24个氨基酸。在一些实施方案中，肽的长度为从或从约9至22个氨基酸，用于在MHC II类复合物中识别。在一些实施方案中，肽的长度为从或从约8至13个氨基酸，用于在MHC I类复合物中识别。在一些实施方案中，在识别MHC分子(如MHC-肽复合物)背景中的肽后，所述抗原受体(如TCR或TCR样CAR)产生或触发激活信号至T细胞，诱导T细胞应答，如T细胞增殖、细胞因子产生、细胞毒性T细胞应答或其他应答。
在一些实施方案中，TCR样抗体或抗原结合部分是已知的或者可以通过本领域中已知的方法产生(参见例如美国公开申请号US 2002/0150914；US 2003/0223994；US 2004/0191260；US 2006/0034850；US 2007/00992530；US 20090226474；US 20090304679；和国际PCT公开号WO 03/068201)。
在一些实施方案中，特异性结合至MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过用有效量的含有特定MHC-肽复合物的免疫原对宿主进行免疫来产生。在一些情况下，所述MHC-肽复合物的肽是能够结合至MHC的抗原的表位，如肿瘤抗原，例如通用肿瘤抗原、骨髓瘤抗原或如下文所述的其他抗原。在一些实施方案中，然后向宿主给予有效量的免疫原以用于引发免疫应答，其中所述免疫原保持其三维形式持续一段足以引发针对所述肽在所述MHC分子的结合沟中的三维呈递的免疫应答的时间。然后测定从所述宿主收集的血清以确定是否产生了识别MHC分子结合沟中的肽的三维呈现的所需抗体。在一些实施方案中，可以评估所产生的抗体以确认所述抗体可以区分MHC-肽复合物与单独的MHC分子、单独的目标肽以及MHC与无关肽的复合物。然后可以分离所需抗体。
在一些实施方案中，特异性结合至MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过采用抗体文库展示方法(如噬菌体抗体文库)来产生。在一些实施方案中，可以产生突变型Fab、scFv或其他抗体形式的噬菌体展示文库，例如，其中所述文库的成员在一个或多个CDR的一个或多个残基处发生突变。参见例如美国公开申请号US 20020150914、US 2014/0294841；和Cohen CJ.等人(2003)J Mol.Recogn.16:324-332。
本文的术语“抗体”是以最广义使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、能够特异性结合抗原的可变重链(VH)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scFv))和单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scFv、串联三-scFv。除非另有说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能性抗体片段。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD)的抗体。
在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白、抗体及其抗原结合片段特异性地识别全长抗体的抗原。在一些实施方案中，抗体的重链和轻链可以是全长的或者可以是抗原结合部分(Fab、F(ab’)2、Fv或单链Fv片段(scFv))。在其他实施方案中，所述抗体重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE，特别是选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，更特别是IgG1(例如，人IgG1)。在另一个实施方案中，所述抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；可变重链(VH)区、单链抗体分子(如scFv)和单结构域VH单一抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，所述抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scFv。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个CDR。(参见例如，Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007))。单个VH或VL结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域分离结合所述特定抗原的抗体，以分别筛选互补的VL或VH结构域的文库。参见例如，Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。在一些实施方案中，所述CAR包含特异性结合抗原的抗体重链结构域，所述抗原是例如癌症标记或待靶向的细胞或疾病(如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原，如本文所述的或本领域已知的任何靶抗原。
抗体片段可以通过多种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，所述抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可以不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是如下抗体，其中所有或基本上所有CDR氨基酸残基源自非人CDR并且所有或基本上所有FR氨基酸残基源自人FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指所述非人抗体的变体，其经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，衍生出CDR残基的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
因此，在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体(包括TCR样CAR)包括含有抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些实施方案中，所述抗体或片段包括scFv。在一些方面，所述嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在T细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的信号传导结构域。
在一些实施方案中，所述重组受体(如CAR，如其抗体部分)还包括间隔子，所述间隔子可以是或包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分或其变体或经修饰形式，如铰链区(例如，IgG4铰链区)和/或CH1/CL和/或Fc区。在一些实施方案中，所述重组受体还包含间隔子和/或铰链区。在一些实施方案中，所述恒定区或部分是人IgG(如IgG4或IgG1)的。在一些方面，所述恒定区的部分用作抗原识别组分(例如，scFv)与跨膜结构域之间的间隔子区。与不存在间隔子的情况下相比，所述间隔子的长度可以提供抗原结合后增强的细胞反应性。在一些例子中，所述间隔子的长度为或约12个氨基酸或者长度不超过12个氨基酸。示例性间隔子包括具有至少约10至229个氨基酸、约10至200个氨基酸、约10至175个氨基酸、约10至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约10至100个氨基酸、约10至75个氨基酸、约10至50个氨基酸，约10至40个氨基酸、约10至30个氨基酸、约10至20个氨基酸或约10至15个氨基酸(并且包括任何列出的范围的端点之间的任何整数)的那些。在一些实施方案中，间隔子区具有约12个或更少的氨基酸、约119个或更少的氨基酸或约229个或更少的氨基酸。示例性间隔子包括单独的IgG4铰链、与CH2和CH3结构域连接的IgG4铰链或与CH3结构域连接的IgG4铰链。示例性间隔子包括但不限于在Hudecek等人(2013)Clin.Cancer Res.,19:3153或国际专利申请公开号WO 2014031687中描述的那些。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:1中所示的序列，并且由SEQ ID NO:2中所示的序列编码。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:3中所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:4中所示的序列。
在一些实施方案中，所述恒定区或部分是IgD的。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:5中所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有与SEQ ID NO:1、3、4和5中的任一个展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:31-39中所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有与SEQ ID NO:31-39中的任一个展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
所述抗原识别结构域通常与一种或多种细胞内信号传导组分(如通过抗原受体复合物(如TCR复合物)(在CAR的情况下)模拟激活和/或经由另一种细胞表面受体模拟信号的信号传导组分)连接。因此，在一些实施方案中，所述抗原结合组分(例如，抗体)与一个或多个跨膜和细胞内信号传导区域连接。在一些实施方案中，所述跨膜结构域与所述细胞外结构域融合。在一个实施方案中，使用天然与所述受体(例如，CAR)中的一个结构域缔合的跨膜结构域。在一些情形中，通过氨基酸取代选择或修饰所述跨膜结构域以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以最小化与所述受体复合物的其他成员的相互作用。
在一些实施方案中，所述跨膜结构域源自天然或合成来源。在天然来源的情况下，在一些方面，所述结构域源自任何膜结合或跨膜蛋白。跨膜区包括源自以下的那些(即，包含以下的至少一个或多个跨膜区)：T细胞受体的α、β或ζ链，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137，CD154。可替代地，在一些实施方案中，所述跨膜结构域是合成的。在一些方面，所述合成跨膜结构域主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，将在合成跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，连接是通过接头、间隔子和/或一个或多个跨膜结构域。
所述细胞内信号传导区域包括通过天然抗原受体模拟或接近信号、通过这种受体与共刺激受体组合模拟或接近信号和/或仅通过共刺激受体模拟或接近信号的那些。在一些实施方案中，存在短的寡肽或多肽接头，例如长度为2至10个氨基酸的接头(如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体)，并在所述CAR的跨膜结构域与胞质信号传导结构域之间形成连接。
所述受体(例如，CAR)通常包括至少一种或多种细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，所述受体包括TCR复合物的细胞内组分，如介导T细胞激活和细胞毒性的TCR CD3链，例如CD3ζ链。因此，在一些方面，所述ROR1结合抗体与一个或多个细胞信号传导模块连接。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括CD3跨膜结构域、CD3细胞内信号传导结构域和/或其他CD跨膜结构域。在一些实施方案中，所述受体(例如，CAR)还包括一种或多种另外的分子(如Fc受体γ、CD8、CD4、CD25或CD16)的一部分。例如，在一些方面，所述CAR包括CD3-ζ(CD3-ζ)或Fc受体γ与CD8、CD4、CD25或CD16之间的嵌合分子。
在一些实施方案中，在连接所述CAR后，所述CAR的胞质结构域或细胞内信号传导区域激活免疫细胞(例如，工程化以表达所述CAR的T细胞)的正常效应子功能或应答中的至少一种。例如，在一些背景下，所述CAR诱导T细胞的功能，如细胞溶解活性或T辅助活性，如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导区域的截短部分(例如如果其转导效应子功能信号的话)代替完整的免疫刺激链。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域(例如，包含一个或多个细胞内信号传导结构域)包括T细胞受体(TCR)的胞质序列，并且在一些方面还包括共受体(其在天然背景下与这种受体并行起作用以在抗原受体接合后启动信号转导)和/或此类分子的任何衍生物或变体的那些，和/或具有相同功能能力的任何合成序列。
在天然TCR的背景下，完全激活通常不仅需要通过TCR进行信号传导，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，用于生成次级或共刺激信号的组分也被包括在所述CAR中。在其他实施方案中，所述CAR不包括用于生成共刺激信号的组分。在一些方面，另外的CAR在同一细胞中表达，并且提供用于生成次级或共刺激信号的组分。
在一些方面，将T细胞激活描述为由两个类别的胞质信号传导序列来介导：通过TCR启动抗原依赖性初级激活的那些序列(初级胞质信号传导序列)以及以非抗原依赖性方式作用以提供刺激或共刺激信号的那些序列(次级胞质信号传导序列)。在一些方面，所述CAR包括此类信号传导组分中的一种或两种。
在一些方面，所述CAR包括调节所述TCR复合物的初级激活的初级胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的初级胞质信号传导序列可以含有信号传导基序(其被称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM)。含有初级胞质信号传导序列的ITAM的例子包括源自TCR或CD3ζ、FcRγ或FcRβ的那些。在一些实施方案中，所述CAR中的一种或多种胞质信号传导分子含有源自CD3ζ的胞质信号传导结构域、其部分或序列。
在一些实施方案中，所述CAR包括共刺激受体(如CD28、4-1BB、OX40、DAP10和ICOS)的信号传导区域和/或跨膜部分。在一些方面，同一CAR包括信号传导区域和共刺激组分。
在一些实施方案中，所述信号传导区域包括于一种CAR内，而共刺激组分是由识别另一种抗原的另一种CAR提供。在一些实施方案中，所述CAR包括在同一细胞上表达的激活或刺激CAR和共刺激CAR(参见WO2014/055668)。
在某些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含连接至CD3(例如，CD3-ζ)细胞内结构域的CD28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含连接至CD3ζ细胞内结构域的嵌合CD28和CD137(4-1BB，TNFRSF9)共刺激结构域。
在一些实施方案中，所述CAR在胞质部分中包含一个或多个(例如，两个或更多个)共刺激结构域和激活结构域(例如，主激活结构域)。示例性CAR包括CD3-ζ、CD28和4-1BB的细胞内组分。
在一些情况下，CAR被称为第一代、第二代和/或第三代CAR。在一些方面，第一代CAR是在抗原结合后仅提供CD3链诱导的信号的CAR；在一些方面，第二代CAR是提供这种信号和共刺激信号的CAR，如包括来自共刺激受体(如CD28或CD137)的细胞内信号传导结构域的CAR；在一些方面，第三代CAR是在一些方面包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的CAR。
在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些方面，所述嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述抗体或片段包括scFv或单结构域VH抗体，并且所述细胞内结构域含有ITAM。在一些方面，所述细胞内信号传导结构域包括CD3-ζ(CD3ζ)链的ζ链的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括设置在细胞外结构域与细胞内信号传导区域之间的跨膜结构域。
在一些方面，所述跨膜结构域含有CD28的跨膜部分。所述细胞外结构域和跨膜可以直接或间接连接。在一些实施方案中，所述细胞外结构域和跨膜通过间隔子(如本文所述的任何间隔子)连接。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域，如在跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间。在一些方面，所述T细胞共刺激分子是CD28或4-1BB。
在一些实施方案中，所述CAR含有抗体(例如，抗体片段)、跨膜结构域(其是或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)、以及含有CD28的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述CAR含有抗体(例如，抗体片段)、跨膜结构域(其是或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)、以及含有4-1BB的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些此类实施方案中，所述受体还包括含有Ig分子(如人Ig分子，如Ig铰链，例如IgG4铰链)的一部分的间隔子，如仅铰链的间隔子。
在一些实施方案中，所述受体(例如，CAR)的跨膜结构域是人CD28的跨膜结构域或其变体，例如人CD28(登录号：P10747.1)的27个氨基酸的跨膜结构域，或者是包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:8展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的跨膜结构域；在一些实施方案中，含有所述重组受体的一部分的跨膜结构域包含SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列或与其具有至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些方面，所述T细胞共刺激分子是CD28或4-1BB。
在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含人CD28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如其41个氨基酸的结构域，和/或在天然CD28蛋白的位置186-187处具有LL至GG取代的这种结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域可以包含SEQ ID NO:10或11中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:10或11展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内区域包含4-1BB的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如人4-1BB(登录号Q07011.1)的42个氨基酸的胞质结构域或其功能变体或部分，如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:12展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含人CD3链、任选地CD3ζ刺激性信号传导结构域或其功能变体，如人CD3ζ(登录号：P20963.2)的亚型3的112个AA的胞质结构域或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993中所述的CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含SEQ ID NO:13、14或15中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13、14或15展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些方面，所述间隔子仅含有IgG的铰链区，如仅IgG4或IgG1的铰链，如SEQ ID NO:1中所示的仅铰链的间隔子。在其他实施方案中，所述间隔子是与CH2和/或CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链。在一些实施方案中，所述间隔子是与CH2和CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:3中所示。在一些实施方案中，所述间隔子是仅与CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:4中所示。在一些实施方案中，所述间隔子是或包含富甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头，如已知的柔性接头。
2.T细胞受体
在一些实施方案中，提供了工程化细胞(如T细胞)，其表达识别靶多肽(如肿瘤、病毒或自身免疫蛋白的抗原)的肽表位或T细胞表位的T细胞受体(TCR)或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，“T细胞受体”或“TCR”是含有可变α和β链(也分别称为TCRα和TCRβ)或可变γ和δ链(也分别称为TCRα和TCRβ)的分子或其抗原结合部分，并且其能够特异性结合与MHC分子结合的肽。在一些实施方案中，所述TCR呈αβ形式。通常，以αβ和γδ形式存在的TCR一般在结构上相似，但是表达它们的T细胞可以具有不同的解剖位置或功能。TCR可以在细胞的表面上发现或以可溶形式发现。通常，发现TCR在T细胞(或T淋巴细胞)的表面上，在此处它通常负责识别与主要组织相容性复合物(MHC)分子结合的抗原。
除非另有说明，否则术语“TCR”应当理解为涵盖完整的TCR以及其抗原结合部分或其抗原结合片段。在一些实施方案中，TCR是完整或全长TCR，包括呈αβ形式或γδ形式的TCR。在一些实施方案中，所述TCR是如下抗原结合部分，其少于全长TCR但与在MHC分子中结合的特定肽结合(如与MHC-肽复合物结合)。在一些情况下，TCR的抗原结合部分或片段可以仅含有全长或完整TCR的结构性结构域的一部分，但是仍能够结合与完整TCR结合的肽表位(如MHC-肽复合物)。在一些情况下，抗原结合部分含有TCR的可变结构域(如TCR的可变α链和可变β链)，足以形成用于与特定MHC-肽复合物结合的结合位点。通常，TCR的可变链含有参与肽、MHC和/或MHC-肽复合物的识别的互补决定区。
在一些实施方案中，TCR的可变结构域含有超变环或互补决定区(CDR)，其通常是抗原识别和结合能力和特异性的主要贡献者。在一些实施方案中，TCR的CDR或其组合形成给定TCR分子的全部或基本上全部的抗原结合位点。TCR链的可变区内的各个CDR通常由框架区(FR)隔开，与CDR相比，所述框架区通常在TCR分子之间展示较低可变性(参见例如，Jores等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.U.S.A.87:9138,1990；Chothia等人,EMBO J.7:3745,1988；还参见Lefranc等人,Dev.Comp.Immunol.27:55,2003)。在一些实施方案中，CDR3是负责抗原结合或特异性的主要CDR，或者是在给定TCR可变区的用于所述肽-MHC复合物的加工肽部分的抗原识别和/或用于与其相互作用的三个CDR中最重要的CDR。在一些背景下，所述α链的CDR1可以与某些抗原肽的N末端部分相互作用。在一些背景下，所述β链的CDR1可以与所述肽的C末端部分相互作用。在一些背景下，CDR2对与所述MHC-肽复合物的MHC部分的相互作用或识别具有最强的作用或者是主要的负责CDR。在一些实施方案中，所述β链的可变区可以含有另外的高变区(CDR4或HVR4)，其通常参与超抗原结合而非抗原识别(Kotb(1995)Clinical Microbiology Reviews,8:411-426)。
在一些实施方案中，TCR还可以含有恒定结构域、跨膜结构域和/或短胞质尾(参见例如，Janeway等人,Immunobiology:The Immune System in Health and Disease,第3版,Current Biology Publications,第4页:33,1997)。在一些方面，TCR的每条链可以具有一个N末端免疫球蛋白可变结构域、一个免疫球蛋白恒定结构域、跨膜区和位于C末端的短胞质尾。在一些实施方案中，TCR与参与介导信号转导的CD3复合物的不变蛋白质缔合。
在一些实施方案中，TCR链含有一个或多个恒定结构域。例如，给定TCR链(例如，α链或β链)的细胞外部分可以含有与细胞膜相邻的两个免疫球蛋白样结构域，如可变结构域(例如，Vα或Vβ；通常基于Kabat编号的氨基酸1至116，Kabat等人,“Sequences of Proteins ofImmunological Interest,US Dept.Health and Human Services,Public HealthService National Institutes of Health,1991,第5版)和恒定结构域(例如，α链恒定域或Cα，通常基于Kabat编号的位置117至259；或β链恒定结构域或Cβ，通常基于Kabat的链的位置117至295)。例如，在一些情况下，由两条链形成的TCR的细胞外部分含有两个膜近端恒定结构域和两个膜远端可变结构域，其中可变结构域各自含有CDR。所述TCR的恒定结构域可以含有短连接序列，其中半胱氨酸残基形成二硫键，由此连接TCR的两条链。在一些实施方案中，TCR可以在α链和β链中的每一个中具有另外的半胱氨酸残基，使得所述TCR在恒定结构域中含有两个二硫键。
在一些实施方案中，所述TCR链含有跨膜结构域。在一些实施方案中，所述跨膜结构域带正电荷。在一些情况下，所述TCR链含有胞质尾。在一些情况下，所述结构允许TCR与其他分子(像CD3)及其亚基缔合。例如，含有恒定结构域与跨膜区的TCR可以将所述蛋白质锚定在细胞膜中并与所述CD3信号传导设备或复合物的不变亚基缔合。CD3信号传导亚基(例如CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ链)的细胞内尾含有TCR复合物的信号传导能力中所涉及的一个或多个基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM。
在一些实施方案中，所述TCR可以是两条链α和β(或者任选地γ和δ)的异二聚体，或者它可以是单链TCR构建体。在一些实施方案中，所述TCR是含有两条单独链(α和β链或γ和δ链)的异二聚体，所述链是通过例如一个或多个二硫键连接。
在一些实施方案中，所述TCR可以从一个或多个已知的TCR序列(如Vα,β链的序列)产生，所述一个或多个已知的TCR序列的基本上全长的编码序列是易于获得的。用于从细胞来源获得全长TCR序列(包括V链序列)的方法是熟知的。在一些实施方案中，编码所述TCR的核酸可以从多种来源获得，如通过一种或多种给定细胞内的或从所述一种或多种给定细胞分离的编码TCR的核酸的聚合酶链式反应(PCR)扩增获得，或者通过公众可获得的TCR DNA序列的合成获得。
在一些实施方案中，所述TCR是从生物来源获得，如来自细胞(如来自T细胞(例如细胞毒性T细胞))、T细胞杂交瘤或其他公众可获得的来源。在一些实施方案中，所述T细胞可以从体内分离的细胞获得。在一些实施方案中，所述TCR是胸腺选择的TCR。在一些实施方案中，所述TCR是新表位限制性TCR。在一些实施方案中，所述T细胞可以是培养的T细胞杂交瘤或克隆。在一些实施方案中，所述TCR或其抗原结合部分或其抗原结合片段可以根据对TCR序列的了解以合成方式产生。
在一些实施方案中，所述TCR是从通过针对靶多肽抗原或其靶T细胞表位筛选候选TCR文库而鉴定或选择的TCR产生的。TCR文库可以通过扩增来自T细胞的Vα和Vβ库来产生，所述T细胞是从受试者分离，包括存在于PBMC、脾或其他淋巴器官中的细胞。在一些情况下，T细胞可以从肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)扩增。在一些实施方案中，可以从CD4+或CD8+细胞产生TCR文库。在一些实施方案中，所述TCR可以从正常或健康受试者的T细胞来源扩增，即正常TCR文库。在一些实施方案中，所述TCR可以从患病受试者的T细胞来源扩增，即患病TCR文库。在一些实施方案中，使用简并引物扩增Vα和Vβ的基因库，如通过在从人获得的样品(如T细胞)中进行RT-PCR。在一些实施方案中，scTv文库可以从天然Vα和Vβ文库组装，其中扩增的产物被克隆或组装以通过接头隔开。取决于受试者和细胞的来源，所述文库可以是HLA等位基因特异性的。可替代地，在一些实施方案中，TCR文库可以通过亲本或支架TCR分子的诱变或多样化产生。在一些方面，所述TCR经受定向进化，如通过诱变例如α或β链。在一些方面，所述TCR的CDR内的特定残基被改变。在一些实施方案中，可以通过亲和力成熟来修饰选择的TCR。在一些实施方案中，可以选择抗原特异性T细胞，如通过筛选以评估针对所述肽的CTL活性。在一些方面，可以选择例如存在于抗原特异性T细胞上的TCR，如通过结合活性，例如对所述抗原的特定亲和力或亲合力。
在一些实施方案中，所述TCR或其抗原结合部分是已经被修饰或工程化的。在一些实施方案中，使用定向进化方法来产生具有改变的特性(如具有较高的对特定MHC-肽复合物的亲和力)的TCR。在一些实施方案中，通过展示方法来实现定向进化，所述展示方法包括但不限于酵母展示(Holler等人(2003)Nat Immunol,4,55-62；Holler等人(2000)Proc NatlAcad Sci U S A,97,5387-92)、噬菌体展示(Li等人(2005)Nat Biotechnol,23,349-54)或T细胞展示(Chervin等人(2008)J Immunol Methods,339,175-84)。在一些实施方案中，展示方式涉及工程化或修饰已知的亲本或参考TCR。例如，在一些情况下，野生型TCR可以用作模板以用于产生诱变的TCR，其中CDR的一个或多个残基被突变，并且选择具有所需改变的特性(如对所需靶抗原具有更高的亲和力)的突变体。
在一些实施方案中，用于生产或产生目标TCR的靶多肽的肽是已知的或可以由熟练技术人员容易地鉴定。在一些实施方案中，适用于产生TCR或抗原结合部分的肽可以基于目标靶多肽(如下文所述的靶多肽)中HLA限制性基序的存在来确定。在一些实施方案中，使用可用的计算机预测模型来鉴定肽。在一些实施方案中，对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(Singh和Raghava(2001)Bioinformatics 17(12):1236-1237)和SYFPEITHI(参见Schuler等人(2007)Immunoinformatics Methods in MolecularBiology,409(1):75-93 2007)。在一些实施方案中，MHC限制性表位是HLA-A0201，其在所有高加索人的大约39％-46％中表达，并且因此代表用于制备TCR或其他MHC-肽结合分子的MHC抗原的合适选择。
使用计算机预测模型的HLA-A0201结合基序以及蛋白酶体和免疫蛋白酶体的切割位点是本领域技术人员已知的。对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(更详细地描述于Singh和Raghava,ProPred:prediction of HLA-DR bindingsites.BIOINFORMATICS 17(12):1236-12372001中)和SYFPEITHI(参见Schuler等人SYFPEITHI,Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction.于Immunoinformatics Methods in Molecular Biology,第409(1)卷:75-93 2007)。
在一些实施方案中，所述TCR或其抗原结合部分可以是重组产生的天然蛋白质或其突变形式(其中一种或多种特性(如结合特征)已经被改变)。在一些实施方案中，TCR可以源自多种动物物种之一，如人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物。TCR可以是细胞结合的或呈可溶形式。在一些实施方案中，出于所提供的方法的目的，所述TCR呈在细胞的表面上表达的细胞结合形式。
在一些实施方案中，所述TCR是全长TCR。在一些实施方案中，所述TCR是抗原结合部分。在一些实施方案中，所述TCR是二聚体TCR(dTCR)。在一些实施方案中，所述TCR是单链TCR(sc-TCR)。在一些实施方案中，dTCR或scTCR具有如WO 03/020763、WO 04/033685、WO 2011/044186中所述的结构。
在一些实施方案中，所述TCR含有对应于跨膜序列的序列。在一些实施方案中，所述TCR确实含有对应于胞质序列的序列。在一些实施方案中，所述TCR能够与CD3形成TCR复合物。在一些实施方案中，任何TCR(包括dTCR或scTCR)可以与在T细胞的表面上产生活性TCR的信号传导结构域连接。在一些实施方案中，所述TCR在细胞的表面上表达。
在一些实施方案中，dTCR含有第一多肽(其中对应于TCRα链可变区序列的序列与对应于TCRα链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合)和第二多肽(其中对应于TCRβ链可变区序列的序列与对应于TCRβ链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合)，所述第一和第二多肽通过二硫键连接。在一些实施方案中，所述键可以对应于天然二聚体αβTCR中存在的天然链间二硫键。在一些实施方案中，所述链间二硫键不存在于天然TCR中。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入dTCR多肽对的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。在一些实施方案中，所述TCR含有跨膜序列以锚定至膜。
在一些实施方案中，dTCR含有TCRα链(含有可变α结构域、恒定α结构域和附接至恒定α结构域C末端的第一二聚化基序)和TCRβ链(包含可变β结构域、恒定β结构域和附接至恒定β结构域C末端的第一二聚化基序)，其中所述第一和第二二聚化基序易于相互作用以在第一二聚化基序的氨基酸与第二二聚化基序的氨基酸之间形成共价键，从而将TCRα链与TCRβ链连接在一起。
在一些实施方案中，所述TCR是scTCR。通常，可以使用本领域技术人员已知的方法来产生scTCR，参见例如，Soo Hoo,W.F.等人PNAS(USA)89,4759(1992)；Wülfing,C.和Plückthun,A.,J.Mol.Biol.242,655(1994)；Kurucz,I.等人PNAS(USA)90 3830(1993)；国际公开PCT号WO 96/13593、WO 96/18105、WO 99/60120、WO 99/18129、WO 03/020763、WO 2011/044186；以及Schlueter,C.J.等人J.Mol.Biol.256,859(1996)。在一些实施方案中，scTCR含有引入的非天然链间二硫键以促进TCR链的缔合(参见例如，国际公开PCT号WO 03/020763)。在一些实施方案中，scTCR是非二硫键连接的截短的TCR，其中与其C末端融合的异源亮氨酸拉链促进链缔合(参见例如国际公开PCT号WO 99/60120)。在一些实施方案中，scTCR含有经由肽接头与TCRβ可变结构域共价连接的TCRα可变结构域(参见例如，国际公开PCT号WO 99/18129)。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由对应于TCRα链可变区的氨基酸序列构成)、第二区段(其由与对应于TCRβ链恒定结构域细胞外序列的氨基酸序列的N末端融合的对应于TCRβ链可变区序列的氨基酸序列构成)和接头序列(其将所述第一区段的C末端连接至所述第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与α链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的α链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列β链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的β链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将所述第一区段的C末端连接至所述第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与β链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的TCRβ链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列α链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的α链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将所述第一区段的C末端连接至所述第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR的连接所述第一和第二TCR区段的接头可以是能够形成单多肽链同时保留TCR结合特异性的任何接头。在一些实施方案中，所述接头序列可以例如具有式-P-AA-P-，其中P是脯氨酸并且AA代表氨基酸序列，其中所述氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。在一些实施方案中，所述第一和第二区段配对，使得其可变区序列定向用于这种结合。因此，在一些情况下，所述接头具有足够的长度以跨越所述第一区段的C末端与所述第二区段的N末端之间的距离，或反之亦然，但是不能太长以阻断或减少所述scTCR与所述靶配体的结合。在一些实施方案中，所述接头可以含有从或从约10至45个氨基酸，如10至30个氨基酸或26至41个氨基酸残基，例如29、30、31或32个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头具有式-PGGG-(SGGGG)5-P-，其中P是脯氨酸，G是甘氨酸并且S是丝氨酸(SEQ ID NO:16)。在一些实施方案中，所述接头具有序列GSADDAKKDAAKKDGKS(SEQ ID NO:17)
在一些实施方案中，所述scTCR含有共价二硫键，其将α链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基连接至β链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基。在一些实施方案中，天然TCR中不存在链间二硫键。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入所述scTCR多肽的第一和第二区段的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。
在含有引入的链间二硫键的dTCR或scTCR的一些实施方案中，不存在天然二硫键。在一些实施方案中，将形成天然链间二硫键的所述一个或多个天然半胱氨酸取代为另一种残基，如取代为丝氨酸或丙氨酸。在一些实施方案中，可以通过使第一和第二区段上的非半胱氨酸残基突变为半胱氨酸来形成引入的二硫键。TCR的示例性非天然二硫键描述于已公开的国际PCT号WO2006/000830中。
在一些实施方案中，所述TCR或其抗原结合片段对靶抗原以如下平衡结合常数展现出亲和力，所述平衡结合常数是在或在约10-5M与10-12M之间以及其中的所有单独值和范围。在一些实施方案中，所述靶抗原是MHC-肽复合物或配体。
在一些实施方案中，编码TCR(如α和β链)的一种或多种核酸可以通过PCR、克隆或其他合适的方法扩增，并且克隆到合适的表达载体中。所述表达载体可以是任何合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任何合适的宿主。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或用于两者的那些，如质粒和病毒。
在一些实施方案中，所述载体可以是以下系列的载体：pUC系列(Fermentas LifeSciences)、pBluescript系列(Stratagene，加利福尼亚州拉霍亚)、pET系列(Novagen，威斯康星州麦迪逊)、pGEX系列(Pharmacia Biotech，瑞典乌普萨拉)或pEX系列(Clontech，加利福尼亚州帕罗奥图)。在一些情况下，也可以使用噬菌体载体，如λG10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。在一些实施方案中，可以使用植物表达载体，并且包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。在一些实施方案中，动物表达载体包括pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。在一些实施方案中，使用病毒载体，如逆转录病毒载体。
在一些实施方案中，可以使用标准重组DNA技术来制备所述重组表达载体。在一些实施方案中，载体可以含有调节序列(如转录和翻译起始和终止密码子)，其对引入载体的宿主(例如，细菌、真菌，植物或动物)的类型具有特异性，酌情并考虑所述载体是基于DNA还是基于RNA。在一些实施方案中，所述载体可以含有非天然启动子，其可操作地连接至编码所述TCR或抗原结合部分(或其他MHC-肽结合分子)的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，如巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子和在鼠干细胞病毒的长末端重复序列中发现的启动子。还设想了其他已知的启动子。
在一些实施方案中，为了产生编码TCR的载体，将α和β链从表达目标TCR的T细胞克隆分离的总cDNA进行PCR扩增，并且将其克隆到表达载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到同一载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到不同的载体中。在一些实施方案中，将所产生的α和β链掺入逆转录病毒(例如慢病毒)载体中。
3.多靶向
在一些实施方案中，所述细胞和方法包括多靶向策略，如在细胞上表达两种或更多种基因工程化受体，每种受体识别相同或不同的抗原，并且通常各自包括不同的细胞内信号传导组分。此类多靶向策略描述于例如以下文献中：PCT公开号WO 2014055668 A1(描述了激活和共刺激CAR的组合，例如靶向单独存在于脱靶(例如，正常细胞)上，但仅一起存在于待治疗疾病或病症的细胞上的两种不同抗原)和Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013)(描述了表达激活和抑制性CAR的细胞，例如激活CAR结合同时在正常或非患病细胞和待治疗疾病或病症的细胞上表达的一种抗原，并且抑制性CAR结合仅在正常细胞或不希望治疗的细胞上表达的另一种抗原的那些细胞)。
例如，在一些实施方案中，所述细胞包括表达第一基因工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)的受体，所述受体通常在特异性结合第一受体所识别的抗原(例如，第一抗原)后能够将激活信号诱导至细胞。在一些实施方案中，所述细胞还包括第二基因工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)，例如嵌合共刺激受体，所述受体通常在特异性结合第二受体所识别的第二抗原后能够将共刺激信号诱导至免疫细胞。在一些实施方案中，所述第一抗原与第二抗原是相同的。在一些实施方案中，所述第一抗原与第二抗原是不同的。
在一些实施方案中，所述第一和/或第二基因工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)能够将激活信号诱导至细胞。在一些实施方案中，所述受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，由所述第一受体诱导的激活涉及信号转导或细胞中蛋白质表达的变化，导致启动免疫应答(如ITAM磷酸化)和/或启动ITAM介导的信号转导级联、形成免疫突触和/或所结合受体(例如CD4或CD8等)附近的分子的聚簇、激活一种或多种转录因子(如NF-κB和/或AP-1)和/或诱导因子(如细胞因子)的基因表达、增殖和/或存活。
在一些实施方案中，所述第一和/或第二受体包括共刺激受体(如CD28、CD137(4-1BB)、OX40和/或ICOS)的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述第一和第二受体包括不同的共刺激受体的细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，所述第一受体含有CD28共刺激信号传导区域，并且所述第二受体含有4-1BB共刺激信号传导区域，或反之亦然。
在一些实施方案中，所述第一和/或第二受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域和共刺激受体的细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，所述第一受体含有包含ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域，并且所述第二受体含有共刺激受体的细胞内信号传导结构域。与在同一细胞中诱导的激活信号组合的共刺激信号是导致免疫应答的共刺激信号，所述免疫应答是例如稳健且持续的免疫应答，如增加的基因表达、细胞因子和其他因子的分泌、以及T细胞介导的效应子功能(如细胞杀伤)。
在一些实施方案中，单独的第一受体的连接和单独的第二受体的连接都不会诱导稳健的免疫应答。在一些方面，如果仅连接一种受体，则所述细胞变得耐受抗原或对抗原无反应，或被抑制，和/或不被诱导增殖或分泌因子或实现效应子功能。然而，在一些此类实施方案中，在连接所述多种受体时，如在遇到表达所述第一和第二抗原的细胞时，实现所需反应，如完全免疫激活或刺激，例如如通过一种或多种细胞因子的分泌、增殖、持久性和/或执行免疫效应子功能(如靶细胞的细胞毒性杀伤)所指示的。
在一些实施方案中，所述两种受体分别将激活和抑制信号诱导至细胞，使得一种受体与其抗原的结合激活细胞或诱导反应，但是第二抑制性受体与其抗原的结合诱导了抑制或减弱所述反应的信号。例子是激活CAR与抑制性CAR或iCAR的组合。例如，可以使用这种策略，其中所述激活CAR结合在疾病或病症中表达但也在正常细胞上表达的抗原，并且所述抑制性受体结合在正常细胞上表达但不在所述疾病或病症的细胞上表达的单独抗原。
在一些实施方案中，所述多靶向策略用于以下情况：其中与特定疾病或病症相关的抗原在未患病细胞上表达和/或在工程化细胞本身上表达，所述表达为瞬时表达(例如，在与基因工程化相关的刺激后)或永久表达。在此类情况下，通过需要连接两个分开的和单独特异性抗原受体，可以改善特异性、选择性和/或功效。
在一些实施方案中，所述多种抗原(例如，所述第一和第二抗原)在所靶向的细胞、组织或疾病或病症上(如在癌细胞上)表达。在一些方面，所述细胞、组织、疾病或病症是多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞。在一些实施方案中，所述多种抗原中的一种或多种通常也在不需要用细胞疗法靶向的细胞(如正常或未患病细胞或组织、和/或工程化细胞本身)上表达。在此类实施方案中，通过需要连接多个受体以实现细胞的反应，实现特异性和/或功效。
B.核酸和载体
还提供了编码重组受体的一种或多种多核苷酸(例如，核酸分子)、用于将细胞基因工程化以表达受体的载体以及用于产生所述工程化细胞的方法。
还提供了多核苷酸的组或组合。还提供了含有多核苷酸的这种组或组合的组合物。在一些实施方案中，多核苷酸的所述组或组合一起用于细胞的工程化。在一些实施方案中，将所述组中的第一和第二多核苷酸同时或按任何顺序依次引入用于工程化的细胞中。
在其他方面，所述信号序列可以编码异源或非天然信号肽，如SEQ ID NO:25中所示并且由SEQ ID NO:24中所示核苷酸序列编码的GMCSFRα链的示例性信号肽。在一些情况下，编码所述重组受体(例如，嵌合抗原受体(CAR))的核酸序列含有编码信号肽的信号序列。信号肽的非限制性示例性例子包括例如SEQ ID NO:25中所示并且由SEQ ID NO:24中所示核苷酸序列编码的GMCSFRα链信号肽，或SEQ ID NO:26中所示的CD8α信号肽。
在核酸分子编码两条或更多条不同多肽链的某些情况下，所述多肽链中的每一条可以由单独的核酸分子编码。例如，提供了两个单独的核酸，并且每一个可以单独转移到或引入细胞中以在细胞中表达。
在一些实施方案中，例如在所述多核苷酸含有第一和第二核酸序列的那些实施方案中，编码每条不同多肽链的编码序列可以与启动子可操作地连接，所述启动子可以是相同的或不同的。在一些实施方案中，所述核酸分子可以含有驱动两条或更多条不同多肽链表达的启动子。在一些实施方案中，此类核酸分子可以是多顺反子的(双顺反子的或三顺反子的，参见例如，美国专利号6,060,273)。在一些实施方案中，转录单元可以被工程化以含有IRES(内部核糖体进入位点)的双顺反子单元，其允许通过来自单个启动子的信息来共表达基因产物。可替代地，在一些情况下，单个启动子可以指导RNA的表达，所述RNA在单个开放阅读框(ORF)中含有通过编码自切割肽(例如，2A序列)或蛋白酶识别位点(例如，弗林蛋白酶)的序列彼此分开的两个或三个基因。因此，所述ORF编码单个多肽，其在翻译期间(在2A的情况下)或翻译后被加工成单个蛋白质。在一些情况下，所述肽(如T2A)可以导致核糖体跳过(核糖体跳跃)2A元件C末端处的肽键的合成，这导致2A序列末端与下游的下一个肽之间分开(参见例如，de Felipe.Genetic Vaccines and Ther.2:13(2004)和deFelipe等人Traffic 5:616-626(2004))。多种2A元件是已知的。可以用于本文公开的方法和***中的2A序列的例子包括但不限于来自以下病毒的2A序列：***病毒(F2A，例如SEQ ID NO:23)、马鼻炎A病毒(E2A，例如SEQ ID NO:22)、明脉扁刺蛾β四体病毒(T2A，例如SEQ ID NO:6或18)和猪捷申病毒-1(P2A，例如SEQ ID NO:20或21)，如美国专利公开号20070116690中所述。
在一些实施方案中，所述载体含有编码一种或多种标记的核酸序列。在一些实施方案中，所述一种或多种标记是转导标记、替代标记和/或选择标记。
在一些实施方案中，所述标记是转导标记或替代标记。转导标记或替代标记可以用于检测已经引入多核苷酸(例如，编码重组受体的多核苷酸)的细胞。在一些实施方案中，所述转导标记可以指示或确认对细胞的修饰。在一些实施方案中，所述替代标记是经制备在细胞表面上与所述重组受体(例如，CAR)共表达的蛋白质。在特定实施方案中，这种替代标记是已经修饰以具有极少或无活性的表面蛋白。在某些实施方案中，所述替代标记由编码所述重组受体的相同多核苷酸编码。在一些实施方案中，编码所述重组受体的核酸序列与编码标记的核酸序列可操作地连接，任选地通过内部核糖体进入位点(IRES)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(如2A序列，如T2A、P2A、E2A或F2A)的核酸分开。在一些情况下，外在标记基因可以结合工程化细胞以允许检测或选择细胞，并且在一些情况下还允许促进细胞***。
示例性替代标记可以包括截短形式的细胞表面多肽，如是非功能性的并且不转导或不能转导信号或通常被细胞表面多肽的全长形式转导的信号、和/或不内化或不能内化的截短形式。示例性截短的细胞表面多肽包括截短形式的生长因子或其他受体，如截短的人表皮生长因子受体2(tHER2)、截短的表皮生长因子受体(tEGFR，在SEQ ID NO:7中所示的示例性tEGFR序列)或***特异性膜抗原(PSMA)或其修饰形式。tEGFR可以含有被抗体西妥昔单抗
Figure BDA0002379202310000921
或其他治疗性抗EGFR抗体或结合分子识别的表位，其可以被用于鉴定或选择已经用tEGFR构建体和编码的外源蛋白质工程化的细胞，和/或用于消除或分离表达所编码的外源蛋白质的细胞。参见美国专利号8,802,374以及Liu等人,Nature Biotech.2016年4月；34(4):430-434。在一些方面，所述标记(例如替代标记)包括CD34的全部或部分(例如，截短形式)、NGFR、CD19或截短的CD19(例如，截短的非人CD19)或表皮生长因子受体(例如，tEGFR)。在一些实施方案中，所述标记是或包含荧光蛋白，如绿色荧光蛋白(GFP)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(如超折叠GFP(sfGFP))、红色荧光蛋白(RFP)(如tdTomato、mCherry、mStrawberry、AsRed2、DsRed或DsRed2)、青色荧光蛋白(CFP)、蓝绿色荧光蛋白(BFP)、增强型蓝色荧光蛋白(EBFP)和黄色荧光蛋白(YFP)及其变体，包括物种变体、单体变体和密码子优化的和/或增强的荧光蛋白变体。在一些实施方案中，所述标记是或包含酶(如萤光素酶)、来自大肠杆菌的lacZ基因、碱性磷酸酶、分泌的胚胎碱性磷酸酶(SEAP)、氯霉素乙酰转移酶(CAT)。示例性发光报告基因包括萤光素酶(luc)、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶(CAT)、β-葡萄糖醛酸酶(GUS)或其变体。
在一些实施方案中，所述标记是选择标记。在一些实施方案中，所述选择标记是或包含赋予对外源药剂或药物的抗性的多肽。在一些实施方案中，所述选择标记是抗生素抗性基因。在一些实施方案中，所述选择标记是向哺乳动物细胞赋予抗生素抗性的抗生素抗性基因。在一些实施方案中，所述选择标记是或包含嘌呤霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、杀稻瘟菌素抗性基因、新霉素抗性基因、遗传霉素抗性基因或博莱霉素抗性基因或其修饰形式。
在一些实施方案中，编码所述标记的核酸与编码接头序列(如可切割的接头序列，例如T2A)的多核苷酸可操作地连接。例如，标记和任选地接头序列可以是如PCT公开号WO2014031687中所披露的任一种。例如，所述标记可以是截短的EGFR(tEGFR)，其任选地连接至接头序列，如T2A可切割接头序列。截短的EGFR(例如tEGFR)的示例性多肽包含SEQ IDNO:7中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
还提供了含有此类核酸和/或多核苷酸的载体或构建体。在一些实施方案中，所述载体或构建体含有一个或多个启动子，所述一个或多个启动子与编码所述重组受体的核酸可操作地连接以驱动所述核酸的表达。在一些实施方案中，所述启动子可操作地连接至一个或多于一个核酸分子或多核苷酸。因此，还提供了载体，如含有本文所提供的任何多核苷酸的那些。
在一些情况下，所述载体是病毒载体，如逆转录病毒载体，例如慢病毒载体或γ逆转录病毒载体。还提供了载体的组或组合。在一些实施方案中，载体的所述组或组合包含第一载体和第二载体。还提供了含有载体的这种组或组合的组合物。在一些实施方案中，将载体的所述组或组合一起用于细胞的工程化。在一些实施方案中，将所述组中的第一和第二载体同时或按任何顺序依次引入用于工程化的细胞中。
在一些实施方案中，所述载体包括病毒载体，例如逆转录病毒或慢病毒、非病毒载体或转座子，例如睡美人(Sleeping Beauty)转座子***；源自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体；慢病毒载体或逆转录病毒载体，如γ-逆转录病毒载体，源自莫洛尼(Moloney)鼠白血病病毒(MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠胚胎干细胞病毒(MESV)、鼠干细胞病毒(MSCV)、脾病灶形成病毒(SFFV)或腺相关病毒(AAV)的逆转录病毒载体。
C.用于工程化的细胞和细胞的制备
本文提供了细胞，如含有重组受体的工程化细胞。还提供了此类细胞的群体、含有此类细胞和/或富含此类细胞的组合物，例如其中表达所述重组受体(例如嵌合受体)的细胞构成所述组合物中总细胞的或某种类型的细胞(如T细胞或CD8+或CD4+细胞)的至少50、60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或更高百分比。所述组合物包括用于给予(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供了用于工程化、生产或产生此类细胞的方法，用于将所述细胞和组合物给予受试者(例如，患者)的治疗方法，以及用于检测、选择、分离或分开此类细胞的方法。
因此，提供了表达所述重组受体(例如，CAR)的基因工程化细胞。所述细胞通常是真核细胞，如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，所述细胞源自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫***的细胞，如先天免疫或适应性免疫的细胞，例如骨髓或淋巴细胞，包括淋巴细胞，通常为T细胞和/或NK细胞。其他示例性细胞包括干细胞，如多潜能干细胞和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(iPSC)。所述细胞通常是原代细胞，如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些。在一些实施方案中，所述细胞包括T细胞或其他细胞类型的一个或多个子集，如整个T细胞群、CD4+细胞、CD8+细胞及其亚群，如由以下所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于待治疗的受试者，所述细胞可以是同种异体的和/或自体的。所述方法包括现成的方法。在一些方面，如对于现成的技术，所述细胞是多能的和/或多潜能的，如干细胞，如诱导多能干细胞(iPSC)。在一些实施方案中，所述方法包括从所述受试者中分离细胞，如本文所述的制备、加工、培养和/或工程化它们，并且在冷冻保存之前或之后将它们重新引入同一患者体内。
T细胞和/或CD4+和/或CD8+ T细胞的亚型和亚群包括幼稚T(TN)细胞、效应T细胞(TEFF)、记忆T细胞及其亚型(如干细胞记忆T(TSCM)、中枢记忆T(TCM)、效应记忆T(TEM)或终末分化的效应记忆T细胞)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、未成熟T细胞、成熟T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粘膜相关恒定T(MAIT)细胞、天然存在和适应性调节性T(Treg)细胞、辅助T细胞(如TH1细胞、TH2细胞、TH3细胞、TH17细胞、TH9细胞、TH22细胞、滤泡性辅助T细胞)、α/βT细胞以及δ/γT细胞。在一些实施方案中，所述细胞是调节性T细胞(Treg)。在一些实施方案中，所述细胞还包含重组FOXP3或其变体。
在一些实施方案中，所述细胞是天然杀伤(NK)细胞。在一些实施方案中，所述细胞是单核细胞或粒细胞，例如骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。
在一些实施方案中，所述细胞包括经由基因工程引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，所述核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从所述细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或衍生出这种细胞的生物中发现。在一些实施方案中，所述核酸不是天然存在的，如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
在一些实施方案中，所述工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤。用于工程化的细胞可以从样品(如生物样品，例如获得自或源自受试者的生物样品)中分离。在一些实施方案中，分离出所述细胞的受试者是患有所述疾病或病症或需要细胞疗法或将对其给予细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，所述受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，其中细胞被分离、加工和/或工程化)的人。
因此，在一些实施方案中，所述细胞是原代细胞，例如原代人细胞。所述样品包括直接取自所述受试者的组织、流体和其他样品，以及来自一个或多个加工步骤(如分离、离心、基因工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)的样品。所述生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过加工的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的加工样品。
在一些方面，衍生出或分离出所述细胞的样品是血液或血液衍生的样品，或者是或源自单采术或白细胞单采术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、***、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾、其他淋巴组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、***、骨、***、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或由其衍生的细胞。在细胞疗法(例如，过继细胞疗法)的背景下，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。
在一些实施方案中，所述细胞源自细胞系，例如T细胞系。在一些实施方案中，所述细胞获得自异种来源，例如获得自小鼠、大鼠、非人灵长类动物或猪。
在一些实施方案中，所述细胞的分离包括一个或多个制备和/或基于非亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，将细胞在存在一种或多种试剂的情况下洗涤、离心和/或孵育，例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，基于一种或多种特性(如密度、粘附特性、尺寸、对特定组分的敏感性和/或抗性)分离细胞。
在一些例子中，来自受试者的循环血液的细胞例如通过单采术或白细胞单采术获得。在一些方面，所述样品含有淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板，并且在一些方面含有除红细胞和血小板之外的细胞。
在一些实施方案中，洗涤从所述受试者收集的血细胞，例如以去除血浆级分并将所述细胞置于适当的缓冲液或介质中以用于随后的加工步骤。在一些实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤所述细胞。在一些实施方案中，所述洗涤溶液缺乏钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面，根据制造商的说明书，通过半自动“流通”离心机(例如，Cobe2991细胞加工器，Baxter)完成洗涤步骤。在一些方面，根据制造商的说明书，通过切向流过滤(TFF)完成洗涤步骤。在一些实施方案中，洗涤后将所述细胞重悬于多种生物相容性缓冲液(例如像不含Ca++/Mg++的PBS)中。在某些实施方案中，去除血细胞样品的组分并将所述细胞直接重悬于培养基中。
在一些实施方案中，所述方法包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞并通过Percoll或Ficoll梯度离心而从外周血制备白细胞。
在一些实施方案中，所述分离方法包括基于细胞中一种或多种特定分子(如表面标记，例如表面蛋白、细胞内标记或核酸)的表达或存在来分离不同细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的基于此类标记的用于分离的方法。在一些实施方案中，所述分离是基于亲和力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，所述分离包括基于所述细胞的一种或多种标记(通常为细胞表面标记)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过和与此类标记特异性结合的抗体或结合配偶体一起孵育，然后通常是洗涤步骤和从那些未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞中分离已结合所述抗体或结合配偶体的细胞。
此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已经结合所述试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞)。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面，在没有可用于特异性鉴定异质群体中的细胞类型的抗体的情况下，阴性选择可能特别有用，使得最好基于由除所需群体之外的细胞表达的标记进行分离。
所述分离不需要导致100％富集或去除特定细胞群或表达特定标记的细胞。例如，针对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数目或百分比，但不需要导致不表达所述标记的细胞的完全不存在。同样地，特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数目或百分比，但不需要导致所有此类细胞的完全去除。
在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经受另一个分离步骤，如随后的阳性或阴性选择。在一些例子中，单个分离步骤可以同时耗尽表达多种标记的细胞，如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体(每种抗体或结合配偶体对被靶向用于阴性选择的标记具有特异性)一起孵育。同样地，通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育，可以同时阳性选择多种细胞类型。
例如，在一些方面，T细胞的特定亚群(如对一种或多种表面标记呈阳性或高水平表达的细胞(例如，CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+和/或CD45RO+ T细胞))通过阳性或阴性选择技术来分离。
例如，可以使用抗CD3/抗CD28缀合的磁珠(例如，
Figure BDA0002379202310000971
M-450 CD3/CD28T Cell Expander)阳性选择CD3+、CD28+ T细胞。
在一些实施方案中，通过经由阳性选择富集特定细胞群，或经由阴性选择耗尽特定细胞群来进行分离。在一些实施方案中，通过将细胞与一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育来完成阳性或阴性选择，所述一种或多种抗体或其他结合剂与分别在阳性或阴性选择的细胞上表达或以相对较高水平(标记高)(标记+)的一种或多种表面标记特异性结合。
在一些实施方案中，通过阴性选择在非T细胞(如B细胞、单核细胞或其他白细胞)上表达的标记(如CD14)，将T细胞与PBMC样品分离。在一些方面，CD4+或CD8+选择步骤用于分离CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞。通过对在一种或多种幼稚、记忆和/或效应T细胞亚群上表达或以相对较高程度表达的标记的阳性或阴性选择，可以将此类CD4+和CD8+群体进一步分类成亚群。
在一些实施方案中，如通过基于与相应亚群相关的表面抗原进行阳性或阴性选择，将CD8+细胞针对幼稚、中枢记忆、效应记忆和/或中枢记忆干细胞进一步富集或耗尽。在一些实施方案中，针对中枢记忆T(TCM)细胞进行富集以增加功效，如以改善给予后的长期存活、扩增和/或移植，这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见Terakura等人(2012)Blood.1:72–82；Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，组合富含TCM的CD8+ T细胞与CD4+ T细胞进一步增强功效。
在实施方案中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+和CD62L-两个子集中。可以例如使用抗CD8和抗CD62L抗体将PBMC针对CD62L-CD8+和/或CD62L+CD8+级分进行富集或耗尽。
在一些实施方案中，中枢记忆T(TCM)细胞的富集是基于CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3和/或CD 127的阳性或高表面表达；在一些方面，它是基于对表达或高度表达CD45RA和/或颗粒酶B的细胞的阴性选择。在一些方面，通过表达CD4、CD14、CD45RA的细胞的耗尽和表达CD62L的细胞的阳性选择或富集来进行富含TCM细胞的CD8+群体的分离。在一个方面，中枢记忆T(TCM)细胞的富集从基于CD4表达所选择的阴性细胞级分开始进行，所述阴性细胞级分基于CD14和CD45RA的表达进行阴性选择且基于CD62L进行阳性选择。此类选择在一些方面是同时进行的，并且在其他方面以任何顺序依次进行。在一些方面，用于制备CD8+细胞群或亚群的相同的基于CD4表达的选择步骤也用于产生CD4+细胞群或亚群，使得来自基于CD4的分离的阳性和阴性级分被保留并用于所述方法的后续步骤中，任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后。
在一个特定例子中，PBMC样品或其他白细胞样品经受CD4+细胞的选择，其中保留了阴性和阳性两种级分。然后所述阴性级分基于CD14和CD45RA或ROR1的表达进行阴性选择，并基于中枢记忆T细胞(如CD62L或CCR7)的标记特征进行阳性选择，其中以任何顺序进行所述阳性和阴性选择。
通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将CD4+ T辅助细胞分类为幼稚、中枢记忆和效应细胞。CD4+淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚CD4+ T淋巴细胞是CD45RO-、CD45RA+、CD62L+、CD4+ T细胞。在一些实施方案中，中枢记忆CD4+细胞是CD62L+且CD45RO+。在一些实施方案中，效应CD4+细胞是CD62L-且CD45RO-。
在一个例子中，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合剂通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施方案中，所述抗体或结合配偶体与固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)结合，以允许细胞分离以用于阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分开技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于Methods in Molecular Medicine,第58卷:Metastasis Research Protocols,第2卷:Cell Behavior In vitro and In vivo,第17-25页S.A.Brooks和U.Schumacher编辑
Figure BDA0002379202310000991
Humana Press Inc.,新泽西州托托瓦)。
在一些方面，将待分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应颗粒或微粒，如顺磁珠(例如像Dynalbeads或MACS珠))一起孵育。所述磁响应材料(例如，颗粒)通常直接或间接地附着于结合配偶体(例如，抗体)，所述结合配偶体与希望分离(例如，希望阴性地或阳性地选择)的一个细胞、多个细胞或细胞群上存在的分子(例如，表面标记)特异性结合。
在一些实施方案中，所述磁性颗粒或珠包含与特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)结合的磁响应材料。有许多熟知的在磁分离方法中使用的磁响应材料。合适的磁性颗粒包括在Molday,美国专利号4,452,773和在欧洲专利说明书EP 452342 B(将其通过引用特此并入)中描述的那些。胶体大小的颗粒(如在Owen美国专利号4,795,698以及Liberti等人,美国专利号5,200,084中描述的那些)是其他例子。
所述孵育通常在这样的条件下进行，由此抗体或结合配偶体或者与附着于磁性颗粒或珠的此类抗体或结合配偶体特异性结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于所述样品内的细胞上的话)特异性结合。
在一些方面，将所述样品置于磁场中，并且具有附着于其上的磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引到磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留被磁铁吸引的细胞；对于阴性选择，保留未被吸引的细胞(未标记的细胞)。在一些方面，在同一选择步骤期间进行阳性和阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步处理或经受另外的分离步骤。
在某些实施方案中，所述磁响应颗粒被包被在一抗或其他结合配偶体、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中，所述磁性颗粒通过对一种或多种标记具有特异性的一抗的包被而附着于细胞。在某些实施方案中，用一抗或结合配偶体标记所述细胞而不是珠，然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如，链霉亲和素)包被的磁性颗粒。在某些实施方案中，将链霉亲和素包被的磁性颗粒与生物素化的一抗或二抗结合使用。
在一些实施方案中，所述磁响应颗粒保持附着于所述细胞，所述细胞随后被孵育、培养和/或工程化；在一些方面，所述颗粒保持附着于所述细胞以用于给予患者。在一些实施方案中，从所述细胞中去除可磁化或磁响应颗粒。用于从细胞中去除可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括例如使用竞争性非标记抗体、可磁化颗粒或与可切割接头缀合的抗体等。在一些实施方案中，所述可磁化颗粒是可生物降解的。
在一些实施方案中，基于亲和力的选择是经由磁激活细胞分选(MACS)(MiltenyiBiotec，加利福尼亚州奥本)。磁激活细胞分选(MACS)***能够高纯度选择附着有磁化颗粒的细胞。在某些实施方案中，MACS以这样的模式操作，其中在施加外部磁场之后依次洗脱非靶标和靶标种类。也就是说，附着于磁化颗粒的细胞保持在适当的位置，而未附着的种类被洗脱。然后，在完成第一次洗脱步骤之后，以某种方式释放被捕获在磁场中并被阻止洗脱的种类，使得它们可以被洗脱和回收。在某些方面，所述非靶细胞被标记并从异质细胞群中耗尽。
在某些实施方案中，使用如下***、设备或装置进行分离或分开，所述***、装置或设备进行所述方法的分离、细胞制备、分开、加工、孵育、培养和/或制备步骤中的一个或多个。在一些方面，所述***用于在封闭或无菌环境中进行这些步骤中的每一个，例如以最小化错误、用户操作和/或污染。在一个例子中，所述***是如PCT公开号WO 2009/072003或US20110003380 A1中所述的***。
在一些实施方案中，所述***或设备在集成或独立***中和/或以自动或可编程方式进行分离、加工、工程化和配制步骤中的一个或多个(例如，全部)。在一些方面，所述***或设备包括与所述***或设备通信的计算机和/或计算机程序，其允许用户对加工、分离、工程化和配制步骤的各个方面进行编程、控制、评估其结果和/或调整。
在一些方面，使用CliniMACS***(Miltenyi Biotec)进行所述分离和/或其他步骤，例如以用于在封闭和无菌***中在临床规模水平上自动分离细胞。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面，所述集成计算机控制所述仪器的所有部件并指示所述***以标准化顺序执行重复程序。在一些方面，所述磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。所述蠕动泵控制整个管组的流速，并与夹管阀一起确保缓冲液通过所述***的受控流动和细胞的连续悬浮。
在一些方面，所述CliniMACS***使用抗体偶联的可磁化颗粒，其在无菌、无热原的溶液中提供。在一些实施方案中，在用磁性颗粒标记细胞后，洗涤所述细胞以去除过量的颗粒。然后将细胞制备袋连接到管组，所述管组又连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。所述管组由预装配的无菌管(包括预柱和分离柱)组成，并且仅供一次性使用。在启动分离程序后，所述***自动将细胞样品施加到分离柱。标记的细胞保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤去除。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群在去除磁场后从柱中洗脱，并且收集在细胞收集袋内。
在某些实施方案中，使用CliniMACS Prodigy***(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面，所述CliniMACS Prodigy***配备有细胞加工联合体，其允许通过离心自动化洗涤和分级分离细胞。所述CliniMACS Prodigy***还可以包括机载相机和图像识别软件，其通过辨别源细胞产品的宏观层来确定最佳细胞分级终点。例如，可以将外周血自动分离成红细胞、白细胞和血浆层。所述CliniMACS Prodigy***还可以包括集成细胞培育室，其实现细胞培养方案，例如像细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可以允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见例如，Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651–660；Terakura等人(2012)Blood.1:72–82；以及Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过流式细胞术收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群，其中针对多种细胞表面标记染色的细胞在流体流中载携。在一些实施方案中，通过制备规模(FACS)分选收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群。在某些实施方案中，通过使用微机电***(MEMS)芯片结合基于FACS的检测***来收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群(参见例如，WO 2010/033140；Cho等人(2010)Lab Chip 10:1567-1573；和Godin等人(2008)JBiophoton.1(5):355–376)。在两种情况下，细胞可以用多种标记来标记，允许以高纯度分离明确定义的T细胞子集。
在一些实施方案中，用一种或多种可检测标记来标记所述抗体或结合配偶体，以促进分离供阳性和/或阴性选择。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具有特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞在流体流中载携，如通过荧光激活细胞分选(FACS)，包括制备规模(FACS)和/或微机电***(MEMS)芯片，例如与流式细胞检测***组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。
在一些实施方案中，所述制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如，冷冻保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，所述冷冻和后续解冻步骤去除所述细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如在洗涤步骤之后将所述细胞悬浮在冷冻溶液中以去除血浆和血小板。在一些方面中，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任何一种。一个例子涉及使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS，或其他合适的细胞冷冻培养基。然后将其用培养基1:1稀释，使得DMSO和HSA的最终浓度分别为10％和4％。然后将所述细胞以1°/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。
在一些实施方案中，所提供的方法包括培育、孵育、培养和/或基因工程步骤。例如，在一些实施方案中，提供了用于孵育耗尽的细胞群和培养起始组合物和/或将它们工程化的方法。
因此，在一些实施方案中，在培养起始组合物中孵育所述细胞群。所述孵育和/或工程化可以在培养容器中进行，所述培养容器是例如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋或其他用于培养或培育细胞的容器。
在一些实施方案中，在基因工程化之前或与其相连地孵育和/或培养所述细胞。所述孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活和/或繁殖。在一些实施方案中，在存在刺激条件或刺激剂的情况下孵育所述组合物或细胞。此类条件包括针对以下而设计的那些条件：在群体中诱导细胞的增殖、扩增、激活和/或存活以模拟抗原暴露和/或引发细胞用于基因工程化(如用于引入重组受体，例如CAR)。
所述条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他旨在激活细胞的药剂))。
在一些实施方案中，所述刺激条件或药剂包括一种或多种药剂(例如，配体)，其能够激活TCR复合物的细胞内信号传导区域。在一些方面，所述药剂在T细胞中开启或启动TCR/CD3细胞内信号传导级联。此类药剂可以包括抗体，如对TCR具有特异性的那些抗体，例如抗CD3。在一些实施方案中，所述刺激条件包括能够刺激共刺激受体的一种或多种药剂(例如，配体)，例如抗CD28。在一些实施方案中，此类药剂和/或配体可以结合至固体支持物(如珠)和/或一种或多种细胞因子。任选地，所述扩增方法还可以包括向培养基中(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)添加抗CD3和/或抗CD28抗体的步骤。在一些实施方案中，所述刺激剂包括IL-2、IL-15和/或IL-7。在一些方面中，IL-2浓度为至少约10单位/mL。
在一些方面，孵育是根据诸如以下文献中所述的那些等技术来进行：Riddell等人的美国专利号6,040,177；Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651-660；Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；和/或Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过以下方式扩增T细胞：向培养起始组合物中添加饲养细胞(如非***外周血单核细胞(PBMC))(例如，使得所得细胞群含有至少约5、10、20或40种或更多种PBMC饲养细胞，以使初始群体中的每种T淋巴细胞进行扩增)；以及孵育培养物(例如，持续足以扩增T细胞数的时间)。在一些方面，所述非***饲养细胞可以包含γ辐射的PBMC饲养细胞。在一些实施方案中，用约3000至3600拉德范围内的γ射线辐射PBMC以防止细胞***。在一些方面中，在添加T细胞群之前将所述饲养细胞添加到培养基中。
在一些实施方案中，所述刺激条件包括适合于人T淋巴细胞生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常为至少约30摄氏度，并且通常在或在约37摄氏度。任选地，所述孵育还可以包括添加非***EBV转化的类淋巴母细胞(LCL)作为饲养细胞。可以用约6000至10,000拉德范围内的γ射线辐射LCL。在一些方面，所述LCL饲养细胞以任何合适的量(如LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比率为至少约10:1)提供。
在实施方案中，通过用抗原刺激幼稚或抗原特异性T淋巴细胞获得抗原特异性T细胞，如抗原特异性CD4+和/或CD8+ T细胞。例如，可以通过从被感染的受试者分离T细胞并在体外用相同抗原刺激所述细胞，针对巨细胞病毒抗原来产生抗原特异性T细胞系或克隆。
D.用于基因工程化的方法
用于引入基因工程化组分如重组受体(例如，CAR或TCR)的多种方法是熟知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码所述多肽或受体的核酸的那些方法，包括经由病毒载体，例如逆转录病毒或慢病毒、非病毒载体或转座子(例如睡美人转座子***)。基因转移的方法可以包括转导、电穿孔或导致基因转移到细胞中的其他方法。
在一些实施方案中，通过以下方式完成基因转移：首先刺激细胞，如通过将其与诱导反应(如增殖、存活和/或激活)的刺激物进行组合，例如如通过细胞因子或激活标记的表达测量的，然后转导激活的细胞，并且在培养物中扩增至足以用于临床应用的数目。
在一些背景下，可能需要防止刺激因子(例如，淋巴因子或细胞因子)的过表达可能潜在地导致受试者中不希望的结果或较低的功效(如受试者中与毒性相关的因素)的可能性。因此，在一些背景下，所述工程化细胞包括导致细胞在体内(如在过继免疫疗法中给予时)对阴性选择易感的基因区段。例如，在一些方面，将所述细胞工程化，使得它们可以由于给予它们的患者的体内状况的改变而被消除。所述阴性选择性表型可以由赋予对所给予的药剂(例如，化合物)的敏感性的基因的***而产生。阴性选择性基因包括单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV-I TK)基因(Wigler等人,Cell 2:223,I977)，其赋予更昔洛韦敏感性；细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因；细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(APRT)基因；细菌胞嘧啶脱氨酶(Mullen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89:33(1992))。
在一些实施方案中，使用重组感染性病毒颗粒(例如像源自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体)将重组核酸转移到细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ逆转录病毒载体)将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Koste等人(2014)Gene Therapy 2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等人(2000)Exp Hematol 28(10):1137-46；Alonso-Camino等人(2013)Mol Ther Nucl Acids2,e93；Park等人,Trends Biotechnol.2011年11月29(11):550–557)。
在一些实施方案中，所述逆转录病毒载体具有长末端重复序列(LTR)，例如源自莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠胚胎干细胞病毒(MESV)、鼠干细胞病毒(MSCV)、脾病灶形成病毒(SFFV)或腺相关病毒(AAV)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体源自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，所述逆转录病毒包括源自任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。所述逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的若干种物种的宿主细胞。在一个实施方案中，待表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已经描述了许多说明性逆转录病毒***(例如，美国专利号5,219,740；6,207,453；5,219,740；Miller和Rosman(1989)BioTechniques 7:980-990；Miller,A.D.(1990)Human Gene Therapy 1:5-14；Scarpa等人(1991)Virology 180:849-852；Burns等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:8033-8037；以及Boris-Lawrie和Temin(1993)Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109)。
慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；Cooper等人(2003)Blood.101:1637–1644；Verhoeyen等人(2009)Methods Mol Biol.506:97-114；以及Cavalieri等人(2003)Blood.102(2):497-505中。
在一些实施方案中，经由电穿孔将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Chicaybam等人,(2013)PLoS ONE 8(3):e60298和Van Tedeloo等人(2000)Gene Therapy 7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，经由转座将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Manuri等人(2010)Hum Gene Ther 21(4):427-437；Sharma等人(2013)Molec Ther Nucl Acids 2,e74；以及Huang等人(2009)Methods Mol Biol 506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如在Current Protocols in MolecularBiology,John Wiley&Sons,New York.N.Y.中所述)；原生质体融合；阳离子脂质体介导的转染；钨粒子促进的微粒轰击(Johnston,Nature,346:776-777(1990))；以及磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。
用于转移编码所述重组产物的核酸的其他方法和载体是例如在国际专利申请公开号WO 2014055668和美国专利号7,446,190中所述的那些。
在一些实施方案中，可以将所述细胞(例如，T细胞)在扩增期间或之后例如用编码重组受体(例如，T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR))的核酸进行转染。例如，用于引入所需多肽或受体的基因的这种转染可以用任何合适的逆转录病毒载体进行。然后可以使基因修饰的细胞群摆脱初始刺激物(例如CD3/CD28刺激物)，并且随后用第二种类型的刺激物例如经由从头引入的受体进行刺激。所述第二种类型的刺激物可以包括肽/MHC分子形式的抗原刺激物、基因引入的受体的同源(交联)配体(例如CAR的天然配体)或在新受体的框架内直接结合(例如通过识别受体内的恒定区)的任何配体(如抗体)。参见例如，Cheadle等人,“Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy”Methods Mol Biol.2012；907:645-66或Barrett等人,Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer AnnualReview of Medicine第65卷:333-347(2014)。
另外的核酸(例如，用于引入的基因)包括用于改善治疗功效的那些，如通过促进转移细胞的活力和/或功能；用于提供选择和/或评估细胞的遗传标记的基因，如以评估体内存活或定位；改善安全性的基因，例如通过使细胞在体内对阴性选择易感，如Lupton S.D.等人,Mol.and Cell Biol.,11:6(1991)和Riddell等人,Human Gene Therapy 3:319-338(1992)所述；还参见Lupton等人的PCT/US91/08442和PCT/US94/05601的出版物，其描述了使用由将显性阳性选择性标记与阴性选择性标记融合而得到的双功能选择性融合基因。参见例如，Riddell等人,美国专利号6,040,177,第14-17栏。
如上所述，在一些实施方案中，在基因工程化之前或与其相连地孵育和/或培养所述细胞。所述孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活、繁殖和/或冷冻以保存(例如冷冻保存)。
IV.评估、给予和治疗方法
本文提供了用于与细胞疗法(例如CAR+ T细胞)和/或治疗毒性的药剂结合使用(包括与过继细胞疗法结合用作伴随诊断剂和/或用于与过继细胞疗法结合的预防性治疗方法中)的涉及试剂的制品、试剂盒和方法，所述试剂能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记。在一些实施方案中，所提供的制品和方法与在给予细胞疗法(如CAR+ T细胞疗法)的受试者中降低产生毒性(如严重毒性，例如严重神经毒性)的风险相关。
A.治疗方法
提供了评估骨髓标记的方法和制品，包括在表达重组受体(例如CAR)识别的抗原的疾病、病症和障碍中的使用和用途。提供了制品，其包含含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物的细胞疗法以及用于根据或基于生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记(例如CD14)的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述细胞疗法的说明书。在一些实施方案中，所给予的细胞表达重组受体，例如CAR。在一些实施方案中，所述治疗方法涉及向受试者给予本文提供的任何工程化细胞或本文提供的任何组合物。此外，所述方法还包括提供干预，如第II.B节中所述的任何干预。
本文提供了评估毒性(例如神经毒性或严重神经毒性)风险的方法，其通过测定来自受试者的单采术样品的骨髓细胞群的细胞或者对所述群体的细胞表达的标记呈阳性或对骨髓标记的表达呈阳性的细胞的存在或百分比或数目来进行。在一些实施方案中，所述评估方法然后包括，根据或基于所述测定的结果，确定所述受试者在给予细胞疗法后是否有产生神经毒性(例如严重神经毒性)的风险，其中受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者。在一些实施方案中，所述评估在单采术样品上进行，所述单采术样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述单采术样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。在一些实施方案中，如果所述样品中对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则将所述受试者评估为有产生神经毒性或严重神经毒性的风险。在一些实施方案中，所述百分比是在所述样品中总白细胞或总CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。在一些情况下，所述百分比是在所述样品中总白细胞或CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。在一些例子中，所述百分比是总白细胞或CD45+细胞中CD14+细胞的百分比。
在一些实施方案中，所述评估方法还包括在给予所述细胞疗法之后监测所述受试者的除发热以外的神经毒性体征或症状的出现。在一些情况下，基于所述评估的结果，所述方法还包括在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的所述药剂或其他治疗；向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
在一些实施方案中，所述方法包括将所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目与阈值水平进行比较。在一些实施方案中，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则将所述受试者评估为不怀疑有或不太可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险。在一些情况下，如果未将所述受试者评估为有产生神经毒性或严重神经毒性的风险，则在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的神经毒性体征或症状出现之前不向所述受试者进一步给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述神经毒性产生的药剂或治疗；或者所述方法还包括在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法。在一些方面，所述评估作为用所述细胞疗法进行治疗的一部分或在其之前进行。
还提供了用于选择受试者进行治疗的方法，其包括使生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)与能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)的试剂接触。在所述方法的一些实施方案中，所述生物样品来自作为用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法含有表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物，并且所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。
在一些实施方案中，方法和制品还包括用于向所述受试者给予所述细胞疗法的说明书。在一些情况下，所述说明书规定例如，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗。在一些实施方案中，所述百分比是在所述样品中总白细胞或总CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。在一些情况下，所述百分比是在所述样品中总白细胞或CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。在一些例子中，所述百分比是总白细胞或CD45+细胞中CD14+细胞的百分比。在一些情况下，所述说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法。另外，在一些实施方案中，所述说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。在一些实施方案中，所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予细胞疗法。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性。在一些情况下，所述神经毒性是严重神经毒性(例如3级或更高的神经毒性)。
在一些实施方案中，所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。在一些实施方案中，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
还提供了一种在给予所述细胞疗法之后监测受试者的方法。在一些实施方案中，所述方法包括观察给予细胞疗法的受试者的除发热以外的神经毒性或严重神经毒性的体征或症状的出现，其中所述受试者是已经被确定为有或可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险的受试者，如基于通过检测骨髓细胞群或由骨髓细胞表达的标记来测定来自所述患者的生物样品所确定的。在一些实施方案中，所述单采术样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得。在一些实施方案中，所述检测是在如下受试者中进行，在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下或在所述受试者在所述观察期或所述观察期的一部分期间住在医院的情况下已经向所述受试者给予所述细胞疗法。
还提供了预防性治疗的方法，其包括向受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗。在所述方法的一些实施方案中，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包含表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以治疗疾病或病症；并且根据或基于来自受试者的生物样品的骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的测定的结果已经将所述受试者鉴定为有产生毒性的风险，所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。
在一些情况下，根据或基于生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记(例如CD14)的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述细胞疗法。例如，所述评估包括检测，如通过使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。在一些实施方案中，基于所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目确定阈值水平。在一些方面，所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％。在一些情况下，所述阈值水平是所述生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约50％、55％或60％。
在一些情况下，所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。
提供了含有所述工程化细胞的制品或给予所述工程化细胞和组合物的方法，以及此类工程化细胞和组合物用于治疗或预防疾病、病症和障碍(包括癌症)的用途。在一些实施方案中，将所述工程化细胞和组合物给予受试者或患者，所述受试者或患者患有要例如经由过继细胞疗法(如过继T细胞疗法)治疗的特定疾病或病症。在一些实施方案中，将所提供的细胞或组合物给予受试者，如患有或有风险患上所述疾病或病症的受试者。在一些方面，所述方法由此治疗所述疾病或病症(例如，改善其一种或多种症状)，例如通过减轻表达由工程化T细胞识别的抗原的癌症中的肿瘤负荷来治疗。
在一些方面，所治疗的疾病或病症可以是任何疾病或病症，其中抗原的表达与疾病、障碍或病症的细胞或组织相关、特异于和/或表达于疾病、障碍或病症的细胞或组织，和/或参与疾病、病症或障碍的病因，例如导致、加剧或以其他方式参与这种疾病、病症或障碍。示例性疾病和病症可以包括与恶性肿瘤或细胞转化(例如癌症)、自身免疫性疾病或炎性疾病或例如由细菌、病毒或其他病原体引起的感染性疾病相关的疾病或病症。上文描述了示例性抗原，其包括与可以治疗的多种疾病和病症相关的抗原。在特定实施方案中，免疫调节多肽和/或重组受体(例如，嵌合抗原受体或TCR)特异性结合至与所述疾病或病症相关的抗原。在一些实施方案中，所述受试者患有疾病、障碍或病症，任选地癌症，肿瘤，自身免疫性疾病、障碍或病症，或感染性疾病。
在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症包括与各种癌症相关的肿瘤。在一些实施方案中，所述癌症可以是位于受试者体内的任何癌症，例如但不限于位于头和颈、***、肝、结肠、卵巢、***、胰腺、脑、子宫颈、骨、皮肤、眼睛、膀胱、胃、食管、腹膜或肺的癌症。例如，抗癌剂可以用于治疗结肠癌、***、中枢神经***癌、乳腺癌、膀胱癌、***癌、头颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经内分泌癌、软组织癌、***癌、***癌、胰腺癌、胃癌、胆囊癌或食管癌。在一些情况下，所述癌症可以是血液癌。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症是肿瘤，如实体瘤、淋巴瘤、白血病、血液肿瘤、转移性肿瘤或其他癌症或肿瘤类型。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症选自结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、***癌、卵巢癌、皮肤癌、黑素瘤、骨癌、脑癌、卵巢癌、上皮癌、肾细胞癌、胰腺腺癌、***、结直肠癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、尤因肉瘤、髓母细胞瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤和/或间皮瘤。
所述疾病、病症和障碍包括肿瘤，包括实体瘤、血液恶性肿瘤和黑素瘤，并且包括局部和转移性肿瘤；感染性疾病，如病毒或其他病原体的感染，例如HIV、HCV、HBV、CMV、HPV和寄生虫病；以及自身免疫性和炎性疾病。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症是肿瘤、癌症、恶性肿瘤、肿疡或其他增殖性疾病或障碍。此类疾病包括但不限于白血病、淋巴瘤，例如急性髓性(或骨髓性)白血病(AML)、慢性髓性(或骨髓性)白血病(CML)、急性淋巴细胞(或成淋巴细胞性)白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、滤泡性淋巴瘤、难治性滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和多发性骨髓瘤(MM)，B细胞恶性肿瘤选自急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在一些实施方案中，所述疾病或病症是感染性疾病或病症，例如但不限于病毒、逆转录病毒、细菌和原生动物感染、免疫缺陷、巨细胞病毒(CMV)、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barrvirus，EBV)、腺病毒、BK多瘤病毒。在一些实施方案中，所述疾病或病症是自身免疫性或炎性疾病或病症，如关节炎(例如，类风湿性关节炎(RA))、I型糖尿病、***性红斑狼疮(SLE)、炎性肠病、银屑病、硬皮病、自身免疫性甲状腺疾病、格雷夫斯病、克罗恩病、多发性硬化症、哮喘和/或与移植相关的疾病或病症。
在一些实施方案中，与所述疾病或障碍相关的抗原选自受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CA9，也称为G250或CAIX)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、CD19、CD20、CD22、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、III型表皮生长因子受体突变体(EGFR vIII)、叶酸结合蛋白(FBP)、Fc受体样5(FCRL5，也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、人高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、IL-22受体α(IL-22Rα或IL-22R-α)、IL-13受体α2(IL-13Rα2或IL-13R-α2)、激酶***区受体(kdr)、κ轻链、富含亮氨酸重复序列蛋白家族成员8A(LRRC8A)、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、黑素瘤优先表达抗原(PRAME)、存活素、TAG72、B7-H3、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CD171、人白细胞抗原A1(HLA-AI)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、叶酸受体-α、CD44v6、CD44v7/8、αvβ6整合素(avb6整合素)、8H9、神经细胞粘附分子(NCAM)、血管内皮生长因子受体(VEGF受体或VEGFR)、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、NKG2D配体、双抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素(MSLN)、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、***特异性抗原、***干细胞抗原(PSCA)、***特异性膜抗原(PSMA)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、黑色素A(MART-1)、糖蛋白100(gp100)、癌胚胎抗原、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ-异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)、癌胚抗原(CEA)、***受体、孕酮受体、CD123、CD133、c-Met、O-乙酰化GD2(OGD2)、L1-CAM的CE7表位、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD138、病原体特异性或病原体表达的抗原、和与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，所述受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，所述受体靶向的抗原是CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。
用于过继细胞疗法的工程化细胞的给予方法是已知的，并且可以与所提供的方法和组合物结合使用。例如，过继T细胞疗法方法描述于例如Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat Rev ClinOncol.8(10):577-85中。参见例如，Themeli等人(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。在一些实施方案中，向其给予免疫调节多肽、工程化细胞或组合物的受试者(例如，患者)是哺乳动物，通常是灵长类动物，如人。在一些实施方案中，所述灵长类动物是猴或猿。所述受试者可以是雄性或雌性，并且可以处于任何合适的年龄，包括婴儿、幼年、***、成年和老年受试者。在一些实施方案中，所述受试者是非灵长类哺乳动物，如啮齿动物。
如本文所用，“治疗”(“treatment”)(及其语法变体如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病症或障碍、或者与之相关的症状、不良效果或结果或表型的完全或部分改善或减轻。所希望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的缓和、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展的速度、减轻或减缓疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不暗示完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结果的一种或多种影响。
如本文所用，“延迟疾病的发展”意指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(如癌症)的发展。此延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。对于本领域技术人员清楚的是，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，如转移的发展。
如本文所用，“预防”包括提供关于受试者的疾病的发生或复发的预防，所述受试者可能易患所述疾病但尚未被诊断患有所述疾病。在一些实施方案中，所提供的细胞和组合物用于延迟疾病的发展或延缓疾病的进展。
如本文所用，“抑制”功能或活性是当与除了目标条件或参数以外的原本相同的条件相比时，或者与另一种条件相比时，降低功能或活性。例如，与不存在细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的所述细胞降低了肿瘤的生长速率。
在给予的背景下，药剂(例如，药物配制品、细胞或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(如治疗或预防结果)的量。
药剂(例如，药物配制品或工程化细胞)的“治疗有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需治疗结果(如针对治疗疾病、病症或障碍)和/或治疗的药代动力学或药效动力学作用的量。治疗有效量可以根据诸如以下等因素而变化：疾病状态、受试者的年龄、性别和体重、以及所给予的免疫调节多肽或工程化细胞。在一些实施方案中，所提供的方法涉及给予有效量(例如，治疗有效量)的免疫调节多肽、工程化细胞或组合物。
“预防有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需预防结果的量。通常但不是必须的，因为预防剂量是在疾病之前或早期在受试者中使用的，所以预防有效量将小于治疗有效量。
所提供的方法和用途包括用于过继细胞疗法的方法和用途。在一些实施方案中，所述方法包括将所述工程化细胞或含有所述细胞的组合物给予受试者、组织或细胞，如患有、有风险患上或怀疑患有所述疾病、病症或障碍的受试者、组织或细胞。在一些实施方案中，将所述细胞、群体和组合物给予患有有待例如经由过继细胞疗法(如过继T细胞疗法)治疗的特定疾病或病症的受试者。在一些实施方案中，将所述细胞或组合物给予所述受试者，如患有或有风险患上所述疾病或病症的受试者，改善所述疾病或病症的一种或多种症状。
在一些实施方案中，所述细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)通过自体转移进行，其中从接受细胞疗法的受试者或从源自这种受试者的样品中分离和/或以其他方式制备细胞。因此，在一些方面，所述细胞源自需要治疗的受试者(例如，患者)，并且在分离和加工后将所述细胞给予同一受试者。
在一些实施方案中，所述细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)通过同种异体转移进行，其中从将要接受或最终接受细胞疗法的受试者以外的受试者(例如，第一受试者)分离和/或以其他方式制备细胞。在此类实施方案中，然后将所述细胞给予相同物种的不同受试者，例如第二受试者。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中，所述第二受试者与所述第一受试者表达相同的HLA类别或超类型。所述细胞可以通过任何合适的方式给予。给药和给予可以部分取决于给予是短暂的还是长期的。各种给药时间表包括但不限于在不同时间点的单次或多次给予、推注给予和脉冲输注。
B.给药
在一些实施方案中，根据所提供的方法将细胞剂量给予受试者。在一些实施方案中，剂量的大小或时间安排根据所述受试者的特定疾病或病症确定。在一些情况下，可以根据所提供的描述凭经验确定用于特定疾病的剂量的大小或时间安排。
在一些实施方案中，所述细胞剂量包含在等于或约2x 105个细胞/kg与等于或约2x106个细胞/kg之间，如在等于或约4x 105个细胞/kg与等于或约1x106个细胞/kg之间或在等于或约6x 105个细胞/kg与等于或约8x 105个细胞/kg之间。在一些实施方案中，所述细胞剂量包含不超过2x 105个细胞(例如表达抗原的细胞，如表达CAR的细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如不超过或不超过约3x 105个细胞/kg、不超过或不超过约4x 105个细胞/kg、不超过或不超过约5x 105个细胞/kg、不超过或不超过约6x 105个细胞/kg、不超过或不超过约7x 105个细胞/kg、不超过或不超过约8x 105个细胞/kg、不超过或不超过约9x 105个细胞/kg、不超过或不超过约1x 106个细胞/kg或者不超过或不超过约2x 106个细胞/kg。在一些实施方案中，所述细胞剂量包含至少2x 105个细胞或至少约2x 105个细胞或2x 105个细胞或约2x 105个细胞(例如表达抗原的细胞，如表达CAR的细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如至少3x 105个细胞/kg或至少约3x 105个细胞/kg或3x 105个细胞/kg或约3x 105个细胞/kg、至少4x 105个细胞/kg或至少约4x 105个细胞/kg或4x 105个细胞/kg或约4x 105个细胞/kg、至少5x 105个细胞/kg或至少约5x 105个细胞/kg或5x 105个细胞/kg或约5x 105个细胞/kg、至少6x 105个细胞/kg或至少约6x 105个细胞/kg或6x 105个细胞/kg或约6x 105个细胞/kg、至少7x 105个细胞/kg或至少约7x 105个细胞/kg或7x 105个细胞/kg或约7x105个细胞/kg、至少8x 105个细胞/kg或至少约8x 105个细胞/kg或8x 105个细胞/kg或约8x105个细胞/kg、至少9x 105个细胞/kg或至少约9x 105个细胞/kg或9x 105个细胞/kg或约9x105个细胞/kg、至少1x 106个细胞/kg或至少约1x 106个细胞/kg或1x 106个细胞/kg或约1x106个细胞/kg或者至少2x 106个细胞/kg或至少约2x 106个细胞/kg或2x 106个细胞/kg或约2x 106个细胞/kg。
在某些实施方案中，所述细胞或单独的细胞亚型群体以约100万至约1000亿个细胞和/或按每公斤体重所述细胞量的范围给予受试者，例如像100万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，如约1000万至约1000亿个细胞(例如，约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，并且在一些情况下约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如，约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)或在这些范围和/或每公斤体重的范围之间的任何值。剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量包括少于约1x 108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如在约1x 106至1x108个此类细胞(如2x 106、5x 106、1x 107、5x 107或1x 108个)总此类细胞的范围或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，在所述受试者是人的情况下，所述剂量包括约1x106与3x 108个之间的总重组受体(例如，CAR)表达细胞，例如在约1x 107至2x 108个此类细胞(如1x 107、5x 107、1x 108或1.5x 108个总此类细胞)的范围或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，给予所述患者多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，所述细胞剂量包括给予从或从约1x 105至5x 108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、1x 105至1x 108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、从或从约5x 105至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞或者从或从约1x 106至1x 107个总重组受体表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值。
在一些实施方案中，细胞(例如，表达重组受体的T细胞)的所述剂量作为单剂量给予所述受试者，或者在两周、一个月、三个月、六个月、1年或更长的时间段内仅给予一次。
在过继细胞疗法的背景下，给定“剂量”的给予包括以单一组合物和/或单次不间断给予的方式(例如，以单次注射或连续输注的方式)给予给定量或数目的细胞，并且还包括在不超过3天的指定时间段内以在多个单独组合物或输注中提供的分割剂量的方式给予给定量或数目的细胞。因此，在一些背景下，所述剂量是指定数目的细胞的单次或连续给予，在单个时间点给予或开始。然而，在一些背景下，所述剂量在不超过三天的时间段内以多次注射或输注的方式给予，如每天一次持续三天或两天或者通过在一天的时间内多次输注。
因此，在一些方面，所述细胞剂量以单一药物组合物给予。在一些实施方案中，所述细胞剂量以共同含有所述剂量的细胞的多种组合物给予。
在一些实施方案中，术语“分割剂量”是指这样分割的剂量，使其在超过一天的时间内给予。这种类型的给药包括在本发明方法中并且被认为是单剂量。
因此，所述细胞剂量可以作为分割剂量给予，例如随时间给予的分割剂量。例如，在一些实施方案中，所述剂量可以在2天内或在3天内给予所述受试者。用于分割给药的示例性方法包括在第一天给予25％的剂量并在第二天给予剩余的75％的剂量。在其他实施方案中，可以在第一天给予33％的剂量，并且在第二天给予剩余的67％。在一些方面，在第一天给予10％的剂量，在第二天给予30％的剂量，并且在第三天给予60％的剂量。在一些实施方案中，所述分割剂量的分布不超过3天。
在一些实施方案中，所述剂量的细胞可以通过给予多种组合物或溶液(如第一和第二，任选地更多)来给予，每种组合物或溶液含有所述剂量的一些细胞。在一些方面，任选地在一定时间段内，分开地或独立地给予所述多种组合物，每种组合物含有不同细胞群和/或细胞亚型。例如，所述细胞群或细胞亚型可以分别包括CD8+和CD4+ T细胞，和/或分别包括富集CD8+和CD4+的群体，例如CD4+和/或CD8+ T细胞，其各自单独地包括基因工程化以表达所述重组受体的细胞。在一些实施方案中，所述剂量的给予包括给予第一组合物，其包含一定剂量的CD8+ T细胞或一定剂量的CD4+ T细胞；以及给予第二组合物，其包含另一剂量的CD4+T细胞和CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，所述组合物或剂量的给予(例如，所述多种细胞组合物的给予)涉及分开给予所述细胞组合物。在一些方面，所述分开给予同时或按任何顺序依次进行。在一些实施方案中，所述剂量包含第一组合物和第二组合物，并且所述第一组合物和第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时。在一些实施方案中，所述第一组合物的给予的开始和所述第二组合物的给予的开始相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟进行。在一些实施方案中，所述第一组合物的给予的开始和/或完成和所述第二组合物的给予的完成和/或开始相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟进行。
在一些组合物中，所述第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD4+ T细胞。在一些组合物中，所述第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD8+ T细胞。在一些实施方案中，所述第一组合物是在所述第二组合物之前给予。
在一些实施方案中，细胞的所述剂量或组合物包括表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞的确定的或目标比率，所述比率任选地为大约1:1，或者在大约1:3与大约3:1之间，如大约1:1。在一些方面，具有目标或所需比率的不同细胞群(如CD4+:CD8+比率或CAR+CD4+:CAR+CD8+比率，例如1:1)的组合物或剂量的给予涉及给予含有一个所述群体的细胞组合物，然后给予包含另一所述群体的单独细胞组合物，其中所述给予是以或大约以目标或所需比率来进行。
在一些实施方案中，所述受试者接受所述细胞的多个剂量，例如两个或更多个剂量或多个连续剂量。在一些实施方案中，向受试者给予两个剂量。在一些实施方案中，所述受试者接受连续剂量，例如，第二剂量是在第一剂量后大约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天给予。在一些实施方案中，在第一剂量后给予多个连续剂量，使得在给予所述连续剂量后给予另外一个或多个剂量。在一些方面，在另外的剂量中给予所述受试者的细胞数与第一剂量和/或连续剂量相同或相似。在一些实施方案中，所述另外一个或多个剂量大于先前剂量。
在一些方面，所述第一和/或连续剂量的大小基于一个或多个标准来确定，如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、尺寸或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些方面，所述第一剂量的给予与所述连续剂量的给予之间的时间为约9至约35天、约14至约28天或15至27天。在一些实施方案中，给予所述连续剂量是在给予所述第一剂量后大于约14天且小于约28天的时间点。在一些方面，所述第一剂量与所述连续剂量之间的时间为约21天。在一些实施方案中，在给予所述连续剂量后给予另外一个或多个剂量(例如连续剂量)。在一些方面，在给予先前剂量后至少约14天且小于约28天给予所述另外一个或多个连续剂量。在一些实施方案中，在先前剂量后小于约14天(例如在先前剂量后4、5、6、7、8、9、10、11、12或13天)给予所述另外的剂量。在一些实施方案中，在先前剂量后小于约14天不给予剂量，和/或在先前剂量后超过约28天不给予剂量。
在一些实施方案中，细胞(例如，表达重组受体的细胞)的所述剂量包含两个剂量(例如，双倍剂量)，包含T细胞的第一剂量和T细胞的连续剂量，其中所述第一剂量和所述第二剂量中的一个或两个包含给予T细胞的分割剂量。
在一些实施方案中，所述细胞剂量通常足够大以有效减轻疾病负荷。
在一些实施方案中，所述细胞以所需剂量给予，所述所需剂量在一些方面包括所需剂量或数目的细胞或一种或多种细胞类型和/或所需比率的细胞类型。因此，在一些实施方案中，所述细胞剂量基于细胞总数(或每kg体重的细胞数)和所需的单独群体或亚型的比率，如CD4+与CD8+的比率。在一些实施方案中，所述细胞剂量基于所需的单独群体中的细胞或单独细胞类型的总数(或每kg体重的细胞数)。在一些实施方案中，所述剂量基于此类特征的组合，此类特征是例如所需的总细胞数、所需比率和所需的单独群体中的细胞总数。
在一些实施方案中，以所需剂量的总细胞(如所需剂量的T细胞)的耐受差异或在所述耐受差异之内给予细胞的群体或亚型如CD8+和CD4+ T细胞。在一些方面，所需剂量是所需细胞数或被给予所述细胞的受试者的每单位体重的所需细胞数，例如细胞/kg。在一些方面，所需剂量等于或高于最小细胞数或每单位体重的最小细胞数。在一些方面，在以所需剂量给予的总细胞中，单独群体或亚型以等于或接近所需输出比率(如CD4+与CD8+的比率)存在，例如在这种比率的一定耐受差异或误差内。
在一些实施方案中，所述细胞以所需剂量的一种或多种单独细胞群或亚型(如所需剂量的CD4+细胞和/或所需剂量的CD8+细胞)的耐受差异或在所述耐受差异之内给予。在一些方面，所需剂量是所需的亚型或群体的细胞数或所需的被给予所述细胞的受试者的每单位体重的此类细胞数，例如细胞/kg。在一些方面，所需剂量等于或高于最小的群体或亚型的细胞数或每单位体重的最小的群体或亚型的细胞数。
因此，在一些实施方案中，所述剂量基于所需的总细胞的固定剂量和所需比率，和/或基于所需的一种或多种单独亚型或亚群(例如，各自)的固定剂量。因此，在一些实施方案中，所述剂量基于所需的T细胞的固定或最小剂量和所需的CD4+与CD8+细胞的比率，和/或基于所需的CD4+和/或CD8+细胞的固定或最小剂量。
在一些实施方案中，所述细胞以所需输出比率的多种细胞群或亚型(如CD4+和CD8+细胞或亚型)的耐受范围或在所述耐受范围内给予。在一些方面，所需比率可以是特定比率或者可以是一系列比率。例如，在一些实施方案中，所需比率(例如，CD4+与CD8+细胞的比率)在等于或约1:5与等于或约5:1之间(或大于约1:5且小于约5:1)，或在等于或约1:3与等于或约3:1之间(或大于约1:3且小于约3:1)，如在等于或约2:1与等于或约1:5之间(或大于约1:5且小于约2:1)，如等于或约5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5。在一些方面，所述耐受差异在所需比率的约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％(包括这些范围之间的任何值)内。
在特定实施方案中，细胞的数目和/或浓度是指重组受体(例如，CAR)表达细胞的数目。在其他实施方案中，细胞的数目和/或浓度是指给予的所有细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)的数目或浓度。
在一些方面，所述剂量的大小基于一个或多个标准来确定，如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、尺寸或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些实施方案中，所述方法还包括给予一个或多个另外的剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞和/或淋巴细胞清除疗法，和/或重复所述方法的一个或多个步骤。在一些实施方案中，所述一个或多个另外的剂量与初始剂量相同。在一些实施方案中，所述一个或多个另外的剂量不同于初始剂量，例如更高，如比初始剂量高2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍；或者更低，如比初始剂量低2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍。在一些实施方案中，基于以下确定一个或多个另外的剂量的给予：受试者对初试治疗或任何先前治疗的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、尺寸或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在某些实施方案中，所述细胞或单独的细胞亚型群体以约100万至约1000亿个细胞和/或按每公斤体重所述细胞量的范围给予受试者，例如像100万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，如约1000万至约1000亿个细胞(例如，约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，并且在一些情况下约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如，约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)或在这些范围和/或每公斤体重的范围之间的任何值。剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量包括少于约1x 108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如在约1x 106至1x108个此类细胞(如2x 106、5x 106、1x 107、5x 107或1x 108个)总此类细胞的范围或任两个前述值之间的范围内。
在一些实施方案中，所述基因工程化细胞剂量包含从或从约1x 105至5x 108个总CAR表达T细胞、1x 105至2.5x 108个总CAR表达T细胞、1x 105至1x 108个总CAR表达T细胞、1x105至5x 107个总CAR表达T细胞、1x 105至2.5x 107个总CAR表达T细胞、1x 105至1x 107个总CAR表达T细胞、1x 105至5x 106个总CAR表达T细胞、1x 105至2.5x 106个总CAR表达T细胞、1x 105至1x 106个总CAR表达T细胞、1x 106至5x 108个总CAR表达T细胞、1x 106至2.5x 108个总CAR表达T细胞、1x 106至1x 108个总CAR表达T细胞、1x 106至5x 107个总CAR表达T细胞、1x 106至2.5x 107个总CAR表达T细胞、1x 106至1x 107个总CAR表达T细胞、1x 106至5x106个总CAR表达T细胞、1x 106至2.5x 106个总CAR表达T细胞、2.5x 106至5x 108个总CAR表达T细胞、2.5x 106至2.5x 108个总CAR表达T细胞、2.5x 106至1x 108个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x 107个总CAR表达T细胞、2.5x 106至2.5x 107个总CAR表达T细胞、2.5x 106至1x107个总CAR表达T细胞、2.5x 106至5x 106个总CAR表达T细胞、5x 106至5x 108个总CAR表达T细胞、5x 106至2.5x 108个总CAR表达T细胞、5x 106至1x 108个总CAR表达T细胞、5x 106至5x107个总CAR表达T细胞、5x 106至2.5x 107个总CAR表达T细胞、5x 106至1x 107个总CAR表达T细胞、1x 107至5x 108个总CAR表达T细胞、1x 107至2.5x 108个总CAR表达T细胞、1x 107至1x108个总CAR表达T细胞、1x 107至5x 107个总CAR表达T细胞、1x 107至2.5x 107个总CAR表达T细胞、2.5x 107至5x 108个总CAR表达T细胞、2.5x 107至2.5x 108个总CAR表达T细胞、2.5x107至1x 108个总CAR表达T细胞、2.5x 107至5x 107个总CAR表达T细胞、5x 107至5x 108个总CAR表达T细胞、5x 107至2.5x 108个总CAR表达T细胞、5x 107至1x 108个总CAR表达T细胞、1x 108至5x 108个总CAR表达T细胞、1x 108至2.5x 108个总CAR表达T细胞或2.5x 108至5x108个总CAR表达T细胞。
在一些实施方案中，所述基因工程化细胞剂量包含至少或至少约1x 105个表达CAR的细胞、至少或至少约2.5x 105个表达CAR的细胞、至少或至少约5x 105个表达CAR的细胞、至少或至少约1x 106个表达CAR的细胞、至少或至少约2.5x 106个表达CAR的细胞、至少或至少约5x 106个表达CAR的细胞、至少或至少约1x 107个表达CAR的细胞、至少或至少约2.5x 107个表达CAR的细胞、至少或至少约5x 107个表达CAR的细胞、至少或至少约1x 108个表达CAR的细胞、至少或至少约2.5x 108个表达CAR的细胞或者至少或至少约5x 108个表达CAR的细胞。
在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数：从或从约1x 105至5x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x 105至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)或者从或从约1x 106至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予一定剂量的细胞，所述剂量包含以下细胞数：至少或至少约1x 105个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如至少或至少1x 106、至少或至少约1x 107、至少或至少约1x 108个此类细胞。在一些实施方案中，所述数目是关于CD3+或CD8+的总数，在一些情况下也是关于重组受体表达(例如CAR+)细胞。在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数：从或从约1x 105至5x 108个CD3+或CD8+总T细胞或者CD3+或CD8+重组受体表达细胞、从或从约5x 105至1x 107个CD3+或CD8+总T细胞或者CD3+或CD8+重组受体表达细胞或者从或从约1x 106至1x 107个CD3+或CD8+总T细胞或者CD3+或CD8+重组受体表达细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数：从或从约1x 105至5x 108个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、从或从约5x 105至1x 107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞或者从或从约1x 106至1x 107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞，每个都包含端值。
在一些实施方案中，所述剂量的T细胞包括CD4+ T细胞、CD8+ T细胞或CD4+和CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量的CD8+ T细胞(包括在剂量中包括CD4+和CD8+ T细胞)包括在约1x 106与5x 108个之间的总重组受体(例如CAR)表达CD8+细胞，例如在约5x 106至1x 108个此类细胞(如1x 107、2.5x 107、5x 107、7.5x107、1x 108或5x 108个总此类细胞)的范围或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，给予所述患者多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，所述细胞剂量包括给予从或从约1x 107至0.75x 108个总重组受体表达CD8+ T细胞、1x107至2.5x 107个总重组受体表达CD8+ T细胞、从或从约1x 107至0.75x 108个总重组受体表达CD8+ T细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，所述细胞剂量包括给予或给予约1x107、2.5x 107、5x 107、7.5x 107、1x 108或5x 108个总重组受体表达CD8+ T细胞。
在一些方面，所述剂量的大小基于一个或多个标准来确定，如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、尺寸或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些方面，所述剂量的大小由所述受试者的疾病或病症的负荷决定。例如，在一些方面，在所述剂量中给予的细胞数基于就在所述细胞剂量开始给予之前在所述受试者中存在的肿瘤负荷来确定。在一些实施方案中，所述第一剂量和/或随后剂量的大小与疾病负荷成反比。在一些方面，如在疾病负荷大的背景下，向所述受试者给予少量的细胞。在其他实施方案中，如在疾病负荷较低的背景下，向所述受试者给予大量的细胞。
在一些实施方案中，基于来自受试者的生物样品的骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的测定结果来确定所述剂量。在一些情况下，基于所述测定的结果，向受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予细胞疗法。
在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予不超过1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。在一些情况下，其中剂量的剂量或与产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量是或含有少于或少于约5x107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如少于或少于约2.5x 107个、少于或少于约1.0x 107个、少于或少于约5.0x 106个、少于或少于约1.0x 106个、少于或少于约5.0x 105个或者少于或少于约1x 105个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
在一些例子中，与产生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含从或从约1x105至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如1x 105至2.5x 107个、1x 105至1.0x 107个、1x 105至5.0x 106个、1x 105至1.0x106个、1.0x 105至5.0x 105个、5.0x 105至5x 107个、5x 105至2.5x 107个、5x 105至1.0x107个、5x 105至5.0x 106个、5x 105至1.0x 106个、1.0x 106至5x 107个、1x 106至2.5x 107个、1x 106至1.0x 107个、1x 106至5.0x 106个、5.0x 106至5x 107个、5x 106至2.5x 107个、5x 106至1.0x 107个、1.0x 107至5x 107个、1x 107至2.5x 107个或者2.5x107至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂包括细胞因子(如IL-2)，以例如增强持久性。在一些实施方案中，所述方法包括给予化学治疗剂。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂包括一种或多种淋巴细胞清除疗法，例如在开始给予所述工程化细胞之前或同时。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括给予磷酰胺，如环磷酰胺。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法可以包括给予氟达拉滨。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法中不包括氟达拉滨。在一些实施方案中，不给予淋巴细胞清除疗法。
在一些实施方案中，在给予所述细胞后，例如通过许多已知方法中的任一种测量所述工程化细胞群的生物学活性。待评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，可以使用任何合适的方法(如描述于例如Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)中的细胞毒性测定)测量所述工程化细胞破坏靶细胞的能力。在某些实施方案中，通过测定一种或多种细胞因子(如CD 107a、IFNγ、IL-2和TNF)的表达和/或分泌来测量所述细胞的生物学活性。在一些方面，通过评估临床结果(如肿瘤负荷或负担的减少)来测量所述生物学活性。
在某些实施方案中，将所述工程化细胞以许多方式进一步修饰，使得增加其治疗或预防功效。例如，可以将所述群体表达的工程化重组受体(如CAR或TCR)直接或通过接头间接缀合至靶向部分。将化合物(例如，CAR或TCR)与靶向部分缀合的实践在本领域是已知的。参见例如，Wadwa等人,J.Drug Targeting 3:1 1 1(1995)和美国专利5,087,616。
V.制品
提供了含有上述试剂的制品，并且提供了使用说明书。所述制品涉及能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记(例如CD14)的试剂。在一些实施方案中，所述试剂检测如下标记，所述标记是骨髓细胞标记，如人骨髓细胞标记，如单核细胞标记，例如人单核细胞标记。在一些方面，所述单核细胞标记是存在于任选地人或健康个体中的全部或大多数单核细胞或大多数单核细胞群上(例如，存在于其表面)的标记。在一些方面，所述单核细胞标记不存在于或通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上，例如不存在于淋巴细胞上和/或不表达于嗜中性粒细胞上。在一些方面，所述单核细胞标记是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。
在一些实施方案中，提供了使用所述试剂测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。
在一些实施方案中，提供了制品，其包括表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以及用于根据或基于生物样品(例如单采术或白细胞单采术样品)中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记(例如CD14)的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述细胞疗法的说明书。在一些实施方案中，所述制品包括包含治疗有效量的本文所述的任何工程化细胞的组合物以及用于向受试者给予以治疗疾病或病症的说明书。
还提供了制品，其含有能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂以及用于根据或基于生物样品中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述药剂的说明书。
所提供的制品可以包括容器和在所述容器上或与所述容器相关的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。所述容器可以由各种材料(如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中，所述容器容纳组合物自身或组合物与有效治疗、预防和/或诊断所述病症的另一种组合物的组合。在一些实施方案中，所述容器具有无菌入口。示例性容器包括静脉内溶液袋、小瓶(包括具有可被注射针刺穿的塞子的那些溶液袋、小瓶)或用于口服给予剂的瓶子或小瓶。所述标签或包装说明书可以指示将所述组合物用于治疗疾病或病症。
在所述制品的一些实施方案中，还提供了说明书。所述说明书规定例如，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗。
在一些情况下，所述说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法。另外，在一些实施方案中，所述说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
在一些实施方案中，所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予细胞疗法。
在一些方面，所述说明书用于基于在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得的生物样品中标记(例如CD14)的检测来给予所述细胞疗法和任选地用于治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的一种或多种其他药剂或治疗。在一些实施方案中，所检测的标记是骨髓细胞标记，如人骨髓细胞标记，如单核细胞标记，例如人单核细胞标记。在一些方面，所述单核细胞标记是存在于任选地人或健康个体中的全部或大多数单核细胞或大多数单核细胞群上(例如，存在于其表面)的标记。在一些方面，所述单核细胞标记不存在于或通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上，例如不存在于淋巴细胞上和/或不表达于嗜中性粒细胞上。在一些方面，所述单核细胞标记是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。在一些实施方案中，所述说明书规定，如果对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比低于所述阈值水平，则任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。在一些方面，所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗。在一些情况下，所述说明书规定，在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予所述细胞疗法。
在一些例子中，所述制品还可以含有一种或多种治疗剂。在一些实施方案中，所述治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。
所述制品可以包括容器和在所述容器上或与所述容器相关的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。所述容器可以由各种材料(如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中，所述容器容纳组合物自身或组合物与有效治疗、预防和/或诊断所述病症的另一种组合物的组合。在一些实施方案中，所述容器具有无菌入口。示例性容器包括静脉内溶液袋、小瓶(包括具有可被注射针刺穿的塞子的那些溶液袋、小瓶)或用于口服给予剂的瓶子或小瓶。所述标签或包装说明书可以指示将所述组合物用于治疗疾病或病症。所述制品还可以包括包装说明书，其指示所述组合物可以用于治疗特定病症。可替代地或另外，所述制品还可以包括另一种或相同的容器，所述容器包含药学上可接受的缓冲剂。它还可以包括其他材料，如其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和/或注射器。
VI.定义
除非另有定义，否则本文使用的所有领域术语、符号和其他技术和科学术语或用辞旨在具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于参考而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含的此类定义不一定应当被解释为表示与本领域通常理解的实质性差异。
如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。在一些实施方案中，向其给予免疫调节多肽、工程化细胞或组合物的受试者(例如，患者)是哺乳动物，通常是灵长类动物，如人。在一些实施方案中，所述灵长类动物是猴或猿。所述受试者可以是雄性或雌性，并且可以处于任何合适的年龄，包括婴儿、幼年、***、成年和老年受试者。在一些实施方案中，所述受试者是非灵长类哺乳动物，如啮齿动物。
如本文所用，“治疗”(“treatment”)(及其语法变体如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病症或障碍、或者与之相关的症状、不良效果或结果或表型的完全或部分改善或减轻。所希望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的缓和、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展的速度、减轻或减缓疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不暗示完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结果的一种或多种影响。
如本文所用，“延迟疾病的发展”意指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(如癌症)的发展。此延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。对于本领域技术人员清楚的是，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，如转移的发展。
如本文所用，“预防”包括提供关于受试者的疾病的发生或复发的预防，所述受试者可能易患所述疾病但尚未被诊断患有所述疾病。在一些实施方案中，所提供的细胞和组合物用于延迟疾病的发展或延缓疾病的进展。
如本文所用，“抑制”功能或活性是当与除了目标条件或参数以外的原本相同的条件相比时，或者与另一种条件相比时，降低功能或活性。例如，与不存在细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的所述细胞降低了肿瘤的生长速率。
在给予的背景下，药剂(例如，药物配制品、细胞或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(如治疗或预防结果)的量。
药剂(例如，药物配制品或工程化细胞)的“治疗有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需治疗结果(如针对治疗疾病、病症或障碍)和/或治疗的药代动力学或药效动力学作用的量。治疗有效量可以根据诸如以下等因素而变化：疾病状态、受试者的年龄、性别和体重、以及所给予的免疫调节多肽或工程化细胞。在一些实施方案中，所提供的方法涉及给予有效量(例如，治疗有效量)的免疫调节多肽、工程化细胞或组合物。
“预防有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需预防结果的量。通常但不是必须的，因为预防剂量是在疾病之前或早期在受试者中使用的，所以预防有效量将小于治疗有效量。
术语“药物配制品”是指如下制剂，其处于使得其中所含活性成分的生物学活性有效的形式，并且不含对给予配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分之外对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
如本文所用，叙述核苷酸或氨基酸位置“对应于”所公开序列中的核苷酸或氨基酸位置(例如序列表中所示)是指，在使用标准比对算法(如GAP算法)与所公开序列比对以使同一性最大化之后，所鉴定的核苷酸或氨基酸位置。通过比对序列，本领域技术人员可以例如使用保守和相同的氨基酸残基作为指导来鉴定相应的残基。通常，为了鉴定对应位置，比对氨基酸序列使得获得最高阶匹配(参见例如：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.编辑,Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing:Informatics andGenome Projects,Smith,D.W.编辑,Academic Press,New York,1993；Computer Analysisof Sequence Data,Part I,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑,Humana Press,New.Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,AcademicPress,1987；和Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.和Devereux,J.编辑,M StocktonPress,New York,1991；Carrillo等人(1988)SIAM J Applied Math 48:1073)。
如本文所用，术语“载体”是指能够传播其所连接的另一核酸分子的核酸分子。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入其的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够指导它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。所述载体包括病毒载体，如逆转录病毒(例如，γ逆转录病毒和慢病毒)载体。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和由其衍生的后代，不考虑传代次数。后代在核酸含量上可能与亲代细胞不完全相同，但可能含有突变。本文包括如在初始转化细胞中所筛选或选择的，具有相同功能或生物学活性的突变型后代。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阳性”的陈述是指特定标记(通常为表面标记)在细胞上或细胞中的可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的存在，例如通过用与所述标记特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平是可检测的，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上与已知对所述标记呈阳性的细胞的水平相似，和/或所述水平基本上高于已知对所述标记呈阴性的细胞的水平。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阴性”的陈述是指特定标记(通常为表面标记)在细胞上或细胞中不存在实质上可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的不存在，例如通过用与所述标记特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平没有检测到，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上低于已知对所述标记呈阳性的细胞的水平，和/或所述水平与已知对所述标记呈阴性的细胞的水平相比是基本上相似的。
如本文所用，在关于氨基酸序列(参考多肽序列)使用时，“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同一性百分比”定义为，在比对序列并在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比并且不将任何保守取代视作序列同一性的一部分之后，候选序列(例如，主题抗体或片段)中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以按本领域熟知的多种方式来实现，例如使用公众可获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较序列的全长中实现最大比对所需的任何算法。
如本文所用，单数形式“一种/一个”(“a”)、“一种/一个”(“an”)和“所述”(“the”)包括复数指示物，除非上下文另外明确说明。例如，“一种/一个”(“a”)或“一种/一个”(“an”)意指“至少一种/至少一个”或“一种/一个或多种/多个”。应理解，本文所述的方面和变化包括“由方面和变化组成”和/或“基本上由方面和变化组成”。
贯穿本公开文本，所要求保护的主题的各个方面以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应当被解释为对所要求保护的主题的范围的僵硬限制。因此，应当认为范围的描述具体公开了所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，在提供值的范围情况下，应理解，在所述范围的上限与下限之间的每个中间值以及在所述范围内的任何其他所述或中间值涵盖在所要求保护的主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地被包括在所述较小范围内，并且也涵盖在所要求保护的主题内，受制于在所陈述范围内任何确切排除的限制。在所陈述范围包括限制中的一者或两者的情况下，排除了那些包括的限制中的任一者或两者的范围也包括在所要求保护的主题内。无论范围的广度如何，这都适用。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文对“约”某一值或参数的提及包括(并描述)针对所述值或参数本身的实施方案。例如，涉及“约X”的描述包括“X”的描述。
如本文所用的，组合物是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。它可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性的、非水性的或其任何组合。
VII.示例性实施方案
所述示例性实施方案包括：
1.一种制品，其包含能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂以及用于使用所述试剂来测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包含表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。
2.根据实施方案1所述的制品，其中所述细胞群是或包含单核细胞。
3.根据实施方案1或实施方案2所述的制品，其中所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或包含CD14+骨髓细胞。
4.根据实施方案1-3中任一项所述的制品，其中所述标记是人的，任选地是人CD14。
5.根据实施方案1-4中任一项所述的制品，其中所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。
6.根据实施方案1-5中任一项所述的制品，其中所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的制品，其中所述生物样品是或获得自血液、血浆或血清样品。
8.根据实施方案1-7中任一项所述的制品，其中所述生物样品是或获得自单采术或白细胞单采术样品。
9.根据实施方案1-8中任一项所述的制品，其还包含所述细胞疗法和/或还包含与所述细胞疗法进行的治疗一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。
10.根据实施方案1-9中任一项所述的制品，其还包含用于治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于给予治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。
11.根据实施方案1-9中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平：
在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗；和/或
向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或
在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
12.根据实施方案1-11中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。
13.根据实施方案1-12中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定向所述受试者给予所述细胞疗法，并且其中所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平：
所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或
所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
14.根据实施方案11-13中任一项所述的制品，其中所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。
15.根据实施方案11-14中任一项所述的制品，其中所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％。
16.一种包含细胞疗法的制品，所述细胞疗法任选地包含表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以及用于给予所述T细胞疗法的说明书，其中：
(A)所述说明书或文献进一步规定，所述给予是根据或基于生物样品中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果来进行，任选地所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；和/或
(B)所述说明书或文献进一步规定了所述治疗的一个或多个具体方面或者进行有待与所述给予联合地进行的一种或多种干预，任选地基于在给予所述细胞疗法后在来自所述受试者的生物样品中评估的参数和/或产生毒性或毒性结果的风险评估水平，其中(i)所述参数是或包含所述受试者的细胞、样品或组织中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平，或者(ii)所述风险评估水平是基于所述受试者的细胞、样品或组织中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平。
17.根据实施方案16、155或156所述的制品，其中(A)中的所述评估包括检测，其任选地包括使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的所述标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。
18.根据实施方案16所述的制品，其中所述细胞群是或包含单核细胞。
19.根据实施方案16-18中任一项所述的制品，其中所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或包含CD14+骨髓细胞，任选地其中所述标记在人细胞的表面上表达，任选地其中所述标记是人CD14。
20.根据实施方案16-19中任一项所述的制品，其中所述标记是作为单核细胞标记的骨髓标记，任选地其中：
所述单核细胞标记不存在于或通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上；和/或
是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。
21.根据实施方案17-20中任一项所述的制品，其中所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。
22.根据实施方案17-21中任一项所述的制品，其中所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
23.根据实施方案16-22中任一项所述的制品，其中所述生物样品是或获得自血液、血浆或血清样品。
24.根据实施方案16-23中任一项所述的制品，其中所述生物样品是或获得自单采术或白细胞单采术样品。
25.根据实施方案17-24中任一项所述的制品，其还包含用于检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述试剂，和/或还包含与用于检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述试剂一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。
26.根据实施方案16-25中任一项所述的制品，其还包含用于治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于给予治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。
27.根据实施方案16-26中任一项所述的制品，其中用于给予所述细胞疗法的说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平：
在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述基因工程化细胞(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗；和/或
向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或
在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
28.根据实施方案16-27中任一项所述的制品，其中用于给予所述细胞疗法的说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。
29.根据实施方案16-28中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定向所述受试者给予所述细胞疗法，并且其中所述说明书进一步规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平：
在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前不给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或
所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
30.根据实施方案27-29中任一项所述的制品，其中所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。
31.根据实施方案27-30中任一项所述的制品，其中所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％。
32.一种制品，其包含能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂以及用于根据或基于生物样品中骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的评估结果给予所述药剂的说明书。
33.根据实施方案32所述的制品，其中所述评估包括检测，其任选地包括使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述骨髓标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。
34.根据实施方案32或实施方案33所述的制品，其中所述说明书规定，在开始向所述受试者给予所述细胞疗法i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时将给予所述药剂，和/或还包含与所述细胞疗法进行的治疗一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。
35.根据实施方案32-34中任一项所述的制品，其中所述生物样品在给予所述药剂或细胞疗法之前从所述受试者获得。
36.根据实施方案32-35中任一项所述的制品，其中所述细胞群是或包含单核细胞。
37.根据实施方案32-34中任一项所述的制品，其中所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或包含CD14+骨髓细胞，任选地其中所述标记在人细胞的表面上表达，任选地其中所述标记是人CD14。
38.根据实施方案32-37中任一项所述的制品，其中所述标记是作为单核细胞标记的骨髓标记，任选地其中：
所述单核细胞标记不存在于或通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上；和/或
是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。
39.根据实施方案33-38中任一项所述的制品，其中所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。
40.根据实施方案33-39中任一项所述的制品，其中所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
41.根据实施方案32-40中任一项所述的制品，其中所述生物样品是或获得自血液、血浆或血清样品。
42.根据实施方案32-41中任一项所述的制品，其中所述生物样品是或获得自单采术或白细胞单采术样品。
43.根据实施方案33-42中任一项所述的制品，其还包含用于检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述试剂，和/或还包含与用于检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述试剂一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。
44.根据实施方案34-43中任一项所述的制品，其还包含所述细胞疗法和/或还包含与所述细胞疗法进行的治疗一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。
45.根据实施方案32-44中任一项所述的制品，其中用于给予所述药剂的说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则向所述受试者给予所述药剂。
46.根据实施方案45所述的制品，其中所述说明书进一步规定了向所述受试者给予细胞疗法，其中所述药剂的给予将在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时进行。
47.根据实施方案32-44中任一项所述的方法，其中用于给予所述药剂的说明书规定，如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比低于所述阈值水平，则向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中所述说明书规定，在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予所述细胞疗法。
48.根据实施方案32-47中任一项所述的制品，其中所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。
49.根据实施方案32-48中任一项所述的制品，其中所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％。
50.根据实施方案1-49中任一项所述的制品，其中对细胞骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述测定或评估包括流式细胞术。
51.根据实施方案10-50中任一项所述的制品，其中所述毒性包含神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，任选地1级或更高的神经毒性或CRS。
52.根据实施方案10-51中任一项所述的制品，其中所述毒性包含神经毒性。
53.根据实施方案10-51中任一项所述的制品，其中：
所述毒性包含严重神经毒性和/或包含2级或更高的神经毒性、3级或更高的神经毒性、至少延长的3级神经毒性或者处于或高于4级或5级神经毒性；和/或
所述毒性包含严重CRS和/或包含2级或更高或者3级或更高的CRS。
54.根据实施方案10-53中任一项所述的制品，其中所述毒性包含严重神经毒性和/或3级或更高的神经毒性。
55.根据实施方案10-54中任一项所述的制品，其中所述毒性与脑水肿相关。
56.根据实施方案10-15和26-55中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗剂是或包含以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的药剂。
57.根据实施方案56所述的制品，其中所述拮抗剂或抑制剂是或包含选自以下的药剂：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
58.根据实施方案10-15和27-56中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。
59.根据实施方案10-15和27-58中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克莱赞珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛珠单抗(CDP6038)、艾西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
60.根据实施方案10-15和27-59中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗是或包含托珠单抗。
61.根据实施方案10-15和27-59中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗是或包含司妥昔单抗。
62.根据实施方案56所述的制品，其中所述类固醇是或包含***。
63.根据实施方案56所述的制品，其中能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性结合CSF-1，特异性结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)激活，激活CB2受体，和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)，或者上调微小RNA-124(miR-124)。
64.根据实施方案63所述的制品，其中能够阻止、阻断或降低小胶质细胞激活或功能的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。
65.根据实施方案63或实施方案64所述的制品，其中所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、***素(任选地WIN55或212-2)、静脉注射免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。
66.根据实施方案63-65中任一项所述的制品，其中所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。
67.根据实施方案63-66中任一项所述的制品，其中所述抑制剂选自：
PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；
艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003或是其抗原结合片段；
或任何前述项的组合。
68.根据实施方案63-67中任一项所述的制品，其中所述抑制剂是PLX-3397。
69.根据实施方案1-68中任一项所述的制品，其中所述重组受体特异性结合至与所述疾病或病症相关的或在与所述疾病或病症相关的病变环境的细胞中表达的抗原。
70.根据实施方案1-69中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是癌症。
71.根据实施方案1-70中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
72.根据实施方案1-71中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
73.根据实施方案69-72中任一项所述的制品，其中所述抗原是受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CA9，也称为G250或CAIX)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、CD19、CD20、CD22、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、III型表皮生长因子受体突变体(EGFR vIII)、叶酸结合蛋白(FBP)、Fc受体样5(FCRL5，也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、人高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、IL-22受体α(IL-22Rα或IL-22R-α)、IL-13受体α2(IL-13Rα2或IL-13R-α2)、激酶***区受体(kdr)、κ轻链、富含亮氨酸重复序列蛋白家族成员8A(LRRC8A)、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、黑素瘤优先表达抗原(PRAME)、存活素、TAG72、B7-H3、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CD171、人白细胞抗原A1(HLA-AI)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、叶酸受体-α、CD44v6、CD44v7/8、αvβ6整合素(avb6整合素)、8H9、神经细胞粘附分子(NCAM)、血管内皮生长因子受体(VEGF受体或VEGFR)、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、NKG2D配体、双抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素(MSLN)、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、***特异性抗原、***干细胞抗原(PSCA)、***特异性膜抗原(PSMA)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、黑色素A(MART-1)、糖蛋白100(gp100)、癌胚胎抗原、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ-异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)、癌胚抗原(CEA)、***受体、孕酮受体、CD123、CD133、c-Met、O-乙酰化GD2(OGD2)、L1-CAM的CE7表位、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD138、病原体特异性或病原体表达的抗原。
74.根据实施方案1-73中任一项所述的制品，其中所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。
75.根据实施方案1-74中任一项所述的制品，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
76.根据实施方案75所述的制品，其中所述CAR包含特异性结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-ζ(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR还包含共刺激信号传导区域，其任选地包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
77.根据实施方案1-74中任一项所述的制品，其中所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+和/或CD8+ T细胞。
78.根据实施方案77所述的制品，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
79.根据实施方案1-78中任一项所述的制品，其中与产生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含少于或少于约5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如少于或少于约2.5x 107个、少于或少于约1.0x 107个、少于或少于约5.0x 106个、少于或少于约1.0x 106个、少于或少于约5.0x 105个或者少于或少于约1x 105个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
80.根据实施方案1-79中任一项所述的制品，其中与产生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含从或从约1x 105至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如1x 105至2.5x 107个、1x 105至1.0x 107个、1x 105至5.0x 106个、1x 105至1.0x 106个、1.0x 105至5.0x 105个、5.0x 105至5x 107个、5x 105至2.5x 107个、5x 105至1.0x 107个、5x 105至5.0x 106个、5x 105至1.0x 106个、1.0x 106至5x107个、1x 106至2.5x 107个、1x 106至1.0x 107个、1x 106至5.0x 106个、5.0x 106至5x 107个、5x 106至2.5x 107个、5x 106至1.0x 107个、1.0x 107至5x 107个、1x 107至2.5x 107个或者2.5x 107至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
81.根据实施方案1-80中任一项所述的制品，其中所述试剂被可检测地标记，任选地被荧光标记。
82.一种选择受试者进行治疗的方法，所述方法包括：
(a)使生物样品与能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂接触，其中：
所述生物样品来自作为用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地包含表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物；并且
所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)选择受试者，在所述受试者中：
i)所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，从而鉴定出有对所述细胞疗法产生毒性的风险的受试者；或者
ii)所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目低于阈值水平。
83.根据实施方案82所述的方法，其中：
(a)选择i)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予将在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时给予；和/或
(b)选择i)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予细胞疗法；和/或
(c)选择i)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
84.根据实施方案82或实施方案83所述的方法，其中选择i)中的受试者进行治疗，并且所述方法还包括：(a)向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时进行；
(b)向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予细胞疗法；
(c)向所述受试者给予细胞疗法或一定剂量的细胞疗法的基因工程化细胞，所述剂量在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关；和/或
(d)在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
85.根据实施方案82所述的方法，其中：
(a)选择ii)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是向所述受试者给予细胞疗法，任选地以非降低剂量，或者任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下；
(b)选择ii)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是向所述受试者给予细胞疗法，其中所述细胞疗法不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或
(c)选择ii)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下给予细胞疗法。
86.根据实施方案82或实施方案85所述的方法，其中选择ii)中的受试者，并且所述方法还包括任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。
87.根据实施方案82、实施方案85或实施方案86所述的方法，其中选择ii)中的受试者，并且所述方法还包括向所述受试者给予所述细胞疗法，其中；
所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或
所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
88.一种治疗方法，其包括：
(a)测定生物样品的骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平，其中所述生物样品来自作为任选地用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地包含表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以治疗疾病或病症；以及
(b)根据或基于所述测定的结果，向所述受试者给予所述细胞疗法和任选地能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗。
89.一种治疗方法，其包括根据或基于来自受试者的生物样品的骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者对所述群体的细胞表达的标记的表达呈阳性或对骨髓标记的表达呈阳性的细胞的水平的测定的结果，向所述受试者给予(i)细胞疗法，其任选地包含表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以治疗疾病或病症，以及任选地(ii)能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗，其中所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得。
90.根据实施方案88或实施方案89所述的方法，其中所述测定包括检测，其任选地包括使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述骨髓标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。
91.根据实施方案88-90中任一项所述的方法，其中如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平：
在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的所述药剂或其他治疗；和/或
向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或
在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
92.根据实施方案88-90中任一项所述的方法，其中如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目或百分比和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或低于阈值水平：
所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性产生的药剂或治疗；和/或
所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
93.一种评估神经毒性风险的方法，其包括：
测定来自受试者的单采术样品的骨髓细胞群的细胞或者对所述群体的细胞表达的标记呈阳性或对骨髓标记的表达呈阳性的细胞的存在或百分比或数目；以及
根据或基于所述测定的结果，确定所述受试者在给予细胞疗法后是否有产生神经毒性或严重神经毒性的风险，所述细胞疗法包含含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物以治疗所述受试者的疾病或病症，
其中所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，并且所述单采术样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述单采术样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。
94.根据实施方案93所述的方法，其中如果所述样品中对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则将所述受试者评估为有产生神经毒性或严重神经毒性的风险。
95.根据实施方案94所述的方法，其中如果将所述受试者评估为有产生神经毒性或严重神经毒性的风险，则所述方法还包括：
在给予所述细胞疗法之后监测所述受试者的除发热以外的神经毒性体征或症状的出现；
在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的所述药剂或其他治疗；
向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或
在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
96.根据实施方案93所述的方法，其中如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则将所述受试者评估为不怀疑有或不太可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险。
97.根据实施方案96所述的方法，其中如果将所述受试者评估为不怀疑有或不太可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险：
在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的神经毒性体征或症状出现之前不向所述受试者进一步给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述神经毒性产生的药剂或治疗；或者
所述方法还包括在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法。
98.一种在给予细胞疗法之后监测受试者的方法，所述方法包括观察给予细胞疗法的受试者的除发热以外的神经毒性或严重神经毒性的体征或症状的出现，其中所述受试者是已经被确定为有或可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险的受试者，如基于将单采术样品中骨髓细胞群的细胞或者对所述群体的细胞表达的标记呈阳性或对骨髓标记的表达呈阳性的细胞的存在或百分比或数目测定为等于或高于阈值水平所确定的，所述单采术样品已经在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述单采术样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞，
其中所述细胞疗法包含含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物以治疗所述受试者的疾病或病症。
99.根据实施方案98所述的方法，其中在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下或在所述受试者在所述观察期或所述观察期的一部分期间住在医院的情况下已经向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在所述受试者没有被确定为有风险的情况下，在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
100.一种预防性治疗的方法，其包括向受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗，其中：
所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包含表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物以治疗疾病或病症；并且
根据或基于来自所述受试者的生物样品的骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的测定的结果已经将所述受试者鉴定为有产生毒性的风险，所述生物样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。
101.根据实施方案91-97和100中任一项所述的方法，其中所述测定包括检测，其任选地包括使能够直接或间接检测骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中对所述标记和/或水平呈阳性、任选地呈表面阳性的细胞的百分比或数目。
102.根据实施方案91-97和100-101所述的方法，其中如果所述样品中对所述标记呈阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述群体的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则向所述受试者给予所述药剂。
103.根据实施方案91-97和100-102中任一项所述的方法，其中在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时给予所述药剂。
104.根据实施方案82-103中任一项所述的方法，其中所述阈值水平在于接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了毒性。
105.根据实施方案82-104中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是所述生物样品或血液或单采术样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比，其为或为约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％。
106.根据实施方案82-105中任一项所述的方法，其中所述百分比是在所述样品中总白细胞或总CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群的或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比，或者是在所述样品中总白细胞或CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群的或对所述骨髓标记呈阳性的细胞的百分比。
107.根据实施方案82-106中任一项所述的方法，其中所述单采术样品是白细胞单采术样品。
108.根据实施方案82-107中任一项所述的方法，其中所述细胞群是或包含单核细胞。
109.根据实施方案82-108中任一项所述的方法，其中所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或包含CD14+骨髓细胞，任选地其中所述标记在人细胞的表面上表达，任选地其中所述标记是人CD14。
110.根据实施方案82-109中任一项所述的方法，其中所述标记是作为单核细胞标记的骨髓标记，任选地其中：
所述单核细胞标记不存在于或通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上；和/或
是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。
111.根据实施方案82-110所述的方法，其中所述标记是CD14，或者所述骨髓细胞群是CD14+，并且所述百分比是在所述样品中总存活白细胞或总存活CD45+细胞中CD14+细胞的百分比。
112.根据实施方案111所述的方法，其中所述阈值水平是在所述单采术样品中总存活白细胞或总存活CD45+细胞中CD14+细胞的百分比，其中所述百分比为或为约45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。
113.根据实施方案82-112中任一项所述的方法，其中所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。
114.根据实施方案82-113中任一项所述的方法，其中所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
115.根据实施方案82-114中任一项所述的方法，其中所述生物样品是或获得自血液、血浆或血清样品。
116.根据实施方案82-115中任一项所述的方法，其中所述生物样品是或获得自单采术或白细胞单采术样品。
117.根据实施方案82-116中任一项所述的方法，其中对细胞骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的所述测定或评估包括流式细胞术。
118.根据实施方案82-117中任一项所述的方法，其中所述毒性包含神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，任选地1级或更高的神经毒性或CRS。
119.根据实施方案82-118中任一项所述的方法，其中所述毒性是神经毒性。
120.根据实施方案119所述的方法，其中所述神经毒性是严重神经毒性或者是3级或更高的神经毒性。
121.根据实施方案82-120中任一项所述的方法，其中：
所述毒性包含严重神经毒性和/或包含2级或更高的神经毒性、3级或更高的神经毒性、至少延长的3级神经毒性或者处于或高于4级或5级神经毒性；和/或
所述毒性包含严重CRS和/或包含2级或更高或者3级或更高的CRS。
122.根据实施方案82-121中任一项所述的方法，其中所述毒性与脑水肿相关。
123.根据实施方案82-122中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗剂是或包含以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的药剂。
124.根据实施方案123所述的方法，其中所述拮抗剂或抑制剂是或包含选自以下的药剂：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
125.根据实施方案83-124中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。
126.根据实施方案83-125中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克莱赞珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛珠单抗(CDP6038)、艾西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
127.根据实施方案83-126中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含托珠单抗。
128.根据实施方案83-127中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含司妥昔单抗。
129.根据实施方案123所述的方法，其中所述类固醇是或包含***。
130.根据实施方案123所述的方法，其中能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性结合CSF-1，特异性结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)激活，激活CB2受体，和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)，或者上调微小RNA-124(miR-124)。
131.根据实施方案130所述的方法，其中能够阻止、阻断或降低小胶质细胞激活或功能的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。
132.根据实施方案130或实施方案131所述的方法，其中所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、***素(任选地WIN55或212-2)、静脉注射免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。
133.根据实施方案130-132中任一项所述的方法，其中所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。
134.根据实施方案130-133中任一项所述的方法，其中所述抑制剂选自：
PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；
艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003或是其抗原结合片段；
或任何前述项的组合。
135.根据实施方案130-133中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是PLX-3397。
136.根据实施方案83-135中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合至与所述疾病或病症相关的或在与所述疾病或病症相关的病变环境的细胞中表达的抗原。
137.根据实施方案83-136中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
138.根据实施方案83-137中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
139.根据实施方案83-138中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
140.根据实施方案82-139中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合与所述疾病或病症相关的或者表达或存在于所述疾病或病症的细胞上的抗原。
141.根据实施方案140所述的方法，其中所述抗原是受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CA9，也称为G250或CAIX)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、CD19、CD20、CD22、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、III型表皮生长因子受体突变体(EGFR vIII)、叶酸结合蛋白(FBP)、Fc受体样5(FCRL5，也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、人高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、IL-22受体α(IL-22Rα或IL-22R-α)、IL-13受体α2(IL-13Rα2或IL-13R-α2)、激酶***区受体(kdr)、κ轻链、富含亮氨酸重复序列蛋白家族成员8A(LRRC8A)、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、黑素瘤优先表达抗原(PRAME)、存活素、TAG72、B7-H3、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CD171、人白细胞抗原A1(HLA-AI)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、叶酸受体-α、CD44v6、CD44v7/8、αvβ6整合素(avb6整合素)、8H9、神经细胞粘附分子(NCAM)、血管内皮生长因子受体(VEGF受体或VEGFR)、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、NKG2D配体、双抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素(MSLN)、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、***特异性抗原、***干细胞抗原(PSCA)、***特异性膜抗原(PSMA)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、黑色素A(MART-1)、糖蛋白100(gp100)、癌胚胎抗原、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ-异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)、癌胚抗原(CEA)、***受体、孕酮受体、CD123、CD133、c-Met、O-乙酰化GD2(OGD2)、L1-CAM的CE7表位、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD138、病原体特异性或病原体表达的抗原。
142.根据实施方案1-141中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合至由治疗剂包含的标签，所述治疗剂特异性靶向所述疾病或病症或者所述疾病或病症的细胞，已经或将向所述受试者给予所述标签。
143.根据实施方案82-142中任一项所述的方法，其中所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。
144.根据实施方案82-143中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
145.根据实施方案144所述的方法，其中所述CAR包含特异性结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-ζ(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR还包含共刺激信号传导区域，其任选地包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
146.根据实施方案82-145中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+和/或CD8+ T细胞。
147.根据实施方案146所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
148.根据实施方案82-147中任一项所述的方法，其中所述细胞疗法包括给予从或从约1x 105至1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x105至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)或者从或从约1x106至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。
149.根据实施方案82-148中任一项所述的方法，其中所述细胞疗法包括给予不超过1x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
150.根据实施方案82-149中任一项所述的方法，其中与产生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含少于或少于约5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如少于或少于约2.5x 107个、少于或少于约1.0x 107个、少于或少于约5.0x 106个、少于或少于约1.0x 106个、少于或少于约5.0x 105个或者少于或少于约1x 105个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
151.根据实施方案82-150中任一项所述的方法，其中与产生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含从或从约1x 105至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如1x 105至2.5x 107个、1x 105至1.0x 107个、1x 105至5.0x 106个、1x 105至1.0x 106个、1.0x 105至5.0x 105个、5.0x 105至5x 107个、5x 105至2.5x 107个、5x 105至1.0x 107个、5x 105至5.0x 106个、5x 105至1.0x 106个、1.0x 106至5x107个、1x 106至2.5x 107个、1x 106至1.0x 107个、1x 106至5.0x 106个、5.0x 106至5x 107个、5x 106至2.5x 107个、5x 106至1.0x 107个、1.0x 107至5x 107个、1x 107至2.5x 107个或者2.5x 107至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
152.根据实施方案82-151中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞对所述受试者是自体的。
153.根据实施方案82-152中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞对所述受试者是同种异体的。
154.根据实施方案82-153中任一项所述的方法，其中所述试剂被可检测地标记，任选地被荧光标记。
155.根据实施方案16所述的制品，其中(B)中的所述进一步规定包括
规定在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述基因工程化细胞(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗；和/或
规定向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生毒性或严重毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生毒性或严重毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或
规定在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
156.根据实施方案16或实施方案155所述的制品，其中所述说明书进一步规定了所述参数或评估风险的水平。
157.根据实施方案1-81和155-156中任一项所述的制品，其中所述说明书规定了进行根据实施方案82-154中任一项所述的方法。
VIII.实施例
以下实施例被包括在内仅用于说明目的，并不旨在限制本发明的范围。
实施例1：对单采术样品中的CD14+单核细胞的评估作为与自体CAR+ T细胞疗法相连的 神经毒性的预测。
评估来自受试者的单采术样品的CD14+单核细胞的百分比，所述单采术样品是在从来自单采术的分离细胞产生自体CAR+ T细胞组合物之前获得的。事后，将CD14+单核细胞的百分比与给予自体治疗性CAR+ T细胞组合物之后在个体受试者中神经毒性的产生相关联。
使用白细胞单采术收集***从来自受试者的全血样品获得在单核细胞中富集的人白细胞单采术样品。通过流式细胞术使用抗CD14抗体评估白细胞单采术样品的CD14+单核细胞的存在。
通过基于免疫亲和力的富集从来自个体受试者的白细胞单采术样品分离CD4+和CD8+T细胞，用编码抗CD19 CAR的病毒载体激活并转导，然后进行扩增和冷冻保存。CAR含有源自鼠抗体的抗CD19 scFv、免疫球蛋白间隔子、源自CD28的跨膜结构域、源自4-1BB的共刺激区域和CD3-ζ细胞内信号传导结构域。
向五十八名患有复发性或难治性非霍奇金淋巴瘤且东部肿瘤协作组(EasterCooperative Oncology Group，ECOG)评分为0-2的受试者(包括患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)NOS(从头的和从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)和3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)的受试者)给予所产生的表达抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞。在静脉内给予之前在床边解冻冷冻保存的细胞组合物。将治疗性T细胞组合物作为确定的组合物细胞产物来给予，其具有源自同一受试者的CAR+工程化T细胞的经配制CD4+和CD8+群体，以大约1:1的目标比率来给予。用含有5x 107个总CAR表达T细胞的剂量水平1(DL-1)或含有1x108个(DL-2)总CAR表达T细胞的剂量水平2(DL-2)治疗受试者。
在给予表达CAR的T细胞之前，将受试者每天用30mg/m2的氟达拉滨治疗3天，并且每天用300mg/m2的环磷酰胺治疗3天。
治疗后，评估并监测受试者的神经毒性(神经***并发症，包括以下症状：意识模糊、失语症、脑病、肌阵挛癫痫、惊厥、嗜睡和/或精神状态改变)，根据美国国家癌症研究所-常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)，按1-5量表分级。常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)。参见美国卫生和公共服务部的不良事件通用术语(CTCAE)第4版，公开于：2009年5月28日(v4.03：2010年6月14日)；和Guido Cavaletti&PaolaMarmiroli Nature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)。在所评估的受试者中，83％(48/58)的经治疗受试者未表现出任何神经毒性，而17％(10/58)的受试者产生了1-4级的神经毒性(任何NTX Gr)，并且在12％(7/58)的受试者中观察到3级或更高的(NTX Gr3+)神经毒性。
通过单变量分析评估单采术样品中CD14+单核细胞的百分比与输注自体CAR+ T细胞后个体受试者中的神经毒性的相关性程度。如图1A和1B所示，未产生任何神经毒性的受试者的白细胞单采术样品中活白细胞的CD14+单核细胞的百分比显著低于产生神经毒性(p＝0.0242)或3+级更高神经毒性(p＝0.0149)的受试者。用其他统计方法观察到相似的结果。
结果与以下发现一致：骨髓细胞(例如单核细胞)的存在(如通过骨髓特异性标记CD14确定的)是个体受试者中白细胞单采术样品的用于预测与后续给予自体表达CAR的T细胞相连产生神经毒性的风险的内在因素。这些结果支持将CD14在来自作为CAR+ T细胞疗法的候选者的受试者的单采术或其他血液衍生的样品中用作标记，以鉴定或筛选受试者用干预进行预防性治疗，从而改善对CAR+ T细胞疗法的神经毒性风险。
实施例2：向患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者给予表达抗CD19 CAR 的细胞
A.受试者和治疗
将含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物给予患有B细胞恶性肿瘤的受试者。结果描述于本实施例中，用于在正在进行的研究中通过特定时间点评价五十五(55)名成人受试者的群组(完整群组)，所述受试者患有复发性或难治性(R/R)侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)，包括从头的或从惰性淋巴瘤转化的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(NOS)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)和2线治疗失败后的3b级滤泡性淋巴瘤(FLG3B)。所治疗的受试者包括东部肿瘤协作组(ECOG)得分在0与2之间的那些(中值随访期为3.2个月)。55名受试者不包括患有套细胞淋巴瘤(MCL)的受试者。没有基于先前的同种异体干细胞移植(SCT)而排除受试者，并且对于单采术不需要最小绝对淋巴细胞计数(ALC)。
分开评估55名受试者的核心子集(所述子集不包括那些具有较差表现状态(ECOG 2)、从边缘区淋巴瘤(MZL)转化的DLBCL和/或慢性淋巴细胞白血病(CLL，Richter's)的受试者(核心群组))在这个时间点的结果。
完整和核心群组的人口统计学和基线特征示于表6中。
Figure BDA0002379202310001601
Figure BDA0002379202310001611
*到最后一次含化疗方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发
所给予的治疗性T细胞组合物已经通过包括从来自待治疗的个体受试者的白细胞单采术样品对CD4+和CD8+细胞进行基于免疫亲和力的富集的过程产生。用编码抗CD19 CAR的病毒载体激活并转导所分离的CD4+和CD8+T细胞，然后对工程化细胞群进行扩增和冷冻保存。CAR含有源自鼠抗体的抗CD19 scFv、免疫球蛋白衍生的间隔子、源自CD28的跨膜结构域、源自4-1BB的共刺激区域和CD3-ζ细胞内信号传导结构域。
在静脉内给予之前解冻冷冻保存的细胞组合物。通过给予以大约1:1的目标比率给予的经配制CD4+CAR+细胞群和经配制CD8+CAR+群体，将治疗性T细胞剂量作为确定的细胞组合物来给予。向受试者给予表达CAR的T细胞的单剂量或双剂量(每个单剂量分别通过表达CAR的CD4+ T细胞和表达CAR的CD8+ T细胞的单独输注来给予)，如下：含有5x 107个总CAR表达T细胞的剂量水平1(DL1)的单剂量(n＝30)；DL1的双剂量，其中每个剂量相隔大约十四(14)天给予(n＝6，包括一名由于给药错误而无意中通过二剂量时间表接受两次DL2剂量的受试者)；或含有1x 108个(DL2)总CAR表达T细胞的剂量水平2(DL2)的单剂量(n＝18)。在CAR+ T细胞输注前三(3)天开始，受试者接受采用氟拉滨(flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除化学疗法。
B.安全性
评估CAR-T细胞疗法的治疗紧急不良事件(TEAE)的存在或不存在。图2描绘了观察到已经历实验室异常和在≥20％的受试者中发生的TEAE的受试者的百分比。除了图2中所示的TEAE之外，还在≥5％的患者中观察到以下3-4级事件项：白细胞计数下降(13.6％)、脑病(12％)、高血压(7％)。所观察到的毒性程度在剂量水平1与2之间一致。
还评估并监测受试者的神经毒性(神经***并发症，包括以下症状：意识模糊、失语症、脑病、肌阵挛癫痫、惊厥、嗜睡和/或精神状态改变)，根据美国国家癌症研究所—常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)，按1-5量表分级。常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)。参见美国卫生和公共服务部的不良事件通用术语(CTCAE)第4版，公开于：2009年5月28日(v4.03：2010年6月14日)；和Guido Cavaletti&PaolaMarmiroli Nature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)。还确定并监测细胞因子释放综合征(CRS)，并且基于严重性进行分级。
在84％的完整群组受试者中，未观察到严重(3级或更高的)细胞因子释放综合征(CRS)和严重神经毒性。另外，据观察，完整群组受试者中的60％未产生任何等级的CRS或神经毒性。在剂量水平之间没有观察到CRS、神经毒性(NT)、sCRS或严重神经毒性(sNT)的发生率的差异。表7汇总了在接受至少一个剂量的CAR-T细胞后28天，患者中细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性不良事件的发生率。如表7所示，在接受单剂量DL2或双剂量DL1的任何受试者中均未观察到sCRS(3-4级)。在完整群组受试者中的16％(9/55)和核心子集受试者中的18％(8/44)中观察到严重神经毒性或严重CRS(3-4级)。11％(n＝6)的受试者接受托珠单抗，24％(n＝13)的受试者接受***。在完整群组内的ECOG2受试者中，所观察到的CRS和神经毒性的比率分别为71％和29％。
Figure BDA0002379202310001621
Figure BDA0002379202310001631
Figure BDA0002379202310001633
包括一名由于给药错误而按DL2 2-剂量时间表治疗的患者
图3示出了描绘所观察到的至CRS和神经毒性发作的时间的Kaplan meier曲线。如图所示，所观察到的到CRS发作和神经毒性发作的中值时间分别为5天和11天，其中在开始给予细胞疗法后不到72小时，仅11％的患者经历CRS发作。到CRS和神经毒性消退至1级或更佳的中值时间分别为5天和7天。到CRS和神经毒性完全消退的中值时间分别为5天和11天。结果与以下结论一致：受试者中任何CRS或神经毒性的早期发作率都较低。
C.对治疗的反应
监测受试者的反应，包括通过在给予CAR+ T细胞后1、3、6、7、12、18和24个月时评估肿瘤负荷。反应率列于表8中。在受试者群组中观察到高持久反应率，所述群组包括过度预治疗或具有较差预后和/或患有复发性或难治性疾病的受试者。对于核心(n＝44)群组中所有剂量的受试者，所观察到的总体反应率(ORR)为86％，并且所观察到的完全反应(CR)率为59％。对于核心群组，在三个月时，总体反应率(ORR)为66％；在核心群组中三个月的CR率为50％。在核心群组中，3个月的ORR在剂量水平1下为58％(11/19)，在剂量水平2下为78％；剂量水平1的3个月CR率为42％(8/19)，并且剂量水平2为56％(5/9)，与所提出的对治疗结果的剂量反应效应一致。另外，结果和剂量与反应持久性之间的关系一致。
Figure BDA0002379202310001632
Figure BDA0002379202310001641
DL1S：DL1 1-剂量时间表；DL2S：DL2 1-剂量时间表；DL1D：DL1 2-剂量时间表；
a包括具有PD、死亡或28天重分期扫描(restaging scan)事件的患者。不包括在数据快照前<28天治疗的患者。
b分母是在数据快照日期之前(在第3个月进行功效评估或者先前的PD或死亡评估)，
在≥3个月前接受CAR T细胞疗法的患者数目。
c包括一名由于给药错误而按DL2 2-剂量时间表治疗的患者
完整和核心群组中各个亚组的受试者之间的总体反应率分别示于图4A和4B中。在高危(poor-risk)DLBCL亚组中，反应率总体上较高。在具有双重/三重命中分子亚型的患者中，在3个月时观察到大于50％的ORR，所述患者患有原发性难治性或化学难治性DLBCL或从未实现过CR。在2名患者中观察到CNS由淋巴瘤累及的完全消退。
在评价的特定时间点之前六个月或更长时间治疗的受试者中，十(10)名患者在三个月时已经有反应，9名(90％)在六个月时仍有反应。在评价时间点，核心子集中97％已经反应的受试者存活并且处于随访中，中值随访时间为3.2个月。
对于受试者的完整和核心群组，反应持续时间和总体存活的结果(按最佳总体反应(无反应者、CR/PR、CR和/或PR)分组)分别示于图5A和5B中。如图所示，在反应者中观察到延长的存活，并且在具有CR的受试者中观察到反应持久性增加。虽然5/6的具有较差表现状态(ECOG 2)的受试者已经期满，但所有在三个月时有反应的患者在评价时都保持存活。
C.对血液中的CAR+ T细胞的评估
进行药代动力学分析以评估在治疗后不同时间点外周血中的CAR+ T细胞数。如图6A所示，在两个所给予剂量水平下，在整个评估过程中检测表达CAR的CD4+和CD8+细胞，如通过在对数标度上标绘的细胞数/μL血液(中值±四分位数)所测量。
与较低剂量水平相比，在给予较高剂量水平的受试者中观察到中值曲线下面积(AUC)(随时间血液中的CD8+CAR+细胞数)增加，没有观察到毒性增加。在反应者(CR/PR)中观察到高于非反应者(PD)的峰值CD8+/CAR+ T细胞暴露；即使在疾病已经进展的受试者中，也观察到在评估期间(包括至3个月和6个月时)细胞的持久性(图6B)。结果与以下结论一致：即使在具有较差反应的受试者中，治疗也导致工程化细胞的暴露和持久性延长。在一些实施方案中，使用组合途径，如在工程化细胞持续存在于受试者中的时间(例如，如通过外周血中的细胞水平所测量)，例如在复发或疾病进展后，给予免疫检查点调节剂或其他免疫调节剂。在一些方面，在给予其他药剂或治疗之后，已经持续延长时间的细胞再次扩增或被激活和/或展现出抗肿瘤功能。通常在产生神经毒性的受试者的血液中随时间观察到较高的中值CD4+和CD8+CAR+ T细胞数(图6C)。
D.血液分析物和神经毒性
在给予CAR+ T细胞之前，在受试者的血清中测量各种治疗前血液分析物，包括细胞因子。使用统计学分析评估与产生神经毒性的风险的潜在相关性。图7示出了在CAR+ T细胞疗法后未产生神经毒性的受试者与产生神经毒性的受试者中，以单位(LDH，U/L；铁蛋白，ng/mL；CRP，mg/L；细胞因子，pg/mL)表示的所评估分析物的中值水平。观察到某些血液分析物(包括LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β)的水平与产生神经毒性的风险水平相关(Wilcoxon p值<0.05，不进行多重数调节)。具体而言，结果与以下结论一致：LDH(其在一些实施方案中是疾病负荷的替代物)的治疗前水平可用于潜在神经毒性风险评估和/或对某些受试者的治疗的风险适应性给药或调整。此外，在给予CAR-T细胞组合物之前测量的肿瘤负荷与产生神经毒性的风险相关联(Spearman p值<0.05)。在一些方面，LDH水平可以单独评估和/或与另一种治疗前参数组合评估，所述另一种治疗前参数是例如疾病负荷的另一种量度或指示物，如肿瘤体积测量值，如尺寸乘积之和(SPD)或疾病负荷的其他基于CT或基于MRI的体积测量值。在一些方面，对指示疾病负荷的一个或多个参数进行评估，并且在一些背景下，所述一个或多个参数可以指示在T细胞疗法后产生神经毒性的风险的存在、不存在或程度。在一些方面，所述一个或多个参数包括LDH和/或体积肿瘤测量值。
图8示出了标绘完整和核心群组内个体受试者的无进展时间(月)的图。每个条形代表单个患者。阴影指示最佳总体反应(在每种情况下，除非另有指示，否则是在1个月时实现)；纹理指示剂量(实心＝剂量水平1(DL1)，单剂量；交叉阴影线，剂量-水平2(DL2)，单剂量；竖直阴影线＝剂量水平1(DL1)，双剂量)。水平箭头指示正在进行中的反应。某些个体受试者最初(例如，在1个月时)被评估为表现出稳定疾病(SD)或部分反应(PR)，并且随后观察到已经实现PR(例如，SD转化为PR)或CR。在此类情况下，如图所示，个体患者条形的阴影指示最佳总体反应，并且沿着每个个体受试者条形的点(与阴影同样对应于所实现的反应)指示在受试者中观察到每例SD、PR和/或CR发生的时间。在两名患者中观察到CNS由淋巴瘤累及的完全消退。观察到一名受试者中的CAR+细胞在复发后在活检后扩增。
实施例3：向患有套细胞淋巴瘤(MCL)的受试者给予表达抗CD19 CAR的细胞
将含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物(如实施例1中所述来产生)给予四(4)名患有套细胞淋巴瘤(MCL)且1线治疗已经失败的人类受试者。在静脉内给予之前解冻冷冻保存的细胞组合物。将治疗性T细胞组合物作为确定的组合物细胞产物来给予，其具有源自同一受试者的CAR+工程化T细胞的经配制CD4+和CD8+群体，以大约1:1的目标比率来给予。以含有5x 107个表达CAR的T细胞的剂量水平1(DL1)的单剂量向受试者给予表达CAR的T细胞的剂量(作为表达CAR的CD4+和CD8+ T细胞的分割剂量)。在CAR+ T细胞输注前三(3)天开始，受试者接受采用氟拉滨(flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除化学疗法。
如实施例1中所述监测受试者的反应和毒性。在任何受试者中均未观察到CRS或神经毒性。在所治疗的4名受试者中，两(2)名受试者实现PR(非持久)，并且两(2)名患者患有进行性疾病。
实施例4：在给予表达抗CD19 CAR的细胞后，在患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)的受试者中对单采术样品中的CD14+单核细胞、反应和安全性结果的进一步评估
在已经于以上实施例1和2所述的临床研究的随后时间点给予自体抗CD19 CAR+ T组合物的患者中评估反应、安全性结果和单采术样品中CD14+单核细胞的百分比与神经毒性结果的相关性。
本实施例中呈现的此时间点的分析是基于对受试者的评估，所述受试者患有DLBCL(从头的和从滤泡性淋巴瘤转化的DLBCL，NOS；高级B细胞淋巴瘤(双重/三重命中)；从CLL或MZL转化的DLBCL；PMBCL；和FL3B，ECOG 0-2，在2线治疗后；用于分析的核心群组包括患有DLBCL，NOS并从滤泡性淋巴瘤(tFL)转化或高级B细胞淋巴瘤(双重/三重命中)且东部肿瘤协作组表现状态(ECOG PS)为0或1的受试者。完整和核心群组中的许多经治疗患者具有至少一种预测3-6个月的短中值总体存活(OS)的高危疾病特征(参见Crump等人,Blood(2017)130:1800-1808和Van de Nest等人,Bone Marrow Transplant.(2016)51(1):51-7)，如双重/三重命中表达子、原发性难治性疾病、是2线或更多治疗线难治性的、从未实现CR、从未接受自体干细胞移植(ASCT)或ECOG PS为2。
总体上如实施例1中所述，从受试者获得单采术样品并评估样品中活CD45+细胞的CD14+单核细胞的百分比。事后，将CD14+单核细胞的百分比与给予自体治疗性CAR+ T细胞组合物之后在个体受试者中神经毒性的产生相关联。
用治疗性CAR+ T细胞组合物治疗后，评估受试者的反应结果(总体反应率(ORR)、完全反应(CR)、部分反应(PR))、持久反应(3个月和6个月ORR和CR)。还评估了各个反应组的反应持续时间(DOR)和总体存活。对于抗CD19 CAR+ T细胞给予，在高危DLBCL亚组中观察到了高持久ORR。此外，在核心群组中，在3个月时有CR的受试者在6个月时继续显示CR，并且在6个月时表现出CR的受试者继续显示较长期的反应。结果与以下观察结果一致：含有精确且一致剂量的CD4+和CD8+CAR+ T细胞的抗CD19 CAR+细胞组合物的给予导致患有R/R侵袭性NHL且预后不良和/或预治疗难消化的受试者产生持久反应。结果表明，核心群组的持久反应率良好。
基本上如实施例1和2中所述，还评估和监测受试者的安全性结果，包括神经毒性和细胞因子释放综合征(CRS)的产生。结果也与可控的毒性和良好的安全性(包括严重CRS和严重神经毒性的发生率较低)一致。在所评估的受试者中，79％(80/101)未表现出任何神经毒性，而21％(21/101)的受试者产生了1-4级的神经毒性(任何NTX Gr)，并且在10％(10/101)的受试者中观察到3级或更高的(NTX Gr3+)神经毒性。
通过单变量分析评估单采术样品中CD14+单核细胞的百分比与输注自体CAR+ T细胞后个体受试者中的神经毒性的相关性程度。如图9A和9B所示，与来自产生神经毒性(p＝0.0299)或3+级更高神经毒性(p＝0.0067)的受试者的白细胞单采术样品中的百分比相比，未产生任何神经毒性的受试者的白细胞单采术样品中活白细胞中的CD14+单核细胞的百分比显著更低。针对有任何神经毒性或没有神经毒性的组之间的结果计算的效应值为0.5516，并且针对有0-2级神经毒性和严重(3+级)神经毒性的组之间的结果计算的效应值为0.8651。
结果与以下发现一致：骨髓细胞(例如单核细胞)的存在(如通过骨髓特异性标记CD14确定的)是个体受试者中白细胞单采术样品的用于预测与后续给予自体表达CAR的T细胞相连产生神经毒性的风险的内在因素。
本发明在范围上并不旨在限于具体公开的实施方案，所提供的实施方案例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和教导，对所描述的组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不脱离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践此类变化，并且此类变化旨在落入本公开文本的范围内。
序列
Figure BDA0002379202310001691
Figure BDA0002379202310001701
Figure BDA0002379202310001711
Figure BDA0002379202310001721
Figure BDA0002379202310001731
Figure BDA0002379202310001741
序列表
<110> JUNO THERAPEUTICS, INC.
YEE, Nathan
RAMSBORG, Christopher Glen
ALBERTSON, Tina
<120> 与和细胞疗法相关的毒性有关的制品和方法
<130> 735042012040
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> 62/514,762
<151> 2017-06-02
<150> 62/515,526
<151> 2017-06-05
<160> 61
<170> 用于Windows版本4.0的FastSEQ
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 间隔子（IgG4铰链）
<400> 1
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 间隔子（IgG4铰链）
<400> 2
gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36
<210> 3
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 铰链-CH3间隔子
<400> 3
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1 5 10 15
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
20 25 30
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
35 40 45
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
50 55 60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
85 90 95
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
100 105 110
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
115
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 铰链-CH2-CH3间隔子
<400> 4
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 5
<211> 282
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> IgD-铰链-Fc
<400> 5
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln
65 70 75 80
Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val
100 105 110
Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn
130 135 140
Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro
145 150 155 160
Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser
180 185 190
Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu
195 200 205
Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro
210 215 220
Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser
225 230 235 240
Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr
245 250 255
Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg
260 265 270
Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His
275 280
<210> 6
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A
<400> 6
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 7
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> tEGFR
<400> 7
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu
195 200 205
Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln
210 215 220
Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly
225 230 235 240
Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro
245 250 255
His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr
260 265 270
Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His
275 280 285
Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro
290 295 300
Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
325 330 335
<210> 8
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 8
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 9
<211> 66
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 9
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
35 40 45
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
50 55 60
Trp Val
65
<210> 10
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 10
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD28
<400> 11
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 12
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 4-1BB
<300>
<308> UniProt Q07011.1
<309> 1995-02-01
<400> 12
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD3ζ
<400> 13
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD3ζ
<400> 14
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD3ζ
<400> 15
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<220>
<221> 重复序列
<222> (5)...(9)
<223> SGGGG重复5次
<400> 16
Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 17
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 17
Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 18
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A
<400> 18
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 19
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MMP接头
<400> 19
Pro Leu Gly Leu Trp Ala
1 5
<210> 20
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A
<400> 20
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 21
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A
<400> 21
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 22
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> E2A
<400> 22
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 23
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2A
<400> 23
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 24
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GMCSFRα链信号序列
<400> 24
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atccca 66
<210> 25
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GMCSFRα链信号序列
<400> 25
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 26
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8α信号肽
<400> 26
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala
<210> 27
<211> 375
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 人CD14
<400> 27
Met Glu Arg Ala Ser Cys Leu Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Val His
1 5 10 15
Val Ser Ala Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu Asp Phe
20 25 30
Arg Cys Val Cys Asn Phe Ser Glu Pro Gln Pro Asp Trp Ser Glu Ala
35 40 45
Phe Gln Cys Val Ser Ala Val Glu Val Glu Ile His Ala Gly Gly Leu
50 55 60
Asn Leu Glu Pro Phe Leu Lys Arg Val Asp Ala Asp Ala Asp Pro Arg
65 70 75 80
Gln Tyr Ala Asp Thr Val Lys Ala Leu Arg Val Arg Arg Leu Thr Val
85 90 95
Gly Ala Ala Gln Val Pro Ala Gln Leu Leu Val Gly Ala Leu Arg Val
100 105 110
Leu Ala Tyr Ser Arg Leu Lys Glu Leu Thr Leu Glu Asp Leu Lys Ile
115 120 125
Thr Gly Thr Met Pro Pro Leu Pro Leu Glu Ala Thr Gly Leu Ala Leu
130 135 140
Ser Ser Leu Arg Leu Arg Asn Val Ser Trp Ala Thr Gly Arg Ser Trp
145 150 155 160
Leu Ala Glu Leu Gln Gln Trp Leu Lys Pro Gly Leu Lys Val Leu Ser
165 170 175
Ile Ala Gln Ala His Ser Pro Ala Phe Ser Cys Glu Gln Val Arg Ala
180 185 190
Phe Pro Ala Leu Thr Ser Leu Asp Leu Ser Asp Asn Pro Gly Leu Gly
195 200 205
Glu Arg Gly Leu Met Ala Ala Leu Cys Pro His Lys Phe Pro Ala Ile
210 215 220
Gln Asn Leu Ala Leu Arg Asn Thr Gly Met Glu Thr Pro Thr Gly Val
225 230 235 240
Cys Ala Ala Leu Ala Ala Ala Gly Val Gln Pro His Ser Leu Asp Leu
245 250 255
Ser His Asn Ser Leu Arg Ala Thr Val Asn Pro Ser Ala Pro Arg Cys
260 265 270
Met Trp Ser Ser Ala Leu Asn Ser Leu Asn Leu Ser Phe Ala Gly Leu
275 280 285
Glu Gln Val Pro Lys Gly Leu Pro Ala Lys Leu Arg Val Leu Asp Leu
290 295 300
Ser Cys Asn Arg Leu Asn Arg Ala Pro Gln Pro Asp Glu Leu Pro Glu
305 310 315 320
Val Asp Asn Leu Thr Leu Asp Gly Asn Pro Phe Leu Val Pro Gly Thr
325 330 335
Ala Leu Pro His Glu Gly Ser Met Asn Ser Gly Val Val Pro Ala Cys
340 345 350
Ala Arg Ser Thr Leu Ser Val Gly Val Ser Gly Thr Leu Val Leu Leu
355 360 365
Gln Gly Ala Arg Gly Phe Ala
370 375
<210> 28
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 成熟的人CD14
<400> 28
Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu Asp Phe Arg Cys Val
1 5 10 15
Cys Asn Phe Ser Glu Pro Gln Pro Asp Trp Ser Glu Ala Phe Gln Cys
20 25 30
Val Ser Ala Val Glu Val Glu Ile His Ala Gly Gly Leu Asn Leu Glu
35 40 45
Pro Phe Leu Lys Arg Val Asp Ala Asp Ala Asp Pro Arg Gln Tyr Ala
50 55 60
Asp Thr Val Lys Ala Leu Arg Val Arg Arg Leu Thr Val Gly Ala Ala
65 70 75 80
Gln Val Pro Ala Gln Leu Leu Val Gly Ala Leu Arg Val Leu Ala Tyr
85 90 95
Ser Arg Leu Lys Glu Leu Thr Leu Glu Asp Leu Lys Ile Thr Gly Thr
100 105 110
Met Pro Pro Leu Pro Leu Glu Ala Thr Gly Leu Ala Leu Ser Ser Leu
115 120 125
Arg Leu Arg Asn Val Ser Trp Ala Thr Gly Arg Ser Trp Leu Ala Glu
130 135 140
Leu Gln Gln Trp Leu Lys Pro Gly Leu Lys Val Leu Ser Ile Ala Gln
145 150 155 160
Ala His Ser Pro Ala Phe Ser Cys Glu Gln Val Arg Ala Phe Pro Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Leu Asp Leu Ser Asp Asn Pro Gly Leu Gly Glu Arg Gly
180 185 190
Leu Met Ala Ala Leu Cys Pro His Lys Phe Pro Ala Ile Gln Asn Leu
195 200 205
Ala Leu Arg Asn Thr Gly Met Glu Thr Pro Thr Gly Val Cys Ala Ala
210 215 220
Leu Ala Ala Ala Gly Val Gln Pro His Ser Leu Asp Leu Ser His Asn
225 230 235 240
Ser Leu Arg Ala Thr Val Asn Pro Ser Ala Pro Arg Cys Met Trp Ser
245 250 255
Ser Ala Leu Asn Ser Leu Asn Leu Ser Phe Ala Gly Leu Glu Gln Val
260 265 270
Pro Lys Gly Leu Pro Ala Lys Leu Arg Val Leu Asp Leu Ser Cys Asn
275 280 285
Arg Leu Asn Arg Ala Pro Gln Pro Asp Glu Leu Pro Glu Val Asp Asn
290 295 300
Leu Thr Leu Asp Gly Asn Pro Phe Leu Val Pro Gly Thr Ala Leu Pro
305 310 315 320
His Glu Gly Ser Met Asn
325
<210> 29
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 29
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 30
<211> 735
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv
<400> 30
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240
gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480
tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtga gcagc 735
<210> 31
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> Xaa1 = 甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸
<220>
<221> 变体
<222> (4)...(4)
<223> Xaa4 = 半胱氨酸或苏氨酸
<400> 31
Xaa Pro Pro Xaa Pro
1 5
<210> 32
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 32
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 33
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 34
<211> 61
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 34
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10 15
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 35
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 35
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 36
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 36
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 37
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 38
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 39
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 39
Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 CDR L1
<400> 40
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 CDR L2
<400> 41
Ser Arg Leu His Ser Gly Val
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 CDR L3
<400> 42
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly
1 5
<210> 43
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 CDR H1
<400> 43
Asp Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 44
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 CDR H2
<400> 44
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 CDR H3
<400> 45
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
1 5
<210> 46
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 VH
<400> 46
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 47
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 VL
<400> 47
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
100 105
<210> 48
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 scFv
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SJ25C1 CDR L1
<400> 49
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SJ25C1 CDR L2
<400> 50
Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SJ25C1 CDR L3
<400> 51
Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 52
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SJ25C1 CDR H1
<400> 52
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SJ25C1 CDR H2
<400> 53
Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 54
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SJ25C1 CDR H3
<400> 54
Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 55
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SJ25C1 VH
<400> 55
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 56
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SJ25C1 VL
<400> 56
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 57
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 57
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 58
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SJ25C1 scFv
<400> 58
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe
210 215 220
Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 CDR H3
<400> 59
His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 CDR L2
<400> 60
His Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FMC63 CDR L3
<400> 61
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr
1 5

Claims (78)

1.一种选择受试者进行治疗的方法，所述方法包括：
(A)使单采术样品与能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记或对骨髓标记的表达呈表面阳性的细胞的试剂接触，其中：
所述单采术样品来自作为用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包含含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物；并且
所述单采术样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述单采术样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(B)选择受试者进行治疗，在所述受试者中：
i)所述样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，从而鉴定出有对所述细胞疗法产生神经毒性的风险的受试者；或者
ii)所述样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目低于阈值水平。
2.根据权利要求1所述的方法，其中：
(a)选择i)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予将在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时给予；和/或
(b)选择i)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的剂量给予细胞疗法；和/或
(c)选择i)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中选择i)中的所述受试者进行治疗，并且所述方法还包括：
(a)向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时进行；
(b)向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的剂量给予细胞疗法；
(c)向所述受试者给予细胞疗法或一定剂量的细胞疗法的基因工程化细胞，所述剂量在给予所述细胞疗法之后与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关；或者
(d)在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
4.根据权利要求1所述的方法，其中：
(a)选择ii)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是向所述受试者给予细胞疗法，任选地以非降低剂量，或者任选地在门诊基础上或任选地不在医院住院持续一天或多天的情况下；
(b)选择ii)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是向所述受试者给予细胞疗法，其中所述细胞疗法不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的神经毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述神经毒性产生的药剂或治疗；和/或
(c)选择ii)中的所述受试者进行治疗，并且所述治疗是在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下给予细胞疗法。
5.根据权利要求1或权利要求4所述的方法，其中选择ii)中的所述受试者进行治疗，并且所述方法还包括任选地在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下任选地以非降低剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。
6.根据权利要求1、权利要求4或权利要求5所述的方法，其中选择ii)中的所述受试者进行治疗，并且所述方法还包括向所述受试者给予所述细胞疗法，其中：
所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的神经毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述神经毒性产生的药剂或治疗；或者
所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
7.一种治疗方法，其包括：
(a)测定单采术样品的骨髓细胞群的细胞或者对所述群体的细胞表达的标记呈表面阳性或对骨髓标记的表达呈表面阳性的细胞的存在或百分比或数目，其中所述单采术样品来自作为任选地用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括给予包含一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物以治疗所述受试者的疾病或病症；以及
(b)根据或基于所述测定的结果，向所述受试者给予所述细胞疗法和任选地能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗。
8.一种治疗方法，其包括根据或基于来自受试者的单采术样品的骨髓细胞群的细胞或者对所述群体的细胞表达的标记呈表面阳性或对骨髓标记的表达呈表面阳性的细胞的存在或百分比或数目的测定的结果，向所述受试者给予(i)细胞疗法，所述细胞疗法包含含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物以治疗所述受试者的疾病或病症，以及任选地(ii)能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗，
其中所述单采术样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得。
9.根据权利要求7或权利要求8所述的方法，其中所述测定包括使所述单采术样品与能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂接触，以及确定所述样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比或数目和/或所述单采术样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目。
10.根据权利要求7-9中任一项所述的方法，其中如果所述样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平：
在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的所述药剂或其他治疗；
向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；或者
在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
11.根据权利要求7-9中任一项所述的方法，其中如果所述样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目低于阈值水平：
所述给予不包括在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的神经毒性体征或症状出现之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述神经毒性产生的药剂或治疗；或者
所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下将向或可以向所述受试者给予。
12.一种评估神经毒性风险的方法，其包括：
测定来自受试者的单采术样品的骨髓细胞群的细胞或者对所述群体的细胞表达的标记呈表面阳性或对骨髓标记的表达呈表面阳性的细胞的存在或百分比或数目；以及
根据或基于所述测定的结果，确定所述受试者在给予细胞疗法后是否有产生神经毒性或严重神经毒性的风险，所述细胞疗法包含含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物以治疗所述受试者的疾病或病症，
其中所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，并且所述单采术样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述单采术样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。
13.根据权利要求12所述的方法，其中如果所述样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目等于或高于阈值水平，则将所述受试者评估为有产生神经毒性或严重神经毒性的风险。
14.根据权利要求13所述的方法，其中如果将所述受试者评估为有产生神经毒性或严重神经毒性的风险，则所述方法还包括：
在给予所述细胞疗法之后监测所述受试者的除发热以外的神经毒性体征或症状的出现；
在开始向所述受试者给予所述细胞疗法(i)之前、(ii)在其一天、两天或三天内、(iii)与其同时和/或(iv)在其之后第一次发热时向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的所述药剂或其他治疗；
向所述受试者以降低的剂量或以在给予所述细胞疗法之后与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关或与在大多数受试者和/或患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的大多数受试者中产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的剂量给予所述细胞疗法；和/或
在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
15.根据权利要求12所述的方法，其中如果所述样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目低于阈值水平，则将所述受试者评估为不怀疑有或不太可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险。
16.根据权利要求15所述的方法，其中如果将所述受试者评估为不怀疑有或不太可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险：
在给予所述细胞疗法之前或与其同时和/或在除发热以外的神经毒性体征或症状出现之前不向所述受试者进一步给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述神经毒性产生的药剂或治疗；或者
所述方法还包括在门诊环境中和/或在所述受试者不在医院住院过夜或持续连续一天或多天的情况下和/或在所述受试者不在医院住院持续一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法。
17.一种在给予细胞疗法之后监测受试者的方法，所述方法包括观察给予细胞疗法的受试者的除发热以外的神经毒性或严重神经毒性的体征或症状的出现，其中所述受试者是已经被确定为有或可能有产生神经毒性或严重神经毒性的风险的受试者，如基于将单采术样品中骨髓细胞群的细胞或者对所述群体的细胞表达的标记呈表面阳性或对骨髓标记的表达呈表面阳性的细胞的存在或百分比或数目测定为等于或高于阈值水平所确定的，所述单采术样品已经在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述单采术样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞，其中所述细胞疗法包含含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物以治疗所述受试者的疾病或病症。
18.根据权利要求17所述的方法，其中在住院环境中和/或在医院住院持续一天或多天的情况下或在所述受试者在所述观察期或所述观察期的一部分期间住在医院的情况下已经向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中在所述受试者没有被确定为有风险的情况下，在门诊基础上或不在医院住院持续一天或多天的情况下将以其他方式向受试者给予所述细胞疗法。
19.一种预防性治疗的方法，其包括向受试者给予能够治疗、预防、延迟、减少或减弱神经毒性的产生或产生风险的药剂或其他治疗，其中：
所述受试者是用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法包含含有一定剂量的表达重组受体的基因工程化细胞的组合物以治疗疾病或病症；并且
根据或基于来自所述受试者的单采术样品的骨髓细胞群的细胞的存在或百分比或数目或者所述群体的细胞表达的标记的表达水平或骨髓标记的表达水平的测定的结果已经将所述受试者鉴定为有产生神经毒性或严重神经毒性的风险，所述单采术样品在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述单采术样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。
20.根据权利要求17-19中任一项所述的方法，其中所述测定包括使所述单采术样品与能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂接触，以及确定所述样品中对所述标记呈表面阳性的细胞的百分比或数目和/或所述样品中所述骨髓细胞群的细胞的百分比或数目。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述阈值水平在低于在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的单采术样品中对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均或均值百分比或数目的25％之内、20％之内、15％之内、10％之内或5％之内，和/或在所述细胞的平均或均值百分比或数目的标准差之内，其中所述组的每名受试者在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物以治疗相同疾病或病症后都接着产生了神经毒性或严重神经毒性。
22.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是在所述单采术样品中骨髓细胞群的或对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比，其中所述百分比为或为约45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述百分比是在所述样品中总白细胞或总CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群的或对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比，或者是在所述样品中总白细胞或CD45+细胞或其存活细胞中所述骨髓细胞群的或对所述骨髓标记呈表面阳性的细胞的百分比。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述单采术样品是白细胞单采术样品。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述骨髓细胞群是或包含单核细胞。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或包含CD14+骨髓细胞，任选地其中所述标记在人细胞的表面上表达，任选地其中所述标记是人CD14。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述标记是作为单核细胞标记的骨髓标记，任选地其中：
所述单核细胞标记不存在于或通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上；和/或
是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述骨髓标记是CD14，或者所述骨髓细胞群是CD14+，并且所述百分比是在所述样品中总存活白细胞或总存活CD45+细胞中CD14+细胞的百分比。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述阈值水平是在所述单采术样品中总存活白细胞或总存活CD45+细胞中CD14+细胞的百分比，其中所述百分比为或为约45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的方法，其中所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的方法，其中对细胞骨髓细胞或在骨髓细胞群上表达的标记的测定或评估包括流式细胞术。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的方法，其中：
所述神经毒性包含严重神经毒性和/或包含2级或更高的神经毒性、3级或更高的神经毒性、至少延长的3级神经毒性或者处于或高于4级或5级神经毒性。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述神经毒性是严重神经毒性或者是3级或更高的神经毒性。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的方法，其中所述神经毒性与脑水肿相关。
36.根据权利要求2-35中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗剂是或包含以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的药剂。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述拮抗剂或抑制剂是或包含选自以下的药剂：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
38.根据权利要求2-37中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。
39.根据权利要求2-38中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克莱赞珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛珠单抗(CDP6038)、艾西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
40.根据权利要求2-39中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含托珠单抗。
41.根据权利要求2-40中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含司妥昔单抗。
42.根据权利要求36所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是类固醇，并且所述类固醇是或包含***。
43.根据权利要求36所述的方法，其中所述药剂是能够阻止、阻断或降低小胶质细胞活性或功能的药剂，并且所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性结合CSF-1，特异性结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)激活，激活CB2受体，和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)，或者上调微小RNA-124(miR-124)。
44.根据权利要求43所述的方法，其中能够阻止、阻断或降低小胶质细胞激活或功能的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。
45.根据权利要求43或权利要求44所述的方法，其中所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、***素(任选地WIN55或212-2)、静脉注射免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。
46.根据权利要求43-45中任一项所述的方法，其中所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。
47.根据权利要求43-46中任一项所述的方法，其中所述抑制剂选自：
PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；
艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003或是其抗原结合片段；
或任何前述项的组合。
48.根据权利要求43-47中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是PLX-3397。
49.根据权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合至与所述疾病或病症相关的或在与所述疾病或病症相关的病变环境的细胞中表达的抗原。
50.根据权利要求2-49中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
51.根据权利要求2-50中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
52.根据权利要求2-51中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤，和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
53.根据权利要求1-52中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合与所述疾病或病症相关的或者表达或存在于所述疾病或病症的细胞上的抗原。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述抗原是受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CA9，也称为G250或CAIX)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、CD19、CD20、CD22、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、III型表皮生长因子受体突变体(EGFR vIII)、叶酸结合蛋白(FBP)、Fc受体样5(FCRL5，也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、人高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、IL-22受体α(IL-22Rα或IL-22R-α)、IL-13受体α2(IL-13Rα2或IL-13R-α2)、激酶***区受体(kdr)、κ轻链、富含亮氨酸重复序列蛋白家族成员8A(LRRC8A)、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、黑素瘤优先表达抗原(PRAME)、存活素、TAG72、B7-H3、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CD171、人白细胞抗原A1(HLA-AI)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、叶酸受体-α、CD44v6、CD44v7/8、αvβ6整合素(avb6整合素)、8H9、神经细胞粘附分子(NCAM)、血管内皮生长因子受体(VEGF受体或VEGFR)、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、NKG2D配体、双抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素(MSLN)、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、***特异性抗原、***干细胞抗原(PSCA)、***特异性膜抗原(PSMA)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、黑色素A(MART-1)、糖蛋白100(gp100)、癌胚胎抗原、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ-异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)、癌胚抗原(CEA)、***受体、孕酮受体、CD123、CD133、c-Met、O-乙酰化GD2(OGD2)、L1-CAM的CE7表位、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD138、病原体特异性或病原体表达的抗原。
55.根据权利要求1-54中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合至由治疗剂包含的标签，所述治疗剂特异性靶向所述疾病或病症或者所述疾病或病症的细胞，已经或将向所述受试者给予所述标签。
56.根据权利要求1-55中任一项所述的方法，其中所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。
57.根据权利要求1-56中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述CAR包含特异性结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-ζ(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR还包含共刺激信号传导区域，其任选地包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
59.根据权利要求1-58中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+和/或CD8+T细胞。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
61.根据权利要求1-60中任一项所述的方法，其中所述细胞疗法包括给予从或从约1x105至1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x 105至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)或者从或从约1x 106至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。
62.根据权利要求1-61中任一项所述的方法，其中所述细胞疗法包括给予不超过1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
63.根据权利要求2、3、10、14-63中任一项所述的方法，其中与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的所述剂量是或包含少于或少于约5x107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如少于或少于约2.5x 107个、少于或少于约1.0x 107个、少于或少于约5.0x 106个、少于或少于约1.0x 106个、少于或少于约5.0x105个或者少于或少于约1x 105个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
64.根据权利要求2、3、10、14-63中任一项所述的方法，其中与产生神经毒性或严重神经毒性的风险无关的所述剂量是或包含从或从约1x 105至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如1x 105至2.5x 107个、1x 105至1.0x 107个、1x105至5.0x 106个、1x 105至1.0x 106个、1.0x 105至5.0x 105个、5.0x 105至5x 107个、5x 105至2.5x 107个、5x 105至1.0x 107个、5x 105至5.0x 106个、5x 105至1.0x106个、1.0x 106至5x 107个、1x 106至2.5x 107个、1x106至1.0x 107个、1x 106至5.0x 106个、5.0x 106至5x 107个、5x 106至2.5x 107个、5x 106至1.0x 107个、1.0x 107至5x 107个、1x 107至2.5x 107个或者2.5x 107至5x 107个总重组受体表达细胞、任选地CAR+细胞，总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
65.根据权利要求1-64中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞对所述受试者是自体的。
66.根据权利要求1-65中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞对所述受试者是同种异体的。
67.根据权利要求1-66中任一项所述的方法，其中所述试剂被可检测地标记，任选地被荧光标记。
68.一种制品，其包含能够检测或特异于骨髓细胞群或在骨髓细胞群上表达的标记的试剂以及用于使用所述试剂来测定来自受试者的单采术样品的说明书，所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包含表达重组受体的基因工程化细胞的剂量或组合物。
69.根据权利要求68所述的制品，其中所述细胞群是或包含单核细胞。
70.根据权利要求68或权利要求69所述的制品，其中所述标记是骨髓细胞标记和/或其中所述标记是CD14和/或其中所述细胞群是或包含CD14+骨髓细胞，任选地其中所述标记在人细胞的表面上表达，任选地其中所述标记是人CD14。
71.根据权利要求68-70中任一项所述的制品，其中所述标记是作为单核细胞标记的骨髓标记，任选地其中：
所述单核细胞标记不存在于或通常不表达于除骨髓细胞以外或除单核细胞以外的细胞群上；和/或
是如下标记，其与人细胞中的CD14共表达或基本上共表达或者与人细胞中的CD14具有同范围的或本质上同范围的表达模式，和/或与人中的CD14具有相似的或本质上相同的表达模式。
72.根据权利要求68-71中任一项所述的制品，其中所述试剂是特异性结合至所述骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。
73.根据权利要求68-72中任一项所述的制品，其中所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
74.根据权利要求68-73中任一项所述的制品，其中所述单采术样品是白细胞单采术样品。
75.根据权利要求68-74中任一项所述的制品，其还包含所述细胞疗法和/或还包含与所述细胞疗法进行的治疗一起使用、在其之前使用和/或与其结合使用的说明书。
76.根据权利要求68-75中任一项所述的制品，其还包含用于治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中神经毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于给予治疗、预防、延迟、减少或减弱所述受试者中神经毒性的产生或产生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。
77.根据权利要求68-76中任一项所述的制品，其中所述神经毒性是严重神经毒性或者是3级或更高的神经毒性。
78.根据权利要求67-77中任一项所述的制品，其中所述说明书规定了进行根据权利要求1-67中任一项所述的方法。
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