CN110882385B - 抗pd-1抗体在***中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抗PD‑1抗体在***中的用途。本发明还涉及用于检测外周血中CD8+T细胞和/或NK细胞的状态的试剂或用于检测EMSY基因的试剂在预测肿瘤病人对抗PD‑1抗体和/或其抗原结合片段治疗的效果的检测试剂盒中的用途。

Description

抗PD-1抗体在***中的用途

技术领域

本发明涉及抗PD-1抗体在***中的用途。具体而言，本发明涉及抗PD-1抗体在治疗实体瘤，尤其是黑色素瘤中的用途；以及抗PD-1抗体在制备治疗实体瘤，尤其是黑色素瘤的药物中的用途；以及利用生物标记物预测抗PD-1抗体在治疗实体瘤中的疗效的方法；以及包含该抗PD-1抗体的组合疗法或组合物在治疗实体瘤中的用途。

背景技术

免疫逃逸是癌症的特征之一。Ahmadzadeh,M.等，Blood,114:1537-44中公开了肿瘤特异性T淋巴细胞常存在于肿瘤微环境、引流***和外周血中，但由于肿瘤微环境中存在的免疫抑制机制网络，其通常无法控制肿瘤的进展。CD8⁺肿瘤浸润T淋巴细胞(TIL)通常表达活化诱导的抑制受体，包括CTLA-4和PD-1，而肿瘤细胞经常表达免疫抑制配体，包括PD-1配体1(PD-L1，也叫B7-H1或CD274)，该配体抑制T细胞激活和效应功能。在抑制机制中，PD-1及其配体已成为肿瘤细胞利用其抑制肿瘤微环境中激活的T细胞的重要途径。

程序性死亡受体1(PD-1)在免疫调节及周边耐受性维持中起重要作用。PD-1主要在激活的T细胞和B细胞中表达，功能是抑制淋巴细胞的激活，这是免疫***的一种正常的防治免疫过激的外周组织耐受机制。但是，在肿瘤微环境中浸润的活化T细胞高表达PD-1分子，活化白细胞分泌的炎症因子会诱导肿瘤细胞高表达PD-1的配体PD-L1和PD-L2，导致肿瘤微环境中活化T细胞PD-1通路持续激活，T细胞功能被抑制，无法杀伤肿瘤细胞。治疗型PD-1抗体可以阻断这一通路，部分恢复T细胞的功能，使活化T细胞能够继续杀伤肿瘤细胞。

近十年来，PD-1/PD-L1通路阻断已被证明是在各种癌症适应症中诱导持久抗肿瘤应答的有效途径。阻断PD/PD-L1通路的单克隆抗体(mAbs)可以增强肿瘤特异性T细胞的活化和效应功能，减轻肿瘤负担，提高生存率。2014年至2017年之间，FDA已经批准了2款抗-PD1单克隆抗体(nivolumab)和3款抗-PD-L1单克隆抗体(atezolizumab、avelumab和durvalumab)用于治疗人类肿瘤。黑色素瘤是Nivolumab和Pembrolizumab在2014首先获批的适应症。

黑色素瘤长期以来被认为是一种免疫原性癌症，因为经常观察到淋巴细胞浸润到肿瘤中，以及对高剂量IL-2免疫治疗的临床反应。从机制上讲，在西方人群中，诱导DNA损伤相关的慢性紫外线辐射暴露是导致黑色素瘤的主要原因。慢性紫外线辐射晒伤(CSD)黑色素瘤占美国和其他西方国家皮肤黑色素瘤的95％。相比之下，肢端雀斑样黑色素瘤(ALM)(～50％)和黏膜黑色素瘤(MM)(～20％)则是在亚洲人群中最常见的两个黑色素瘤亚群，这个发现由Chi,Z.等，BMC Cancer(2011),11:85中公开。Furney,S.J.等，Pigment CellMelanoma Res(2014),27:835-8中公开了ALM和MM都与慢性紫外线暴露无关，携带更少的DNA突变。Cho,J.等，Invest New Drugs(2016),34:677-84的回顾性研究表明，与CSD黑色素瘤相比，免疫疗法治疗ALM和MM的效果较差。因此，免疫疗法，比如抗PD-1抗体在治疗黑色素瘤，尤其是在治疗亚洲人群中常发的粘膜型和肢端型黑色素瘤中的疗效存在不确定性，以及怎样进一步提高其治疗效果，是本领域急需解决的技术问题。

发明内容

本发明一方面提供一种治疗癌症患者的方法，其包含向所述患者施用治疗有效量的抗PD-1抗体和/或其抗原结合片段和任选的除抗PD-1抗体和/或其抗原结合片段外的其他抗癌剂。

本发明第二方面提供抗PD-1抗体和/或其抗原结合片段和任选的除抗PD-1抗体和/或其抗原结合片段外的其他抗癌剂在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

在一个或多个实施方式中，本发明所述的其他抗癌剂为小分子靶向抗癌剂。在一个实施方式中，本发明所述的其他抗癌剂选自CDK4/6抑制剂，FGF/FGFR抑制剂，VEGFR抑制剂和PARP抑制剂。

在一个或多个实施方案中，所述药物含有抗PD-1抗体和CDK4/6抑制剂。在一个或多个实施方案中，所述药物含有抗PD-1抗体和FGF/FGFR抑制剂。在一个或多个实施方案中，所述药物含有抗PD-1抗体和VEGFR抑制剂。在一个或多个实施方案中，所述药物含有抗PD-1抗体和PARP抑制剂。

在一个或多个实施方式中，本发明提供抗PD-1抗体在用于制备与CDK4/6抑制剂，FGF/FGFR抑制剂，VEGFR抑制剂或PARP抑制剂组合用于治疗癌症患者的药物中的用途；以及提供了CDK4/6抑制剂；FGF/FGFR抑制剂，VEGFR抑制剂或PARP抑制剂在用于制备与抗PD-1抗体组合用于治疗癌症患者的药物中的用途。

在一个或多个实施方式中，本发明提供抗PD-1抗体与CDK4/6抑制剂，FGF/FGFR抑制剂，VEGFR抑制剂或PARP抑制剂组合的用途，其用于制备治疗癌症患者的药物。

在一个或多个实施方案中，本发明所述癌症为实体瘤。

在一个或多个实施方案中，所述癌症患者外周血中激活的CD8⁺T细胞在外周血总CD8+T细胞中的百分比≥65％。在一个或多个实施方案中，所述癌症患者外周血中NK细胞在外周血单核细胞中的百分比≥26％。在一个或多个实施方案中，所述癌症患者外周血中激活的CD8⁺T细胞在外周血总CD8+T细胞中的百分比≥65％，且其外周血中NK细胞在外周血单核细胞中的百分比≥26％。在一个或多个实施方案中，所述NK细胞为CD3^-CD16⁺CD54⁺NK细胞。

在一个或多个实施方案中，所述癌症患者的肿瘤组织中检出EMSY基因突变。

在一些优选实施方式中，所述的实体瘤包含但不局限于泌尿道癌症、膀胱癌、乳腺癌、肾细胞癌、淋巴瘤、头/颈鳞状细胞癌、肺癌、肝癌、胆管癌、胃癌、食管癌、肠癌、胰腺癌、神经内分泌瘤、黑色素瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***或***癌。

在一个或多个优选实施方式中，所述的癌症是黑色素瘤。在一个或多个优选的实施方式中，所述的癌症是粘膜黑色素瘤。在一个或多个优选的实施方式中，所述的癌症是肢端黑色素瘤。

在一个或多个实施方案中，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的抗PD-1抗体和/或其抗原结合片段，所述患者患有粘膜黑色素瘤或肢端黑色素瘤。

在一个或多个实施方案中，所述用途为抗PD-1抗体和/或其抗原结合片段在制备用于治疗粘膜黑色素瘤或肢端黑色素瘤的药物中的用途。

在某些实施方式中，所述个体已经进行了预先治疗。在某些实施方式中，所述个体已经经过标准全身治疗。在一个或多个优选的实施方式中，所述的标准全身治疗为化疗。在某些实施方式中，所述个体无自身免疫性疾病史或持续感染史。在某些实施方式中，所述癌症为黑色素瘤。在其他实施方式中，所述的黑色素瘤是晚期、转移性和/或难治性黑色素瘤。在一些实施方式中，单独施用抗PD-1抗体或其抗原结合片段，或与CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、VEGFR抑制剂和/或PARP抑制剂组合施用抗PD-1抗体，以诱导所述个体中持久的临床反应。

在某些实施方式中，单独施用抗PD-1抗体或其抗原结合片段，或与CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、VEGFR抑制剂和/或PARP抑制剂组合施用抗PD-1抗体导致肿瘤组织中或肿瘤中的T细胞浸润增加。在一些实施方式中，所述T细胞浸润增加的特征在于激活的CD8⁺T细胞在肿瘤组织或肿瘤中的浸润增加。在一些实施方式中，单独施用抗PD-1抗体或其抗原结合片段，或与CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、VEGFR抑制剂和/或PARP抑制剂组合施用抗PD-1抗体导致T细胞增殖增加。

在一个或多个实施方案中，在包括单独施用抗PD-1抗体或其抗原结合片段，或与CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、VEGFR抑制剂和/或PARP抑制剂组合施用抗PD-1抗体的治疗中，抗PD-1抗体治疗有效剂量的范围为约0.1至约10.0mg/kg，或240mg固定剂量，约每2-6周静脉输注一次。在一些实施方式中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段以约1mg/kg，3mg/kg，10mg/kg或240mg固定剂量施用，每2-4周一次。

本发明第三方面提供用于治疗患有癌症的个体的试剂盒，所述试剂盒包括：(a)特异性结合并抑制PD-1的单抗或其抗原结合片段；和任选的(b)靶向CDK4/6、FGF/FGFR、VEGFR、或PARP的一种或多种抑制剂；(c)单独使用抗PD-1抗体或组合使用抗PD-1抗体和任选的靶向CDK4/6、FGF/FGFR、VEGFR、或PARP的一种或多种抑制剂用以治疗个体癌症的说明书。作为一种优选方式，所述的癌症为黑色素瘤。作为更进一步的优选方式，所述的癌症是肢端黑色素瘤；作为另一更进一步的优选方式，所述的癌症为粘膜黑色素瘤。

本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒中，所述抗PD-1抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述抗PD-1抗体特异性结合PD-1，阻断PD-L1或PD-L2与PD-1结合。在某些实施方案中，所述抗PD-1抗体特异性结合PD-L1或/和PD-L2，阻断PD-L1和/或PD-L2与PD-1的结合。

在一个或多个实施方式中，抗PD-1抗体是包含互补决定区(CDR)的抗体，其轻链互补决定区(LCDR)如SEQ ID NO：1、2和3所示，重链互补决定区(HCDR)如SEQ ID NO：4、5和6所示。

在一个或多个实施方式中，抗PD-1抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中，VL如SEQ ID NO：7所示，VH如SEQ ID NO：8所示。

在一个或多个实施方式中，抗PD-1抗体是包含轻链和重链的抗PD-1抗体，且轻链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，重链包含SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列。

在一个或多个优选的实施方式中，本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒中的VEGFR抑制剂为N-甲基-2-[3-((E)-2-吡啶-2-基-乙烯基)-1H-吲唑-6-基硫烷基]-苯甲酰胺或其药学上可接受的盐、或前药。

本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒中，个体是人。

本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒中，癌症的组织或切片的PD-L1或CD8⁺T细胞中之一或二者的表达经测试呈阳性。在一个或多个实施方式中，癌症的组织或切片的PD-L1表达经测试呈阳性。在一个或多个实施方式中，癌症的组织或切片的CD8⁺T细胞表达经测试呈阳性。在一个或多个实施方式中，癌症的组织或切片的PD-L1和CD8⁺T细胞的表达经测试均呈阳性。

本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒在一个或多个实施方式中，本发明所述的个体是人且其癌症是经测试对人PD-L1呈阳性或CD8+呈阳性的黑色素瘤。

在一个或多个优选的实施方式中，本发明所述的个体是人且其癌症是经测试对人PD-L1呈阳性和/或CD8+呈阳性的肢端黑色素瘤。在一个优选的实施方式中，本发明所述的的个体是人且其癌症是经测试对人PD-L1呈阳性和/或CD8+呈阳性的粘膜黑色素瘤。

本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒在另一个或多个实施方式中，对象患有黑色素瘤且既往未接受免疫治疗。在一个优选的实施方式中，所述的癌症是肢端黑色素瘤。在一个优选的实施方式中，所述的癌症是粘膜黑色素瘤。

本发明第四方面提供一种用于预测抗PD-1抗体癌症治疗效果的方法，其包括在治疗前检测患者外周血中的生物标记物，其中，所述的生物标记物选自但不限于CD8⁺T细胞或NK细胞。

在一个或多个实施方案中，患者外周血中激活的CD8⁺T细胞在外周血总CD8⁺T细胞中的百分比≥65％，表明该患者适合使用抗PD-1抗体治疗其癌症。在一个或多个实施方案中，患者外周血中NK细胞在外周血单核细胞中的百分比≥26％，表明该患者适合使用抗PD-1抗体治疗其癌症。在一个或多个实施方案中，患者外周血中激活的CD8⁺T细胞在外周血总CD8⁺T细胞中的百分比≥65％，且外周血中NK细胞在外周血单核细胞中的百分比≥26％，表明该患者适合使用抗PD-1抗体治疗其癌症。在一个或多个实施方案中，所述NK细胞为CD3^-CD16⁺CD54⁺NK细胞。在一个或多个实施方案中，所述癌症为黑色素瘤。

本发明第五方面提供一种预测肿瘤病人对抗PD-1抗体治疗的效果的方法，其包括检测患者肿瘤组织中EMSY基因突变，其中，存在所述EMSY基因突变表明所述肿瘤病人适于用抗PD-1抗体进行治疗。

附图说明

图1：单用toripalimab的药效学的读数。通过流式细胞术分析，PD-1受体占位率(RO)由结合TORIPALIMAB的受体在来自外周血中的激活淋巴细胞(CD3+CD45RA-)中的总PD-1中所占百分比决定。

图2：单用toripalimab的抗肿瘤活性。研究人员每8周用(RECIST)v1.1对临床反应进行评估。(A)在toripalimab治疗过程中，每个受试者的目标病灶直径总和超过基线测量的百分比显示在蜘蛛图中。大多数患者的反应是持久的，因为反应的中位持续时间是5.6个月(范围是从1.8个月到17.7+个月)。(B)瀑布图显示肿瘤负荷从基线下降的最佳百分比。先前的治疗方法是用每个受试者的颜色标记的。7/8的应答者至少接受过两次***性治疗。

图3：Toripalimab治疗后所有受试者的无进展生存(PFS)。

图4：所有受试者的总体生存(OS)。

图5：在临床响应者和非响应者中显示CD8T细胞(CD3⁺CD8⁺CD45RA^-)随时间的激活频率。

图6：通过在肿瘤活检中IHC染色的PD-L1表达与临床疗效的关系。(A)由在肿瘤细胞中抗PD-L1(SP142)IHC染色测定的高(>50％)(n＝7)，中等(1-50％)(n＝9)和低(<1％)(n＝12)的PD-L1表达亚群与临床响应进行了比较。(B)在肿瘤活检中进行PD-L1和CD8双重IHC染色。

图7：生物标志物或亚组与临床疗效的相关性。

图8：血液肿瘤突变负荷(TMB)与TORIPALIMAB治疗的客观反应及总体生存率的相关性。(A)TMB与临床反应的相关性。每Mb 6个突变被作为分类节点值。(B)TMB与总体生存率的相关性。

图9：入组受试者的基因组测序分析突变图谱。

图10：toripalimab与阿西替尼联用的抗肿瘤活性。(A)在toripalimab与阿西替尼联用治疗过程中，每个受试者的目标病灶直径总和超过基线测量的百分比显示在蜘蛛图中。(B)toripalimab与阿西替尼联用治疗过程的瀑布图显示肿瘤负荷从基线下降的最佳百分比。

具体实施方式

本发明涉及肿瘤治疗方法。本发明的方法包括向有需要的患者单独施用抗PD-1抗体或其抗原结合片段；或包括向有需要的患者施用与其他抗癌剂组合的抗PD-1抗体。本发明还涉及利用生物标记物预测抗PD-1抗体在治疗癌症，尤其是黑色素瘤患者中的疗效的方法。

术语

为了更易于理解本发明，下文具体定义某些科技术语。除非本文中别处另有明确说明，否则本文所用的科技术语皆具有本发明所属技术领域的普通技术人员通常所了解的含义。

“施用”、“给与”及“处理”是指采用本领域技术人员已知的各种方法或递送***中的任意一种将包含治疗剂的组合物引入受试者。抗PD-1抗体的给药途径包括静脉内、肌内、皮下、腹膜、脊髓或其他胃肠外给药途径，比如注射或输注。“胃肠外给药”是指除了肠内或局部给药以外的通常通过注射的给药方式，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴内、损伤内、囊内、框内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜内和胸骨内注射和输注以及经体内电穿孔。

本文所述的“不良反应”(AE)是与使用医学治疗相关的任何不利的和通常无意的或不期望的迹象、症状或疾病。例如，不良反应可能与在响应治疗时免疫***的激活或免疫***细胞的扩增相关。医学治疗可以具有一种或多种相关的AE，并且每种AE可以具有相同或不同的严重性水平。

术语“受试者”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔等)，且最优选的是人。术语“受试者”和“患者”在本文中可以互换使用。

本文所述的“抗体”是指能达到期望的生物活性或结合活性的任何形式的抗体。因此，它以最广泛含义使用，但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体、人源化全长人抗体、嵌合抗体及骆驼话单一结构域抗体。其特异性结合抗原并包含通过二硫键互连的至少两条重(H)和两条轻(L)链，或其抗原结合片段。每条重链包含重链可变区(VH)和重链恒定区，重链恒定区包含三个恒定结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区，轻链恒定区包含一个恒定结构域CL。VH和VL区可进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，其散布于更为保守的称为框架区(FR)的区域。一般而言，自N末端至C末端，轻链及重链可变结构域二者皆包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。通常是根据如下的定义将氨基酸分配至每一个结构域的：Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,Kabat等人；National Institutes of Health,Bethesda,Md.；第5版；NIH出版号91-3242(1991)：Kabat(1978)Adv.Prot.Chem.32:1-75；Kabat等人，(1977)J.Biol.Chem.252:6609-6616；Chothia等人，(1987)J Mol.Biol.196:901-917或Chothia等人，(1989)Nature 341:878-883。

重链的羧基末端部分可定义主要负责效应子功能的恒定区。通常，人轻链分为κ链及λ链。人重链通常分为μ、δ、γ、α或ε，且将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。IgG亚类是本领域技术人员熟知的，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG和IgG4。

术语“抗体”包括：天然存在的和非天然存在的Ab；单克隆和多克隆Ab；嵌合和人源化Ab；人或非人Ab；全合成Ab；和单链Ab。非人Ab可以通过重组方法人源化以降低其在人中的免疫原性。

除非另有明确表示，否则本文所述的“抗体片段”或“抗原结合片段”是指抗体的抗原结合片段，即保留了全长抗体的特异性结合至抗原能力的抗体片段，例如保留一个或多个CDR区的片段。抗体结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2及Fv片段；双链抗体；线形抗体；单链抗体分子；纳米抗体及由抗体片段形成的多特异性抗体。

“嵌合抗体”是指如下的抗体以及其片段：其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种(如人)或属于特定抗体种类或亚类的抗体中相应序列相同或同源，而链的其余部分与源自另一物种(如小鼠)或属于另一抗体种类或亚类的抗体中相应序列相同或同源，只要其表现出期望的生物活性即可。

“人抗体”是指仅包含人免疫球蛋白序列的抗体。若人抗体是在小鼠、小鼠细胞或源自小鼠细胞的杂交瘤中产生，则其可含有鼠类碳水化合物链。类似的，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”是指仅分别包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。

“人源化抗体”是指含有来自非人(如鼠类)抗体以及人抗体的序列的抗体形式。此类抗体含有源自非人免疫球单边的最小序列。通常，人源化抗体将包含实质上全部的至少一个且通常两个可变结构域，其中全部或实质上全部超变环对应于非人免疫球蛋白的超变环，且全部或实质上全部FR区为人免疫球蛋白的FR区。人源化抗体任选还包括免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常为人免疫球蛋白恒定区)的至少一部分。

术语“癌症”是指以身体中异常细胞不受控制的生长为特征的广泛的各种疾病。不受调节的细胞***、生长***和生长导致恶性肿瘤的形成，其侵入邻近组织并还可以通过淋巴***或血流转移至身体的远端部分。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、白血病、母细胞瘤及肉瘤。癌症的更特定的实例包括鳞状细胞癌、骨髓瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胶质瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、胃肠(道)癌、肾癌、卵巢癌、肝癌、淋巴母细胞性白血病、淋巴细胞白血病、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、***癌、甲状腺癌、黑色素瘤、软骨肉瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌、多形性神经胶质母细胞瘤、子***、脑癌、胃癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌及头颈癌。癌症的另一个实施方式包括黑色素瘤。癌症的另一特定实施例包括转移性黏膜黑色素瘤。本发明所述的癌症包括那些特征在于测试的组织样品中的PD-L1及PD-L2之一或二者表达升高者。

术语“黑色素瘤”是来源于黑色素细胞的一类恶性肿瘤，常见于皮肤，亦见于黏膜、眼脉络膜等部位。黑色素瘤是皮肤肿瘤中恶性程度最高的瘤种，容易出现远处转移。黑色素瘤分为四种亚型，包括肢端型(acral)、粘膜型(mucosal)、长期日照的皮肤型(CSD)以及非长期阳性暴露性损害型(non-CSD)，CSD和non-CSD统称日光型。McLaughlin等，Cancer，2005，Mar 1,103(5)：1000-1007；Chi Z.等，BMC Cancer,2011；11:85公开了肢端和粘膜型黑色素瘤是亚洲人种最主要的亚型，其癌变不是由紫外线辐射导致的DNA突变引起的。与日光型黑色素瘤相比，肢端和粘膜型黑色素瘤只含有少量DNA突变。在美国，95％的黑色素瘤是日光型的，而在亚洲，尤其是中国，70％以上的黑色素瘤是肢端和粘膜型，其中粘膜型又达到了50％以上。Invest New Drugs,34:677-684；Cho,J.等公开了与日光型黑色素瘤相比，免疫疗法治疗肢端型和粘膜型的效果较差。

术语“免疫治疗”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式修饰免疫反应的方法治疗患有疾病或具有感染或遭受疾病复发风险的受试者。受试者的“治疗”或“疗法”是指对受试者进行的任何类型的干预或过程，或给与受试者活性剂，目的在于逆转、缓解、改善、减缓或预防症状、并发症或病症的发作、进展、严重性或复发，或与疾病相关的生化指标。

“程序性死亡受体-1(PD-1)”是指属于CD28家族的免疫抑制性受体。PD-1主要在体内先前活化的T细胞上表达，并且结合两种配体PD-L1和PD-L2。本文使用的术语“PD-1”包括人PD-1(hPD-1)、hPD-1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-1具有至少一个共同表位的类似物。

药物或治疗剂的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是当单独使用或与另一种治疗剂组合使用时保护受试者免于疾病发作或促进疾病消退的任何量的药物，所述疾病消退通过疾病症状的严重性的降低，疾病无症状期的频率和持续时间的增加，或由疾病痛苦引起的损伤或失能的预防来证明。治疗剂促进疾病消退的能力可以使用本领域技术人员已知的多种方法来评价，比如在临床试验期间的人受试者中，在预测人类功效的动物模型***中，或通过在体外测定法中测定所述药剂的活性。

药物治疗有效量包括“预防有效量”，即当单独或与抗肿瘤剂组合给与处于发展癌症风险的受试者或患有癌症复发的受试者时，抑制癌症的发展或复发的任何量的药物。

“生物治疗剂”是指在支持肿瘤维持和/或生长或抑制抗肿瘤免疫应答的任何生物途径中阻断配体/受体信号传导的生物分子，例如抗体或融合蛋白。

除非另有明确表示，否则本文所用的“CDR”是指免疫球蛋白可变区是使用Kabat编号***定义的互补决定区。

“抗癌剂”是指可用于治疗癌症的任何治疗剂。抗癌剂的类别包括但不限于：烷化剂、抗代谢药、激酶抑制剂、纺锤体毒剂植物碱、细胞毒性/抗肿瘤抗生素、光敏化剂、抗***及选择性***受体调节剂、抗孕酮剂、芳香酶抑制剂、CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、EGFR抑制剂、VEGFR抑制剂，及抑制参与异常细胞增殖或肿瘤生长的基因表达的反义寡核苷酸。

术语“约”是指如本领域普通技术人员所确定的特定值或组成的可接受误差范围内的值或组成，其部分取决于如何测量或确定所述值或组成，即测量***的限制。比如，“约”可以是指根据本领域中的实践在1个或大于1个标准偏差内。或者，“约”可以是指多达10％或20％的范围(即，±10％或±20％)。例如，约3mg/kg可包括2.7mg/kg和3.3mg/kg之间(相对于10％)，和2.4mg/kg和3.6mg/kg之间(相对于20％)的任何数目。在本文中，提供特定值或组成时，除非另有明确说明，“约”的含义应假定设为该特定值或组成的可接受误差范围内。

“治疗性抗PD-1单克隆抗体”是指特异性结合至在某些哺乳动物细胞表面上表达的特定PD-1的成熟形式的抗体。成熟的PD-1无前分泌前导序列，或叫前导肽。术语“PD-1”及“成熟的PD-1”在本文中可互换使用，且除非另有明确定义，或明确能从上下文看出，否则应理解为相同分子。

如本文所述，治疗性抗人PD-1抗体或抗hPD-1抗体是指特异性结合至成熟人PD-1的单克隆抗体。

本文所述的“框架区”或“FR”是指不包括CDR区的免疫球蛋白可变区。

“分离的抗体或其抗原结合片段”是指纯化状态且在该情况下所指定的分子实质上不含有其他生物分子，诸如核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物或其他材料(诸如细胞碎片或生长培养基)。

“患者”、“病人”或“受试者”是指需要医疗方法或参与临床试验、流行病学研究或用作对照的任意单一受试者，包括人及哺乳动物，比如马、牛、狗或猫。

在以下段落中，进一步详细描述本发明的各个方面。

抗PD-1抗体

“PD-1抗体”是指结合PD-1受体，阻断表达于癌细胞上的PD-L1与表达于免疫细胞(T、B、NK细胞)上的PD-1结合且优选也能阻断表达于癌细胞上的PD-L2与表达于免疫细胞上的PD-1结合的任何化学化合物或生物分子。PD-1及其配体的替代名词或同义词包括：对于PD-1而言有PDCD1、PD1、CD279及SLEB2；对于PD-L1而言有PDCD1L1、PDL1、B7-H1、B7H1、B7-4、CD274及B7-H；且对于PD-L2而言有PDCD1L2、PDL2、B7-DC及CD273。在治疗人个体的任何本发明治疗方法、药物及用途中，PD-1抗体阻断人PD-L1与人PD-1的结合，且优选阻断人PD-L1和PD-L2二者与人PD1结合。人PD-1氨基酸序列可见于NCBI基因座编号：NP_005009。人PD-L1及PD-L2氨基酸序列可分别见于NCBI基因座编号：NP_054862及NP_079515。

本文中，当提及“抗PD-1抗体”时，除非另有说明或描述，否则该术语包括其抗原结合片段。

可用于本发明所述的任何用途、疗法、药物及试剂盒的抗PD-1抗体包括单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段，其特异性结合至PD-1，且优选特异性结合至人PD-1。mAb可以为人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，且可包括人恒定区。在一些实施方式中，恒定区是选自人IgG1、IgG2、IgG3及IgG4恒定区组成的组，且在优选实施方式中，恒定区是人IgG4恒定区。

在本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒的任意一个实施方式中，PD-1抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)轻链CDR为SEQ ID NO：1、2和3所示的氨基酸，及重链CDR为SEQ ID NO：4、5和6所示的氨基酸。

在本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒的任意一个实施方式中，PD-1抗体是特异性结合至人PD-1且包含：(a)包含SEQ ID NO：7的轻链可变区，及(b)包含SEQ ID NO：8的重链可变区的单克隆抗体。

在本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒的任意一个实施方式中，PD-1抗体是特异性结合至人PD-1且包含：(a)包含SEQ ID NO：9的轻链，及(b)包含SEQ ID NO：10的重链的单克隆抗体。

在本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒的任意一个实施方式中，PD-1抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段，下表A提供了用于本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒中的示例性抗PD-1抗体mAb的氨基酸序列的列表：

表A：示例性抗人PD-1抗体的轻重链CDR

结合至人PD-1且可用于本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒的抗PD-1抗体的实施例阐述于WO2014206107中。在本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒中可用作抗PD-1抗体的人PD-1mAb包括WO2014206107中描述的任意一个抗PD-1抗体，包括：特瑞普利单抗(Toripalimab)(一种具有WHO Drug Information(第32卷，第2期，第372-373页(2018))中所述的结构且包含序列SEQ ID NO：9和10所示的轻链及重链氨基酸序列的人源化IgG4mAb)。在某些实施方案中，可用于本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒的抗PD-1抗体还包括FDA已经批准的Nivolumab和Pembrolizumab。

在某些实施方案中，可用于本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒的抗PD-1抗体也包括特异性结合PD-L1以阻断PD-L1与PD-1结合的抗PD-L1单克隆抗体，如atezolizumab、avelumab和durvalumab。

如本文所述的“PD-L1”表达或“PD-L2”表达是指细胞表面上的特定PD-L蛋白质或细胞或组织内的特定PD-L mRNA的任何可检测的表达水平。PD-L蛋白质表达可利用诊断性PD-L抗体在肿瘤组织切片的IHC分析中或通过流式细胞术检测。或者，肿瘤细胞的PD-L蛋白质表达可通过PET成像使用特异性结合至期望PD-L靶标(比如PD-L1或PD-L2)的结合剂检测。

用于在肿瘤组织切片的IHC分析中定量PD-L1蛋白质表达的方法，参见以下但不限于Thompson,R.H.等人，PNAS 101(49)：17174-17179(2004)；Taube,J.M.等人，Sci TranslMed 4，127ra37(2012)；及Toplian,S.L.等人，New Eng.J.Med.366(26):2443-2454(2012)等。

一种方法采用PD-L1表达呈阳性或阴性的简单二元终点，其中阳性结果用显示细胞表面膜染色的组织学证据的肿瘤细胞百分比来定义。将肿瘤组织切片计数为总肿瘤细胞的至少1％定义为PD-L1表达呈阳性。

在另一方法中，在肿瘤细胞中以及在浸润免疫细胞中定量肿瘤组织切片中的PD-L1表达。将展现膜染色的肿瘤细胞及浸润免疫细胞的百分比单独的定量为<1％、1％至50％，及随后的50％直至100％。对于肿瘤细胞，若评分<1％，则将PD-L1表达计数为阴性，若评分≥1％则为阳性。

在一些实施方式中，基于与由适当对照的PD-L1表达水平的比较，由恶性细胞和/或由肿瘤内的浸润免疫细胞的PD-L1表达水平测定为“过表达”或“升高”。比如，对照PD-L1的蛋白质或mRNA表达水平可为相同类型的非恶性细胞中或来自匹配正常组织的切片中定量的水平。

如本文所述的“RECIST 1.1疗效标准”是指Eisenhauver等人、E.A.等人，Eur.JCancer 45:228-247(2009)基于所测量反应的背景针对靶标损伤或非靶标损伤所述的定义。

术语“ECOG”评分标准，是从患者的体力来了解其一般健康状况和对治疗耐受能力的指标。ECOG体力状况评分标准记分：0分、1分、2分、3分、4分和5分。评分为0是指活动能力完全正常，与起病前活动能力无任何差异。评分为1是指能自由走动及从事轻体力活动，包括一般家务或办公室工作，但不能从事较重的体力活动。

“持续应答”是指在停止用本文所述治疗剂或组合疗法后的持续治疗效应。在一些实施方式中，持续应答具有至少与治疗持续时间相同或为治疗持续时间的至少1.5,2.0,2.5或3倍的持续时间。

“组织切片”是指组织样品的单一部分或片，比如从正常组织或肿瘤的样品切割的组织薄片。

本文所述的“治疗”癌症是指向患有癌症或经诊断患有癌症的受试者采用本文所述治疗方案(如施用抗PD-1抗体与VEGFR抑制剂的组合疗法)以达到至少一种阳性治疗效果(比如，癌症细胞数目减少、肿瘤体积减小、癌细胞浸润至周边器官的速率降低或肿瘤转移或肿瘤生长的速率降低)。癌症中的阳性治疗效果可以多种方式测量(参见W.A.Weber,J.Nucl.Med.,50:1S-10S(2009))。比如，关于肿瘤生长抑制，根据NCI标准，T/C≦42％是抗肿瘤活性的最小水平。认为T/C(％)＝经***体积中值/对照肿瘤体积中值×100。在一些实施方式中，通过本发明的组合达到的治疗效果是PR、CR、OR、PFS、DFS及OS中的任一个。PFS(也叫“至肿瘤进展的时间”)是指治疗期间及之后癌症不生长的时间长度，且包括患者经历CR或PR的时间量以及患者经历SD的时间量。DFS是指治疗期间及之后患者仍无疾病的时间长度。OS是指与初始或未经治疗的个体或患者相比预期寿命的延长。在一些实施方式中，对本发明组合的应答是PR、CR、PFS、DFS、OR或OS中的任一个，其使用RECIST 1.1疗效标准评定。有效治疗癌症患者的本发明组合的治疗方案可根据多种因素(比如患者的疾病状态、年龄、体重及疗法激发受试者的抗癌反应的能力)而变。尽管本发明的实施方式可不在每个受试者中达到有效的阳性治疗效果，但在统计学上显著数目的受试者中应有效并达到了阳性治疗效果。

术语“给药方式”、“给药方案”可互换使用，是指本发明组合中每一治疗剂的使用剂量及时间。

“肿瘤”在应用于经诊断患有或怀疑患有癌症的受试者时是指任何大小的恶性或潜在恶性的赘生物或组织块，且包括原发性肿瘤及继发性赘生物。实体瘤通常不含有囊肿或液体区域的组织的异常生长或块。不同类型的实体瘤针对形成其的细胞类型来命名。实体瘤的例子有肉瘤、癌及淋巴瘤。血液癌通常不会形成实体瘤。

“肿瘤负荷”是指分布于整个体内的肿瘤物质的总量。肿瘤负荷是指整个体内的癌细胞的总数目或肿瘤的总大小。肿瘤负荷可通过现有技术中已知的多种方法测定，比如在肿瘤自受试者移除后使用卡尺、或在体内时使用成像技术(比如超声、骨扫描、计算层析X射线照相术(CT)或磁共振成像(MRI)扫描)测量其尺寸。

术语“肿瘤大小”是指肿瘤的总大小，其可测量为肿瘤的长度及宽度。肿瘤大小可通过现有技术中已知的多种方法测定，例如在肿瘤自受试者移除后使用卡尺、或在体内时使用成像技术(比如骨扫描、超声、CT或MRI扫描)测量其尺寸。

术语“肿瘤突变负荷(TMB)”是指每百万碱基中被检测出的，体细胞基因编码错误、碱基替换、基因***或缺失错误的总数。在本发明的一些实施方式中，肿瘤突变负荷(TMB)是通过分析体细胞突变(包括编码基置换和研究的面板序列的巨碱基***)来估计的。在本发明的一些实施方式中，受试者的肿瘤突变负荷(TMB)大于等于6个突变/Mb，预示着对此类受试者单独施用抗PD-1抗体，或施用与其他抗癌剂组合的抗PD-1抗体相比TMB<6个突变/Mb能取得更好的疗效。在一些优选的实施方式中，所述的癌症为实体瘤。在一些具体的实施方式中，所述的癌症为黑色素瘤。作为一种优选的实施方式，所述的癌症为肢端型或/和粘膜型黑色素瘤。

术语“基因扩增”是指某特异蛋白质编码的基因的拷贝数选择性地增加而其他基因并未按比例增加的过程。在自然条件下，基因扩增是通过从染色体切除基因的重复序列再在质粒中进行染色体外复制或通过将核糖体RNA的全部重复序列生成RNA转录物再转录生成原来DNA分子的额外拷贝而实现的。本发明中，一些实施例中公开了基因测序分析。本发明的一些实施方式中，本发明所述的受试者中具有某些独特的基因扩增。在一些优选实施方式中，所述受试者具有CDK4/6基因扩增；在一些优选实施方式中，所述受试者具有FGF3/4/6/19基因扩增；在一些优选实施方式中，所述受试者具有EMSY基因扩增；在一些优选实施方式中，所述受试者具有BRCA2基因失活性突变；在一些优选实施方式中，所述受试者具有PARP基因扩增；在一些优选实施方式中，所述受试者具有EGF/EGFR基因扩增；在一些优选实施方式中，所述受试者具有TERT或TP53基因突变。作为一种优选的实施方式，所述肢端黑色素瘤受试者中具有CDK4/6基因扩增。作为一种优选的实施方式，所述肢端黑色素瘤受试者中具有FGF3/4/19基因扩增。作为一种优选的实施方式，所述肢端黑色素瘤受试者中具有EMSY基因扩增。在一些实施方式中，所述的肿瘤患者具有EMSY基因扩增，预示着其可用本发明所述的抗PD-1抗体进行治疗疗效更好。

术语“CDK”即周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases)，是一组丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，CDK通过和周期蛋白cyclin协同作用对丝氨酸/苏氨酸蛋白的磷酸化驱动细胞周期，是细胞周期调控中的重要因子。CDK家族有CDK 1-8等8种，每种CDK结合不同类型的cyclin形成复合物，调节细胞从G1期过渡到S期或G2期过渡到M期以及退出M期的进程。目前FDA已经批准上市的CDK4/6抑制剂主要有瑞博西尼、帕博西尼，而处于临床研究阶段的CDK4/6抑制剂有几十种。

术语“FGF”即成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor)蛋白类家族，该家族成员共有23个，FGF1-23。根据FGFs的不同作用机制可将其分为三类：内分泌(FGF15/19/21/23)、旁分泌(FGF1-10、FGF16-18、FGF20、FGF22)和胞分泌FGF11/12/13/14。旁分泌FGFs调节生物活性的过程是利用HS作为辅助因子，特异性结合细胞表面的FGF受体(Fibroblast Growth Factor Receptor，FGFRs)。而FGFRs主要包括4种：FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4。目前尚未有FGF/FGFR抑制剂上市，勃林格英格汉的VEGFR/PDGFR/FGFR抑制剂nintedanib用于治疗肝癌、非小细胞肺癌、特发性纤维化于2014年获得了FDA的突破性药物资格，而在国内目前有德立替尼处于临床阶段。

术语“PARP(poly ADP-ribose polymerase)”是一种DNA修复酶。在DNA修复通路中起关键作用。DNA损伤断裂时会激活PARP，它作为DNA损伤的一种分子感受器，具有识别、结合到DNA断裂位置的功能，进而激活、催化受体蛋白的聚ADP核糖基化作用，参与DNA的修复过程。PARP抑制剂是一种靶向聚ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose Polymerase，PARP)的癌症疗法。目前已上市的PARP抑制剂包括阿斯利康的Olaparib，用于治疗卵巢癌或原发性腹膜癌；Clovis的Rubraca用于治疗卵巢癌；以及默沙东的Zejula用于治疗卵巢癌和腹膜癌。其他处于临床研究阶段的PARP抑制剂还有几十种。

术语“EMSY”是一个BRCA2抑制蛋白，BRCA2基因是一个抑癌基因，在调节人体细胞的复制、遗传物质DNA损伤修复、细胞的正常生长方面有重要作用，EMSY基因扩展和蛋白的过表达，抑制BRCA2功能。BRCA2基因突变或功能缺失的人群罹患癌症的风险大大增加。在一些实施方式中，检测EMSY可作为指标预测个体单独使用抗PD-1抗体或/和与其他抗癌剂组合治疗癌症的前景。

术语“VEGF/VEGFR”中的VEGF(血管内皮生长因子)是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用。VEGF与血管内皮细胞上酪氨酸激酶受体VEGFR的细胞外结合域结合后，使每两个单体受体分子在膜上形成二聚体，并致受体细胞内结合域尾部酪氨酸残基发生磷酸化，进而激活不同信号传导，发挥一系列生物学效应。“VEGFR抑制剂”是指血管内皮生长因子(VEGF)受体的小分子抑制剂，或针对血管内皮生长因子(VEGF)的单克隆抗体。在一个实施方式中，“VEGFR抑制剂”是指血管内皮生长因子(VEGF)受体的小分子抑制剂。在本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒中，用作VEGFR抑制剂的具体的抑制剂包括阿西替尼(axitinib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、阿帕替尼(apatinib)、瑞伐非尼(regorafenib)及帕唑帕尼(pazopanib)。在一个实施方式中，在本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒中，用作VEGFR抑制剂的具体的抑制剂包括阿西替尼、舒尼替尼及阿帕替尼。

在一个具体的实施方式中，在本发明所述的用途、疗法、药物及试剂盒中，VEGFR抑制剂是具体如下结构的化合物：N-甲基-2-[3-((E)-2-吡啶-2-基-乙烯基)-1H-吲唑-6-基硫烷基]-苯甲酰胺：

其称作阿西替尼。

阿西替尼是血管内皮生长因子(VEGF)受体1、2、3的选择性抑制剂。这些受体与病理性血管生成、肿瘤生长以及癌症的发展有关。在体外和小鼠模型中，阿昔替尼抑制VEGF介导的内皮细胞增殖和生存。在肿瘤异种移植的小鼠模型中，阿西替尼显示具有抑制肿瘤生长和VEGFR-2的磷酸化的作用。目前已在美国、欧洲、日本、中国等国家和地区上市，临床上主要用于既往接受过一种酪氨酸激酶抑制剂或细胞因子治疗失败的进展期肾细胞癌(RCC)的成人患者。

阿西替尼及其药学上可接受的盐描述在中国专利CN1137884和CN1234693中，上文列举的专利以引用的方式并入本文中。

除非本文另有明确规定，否则包括阿西替尼在内的小分子靶向抑制剂包括其盐及前药。包括阿西替尼在内的小分子靶向抑制剂一般本质上是碱性的且能够与各种无机酸及有机酸形成多种盐。如本文所述“盐”是指与无机酸和/或有机酸形成的酸性盐。包括阿西替尼在内的小分子靶向抑制剂的药学上可接受的盐可通过使包括阿西替尼在内的小分子靶向抑制剂与一定量的酸在介质中反应，然后干燥来形成。

作为一种具体的实施方式，阿西替尼的酸加成盐包括乙酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐等。

出于本发明的目的，所有所述的酸性盐均是可用于本发明的包括阿西替尼在内的小分子靶向抑制剂的药学上可接受的盐，且认为所有的酸性盐均等效于相应的化合物的游离形式。

术语“前药”是指在施用受试者后通过代谢或化学过程经历化学转化以产生包括阿西替尼在内的小分子靶向抑制剂或其盐的药物前体的化合物。

术语“PD-1受体占用”或“PD-1受体占位(率)”在本发明中是等同的，是指结合本发明所述的人外周血淋巴细胞中PD-1受体被总PD-1抗体结合占有的百分数。在本发明的一些实施方式中，结合本发明所述抗PD-1抗体的受体由识别该抗体的IgG4Fc部分的亚型特异的抗体检测。在本发明的一些实施方式中，用本发明所述的抗PD-1抗体饱和浓度孵育细胞，然后用PE-标记的抗人IgG4Fc对细胞进行染色，用以评估人全血淋巴细胞中PD-1的总量。PD-1阳性靶细胞主要存在于CD45RA-T细胞亚群中。

术语“免疫组化(IHC)”是指利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，并对其进行定位、定性及相对定量的研究的方法。本发明的一些实施方式中，在利用抗PD-1抗体治疗之前，对受试者的肿瘤组织样品进行PD-L1或/和CD8⁺T细胞检测，所述检测使用罗氏的抗人PD-L1抗体SP142(Cat No：M4422)，或CD8抗体(克隆4B11，Cat#MCA 1817T)进行染色实验。在一些实施方式中，肿瘤细胞的膜染色强度≥1％被定义为PD-L1阳性。

药物组合物及剂量

本发明所述的治疗剂可以构成药物组合物，比如含有本文所述抗PD-1抗体或/和该抗PD-1抗体以外的其他抗癌剂以及其他药学上可接受的载体的药物组合物。如本发明所述，“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。优选的，适用于含有抗PD-1抗体的组合物的载体适合于静脉内、肌内、皮下、胃肠外、脊椎或表皮施用，比如通过注射或输注，而用于含有其他抗癌剂的组合物的载体适合于胃肠外施用，比如口服。本发明的药物组合物可以含有一种或多种药学上可接受的盐、抗氧化剂、水、非水载体、和/或佐剂比如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。

调整给药方案以提供最佳所需的反应，比如最大治疗反应和/或最小不良效果。对于抗PD-1抗体，包括与另一抗癌剂组合时的施用，剂量范围可为约0.01至约20mg/kg，约0.1至约10mg/kg个体体重，或120mg、240mg、360mg、480mg固定剂量。例如，剂量可以是约0.1，约0.3，约1，约2，约3，约5，或约10mg/kg个体体重。通常设计给药方案以实现这样的暴露，其导致基于Ab的典型药代动力学特性的持续受体占用(RO)。代表性的给药方案可能为约每周一次，约每两周一次，约每三周一次，约每四周一次，约一个月一次，或更长一次施用。在一些实施方式中，约每两周一次向个体施用抗PD-1抗体。

其他抗癌剂的给药时间表针对不同的药物而有所不同。

本发明的一些具体实施方式中，所述的VEGFR抑制剂的给药时间表针对不同的亚型而变化。比如，舒尼替尼的通常剂量包括每天一次随或不随食物向成人施用50mg的固定剂量，其中以约12.5mg增量或基于个体患者安全性和耐受性推荐的增量进行剂量调整。而阿西替尼的开始剂量为5mg，以每天2次，口服，基于个体安全性和耐受性来调整剂量。对于抗PD-1抗体与VEGFR抑制剂的组合治疗，在一些实施方式中，将VEGFR抑制剂以其批准或推荐的剂量施用，继续治疗，直到观察到临床效果或直到不可接受的毒性或疾病进展发生。

本发明的方法

本发明涉及治疗癌症患者的方法，包括向癌症患者施用治疗有效量的抗PD-1抗体和任选的除抗PD-1抗体外的其他抗癌剂。在某些实施方案中，适用于本发明方法进行治疗的癌症患者优选是外周血中激活的CD8⁺T细胞在外周血总CD8+T细胞中的百分比≥65％。在某些实施方案中，适用于本发明方法进行治疗的癌症患者优选是外周血中NK细胞在外周血单核细胞中的百分比≥26％。在某些实施方案中，适用于本发明方法进行治疗的癌症患者优选是外周血中激活的CD8⁺T细胞在外周血总CD8+T细胞中的百分比≥65％，且其外周血中NK细胞在外周血单核细胞中的百分比≥26％。在优选实施方案中，所述NK细胞为CD3^-CD16⁺CD54⁺NK细胞。在某些实施方案中，适用于本发明方法进行治疗的癌症患者优选是肿瘤组织中检出EMSY基因突变的癌症患者。

在某些实施方案中，本发明提供治疗患有黑色素瘤的个体/患者的方法。在一些实施方式中，本发明包括治疗黑色素瘤或患有黑色素瘤个体的方法。在一些实施方式中，所述方法包括向个体施用治疗有效剂量的以下组合：(a)作为特异性结合PD-1受体并抑制PD-1活性的Ab或其抗原结合片段的抗癌剂；和(b)另一抗癌疗法。在一个实施方式中，本发明涉及治疗有效需要的个体的黑色素瘤或患有黑色素瘤的个体的方法，所述的方法包括向个体施用以下有效量的组合：(i)本文其他部分公开的治疗黑色素瘤的标准疗法，或(ii)其他抗癌剂。在一些实施方式中，所述的其他抗癌剂选自CDK4/6抑制剂、FGF3/4/19抑制剂、PARP抑制剂、或VEGFR抑制剂。由于在亚洲黑色素瘤患者中大约50％是粘膜型黑色素瘤，大约20％是粘膜型黑色素瘤，因此，在一些实施方式中，所述的黑色素瘤为粘膜型黑色素瘤。在另一些实施方式中，所述的黑色素瘤为肢端型黑色素瘤。

适用于本发明的方法中的抗PD-1抗体

适用于本发明的方法中的抗体PD-1抗体是以高特异性和亲和力结合PD-1，阻断PD-L1/2与PD-1的结合，并抑制PD-1信号转导达到的免疫抑制效果。在任何本文公开的治疗方法中，抗PD-1抗体包括结合PD-1受体并在抑制配体结合和上调免疫***方面表现出类似完整Ab的功能特性的抗原结合部分或片段。在一些实施方式中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段为与特瑞普利单抗交叉竞争结合人PD-1的抗PD-1抗体或其抗原结合片段。在其他的实施方式中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段是嵌合、人源化或人Ab或其抗原结合片段。在用于治疗人个体的某些实施方式中，所述的Ab为人源化Ab。

在一些实施方式中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含人IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。在一些实施方式中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段的IgG4重链恒定区的序列包含S228P突变，其用IgG1同种型抗体的相应位置处通常存在的脯氨酸残基替代铰链区中的丝氨酸残基。在包括施用抗PD-1抗体的本文描述的任何治疗方法的某些实施方式中，所述抗PD-1抗体是特瑞普利单抗。在一些实施方式中，VEGFR抑制剂是阿西替尼。在一些实施方式中，所述的抗PD-1抗体选自WO2014206107中描述的人源化抗体38,39,41和48。

适用于本发明的方法中的CDK4/6抑制剂

本发明用于***的一些实施方式中，其他的抗癌剂，即除了抗PD-1抗体以外与抗PD-1抗体组合使用的抗癌剂是CDK4/6抑制剂。目前FDA已经批准上市的CDK4/6抑制剂主要有礼来公司的Verzenio(abemaciclib)，主要用于治疗接受内分泌疗法后疾病进展的激素受体(HR)阳性以及人类表皮生长因子受体2(HER2)阴性的晚期或转移性乳腺癌成年患者；以及诺华公司的Kisqali(Ribociclib，瑞博西尼)，其与芳香酶抑制剂联用可作为一线用药治疗HR阳性以及HER2阴性的绝经后晚期转移性乳腺癌女性患者；第三个是辉瑞公司的Ibrance(Palbociclib，帕博西尼)，其与来曲唑联用治疗***受体(ER)阳性、人表皮生长因子受体2(HER2)阴性的绝经后妇女转移性乳腺癌。

适用于本发明的方法中的FGF/FGFR抑制剂

本发明用于***的一些实施方式中，其他的抗癌剂，即除了抗PD-1抗体以外与抗PD-1抗体组合使用的抗癌剂是FGF/FGFR抑制剂。目前尚未有FGF/FGFR抑制剂上市，勃林格英格汉的VEGFR/PDGFR/FGFR抑制剂nintedanib用于治疗肝癌、非小细胞肺癌、特发性纤维化于2014年获得了FDA的突破性药物资格，而在国内目前有德立替尼处于临床阶段。

适用于本发明的方法中的PARP抑制剂

本发明用于***的一些实施方式中，其他的抗癌剂，即除了抗PD-1抗体以外与抗PD-1抗体组合使用的抗癌剂是PARP抑制剂。目前已上市的PARP抑制剂包括阿斯利康的Olaparib，用于治疗卵巢癌或原发性腹膜癌；Clovis的Rubraca用于治疗卵巢癌；以及默沙东的Zejula用于治疗卵巢癌和腹膜癌。其他处于临床研究阶段的PARP抑制剂还有几十种。

适用于本发明的方法中的VEGFR抑制剂

本发明用于治疗黑色素瘤的一些实施方式中，其他的抗癌剂，即除了抗PD-1抗体以外与抗PD-1抗体组合使用的抗癌剂是VEGFR抑制剂。已批准的VEGFR抑制剂包括：阿帕替尼，用于治疗晚期胃癌和晚期非璘非小细胞肺癌；阿西替尼，用于治疗转移性肾细胞癌；索拉非尼用于治疗肝细胞癌，甲状腺癌等；帕唑帕尼用于治疗晚期肾细胞癌；舒尼替尼用于治疗胃肠间质瘤、晚期肾细胞癌、乐伐替尼用于治疗甲状腺癌；瑞格菲尼用于治疗胃肠间质瘤。对于治疗黑色素瘤，尤其是用于治疗晚期黑色素瘤尚未见批准的。因此，将VEGFR抑制剂与抗PD-1抗体组合用于治疗黑色素瘤，是否能达到组合的功效，以及在临床上安全性并无预见，尚需要通过大量的临床试验来验证。

用途、疗法、药物及试剂盒

本发明一方面，提供了用于治疗个体中癌症的方法，该方法包含向所述个体施用包含抗PD-1抗体及CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、PARP抑制剂或VEGFR抑制剂中的一种或多种的组合疗法。

组合疗法也可以包含一种或多种额外治疗剂。所述的额外治疗机可以是除CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、PARP抑制剂或VEGFR抑制剂以外的化学治疗剂或生物治疗剂。

根据标准医药实践，本发明的组合疗法中的每一个治疗剂均可单独施用或在药物组合物中施用，该药物组合物包含治疗剂及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂及稀释剂。

本发明的组合疗法中的每一个治疗剂可同时施用、并行施用或以任何次序依次施用。在组合疗法中的治疗剂以不同剂型施用，比如一种药物是片剂或胶囊且另一种药物是无菌液体，和/或以不同给药时间施用，比如化学治疗剂至少每日施用且生物治疗剂不频繁施用，比如每一周、或每两周或每三周一次。

在一些实施方式中，CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、PARP抑制剂或VEGFR抑制剂是在施用抗PD-1抗体之前施用，而在另一些实施方式中，CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、PARP抑制剂或VEGFR抑制剂是在施用抗PD-1抗体之后施用。

在一些实施方式中，在药物作为单一疗法用于治疗相同癌症时，组合疗法中的治疗剂中至少一种使用相同的给药方案(剂量、频次、治疗持续时间)施用。

本发明所述的组合疗法中的每一个小分子治疗剂可经口或胃肠外(比如静脉内、肌内、腹膜内、皮下、经直肠、局部或透皮施用途径)施用。

本发明所述的组合疗法可在手术之前或之后施用，且可在放疗之前、期间或之后施用。

在一些实施方式中，将本发明所述的组合疗法施用于先前未经生物治疗剂或化学治疗剂治疗的患者中。在另一些实施方式中，将组合疗法施用于用生物治疗剂或化学治疗剂治疗之后而不能达到持续响应的患者中。

本发明所述的组合疗法可用于治疗通过触诊或通过现有技术中已知的成像技术发现的肿瘤中，比如MRI、超声或CAT扫描。

本发明所述的组合疗法优先施用于经测试PD-L1表达呈现阳性或CD8+呈阳性的癌症患者。

本发明的组合疗法的给药方案的选择取决于若干的因素，包括但不限于血清或组织转化率、症状的程度、免疫原性及所治疗个体的靶标细胞、组织、器官的可达性。优选的，给药方案要配合可接受的副作用程度来给患者递送最大量的各种治疗剂。因此，组合疗法中的每一个生物治疗剂和化学治疗剂的剂量及给药频率取决于特定的治疗剂、所治疗的癌症的严重程度及患者的特性。

本发明所述的抗PD-1抗体和CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、PARP抑制剂或VEGFR抑制剂中的一种或几种可作为包含第一容器及第二容器及包装插页的试剂盒提供。

第一容器含有至少一个剂量的包含抗PD-1抗体的药物，第二容器含有至少一个剂量的包含CDK4/6抑制剂、FGF/FGFR抑制剂、PARP抑制剂或VEGFR抑制剂中的一种或几种的药物，且包装插页或标签包含使用药物治疗癌症的说明。试剂盒可进一步包含可用于施用药物的其他材料，比如稀释剂、滤纸、IV袋及线、针及注射器。作为一种优选方式，说明书可陈述药物旨在用于治疗癌症患者，其PD-L1表达经ICH分析法测试呈现阳性。

抗PD-1抗体对治疗癌症效果的预测方法

本发明所述的抗PD-1抗体，尤其是toripalimab对治疗个体中癌症的效果的预测方法，包括在治疗前检测患者外周血中的生物标记物，所述的生物标记物选自但不限于CD8⁺T细胞或NK细胞。

在一个实施方式中，本发明所述的癌症为黑色素瘤。在一个实施方式中，本发明所述的预测方法中的CD8⁺T细胞为激活状态。在一个实施方式中，本发明所述的激活的CD8⁺T细胞在外周血总CD8+T细胞中的百分比为不小于65％，优选≥75％。在一个实施方式中，本发明所述的NK细胞在外周血单核细胞中的百分比为不小于23％，优选≥26％。在某些实施方案中，所述NK细胞为CD3^-CD16⁺CD54⁺NK细胞。

本发明还包括利用EMSY基因预测肿瘤患者对抗PD-1抗体治疗的效果的方法。存在EMSY基因突变表明所述肿瘤患者适于用抗PD-1抗体进行治疗。

在某些实施方案中，本发明还提供生物标记物(尤其是CD8⁺T细胞和/或NK细胞)的检测试剂在制备预测抗PD-1抗体治疗癌症的效果用的试剂盒中的用途。这类试剂包括例如对全血中的T淋巴细胞的频率和激活状态进行检测的试剂，如CD45RA染色试剂等。

本发明还包括检测EMSY基因的试剂在制备预测抗PD-1抗体治疗癌症的效果用的试剂盒中的用途。这类试剂包括但不限于测试中常规使用到的试剂，包括但不限于引物、探针、PCR所需试剂等。

缩略语

贯穿于本发明的说明书及实施例中，使用以下缩略语：

BID 一个剂量，每日2次

CDR 互补决定区

DFS 无疾病生存

FR 框架区

IgG 免疫球蛋白G

IHC 免疫组织化学

OR 总体应答

ORR 客观缓解率

OS 总生存

PD 疾病进展

PFS 无进展生存

PR 部分应答

CR 完全应答

SD 疾病稳定

DLT 剂量限制性毒性

MTD 最大耐受剂量

AE 不良事件

Q2W 每两周一个剂量

QD 每天一个剂量

CSD 长期日照型

non-CSD 非长期日照型

IRC 独立审查委员会

TRAE 与治疗相关的不良反应

SAE 严重不良反应

RO 受体占位率

UC 尿路上皮癌

RCC 肾细胞癌

MM 转移黑色素瘤

本发明通过以下实施例进一步阐述，但所述实施例不应被解释为限制本发明。整个申请中引用的所有参考文献的内容通过引用的方式明确并入本文。

实施例

实施例1：抗PD-1抗体单用***的临床研究

入组标准：符合条件的受试者必须(1)年龄在18至70岁之间，(2)患有转移性黑色素瘤或泌尿***癌症，(3)经过标准全身治疗后难以治愈，(4)ECOG评分为0或1，(5)无自身免疫性疾病史或持续感染史，(6)之前未接受过任何免疫治疗。

受试者必须是按RECIST v 1.1标准有可评估病灶，不允许同时使用抗肿瘤药物治疗、不允许全身类固醇药物治疗或未使用过抗-CTLA4、抗PD-1、抗PD-L1抗体治疗。入组受试者的人口学统计数据如表1所示。

表1：入组受试者人口学统计数据

受试药物：抗PD-1抗体toripalimab(WO2014206107)。

本试验有三个抗PD-1抗体剂量组，分别为：1mg/kg(n＝15)，3mg/kg(n＝15)和10mg/kg(n＝6)，每两周静脉注射一次(Q2W)。详细参数见表2肿瘤组织学参数表。

表2：肿瘤组织学参数表

临床设计：

这是一个单臂，临床I期，非盲临床试验，分为2组(A组：剂量递增；B组：剂量扩大)。该研究用以评价抗PD-1抗体的安全性、耐受性、药代动力学、药效学、免疫原性，和抗肿瘤活性。

A组：纳入多至18名受试者

计划剂量为1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg，Q2W。

在每个剂量水平上最初至少有3名受试者参加。受试者序贯接受一次60分钟的静脉注射抗PD-1抗体，进行4周的毒性评估。

如果在最初的三个受试者中没有DLT，将会升级到下一个剂量组，如果发生DLT，该剂量组将扩大到总共6名受试者。

第一次给药后28天，受试者继续每两周接受抗PD-1抗体的预定剂量水平，随后每8周进行放射学评估。采用RECIST v1.1反应评价标准进行相应评价。疾病进展或耐药毒性的受试者将被排除在研究之外。

任何不超过MTD的剂量A组递增组都可以扩大到最多B组的12名受试者，以进一步评估安全性、药代学、药效学和临床活性。

B组：受试者通过静脉注射抗PD-1抗体，每2周注射1、3或10mg/kg，然后每8周进行一次放射评估，直到疾病恶化、出现难以忍受的毒性或自愿退出研究。2018年7月31日报告不良事件。

1.1药代动力学测定

在给药前采集受试者血清样本，并在第一次使用抗PD-1抗体(toripalimab)后28天内连续采集受试者的血清样本。评价PK。

其PK参数结果如下表3所示，注射1小时后toripalimab的血清浓度达到Cmax，并缓慢退出循环。其显示了剂量依赖的线形PK状况。静脉注射toripalimab，Q2W，多剂量注射后测定的血清半衰期分别为9.5±2.0，16.5±7.8和13.9±5.5(天)。血清中toripalimab的谷浓度大约在连续5次剂量后稳定下来，在剂量组1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg中，toripalimab在临床上的稳态谷浓度分别是8.9±4.4、37.8±17.5和174.3±95.6g/mL。

表3：不同剂量组的抗PD-1抗体(toripalimab)在人血清中的PK参数

1.2PD-1受体占位的抗PD-1抗体的药效学研究

结合抗PD-1抗体(toripalimab)的受体由识别toripalimab的IgG4Fc部分的亚型特异的抗体检测。首先用toripalimab饱和浓度的细胞孵育，然后用PE-标记的抗人IgG4Fc对细胞进行染色，用以评估PD-1的总量。PD-1阳性靶细胞主要存在于CD45RA-T细胞亚群中，该亚群代表非初始或活化的T细胞群。如表4所示，在治疗过程中，三个剂量组的大多数受试者在外周血T淋巴细胞上维持PD-1受体完全占据(>80％)。如图1所示PD-1受体占用的药效学读数与临床响应不相关，在应答者和非应答者的治疗中均有相似的RO。

表4：在3个剂量组中的toripalimab的PD-1受体占位率(RO)

1.3安全性研究：

2016年3月30日到2016年12月26日，36例标准全身性治疗难治的中晚期转移性黑色素瘤患者(n＝22)、肾细胞癌(n＝6)或泌尿道肿瘤(n＝8)病人参加三个剂量升级组：1mg/mL(n＝3)、3mg/mL(n＝4)、10mg/mL(n＝3)和三个剂量扩张组：1mg/kg(n＝12)、3mg/kg(n＝11)、10mg/kg(n＝3)。

如表5和表6所示，抗PD-1抗体即使在剂量高达10mg/kg Q2W时仍有一个可接受的整体安全概况，且未出现新的安全信号。

表5：每个剂量组中治疗相关不良反应(TRAE)总结

表6：所有受试者(n＝36)中常见的(≥20％)与toripalimab治疗相关的不良事件

1.4抗肿瘤活性研究：

研究人员每8周采用RECIST v1.1对临床反应进行评价。截至2018年7月3日，1mg/kg扩增梯队中的1例肢端黑色素瘤患者在接受两剂TORIPALIMAB后，于第15天自愿退出试验，且该患者未进行治疗后的影像学评估。该受试者仍被纳入意向治疗人群进行疗效评价。在所有36个受试者中，观察到1例确认的完全应答(肢端黑色素瘤)，7例确认的部分应答(2个肢端黑素瘤，1个黏膜黑色素瘤，2个UC和2个RCC)，和10例疾病稳定(包括1个未经确认的PR，UC)，客观应答率(ORR)为22.2％(95％CI,10.1-39.2)和疾病控制率为50.0％(95％CI,32.9-67.1)，结果如表7所示。

在每个剂量水平和所有三种癌症类型中均观察到临床响应。1、3、10mg/kg剂量组的最佳客观响应率分别为21.4％(包括1例未经确认的PR)、26.7％和33.3％，同时DCR分别为64.3％、46.7％和33.3％。未观察到明显的剂量相关的临床疗效。7/8的响应受试者至少接受过两次***性治疗。随着时间推移，肿瘤大小(靶病灶直径之和)的变化和从基线开始的最佳响应如图2A的蜘蛛图和2B的瀑布图所示。

应答的中位时间为12周(范围为8至65.7周)。值得注意的是，一名UC受试者在460天内一直保持着稳定的病情，直到获得PR。大多数患者的反应是持续的，持续相应的中位时间为5.6个月(从1.8个月到17.7+个月)。

在13个评估的肢端黑素瘤受试者中，1例证实为CR，2例证实PR，3例SD，ORR为23.1％，DCR为46.2％。同时，在4例黏膜黑色素瘤患者中观察到1例PR和1例SD。4名接受过2-5线前期全身治疗的黑色素瘤患者的反应持续时间分别为8.0、8.4、10.6和17.7+个月。其中1例粘膜黑色素瘤受试者在接受抗PD-1抗体治疗19.5个月后仍有持续反应。

表7：每8周评估一次RECIST v1.1中TORIPALIMAB的临床反应

无进展生存率和总体活率

在2018年7月3日的最后一次随访中，21例受试者死亡，4例受试者失联，11例患者存活。平均无进展生存期为2.8个月(范围0.5到21.9+个月)(图3)。平均总体生存期为12.2个月(范围1.7到27.5+个月)(图4)。所有受试者和黑素瘤亚组的一年生存率均为50.0％。

实施例2：自然杀伤细胞(NK)与抗PD-1抗体***疗效对应关系研究

在实施例1所述的临床试验过程中，对在全血中的T淋巴细胞的频率和激活状态(通过CD45RA染色)进行评估。抗PD-1抗体对于单个受试者外周血中激活的CD8⁺T淋巴细胞的频率影响不大。如图5所示，在PFS大于250天的组中，CD8⁺细胞激活率高的受试者得到了富集。而在Toripalimab治疗前，所有受试者激活的CD8⁺的平均百分比为65％。发现4/5的耐久应答者(PFS>300天)的外周血中有超过80％的激活CD8⁺(占总CD8⁺细胞)和超过26％的CD3^-CD16⁺CD54⁺NK细胞(占总单核细胞)；相反在所有受试者中激活的CD8⁺T细胞和NK细胞的平均百分比分别为65％和20％。

实施例3：生物标记物与临床疗效相关性研究

通过对28例患者肿瘤活检标本进行PD-L1CD8双IHC染色，从而分析肿瘤组织学与抗PD-1抗体在临床疗效上的相关性。采用罗氏公司的兔抗人PD-L1抗体SP142和抗CD8克隆4B11。PD-L1阳性状态被定义为肿瘤细胞存在膜染色强度≥1％。

如图6和图7所示，在肿瘤活检中PD-L1阳性表达的受试者比PD-L1阴性的受试者从TORIPALIMAB治疗中获益更多(43.8％ORR,62.5DCR相比0％ORR,50％DCR)。PD-1表达高的亚群(>50％)对TORIPALIMAB治疗的响应最好，ORR为57.1％，DCR为71.4％。值得注意的是，所有ORR(CR+PR)受试者均为PD-L1和TIL双阳性。在肿瘤活检中发现TILs和PD-L1+细胞共定位(co-localize)，其中93.8％PD-L1阳性肿瘤也存在TILs。同样TIL阳性受试者对TORIPALIMAB治疗的反应也优于TIL阴性受试者(31.8％ORR,59.1％DCR相比0％ORR,50％DCR)(图6)。然而，无论是PD-L1阴性还是TIL阴性的受试者，仍能受益于PD-1阻断治疗，TORIPALIMAB治疗后两组中均有50％获得了疾病控制。

实施例4：基因测序及肿瘤突变负担测定

在实施例1的试验中，我们使用第二代测序技术在FFPE肿瘤和来自24名受试者的配对外周血样本上使用450个癌症相关的基因面板进行全面的基因组测序。肿瘤突变负担(TMB)是通过分析体细胞突变(包括编码基置换和研究的面板序列的巨碱基***)来评估的。如图8所示，除了一名肢端黑色素瘤受试者(17.6个突变/Mb)外，所有受试者的TMB小于10个突变/Mb。TMB水平与临床反应和总体生存率有关(如图8所示)。使用6个突变/Mb作为节点，具有高于6个突变/Mb(n＝12)的受试者比少于6个突变/Mb(n＝12)的受试者获得更好的临床反应(41.7％ORR和58.3％DCR相比16.7％ORR和33.3％DCR)。

如图9所示，基因组图谱还可在肢端黑色素瘤患者(n＝7)中鉴别出独特的基因扩增，包括细胞周期调节蛋白(Cyclin D1,CDK4/6)(5/7))、成纤维细胞生长因子(FGF19/3/4)(3/7)和EMSY(3/7)(图9)。而这种聚集性基因扩增在黏膜或紫外线诱导的皮肤黑色素瘤受试者中并没有观察到。

并且7名肢端黑素瘤受试者中有2人对抗PD-1抗体治疗有反应(1CR和1PR)，并且都存在EMSY基因扩增。

另外，从图9可见，粘膜黑色素瘤受试者中少见DNA突变或基因扩增。

实施例5：抗PD-1抗体联合阿西替尼治疗转移性粘膜性黑色素瘤的临床研究

入组标准：(1)粘膜性黑色素瘤；(2)具有历史或新鲜肿瘤活检；(3)既往无或一次全身化疗；(4)ECOG评分为0-1分。

受试药物：市售阿西替尼片；抗PD-1抗体(WO2014206107)。

给药方式：截止2018年4月2日共筛选入组33例受试者。

第一部分：001-003例给药方式为抗PD-1抗体静脉滴注，3mg/kg，2周/次；阿西替尼口服，5mg，2次/日；004-006例给药方式为抗PD-1抗体静脉滴注，1mg/kg，2周/次；阿西替尼口服，5mg，2次/日。

临床结果：未发现DLT，在97％的受试者中出现与治疗相关的AE，但大多数治疗相关的AE为1级和2级，未发现4级和5级与治疗相关的AE。在6例受试者中发现有18.2％的与治疗相关的3级AE，包括体重减轻、胆固醇增加等，但均未发现有超出两种药物单独给药的新的AE出现。

推荐剂量组合为：抗PD-1抗体静脉滴注，3mg/kg，2周/次；阿西替尼口服，5mg，2次/日。

第二部分：将推荐剂量扩大至30例受试者，入组27例受试者。

007-033例给药方式为抗PD-1抗体静脉滴注，3mg/kg，2周/次；阿西替尼口服，5mg，2次/日。

临床效果：通过IRC，RECIST 1.1疗效标准，每8周评价临床有效性。33例受试者中有20例PR，9例SD，其中ORR为60.65％，DCR为87.9％，且20例PR受试者中有16例受试者持续应答，未达到中位持续应答时间。结果如图10所示。

序列表

<110> 上海君实生物医药科技股份有限公司

苏州君盟生物医药科技有限公司

<120> 抗PD-1抗体在***中的用途

<130> 187222

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Phe Gln Gly Ser His Val Pro Leu Thr

1 5

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Asp Tyr Glu Met His

1 5

<210> 5

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Val Ile Glu Ser Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 6

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Glu Gly Ile Thr Thr Val Ala Thr Thr Tyr Tyr Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10 15

<210> 7

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 8

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Gln Gly Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Ile His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Glu Ser Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Ile Thr Thr Val Ala Thr Thr Tyr Tyr Trp Tyr Phe

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 9

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 10

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

Gln Gly Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Ile His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Glu Ser Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Ile Thr Thr Val Ala Thr Thr Tyr Tyr Trp Tyr Phe

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly Lys

450

Claims (6)

1.抗PD-1抗体和/或其抗原结合片段与VEGFR抑制剂在制备治疗粘膜型黑色素瘤患者的药物中的用途，其中，所述抗PD-1抗体的轻链互补决定区如SEQ ID NO：1、2和3所示，重链互补决定区如SEQ ID NO：4、5和6所示。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗PD-1抗体的轻链可变区如SEQ ID NO：7所示，重链可变区如SEQ ID NO：8所示。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗PD-1抗体为toripalimab。

4.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其特征在于，所述VEGFR抑制剂选自：阿西替尼、舒尼替尼、索拉非尼、阿帕替尼、瑞伐非尼和帕唑帕尼。

5.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其特征在于，所述VEGFR抑制剂为阿西替尼或其药学上可接受的盐。

6.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其特征在于，所述患者为亚洲患者。

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