CN110927311A - 一种罗布麻叶药材uplc特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法 - Google Patents
一种罗布麻叶药材uplc特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法及黄酮类成分含量测定，所述的罗布麻叶药材UPLC特征图谱的建立方法包含如下步骤：（1）精密称取罗布麻叶药材粉末，制备得到罗布麻叶药材供试品溶液；（2）将罗布麻叶药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到罗布麻叶药材UPLC特征图谱。本发明建立了罗布麻叶药材UPLC特征图谱，通过对照品峰指认确定了7个共有峰成分，充分展示了罗布麻叶药材的化学成分特征；本发明测定了罗布麻叶药材的金丝桃苷和异槲皮苷含量，进行了快速定性及定量分析。该方法为罗布麻药材的质量评价和控制提供了较为全面、***、有效的快速评价方法。
Description
技术领域
本发明涉及中药材检测技术领域，具体公开了一种罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法。
背景技术
罗布麻叶为夹竹桃科植物罗布麻Apocynum venetum L.的干燥叶。夏季采收，除去杂质，干燥。具有平肝安神，清热利水的功效，可用于治疗肝阳眩晕、心悸失眠、浮肿尿少。罗布麻叶中主要含黄酮类、鞣质、酸类、脂肪酸醇酯、醇类、甾体类、糖类、氨基酸类、矿物质元素、挥发油等化学成分。其中黄酮类为罗布麻叶的主要活性成分，具有降血压、降血脂、保肝、抗抑郁、抗氧化等功效，具有较高的开发利用价值。
《中国药典》2015版一部仅收载了罗布麻叶金丝桃苷的含量测定，难以全面反映其内在质量。由于中药的成分复杂，有效成分又多随产地、来源、采收季节等情况变化而变化，因此，采用特征图谱技术全面反映药材的整体特征，并进一步与其活性相关联，对于完善目前的质量控制方法，保证临床用药的安全有效是十分必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法，该方法采用UPLC法建立罗布麻叶药材的特征图谱，其同时测定其黄酮类成分含量，以有效控制罗布麻叶药材的整体质量，保证产品的有效性和安全性。
本发明所要解决的上述技术问题，通过如下技术方案予以实现：
一种罗布麻叶药材的UPLC特征图谱的构建方法，其包含如下步骤：
（1）精密称取罗布麻叶药材粉末，制备得到罗布麻叶药材供试品溶液；
（2）将罗布麻叶药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到罗布麻叶药材UPLC特征图谱。
作为一种优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05~0.15％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为320~400nm，流速为0.25~0.35ml/min，柱温为30~40℃，进样量为0.5~1.5ul。
作为一种最优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为360nm，流速为0.3ml/min，柱温为35℃，进样量为1ul。
作为一种优选方案，梯度洗脱条件为：0~7min，流动相A的体积分数变化为6%~12%，流动相B的体积分数变化为94%~88%；7~11min，流动相A的体积分数变化为12%~13%，流动相B的体积分数变化为88%~87%；11~17min，流动相A的体积分数变化为13%~15%，流动相B的体积分数变化为87%~85%；17~20min，流动相A的体积分数变化为15%~19%，流动相B的体积分数变化为85%~81%；20~25min，流动相A的体积分数变化为19%~30%，流动相B的体积分数变化为81%~70%；25~28min，流动相A的体积分数变化为30~60%，流动相B的体积分数变化为70%~40%；28~33min，流动相A的体积分数变化为60%~75%，流动相B的体积分数变化为40%~25%。
作为一种优选方案，所述的供试品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入50%~90%甲醇25~100ml，称定重量，加热回流60~120分钟，放冷，再称定重量，用50%~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
作为一种最优选方案，所述的供试品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
本发明还提供了一种罗布麻叶药材中黄酮类成分含量测定方法，包括如下步骤：
（1）吸取对照品溶液和待测罗布麻叶药材样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定相应峰面积；
（2）通过外标法计算，即得。
作为一种优选方案，所述黄酮类成分为金丝桃苷、异槲皮苷。
作为一种优选方案，所述对照品溶液通过如下方法制备得到：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷80~120μg和异槲皮苷90~130μg的混合溶液，摇匀，即得。
作为一种最优选方案，所述对照品溶液通过如下方法制备得到：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷100.6889μg和异槲皮苷107.3574μg的混合溶液，摇匀，即得。
作为一种优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05~0.15％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为320~400nm，流速为0.25~0.35ml/min，柱温为30~40℃，进样量为0.5~1.5ul。
作为一种最优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为360nm，流速为0.3ml/min，柱温为35℃，进样量为1ul。
作为一种优选方案，梯度洗脱条件为：0~7min，流动相A的体积分数变化为6%~12%，流动相B的体积分数变化为94%~88%；7~11min，流动相A的体积分数变化为12%~13%，流动相B的体积分数变化为88%~87%；11~17min，流动相A的体积分数变化为13%~15%，流动相B的体积分数变化为87%~85%；17~20min，流动相A的体积分数变化为15%~19%，流动相B的体积分数变化为85%~81%；20~25min，流动相A的体积分数变化为19%~30%，流动相B的体积分数变化为81%~70%；25~28min，流动相A的体积分数变化为30~60%，流动相B的体积分数变化为70%~40%；28~33min，流动相A的体积分数变化为60%~75%，流动相B的体积分数变化为40%~25%。
作为一种优选方案，所述的待测罗布麻叶药材样品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入50%~90%甲醇25~100ml，称定重量，加热回流60~120分钟，放冷，再称定重量，用50%~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
作为一种最优选方案，所述的待测罗布麻叶药材样品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
有益效果：（1）本发明建立了罗布麻叶药材UPLC特征图谱，通过对照品峰指认确定了7个共有峰成分，充分展示了罗布麻叶药材的化学成分特征；（2）本发明测定了罗布麻叶药材的金丝桃苷和异槲皮苷含量，进行了快速定性及定量分析。该方法为罗布麻药材的质量评价和控制提供了较为全面、***、有效的快速评价方法；（3）本发明构建的特征图谱全面的反应样品的特征峰信息，且方法稳定，精密度高，重现性较好。
附图说明
图1为洗脱条件1下的特征图谱。
图2为洗脱条件2下的特征图谱。
图3为16批罗布麻叶药材UPLC图谱叠加图。
图4为罗布麻叶药材UPLC特征图谱。
图5为罗布麻叶药材色谱峰指认的特征图谱。
图中标记：峰1：新绿原酸；峰2：绿原酸；峰3：隐绿原酸；峰4（S）：金丝桃苷；峰5：异槲皮苷；峰6：槲皮素；峰7：山奈酚。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
主要仪器、试剂、试药与来源
主要仪器：Waters H-Class型超高液相色谱仪、Thermo Vanquish型超高效液相色谱仪；XP26百万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司)；ME204E型万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司)；千分之一天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），KQ500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HWS28型恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）；Milli-QDirect 型超纯水***(默克股份有限公司)。
主要试剂：乙腈（德国merck公司，色谱纯）；甲醇（西陇科学股份有限公司，分析纯）；乙醇（西陇科学股份有限公司，分析纯）；磷酸（天津科密欧化学试剂有限公司，色谱纯）；甲酸（天津科密欧化学试剂有限公司，色谱纯）；水为实验室自制水。
主要试药：金丝桃苷对照品(含量：93.3%)；异槲皮苷对照品(含量：92.9%)；对照品均由中国食品药品检定研究院提供；16批罗布麻叶药材信息详见表1。
实施例1
罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建
1.试验方法
1.1罗布麻叶药材供试品溶液的配制：取罗布麻叶药材粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
1.2对照品溶液：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷100.6889μg和异槲皮苷107.3574μg的混合溶液，摇匀，即得。
1.3色谱条件：以Waters CORTECS UPLC T3（2.1×100mm，1.6μm）；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱条件如下表2；检测波长为360nm，流速为0.3mL/min，柱温为35℃。
表2 梯度洗脱流动相配比
2.供试品溶液制备方法考察
2.1提取溶媒考察
取罗布麻叶药材（S1）适量，取0.5g，精密称定，平行6组，每组2份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇各50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表3。
综合考虑各溶剂的提取能力、色谱峰峰形、峰面积/称样量的值和溶剂效应等，最终采用70％甲醇作为提取溶剂。
表3不同提取溶媒比较
2.2提取方式考察
取罗布麻叶药材（S1）适量，取0.5g，平行两份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟、加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表4。
通过对比超声和回流发现，回流提取时总峰面积/称样量较大，故选择加热回流作为提取方式。
表4 不同提取方式比较
2.3提取时间考察
取罗布麻叶药材（S1）适量，取0.5g，平行三份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟、60分钟、90分钟、120分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表5。
通过对比不同提取时间对罗布麻叶药材特征图谱影响发现，随着时间的增加总峰面积/称样量逐渐增加，但90分钟和120分钟差异不大，为节省时间，故选择加热回流90分钟。
表5 不同提取时间比较
2.4溶媒用量考察
取罗布麻叶药材（S1）适量，取0.5g，精密称定，平行3组，每组2份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入70%甲醇25ml、50ml、100ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。结果见表6。
通过对比溶媒用量的总峰面积/称样量体积，可发现不同提取溶剂用量，色谱图的色谱峰数目与色谱峰峰型一致，色谱图总面积与称样量比值基本一致，说明提取溶剂用量对其影响不大，为保证提取完全，故选择溶剂用量为50ml。
表6 不同溶媒用量比较
根据上述实验结果，供试品的制备方法为：取罗布麻叶药材粉末，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.色谱条件的优化
3.1色谱柱的选择
经比较发现，Waters CORTECS UPLC T3(2.1×100mm，1.6μm)柱分离效果最好，峰型更好，因此，选择Waters CORTECS UPLC T3(2.1×100mm，1.6μm)为色谱柱。
3.2检测波长的选择
采用PDA检测器对样品进行全波长扫描，发现在360nm处基线稳定，峰信息量较大，色谱图基线平稳，各峰峰面积适中，因此，检测波长确定为360nm。
3.3流动相的选择
考察了流动相A为甲醇、乙腈；流动相B为0.1%磷酸、0.1%甲酸、0.1%乙酸以及酸的浓度（0.05%、0.1%、0.2%）时对色谱峰的影响，结果以乙腈（A）-0.1%磷酸（B）为流动相时，色谱峰型较好且分离度较佳。
3.4洗脱条件的优化
洗脱条件1：
以Waters CORTECS UPLC T3色谱柱（2.1×100mm，1.6μm）；流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸水溶液，按下表7中的规定进行梯度洗脱；流速：0.3ml/min；柱温：35℃，图谱见图1。
表7 梯度洗脱表
洗脱条件2：
以Waters CORTECS UPLC T3色谱柱（2.1×100mm，1.6μm）；流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸水溶液，按下表8中的规定进行梯度洗脱；流速：0.3ml/min；柱温：35℃，图谱见图2。
表8 梯度洗脱表
结果显示：洗脱条件1中各峰较紧凑，峰纯度没有达到要求，且分离不合格。洗脱条件2各色谱峰分离效果较好，并且峰纯度也符合要求，故选择优化条件2进行实验。
3.5流速的选择
在拟定的实验条件基础上，分别对流速为0.25mL/min、0.3mL/min、0.35mL/min时进行了考察，结果流速为0.3ml/min时，各色谱峰峰型、分离度较好。
3.6柱温的选择
在拟定的实验条件基础上，分别对柱温为30℃、35℃、40℃时进行考察。结果表明柱温为35℃时，各色谱峰峰型、分离度较好。
4.方法学考察
4.1精密度试验 取罗布麻叶药材（批号：S1）供试品溶液，在规定的色谱条件下连续进样6次，考察共有峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，所得共有峰的相对峰面积与相对保留时间RSD<2%，表明仪器精密度良好。
4.2稳定性试验 取罗布麻叶药材（批号：S1）供试品溶液，在规定的色谱条件下，分别于0、2、4、8、12、24h进样测定，考察共有峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，并计算RSD值。所得共有峰的相对峰面积与相对保留时间RSD<3%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
4.3重复性试验 取罗布麻叶药材（批号：S1），按照供试品制备方法平行制备6份供试品溶液，按上述的色谱条件，进样测定，考察共有峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，并计算RSD值。所得共有峰的相对峰面积RSD<1%，相对保留时间RSD<3%，表明该方法重复性良好。
5.罗布麻叶药材特征图谱的建立
取16批罗布麻叶药材样品，制备供试品溶液，在规定色谱条件下进样测定，进样1μL，记录UPLC图谱。将图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价***”进行数据进行数据匹配，建立罗布麻叶药材的特征图谱，叠加图见附图3，生成的共有模式见附图4。
标示出罗布麻叶药材色谱图中的7个共有峰，以4号峰为参照峰S，计算各特征峰相对保留时间RSD值。结果表明，样品各色谱图共有峰的相对保留时间RSD值均小于3.0%；而相对峰面积的RSD值相差较大，见表9、表10。
表9 16批罗布麻叶药材特征图谱相对保留时间
表10 16批罗布麻叶药材特征图谱相对峰面积
分别计算16批罗布麻叶药材样品的相似度，见表11，16批罗布麻叶药材相似度均大于0.90，说明罗布麻叶药材化学成分一致性较好，质量比较稳定。
表11 16批罗布麻叶药材相似度
6.特征图谱峰指认：在规定色谱条件下，分别对供试品溶液和对照品溶液进行检测。通过化合物的色谱峰保留时间及与对照品进行比对，共确定了7个化合物，分别为新绿原酸（峰1）、绿原酸（峰2）、隐绿原酸（峰3）、金丝桃苷（峰4）、异槲皮苷（峰5）、槲皮素（峰6）、山奈酚（峰7）。供试品溶液与7个对照品溶液色谱峰叠加图，见图5。
实施例2
罗布麻叶药材中黄酮类成分含量测定，测量步骤如下：
（1）吸取对照品溶液和待测罗布麻叶药材样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定相应峰面积；
（2）通过外标法计算，即得。
1.色谱条件：以Waters CORTECS UPLC T3（2.1×100mm，1.6μm）；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱条件如表12；检测波长为360nm，流速为0.3mL/min，柱温为35℃。
表12 梯度洗脱条件
2.待测罗布麻叶药材样品溶液制备方法：取罗布麻叶药材粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.对照品溶液：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷100.6889μg和异槲皮苷107.3574μg的混合溶液，摇匀，即得。
4.方法学考察
4.1精密度：分别精密吸取同一待测罗布麻叶药材样品溶液1μl注入液相色谱仪，重复进样6次，记录峰面积。计算金丝桃苷峰面积RSD%为2.08%、异槲皮苷峰面积RSD%为2.09%，表明仪器精密度良好。
4.2线性关系考察：分别精密称取金丝桃苷、异槲皮苷对照品6.325mg、8.153mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，作罗布麻叶药材线性母液。精密量取罗布麻叶药材线性母液0.25、0.5、1、2、4ml置10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，即得罗布麻叶药材线性混合对照品溶液。精密吸取混合上述混合对照品溶液1μl，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以各组分峰面积（Y）和对照品浓度（X）进行回归处理，得各组分回归方程及线性范围，结果见表13。
表13 罗布麻叶药材中6个成分的线性关系考察结果
4.3重复性考察 ：取同一批罗布麻叶药材（批号：S1），按照待测罗布麻叶药材样品溶液平行制备6份待测罗布麻叶药材样品溶液，按照上述色谱条件进行平行测定，计算金丝桃苷含量RSD为0.86%、异槲皮苷含量RSD为0.72%，表明本法重复性良好。
4.4稳定性考察：精密吸取同一待测罗布麻叶药材样品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h后进样，测定峰面积，计算金丝桃苷峰面积RSD为1.57%、异槲皮苷峰面积RSD为1.55%，表明仪器精密度良好。
4.5加样回收率：精密称取已知含量的罗布麻叶药材（批号：S1）共9份，分别精密加入一定量的对照品溶液，按照待测罗布麻叶药材样品溶液的制备方法及色谱条件测定，计算金丝桃苷、异槲皮苷的回收率，结果表明加样回收率良好，见表15。
表15 方法学验证结果汇总表
5.样品测定：将16批罗布麻叶药材制备待测罗布麻叶药材样品溶液在规定色谱条件下测定，通过外标法计算16批罗布麻叶药材中金丝桃苷和异槲皮苷的含量，结果见表15。
表15 16批罗布麻叶药材含量测定结果
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：
（1）精密称取罗布麻叶药材粉末，制备得到罗布麻叶药材供试品溶液；
（2）将罗布麻叶药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到罗布麻叶药材UPLC特征图谱。
2.根据权利要求1所述的罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05~0.15％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为320~400nm，流速为0.25~0.35ml/min，柱温为30~40℃，进样量为0.5~1.5 ul。
3.根据权利要求2所述的罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，梯度洗脱条件为：0~7min，流动相A的体积分数变化为6%~12%，流动相B的体积分数变化为94%~88%；7~11min，流动相A的体积分数变化为12%~13%，流动相B的体积分数变化为88%~87%；11~17min，流动相A的体积分数变化为13%~15%，流动相B的体积分数变化为87%~85%；17~20min，流动相A的体积分数变化为15%~19%，流动相B的体积分数变化为85%~81%；20~25min，流动相A的体积分数变化为19%~30%，流动相B的体积分数变化为81%~70%；25~28min，流动相A的体积分数变化为30~60%，流动相B的体积分数变化为70%~40%；28~33min，流动相A的体积分数变化为60%~75%，流动相B的体积分数变化为40%~25%。
4.根据权利要求1所述的罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的供试品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入50%~90%甲醇25~100ml，称定重量，加热回流60~120分钟，放冷，再称定重量，用50%~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.一种罗布麻叶药材中黄酮类成分含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）吸取对照品溶液和待测罗布麻叶药材样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定相应峰面积；
（2）通过外标法计算，即得。
6.根据权利要求5所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，所述黄酮类成分为金丝桃苷、异槲皮苷。
7.根据权利要求5所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分含量测定方法，其特征在于，所述对照品溶液通过如下方法制备得到：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷80~120μg和异槲皮苷90~130μg的混合溶液，摇匀，即得。
8.根据权利要求5所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05~0.15％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为320~400nm，流速为0.25~0.35ml/min，柱温为30~40℃，进样量为0.5~1.5 ul。
9.根据权利要求8所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，梯度洗脱条件为：0~7min，流动相A的体积分数变化为6%~12%，流动相B的体积分数变化为94%~88%；7~11min，流动相A的体积分数变化为12%~13%，流动相B的体积分数变化为88%~87%；11~17min，流动相A的体积分数变化为13%~15%，流动相B的体积分数变化为87%~85%；17~20min，流动相A的体积分数变化为15%~19%，流动相B的体积分数变化为85%~81%；20~25min，流动相A的体积分数变化为19%~30%，流动相B的体积分数变化为81%~70%；25~28min，流动相A的体积分数变化为30~60%，流动相B的体积分数变化为70%~40%；28~33min，流动相A的体积分数变化为60%~75%，流动相B的体积分数变化为40%~25%。
10.根据权利要求5所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，所述的待测罗布麻叶药材样品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入50%~90%甲醇25~100ml，称定重量，加热回流60~120分钟，放冷，再称定重量，用50%~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
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Denomination of invention: A method for constructing a UPLC characteristic map and determining the content of flavonoids in Apocynum venetum leaves Effective date of registration: 20231225 Granted publication date: 20220401 Pledgee: Bank of China Limited by Share Ltd. Foshan branch Pledgor: GUANGDONG YIFANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2023980073969 |