CN111057139A - 一种制备特立帕肽的新工艺 - Google Patents
一种制备特立帕肽的新工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111057139A CN111057139A CN201811206844.6A CN201811206844A CN111057139A CN 111057139 A CN111057139 A CN 111057139A CN 201811206844 A CN201811206844 A CN 201811206844A CN 111057139 A CN111057139 A CN 111057139A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fmoc
- trt
- fragment
- resin
- leu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 title claims abstract description 66
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 title claims abstract description 52
- 229960005460 teriparatide Drugs 0.000 title claims abstract description 51
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 106
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 106
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 82
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims abstract description 26
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 25
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 55
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 45
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 37
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 37
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 26
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 24
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 22
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 21
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 16
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 11
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 11
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 10
- XXMYDXUIZKNHDT-QNGWXLTQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(1-tritylimidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(N=C1)=CN1C(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 XXMYDXUIZKNHDT-QNGWXLTQSA-N 0.000 claims description 9
- REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](COC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 9
- KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-(tritylamino)butanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N 0.000 claims description 9
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 claims description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 8
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- BUUKFBVDKSFMHN-LKMAISLMSA-N parathar acetate Chemical compound CC(O)=O.C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 BUUKFBVDKSFMHN-LKMAISLMSA-N 0.000 claims description 7
- 229960000338 teriparatide acetate Drugs 0.000 claims description 7
- BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 6
- WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)CC(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N 0.000 claims description 6
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 6
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 claims description 6
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- AAAFQLPJNOITCL-SFHVURJKSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[(2s)-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]carbamate Chemical compound C([C@@H](C=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 AAAFQLPJNOITCL-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N 0.000 claims description 3
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 3
- QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N (2s,3s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 22
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 19
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 17
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 13
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 12
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 10
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 7
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 6
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 6
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 5
- 102100036893 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 3
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007825 activation reagent Substances 0.000 description 2
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 2
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 2
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 2
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N tetrahydropyridine hydrochloride Natural products C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 1
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 1
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 1
- 101001135732 Bos taurus Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- 101001135770 Homo sapiens Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 101001135995 Homo sapiens Probable peptidyl-tRNA hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 206010058359 Hypogonadism Diseases 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 1
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 206010041569 spinal fracture Diseases 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供一种特立帕肽合成方法。本发明的所述的方法中,按照特立帕肽主链肽序分为片段[1‑12]肽树脂及片段一和片段二两个片段,可以分别先合成这三个短肽,再将片段[1‑12]肽树脂与片段一、片段二逐个连接,脱末端Fmoc保护基后得到特立帕肽树脂,最后经裂解、纯化、成盐最终获得目标产品。各片段及片段树脂的结构如说明书所述。本发明方法操作简单,所得产品纯度较高,成本较低,有利于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及多肽的合成技术,特别是利用固相合成技术实现特立帕肽的合成工艺。
背景技术
特立帕肽Forteo(Teriparatide)为美国礼来研发,用于原发性骨质疏松及性腺功能减退性骨质疏松、绝经后骨质疏松。是美国食品及药物管理局(FDA)首次批准的促骨形成新药,这种甲状旁腺激素的衍生物可以通过增加成骨细胞的活性及数量而促进骨生长,而目前的常规骨质疏松药物一般只是作用于破骨细胞而减缓或阻断骨质流失。原研的特立帕肽于2002年12月首次获批在美国上市,2011年3 月在中国获批上市。在一项涉及到1,637例绝经后骨质疏松症患者的临床研究结果显示,与那些只服用了钙和维生素D补加剂的患者相比,96%的患者在接受该药治疗后,其脊柱和臀部的骨(矿物质)密度BMD均表现出显著增加。此外还发现,该药能够分别减少发生脊椎骨折和其他类型骨折危险的65%和53%。该药的另一个特点是副作用很小,通常只是恶心、眩晕和腿痛性痉挛。特立帕肽在 2016年全球销售额达到15亿美元。我国是全世界骨质疏松人数最多的国家,有数据显示目前我国骨质疏松患者为9000万人,预计到2025年该数字将上升到 1.5亿,市场潜力巨大。
特立帕肽的结构式:
Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu- Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH
特立帕肽[hPTH(1-34)]是一种合成的多肽激素,为人甲状旁腺素PTH的1-34氨基酸片段,该片段是含有84个氨基酸的内源性甲状旁腺素PTH具有生物活性的 N-末端区域。特立帕肽的免疫学和生物学特性与内源性甲状旁腺素PTH以及牛甲状旁腺素PTH(bPTH)完全相同,能够刺激骨形成和骨吸收,减少绝经后妇女骨折的发生率,根据给药方式的不同,还能提高或降低骨密度。连续输注可导致甲状旁腺素PTH浓度持续增高,因此比仅引起血清甲状旁腺素PTH浓度短暂增高的每日注射法产生的骨吸收作用更强。此外,特立帕肽不抑制二磷酸腺苷诱导途径或者胶原诱导途径的血小板聚集反应。其用法为静脉注射或皮下注射,特别地,老年人剂量在31~85岁范围内,年龄增加对本药药动学无显著影响,无需调整剂量。
目前特立帕肽合成有关的专利如下:
1)采用逐级固相合成法。CN107501408及CN104530218等专利按照氨基酸序列,将氨基酸与树脂逐个连接的方法得到肽树脂,然后酸解获得特立帕肽粗品,特立帕肽粗品经纯化、转醋酸盐得到醋酸特立帕肽纯品;CN104017064按照从C端到N端的顺序将17与18位的Ser与Met偶联成二肽再对接到主链中; CN1103467595按照从C端到N端的顺序将18与19位的Asn与Ser偶联成二肽再对接到主链中。总体上CN104017064与CN1103467595还是采用了逐级连接的方法。总体而言,逐级固相合成法的技术方法差异主要体现在树脂、缩合或活化试剂、裂解溶剂等不同,相互之间的优势不显著。
2)片段固相合成法。CN105384809及CN102731643等专利将氨基酸序列分成多个片段合成,然后拼接得到最后的肽树脂,收率20~40%。缺点是碎片还是较多、步骤长、收率低,有待改善提升。
综上所述,现有特立帕肽的合成方法,得到的肽收率基本在20-42%,存在杂质多、收率低、氨基酸消旋、纯化困难、收率低等问题,尚未见比较适合工业化生产的技术方案。为此,本发明人对特立帕肽的合成方法进行了研究,从而得到了本发明的技术方案。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有合成过程中所存在的杂质多,纯度和收率低,成本昂贵,操作步骤繁琐,废液过量,不利于工业化生产的问题,提供一种特立帕肽合成方法。
本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的,一种特立帕肽的合成方法,包括如下步骤:
步骤一、按照主链C端至N端的氨基酸顺序,固相合成第1-12氨基酸的片段[1-12]肽树脂,所述的多肽片段肽树脂侧链上偶联有保护基;
步骤二、按照主链C端至N端的氨基酸顺序,固相合成第13-22氨基酸的肽树脂,切割树脂得片段一;
步骤三、按照主链C端至N端的氨基酸顺序,固相合成第23-34氨基酸的肽树脂,切割树脂得片段二;
步骤四、固相法将片段[1-12]肽树脂脱末端Fmoc后,与片段一偶联反应,得到片段[1-22]肽树脂;
步骤五、固相法将片段[1-22]肽树脂脱末端Fmoc后,与片段二偶联反应,得到特立帕肽树脂;
步骤六:将特立帕肽树脂在裂解剂的作用下进行裂解反应得到特立帕肽粗品;步骤七:特立帕肽粗品经过纯化、成盐、冻干得到醋酸特立帕肽精肽。
在本发明的所述的方法中,按照特立帕肽主链肽序分为上文所述的一个短链的片段树脂及两个短链片段。分别先合成片段肽树脂及另外两个片段,然后再逐个连接,切割树脂得到最终产品的粗品。以特立帕肽主链C端到N端的氨基酸顺序编号,其肽序如下式所示:
Ser34-Val33-Ser32-Glu31-Ile30-Gln29-Leu28-Met27-His26-Asn25-Leu24-Gly23-Lys22-His 21-Leu20-Asn19-Ser18-Met17-Glu16-Arg15-Val14-Glu13-Trp12-Leu11-Arg10-Lys9-Lys8-Leu7 -Gln6-Asp5-Val4-His3-Asn2-Phe1-OH
进一步地,
片段[1-12]肽树脂、片段[1-22]肽树脂及特立帕肽树脂的His、Asp、Gln、 Lys、Arg、Trp、Glu、Ser、Asn上有保护基;
片段一、片段二的His、Asp、Gln、Lys、Arg、Trp、Glu、Ser、Asn上有保护基;
本发明所述保护基是在氨基酸合成领域常用的保护氨基酸主链上氨基、侧链功能团包括含活泼氢的氮基或羟基或羧基等干扰合成的基团的保护基团,防止主链氨基或侧链功能团等在制备目标产物过程中产生杂质。
优选地,Asn、Gln的侧链保护基为Trt;
His的侧链保护基为Adoc、Boc、Mmt、Mtt或Trt,进一步地,优选Trt;
Lys、Trp的侧链保护基为Boc或Trt,进一步地,优选Boc;
Arg的侧链保护基为Boc或Pbf,进一步地,优选Pbf;
Glu的侧链保护基优选OtBu;
Ser的侧链保护基为TES、TMS、TBS、DHP、THP或tBu,进一步地,优选为tBu。
一种特立帕肽的固相合成方法,包括但不限于侧链保护基并以优选保护基进行描述,作为优选的方案,合成方法包括如下步骤:
步骤一、将Fmoc-Phe-Wang Resin,加入固相反应器中,在脱保护剂的作用下脱Fmoc反应后与Fmoc-Asn(Trt)-OH在缩合剂的作用下进行偶联反应,然后重复所述的脱保护基反应和偶联反应,按照多肽序列依次连接如下氨基酸 Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、 Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、 Fmoc-Leu-OH及Fmoc-Trp(Boc)-OH,得到所述多肽片段[1-12]肽树脂;
步骤二、将2-CTC Resin与氨基酸Fmoc-Glu(OtBu)-OH在缩合剂的作用下偶联反应得接头树脂,将其进行Fomc脱保护基反应,然后采用逐一固相偶联反应的方式按照多肽序列依次偶联Fmoc-Val-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、
Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-His(Trt)-OH及Fmoc-Lys(Boc)-OH,重复偶联反应和脱保护基反应操作,直至合成得到片段一肽树脂,最后在裂解剂的作用下裂解树脂后得到片段一;
步骤三、将2-CTC Resin加入固相反应器中与氨基酸Fmoc-Gly-OH在缩合剂的作用下偶联反应得到接头树脂,将其进行Fomc脱保护基反应,然后采用逐一固相偶联反应的方式按照多肽序列依次偶联氨基酸Fmoc-Leu-OH、
Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、
Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH及Fmoc-Ser(tBu)-OH,重复偶联反应和脱保护基反应操作直至合成得到片段二肽树脂,最后在裂解剂的作用下裂解树脂后得到片段二;
步骤四、固相法将片段[1-12]肽树脂末端Fmoc进行脱保护基反应,与片段一在缩合剂的作用下偶联,得到片段[1-22]肽树脂;
步骤五、固相法将片段[1-22]肽树脂末端Fmoc进行脱保护基反应,与片段二在缩合剂的作用下偶联,得到特立帕肽树脂;
步骤六:将特立帕肽树脂在裂解剂的作用下进行裂解反应得到特立帕肽粗品;步骤七:特立帕肽粗品经过纯化、成盐、冻干得到醋酸特立帕肽精肽。
进一步地,
所述的片段[1-12]肽树脂结构式为:
Fmoc-Trp12(Boc)-Leu11-Arg10(pbf)-Lys9(Boc)-Lys8(Boc)-Leu7-Gln6(Trt)-Asp5(OtBu)- Val4-His3(Trt)-Asn2(Trt)-Phe1-Wang树脂;
所述的片段一结构式为:
Fmoc-Lys22(Boc)-His21(Trt)-Leu20-Asn19(Trt)-Ser18(tBu)-Met17-Glu16(OtBu)-Arg15(pb f)-Val14-Glu13(OtBu)-OH;
所述的片段二结构式为:
Fmoc-Ser34(tBu)-Val33-Ser32(tBu)-Glu31(OtBu)-Ile30-Gln29(Trt)-Leu28-Met27-His26(Trt )-Asn25(Trt)-Leu24-Gly23-OH;
所述的片段[1-22]肽树脂其结构式为:
Fmoc-Lys22(Boc)-His21(Trt)-Leu20-Asn19(Trt)-Ser18(tBu)-Met17-Glu16(OtBu)-Arg15(pb f)-Val14-Glu13(OtBu)-Trp12(Boc)-Leu11-Arg10(pbf)-Lys9(Boc)-Lys8(Boc)-Leu7-Gln6(Tr t)-Asp5(OtBu)-Val4-His3(Trt)-Asn2(Trt)-Phe1-Wang树脂;
所述的特立帕肽树脂其结构式为:
Ser34(tBu)-Val33-Ser32(tBu)-Glu31(OtBu)-Ile30-Gln29(Trt)-Leu28-Met27-His26(Trt)-Asn25(Trt)-Leu24-Gly23-Lys22(Boc)-His21(Trt)-Leu20-Asn19(Trt)-Ser18(tBu)-Met17-Glu16(Ot Bu)-Arg15(pbf)-Val14-Glu13(OtBu)-Trp12(Boc)-Leu11-Arg10(pbf)-Lys9(Boc)-Lys8(Boc)- Leu7-Gln6(Trt)-Asp5(OtBu)-Val4-His3(Trt)-Asn2(Trt)-Phe1-Wang树脂。
进一步地,
步骤一至步骤五的任意步骤中,所述的偶联反应是在缩合剂的作用下进行的,所述的缩合剂任意独立地选自DIC/HOBt、HBTU/HOBt/DIEA、PyBop/HOBt/DIEA 中的一种或多种,优选DIC/HOBt;所用的反应溶剂优选为二氯甲烷、DMF、NMP、 DMSO中的一种或多种组合,优选DMF;脱保护基反应是在脱保护剂的作用下进行的,所述的脱保护剂选自Pip/DMF、NaOH/MeOH、TEA/DMF中的任意一种,优选为体积比20%的Pip/DMF溶液。
作为优选的方案,
步骤二或步骤三的任意步骤中,所述的裂解剂选自三氟乙酸/二氯甲烷混合溶液或者三氟乙醇/二氯甲烷混合溶液。
进一步地,混合溶液的用量为:体积比TFA:DCM=0.5~5:95.0~99.5;三氟乙醇与二氯甲烷混合溶液,体积比为TFE:DCM=10~30:70~90;进一步优选为 TFE:DCM=20:80(体积比);裂解剂体积为肽树脂质量的5~20倍,优选为肽树脂质量的8~12倍。
在一种方案中,上述步骤六中,采用的裂解剂为TFA、PhSMe、TIS和水的混合溶液;所述的混合溶液体积比为TFA:PhSMe:TIS:水=70~97:10~1:10~1: 10~1;或者采用的裂解剂为TFA、EDT和水的混合溶液;所述的混合溶液体积比为TFA:EDT:水=90~95:1~5:1~5,比例优选为90:5:5;
进一步地,步骤六中裂解剂体积为肽树脂质量的5~25倍,优选为肽树脂质量的 8~12倍;
在一种方案中,
特立帕肽的固相合成方法中,固相合成的固相载体为取代度为0.2-1.0mmol/g的Wang树脂、取代度为0.2-0.7mmol/g的Fmoc-Phe-Wang树脂、取代度为 0.2-1.0mmol/g的HMP树脂、取代度为0.2-1.0mmol/g的HMBA-AM树脂或取代度为0.2-1.5mmol/g的2-CTC树脂;优选取代度0.3-0.5mmol/g的 Fmoc-Phe-Wang树脂或0.6-1.2mmol/g的2-CTC树脂。
在一种方案中,
本发明所用的反应溶剂任意选自二氯甲烷、DMF、NMP、DMSO中的一种或多种组合。
本发明中,所述的逐一固相偶联反应的方式通常是将反应底物依次连接Fmoc保护的氨基酸,每次偶联反应完毕,用脱保护剂进行脱Fmoc保护基反应,然后再与下一个Fmoc保护的氨基酸进行固相偶联反应,依次重复偶联反应和脱保护基反应操作,直至合成得到目标肽序结构的产物。
本发明所述侧链保护基是在氨基酸合成领域常用的保护氨基酸主链以及侧链上含氢的氮基、羟基或羧基等功能团的保护基团,其有助于防止侧链的一部分与肽合成、加工等步骤中使用的化学物质发生反应。
所述的缩合剂是能引起偶联反应的试剂,在多肽合成中,尤指能促进氨基与羧基偶联形成肽键的试剂。
所述的活化剂是指在多肽偶联反应中,能够协助缩合剂更好的促进偶联反应的试剂,如:抑制偶联反应中消旋杂质的产生、催化加快反应速度等。
本发明的所述的方法中,按照特立帕肽主链肽序分为上文所述的一个基础的片段[1-12]肽树脂及两个片段,可以分别先合成这三个短肽。再将片段[1-12]肽树脂与片段一、片段二逐个连接,脱末端Fmoc保护基后得到特立帕肽树脂。最后经裂解、纯化、成盐最终获得目标产品。
附图说明 说明书附图图1为特立帕肽制备流程图
本发明的有益效果如下:
1)本发明采用三个片段偶联法进行固相合成特立帕肽,其中所述的片段[1-12]肽树脂、片段一、片段二容易合成与纯化,纯度高;
2)较逐级合成法的34步缩短至13步,不同片段可以同时进行合成,有效地缩短了特立帕肽合成时间;
3)本发明所采用的片段合成法,步骤短,反应条件温和,可有效地减少缺失肽、主成份的氨基酸序列相差较多、异构化及氨基酸消旋等问题;
4)产品更容易纯化,后处理操作简单,三废减少;
5)本发明所述的方法工艺稳定、最终特立帕肽纯度可达99.5%以上,总收率46%,有利于工业运用。
具体实施方式
为便于理解,以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是,具体实例仅是为了说明,显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明,在本发明的范围内对本发明做出修正。
本发明说明书和权利要求书中所使用的缩写或英文全称的含义如下表:
实施例一:片段[1-12]肽树脂的合成
在固相反应瓶中加入Fmoc-Phe-Wang树脂(10.00g取代度0.35mmol/g)、 200mLDCM溶胀后抽干。滤饼与300ml20%哌啶/DMF溶液混合,搅拌5分钟后抽干;再加入300mL20%哌啶/DMF溶液,混合搅拌15分钟,抽干。适量DMF 洗涤滤饼,抽干,在固相反应瓶中待用。在另一个干燥的反应瓶中依次加入 Fmoc-Asn(Trt)-OH(6.45g)、HOBT(1.46g)、30mLDMF,搅拌,冰浴下30min 内加入DIC(1.36g),搅拌得活化溶液。新得溶液加入到上述固相反应瓶中,氮气保护下搅拌2h至用茚三酮检测偶联反应完全。抽干,滤饼经适量DMF洗涤,抽干。重复上述脱保护、偶联反应步骤,依次连接Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、 Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、 Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH。偶联反应结束后,抽干,滤饼经DMF洗涤,再经MeOH、DCM交替洗涤,抽干。真空干燥得到片段[1-12]肽树脂,直接用于下一步。
取0.10g肽树脂,投入1mL裂解液(TFA:EDT:水,90:5:5,体积比)中,室温搅拌3h。过滤,树脂用少量TFA洗涤,合并滤液,与15mL冰***混合沉降,离心,白色沉淀用***洗涤,抽干。真空干燥得到固体,经检测,纯度95%。
实施例二:片段一的合成
在固相反应瓶中依次加入2-CTC Resin(25.00g,取代度1.12mmol/g)、400mLDCM,溶胀后抽滤,得滤饼。依次加入Fmoc-Glu(OtBu)-OH(8.51g)、100mLDCM,氮气保护下搅拌,逐滴加入DIEA(约9.53g)。滴毕,搅拌反应2h。加入MeOH (25mL),继续搅拌30min。抽干,滤饼经MeOH、DCM交替洗涤,抽干,室温下真空干燥得接头树脂。经检测,取代度0.73mmol/g;
在固相反应瓶中依次加入上述树脂和200mLDCM,溶胀后抽干。加入100mL20%哌啶/DMF溶液,混合搅拌5分钟,抽干;再加入100mL20%哌啶/DMF溶液,混合搅拌15分钟,抽干。适量DMF洗涤滤饼,抽干。在另外一个干燥的反应瓶中依次Fmoc-Val-OH(18.32g)、HOBT(8.75g)、100mLDMF,搅拌,在冰浴下氮气保护下加入DIC(8.18g)得活化溶液。新得溶液在氮气保护下加入到上述固相反应瓶中,搅拌2h至茚三酮检测偶联反应完全。抽干,滤饼经DMF洗涤。重复脱保护、偶联反应步骤,依次连接Fmoc-Arg(pbf)-OH、
Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH。偶联反应结束,抽干,滤饼经DMF洗涤,再经MeOH、DCM交替洗涤,抽干,室温下真空干燥得到片段一肽树脂。
在反应瓶中依次加入上述肽树脂、500mL20%TFE/DCM,氮气鼓泡搅拌反应2h 后抽滤,适量DCM洗涤滤饼,收集滤液,30℃下减压浓缩去除溶剂。向残留物加入200mLDCM,溶解,加入冰***,析晶,离心,***洗涤,抽干,室温下干燥得片段一41.23g,收率91%,纯度89%。
实施例三:片段二的合成
在固相反应瓶中依次加入2-CTC Resin(25.00g,取代度1.12mmol/g)、400mLDCM,溶胀后抽干得滤饼。依次加入100mLDCM、Fmoc-Gly-OH(5.95g),氮气保护下搅拌,逐滴加入DIEA(9.53g)。滴毕,搅拌反应2h,加入MeOH(25mL),氮气鼓泡搅拌反应30min。抽干,滤饼经DCM、MeOH交替洗涤。抽干,室温下真空干燥得接头树脂。经检测,取代度0.74mmol/g。
200mL DCM溶胀上述物料,抽干。滤饼与100mL20%哌啶/DMF溶液混合,搅拌5分钟,抽干;再加入100mL20%哌啶/DMF溶液混合搅拌15分钟,抽干。适量DMF洗涤滤饼,抽干。反应瓶中加入400mLDMF搅拌,冰浴下30min内依次加入Fmoc-Leu-OH(19.08g)、HOBT(8.75g)、DIC(8.18g)。氮气保护下搅拌反应2h至茚三酮检测反应完全。抽干,肽树脂用DMF洗涤。重复脱保护、偶联反应步骤,依次连接Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、 Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH。偶联反应结束后,抽干,滤饼经适量DMF洗涤,再用适量DCM、MeOH交替洗涤,抽干。室温下真空干燥,得到片段二肽树脂。
向上述肽树脂加入500mL20%TFE/DCM,氮气下搅拌反应2h,抽滤,适量DCM 洗涤滤饼,收集滤液,室温下减压浓缩去除溶剂,残留物经200mLDCM溶解,加入冰***析晶,离心,***洗涤,抽干,室温下干燥得片段二40.96g,收率 95%,纯度90%。
实施例四:片段[1-22]肽树脂的合成
在固相反应瓶中将实施例一中所得到的肽树脂(13.65g),200mLDCM溶胀上述物料,抽干。滤饼与100mL20%哌啶/DMF溶液混合,搅拌5分钟,抽干;再加入100mL20%哌啶/DMF溶液,混合搅拌15分钟,抽干。滤饼经适量DMF洗涤,抽干待用。在另一干燥的反应瓶中,依次加入片段一(9.65g)、HOBT(2.96g)、 DMF(50mL)及DIC(3.00g),混合活化得溶液,然后加入到上述固相反应瓶中。氮气鼓泡下反应至茚三酮检测反应完全。加入30%乙酸酐/吡啶/DCM溶液 100mL搅拌1h,抽干。滤饼经适量DMF洗涤,抽干,直接用于下一步。
实施例五:特立帕肽树脂的合成
将实施例四中所得到的肽树脂,200mLDCM溶胀后,抽干。滤饼用100mL20%哌啶/DMF溶液混合,搅拌5分钟,抽干;再加入100mL20%哌啶/DMF溶液,搅拌15分钟,抽干。用适量DMF洗涤,抽干待用。在另一个干燥的反应瓶中依次加入片段二(13.26g)、HOBT(2.96g)、DMF(50mL)及DIC(3.00g),搅拌活化得溶液,然后加入到上述固相反应瓶中。反应至茚三酮检测反应完全。加入30%乙酸酐/吡啶/DCM溶液100mL搅拌1h,抽干。用适量DMF洗涤,抽干。滤饼与100mL20%哌啶/DMF溶液混合,搅拌5分钟,抽干;加入100mL20%哌啶/DMF溶液,混合搅拌15分钟,抽干。滤饼经适量DMF洗涤,再经适量DCM、 MeOH交替洗涤,抽干,真空干燥,得肽树脂25.00g,得肽树脂,直接用于下一步。
实施例六:特立帕肽粗品的合成
将实施例五所得的树脂粗品与150mL裂解剂(TFA:水:EDT,90:5:5,v/v) 混合,在25℃下裂解3小时至反应结束。过滤,滤液中加入适量异丙醚,沉降、离心、洗涤、分离,室温下真空干燥,得特立帕肽粗品12.25g,HPLC纯度75%,总收率85%。
实施例七:醋酸特立帕肽的制备
向水中依次加入三滴氨水、1.00g特立帕肽粗品,震荡溶解,经汉邦制备HPLC ***(波长为210nm,色谱柱为C8反相柱,20M乙酸铵溶液,pH3.0/乙腈为流动相)纯化,得纯度大于99.5%的特立帕肽精肽溶液。将精肽溶液采用制备HPLC ***(色谱柱为C18反相柱,0.2%醋酸/乙腈为流动相)转盐,收集目标组分,减压浓缩,冻干,得醋酸特立帕肽纯品0.55g,纯度为99.7%,纯化收率为55%,总收率46%;质谱(M+H)+=1373.5,Calculated:4117.5。
Claims (10)
1.一种特立帕肽的合成方法,包括如下步骤:
步骤一、按照主链C端至N端的氨基酸顺序,固相合成第1-12氨基酸的片段[1-12]肽树脂,所述的片段[1-12]肽树脂侧链上偶联有保护基;
步骤二、按照主链C端至N端的氨基酸顺序,固相合成第13-22氨基酸的肽树脂,切割树脂得片段一;
步骤三、按照主链C端至N端的氨基酸顺序,固相合成第23-34氨基酸的肽树脂,切割树脂得片段二;
步骤四、固相法将片段[1-12]肽树脂脱末端Fmoc后,与片段一偶联反应,得到片段[1-22]肽树脂;
步骤五、固相法将片段[1-22]肽树脂脱末端Fmoc后,与片段二偶联反应,得到特立帕肽树脂;
步骤六:将特立帕肽树脂在裂解剂的作用下进行裂解反应得到特立帕肽粗品;
步骤七:特立帕肽粗品经过纯化、成盐、冻干得到醋酸特立帕肽精肽。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的片段一、片段二的His、Asp、Gln、Lys、Arg、Trp、Glu、Ser、Asn上有保护基。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于所述的Asn、Gln的侧链保护基为
Trt;His的侧链保护基为Adoc、Boc、Mmt、Mtt或Trt;
Lys、Trp的侧链保护基为Boc或Trt;
Arg的侧链保护基为Boc或Pbf;
Glu的侧链保护基优选OtBu;
Ser的侧链保护基为TES、TMS、TBS、DHP、THP或tBu。
4.一种特立帕肽的合成方法,其特征在于包括如下步骤:
步骤一、将Fmoc-Phe-Wang Resin,加入固相反应器中,在脱保护剂的作用下脱Fmoc反应后与Fmoc-Asn(Trt)-OH在缩合剂的作用下进行偶联反应,然后重复所述的脱保护基反应和偶联反应,按照多肽序列依次连接如下氨基酸Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH及Fmoc-Trp(Boc)-OH,得到所述多肽片段[1-12]肽树脂;
步骤二、将2-CTC Resin与氨基酸Fmoc-Glu(OtBu)-OH在缩合剂的作用下偶联反应得接头树脂,将其进行Fomc脱保护基反应,然后采用逐一固相偶联反应的方式按照多肽序列依次偶联Fmoc-Val-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-His(Trt)-OH及Fmoc-Lys(Boc)-OH,重复偶联反应和脱保护基反应操作,直至合成得到片段一肽树脂,最后在裂解剂的作用下裂解树脂后得到片段一;
步骤三、将2-CTC Resin加入固相反应器中与氨基酸Fmoc-Gly-OH在缩合剂的作用下偶联反应得到接头树脂,将其进行Fomc脱保护基反应,然后采用逐一固相偶联反应的方式按照多肽序列依次偶联氨基酸Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH及Fmoc-Ser(tBu)-OH,重复偶联反应和脱保护基反应操作直至合成得到片段二肽树脂,最后在裂解剂的作用下裂解树脂后得到片段二;
步骤四、固相法将片段[1-12]肽树脂末端Fmoc进行脱保护基反应,与片段一在缩合剂的作用下偶联,得到片段[1-22]肽树脂;
步骤五、固相法将片段[1-22]肽树脂末端Fmoc进行脱保护基反应,与片段二在缩合剂的作用下偶联,得到特立帕肽树脂;
步骤六:将特立帕肽树脂在裂解剂的作用下进行裂解反应得到特立帕肽粗品;
步骤七:特立帕肽粗品经过纯化、成盐、冻干得到醋酸特立帕肽精肽。
5.根据权利要求3或4任意一项所述的方法,其特征在于所述的片段[1-12]肽树脂结构式为:
Fmoc-Trp12(Boc)-Leu11-Arg10(pbf)-Lys9(Boc)-Lys8(Boc)-Leu7-Gln6(Trt)-Asp5(OtBu)-Val4-His3(Trt)-Asn2(Trt)-Phe1-Wang树脂;
所述的片段一结构式为:
Fmoc-Lys22(Boc)-His21(Trt)-Leu20-Asn19(Trt)-Ser18(tBu)-Met17-Glu16(OtBu)-Arg15(pbf)-Val14-Glu13(OtBu)-OH;
所述的片段二结构式为:
Fmoc-Ser34(tBu)-Val33-Ser32(tBu)-Glu31(OtBu)-Ile30-Gln29(Trt)-Leu28-Met27-His26(Trt)-Asn25(Trt)-Leu24-Gly23-OH;
所述的片段[1-22]肽树脂其结构式为:
Fmoc-Lys22(Boc)-His21(Trt)-Leu20-Asn19(Trt)-Ser18(tBu)-Met17-Glu16(OtBu)-Arg15(pbf)-Val14-Glu13(OtBu)-Trp12(Boc)-Leu11-Arg10(pbf)-Lys9(Boc)-Lys8(Boc)-Leu7-Gln6(Trt)-Asp5(OtBu)-Val4-His3(Trt)-Asn2(Trt)-Phe1-Wang树脂;
所述的特立帕肽树脂其结构式为:
Ser34(tBu)-Val33-Ser32(tBu)-Glu31(OtBu)-Ile30-Gln29(Trt)-Leu28-Met27-His26(Trt)-Asn25(Trt)-Leu24-Gly23-Lys22(Boc)-His21(Trt)-Leu20-Asn19(Trt)-Ser18(tBu)-Met17-Glu16(OtBu)-Arg15(pbf)-Val14-Glu13(OtBu)-Trp12(Boc)-Leu11-Arg10(pbf)-Lys9(Boc)-Lys8(Boc)-Leu7-Gln6(Trt)-Asp5(OtBu)-Val4-His3(Trt)-Asn2(Trt)-Phe1-Wang树脂。
6.根据权利要求4或5任意一项所述的方法,其特征在于步骤一至步骤五的任意步骤中,所述的偶联反应是在缩合剂的作用下进行的,所述的缩合剂任意独立地选自DIC/HOBt、HBTU/HOBt/DIEA、PyBop/HOBt/DIEA中的一种或多种。
7.根据权利要求4或5所述的方法,其特征在于所述的脱保护基反应是在脱保护剂的作用下进行的,所述的脱保护剂选自Pip/DMF、NaOH/MeOH、TEA/DMF中的任意一种。
8.根据权利要求4或5任意一项所述的方法,其特征在于步骤二或步骤三的任意步骤中,所述的裂解剂选自三氟乙酸/二氯甲烷混合溶液或者三氟乙醇/二氯甲烷混合溶液。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于裂解剂体积为肽树脂质量的5~20倍。
10.根据权利要求4所述的方法,其特征在于所述的步骤六中,采用的裂解试剂采用三氟乙酸混合溶液。所述的三氟乙酸混合溶液的体积比为TFA:PhSMe:TIS:水=70~97:10~1:10~1:10~1;或者体积比为TFA:EDT:水=90~95:1~5:1~5;裂解溶剂体积为肽树脂质量的5~25倍。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811206844.6A CN111057139B (zh) | 2018-10-17 | 2018-10-17 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811206844.6A CN111057139B (zh) | 2018-10-17 | 2018-10-17 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111057139A true CN111057139A (zh) | 2020-04-24 |
CN111057139B CN111057139B (zh) | 2023-12-22 |
Family
ID=70296832
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811206844.6A Active CN111057139B (zh) | 2018-10-17 | 2018-10-17 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111057139B (zh) |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE4203040A1 (de) * | 1992-02-04 | 1993-08-05 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue parathormonfragmente, deren herstellung und diese enthaltende arzneimittel |
US6849710B1 (en) * | 1996-07-30 | 2005-02-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the synthesis of analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide |
CN102731643A (zh) * | 2012-06-26 | 2012-10-17 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 |
CN104017064A (zh) * | 2014-06-13 | 2014-09-03 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备特立帕肽的方法 |
CN104530218A (zh) * | 2015-01-07 | 2015-04-22 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特立帕肽的固相合成方法 |
CN104910269A (zh) * | 2015-06-02 | 2015-09-16 | 成都圣诺生物科技股份有限公司 | 一种合成特立帕肽的方法 |
CN105384809A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-09 | 济南康和医药科技有限公司 | 一种片段法固液结合制备特立帕肽的方法 |
US20170129935A1 (en) * | 2015-11-11 | 2017-05-11 | Richter-Helm Bio Tec Gmbh & Co. Kg | Method for purifying teriparatide |
CN107501408A (zh) * | 2017-09-22 | 2017-12-22 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
-
2018
- 2018-10-17 CN CN201811206844.6A patent/CN111057139B/zh active Active
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE4203040A1 (de) * | 1992-02-04 | 1993-08-05 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue parathormonfragmente, deren herstellung und diese enthaltende arzneimittel |
US6849710B1 (en) * | 1996-07-30 | 2005-02-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the synthesis of analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide |
CN102731643A (zh) * | 2012-06-26 | 2012-10-17 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 |
CN104017064A (zh) * | 2014-06-13 | 2014-09-03 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备特立帕肽的方法 |
CN104530218A (zh) * | 2015-01-07 | 2015-04-22 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特立帕肽的固相合成方法 |
CN104910269A (zh) * | 2015-06-02 | 2015-09-16 | 成都圣诺生物科技股份有限公司 | 一种合成特立帕肽的方法 |
US20170129935A1 (en) * | 2015-11-11 | 2017-05-11 | Richter-Helm Bio Tec Gmbh & Co. Kg | Method for purifying teriparatide |
CN105384809A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-09 | 济南康和医药科技有限公司 | 一种片段法固液结合制备特立帕肽的方法 |
CN107501408A (zh) * | 2017-09-22 | 2017-12-22 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
周建华等: "片段法合成抗骨质疏松多肽药物特立帕肽" * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN111057139B (zh) | 2023-12-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103497245B (zh) | 一种合成胸腺法新的方法 | |
CN106146648B (zh) | 一种甲状旁腺激素类似物的合成方法 | |
CN111087462B (zh) | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 | |
WO2020199461A1 (zh) | 一种多肽衍生化合物的合成方法 | |
CN104788546A (zh) | 一种含有24个氨基酸残基的线性直链肽的制备方法 | |
CN113801197A (zh) | 一种普卡那肽的制备方法 | |
CN110818790A (zh) | 一种替莫瑞林的制备方法 | |
CN110903352A (zh) | 一种西曲瑞克的制备方法 | |
KR20210102362A (ko) | 플레카나타이드의 개선된 제조 방법 | |
CN1552728B (zh) | 一种生长抑素的合成方法 | |
CN112062829A (zh) | 依降钙素的制备方法 | |
CN111057129B (zh) | 一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法及其试剂盒,以及普利卡那肽的制备方法 | |
CN110642936B (zh) | 一种制备特立帕肽的方法 | |
CN110615836B (zh) | 一种利拉鲁肽的固相合成方法 | |
CN110894227A (zh) | 一种利拉鲁肽的固相合成方法 | |
CN113956333B (zh) | 一种利那洛肽的合成和纯化方法 | |
CN111233980B (zh) | 一种戈舍瑞林的片段法合成方法 | |
CN111057139B (zh) | 一种制备特立帕肽的新工艺 | |
CN112175067B (zh) | 一种替度鲁肽的制备方法 | |
CN111944040B (zh) | 一种固相合成阿巴帕肽的方法 | |
CN103936848B (zh) | 胸腺肽α1的合成方法 | |
CN109293736B (zh) | 一种用于合成瑞林类药物的二肽 | |
CN110964097B (zh) | 一种固相片段法合成艾塞那肽 | |
CN113135988B (zh) | 一种胸腺肽β4的制备方法 | |
WO2022217395A1 (zh) | 一种高纯的人促肾上腺皮质激素或其类似物及其规模化制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |