CN111163774A - 细菌外排泵抑制剂 - Google Patents

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CN111163774A CN201880045566.2A CN201880045566A CN111163774A CN 111163774 A CN111163774 A CN 111163774A CN 201880045566 A CN201880045566 A CN 201880045566A CN 111163774 A CN111163774 A CN 111163774A
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Abstract

本文公开了式I化合物及其盐。还公开了包含式I化合物的组合物以及使用式I化合物的方法。

Description

细菌外排泵抑制剂
相关申请
本申请要求2017年5月26日提交的美国临时申请号62/511,851和2017年6月21日提交的美国临时申请号62/523,156的优先权。这些申请中的每个的全部内容以引用的方式并入本文。
背景技术
抗生素已经是治疗感染性疾病的有效工具。但是，细菌已经发展出数种不同的机制来克服抗生素的作用。这些抗性机制可以特异于诸如分子或抗生素家族，或者这些机制可以是非特异性的。单种细菌菌株中可能存在数种抗性机制，并且那些机制可以独立地发挥作用，或者它们可以协同地发挥作用，来克服抗生素或抗生素的组合的作用。具体的机制包括例如使药物降解、通过酶法改性使药物失活和改变药物靶标。抗药性的其他机制包括通过减少抗生素向细胞中的转运或者通过增加药物从细胞向外部介质的外排来防止或减少抗生素接近靶标的机制。这两种机制可降低靶位点的药物浓度，并且在存在一种或多种可以其他方式抑制或杀死细菌细胞的抗生素的情况下实现细菌存活。一些细菌利用了两种机制，将细胞壁(包括细胞膜)的低渗透性与抗生素的主动外排结合在一起。已经显示，在单个生物体中抗生素的外排可通过多于一个泵来介导，并且几乎所有的抗生素都通过这种机制经受抗性。
这些多重抗性机制已变得普遍，并威胁抗细菌疗法的临床实用性。抗生素抗性菌株的增加在大型医院和护理中心尤其值得注意。抗性菌株增加的后果包括例如发病率和死亡率较高、患者住院时间较长和治疗成本增加。因此，需要用于抑制这些细菌抗性机制中的一个或多个的剂和方法。
发明内容
当与已知抗生素组合测试时，本文所公开的化合物降低了已知抗生素抑制细菌细胞生长的最小抑制浓度。不受理论的束缚，认为化合物通过抑制一个或多个细菌外排泵来发挥这种作用。
因此，一个实施方案提供式I化合物或其盐：
Figure BDA0002358338140000021
其中：
A为-C(＝O)N(Ra1)-R1、-(C1-C3)烷基-C(＝O)N(Ra1)R1、-(C1-C3)烷基-O-R1、-O-R1、-(C1-C3)烷基-N(Ra1)-R1、-N(Ra1)-R1或R1；
B为(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-，其中B的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个Z1基团取代；
每个R1独立地为：
(a)被一个或多个选自由以下组成的组的基团取代的(C1-C14)烷基：-NRb2Rc2、-NHNH2、-C(＝NRa2)(NRb2Rc2)、-NRa2C(＝NRa2)(Rd2)和-NRa2C(＝NRa2)(NRb2Rc2)，并且其中(C1-C14)烷基任选地独立地被一个或多个卤代基、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基取代；或者
(b)(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-，其中每个(C3-C7)碳环基或(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-独立地被一个或多个Z2或Z3取代，并且其中每个4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个Z2或Z3取代，并且其中R1的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个卤代基、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基取代；
R2为氢、(C1-C4)烷基或苯基(C1-C3)烷基-，其中所述苯基任选地被一个或多个(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素或-NO2取代；
R3为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基、-OH或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R4为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基、-OH或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R5为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基、-OH或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R6为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基、-OH或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Z1独立地为卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、-CO2H、CO2H、苄氧基(-OCH2-苯基)或(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Z2独立地选自由以下组成的组：-NRb3Rc3、-NHNH2、-C(＝NRa3)(NRb3Rc3)、-NRa3C(＝NRa3)(Rd3)和-NRa3C(＝NRa3)(NRb3Rc3)
每个Z3独立地为被一个或多个Z2取代并且任选地被一个或多个Z4取代的-(C1-C6)烷基；
每个Z4独立地为卤代基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra1独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb2和Rc2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
Rd2为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb3和Rc3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；并且
Rd3为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基。
一个实施方案提供一种药物组合物，其包含如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的媒介物。
一个实施方案提供一种药物组合物，其包含如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐、一种或多种抗细菌剂以及药学上可接受的媒介物。
一个实施方案提供一种抑制动物(例如，诸如人的哺乳动物)中的细菌外排泵的方法，其包括向所述动物施用如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐。
一个实施方案提供一种抑制动物(例如，诸如人的哺乳动物)中的细菌外排泵的方法，其包括向有需要的动物施用如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐。
一个实施方案提供一种治疗或预防动物(例如，诸如人的哺乳动物)中的细菌感染的方法，其包括向所述动物共同施用如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种抗细菌剂。
一个实施方案提供一种治疗或预防动物(例如，诸如人的哺乳动物)中的细菌感染的方法，其包括向有需要的动物共同施用如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种抗细菌剂。
一个实施方案提供一种抑制患有细菌感染的动物(例如，诸如人的哺乳动物)中的细菌外排泵的方法，其包括向所述动物施用如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐。
一个实施方案提供一种治疗或预防感染了细菌的动物(例如，诸如人的哺乳动物)中的细菌感染的方法，其包括向所述动物共同施用如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种抗细菌剂。
一个实施方案提供一种如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其用于医学治疗。
一个实施方案提供一种如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其用于预防性或治疗性抑制细菌外排泵以治疗细菌感染。
一个实施方案提供一种如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其与一种或多种抗细菌剂组合用于预防性或治疗性治疗细菌感染。
一个实施方案提供如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐用于制备抑制细菌外排泵的药剂的用途。
一个实施方案提供如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗动物(例如，诸如人的哺乳动物)中的细菌感染的药剂的用途。
一个实施方案提供如本文所述的式I化合物或其药学上可接受的盐用于制备与一种或多种抗细菌剂组合来治疗动物(例如，诸如人的哺乳动物)中的细菌感染的药剂的用途。
一个实施方案提供本文所公开的可用于制备式I化合物或其盐的方法和中间体。
具体实施方式
除非另外描述，否则使用以下定义：卤代基或卤素为氟代、氯代、溴代或碘代。烷基和烷氧基等表示直链基团与支链基团两者，但提及诸如丙基的单独基团仅涵盖直链基团(诸如异丙基的支链异构体是被明确提及的)。
如本文所用，术语“(Ca-Cb)烷基”(其中a和b为整数)是指具有a至b个碳原子的直链或支链烷基。因此，例如当a为1且b为6时，所述术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。
如本文所用，术语“芳基”是指其中环原子为碳的单个芳族环或多稠合环系。例如，芳基可具有6至10个碳原子或6至12个碳原子。芳基包括苯基。芳基还包括具有约9至12个碳原子或9至10个碳原子的多稠合环系(例如，包含2个环的环系)，其中至少一个环为芳族。此类多稠合环系可任选地在多稠合环系的任何环烷基部分上被一个或多个(例如，1个或2个)氧代基取代。应当理解，如上文所定义的多稠合环系的连接点可为环系的任何位置，包括环的芳基或环烷基部分。典型的芳基包括但不限于苯基、茚基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、蒽基等。
如本文所用，术语“杂芳基”是指单个芳族环或多稠合环系。所述术语包括在环中具有约1至6个碳原子和约1-4个选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子的单个芳族环。硫和氮原子也可以氧化形式存在，前提条件是环为芳族。此类环包括但不限于吡啶基、嘧啶基、噁唑基或呋喃基。所述术语还包括多稠合环系(例如，包含2个环的环系)，其中如上文所定义的杂芳基可与一个或多个杂芳基(例如，萘啶基)、杂环(例如，1,2,3,4-四氢萘啶基)、环烷基(例如，5,6,7,8-四氢喹啉基)或芳基(例如，吲唑基)稠合以形成多稠合环系。此类多稠合环系可任选地在稠合环的环烷基或杂环部分上被一个或多个(例如，1个或2个)氧代基取代。在一个实施方案中，单环或双环杂芳基具有5至10个环原子，包含1至9个碳原子和1至4个杂原子。应当理解，多稠合环系(如上针对杂芳基所定义)的连接点可位于多稠合环系的任何位置包括多稠合环系的杂芳基、杂环、芳基或环烷基部分；并且位于多稠合环系的任何合适的原子包括碳原子和杂原子(例如，氮)。示例性杂芳基包括但不限于吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡唑基、噻吩基、吲哚基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、呋喃基、噁二唑基、噻二唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、吲唑基、喹喔啉基、喹唑啉基、5,6,7,8-四氢异喹啉基、苯并呋喃基、苯并咪唑基和硫茚基。
如本文所用，术语“杂环基”或“杂环”是指单个饱和或部分不饱和的环或多稠合环系。所述术语包括在环中具有约1至6个碳原子和约1至3个选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子的单个饱和或部分不饱和的环(例如，3、4、5、6或7元环)。环可被一个或多个(例如，1、2或3个)氧代基取代并且硫和氮原子也可以其氧化形式存在。此类环包括但不限于氮杂环丁烷基、四氢呋喃基或哌啶基。应当理解，杂环的连接点可位于杂环的任何合适的原子。示例性杂环包括但不限于氮丙啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、高哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、四氢呋喃基、二氢噁唑基、四氢吡喃基和四氢硫代吡喃基。
术语“卤代烷基”饱和被一个或多个(例如，1、2、3或4个)卤代基取代的如本文所定义的烷基。一种具体的卤代基烷基为“(C1-C6)卤代烷基”。
术语环烷基、碳环或碳环基包括饱和和部分不饱和的碳环系。在一个实施方案中，环烷基为单环碳环。此类环烷基包括“(C3-C7)碳环基”和“(C3-C8)环烷基”。
以下针对基团、取代基和范围列出的具体值仅用于说明；它们不排除基团和取代基的其他限定值或在限定范围内的其他值。
明确地说，(C1-C6)烷基可为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、戊基、3-戊基或己基；(C1-C6)烷氧基可为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、3-戊氧基或己氧基；(C3-C8)环烷基可为环丙基、环丁基、环戊基或环己基；(C1-C6)卤代烷基可为碘甲基、溴甲基、氯甲基、氟甲基、三氟甲基、2-氯乙基、2-氟乙基、2,2,2-三氟乙基或五氟乙基；芳基可为苯基、茚基或萘基；并且杂芳基可为呋喃基、咪唑基、***基、三嗪基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基(或其N-氧化物)、噻吩基、嘧啶基(或其N-氧化物)、吲哚基、异喹啉基(或其N-氧化物)或喹啉基(或其N-氧化物)。
应当理解，以下所提供的实施方案是针对式I及其所有子式(例如，式Ia)的化合物。应当理解，两个或更多个实施方案可以结合。
在一个实施方案中，A为-C(＝O)N(Ra1)-R1。
在一个实施方案中，Ra1为氢。
在一个实施方案中，R2为氢或(C1-C6)烷基。
在一个实施方案中，R2为氢。
在一个实施方案中，式I化合物为式Ia化合物：
Figure BDA0002358338140000091
或其盐。
在一个实施方案中，R3为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，R3为氢。
在一个实施方案中，R3为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、-OH或(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，R3为氢或-OH。
在一个实施方案中，R3为氢、-OH或甲氧基。
在一个实施方案中，R4为氢、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，R4为苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，R4为苯基，其中苯基任选地被一个或多个卤代基取代。
在一个实施方案中，R4为4-氟苯基。
在一个实施方案中，R4为氢或苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，R4为氢或苯基，其中苯基任选地被一个或多个卤代基取代。
在一个实施方案中，R4为4-氟苯基或氢。
在一个实施方案中，R5为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，R5为氢。
在一个实施方案中，R5为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基或苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，R5为氢或苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，R5为氢或苯基，其中苯基任选地被一个或多个独立地选自由卤代基和(C1-C4)烷基组成的组的基团取代。
在一个实施方案中，R5为氢、4-氟苯基、苯基或3,5-二甲基苯基。
在一个实施方案中，R6为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，R6为氢。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基或杂芳基-(C1-C4)烷基-，其中B的任何C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基或杂芳基-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-或杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-或杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或6元杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或6元杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(CH2)-或吡啶基，其中B的任何苯基、苯基-(CH2)-或吡啶基任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基或杂芳基-(C1-C4)烷基-，其中B的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基或杂芳基-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个Z基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C4)炔基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-或杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-或杂芳基任选地被一个或多个Z基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基乙炔基、(C3-C7)碳环基乙基或6元杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基乙炔基、(C3-C7)碳环基乙基或6元杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(CH2)-、(C3-C7)碳环基乙炔基、(C3-C7)碳环基乙基或吡啶基，其中B的任何苯基、苯基-(CH2)-、(C3-C7)碳环基乙炔基、(C3-C7)碳环基乙基或吡啶基任选地被一个或多个Z1基团取代。
在一个实施方案中，B为4-氟苯基、环丙基、苄基、吡啶-4-基、4-羟基苯基、4-三氟甲基苯基、4-苯甲酸、3-苄氧基苯基、3-羟基苯基、苯基、3,5-二甲基苯基、2-环丙基乙炔基或2-环丙基乙基。
在一个实施方案中，每个Z1独立地为卤代基、-OH或(C1-C4)卤代烷基。
在一个实施方案中，每个Z1独立地为卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)卤代烷氧基。
在一个实施方案中，每个Z1独立地为卤代基、-OH、-CO2H、苄氧基或(C1-C4)卤代烷基。
在一个实施方案中，B为4-氟苯基、环丙基、苄基、吡啶-4-基、4-羟基苯基或4-三氟甲基苯基。
在一个实施方案中，R1为被一个或多个独立地选自-NRb2Rc2的基团取代的(C1-C14)烷基，并且其中所述(C1-C14)烷基任选地被一个或多个(C3-C7)碳环基取代。
在一个实施方案中，R1为被一个或多个独立地选自-NRb2Rc2的基团取代的(C2-C10)烷基，并且其中所述(C2-C10)烷基任选地被一个或多个(C3-C7)碳环基取代。
在一个实施方案中，R1为被两个或更多个独立地选自-NRb2Rc2的基团取代的(C4-C8)烷基。
在一个实施方案中，Rb2和Rc2各自为氢。
在一个实施方案中，R1为4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-，其中所述4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-被一个或多个独立地选自由Z和被一个或多个Z取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z独立地选自由以下组成的组：-NRb3Rc3、-NHNH2、-C(＝NRa3)(NRb3Rc3)、-NRa3C(＝NRa3)(Rd3)和-NRa3C(＝NRa3)(NRb3Rc3)，并且其中所述4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
在一个实施方案中，R1为4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-，其中所述4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-被一个或多个独立地选自由Z和被一个或多个Z取代的(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z独立地为-NRb3Rc3，并且其中所述4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
在一个实施方案中，R1为吡咯烷基-(C1-C4)烷基-，其中所述吡咯烷基-(C1-C4)烷基-被一个或多个独立地选自由Z和被一个或多个Z取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z独立地为-NRb3Rc3，并且其中所述吡咯烷基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
在一个实施方案中，R1为吡咯烷基-(CH2)-，其中所述吡咯烷基-(CH2)-被一个或多个独立地选自由Z和被一个或多个Z取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z独立地为-NRb3Rc3，并且其中所述吡咯烷基-(CH2)-任选地独立地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
在一个实施方案中，R1为吡咯烷基-(CH2)-，其中所述吡咯烷基-(CH2)-在所述吡咯烷基上被经一个或多个-NRb3Rc3取代的-(C1-C6)烷基取代。
在一个实施方案中，Rb3和Rc3各自为氢。在一个实施方案中，R1为：
Figure BDA0002358338140000151
在一个实施方案中，A为：
Figure BDA0002358338140000152
一个实施方案提供一种为以下的化合物：
Figure BDA0002358338140000153
Figure BDA0002358338140000161
Figure BDA0002358338140000171
Figure BDA0002358338140000181
或其盐(或其药学上可接受的盐)。
一个实施方案提供一种为以下的化合物：
Figure BDA0002358338140000191
Figure BDA0002358338140000201
Figure BDA0002358338140000211
一个实施方案提供一种用于鉴别能够抑制细菌外排抑制剂的测试化合物的方法，其包括
1)将细菌与亚抑制浓度的抗生素接触；
2)依序或同时将细菌与a)抑制浓度的抗生素和b)测试化合物接触；以及
3)定量抗生素的最小抑制浓度(MIC)，其中低于单独抗生素的固有MIC的MIC指示测试化合物有效抑制细菌外排泵抑制剂。
在某些实施方案中，步骤1和2相隔约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48小时。在某些实施方案中，步骤1和2相隔约12小时。在某些实施方案中，步骤1和2相隔约24小时。
一个实施方案提供一种用于鉴别能够抑制细菌外排抑制剂的测试化合物的方法，其包括
1)将细菌与亚抑制浓度的抗生素接触；
2)将第一子集的细菌与抑制浓度的抗生素接触；
3)依序或同时将第二子集的细菌与a)抑制浓度的抗生素和b)测试化合物接触；以及
4)定量抗生素对于第一子集的细菌和第二子集的细菌的最小抑制浓度(MIC)，其中在第二子集中MIC较低指示测试化合物有效抑制细菌外排泵抑制剂。
在某些实施方案中，步骤1和2和/或1和3相隔约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48小时。在某些实施方案中，步骤1和2相隔约12小时。在某些实施方案中，步骤1和2相隔约24小时。在某些实施方案中，步骤1和3相隔约12小时。在某些实施方案中，步骤1和3相隔约24小时。在某些实施方案中，步骤2和3在基本上相同的时间(例如，相隔约短于10、30、60、90或120秒，或相隔约3、4或5分钟)进行。
一个实施方案提供一种用于鉴别能够降低抗生素的最小抑制浓度(MIC)的测试化合物的方法，其包括
1)将细菌与亚抑制浓度的抗生素接触；
2)依序或同时将细菌与a)抑制浓度的抗生素和b)测试化合物接触；以及
3)定量抗生素的最小抑制浓度(MIC)，其中低于抗生素的固有MIC的MIC指示测试化合物有效降低抗生素的MIC。
在某些实施方案中，步骤1和2相隔约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48小时。在某些实施方案中，步骤1和2相隔约12小时。在某些实施方案中，步骤1和2相隔约24小时。
一个实施方案提供一种用于鉴别能够降低抗生素的最小抑制浓度(MIC)的测试化合物的方法，其包括
1)将细菌与亚抑制浓度的抗生素接触；
2)将第一子集的细菌与抑制浓度的抗生素接触；
3)依序或同时将第二子集的细菌与a)抑制浓度的抗生素和b)测试化合物接触；以及
4)定量抗生素对于第一子集的细菌和第二子集的细菌的最小抑制浓度(MIC)，其中在第二子集中MIC较低指示测试化合物有效降低抗生素的MIC。
在某些实施方案中，步骤1和2和/或1和3相隔约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48小时。在某些实施方案中，步骤1和2相隔约12小时。在某些实施方案中，步骤1和2相隔约24小时。在某些实施方案中，步骤1和3相隔约12小时。在某些实施方案中，步骤1和3相隔约24小时。在某些实施方案中，步骤2和3在基本上相同的时间(例如，相隔约短于10、30、60、90或120秒，或相隔约3、4或5分钟)进行。
此类方法还可以用于确定测试化合物与抗生素之间的协同作用。
如本文所用，术语“最小抑制浓度(MIC)”是指防止细菌的可见生长的化合物(例如，抗生素)最低浓度。用于测量化合物的MIC的测定为本领域已知的，例如，如本文所述。如本文所用，术语“固有MIC”是指化合物(例如，抗生素)对于尚未预先暴露于化合物的特定细菌种类的MIC。
如本文所用，术语“亚抑制浓度”是指不减少细菌的可见生长的抗生素浓度。在某些实施方案中，亚抑制浓度为1/2×抗生素的MIC。在某些实施方案中，抗生素的亚抑制浓度为能够诱导细菌中一个或多个外排泵的表达的浓度。
如本文所用，术语“抑制浓度”是指减少细菌的可见生长的抗生素浓度。在某些实施方案中，此浓度为抗生素的固有MIC。
在某些实施方案中，细菌为本文所述的细菌种类。在某些实施方案中，细菌为铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)。
在某些实施方案中，抗生素为本文所述的抗生素。在某些实施方案中，抗生素为头孢吡肟(cefepime)、克拉霉素(clarithromycin)或左氧氟沙星(levofloxacin)。
在某些实施方案中，测试化合物为本文所述的化合物诸如式I化合物、外排泵抑制剂(EPI)等。
一个实施方案提供一种鉴别测试化合物和抗生素的能够治疗动物中的败血病的组合的方法，其包括：
1)向动物静脉内施用测试化合物；
2)向动物以口服方式或静脉内施用抗生素；
3)向动物皮下施用测试化合物；
4)向动物以口服方式或静脉内施用抗生素；以及
5)评估动物的败血病症状，其中症状减轻指示所述组合有效治疗败血病。
在某些实施方案中，每次施用独立地相隔大致约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55或60分钟。在某些实施方案中，每次施用相隔约5分钟。
在某些实施方案中，所述方法还包括重复步骤1-4。例如，在某些实施方案中，在已经第二次施用抗生素之后24小时重复步骤1-4。
在某些实施方案中，测试化合物和抗生素的组合为协同组合。
在某些实施方案中，动物为非人动物。例如，在某些实施方案中，动物为小鼠。
在某些实施方案中，抗生素为本文所述的抗生素。在某些实施方案中，抗生素为头孢吡肟、克拉霉素或左氧氟沙星。
在某些实施方案中，测试化合物为本文所述的化合物诸如式I化合物、外排泵抑制剂(EPI)等。
一个实施方案提供一种本文所述的用于(例如，使用实施例中所述的测定)鉴别能够抑制细菌外排泵抑制剂的化合物的方法。
一个实施方案提供式I化合物或其盐：
Figure BDA0002358338140000261
其中：
A为-C(＝O)N(Ra1)-R1、-(C1-C3)烷基-C(＝O)N(Ra1)R1、-(C1-C3)烷基-O-R1、-O-R1、-(C1-C3)烷基-N(Ra1)-R1、-N(Ra1)-R1或R1；
B为(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-，其中B的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个Z1基团取代；
每个R1独立地为：
(a)被一个或多个选自由以下组成的组的基团取代的(C1-C14)烷基：-NRb2Rc2、-NHNH2、-C(＝NRa2)(NRb2Rc2)、-NRa2C(＝NRa2)(Rd2)和-NRa2C(＝NRa2)(NRb2Rc2)，并且其中(C1-C14)烷基任选地独立地被一个或多个(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基取代；或者
(b)(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-，其中每个(C3-C7)碳环基或(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-独立地被一个或多个选自由Z和被一个或多个Z取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，并且其中每个4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个选自由Z和被一个或多个Z取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z独立地选自由以下组成的组：-NRb3Rc3、-NHNH2、-C(＝NRa3)(NRb3Rc3)、-NRa3C(＝NRa3)(Rd3)和-NRa3C(＝NRa3)(NRb3Rc3)，并且其中每个(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个(C1-C4)烷基取代；
R2为氢、(C1-C4)烷基或苯基(C1-C3)烷基-，其中所述苯基任选地被一个或多个(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素或-NO2取代；
R3为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R4为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R5为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R6为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Z1独立地为卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Ra1独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb2和Rc2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
Rd2为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb3和Rc3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；并且
Rd3为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基。
一个实施方案提供式I化合物或其盐：
Figure BDA0002358338140000281
其中：
A为-C(＝O)N(Ra1)-R1、-(C1-C3)烷基-C(＝O)N(Ra1)R1、-(C1-C3)烷基-O-R1、-O-R1、-(C1-C3)烷基-N(Ra1)-R1、-N(Ra1)-R1或R1；
B为(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-，其中B的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个Z1基团取代；
每个R1独立地为：
(a)被一个或多个选自由以下组成的组的基团取代的(C1-C14)烷基：-NRb2Rc2、-NHNH2、-C(＝NRa2)(NRb2Rc2)、-NRa2C(＝NRa2)(Rd2)和-NRa2C(＝NRa2)(NRb2Rc2)，并且其中(C1-C14)烷基任选地独立地被一个或多个卤代基、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基取代；或者
(b)(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-，其中每个(C3-C7)碳环基或(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-独立地被一个或多个Z2或Z3取代，并且其中每个4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个Z2或Z3取代，并且其中R1的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个卤代基、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基取代；
R2为氢、(C1-C4)烷基或苯基(C1-C3)烷基-，其中所述苯基任选地被一个或多个(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素或-NO2取代；
R3为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R4为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R5为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R6为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Z1独立地为卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Z2独立地选自由以下组成的组：-NRb3Rc3、-NHNH2、-C(＝NRa3)(NRb3Rc3)、-NRa3C(＝NRa3)(Rd3)和-NRa3C(＝NRa3)(NRb3Rc3)
每个Z3独立地为被一个或多个Z2取代并且任选地被一个或多个Z4取代的-(C1-C6)烷基；
每个Z4独立地为卤代基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra1独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb2和Rc2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
Rd2为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb3和Rc3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；并且
Rd3为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基。
一般来讲，可如以下一般方法和方案中所说明来制备式I化合物以及可用于制备式I化合物的合成中间体。应当理解，以下所示的可变基团(例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6)可代表式I化合物中存在的最终对应基团，或者这些基团可代表可在合成序列中的便利点转化为式I化合物中存在的最终对应基团的基团。例如，可变基团可含有一个或多个保护基，所述保护基可在合成序列中的便利位置移除以提供式I化合物中的最终对应基团。
方案1和2说明一些用于制备取代的吲哚羧酰胺的一般方法。
方案1
Figure BDA0002358338140000311
方案2
Figure BDA0002358338140000321
本文所公开的化合物为细菌外排泵抑制剂。外排泵抑制剂为干扰外排泵输出底物的能力的化合物。抑制剂可具有其自身固有的抗细菌属性。当与抗细菌剂一起施用时，本文所公开的化合物可用于治疗细菌感染(例如，革兰氏阴性和***感染)。
在一个实施方案中，正在治疗的细菌感染为革兰氏阴性细菌菌株感染。在一个实施方案中，革兰氏阴性细菌菌株选自由以下组成的组：鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)、乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)、溶血不动杆菌(Acinetobacter haemolyticus)、鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffi)、伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia)、伴放线聚集杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)、根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)、吉氏拟杆菌(Bacteroides distasonis)、埃氏拟杆菌(Bacteroides eggerthii)、福赛拟杆菌(Bacteroides forsythus)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、卵状拟杆菌(Bacteroides ovalus)、内脏拟杆菌(Bacteroidessplanchnicus)、多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)、单形拟杆菌(Bacteroidesuniformis)、普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)、支气管炎博德特氏菌(Bordetellabronchiseptica)、副百日咳博德特氏菌(Bordetella parapertussis)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、伯氏疏螺旋体菌(Borrelia burgdorferi)、卡他布兰汉菌(Branhamella catarrhalis)、洋葱伯克氏菌(Burkholderia cepacia)、结肠弯曲菌(Campylobacter coli)、胎儿弯曲菌(Campylobacter fetus)、空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)、新月柄杆菌(Caulobacter crescentus)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、差异柠檬酸杆菌(Citrobacter diversus)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)、大肠埃希氏菌(Escherchia coli)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)、***加德纳菌(Gardnerella vaginalis)、杜克雷嗜血杆菌(Haemophilus ducreyi)、溶血嗜血杆菌(Haemophilus haemolyticus)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、副溶血嗜血杆菌(Haemophilus parahaemolyticus)、副流感嗜血杆菌(Haemophilus parainfluenzae)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、反硝化金氏菌(Kingella denitrificans)、产吲哚金氏菌(Kingella indologenes)、金氏金氏菌(Kingella kingae)、口腔金氏菌(Kingella oralis)、产酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、鼻硬结克雷伯氏菌(Klebsiellarhinoscleromatis)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)、牛莫拉菌(Moraxella bovis)、卡他莫拉菌(Moraxellacatarrhalis)、腔隙莫拉菌(Moraxella lacunata)、摩氏摩根菌(Morganella morganii)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、成团泛菌(Pantoea agglomerans)、犬巴斯德菌(Pasteurella canis)、溶血巴斯德菌(Pasteurella haemolytica)、多杀巴斯德菌(Pasteurella multocida)、土拉巴斯德菌(Pasteurella tularensis)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、产碱普罗威登斯菌(Providencia alcalifaciens)、雷极普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)、斯氏普罗威登斯菌(Providencia stuartii)、食酸假单胞菌(Pseudomonas acidovorans)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteriditis)、副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、福氏志贺氏菌(Shigella jlexneri)、宋内氏志贺氏菌(Shigella sonnei)、嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilla)、小韦荣氏球菌(Veillonella parvula)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)、中间耶尔森氏菌(Yersinia intermedia)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)和假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)。
在一个实施方案中，正在治疗的细菌感染为***菌株感染。在一个实施方案中，***菌株选自由以下组成的组：内氏放线菌(Actinomycesnaeslundii)、粘性放线菌(Actinomyces viscosus)、炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、白喉棒杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、溃疡棒杆菌(Corynebacterium ulcerans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、禽分枝杆菌(Mycobacterium avium)、胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellulare)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus)、人葡萄球菌(Staphylococcus hominis)、猪葡萄球菌(Staphylococcus hyicus)、中间葡萄球菌(Staphylococcus intermedius)、解糖葡萄球菌(Staphylococcus saccharolyticus)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)、变形链球菌(Streptococcus mutans)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)、唾液链球菌(Streptococcussalivarius)和血链球菌(Streptococcus sanguis)。
需要时，组合物还可含有其他活性治疗剂，诸如麻醉剂、非甾体抗炎药(NSAID)、镇痛药、麻药、镇静剂、局部麻药、神经肌肉阻滞剂、抗癌药、抗微生物剂(例如，氨基糖苷、抗真菌剂、抗寄生物剂、抗病毒剂、碳青霉烯类药、头孢菌素(例如，头孢吡肟)、氟喹诺酮、大环内酯、青霉素、磺酰胺、四环素、另一抗微生物剂)、抗银屑病药、皮质类固醇、促蛋白合成类固醇、糖尿病相关剂、矿物质、营养剂、甲状腺剂、维生素、钙相关激素、止泻剂、止咳药、止呕药、抗溃疡药、轻泻剂、抗凝血剂、***(例如，阿法依泊汀(epoetin alpha))、非格司亭(filgrastim)(例如，G-CSF、Neupogen)、沙格司亭(sargramostim)(GM-CSF、Leukine)、免疫接种、免疫球蛋白、免疫抑制剂(例如，巴利昔单抗(basiliximab)、环孢素、达利珠单抗(daclizumab))、生长激素、激素替代药、***受体调节剂、扩瞳药、睫状肌麻痹药、烷基化剂、抗代谢物、有丝***抑制剂、放射性药、抗抑郁药、抗躁狂剂、抗精神病药、抗焦虑药、***、拟交感神经药、***、多奈哌齐(donepezil)、塔克林(tacrine)、哮喘药、β激动剂、吸入甾体、白三烯抑制剂、甲基黄嘌呤、色甘酸、肾上腺素或其类似物、阿法链道酶(dornase alpha)(Pulmozyme)、细胞因子或其任何组合。
在一个实施方案中，抗细菌剂选自喹诺酮、四环素、糖肽、氨基糖苷、β-内酰胺、利福霉素(rifamycin)、大环内酯、酮内酯、噁唑烷酮、香豆霉素(coumermycin)和氯霉素。
应当理解，具有手性中心的本发明化合物可以光学活性和外消旋形式存在和分离。一些化合物可表现出多态性。应当理解，本发明涵盖本发明化合物的具有本文所述的适用属性的任何外消旋、光学活性、多态性或立体异构形式或其混合物，本领域中熟知的是如何制备光学活性形式(例如，通过重结晶技术拆分外消旋形式、通过从光学活性起始材料进行合成、通过手性合成或通过使用手性固定相进行色谱分离)。
当本文的化合物式中的键以非立体化学方式(例如平坦的)绘制时，键所连接的原子包括所有立体化学可能性。当本文的化合物式中的键以限定的立体化学方式(例如粗体、粗体-楔形、虚线或虚线-楔形)绘制时，应当理解，立体化学键所连接的原子富含所描绘的绝对立体异构体，除非另外指出。在一个实施方案中，化合物可以是至少51％的所描绘的绝对立体异构体。在另一实施方案中，化合物可以是至少60％的所描绘的绝对立体异构体。在另一实施方案中，化合物可以是至少80％的所描绘的绝对立体异构体。在另一实施方案中，化合物可以是至少90％的所描绘的绝对立体异构体。在另一实施方案中，化合物可以是至少95％的所描绘的绝对立体异构体。在另一实施方案中，化合物可以是至少99％的所描绘的绝对立体异构体。
本领域的技术人员还应理解，本发明的某些化合物可以多于一种互变异构形式存在。例如，式(I)化合物中的式-NH-C(＝O)H的取代基可以如-N＝C(OH)H的互变异构形式存在。本发明涵盖式I化合物的所有互变异构形式以及其可根据pH而以不带电荷和带电荷的实体平衡地存在的混合物，它们具有本文所述的有用属性。
在化合物具有足够碱性或酸性的情况下，式I化合物的盐可适用作用于分离或纯化式I化合物的中间体。另外，施用作为药学上可接受的酸盐或碱盐的式I化合物可为适当的。药学上可接受的盐的实例为与形成生理可接受的阴离子的酸形成的有机酸加成盐，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。还可形成合适的无机盐，包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。盐可使用本领域中熟知的标准程序获得，例如通过使碱性足够的化合物诸如胺与提供对应的阴离子的合适的酸反应。还可制备羧酸的碱金属(例如，钠、钾或锂)或碱土金属(例如，钙)盐。
药学上合适的抗衡离子包括本领域中熟知的药学上合适的阳离子和药学上合适的阴离子。药学上合适的阴离子的实例包括但不限于上文所述的那些(例如，生理学上可接受的阴离子)，包括Cl-、Br-、I-、CH3SO3 -、H2PO4 -、CF3SO3 -、p-CH3C6H4SO3 -、柠檬酸根、酒石酸根、磷酸根、苹果酸根、富马酸根、甲酸根或乙酸根。
本领域的技术人员应当理解，可以将包含抗衡离子的本发明化合物转化为包含不同抗衡离子的本发明化合物。可以使用多种熟知的技术和材料来实现此一转化，包括但不限于离子交换树脂、离子交换色谱和选择性结晶。
式I化合物可被配制成药物组合物并且以适合于所选施用途径(即，口服或胃肠外、通过静脉内、肌肉内、局部或皮下途径)的多种形式向哺乳动物宿主(诸如，人患者)施用。对于口服施用，可以将化合物配制成具有或不具有肠溶衣的固体剂型。
因此，本发明化合物可与药学上可接受的媒介物诸如惰性稀释剂、赋形剂或可吸收食用载剂组合来全身性施用，例如口服施用。它们可封闭在硬壳或软壳明胶胶囊中，可压制成片剂，或可直接与患者膳食的食物结合。对于口服治疗性施用，活性化合物可与一种或多种赋形剂组合并且以可摄取片剂、经颊片剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬液、糖浆、薄片等形式使用。此类组合物和制剂应含有至少0.1％活性化合物。当然，组合物和制剂的百分比可为变化的并且可合宜地在给定单位剂型的约2重量％至约90重量％之间。此类治疗适用的组合物中活性化合物的量为使得将获得有效剂量水平的量。
片剂、锭剂、丸剂、胶囊等还可含有以下：粘合剂，诸如黄蓍胶、***胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，诸如磷酸二钙；崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，诸如硬脂酸镁；以及甜味剂，诸如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜，或者可添加调味剂，诸如胡椒薄荷、冬青油或樱桃香精。当单位剂型为胶囊时，除以上类型的材料之外，它还可含有液体载剂，诸如植物油或聚乙二醇。各种其他材料可作为包衣存在或以其他方式修改固体单位剂型的物理形式。例如，片剂、丸剂或胶囊可用明胶、蜡、虫胶或糖等包衣。糖浆或酏剂可含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味剂诸如樱桃或甜橙香精。当然，用于制备任何单位剂型的任何材料都应为药学上可接受的并且在所用量下基本上无毒。此外，活性化合物可结合到持续释放的制剂、粒子和装置中。
活性化合物还可通过输注或注射来静脉内或肌肉内施用。可于水中制备活性化合物或其盐的溶液，任选地与无毒表面活性剂混合。还可于甘油、液体聚乙二醇、三乙酸甘油酯及其混合物中以及于油中制备分散液。在普通的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
适用于注射或输注的药物剂型可包括无菌水溶液或分散液或任选地囊封于脂质体中的包含活性成分的无菌粉末，所述活性成分适合于临时制备无菌可注射或可输注溶液或分散液。在所有情况下，最终剂型应在制造和存储条件下为无菌、流体和稳定的。液体载剂或媒介物可为溶剂或液体分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯及其合适的混合物。适当的流动性可例如通过形成脂质体、通过在分散液的情况下维持所需粒子大小或通过使用表面活性剂加以维持。对微生物作用的防止可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞(thimerosal)等来实现。在许多情况下，将为优选的是包括等渗剂，例如糖、缓冲液或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中使用延迟吸收的剂例如单硬脂酸铝和明胶来实现。
无菌注射溶液是通过将在适当溶剂中的所需量的活性化合物与上文列举的各种其他成分(根据需要)合并，随后进行过滤灭菌来制备。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，所述技术产生活性成分加存在于先前无菌过滤溶液中的任何额外所需成分的粉末。
对于局部施用，本发明化合物可以以纯的形式来应用，即在它们为液体时来应用。然而，将通常合乎需要的是将它们与皮肤病学上可接受的载剂组合，以组合物或制剂形式施用至皮肤，所述载剂可为固体或液体。
适用的固体载剂包括微细分的固体，诸如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝、纳米粒子等。适用的液体载剂包括水、醇或二醇或水-醇/二醇共混物，其中本发明化合物可任选地借助于无毒表面活性剂在有效水平下溶解或分散于所述载剂中。可添加诸如芳香剂和额外抗微生物剂的佐剂以优化针对给定用途的属性。所得液体组合物可通过用于浸渍绷带和其他敷料的吸收垫施用，或使用泵型喷雾器或气溶胶喷雾器喷射于受影响的区域上。
增稠剂诸如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯类、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物材料也可与液体载剂一起使用，以形成用于直接向使用者的皮肤施用的可涂开的糊剂、凝胶剂、膏剂、皂剂等。
式I化合物的适用剂量可通过在动物模型中比较它们的体外活性和体内活性来确定。用于将在小鼠和其他动物中的有效剂量外推至人的方法为本领域中已知的；例如参见美国专利号4,938,949。
为在治疗中使用所需的化合物或其活性盐或衍生物的量将不仅随所选的特定盐变化，而且随施用途径、所治疗病状的性质以及患者的年龄和状况变化，并且将最终由主治医师或临床医师酌定。
然而，一般来讲，合适的剂量将在以下范围内：每天每千克体重约1至约500mg，例如约5至约400mg，诸如每天每千克接受者体重1至约250mg。
化合物便利地以单位剂型配制；例如，每单位剂型含有5至500mg、10至400mg或5至100mg活性成分。在一个实施方案中，本发明提供一种包含以此一单位剂型配制的本发明化合物的组合物。
所需剂量可便利地以单剂量提供或者作为以适当间隔施用的分剂量提供，例如作为每天两次、三次、四次或更多次亚剂量提供。亚剂量本身可被进一步分成例如多次分开不精确间隔的施用。
本文所公开的化合物与一种或多种其他活性治疗剂(例如，抗细菌剂)的共同施用通常是指同时或依序施用本文所公开的化合物和一种或多种其他活性治疗剂，使得治疗有效量的本文所公开的化合物和一种或多种其他治疗剂均存在于患者体内。
本文所公开的化合物抑制细菌外排泵的能力可使用如实施例12中所述和如表1中所示的方法确定。
表1
Figure BDA0002358338140000401
Figure BDA0002358338140000411
Figure BDA0002358338140000421
Figure BDA0002358338140000431
Figure BDA0002358338140000441
Figure BDA0002358338140000451
*这些数据是使用克拉霉素作为抗生素和针对大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC25922的各种EPI生成的。
**这些数据是使用左氧氟沙星作为抗生素和针对铜绿假单胞菌ATCC 27853的各种EPI生成的。
本发明现在将通过以下非限制性实施例来说明。
中间体的制备。
表2显示用于制备本文所述的化合物的胺中间体。
表2
Figure BDA0002358338140000461
方案3说明用于制备某些胺中间体的一般方法。
方案4
Figure BDA0002358338140000462
试剂和条件：a)(i)N-甲基吗啉、氯甲酸异丁酯、DME；(ii)NaBH4、DME/H2O；b)(i)邻苯二甲酸酰亚胺、DIAD、PPh3、THF；(ii)肼、甲醇。
变量X和Y表示所需要的保护基。变量W表示对应于式I化合物的R1变量的(C2-C13)烷基。应当理解，连接至W的两个氮原子连接于W的不同碳原子上。
胺中间体A((5-氨基戊-1,4-二基)(R)-二氨基甲酸二-叔丁酯)的制备。
Figure BDA0002358338140000471
(5-氨基戊-1,4-二基)(R)-二氨基甲酸二-叔丁酯
将(5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)戊-1,4-二基)(R)-二氨基甲酸二-叔丁酯(1.71g，2.24mmol)溶解于甲醇(20mL)中，并且添加一水合肼(220μL，4.47mmol)。将反应混合物回流2小时并且冷却至室温。将形成的沉淀物过滤，并且使用甲醇洗涤滤液。将滤液在减压下浓缩，并且将剩余的油状物使用ISCO色谱仪以二氧化硅(0-10％甲醇/二氯甲烷+1％NH4OH)进行纯化以得到呈黄色油状物的产物。(560mg,79％)；1H NMR(CDCl3)(300MHz)δ4.62(m,2H),3.52(m,1H),3.14-3.09(m,2H),2.79-2.60(m,2H),1.64-1.57(m,4H),1.48-1.23(m,18H)
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000481
(5-羟基戊-1,4-二基)(R)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向-15℃的(R)-2,5-双((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸(1.70g，5.11mmol)在30ml THF中的溶液中接连添加N-甲基吗啉(620μL，5.70mmol)和氯甲酸异丁酯(668μL，5.11mmol)。在-15℃下将反应物搅拌至-10℃，持续15分钟。通过过滤移除沉淀的N-甲基吗啉盐酸盐并用THF(10mL)洗涤，将合并的滤液在冰盐浴中冷冻至-15℃。然后在-15℃下一次性添加硼氢化钠(580mg，15.33mmol)在水(4mL)中的溶液。在这个温度下将此反应混合物搅拌10分钟。通过添加饱和NH4Cl水溶液将反应物淬灭并且用乙酸乙酯萃取所得混合物。用盐水洗涤有机层，并且经硫酸钠进行干燥。然后将溶液过滤并且在减压下浓缩。粗产物直接用于下一个步骤而不进行进一步纯化。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000482
(5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)戊-1,4-二基)(R)-二氨基甲酸二-叔丁酯
将三苯基膦(1.61g，6.13mmol)和邻苯二甲酸酰亚胺(902mg，6.13mmol)添加至含有无水THF(40mL)的烧瓶中。添加(5-羟基戊-1,4-二基)(R)-二氨基甲酸二-叔丁酯(1.63g，5.11mmol)并且将烧瓶冷却至0℃。逐滴添加DIAD(1.24g，6.13mmol)，并且将反应物在0℃下搅拌30分钟且在室温下过夜。将混合物在减压下浓缩，并且将残余物使用ISCO色谱仪以二氧化硅(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化进行纯化以得到呈白色固体的产物。(1.71g，74％)；1H NMR(CDCl3)(300MHz)δ7.89-7.82(m,2H),7.76-7.69(m,2H),4.64-4.62(m,2H),3.97-3.94(m,1H)3.74-3.67(m,2H),3.15-3.13(m,2H),1.66-1.52(m,4H),1.52-1.43(m,9H),1.27-1.23(m,9H)。
胺中间体B((5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯)的制备。
Figure BDA0002358338140000491
(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
将形成的(5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(760mg，1.70mmol)溶解于甲醇(30mL)中，并且添加一水合肼(177μL，3.40mmol)。将反应混合物回流2小时并且冷却至室温。将形成的沉淀物过滤，并且使用甲醇洗涤滤液。将滤液在减压下浓缩，并且将剩余的油状物使用ISCO柱色谱法在硅胶(0-10％甲醇/二氯甲烷与1％NH3·H2O)上进行纯化以得到呈黄色油状物的产物。(450mg，83％产率)；1H NMR(CDCl3)(300MHz)δ4.63(m,2H),3.52-3.49(m,1H),3.14-3.12(m,2H),2.79-2.60(m,2H),1.54-1.57(m,4H),1.53-1.26(m,18H)。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000501
(5-羟基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向-15℃的(S)-2,5-双((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸(1000mg，3.01mmol)在30mLTHF中的溶液中接连添加N-甲基吗啉(305μL，3.32mmol)和氯甲酸异丁酯(411μL，3.01mmol)。在-15℃下将反应物搅拌至-10℃，持续15分钟。通过过滤移除沉淀的N-甲基吗啉盐酸盐并用THF(10mL)洗涤，将合并的滤液在冰盐浴中冷冻至-15℃。然后在-15℃下一次性添加硼氢化钠(342mg，9.03mmol)在水(4mL)中的溶液。在这个温度下将此反应混合物搅拌10分钟。通过添加饱和NH4Cl水溶液将反应物淬灭并且用乙酸乙酯萃取所得混合物。用盐水洗涤有机层，并且经硫酸钠进行干燥。然后将溶液过滤并在减压下浓缩，并且将残余物在柱(0-100％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化以得到呈白色粉末的产物(750mg，78％产率)；1HNMR(CDCl3)(300MHz)δ4.74-4.64(m,2H),3.63-3.55(m,3H),3.14-3.13(m,2H),2.45(m,1H),1.68-1.58(m,4H),1.56-1.44(m,18H)。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000502
(5-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
将三苯基膦(742mg，2.83mmol)和邻苯二甲酸酰亚胺(417mg，2.83mmol)添加至含有无水THF(15mL)的烧瓶中。添加(5-羟基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(750mg，2.36mmol)并且将烧瓶冷却至0℃。逐滴添加DIAD(573mg，2.83mmol)，并且将反应物在0℃下搅拌30分钟且在室温下过夜。将混合物在减压下浓缩，并且将残余物使用ISCO色谱法以硅胶(0-100％乙酸乙酯/己烷)进行纯化以得到呈白色固体的产物。(760mg，72％产率)；1HNMR(CDCl3)(300MHz)δ7.86-7.83(m,2H),7.72-7.69(m,2H),4.64-4.61(m,2H),3.97-3.94(m,1H)3.70-3.67(m,2H),3.15-3.13(m,2H),1.67-1.54(m,4H),1.52-1.37(m,9H),1.37-1.22(m,9H)。
胺中间体C的制备。
使用与用于制备中间体A、B、D、E和F的程序类似的程序制备中间体C。
胺中间体D(((2S)-1-氨基己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯)的制备。
Figure BDA0002358338140000511
((2S)-1-氨基己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯
将((2S)-1-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯(320mg，0.694mmol)溶解于甲醇(20mL)中，并且添加一水合肼(0.136mL，2.78mmol)。然后将反应混合物回流2小时并且冷却至室温。将形成的沉淀物过滤，并且使用甲醇洗涤滤液。将滤液在减压下浓缩。将反应物用EtOAc稀释，依序用饱和NaHCO3、饱和氯化铵和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩。粗产物直接使用而不进行进一步纯化；1H NMR(CDCl3)(300MHz)δ4.98-4.90(m,1H),4.72-4.41(m.1H),3.59-3.48(m,1H),2.75-2.56(m,1H),1.48-1.021(m,25H)。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000521
(1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-5-氧代己-2-基)氨基甲酸(S)-叔丁酯
向-78℃的(S)-叔丁基-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-5-氧代吡咯烷-1-甲酸酯(1.8g，3.97mmol)在THF(400mL)中的溶液中逐滴添加3M甲基氯化镁(1.45mL，4.37mmol)。在-78℃下将混合物搅拌2小时之后，将反应物升温至0℃并在室温下再搅拌2小时。将反应混合物用DCM稀释，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，倾倒至水中并用乙酸乙酯萃取。将残余物在ISCO(0-70％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化以得到呈白色固体的产物。(1.5g，78％)；1H NMR(CDCl3)(300MHz)δ7.72(m,4H),7.50(m,6H),4.78(m,1H),3.75-3.69(m,3H),2.55(m,2H),2.15(s,3H),1.95(m,2H),1.53(s,9H),1.16(s,9H)；
步骤2)
Figure BDA0002358338140000531
((2S)-5-氨基-1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)己-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向(1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-5-氧代己-2-基)氨基甲酸(S)-叔丁酯(0.70mg，9.03mmol)和乙酸铵(2.01g，26.1mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中添加分子筛和氰基硼氢化钠(1.64g，26.1mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将分子筛过滤出并用EtOAc洗涤。将滤液在减压下浓缩并且在EtOAc与饱和NaHCO3溶液之间进行分配，且用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，在减压下浓缩。粗产物直接用于下一个步骤而不进行进一步纯化。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000532
((2S)-1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯
向室温的((2S)-5-氨基-1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)己-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.65g，1.34mmol)在DCM(25mL)中的溶液中添加DIPEA(0.47mL，2.68mmol)和(Boc)2O(0.584g，2.68mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用DCM稀释，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩。将残余物在ISCO(0-100％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化以得到呈白色固体的产物。(586mg，75％)；1H NMR(CDCl3)(300MHz)δ7.74(m,5H),7.50(m,5H),4.78(m,1H),4.40(m.1H),3.69(m,5H),1.54-1.33(m,31H),1.12(m,3H)；
步骤4)
Figure BDA0002358338140000541
((2S)-1-羟基己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯
向0℃的((2S)-1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯(0.50g，0.86mmol)在THF(15mL)中的溶液中添加1M TBAF(3.43mL，3.43mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，用EtOAc萃取三次。将有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩。将残余物在ISCO(0-70％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化以得到呈白色固体的产物。(290mg，97％)。1H NMR(CDCl3)(300MHz)δ4.96-4.86(m,1H),4.55-4.36(m.1H),3.57(m,3H),3.13(m,1H),1.61-1.22(m,22H),1.08(m,3H)；
步骤5)
Figure BDA0002358338140000542
((2S)-1-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯
将三苯基膦(237mg，0.905mmol)和邻苯二甲酸酰亚胺(133mg，0.905mmol)添加至含有无水THF(50mL)的烧瓶中。添加((2S)-1-羟基己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯(250mg，0.754mmol)并且将烧瓶冷却至0℃。逐滴添加DIAD(183mg，0.905mmol)，并且将反应物在0℃下搅拌30分钟且在室温下过夜。将混合物在减压下浓缩，并且将残余物使用ISCO色谱仪(0-70％乙酸乙酯/己烷)进行纯化以得到呈白色固体的产物(320mg)。1H NMR(CDCl3)(300MHz)δ7.82(m,2H),7.69(m,2H),4.70-4.58(m,1H),4.37(m.1H),3.92(m,1H),3.65(m,3H),1.61-1.11(m,26H)；
步骤6)
Figure BDA0002358338140000551
((2S)-1-氨基己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯
将((2S)-1-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯(320mg，0.694mmol)溶解于甲醇(20mL)中，并且添加一水合肼(0.136mL，2.78mmol)。然后将反应混合物回流2小时并且冷却至室温。将形成的沉淀物过滤，并且使用甲醇洗涤滤液。将滤液在减压下浓缩。将反应物用EtOAc稀释，依序用饱和NaHCO3、饱和氯化铵和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩。粗产物直接使用而不进行进一步纯化；1H NMR(CDCl3)(300MHz)δ4.98-4.90(m,1H),4.72-4.41(m.1H),3.59-3.48(m,1H),2.75-2.56(m,1H),1.48-1.021(m,25H)。
胺中间体E和F((((3S,5R)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯和(((3R,5S)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯)的制备。
Figure BDA0002358338140000561
(((3S,5R)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0002358338140000562
(((3R,5S)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯。
在0℃下向(((5S)-1-苄基-5-(羟基甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.58g，5.23mmol)、三苯基膦(1.51g，5.75mmol)和邻苯二甲酸酰亚胺(846mg，5.75mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加DIAD(1.16mL，5.75mmol)。在0℃-室温下进行搅拌并通过TLC监测。反应完成之后，将其在减压下浓缩，并且将残余物关于柱色谱法以硅胶使用50-90％在己烷中的乙酸乙酯进行纯化以得到呈灰白色固体的粗产物(2.8g，约80％纯度)。
向以上粗产物(2.8g，约80％纯度，约5.2mmol)在MeOH(30mL)中的溶液中添加一水合肼(1.8mL，36.0mmol)。将混合物在80℃下搅拌1h，然后冷却至室温。将溶剂移除，并且将残余物用CH2Cl2进行研磨。通过过滤移除白色固体，并且将滤液在减压下浓缩，并将残余物通过柱色谱法在硅胶上进行纯化。用EtOAc然后用在10％MeOH/CH2Cl2中的1％NH3.H2O进行洗脱，得到作为(((3S,5R)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的上化合物(top spot)(386mg，黄色油状物，在2个步骤中25％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.30(m,5H),5.28(br.S,1H),3.99(d,J＝13.5Hz,1H),3.15(d,J＝12.9Hz,1H),3.09(m,2H),2.70-2.90(m,3H),2.51(m,1H),2.04-2.34(m,3H),1.36-1.50(m,10H)，和作为(((3S,5R)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的下化合物(bottom spot)(498mg，白色固体，在2个步骤中32％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.30(m,5H),4.52(br.S,1H),3.57(d,J＝12.9Hz,1H),3.47(d,J＝12.9Hz,1H),2.81-3.02(m,5H),1.80-1.95(m,2H),1.59(m,1H),1.43(s,9H),0.70(m,1H)
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000571
(((5S)-1-苄基-5-(羟基甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向0℃在N2下的1-苄基-4-氰基吡咯烷-2-甲酸(2S)-甲酯(2.37mg，9.72mmol)在无水THF(50mL)中的溶液中以数份添加LAH(730mg，19.4mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌1h。然后将反应混合物冷却至0℃，并且缓慢添加H2O(0.7mL)、15％NaOH溶液(0.7mL)、EtOAc和H2O(2.8mL)。在室温下搅拌30min之后，添加Na2SO4。继续搅拌30分钟，然后通过穿过硅藻土垫来移除固体。浓缩滤液以得到粗中间体((2S)-4-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-2-基)甲醇。粗中间体未被进一步纯化和鉴别。它直接用于下一步骤。将以上中间体溶解于DCM(30mL)中，然后添加Boc2O(2.54g，11.7mmol)和TEA(2.02mL，14.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用DCM稀释并且用水、盐水洗涤，然后经无水硫酸钠干燥。移除溶剂，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用EtOAc进行纯化。收集呈淡黄色油状物的所需产物(1.58g，54％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.30(m,5H),4.84(br.S,1H),3.98(d,J＝13.5Hz,1H),3.72(m,1H),3.48(d,J＝11.1Hz,1H),3.26(d,J＝12.9Hz,1H),3.07(m,2H),2.73(m,2H),2.43(m,1H),2.26(m,1H),2.10(m,1H),1.60(m,2H),1.42(s,9H)。
实施例1.(R)-N-(2,5-二氨基戊基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000581
(R)-N-(2,5-二氨基戊基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(R)-二氨基甲酸二-叔丁酯(16mg，0.03mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.1mL，0.4mmol)。在室温下搅拌，直至没有起始材料留下。然后在真空下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈灰白色粉末的沉淀(18mg，65％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.68(m,3H),7.56(m,3H),7.34(m,3H),7.23(m,2H),3.61(m,1H),3.53(m,1H),3.48(m,1H),3.03(m,2H),1.77(m,2H),1.69(m,2H)。MS：C26H26F2N4O的计算值为449.21[M+H]+，实验值为449.25[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000591
3,6-二溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
向6-溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(1.02g，4mmol)在无水THF(25mL)中的溶液中添加NBS(783mg，4.4mmol)。将反应混合物在70℃下加热，直至TLC显示没有起始材料留下。然后将其冷却溶液至室温并在减压下浓缩。将形成的晶体过滤出并用THF洗涤以得到呈白色晶体的产物(1.09g，82％产率)。它用于下一步骤而未进行进一步纯化。MS：C10H7Br2NO2的计算值为331.88[M-H]-，实验值为331.75[M-H]-。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000592
3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在甲苯(30mL)、EtOH(6mL)和饱和NaHCO3溶液(6mL)中的3,6-二溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(890mg，2.5mmol)、(4-氟苯基)硼酸(1.22g，8.75mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(200mg，0.25mmol)。将混合物在105℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取。将有机相合并，用盐水洗涤，在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶(40-60％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈白色固体的产物(800mg，88％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.98(br,1H),7.63(m,3H),7.54(m,2H),7.37(d,J＝8.4Hz,2H),7.15(m,4H),3.84(s,3H)。MS：C22H15F2NO2的计算值为364.11[M+H]+，实验值为364.15[M+H]+。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000601
3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(0.80g，2.2mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，10mL)。在室温下搅拌反应混合物，直至没有起始材料留下。在减压下移除有机溶剂，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将固体干燥以得到呈灰白色粉末的产物(600mg，86％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.60(br,1H),7.66(m,5H),7.57(m,2H),7.27(m,4H)。MS：C21H13F2NO2的计算值，实验值为348.09[M-H]-，697.20[2M-H]-。
步骤4)
Figure BDA0002358338140000611
(5-(3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(R)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(40mg，0.11mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(11mg，0.07mmol)和EDC(25mg，0.13mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(R)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体A)(36mg，0.11mmol)。在室温下继续搅拌反应混合物过夜。然后用EtOAc萃取反应混合物，并且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶(40-60％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈白色固体的产物(35mg，47％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.35(br,1H),7.59(m,3H),7.51(m,2H),7.45(m,2H),7.32(m,2H),7.14(t,J＝8.7Hz,2H),6.03(br,1H),4.62(br,1H),4.47(br,1H),3.51(m,2H),3.35(m,1H),3.09(m,2H),1.58(m,4H),1.42(s,9H),1.39(s,9H)。MS：C36H42F2N4O5的计算值为647.35[M-H]-，实验值为647.35[M-H]-。
实施例2.(S)-3-环丙基-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000612
Figure BDA0002358338140000621
(S)-3-环丙基-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3-环丙基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(41mg，0.07mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加在二噁烷中的HCl(4M，0.15mL，0.6mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至TLC显示没有起始材料留下。将其在减压下浓缩并且用EtOAc研磨以得到粗产物，将其通过C18反相柱色谱法使用MeOH/水(0-50％)进行纯化。在减压下移除溶剂之后，收集白色粉末(12mg，37％产率)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.66(m,3H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,2H),3.81(m,1H),3.76(m,1H),3.54(m,1H),3.03(m,2H),2.22(m,1H),1.83(m,4H),1.19(m,2H),0.85(m,2H)。MS：C23H27FN4O的计算值为393.22[M-H]-，实验值为393.15[M-H]-。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000622
1-(叔丁基)2-甲基3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯
向3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(348mg，1mmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加Boc2O(330mg，1.5mmol)和DMAP(24mg，0.2mmol)。将其在室温下搅拌过夜，并且TLC显示没有起始材料留下。将其用EtOAc萃取并且用NH4Cl溶液和盐水洗涤。浓缩之后，白色粉末用于下一步骤反应而未进行进一步纯化(0.42g，94％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.35(m,1H),7.64(m,3H),7.60(m,1H),7.16(t,J＝8.7Hz,2H),4.00(s,3H),1.63(s,9H)。MS(ESI-)：C21H19BrFNO4的计算值为446.05[M-H]-，实验值为491.00[M+HCOOH-H]-。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000631
1-(叔丁基)2-甲基3-环丙基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯
将在甲苯、乙醇和饱和Na2CO3溶液(10/2/2mL)的混合物中的1-(叔丁基)2-甲基3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(225mg，0.5mmol)和环丙基硼酸(86mg，1mmol)脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(35mg，0.04mmol)。将反应混合物在105℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取并用盐水洗涤，且在减压下浓缩。然后将残余物通过柱色谱法在硅胶(0-10％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色粉末的产物(45mg，22％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.65(m,4H),7.42(m,1H),7.14(m,2H),3.96(s,3H),2.06(m,1H),1.60(s,9H),0.95(m,2H),0.90(m,2H)。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000641
3-环丙基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向1-(叔丁基)2-甲基3-环丙基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(44mg，0.11mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，3mL)。将反应混合物在70℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除THF，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将固体干燥以得到呈灰白色粉末的产物(30mg，92％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。MS：C18H14FNO2的计算值为294.10[M-H]-，实验值为294.05[M-H]-。
步骤4)
Figure BDA0002358338140000642
(5-(3-环丙基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3-环丙基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(30mg，0.09mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(16mg，0.1mmol)和EDC(38mg，0.2mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(32mg，0.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将其稀释，并且用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用40-45％在己烷中的EtOAc进行纯化，以得到浅白色粉末的产物(41mg，73％产率)。MS：C33H43FN4O5的计算值为595.32[M+H]+，实验值为595.40[M+H]+。
实施例3.(S)-3-苄基-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000651
(S)-3-苄基-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3-苄基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(26mg，0.04mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.15mL，0.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌，并且在反应完成之后，在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈灰白色粉末的沉淀(12mg，56％产率)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ7.60(m,3H),7.50(d,J＝8.4Hz,1H),7.27(m,3H),7.16(m,2H),7.10(m,3H),4.50(s,2H),3.67(m,1H),3.61(m,1H),3.37(m,1H),2.91(m,2H),1.81(m,4H)。MS：C27H29FN4O的计算值为443.23[M-H]-，实验值为443.25[M-H]-。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000661
1-(叔丁基)2-甲基3-苄基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯
将在甲苯、乙醇和饱和Na2CO3溶液(10/2/2mL)的混合物中的1-(叔丁基)2-甲基3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(270mg，0.6mmol)和2-苄基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊烷(160mg，0.72mmol)脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(70mg，0.08mmol)。将反应混合物在105℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(0-15％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色粉末的产物(50mg，18％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.58(m,3H),7.48(m,1H),7.23(m,5H),7.14(m,3H),4.21(s,2H),3.91(s,3H),1.54(s,9H)。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000662
3-苄基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向1-(叔丁基)2-甲基3-苄基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(50mg，0.11mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，3mL)。将反应混合物在70℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除THF，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈灰白色粉末的产物(34mg，89％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.65(m,3H),7.55(m,1H),7.26(m,2H),7.21(m,6H),4.50(s,2H)。MS：C22H16FNO2的计算值为344.12[M-H]-，实验值为344.00[M-H]-。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000671
(5-(3-苄基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3-苄基-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(30mg，0.09mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(16mg，0.1mmol)和EDC(38mg，0.2mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(32mg，0.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将其用EtOAc稀释且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用20-40％在己烷中的EtOAc进行纯化，以得到浅黄色粉末的产物(26mg，45％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.28(br,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.58(m,3H),7.31(m,5H),7.14(t,J＝8.7Hz,2H),6.35(br,1H),4.62(br,2H),4.44(s,2H),3.63(m,1H),3.46(m,1H),3.39(m,1H),3.09(m,2H),1.58(m,4H),1.43(s,9H),1.41(s,9H)。MS：C37H45FN4O5的计算值643.34[M-H]-，实验值643.40[M-H]-。
实施例4.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺三盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000681
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺
向(5-(6-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(26mg，0.04mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.15mL，0.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并且在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈灰白色粉末的沉淀(20mg，72％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ8.73(m,2H),8.27(m,3H),7.91(m,1H),7.76(m,2H),7.28(m,3H),3.64(m,1H),3.59(m,1H),3.34(m,1H),3.02(m,2H),1.82(m,4H)。MS：C25H26FN5O的计算值为430.21[M-H]-，实验值为430.25[M-H]-。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000691
6-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在甲苯、乙醇和饱和Na2CO3溶液(10/2/2mL)的混合物中的1-(叔丁基)2-甲基3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(270mg，0.6mmol)、吡啶-4-基硼酸(110mg，0.9mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(70mg，0.08mmol)。将反应混合物在110℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取并用盐水洗涤，且在减压下浓缩。然后将残余物通过柱色谱法在硅胶(0-30％MeOH/乙酸乙酯)上进行纯化，以得到呈灰白色粉末的产物(120mg，58％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.26(br,1H),8.80(m,2H),7.60(m,4H),7.48(m,3H),7.17(d,J＝8.7Hz,2H),3.86(s,3H)。MS：C21H15FN2O2的计算值为345.11[M-H]-，实验值为345.10[M-H]-。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000692
6-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-甲酸
向1-(叔丁基)2-甲基3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(120mg，0.34mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，5mL)。将反应混合物在70℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除THF，并且用HCl溶液将残余物酸化至pH约5-6。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈灰白色粉末的产物(108mg，94％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.57(m,2H),7.65(m,2H),7.59(m,3H),7.51(m,2H),7.32(m,2H)。MS：C20H13FN2O2的计算值为331.510[M-H]-，实验值为331.05[M-H]-。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000701
(5-(6-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-
二氨基甲酸二-叔丁酯
向6-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-甲酸(50mg，0.15mmol)在无水DMF(1.5mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(16mg，0.1mmol)和EDC(35mg，0.18mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(57mg，0.18mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将其用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用50-100％在己烷中的EtOAc进行纯化，以得到浅棕色粉末的产物(36mg，38％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.46(br,1H),8.88(d,J＝6.0Hz,2H),7.61(m,1H),7.58(m,3H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(m,2H),7.14(m,2H),6.28(br,1H),4.64(br,2H),3.61(m,2H),3.34(m,1H),3.12(m,2H),1.59(m,4H),1.46(s,9H),1.43(s,9H)。MS：C35H42FN5O5的计算值为632.32[M+H]+，实验值为632.55[M+H]+。
实施例5.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-3-(4-羟基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000711
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-3-(4-羟基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(6-(4-氟苯基)-3-(4-羟基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(61mg，0.095mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.25mL，1mmol)。将其在室温下搅拌过夜，并且在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈灰白色粉末的沉淀(40mg，81％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ8.29(br,1H),7.77(m,1H),7.73(m,2H),7.66(m,1H),7.49(m,3H),7.24(m,2H),7.08(d,J＝8.4Hz,2H),3.60(m,1H),3.51(m,1H),3.43(m,1H),2.98(m,2H),1.69(m,2H),1.62(m,2H)。MS：C26H27FN4O2的计算值为445.21[M-H]-，实验值为445.20[M-H]-。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000721
1-(叔丁基)2-甲基6-(4-氟苯基)-3-(4-羟基苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯
将添加到甲苯、乙醇和饱和Na2CO3溶液(10/4/2mL)的混合物中的1-(叔丁基)2-甲基3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(270mg，0.6mmol)和(4-羟基苯基)硼酸(138mg，0.9mmol)脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(70mg，0.08mmol)。将反应混合物在105℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取并用盐水洗涤，且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(30-60％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色粉末的产物(150mg，54％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.39(br,1H),7.62(m,4H),7.47(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.43(t,J＝8.7Hz,2H),7.14(t,J＝8.7Hz,2H),6.93(d,J＝8.7Hz,2H),4.97(br,1H),3.81(s,3H),1.64(s,9H)。MS：C27H24FNO5的计算值为460.16[M-H]-，实验值为460.15[M-H]-。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000722
6-(4-氟苯基)-3-(4-羟基苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向1-(叔丁基)2-甲基6-(4-氟苯基)-3-(4-羟基苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(150mg，0.33mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，3mL)。将反应混合物在70℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除THF，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将固体干燥以得到呈灰白色粉末的产物(104mg，92％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.73(s,1H),9.44(s,1H),7.68(m,2H),7.62(m,1H),7.52(d,J＝8.7Hz,1H),7.31(m,5H),6.82(d,J＝8.1Hz,2H)。MS：C21H14FNO3的计算值为348.10[M+H]+，实验值为348.10[M+H]+。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000731
(5-(6-(4-氟苯基)-3-(4-羟基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向6-(4-氟苯基)-3-(4-羟基苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(50mg，0.15mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(27mg，0.15mmol)和EDC(35mg，0.18mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(46mg，0.15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将其用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用20-80％在己烷中的EtOAc进行纯化，以得到浅黄色粉末的产物(62mg，67％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.41(br,1H),8.18(br,1H),7.61(m,1H),7.58(m,3H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(m,2H),7.33(m,1H),7.14(m,3H),6.00(br,1H),4.81(br,1H),4.59(br,1H),3.50(m,2H),3.30(m,1H),3.13(m,1H),2.99(m,1H),1.50(m,4H),1.49(s,9H),1.41(s,9H)。MS：C36H43FN4O6的计算值为647.32[M+H]+，实验值为647.45[M+H]+。
实施例6.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000741
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(6-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(50mg，0.072mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.2mL，0.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并且在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈灰白色粉末的沉淀(27mg，66％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.86(d,J＝6.9Hz,2H),7.69(m,4H),7.61(m,1H),7.39(m,2H),7.20(d,J＝8.1Hz,2H),3.58(m,1H),3.50(m,1H),3.45(m,1H),2.97(m,2H),1.67(m,4H)。MS：C27H26F4N4O的计算值为499.20[M+H]+，实验值为499.25[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000751
6-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在甲苯、乙醇和饱和Na2CO3溶液(10/3/2.5mL)的混合物中的1-(叔丁基)2-甲基3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(140mg，0.4mmol)、(4-三氟苯基)硼酸(115mg，0.6mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(70mg，0.08mmol)。将反应混合物在110℃下加热过夜。将冷却的反应混合物用EtOAc萃取并且用盐水洗涤，且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(10-15％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色粉末的产物(130mg，79％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.08(br,1H),7.73(m,4H),7.66(m,1H),7.60(m,3H),7.38(dd,J＝8.7,1.5Hz,1H),7.15(t,J＝8.7Hz,2H),3.86(s,3H)。MS：C23H15F4NO2的计算值为412.10[M-H]-，实验值为412.00[M-H]-。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000761
6-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向6-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(130mg，0.31mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，5mL)。将反应混合物在65℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除THF，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈灰白色粉末的产物(100mg，80％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.88(s,1H),7.77(m,4H),7.68(m,3H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),6.82(t,J＝8.7Hz,2H)。MS：C22H13F4NO2的计算值为398.09[M-H]-，实验值为797.30[2M-H]-。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000762
(5-(6-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向6-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(50mg，0.125mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.07mL，0.4mmol)、HOBt(19mg，0.125mmol)和EDC(36mg，0.19mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(40mg，0.125mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。用EtOAc萃取反应混合物，并且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用20-80％在己烷中的EtOAc进行纯化，以得到浅棕色粉末的产物(50mg，57％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.47(br,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,2H),7.71(d,J＝8.4Hz,2H),7.59(m,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(dd,J＝8.4,1.5Hz,2H),7.15(t,J＝8.74Hz,2H),4.75(br,1H),4.68(br,1H),3.86(m,1H),3.70(m,1H),3.52(m,1H),3.16(m,2H),1.58(m,4H),1.43(s,9H),1.40(s,9H)。MS：C37H42F4N4O5的计算值为697.31[M-H]-，实验值为697.40[M-H]-。
实施例7.N-((2S)-2,5-二氨基-5-环丙基戊基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000771
Figure BDA0002358338140000781
N-((2S)-2,5-二氨基-5-环丙基戊基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向((4S)-5-(3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-1-环丙基戊-1,4-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯(33mg，0.048mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中添加0.3mL在二噁烷中的4N HCl。将反应物在室温下搅拌过夜。将残余物在减压下浓缩并且用EtOAc研磨以得到呈黄色固体的产物(9mg，33％产率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.21(s,1H),8.33(m,1H),8.16(s,3H),8.06(s,3H),7.74-7.56(m,6H),7.40-7.25(m,5H)3.67-3.15(m,4H),1.78(m,4H),1.22(m,1H),0.86-0.40(m,4H)。
如以下步骤中所示制备需要的中间体。
Figure BDA0002358338140000782
((4S)-5-(3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-1-环丙基戊-1,4-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯
向在DMF(1mL)中的3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(38mg，0.11mmol)中添加DIPEA(0.070mL，0.40mmol)、HOBt(8mg，0.06mmol)、EDC(22mg，0.11mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟。添加((4S)-5-氨基-1-环丙基戊-1,4-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯(35mg，0.10mmol)，并且在室温下继续搅拌反应物过夜。然后将反应混合物用EtOAc稀释，并且用15％LiCl和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并过滤。然后将滤液在减压下浓缩，并且将残余物使用ISCO色谱法以硅胶(0-100％乙酸乙酯/己烷)进行纯化，以得到呈黄色固体的产物(33mg，44％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.05(s,1H),9.70(s,1H),7.65-7.43(m,6H),7.34-7.11(m,5H),4.57(m,1H),3.56-3.33(m,2H),2.92(m,1H),1.83-1.61(m,4H),1.61-1.22(m,18H),0.83(m,1H),0.74-0.20(m,4H)。
实施例8.N-((2S)-2,5-二氨基己基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000791
Figure BDA0002358338140000801
N-((2S)-2,5-二氨基己基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向((4S)-5-(3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-1-环丙基戊-1,4-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯(63mg，0.10mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中添加0.3mL在二噁烷中的4N HCl。将反应物在室温下搅拌过夜。将残余物在减压下浓缩，并且将残余物用EtOAc研磨以得到呈黄色固体的产物(24mg，47％产率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.31(s,1H),8.43(m,1H),8.26(s,3H),8.09(s,3H),7.70-7.55(m,6H),7.39-7.27(m,5H)3.81-3.15(m,4H),1.69(m,4H),1.18(m,3H)。
如以下步骤中所示制备需要的中间体。
Figure BDA0002358338140000802
((2S)-1-(3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯
向在DMF(2mL)中的3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(64mg，0.18mmol)中添加DIPEA(0.064mL，0.36mmol)、HOBt(16mg，0.12mmol)、EDC(42mg，0.22mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟。添加((2S)-1-氨基己-2,5-二基)二氨基甲酸二-叔丁酯(60mg，0.18mmol)，并且在室温下继续搅拌反应物过夜。然后将反应混合物用EtOAc稀释，并且用15％LiCl和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并过滤。然后将滤液在减压下浓缩，并且将残余物使用ISCO色谱法以硅胶(0-100％乙酸乙酯/己烷)进行纯化，以得到呈黄色固体的产物(63mg，53％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.02(s,1H),9.81(s,1H),7.68-7.46(m,6H),7.37-7.11(m,5H),4.53-4.37(m,1H),3.71-3.41(m,3H),1.86-1.22(m,22H),1.10-1.08(d,3H)。
实施例9.N-(((2S,4R)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000811
N-(((2S,4R)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(((3R,5S)-1-苄基-5-((3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(25mg，0.04mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，20mg)。将反应混合物在H2下搅拌过夜。将固体通过硅藻土垫过滤出，并且在减压下浓缩滤液以得到残余物。将残余物溶解于MeOH(1mL)中，添加在二噁烷中的HCl溶液(4M，0.1mL)，并且将其在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。将粗产物用EtOAc研磨，并且通过过滤收集白色固体，以得到标题化合物(10mg，在两个步骤中55％产率)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ7.55-7.70(m,6H),7.15-7.40(m,5H),4.29(m,1H),3.50(m,2H),2.97(m,2H),2.74(m,2H),2.31(m,1H),2.18(m,1H),1.29(m,1H)。
如以下步骤中所示制备需要的中间体。
Figure BDA0002358338140000821
(((3R,5S)-1-苄基-5-((3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(40mg，0.11mmol)在无水DMF(1.0mL)中的溶液中添加DIPEA(0.04mL，0.20mmol)、HOBt(7.0mg，0.05mmol)和EDC(22mg，0.11mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟，并且添加(((3R,5S)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.1mmol)。在室温下继续搅拌反应物过夜。然后将其用EtOAc稀释且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物在硅胶上进行纯化，以得到呈黄色固体的产物(25mg，41％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.50(s,1H),7.60(m,4H),7.45-7.50(m,6H),7.21-7.35(m,6H),7.13(m,4H),5.67(d,J＝8,4Hz,1H),4.44(m,1H),4.12(m,1H),3.50(s,2H),2.95(m,3H),2.78(m,1H),1.98(m,1H),1.83(m,2H),1.41(s,9H),0.57(m,1H)。
实施例10.N-(((2S,4S)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000831
N-(((2S,4S)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(((3S,5S)-1-苄基-5-((3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.05mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，10mg)。将其在H2下搅拌过夜。将固体通过硅藻土垫过滤出，并且在减压下浓缩滤液以得到残余物。向溶解于MeOH(2mL)中的残余物中添加在二噁烷中的HCl溶液(4M，0.2mL)，并且将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩。将粗产物用EtOAc研磨，并且通过过滤收集米黄色固体，以得到标题化合物(9mg，在两个步骤中42％产率)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ7.53-7.70(m,6H),7.14-7.40(m,5H),3.60(m,3H),3.13(m,4H),2.74(m,2H),2.40(m,1H),1.60(m,1H),1.29(m,1H)。
如以下步骤中所示制备需要的中间体。
Figure BDA0002358338140000841
(((3S,5S)-1-苄基-5-((3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(40mg，0.11mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.04mL，0.2mmol)、HOBt(7mg，0.05mmol)和EDC(22mg，0.11mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟，并且添加(((3S,5S)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.1mmol)。在室温下继续搅拌反应物过夜。然后将其用EtOAc稀释且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物在硅胶上进行纯化，以得到呈黄色固体的产物(30mg，51％产率)。LC-MS：C39H40F2N4O3的计算值为650.31[M+1]+，实验值为651.40[M+1]+。
实施例11.N-(((2S,4S)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000851
N-(((2S,4S)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(((3R,5S)-5-((3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.064mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中添加在二噁烷中的HCl(4M，0.3mL，1.2mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将残余物在减压下浓缩并且用EtOAc研磨以得到呈黄色固体的产物(29mg，81％产率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.05(br,1H),9.75(br,1H),9.19(br,1H),8.31-8.20(br,3H),7.54-7.46(m,4H),7.29-7.27(m,3H),7.16-7.04(m,1H),3.65-3.44(m,3H),3.10-2.92(m,2H),2.55(m,2H),2.24(m,2H),1.44-1.41(m,1H)。MS：C21H23FN4O的计算值为367.19[M+H]+，实验值为367.25[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000861
3-溴-1H-吲哚-2-甲酸乙酯
将1H-吲哚-2-甲酸乙酯(500mg，2.65mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺(494mg，2.78mmol)溶解于THF(10mL)中。将反应混合物在室温下搅拌3小时。然后将THF在减压下移除并且由二氯甲烷置换。将所得残余物悬浮于二氯甲烷中。将悬浮液过滤以得到呈白色固体的产物(597mg，84％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.16(br,1H),7.69-7.66(d,1H),7.40-7.35(m,2H),7.24-7.21(m,1H),4.50(q,2H),1.43-1.48(t,3H)。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000871
3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯
将在甲苯、乙醇和饱和Na2CO3溶液(10/3/3mL)的混合物中的3-溴-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(537mg，2mmol)、(4-氟苯基)硼酸(420mg，3mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(120mg，0.15mmol)。将反应混合物在100℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取并用盐水洗涤，且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(0-10％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色粉末的产物(420mg，74％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.93(br,1H),7.58(m,1H),7.52(m,2H),7.45(m,1H),7.37(m,1H),7.15(m,3H),4.30(q,J＝7.2Hz,2H),1.25(t,J＝7.2Hz,3H)。MS：C17H14FNO2的计算值为282.10[M-H]-，实验值为281.95[M-H]-。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000872
3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(350mg，1.2mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加NaOH溶液(50％，10mL)。将其在90℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除THF，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈灰白色粉末的产物(300mg，98％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.76(br,1H),7.51(m,2H),7.49(t,J＝8.7Hz,2H),7.27(m,1H),7.23(t,J＝8.7Hz,2H),7.05(m,1H)。MS：C15H10FNO2的计算值为254.07[M-H]-，实验值为253.95[M-H]-。
步骤4)
Figure BDA0002358338140000881
(((3S,5S)-1-苄基-5-((3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向在DMF(3mL)中的3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(46mg，0.18mmol)中添加DIPEA(0.062mL，0.36mmol)、HOBt(15mg，0.11mmol)、EDC(42mg，0.22mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟。添加(((3S,5S)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体F)(57mg，0.18mmol)，并且在室温下继续搅拌反应物过夜。然后将反应混合物用EtOAc稀释，并且用15％LiCl和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。然后将滤液在减压下浓缩，并且将残余物使用ISCO色谱法以硅胶(0-100％乙酸乙酯/己烷)进行纯化，以得到呈黄色固体的产物(65mg，65％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.07(br,1H),7.59-7.49(br,4H),7.42-7.39(d,1H),7.39-7.15(m,6H)7.12-7.09(m,1H),6.37-6.36(br,1H),4.80(br,1H),3.89-3.74(m,2H),3.43-3.30(m,1H),3.16-3.11(m,1H),2.98-2.81(m,2H),2.66(m,2H),2.52-2.47(m,1H),2.32-2.26(m,1H),2.17-2.13(m,1H),2.00-1.87(m,1H),1.47-1.29(m,9H)。
步骤5)
Figure BDA0002358338140000891
(((3R,5S)-5-((3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向(((3S,5S)-1-苄基-5-((3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.12mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加碳载钯(10％，7mg)。将反应物在氢气球、室温下氢化过夜。将反应物通过硅藻土垫过滤，用MeOH洗涤。然后将滤液在减压下浓缩，并且将残余物使用ISCO色谱法以硅胶(0-10％含有5％氨的MeOH/CH2Cl2)进行纯化，以得到呈棕色固体的产物(31mg，70％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.47(br,1H),7.51(br,1H),7.41(m,3H),7.32-7.26(m,2H),7.19-7.09(m,3H),6.75(br,1H),4.13-4.08(br,1H),3.59-3.47(m,1H),3.34(m,2H),3.10-2.98(m,3H),2.61-2.59(m,1H),1.92-1.86(m,1H),1.46-1.28(m,9H),1.25-1.17(m,2H)。
实施例12.N-(((2S,4R)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000892
Figure BDA0002358338140000901
N-(((2S,4R)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(((3S,5S)-5-((3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.064mmol)在MeOH(1ml)中的溶液中添加在二噁烷中的HCl(4M，0.3mL，1.2mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将残余物在减压下浓缩并且用EtOAc研磨以得到呈黄色固体的产物(31mg，76％产率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.13(br,1H),9.75-9.51(br,1H),8.45-8.26(br,3H),7.66-7.44(m,4H),7.29-7.26(m,3H),7.09-7.04(m,1H),4.23(br,1H),3.38(m,1H),3.24(m,1H),2.74(m,3H),2.62(m,2H),2.26(m,1H),2.07(m,1H),1.27-1.19(m,1H)。MS：C21H23FN4O的计算值为367.19[M+H]+，实验值为367.20[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000911
(((3R,5S)-1-苄基-5-((3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向在DMF(3mL)中的3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(56mg，0.22mmol)中添加DIPEA(0.076mL，0.44mmol)、HOBt(18mg，0.14mmol)、EDC(51mg，0.27mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟。添加(((3R,5S)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体E)(69mg，0.22mmol)，并且在室温下继续搅拌反应物过夜。然后将反应混合物用EtOAc稀释，并且用15％LiCl和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。然后将滤液在减压下浓缩，并且将残余物使用ISCO色谱仪以硅胶(0-100％乙酸乙酯/己烷)进行纯化，以得到呈黄色固体的产物(83mg，68％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.99(br,1H),8.01(br,1H),7.49-7.32(m,4H),7.30-7.17(m,8H),7.13-7.08(m,1H),5.69-5.67(br,1H),3.48(s,2H),3.05-2.90(m,2H),2.81-2.76(m,2H),1.99-1.83(m,2H),1.60-1.46(m,2H),1.39-1.33(m,11H)。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000921
(((3S,5S)-5-((3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向(((3R,5S)-1-苄基-5-((3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(83mg，0.15mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加碳载钯(10％，7mg)。将反应物在氢气球、室温下氢化过夜。将反应物通过硅藻土垫过滤，用MeOH洗涤。然后将滤液在减压下浓缩，并且将残余物使用ISCO色谱法以硅胶(0-10％含有5％氨的MeOH/CH2Cl2)进行纯化，以得到呈黄色固体的产物(46mg，66％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.75-9.68(br,1H),8.01(br,1H),7.48-7.40(m,4H),7.39-7.10(m,4H),5.71(br,1H),3.97(m,2H),3.06-3.02(m,2H),2.14-2.09(m,2H),2.04-1.97(m,2H),1.77-1.75(m,2H),1.58-1.41(m,9H)。
实施例13.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000922
Figure BDA0002358338140000931
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(45mg，0.08mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加在二噁烷中的HCl(4M，0.2mL，0.8mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至TLC显示没有起始材料留下。将反应混合物在减压下浓缩并且用EtOAc研磨，以得到呈灰白色粉末的产物(26mg，75％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.62(m,4H),7.46(m,1H),7.36(m,2H),7.27(m,1H),3.63(m,1H),3.55(m,1H),3.50(m,1H),3.03(m,2H),1.77(m,2H),1.69(m,2H)。MS：C20H23FN4O的计算值为355.19[M+H]+，实验值为355.25[M+H]+。
如以下步骤中所示制备需要的中间体。
Figure BDA0002358338140000932
(5-(3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(51mg，0.2mmol)在无水DMF(1.5mL)中的溶液中添加DIPEA(0.07mL，0.4mmol)、HOBt(18mg，0.12mmol)和EDC(46mg，0.24mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(63mg，0.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将其稀释，并且用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用20-50％在己烷中的EtOAc作为洗脱液进行纯化，以得到灰白色粉末的产物(45mg，41％产率)。MS：C30H39FN4O5的计算值为555.29[M+H]+，实验值为555.40[M+H]+。
实施例14.(S)-4-(2-((2,5-二氨基戊基)氨基甲酰基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-基)苯甲酸盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000941
(S)-4-(2-((2,5-二氨基戊基)氨基甲酰基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-基)苯甲酸盐酸盐
向(S)-4-(2-((2,5-双((叔丁氧基羰基)氨基)戊基)氨基甲酰基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-基)苯甲酸(10mg，0.041mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.1mL，0.4mmol)。在室温下搅拌，直至没有起始材料留下。然后在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈浅棕色粉末的沉淀(6.5mg，85％产率)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.01(m,2H),7.70(m,5H),7.58(m,1H),7.37(m,1H),7.18(t,J＝8.7Hz,2H),3.73(m,1H),3.63(m,1H),3.53(m,1H),3.03(m,2H),1.88(m,2H),1.83(m,2H)。MS：C27H27FN4O3的计算值为475.21[M+H]+，实验值为475.25[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000951
1-(叔丁基)2-甲基3-(4-氨基甲酰基苯基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯
将在甲苯(10mL)、EtOH(3mL)和饱和Na2CO3溶液(3mL)中的1-(叔丁基)2-甲基3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(200mg，0.45mmol)、(4-氨基甲酰基苯基)硼酸(110mg，0.67mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(85mg，0.10mmol)。在100℃下加热混合物过夜，并且用EtOAc对它进行萃取。将有机相合并，用盐水洗涤并在减压下浓缩，将其通过柱色谱法在硅胶(50-100％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈浅棕色固体的产物(165mg，76％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.93(m,2H),7.62(m,6H),7.52(m,1H),7.16(t,J＝8.7Hz,2H),3.81(s,3H),1.66(s,9H)。MS：C28H25FN2O5的计算值为489.17[M+H]+，实验值为511.25[M+Na]+。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000961
3-(4-羧基苯基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向1-(叔丁基)2-甲基3-(4-氨基甲酰基苯基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-1,2-二甲酸酯(0.16g，0.33mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加NaOH溶液(50％，5mL)。将其加热直至没有起始材料留下。在减压下移除有机溶剂，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈浅棕色粉末的产物(85mg，69％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。MS：C22H14FNO4的计算值为374.09[M-H]-，实验值为374.00[M-H]-。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000962
(S)-4-(2-((2,5-双((叔丁氧基羰基)氨基)戊基)氨基甲酰基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-基)苯甲酸
向3-(4-羧基苯基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(75mg，0.2mmol)在无水DMF(1.5mL)中的溶液中添加DIPEA(0.07mL，0.4mmol)、HOBt(18mg，0.12mmol)和EDC(46mg，0.24mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(63mg，0.2mmol)。然后使反应混合物在室温下搅拌过夜。用EtOAc萃取反应混合物，并且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。然后将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶(0-10％MeOH/乙酸乙酯)上进行纯化，以得到呈浅棕色固体的产物(15mg，11％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.56(br,1H),7.76(m,6H),7.47(m,1H),7.36(m,2H),7.14(m,2H),6.06(br,1H),4.67(br,2H),3.83(m,1H),3.52(m,1H),3.37(m,1H),3.11(m,2H),1.61(m,4H),1.42(s,9H),1.39(s,9H)。MS：C37H43FN4O7的计算值为675.31[M+H]+，实验值为675.45[M+H]+。
实施例15.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3,5-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140000971
Figure BDA0002358338140000981
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3,5-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3,5-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(45mg，0.07mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.2mL，0.8mmol)。在室温下搅拌，直至没有起始材料留下。然后在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈浅棕色粉末的沉淀(30mg，82％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.68(m,3H),7.56(m,3H),7.34(m,3H),7.23(m,2H),3.61(m,1H),3.53(m,1H),3.48(m,1H),3.03(m,2H),1.77(m,2H),1.69(m,2H)。MS：C26H26F2N4O的计算值为449.21[M+H]+，实验值为449.25[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140000982
3,5-二溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
向5-溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(1.6g，6.3mmol)在无水THF(40mL)中的溶液中添加NBS(1.17g，6.6mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至TLC显示没有起始材料留下。然后将其在减压下浓缩。将形成的晶体过滤出并用THF洗涤以得到呈白色固体的产物(1.7g，81％产率)。它用于下一步骤而未进行进一步纯化。MS：C10H7Br2NO2的计算值为331.88[M-H]-，实验值为331.80[M-H]-。
步骤2)
Figure BDA0002358338140000991
3,5-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在甲苯(10mL)、EtOH(3mL)和饱和Na2CO3溶液(3mL)中的3,5-二溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(167mg，0.5mmol)、(4-氟苯基)硼酸(0.21g，1.5mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(100mg，0.12mmol)。将混合物在105℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取。将有机相合并，用盐水洗涤并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(10-15％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色固体的产物(145mg，80％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.99(br,1H),8.22(m,1H),7.69(s,1H),7.53(m,4H),7.19(m,2H),7.10(m,3H),3.84(s,3H)。MS：C22H15F2NO2的计算值为364.11[M+H]+，实验值为364.15[M+H]+。
步骤3)
Figure BDA0002358338140000992
3,5-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向3,5-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(0.140g，0.39mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，10mL)。将其在65℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除有机溶剂，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈浅棕色粉末的产物(117mg，86％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。MS：C21H13F2NO2的计算值为348.09[M-H]-，实验值为348.05[M-H]-。
步骤4)
Figure BDA0002358338140001001
(5-(3,5-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3,5-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(50mg，0.14mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(14mg，0.09mmol)和EDC(33mg，0.17mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(45mg，0.14mmol)。使反应混合物在室温下搅拌过夜。将其用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶(40-60％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色固体的产物(49mg，53％产率)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ9.51(br,1H),7.57(m,4H),7.48(m,3H),7.31(m,2H),7.09(t,J＝8.4Hz,2H),6.11(br,1H),4.66(br,1H),4.51(br,1H),3.52(m,1H),3.45(m,1H),3.34(m,1H),3.10(m,2H),1.59(m,4H),1.42(s,9H),1.38(s,9H)。MS：C36H42F2N4O5的计算值为647.31[M-H]-，实验值为647.30[M-H]-。
实施例16.(S)-3-(3-(苄氧基)苯基)-N-(2,5-二氨基戊基)-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001002
Figure BDA0002358338140001011
(S)-3-(3-(苄氧基)苯基)-N-(2,5-二氨基戊基)-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3-(3-(苄氧基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(52mg，0.07mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加在二噁烷中的HCl(4M，0.2mL，0.8mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至TLC显示没有起始材料留下。将其在减压下浓缩并且用EtOAc研磨，以得到呈浅棕色粉末的产物(26mg，59％产率)。MS：C33H33FN4O2的计算值为537.26[M+H]+，实验值为537.40[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140001012
5-溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
向5-溴-1H-吲哚-2-甲酸(1.0g，4.17mmol)在MeOH(30mL)中的悬浮液中缓慢添加SOCl2(0.45mL，6.2mmol)。在回流下加热混合物，直至TLC显示没有起始材料留下。在减压下移除溶剂，并且在干燥之后收集呈棕色分泌的粗产物(0.95g，90％产率)。它用于下一步骤而未进行纯化。MS：C10H8BrNO2的计算值为253.97和251.97[M-H]-，实验值为253.90和251.90[M-H]-。
步骤2)
Figure BDA0002358338140001021
5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在甲苯、乙醇和饱和Na2CO3溶液(30/9/9mL)的混合物中的5-溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(640mg，2.52mmol)、(4-氟苯基)硼酸(530mg，3.78mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(150mg，0.18mmol)。将反应混合物在105℃下加热过夜。将其用EtOAc萃取并且用盐水洗涤，且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(10-15％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色粉末的产物(270mg，40％产率)。
步骤3)
Figure BDA0002358338140001022
3-溴-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
向5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(160mg，0.6mmol)在无水THF(5mL)中的溶液中添加NBS(112mg，0.63mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至TLC显示没有起始材料留下。然后将其在减压下浓缩。将形成的晶体过滤出并用THF洗涤以得到呈白色晶体的产物(0.160mg，77％产率)。它用于下一步骤而未进行进一步纯化。MS：C16H11BrFNO2的计算值为346.00和347.99[M-H]-，实验值为346.00和348.00[M-H]-。
步骤4)
Figure BDA0002358338140001031
3-(3-(苄氧基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在甲苯、乙醇和饱和Na2CO3溶液(10/3/3mL)的混合物中的3-溴-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(150mg，0.43mmol)、(3-(苄氧基)苯基)硼酸(147mg，0.65mmol)脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(35mg，0.04mmol)。将反应混合物在105℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取并用盐水洗涤，且在减压下浓缩有机层。将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用乙酸乙酯/己烷作为洗脱液进行纯化，以得到呈浅棕色粉末的产物(80mg，41％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.05(br,1H),7.71(s,1H),7.46(m,5H),7.36(m,4H),7.19(m,2H),7.13(m,4H),5.11(s,2H),3.81(s,3H)。MS：C29H22FNO3的计算值为450.16[M-H]-，实验值为450.20[M-H]-。
步骤5)
Figure BDA0002358338140001032
3-(3-(苄氧基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向3-(3-(苄氧基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(75mg，0.11mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，3mL)。将其在70℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除THF，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈棕色粉末的产物(62mg，86％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。MS：C28H20FNO3的计算值为438.14[M+H]+，实验值为438.25[M+H]+。
步骤6)
Figure BDA0002358338140001041
(5-(3-(3-(苄氧基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3-(3-(苄氧基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(50mg，0.12mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(10mg，0.07mmol)和EDC(23mg，0.14mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(40mg，0.12mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将其稀释，并且用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用40-45％在己烷中的EtOAc进行纯化，以得到棕色粉末的产物(58mg，66％产率)。MS：C43H49FN4O6的计算值为727.36[M+H]+，实验值为759.30[M+Na]+。
实施例17.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-5-(4-氟苯基)-3-(3-羟基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001051
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-5-(4-氟苯基)-3-(3-羟基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(S)-3-(3-(苄氧基)苯基)-N-(2,5-二氨基戊基)-5-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐(10mg，0.016mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，20mg)。将反应混合物在H2、50psi下搅拌过夜。将其通过硅藻土垫过滤且在减压下浓缩。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈浅棕色粉末的沉淀(4.5mg，54％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.65(s,1H),7.58(m,2H),7.55(m,2H),7.40(m,1H),7.12(t,J＝8.7Hz,2H),7.05(m,2H),6.91(m,1H),3.61(m,1H),3.50(m,1H),3.44(m,1H),2.98(m,2H),1.77(m,2H),1.67(m,2H)。MS：C26H27FN4O2的计算值为447.21[M+H]+，实验值为447.30[M+H]+。
实施例18.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3,5-二苯基-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001052
Figure BDA0002358338140001061
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3,5-二苯基-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3,5-二苯基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(42mg，0.069mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.15mL，0.6mmol)。在室温下搅拌，直至没有起始材料留下。然后在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈灰白色粉末的沉淀(26mg，78％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.30(m,2H),7.16(m,8H),7.13(m,3H),3.39(m,1H),3.33(m,1H),3.28(m,1H),2.92(m,2H),1.62(m,2H),1.53(m,2H)。MS：C26H28N4O的计算值为413.23[M+H]+，实验值为413.30[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140001062
3,5-二苯基-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在甲苯(10mL)、EtOH(2mL)和饱和Na2CO3溶液(2mL)中的3,5-二溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(130mg，0.4mmol)、(4-氟苯基)硼酸(0.17g，1.4mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(100mg，0.12mmol)。将混合物在100℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取。将有机相合并，用盐水洗涤并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(5-15％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈白色固体的产物(85mg，65％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.98(br,1H),7.81(s,1H),7.63(m,4H),7.53(m,3H),7.41(m,4H),7.28(m,1H),3.83(s,3H)。
步骤2)
Figure BDA0002358338140001071
3,5-二苯基-1H-吲哚-2-甲酸
向3,5-二苯基-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(82mg，0.39mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，10mL)。将其在60℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除有机溶剂，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈灰白色粉末的产物(56mg，71％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。MS：C21H15NO2的计算值为314.11[M+H]+，实验值为314.10[M+H]+。
步骤3)
Figure BDA0002358338140001072
(5-(3,5-二苯基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3,5-二苯基-1H-吲哚-2-甲酸(31mg，0.1mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(9mg，0.06mmol)和EDC(24mg，0.12mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(32mg，0.1mmol)。在室温下继续搅拌反应混合物过夜。然后将其用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶(10-30％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色固体的产物(42mg，69％产率)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ9.22(br,1H),7.59(m,9H),7.40(m,2H),7.33(m,1H),7.18(m,1H),6.09(br,1H),4.60(br,1H),4.42(br,1H),3.50(m,1H),3.42(m,1H),3.33(m,1H),3.09(m,2H),1.49(m,4H),1.43(s,9H),1.39(s,9H)。MS：C36H44N4O5的计算值为613.33[M+H]+，实验值为613.45[M+H]+。
实施例19.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3,5-双(3,5-二甲基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001081
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3,5-双(3,5-二甲基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3,5-双(3,5-二甲基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(48mg，0.07mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.2mL，0.8mmol)。在室温下搅拌，直至没有起始材料留下。然后在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈灰白色粉末的沉淀(27mg，78％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.55(m,1H),7.54(s,1H),7.53(m,1H),7.19(s,2H),7.14(s,3H),6.93(s,1H),3.62(m,1H),3.47(m,1H),3.35(m,1H),2.95(m,2H),2.41(s,6H),2.33(s,6H),1.67(m,2H),1.68(m,2H)。MS：C30H36N4O的计算值为469.29[M+H]+，实验值为469.35[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140001091
3,5-双(3,5-二甲基苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在甲苯(10mL)、EtOH(2mL)和饱和Na2CO3溶液(2mL)中的3,5-二溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(130mg，0.4mmol)、(4-氟苯基)硼酸(0.19g，1.27mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(80mg，0.1mmol)。将混合物在100℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取。将有机相合并，用盐水洗涤并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(5-15％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈白色固体的产物(115mg，77％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.94(br,1H),7.78(s,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,1H),7.20(m,4H),7.06(s,1H),6.97(s,1H),3.83(s,3H),2.40(s,6H),2.37(s,6H)。MS：C26H25NO2的计算值为382.19[M-H]-，实验值为382.10[M-H]-。
步骤2)
Figure BDA0002358338140001101
3,5-双(3,5-二甲基苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向3,5-双(3,5-二甲基苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(110mg，0.29mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，10mL)。将反应混合物在70℃下加热1小时，并且没有起始材料留下。在减压下移除有机溶剂，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将固体干燥以得到呈灰白色粉末的产物(82mg，77％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。MS：C25H23NO2的计算值为368.17[M-H]-，实验值为368.05[M-H]-。
步骤3)
Figure BDA0002358338140001102
(5-(3,5-双(3,5-二甲基苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3,5-双(3,5-二甲基苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(37mg，0.1mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(9mg，0.06mmol)和EDC(24mg，0.12mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(32mg，0.1mmol)。使反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将其用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶(10-35％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色固体的产物(48mg，72％产率)。MS：C40H52N4O5的计算值为667.39[M-H]-，实验值为667.45[M-H]-。
实施例20.(S)-3-(环丙基乙炔基)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001111
(S)-3-(环丙基乙炔基)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3-(环丙基乙炔基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(40mg，0.06mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加在二噁烷中的HCl(4M，0.15mL，0.6mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至TLC显示没有起始材料留下。然后将反应混合物在减压下浓缩并且用EtOAc研磨，以得到呈浅棕色粉末的产物(26mg，82％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.84(m,1H),7.79(m,3H),7.48(m,1H),7.23(t,J＝8.7Hz,2H),3.74(m,1H),3.59(m,2H),3.06(m,2H),1.83(m,5H),0.99(m,2H),0.71(m,2H)。MS：C25H27FN4O的计算值为419.22[M+H]+，实验值为419.20[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140001121
3-(环丙基乙炔基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在二噁烷(10mL)中的3-溴-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(100mg，0.3mmol)、乙炔基环丙烷(330mg，5mmol)、PPh3(20mg,0.06mmol)和Cs2CO3(150mg，0.46mmol)的混合物脱气，并且添加CuI(20mg，0.1mmol)和Pd(dppf)Cl2(25mg，0.03mmol)。将反应混合物在105℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取并用盐水洗涤，且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(0-15％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈浅棕色粉末的产物(75mg，75％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.82(br,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(m,2H),7.49(s,1H),7.39(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.14(t,J＝8.4Hz,2H),3.99(s,3H),1.63(m,1H),0.97(m,2H),0.92(m,2H)。MS：C21H16FNO2的计算值为334.12[M+H]+，实验值为334.15[M+H]+。
步骤2)
3-(环丙基乙炔基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向3-(环丙基乙炔基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(70mg，0.11mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，3mL)。将其在40℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除THF，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈浅棕色粉末的产物(48mg，72％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。
步骤3)
Figure BDA0002358338140001132
(5-(3-(环丙基乙炔基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3-(环丙基乙炔基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(48mg，0.15mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(16mg，0.1mmol)和EDC(38mg，0.2mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(48mg，0.15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将其稀释，并且用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用40-50％在己烷中的EtOAc进行纯化，以得到灰白色粉末的产物(43mg，46％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.14(br,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(m,2H),7.52(s,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.15(d,J＝8.7Hz,,2H),4.75(br,1H),4.68(br,1H),3.76(m,1H),3.52(m,2H),3.15(m,2H),1.64(m,1H),1.51(m,4H),1.42(s,9H),1.40(s,9H),1.02(m,2H),0.95(m,2H)。MS：C35H43FN4O5的计算值为619.32[M+H]+，实验值为619.35[M+H]+。
实施例21.(S)-3-(2-环丙基乙基)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001141
(S)-3-(2-环丙基乙基)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(S)-3-(环丙基乙炔基)-N-(2,5-二氨基戊基)-6-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐(15mg，0.03mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，10mg)。将反应混合物在H2、50psi下搅拌过夜。然后将其通过硅藻土垫过滤且在减压下浓缩。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈浅棕色粉末的沉淀(9mg，61％产率)。MS：C25H31FN4O的计算值为423.25[M+H]+，实验值为423.25[M+H]+。
实施例22.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001151
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(50mg，0.09mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加在二噁烷中的HCl(4M，0.2mL，0.8mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至TLC显示没有起始材料留下。然后将其在减压下浓缩并且用EtOAc研磨，以得到呈灰白色粉末的粗产物(30mg，77％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.57(m,2H),7.40(m,1H),7.30(t,J＝8.7Hz,2H),7.14(m,2H),3.60(m,1H),3.52(m,1H),3.45(m,1H),2.96(m,2H),1.67(m,4H)。MS：C20H22F2N4O的计算值为373.18[M+H]+，实验值为373.20[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140001161
7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯
将在甲苯、乙醇和饱和Na2CO3溶液(10/3/3mL)的混合物中的7-氟-3-溴-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(300mg，1.1mmol)、(4-氟苯基)硼酸(24mg，1.5mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(80mg，0.1mmol)。将反应混合物在105℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取并用盐水洗涤，且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(0-30％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色粉末的产物(210mg，66％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.11(br,1H),7.51(m,2H),7.36(m,1H),7.16(t,J＝8.1Hz,2H),7.08(m,2H),3.85(s,3H)。
步骤2)
Figure BDA0002358338140001171
7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸
向7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯(200mg，0.7mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，5mL)。将其在50℃下加热，直至没有起始材料留下。在减压下移除MeOH，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将固体干燥以得到呈灰白色粉末的产物(160mg，84％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。MS：C15H9F2NO2的计算值为272.06[M-H]-，实验值为271.95[M-H]-。
步骤3)
Figure BDA0002358338140001172
(5-(7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(27mg，0.1mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(9mg，0.06mmol)和EDC(24mg，0.12mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(32mg，0.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将其稀释，并且用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用10-30％在己烷中的EtOAc进行纯化，以得到灰白色粉末的产物(50mg，87％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.50(br,1H),7.50(m,2H),7.27(m,2H),7.18(m,1H),7.03(m,2H),6.12(br,1H),6.05(br,1H),4.63(br,1H),4.46(br,1H),3.52(m,1H),3.46(m,1H),3.33(m,1H),3.10(m,2H),1.51(m,4H),1.41(s,9H),1.37(s,9H)。MS：C30H38F2N4O5的计算值为573.28[M+H]+，实验值为573.35[M+H]+。
实施例23.N-(((2S,4R)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001181
N-(((2S,4R)-4-(氨基甲基)吡咯烷-2-基)甲基)-7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(((3R,5S)-1-苄基-5-((7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(36mg，0.07mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加在二噁烷中的HCl(4M，0.15mL，0.6mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至TLC显示没有起始材料留下。然后添加Pd/C(10％，20mg)，并且将其在H2(55psi)下搅拌隔夜。将其通过硅藻土垫过滤，并且将滤液在减压下浓缩且用EtOAc研磨，以得到呈棕色粉末的产物(25mg，87％产率)。MS：C21H22F2N4O的计算值为385.18[M+H]+，实验值为385.15[M+H]+。
如以下步骤中所示制备需要的中间体。
Figure BDA0002358338140001191
(((3R,5S)-1-苄基-5-((7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向7-氟-3-(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(27mg，0.1mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(9mg，0.06mmol)和EDC(24mg，0.12mmol)。将反应混合物在室温下搅拌，并且添加(((3R,5S)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体E)(32mg，0.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将其稀释，并且用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤有机层。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上使用10-40％在己烷中的EtOAc进行纯化，以得到浅棕色粉末的产物(41mg，71％产率)。MS：C33H36F2N4O3的计算值为575.28[M+H]+，实验值为575.35[M+H]+。
实施例24.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3-(4-氟苯基)-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001201
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3-(4-氟苯基)-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3-(4-氟苯基)-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(38mg，0.03mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.1mL，0.4mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至没有起始材料留下。然后在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈灰白色粉末的沉淀(20mg，80％产率)。MS：C21H25FN4O2的计算值为385.20[M+H]+，实验值为385.25[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140001211
3-(3-甲氧基-2-硝基苯基)-2-氧代丙酸乙酯
在室温下向叔丁醇钾(1.88g，16.7mmol)在Et2O(150mL)中的悬浮液中添加草酸二乙酯(2.8mL，22mmol)。在搅拌20分钟之后，添加1-甲氧基-3-甲基-2-硝基苯(2.18g，16.7mmol)。将其在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc稀释并且用饱和NH4Cl溶液洗涤，然后将有机层经无水Na2SO4干燥。将粗混合物在减压下浓缩，且将残余物关于硅胶柱色谱法使用10-35％EtOAc/己烷作为洗脱液进行纯化，以得到呈黄色油状物的产物(3.6g，80％)。
步骤2)
Figure BDA0002358338140001212
7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯
向3-(3-甲氧基-2-硝基苯基)-2-氧代丙酸乙酯(3.5g，13.10mmol)在EtOH(50mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，150mg)并且在H2(55psi)下搅拌过夜。将其通过硅藻土垫过滤，并且在减压下浓缩滤液，且将残余物关于硅胶柱色谱法使用EtOAc/己烷作为洗脱液进行纯化，以得到呈浅棕色粉末的产物(2.6g，90％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.12(br,1H),7.28(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(s,1H),7.13(t,J＝7.8Hz,1H),6.72(d,J＝7.8Hz,1H),4.40(q,J＝7.2Hz,2H),3.97(s,3H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H)。MS：C12H13NO3的计算值为220.09[M+H]+，实验值为220.10[M+H]+。
步骤3)
Figure BDA0002358338140001221
3-溴-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯
向7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2.56g，11.7mmol)在无水THF(25mL)中的溶液中添加NBS(2.08g，11.7mmol)。将反应混合物在45℃下加热，直至TLC显示没有起始材料留下。然后将其冷却溶液至室温并在减压下浓缩。将形成的晶体过滤出并用THF洗涤以得到呈白色晶体的产物(2.70g，77％产率)。它用于下一步骤而未进行进一步纯化。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.14(br,1H),7.25(m,1H),7.13(m,1H),6.76(d,J＝7.5Hz,1H),4.45(q,J＝7.2Hz,2H),3.98(s,3H),1.45(t,J＝7.2Hz,3H)。MS：C12H12BrNO3的计算值为298.00和300.00[M+H]+，实验值为298.00和300.00[M+H]+。
步骤4)
Figure BDA0002358338140001222
3-(4-氟苯基)-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯
将在甲苯(30mL)、EtOH(10mL)和饱和Na2CO3溶液(10mL)中的3-溴-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(1.5g，5mmol)、(4-氟苯基)硼酸(1.06g，5.25mmol)的混合物脱气，并且添加Pd(dppf)Cl2(200mg，0.25mmol)。将混合物在105℃下加热过夜，并且将其用EtOAc萃取。将有机相合并，用盐水洗涤并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法在硅胶(0-30％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈浅棕色固体的产物(1.24g，79％产率)。MS：C18H16FNO3的计算值为314.11[M+H]+，实验值为314.15[M+H]+。
步骤5)
Figure BDA0002358338140001231
3-(4-氟苯基)-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸
向3-(4-氟苯基)-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(510mg，1.63mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加NaOH溶液(2M，10mL)。在室温下搅拌，直至没有起始材料留下。在减压下移除有机溶剂，并且用HCl溶液酸化残余物。将沉淀过滤并用水洗涤。将其干燥以得到呈浅灰色粉末的产物(430mg，93％产率)，其用于下一步反应而未进行进一步纯化。MS：C16H12FNO3的计算值为286.08[M+H]+，实验值为286.10[M+H]+。
步骤6)
Figure BDA0002358338140001232
(5-(3-(4-氟苯基)-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3-(4-氟苯基)-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸(29mg，0.1mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(9mg，0.06mmol)和EDC(24mg，0.12mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(32mg，0.1mmol)。在室温下继续搅拌反应混合物过夜。然后将其用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，将残余物通过柱色谱法在硅胶(30-55％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色固体的产物(38mg，65％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.40(br,1H),7.50(m,2H),7.23(m,1H),7.02(m,2H),6.85(m,1H),6.74(m,1H),6.05(br,1H),4.64(br,1H),4.47(br,1H),3.98(s,3H),3.52(m,1H),3.45(m,1H),3.31(m,1H),3.08(m,2H),1.53(m,4H),1.42(s,9H),1.39(s,9H)。MS：C31H41FN4O6的计算值为585.30[M+H]+，实验值为555.40[M-OMe+H]+。
实施例25.(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3-(4-氟苯基)-7-羟基-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐的制备。
Figure BDA0002358338140001241
Figure BDA0002358338140001251
(S)-N-(2,5-二氨基戊基)-3-(4-氟苯基)-7-羟基-1H-吲哚-2-甲酰胺二盐酸盐
向(5-(3-(4-氟苯基)-7-羟基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(25mg，0.04mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加HCl溶液(4M在二噁烷中，0.1mL，0.4mmol)。在室温下搅拌反应混合物，直至没有起始材料留下。然后在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc研磨，并且收集呈灰白色粉末的沉淀(15mg，77％产率)。1H NMR(300MHz,D2O)δ7.55(m,2H),7.51(m,1H),7.17(m,1H),7.10(m,1H),6.86(m,2H),3.60(m,1H),3.54(m,1H),3.42(m,1H),2.98(m,2H),1.66(m,4H)。MS(ESI+)：C20H23FN4O2的计算值为371.18[M+H]+，实验值为371.25[M+H]+。
如以下步骤中所述制备需要的中间体。
步骤1)
Figure BDA0002358338140001261
3-(4-氟苯基)-7-羟基-1H-吲哚-2-甲酸
在-78℃下向3-(4-氟苯基)-7-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸(100mg，0.35mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加BBr3溶液(1.0M,1.5mL，1.5mmol)。然后将其在-78℃下搅拌至室温，直至TLC显示没有起始材料留下。将其在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化以得到呈浅棕色粉末的产物(35mg，37％)。MS：C15H10FN4O3的计算值为270.06[M-H]-，实验值为270.00[M-H]-。
步骤2)
Figure BDA0002358338140001262
(5-(3-(4-氟苯基)-7-羟基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯
向3-(4-氟苯基)-7-羟基-1H-吲哚-2-甲酸(27mg，0.1mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.05mL，0.3mmol)、HOBt(9mg，0.06mmol)和EDC(24mg，0.12mmol)。在室温下搅拌反应混合物，并且添加(5-氨基戊-1,4-二基)(S)-二氨基甲酸二-叔丁酯(中间体B)(33mg，0.1mmol)。在室温下继续搅拌反应混合物过夜。然后将其用EtOAc萃取且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法在硅胶(40-70％乙酸乙酯/己烷)上进行纯化，以得到呈灰白色固体的产物(25mg，44％产率)。MS：C30H39FN4O6的计算值为571.29[M+H]+，实验值为571.40[M+H]+。
将滤液浓缩并且在硅胶上进行纯化，以得到呈黄色固体的产物(25mg，41％产率)。向3,6-双(4-氟苯基)-1H-吲哚-2-甲酸(40mg，0.11mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.04mL，0.2mmol)、HOBt(7mg，0.05mmol)和EDC(22mg，0.11mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟，并且添加(((3S,5S)-5-(氨基甲基)-1-苄基吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.1mmol)。在室温下继续搅拌反应物过夜。然后将其用EtOAc稀释且用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液浓缩并且在硅胶上进行纯化，以得到呈黄色固体的产物(30mg，51％产率)LC-MS(M+H+)：651.4。
实施例26.一般测试方法的描述：
固有MIC测定
根据临床和实验室标准协会(CLSI)对微量肉汤稀释法的指导进行MIC测定。将对数期细菌以5×105CFU/mL接种在2倍连续稀释化合物的情况下含有阳离子调节的Mueller-Hinton(CAMH)肉汤的96孔板。每个孔中的最终体积为100μL。每种化合物重复测试两次。在37℃下将微量滴定板在有氧环境中孵育18小时。然后通过用VersaMax读板机(MolecularDevices,Inc.)在600nm下读板来测试细菌的生长。MIC定义为抑制90％细菌生长的最低化合物浓度。
实验EPI的固有MIC用所述的方法进行测试。在96孔板的第一列中以100μg/mL测试化合物开始2倍系列稀释。这些测定中包括以下革兰氏阴性细菌菌株：
大肠杆菌ATCC 25922
肺炎克雷伯氏菌ATCC 13883和ATCC 10031
铜绿假单胞菌ATCC 27853.
鲍曼不动杆菌ATCC 19606
细菌EPI测定
第1层测试
出于这些研究的目的，EPI测定表示在存在实验外排泵抑制剂(EPI)的情况下测试抗生素对细菌的MIC的MIC测定。测定中存在的EPI的最高浓度通常为化合物的固有MIC的1/2。如果EPI的固有MIC大于100μg/mL，那么EPI测定是在50μg/mL的情况下测试的。然后使用EPI的系列稀释，评估其抗生素活性的增强。通过将在存在EPI化合物的情况下抗生素的MIC与单独抗生素的固有MIC相比较，决定相对EPI活性。为了评估EPI对预先暴露于抗生素的细菌的功效，在1/2抗生素MIIC下暴露(以便诱导外排泵表达)之后，从被分离为单个菌落的细菌培养物发展所用的细菌种菌，将其与EPI组合使用。
实施例27.标准EPI测定。
实施例2对两种测试抗生素(左氧氟沙星和头孢吡肟)对铜绿假单胞菌ATCC 27853的MIC值的影响是使用我们的标准EPI测定来评估的。左氧氟沙星和头孢吡肟为铜绿假单胞菌的外排泵的已知底物，并且因此非常适合作为测定EPI活性的测试抗生素。
在我们的标准EPI测定中，在不存在和存在亚抑制浓度的EPI的情况下确定测试抗生素的MIC。。最初，所用的亚抑制浓度为1/2×EPI的MIC。由于实施例2对铜绿假单胞菌ATCC27853的固有MIC为12.5μg/mL，所以我们在标准EPI测定中使用6.25μg/mL(1/2×MIC)的实施例2。在不存在EPI的情况下，左氧氟沙星对铜绿假单胞菌ATCC 27853的MIC为1μg/mL。在存在6.25μg/mL的实施例2的情况下，左氧氟沙星的MIC显著降低至0.032μg/mL，相对于在不存在EPI的情况下的左氧氟沙星的MIC(1μg/mL)降低32倍。
第2层测试
对表现出EPI活性的那些化合物进行了第二层体外评估，其中细菌在1/2抗生素MIC下预暴露于抗生素。这种新颖的评估方法提供了体外不显示与抗生素具有协同作用的那些化合物在小鼠感染模型中显示类似的体内功效的更好预测。这些“预暴露细菌EPI测定”证明了是用于按优先次序选择化合物以便进一步体内评估的非常有效的方法。
实施例28.预暴露细菌EPI测定
对于预暴露EPI测定，首先存在1/2×MIC测试抗生素(头孢吡肟或左氧氟沙星)的情况下，将用于测定的铜绿假单胞菌ATCC 27853细菌在37℃下生长于CAMH中过夜。此预暴露的原理为，细菌暴露于亚抑制浓度的测试抗生素将诱导外排泵表达(如果有的话)，并且可更准确地代表体内情形。
预暴露EPI测定使人们获得有关EPI抑制在暴露于不同抗生素时所诱导的外排泵的能力的信息。这种信息在指导体内实验和预测特定EPI-抗生素对的功效方面是有价值的。
实施例29.针对外排抑制的基于荧光的细胞测定
还用基于荧光的细胞测定评估了潜在的EPI化合物对外排泵的活性的影响，所述测定测量Hoechst 33342(革兰氏阴性细菌外排泵的已知底物)的外排。当与细胞内细菌DNA结合时，Hoechst 33342发出明亮的荧光，而在细菌细胞之外未结合的荧光团则几乎没有表现出荧光。因此，Hoechst 33342从细菌细胞内部向外部的外排与荧光的大量降低有关。
通过离心从过夜培养物中收获细菌细胞，并用含有1mM MgCl2的磷酸盐缓冲液(PBSM)洗涤细胞沉淀物。在洗涤细胞之后，将细胞沉淀物重悬浮于PBSM中，以在600nm处获得0.6至0.9的最终OD。然后，通过添加羰基氰化物3-氯苯苯腙(CCCP)至最终浓度在3至10μM的范围内来消耗外排泵功能所需的ATP。然后添加Hoechst 33342至最终浓度为10μM，并且将细胞在37℃下有氧地孵育0.5至18小时。将细菌悬浮液(200μL)添加至黑色平底96孔板的孔中，所述孔含有浓度在1.6至25μg/mL的范围内的测试EPI化合物或等效体积的单独媒介物(DMSO)。使用板旋涡器将细菌细胞与测试EPI化合物混合，并且将板在37℃下预孵育5分钟。预孵育之后，通过添加葡萄糖至最终浓度为10至50mM来起始Hoechst 33342外排。使用
Figure BDA0002358338140001301
2荧光读板机(Molecular Devices,Inc.,Sunnyvale,CA)来在37℃下监测每个孔的荧光每分钟一次，持续20至60分钟。激发和发射波长分别设定为355和460nm。将大肠杆菌ATCC 25922、肺炎克雷伯氏菌ATCC 13883、铜绿假单胞菌ATCC 27853和鲍曼不动杆菌ATCC 19606用作此测定中的模型革兰氏阴性细菌菌株。
由于需要抗生素和EPI均存在才能实现协同作用，所以体内评估细菌EPI的一般方法是复杂的。发现了证明有效确定小鼠败血病模型中细菌EPI的相对功效的一般方法。初始向具有败血病的小鼠静脉内施用细菌EPI，接着5分钟之后静脉内施用或口服施用抗生素。然后再5分钟之后，皮下施用EPI的第二次施用以充当加强剂，接着在第二次施用EPI之后静脉内或口服施用抗生素的最终施用。。在许多情况下，此方案证明了有效说明协同作用并使感染的小鼠存活。在少数情况下，24小时之后需要如第1天所施用的EPI和抗生素的第二方案来影响治愈。
实施例30.评估外排泵抑制剂的体内功效的方法
细菌外排泵抑制剂(EPI)的体内功效的确定可使用感染的小鼠败血病模型来有效地确定。通过在瑞士韦伯斯特(Swiss Webster)雌性小鼠中腹膜内注射500ul含有浓度为在5％粘蛋白中约5×105个细胞的细菌(诸如铜绿假单胞菌[ATCC 27853])的种菌来起始全身感染。实验组(每组4-6只感染的小鼠)由以下组成：阳性和阴性对照、以及用单独抗生素或单独EPI处理感染的小鼠、以及用与抗生素组合施用的EPI处理感染的小鼠。感染之后五分钟，静脉内施用EPI，感染之后10分钟施用抗生素诸如头孢吡肟(250ul 10mg/ml溶液)。然后在感染之后20分钟皮下施用第二剂EPI，在感染之后25分钟再次施用头孢吡肟(250ul10mg/ml溶液)。感染之后10和25分钟每日两次向用头孢吡肟处理的小鼠注射静脉内剂量(250ul 10mg/m溶液)。将用单独EPI处理的小鼠在感染之后5分钟进行静脉内处理并且在感染之后20分钟进行皮下处理。由4-6只感染的小鼠组成的另外的实验组不进行处理或在适当时间点用单独媒介物处理。需要时，此方案将在测定的第2天感染之后24小时重复进行。
实施例31.以下可说明供在人体内治疗性或预防性使用的含有式I化合物(‘化合物X’)或其药学上可接受的盐的代表性药物剂型。以下片剂可任选地包括肠溶衣。
Figure BDA0002358338140001311
Figure BDA0002358338140001321
以上制剂可通过药物领域中熟知的常规程序来获得。
所有公布、专利和专利文件均以引用方式并入本文，恰如个别地以引用方式并入。本发明已参考各种具体和优选实施方案和技术加以描述。然而，应当理解，可在保持处于本发明的精神和范围内的同时作出许多变化和修改。

Claims (53)

1.一种式I化合物或其盐：
Figure FDA0002358338130000011
其中：
A为-C(＝O)N(Ra1)-R1、-(C1-C3)烷基-C(＝O)N(Ra1)R1、-(C1-C3)烷基-O-R1、-O-R1、-(C1-C3)烷基-N(Ra1)-R1、-N(Ra1)-R1或R1；
B为(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-，其中B的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个Z1基团取代；
每个R1独立地为：
(a)被一个或多个选自由以下组成的组的基团取代的(C1-C14)烷基：-NRb2Rc2、-NHNH2、-C(＝NRa2)(NRb2Rc2)、-NRa2C(＝NRa2)(Rd2)和-NRa2C(＝NRa2)(NRb2Rc2)，并且其中(C1-C14)烷基任选地独立地被一个或多个卤代基、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基取代；或者
(b)(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-，其中每个(C3-C7)碳环基或(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-独立地被一个或多个Z2或Z3取代，并且其中每个4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个Z2或Z3取代，并且其中R1的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个卤代基、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基取代；
R2为氢、(C1-C4)烷基或苯基(C1-C3)烷基-，其中所述苯基任选地被一个或多个(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素或-NO2取代；
R3为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基、-OH或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R4为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基、-OH或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R5为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基、-OH或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R6为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基、-OH或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Z1独立地为卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、-CO2H、苄氧基或(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Z2独立地选自由以下组成的组：-NRb3Rc3、-NHNH2、-C(＝NRa3)(NRb3Rc3)、-NRa3C(＝NRa3)(Rd3)和-NRa3C(＝NRa3)(NRb3Rc3)
每个Z3独立地为被一个或多个Z2取代并且任选地被一个或多个Z4取代的-(C1-C6)烷基；
每个Z4独立地为卤代基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra1独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb2和Rc2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
Rd2为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb3和Rc3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；并且
Rd3为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基。
2.如权利要求1所述的化合物或其盐，其中：
A为-C(＝O)N(Ra1)-R1、-(C1-C3)烷基-C(＝O)N(Ra1)R1、-(C1-C3)烷基-O-R1、-O-R1、-(C1-C3)烷基-N(Ra1)-R1、-N(Ra1)-R1或R1；
B为(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-，其中B的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基、杂芳基-(C1-C4)烷基-、3-7元单环杂环或3-7元单环杂环-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个Z1基团取代；
每个R1独立地为：
(a)被一个或多个选自由以下组成的组的基团取代的(C1-C14)烷基：-NRb2Rc2、-NHNH2、-C(＝NRa2)(NRb2Rc2)、-NRa2C(＝NRa2)(Rd2)和-NRa2C(＝NRa2)(NRb2Rc2)，并且其中(C1-C14)烷基任选地独立地被一个或多个(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基取代；或者
(b)(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-，其中每个(C3-C7)碳环基或(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-独立地被一个或多个选自由Z和被一个或多个Z取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，并且其中每个4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个选自由Z和被一个或多个Z取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z独立地选自由以下组成的组：-NRb3Rc3、-NHNH2、-C(＝NRa3)(NRb3Rc3)、-NRa3C(＝NRa3)(Rd3)和-NRa3C(＝NRa3)(NRb3Rc3)，并且其中每个(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、4-7元单环杂环基或4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个(C1-C4)烷基取代；
R2为氢、(C1-C4)烷基或苯基(C1-C3)烷基-，其中所述苯基任选地被一个或多个(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素或-NO2取代；
R3为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R4为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R5为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
R6为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Z1独立地为卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)卤代烷氧基；
每个Ra1独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb2和Rc2独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
Rd2为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Ra3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；
每个Rb3和Rc3独立地为氢、(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基；并且
Rd3为(C1-C4)烷基或(C3-C7)碳环基。
3.如权利要求1或2所述的化合物或其盐，其中A为-C(＝O)N(Ra1)-R1。
4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中Ra1为氢。
5.如权利要求1-4中任一项所述的化合物或盐，其中R2为氢或(C1-C6)烷基。
6.如权利要求1-4中任一项所述的化合物或盐，其中R2为氢。
7.如权利要求1或2所述的化合物或盐，其为式Ia化合物或其盐。
Figure FDA0002358338130000061
8.如权利要求1-7中任一项所述的化合物或盐，其中R3为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、-OH或(C1-C4)卤代烷氧基。
9.如权利要求1-7中任一项所述的化合物或盐，其中R3为氢、OH或甲氧基。
10.如权利要求1-9中任一项所述的化合物或盐，其中R4为氢、芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基。
11.如权利要求1-9中任一项所述的化合物或盐，其中R4为氢或苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基。
12.如权利要求1-9中任一项所述的化合物或盐，其中R4为氢或苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个卤代基取代。
13.如权利要求1-9中任一项所述的化合物或盐，其中R4为4-氟苯基或氢。
14.如权利要求1-13中任一项所述的化合物或盐，其中R5为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)卤代烷氧基或苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个独立地选自由以下组成的组的基团取代：卤代基、-OH、-NO2、-CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤代烷氧基。
15.如权利要求1-13中任一项所述的化合物或盐，其中R5为氢、4-氟苯基、苯基或3,5-二甲基苯基。
16.如权利要求1-15中任一项所述的化合物或盐，其中R6为氢、卤代基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)卤代烷氧基。
17.如权利要求1-15中任一项所述的化合物或盐，其中R6为氢。
18.如权利要求1-17中任一项所述的化合物或盐，其中B为(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基或杂芳基-(C1-C4)烷基-，其中B的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-、杂芳基或杂芳基-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个Z1基团取代。
19.如权利要求1-17中任一项所述的化合物或盐，其中B为(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C4)炔基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-或杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、芳基、芳基-(C1-C4)烷基-或杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
20.如权利要求1-17中任一项所述的化合物或盐，其中B为(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、(C3-C7)碳环基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基-(C2-C6)炔基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
21.如权利要求1-17中任一项所述的化合物或盐，其中B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-或5-6元杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
22.如权利要求1-17中任一项所述的化合物或盐，其中B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基乙炔基、(C3-C7)碳环基乙基或6元杂芳基，其中B的任何(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基-、(C3-C7)碳环基乙炔基、(C3-C7)碳环基乙基或6元杂芳基任选地被一个或多个Z1基团取代。
23.如权利要求1-17中任一项所述的化合物或盐，其中B为(C3-C7)碳环基、苯基、苯基-(CH2)-、(C3-C7)碳环基乙炔基、(C3-C7)碳环基乙基或吡啶基，其中B的任何苯基、苯基-(CH2)-、(C3-C7)碳环基乙炔基、(C3-C7)碳环基乙基或吡啶基任选地被一个或多个Z1基团取代。
24.如权利要求1-23中任一项所述的化合物或盐，其中每个Z1独立地为卤代基、-OH、-CO2H、苄氧基或(C1-C4)卤代烷基。
25.如权利要求1-17中任一项所述的化合物或盐，其中B为4-氟苯基、环丙基、苄基、吡啶-4-基、4-羟基苯基、4-三氟甲基苯基、4-羧基苯基、3-苄氧基苯基、3-羟基苯基、苯基、3,5-二甲基苯基、2-环丙基乙炔基或2-环丙基乙基。
26.如权利要求1-25中任一项所述的化合物或盐，其中R1为被一个或多个独立地选自-NRb2Rc2的基团取代的(C1-C14)烷基，并且其中所述(C1-C14)烷基任选地被一个或多个(C3-C7)碳环基取代。
27.如权利要求1-25中任一项所述的化合物或盐，其中R1为被一个或多个独立地选自-NRb2Rc2的基团取代的(C2-C10)烷基，并且其中所述(C2-C10)烷基任选地被一个或多个(C3-C7)碳环基取代。
28.如权利要求1-25中任一项所述的化合物或盐，其中R1为被两个或更多个独立地选自-NRb2Rc2的基团取代的(C4-C8)烷基。
29.如权利要求1-26中任一项所述的化合物或盐，其中Rb2和Rc2各自为氢。
30.如权利要求1-25中任一项所述的化合物或盐，其中R1为4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-，其中所述4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-被一个或多个独立地选自由Z2和被一个或多个Z2取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z2独立地选自由以下组成的组：-NRb3Rc3、-NHNH2、-C(＝NRa3)(NRb3Rc3)、-NRa3C(＝NRa3)(Rd3)和-NRa3C(＝NRa3)(NRb3Rc3)，并且其中所述4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
31.如权利要求1-25中任一项所述的化合物或盐，其中R1为4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-，其中所述4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-被一个或多个独立地选自由Z2和被一个或多个Z2取代的(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z2独立地为-NRb3Rc3，并且其中所述4-7元单环杂环基-(C1-C4)烷基-任选地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
32.如权利要求1-25中任一项所述的化合物或盐，其中R1为吡咯烷基-(C1-C4)烷基-，其中所述吡咯烷基-(C1-C4)烷基-被一个或多个独立地选自由Z2和被一个或多个Z2取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z2独立地为-NRb3Rc3，并且其中所述吡咯烷基-(C1-C4)烷基-任选地独立地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
33.如权利要求1-25中任一项所述的化合物或盐，其中R1为吡咯烷基-(CH2)-，其中所述吡咯烷基-(CH2)-被一个或多个独立地选自由Z2和被一个或多个Z2取代的-(C1-C6)烷基组成的组的基团取代，其中每个Z2独立地为-NRb3Rc3，并且其中所述吡咯烷基-(CH2)-任选地独立地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
34.如权利要求1-25中任一项所述的化合物或盐，其中R1为吡咯烷基-(CH2)-，其中所述吡咯烷基-(CH2)-在所述吡咯烷基上被经一个或多个-NRb3Rc3取代的-(C1-C6)烷基取代。
35.如权利要求1-25或30-34中任一项所述的化合物或盐，其中Rb3和Rc3各自为氢。
36.如权利要求1-35中任一项所述的化合物或盐，其中R1为：
Figure FDA0002358338130000101
37.如权利要求1-35中任一项所述的化合物或盐，其中A为：
Figure FDA0002358338130000111
38.如权利要求1所述的化合物或盐，其为
Figure FDA0002358338130000112
Figure FDA0002358338130000121
Figure FDA0002358338130000131
Figure FDA0002358338130000141
或其盐。
39.如权利要求1所述的盐，其为：
Figure FDA0002358338130000142
Figure FDA0002358338130000151
Figure FDA0002358338130000161
Figure FDA0002358338130000171
40.一种药物组合物，其包含如权利要求1-39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的媒介物。
41.一种药物组合物，其包含如权利要求1-39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、一种或多种抗细菌剂以及药学上可接受的媒介物。
42.一种抑制动物中的细菌外排泵的方法，其包括向所述动物施用如权利要求1-39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
43.一种治疗或预防动物中的细菌感染的方法，其包括向所述动物共同施用如权利要求1-39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种抗细菌剂。
44.如权利要求42或权利要求43所述的方法，其中所述动物被细菌感染。
45.如权利要求44所述的方法，其中所述细菌感染为革兰氏阴性细菌菌株感染。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述革兰氏阴性细菌菌株选自由以下组成的组：鲍曼不动杆菌、乙酸钙不动杆菌、溶血不动杆菌、鲁氏不动杆菌、伴放线放线杆菌、嗜水气单胞菌、伴放线聚集杆菌、根癌土壤杆菌、吉氏拟杆菌、埃氏拟杆菌、福赛拟杆菌、脆弱拟杆菌、卵状拟杆菌、内脏拟杆菌、多形拟杆菌、单形拟杆菌、普通拟杆菌、支气管炎博德特氏菌、副百日咳博德特氏菌、百日咳博德特氏菌、伯氏疏螺旋体菌、卡他布兰汉菌、洋葱伯克氏菌、结肠弯曲菌、胎儿弯曲菌、空肠弯曲菌、新月柄杆菌、沙眼衣原体、差异柠檬酸杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、产气肠杆菌、阿氏肠杆菌、阴沟肠杆菌、阪崎肠杆菌、大肠埃希氏菌、土拉弗朗西斯菌、具核梭杆菌、***加德纳菌、杜克雷嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、幽门螺杆菌、反硝化金氏菌、产吲哚金氏菌、金氏金氏菌、口腔金氏菌、产酸克雷伯氏菌、肺炎克雷伯氏菌、鼻硬结克雷伯氏菌、嗜肺军团菌、单核细胞增生李斯特氏菌、牛莫拉菌、卡他莫拉菌、腔隙莫拉菌、摩氏摩根菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、成团泛菌、犬巴斯德菌、溶血巴斯德菌、多杀巴斯德菌、土拉巴斯德菌、牙龈卟啉单胞菌、奇异变形杆菌、普通变形杆菌、产碱普罗威登斯菌、雷极普罗威登斯菌、斯氏普罗威登斯菌、食酸假单胞菌、铜绿假单胞菌、产碱假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、肠炎沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、粘质沙雷氏菌、痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌、嗜麦芽寡养单胞菌、小韦荣氏球菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、中间耶尔森氏菌、鼠疫耶尔森氏菌和假结核耶尔森氏菌。
47.如权利要求44所述的方法，其中所述细菌感染为***菌株感染。
48.如权利要求47所述的方法，其中所述***菌株选自由以下组成的组：内氏放线菌、粘性放线菌、炭疽芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、艰难梭菌、白喉棒杆菌、溃疡棒杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、藤黄微球菌、禽分枝杆菌、胞内分枝杆菌、麻风分枝杆菌、结核分枝杆菌、痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、猪葡萄球菌、中间葡萄球菌、解糖葡萄球菌、腐生葡萄球菌、无乳链球菌、变形链球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、唾液链球菌和血链球菌。
49.如权利要求1-39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于医学治疗。
50.如权利要求1-39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于预防性或治疗性抑制细菌外排泵以治疗细菌感染。
51.如权利要求1-39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其与一种或多种抗细菌剂组合用于预防性或治疗性治疗细菌感染。
52.如权利要求1-39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制备抑制细菌外排泵的药剂的用途。
53.如权利要求1-39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗动物中的细菌感染的药剂的用途。
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