CN110975001A - 壳聚糖-纤维素复合止血海绵及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医用材料技术领域,公开了一种壳聚糖‑纤维素复合止血海绵及制备方法和应用。其中制备方法包括如下步骤:(1)采用NaIO4氧化纤维素纳米晶制备二醛基纤维素;(2)将市售分子量为180000‑300000Da,脱乙酰度为80‑95%的脱乙酰壳聚糖和二醛基纤维素按照质量比为m壳聚糖∶m二醛基纤维素=0.2‑10混合制备所述的复合止血海绵。本发明的复合止血海绵具有凝血效果好和吸收能力强的优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物医用材料技术领域,具体涉及一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵及制备方法和应用。
背景技术
本发明对于背景技术的描述属于与本发明相关的相关技术,仅仅是用于说明和便于理解本发明的发明内容,不应理解为申请人明确认为或推定申请人认为是本发明在首次提出申请的申请日的现有技术。
创伤性出血是军事和平民伤亡的主要原因。据报道,大动脉出血造成50%的战场伤亡,在平民的临床环境中也造成31%的死亡率。及时止血对于减少失血,治疗出血创伤,提高救治生存率至关重要。
壳聚糖(chitosan,CS)是一种线性多糖,其结构式为β-(1→4)-2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖,可由世界上最丰富的天然聚合物之一甲壳素(Chitin)通过脱乙酰过程得到,是一种来源广泛、价格低廉的绿色天然聚合物,迄今为止在伤口敷料、药物传递、基因工程、组织工程等方面具有广泛的应用。壳聚糖在止血、抗菌活性,细胞和组织相容性,毒性,生物降解性等方面具有优良的性能,是代表性的止血材料之一。壳聚糖的主要止血机制是它带有一定量的正电荷,能够促进红细胞聚集并增加血小板粘附,从而达到止血的目的并能促进伤口愈合。
纤维素纳米晶是一种从天然纤维素中提取,一种植物性来源的有应用前景的天然材料,由β-1-4连接的D-脱水葡萄糖单元组成,产量巨大,成本低廉。由于其卓越的力学强度,特殊的表面化学性能和优异的生物学特性在作为生物医学材料方面受到广泛关注。
目前的止血海绵普遍存在凝血效果和吸液能力不理想的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵及制备方法和应用。本发明的复合止血海绵具有凝血效果好和吸液能力强的优点。
一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,包括如下步骤:
(1)采用NaIO4氧化纤维素纳米晶制备二醛基纤维素;
(2)将市售分子量为180000-300000Da,脱乙酰度为80-95%的脱乙酰壳聚糖和二醛基纤维素按照质量比为m壳聚糖:m二醛基纤维素=0.2-10混合制备所述的复合止血海绵。
进一步的,所述的步骤(1)具体包括如下步骤:
取偏高碘酸钠NaIO4加入到去离子水中,浓度为2.0wt%-5.0wt%,完全溶解后加入纤维素纳米晶,其中,mNaIO4:m纤维素纳米晶=0.8-1.6,避光条件下室温搅拌24h-72h,加入10mL乙二醇,反应0.5-1h,除去多余的NaIO4,得到NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液;将所述的NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液离心,底部得到凝胶,依次用去离子水、体积百分含量为50%乙醇溶液、无水乙醇、去离子水清洗,-20℃下冷冻,于冻干机中冷冻干燥,制得二醛基纤维素。
进一步的,所述的步骤(2)具体包括如下步骤:
取所述的二醛基纤维素配制成浓度为0.2wt%-20wt%的水溶液,冷却待用;取所述的脱乙酰壳聚糖粉末,溶于1%(v/v)乙酸溶液,配制成浓度0.5wt%-5wt%的壳聚糖溶液,按照质量比为m壳聚糖:m二醛基纤维素=0.2-10将二醛基纤维素溶液和壳聚糖溶液混合后,室温搅拌16h-24h,继续加入5%-10%壳聚糖质量的氰基硼氢化钠,搅拌2-4h,于透析袋中透析至pH值至6.6-7.2,冷冻干燥。
第二方面,本发明提供了一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵,所述的壳聚糖-纤维素复合止血海绵由上述的制备方法制备而得。
第三方面,本发明提供了一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵在止血敷料中的应用,所述的壳聚糖-纤维素复合止血海绵由上述的制备方法制备而得。
本发明实施例具有如下有益效果:
本发明的方法操作简便,且全程反应条件温和,所制的复合海绵为多孔结构,机械性能、凝血性能与液体吸收能力好。
所得止血海绵,通过真空冷冻干燥方法制得三维多孔结构,有良好的吸液性,有利于红细胞聚集,并加速促进血液凝固。
高脱乙酰度壳聚糖和纤维素以化学共价方式结合,既保留了壳聚糖作为止血材料的优良性能,又增加了二醛基纤维素力学性能好,亲水性好的优点,二者协同发挥作用,所获得的复合海绵在止血敷料方面的应用至关重要。
本申请实施例方案反应条件温和,反应在室温下水溶液中进行,仅其中一步使用弱酸作为溶剂介质;
多孔结构提高其液体吸收能力强,透气性好,更利于作为止血敷料;
较现有的静电吸附使两者物理结合的方式,Schiff base交联化学反应使两者共轭结合,稳定结构更有利于发挥协同的凝血性能,较单一壳聚糖或纤维素产品止血效果显著提高。
附图说明
图1为本发明壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法中复合海绵扫描电镜图。
图2为本发明壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法中血栓弹力仪TEG参数说明示意图。
图3为本发明壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法中复合海绵材料吸水后增重比率。
具体实施方式
下面结合实施例对本申请进行进一步的介绍。
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,在下述说明中,不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。不同实施例之间可以替换或者合并组合,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些实施例获得其他的实施方式。
本发明以纤维素与壳聚糖为基材,采用化学方法,首先利用NaIO4对纤维素进行选择性氧化,获得2,3位开环氧化的二醛基纤维素,醛基的存在与壳聚糖发生席夫碱Schiffbase交联反应,增强两者结合效果,同时通过真空冷冻干燥的方式获得的止血海绵为三维多孔结构,既提高壳聚糖的亲水性,能快速吸收水分,浓缩红细胞,促进红细胞聚集,从而加速凝血,增强止血效果,又可以一定程度上提升海绵的机械强度,有效克服壳聚糖粉末自身强度差,成型困难,不变使用等缺点。
一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,包括如下步骤:
(1)采用NaIO4氧化纤维素纳米晶制备二醛基纤维素;
(2)将所述的脱乙酰壳聚糖和二醛基纤维素按照质量比为m壳聚糖:m二醛基纤维素=0.2-10混合制备所述的复合止血海绵。
在本发明的一些实施例中,所述的步骤(1)具体包括如下步骤:
取偏高碘酸钠NaIO4加入到去离子水中,浓度为2.0wt%-5.0wt%,溶解完全后加入纤维素纳米晶,其中,mNaIo4:m纤维素纳米品=0.8-1.6,避光条件下搅拌24h-72h,加入除去多余的NaIO4,得到NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液;将所述的NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液离心,底部得到凝胶,依次用去离子水、体积百分含量为50%乙醇溶液、无水乙醇、去离子水清洗,-20℃下冷冻,于冻干机中冷冻干燥,制得二醛基纤维素。
在本发明的一些实施例中,所述的步骤(2)具体包括如下步骤:
取所述的二醛基纤维素配制成浓度为0.2wt%-20wt%的水溶液,冷却待用;取所述的市售分子量为180000-300000Da,脱乙酰度为80-95%的脱乙酰壳聚糖粉末,溶于1%(v/v)乙酸溶液,配制成浓度0.5wt%-5wt%的壳聚糖溶液,按照质量比为m壳聚糖:m二醛基纤维素=0.2-10将二醛基纤维素溶液和壳聚糖溶液混合后,室温搅拌16h-24h,继续加入5%-10%壳聚糖质量的氰基硼氢化钠,搅拌2-4h,于透析袋中透析至pH值至6.6-7.2,冷冻干燥。
一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵,所述的壳聚糖-纤维素复合止血海绵由上述的制备方法制备而得,所得止血海绵,形貌为多孔结构(图1),有良好的吸液性,有利于红细胞聚集,促进血液凝固。
本申请实施例方案反应条件温和,反应在室温下水溶液中进行,仅其中一步使用弱酸作为溶剂介质;
多孔结构提高其液体吸收能力强,透气性好,更利于作为止血敷料;
较现有的静电吸附使两者结合的方式,Schiff base交联反应使两者共轭结合,稳定结构更有利于发挥协同的凝血性能,较单一壳聚糖或纤维素产品止血效果显著提高。
实施例1
一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,包括如下步骤:
(1)二醛基纤维素:取一定量的偏高碘酸钠NaIO4加入到100mL去离子水中,溶解完全后加入相应比例的纤维素纳米晶CNC,mNaIo4:mCNC=1.6,避光条件下搅拌24h,加入10mL乙二醇,反应0.5-1h,除去多余的NaIO4,得到NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液;
(2)将所述步骤(1)得到的溶液离心,底部得到凝胶,依次用去离子水、50%乙醇溶液、无水乙醇、去离子水清洗,-20℃下冷冻,于冻干机中冷冻干燥,制得二醛基纤维素(DAC);
(3)取一定量的DAC,加入到水中,于100℃油浴条件下加热溶解,配置成DAC水溶液,冷却待用;
(4)复合海绵:取一定量市售分子量为180000Da,脱乙酰度为85%的壳聚糖粉末粉末,溶于1%(v/v)乙酸溶液,配置成浓度5wt%的壳聚糖溶液,按照相应的比例加入DAC水溶液,其质量比为mCS:mDAC=1。室温搅拌16h,继续加入少量氰基硼氢化钠,搅拌2-4h,所得溶液于透析袋中透析2-4天至pH值接近中性,倒入孔板或者平皿中冷冻,冷冻干燥。
实施例2
一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,包括如下步骤:
(1)二醛基纤维素:取一定量的偏高碘酸钠NaIO4加入到100mL去离子水中,溶解完全后加入相应比例的纤维素纳米晶CNC,mNaIO4:mCNC=1,避光条件下搅拌48h,加入10mL乙二醇,反应0.5-1h,除去多余的NaIO4,得到NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液;
(2)将所述步骤(1)得到的溶液离心,底部得到凝胶,依次用去离子水、50%乙醇溶液、无水乙醇、去离子水清洗,-20℃下冷冻,于冻干机中冷冻干燥,制得二醛基纤维素(DAC);
(3)取一定量的DAC,加入到水中,于100℃油浴条件下加热溶解,配置成DAC水溶液,冷却待用;
(4)复合海绵:取一定量的市售分子量为270000Da,脱乙酰度为90%的壳聚糖粉末,溶于1%(v/v)乙酸溶液,配置成浓度1wt%的壳聚糖溶液,按照相应的比例加入DAC水溶液,其质量比为mCS:mDAC=4。室温搅拌20h,继续加入少量氰基硼氢化钠,搅拌2-4h,所得溶液于透析袋中透析2-4天至pH值接近中性,倒入孔板或者平皿中冷冻,冷冻干燥。
实施例3
一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,包括如下步骤:
(1)二醛基纤维素:取一定量的偏高碘酸钠NaIO4加入到100mL去离子水中,溶解完全后加入相应比例的纤维素纳米晶CNC,mNaIo4:mCNC=1.3,避光条件下搅拌48h,加入10mL乙二醇,反应0.5-1h,除去多余的NaIO4,得到NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液;
(2)将所述步骤(1)得到的溶液离心,底部得到凝胶,依次用去离子水、50%乙醇溶液、无水乙醇、去离子水清洗,-20℃下冷冻,于冻干机中冷冻干燥,制得二醛基纤维素(DAC);
(3)取一定量的DAC,加入到水中,于100℃油浴条件下加热溶解,配置成DAC水溶液,冷却待用;
(4)复合海绵:取一定量的市售分子量为180000Da,脱乙酰度为85%的壳聚糖粉末,溶于1%(v/v)乙酸溶液,配置成浓度2wt%的壳聚糖溶液,按照相应的比例加入DAC水溶液,其质量比为mCS:mDAC=6。室温搅拌24h,继续加入少量氰基硼氢化钠,搅拌2-4h,所得溶液于透析袋中透析2-4天至pH值至6.6-7.2,倒入孔板或者平皿中冷冻,冷冻干燥。
实施例4
一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,包括如下步骤:
(1)二醛基纤维素:取一定量的偏高碘酸钠NaIO4加入到100mL去离子水中,溶解完全后加入相应比例的纤维素纳米晶CNC,mNaIO4:mCNC=1.3,避光条件下搅拌72h,加入10mL乙二醇,反应0.5-1h,除去多余的NaIO4,得到NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液;
(2)将所述步骤(1)得到的溶液离心,底部得到凝胶,依次用去离子水、50%乙醇溶液、无水乙醇、去离子水清洗,-20℃下冷冻,于冻干机中冷冻干燥,制得二醛基纤维素(DAC);
(3)取一定量的DAC,加入到水中,于100℃油浴条件下加热溶解,配置成DAC水溶液,冷却待用;
(4)复合海绵:取一定量市售分子量为300000Da,脱乙酰度为95%的壳聚糖粉末,溶于1%(v/v)乙酸溶液,配置成浓度1wt%的壳聚糖溶液,按照相应的比例加入DAC水溶液,其质量比为mCS:mDAC=2。室温搅拌24h,继续加入少量氰基硼氢化钠,搅拌2-4h,所得溶液于透析袋中透析2-4天至pH值至6.6-7.2,倒入孔板或者平皿中冷冻,冷冻干燥。
实施例5
一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,包括如下步骤:
(1)二醛基纤维素:取一定量的偏高碘酸钠NaIO4加入到100mL去离子水中,溶解完全后加入相应比例的纤维素纳米晶CNC,mNaIO4:mCNC=1.6,避光条件下搅拌72h,加入10mL乙二醇,反应0.5-1h,除去多余的NaIO4,得到NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液;
(2)将所述步骤(1)得到的溶液离心,底部得到凝胶,依次用去离子水、50%乙醇溶液、无水乙醇、去离子水清洗,-20℃下冷冻,于冻干机中冷冻干燥,制得二醛基纤维素(DAC);
(3)取一定量的DAC,加入到水中,于100℃油浴条件下加热溶解,配置成DAC水溶液,冷却待用;
(4)复合海绵:取一定量市售分子量为300000Da,脱乙酰度为85%的壳聚糖粉末,溶于1%(v/v)乙酸溶液,配置成浓度0.5wt%的壳聚糖溶液,按照相应的比例加入DAC水溶液,其质量比为mCS:mDAC=2。室温搅拌20h,继续加入少量氰基硼氢化钠(NaBH3CN),搅拌2-4h,所得溶液于透析袋中透析2-4天至pH值至6.6-7.2,倒入孔板或者平皿中冷冻,冷冻干燥。
凝血性能测试
利用血栓弹力图仪(TEG)对所获复合海绵的凝血效果进行评价,测试所得指标意义如图2所示(R:形成首个明显血栓的时间,K:血栓达到特定硬度的时间,A:血栓形成动力学,MA:形成血栓最大强度),具体测试方法下:
取一定量冻干之后的海绵,粉碎至60目过筛,加入1mL抗凝全血,涡旋混合均匀,从中取340μL混合液加入到测试杯中,并加入20μL 0.2mol/L的CaCl2溶液,测试,重复两组。CS与CNC冻干海绵的凝血效果做对比。不同实施例的TEG数据如表1所示。
表1
综上所述,本发明提供的方法制备纤维素纳米晶改性的壳聚糖复合海绵基材具备三维多孔的形貌且对比单独使用的壳聚糖基材凝血效果有显著提升,经过优化的配方,其形成血栓时间R值和达到特定硬度时间K值都显著减少,形成血栓的最大强度则显著提升。同时,所制止血海绵具有高效快速吸收水分的能力,在置于PBS缓冲溶液中10s之内,就可快速吸收水分,最高可达到自重约十五倍以上(图3),有利于聚集红细胞,从而加速血液凝固效果。
应当说明的是,上述实施例均可根据需要自由组合。以上介绍仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)采用NaIO4氧化纤维素纳米晶制备二醛基纤维素;
(2)将分子量为180000-300000Da,脱乙酰度为80-95%的壳聚糖和二醛基纤维素按照质量比为m壳聚糖∶m二醛基纤维素=0.2-10混合制备所述的复合止血海绵。
2.根据权利要求1所述的壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,其特征在于,所述的步骤(1)具体包括如下步骤:
取偏高碘酸钠NaIO4加入到去离子水中,浓度为2.0wt%-5.0wt%,溶解完全后加入纤维素纳米晶,其中,mNaIO4∶m纤维素纳米晶=0.8-1.6,避光条件下搅拌24h-72h,加入10mL乙二醇,反应0.5-1h,除去多余的NaIO4,得到NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液;将所述的NaIO4氧化的纤维素纳米晶分散液高速离心,底部得到凝胶状初产物,并依次用去离子水、体积百分含量为50%乙醇溶液、无水乙醇、去离子水清洗,-20℃下冷冻,于冻干机中冷冻干燥,制得二醛基纤维素。
3.根据权利要求1所述的壳聚糖-纤维素复合止血海绵的制备方法,其特征在于,所述的步骤(2)具体包括如下步骤:
取所述的二醛基纤维素配制成浓度为0.2wt%-20wt%的水溶液;取所述的脱乙酰壳聚糖粉末,溶于体积百分含量为1%乙酸溶液,配制成浓度为0.5wt%-5wt%的壳聚糖溶液,按照质量比为m壳聚糖∶m二醛基纤维素=0.2-10将二醛基纤维素溶液和壳聚糖溶液混合后,室温搅拌16h-24h,继续加入5%-10%壳聚糖质量的氰基硼氢化钠,搅拌2-4h,于透析袋中透析至pH值至6.6-7.2,冷冻干燥。
4.一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵,其特征在于,所述的壳聚糖-纤维素复合止血海绵由权利要求1-3任一项所述的制备方法制备而得。
5.一种壳聚糖-纤维素复合止血海绵在止血敷料中的应用,其特征在于,所述的壳聚糖-纤维素复合止血海绵由权利要求1-3任一项所述的制备方法制备而得。
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