CN110747158A - 一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了外泌体提取领域的一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺。本发明通过多次离心与沉淀剂结合方法，先通过离心去除细胞以及细胞碎片，通过滤膜，去除大分子的杂质，提高上清液中外泌体的纯度，通过PEG与外泌体的脂质分子层结合，改变外泌体的溶解度或分散性，使外泌体发生沉淀，离心得到初步外泌体，通过初步外泌体与乙醇与***混合溶液混合，去除初步外泌体中少量的低丰度的蛋白质，得到纯度较高的外泌体，通过链霉亲和素沉淀剂与重悬后的纯度较高的外泌体结合，链霉亲和素沉淀剂中的特异性磁性探针与外泌体结合，离心得到沉淀，进而去除低丰度的蛋白质，进一步提高外泌体的纯度。

Description

一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺
技术领域
本发明涉及外泌体提取领域，具体为一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺。
背景技术
外泌体作为旁分泌的一个重要组成部分，它是由各种活体细胞分泌的大小约为30～100nm之间，密度在1.13～1.19g/ml之间的脂质双层膜囊泡状结构小体，与质膜融合后，以胞吐形式释放到细胞外环境中。当外泌体与靶细胞接触后，外泌体及其携带的生物分子(如功能性的脂类、蛋白质，信使RNAs(mRNAs)、microRNAs等分子)以胞吞的形式被接收并发挥作用。大量的研究也发现干细胞可以通过自身的外泌体发挥与细胞相类似的组织修复、免疫抑制调节免疫功能等作用。
目前，外泌体提取主要采取差速离心法和沉淀试剂盒法。差速离心法主要通过低速离心、高速离心交替进行，实现外泌体的提取，该方法虽然操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎，但过程比较费时，且回收率不稳定，纯度也受到质疑，此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量；沉淀试剂盒法主要通过沉淀剂与疏水性蛋白和脂质分子结合形成共沉淀，实现外泌体的提取，该方法虽然操作比较简单、成本较低，但是专一性不高，不仅能沉淀高丰度的蛋白质，也会连同部分低丰度的蛋白质一起沉淀。
基于此，本发明设计了一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，包括如下步骤：
S1、将需提取外泌体的细胞放入培养基中，在36～38℃、3～6％CO2的无菌条件下贴壁培养70～72d；
S2、无菌条件下，取S1培养基上清液0.5～1.0mL并置于2～6℃、1500～2000×g离心10～20min，弃去离心后底部沉淀，获得细胞上清液；
S3、无菌条件下，将S2中的细胞上清液通过0.22μm过滤器后，获得过滤上清液；
S4、无菌条件下，按体积比1:4～8，将S3中的过滤上清液与10～40％PEG溶液摇晃均匀，并在2～6℃静置10～12h后，在2500～3000×g离心20～30min，弃去离心后的上清液，通过倒扣吸收纸法，获得底部沉淀；
S5、无菌条件下，将S3中的底部沉淀加入5mL～7.5mL的PBS溶液(pH7.2～7.4)，进行重悬后，再加入6.0～10.0mg/mL的链霉亲和素沉淀剂0.5～1.0mL，摇晃均匀后，在2～8℃下静置20～30min；
S6、在2～8℃以及无菌条件下，将S5静置后的获得液体在2500～3000×g离心20～30min，弃去上清液，并用磁性架除去磁珠，所得沉淀即为所需的外泌体；
S7、在S6中的外泌体中加入0.5～1.0mLPBS溶液(pH7.2～7.4)，进行重悬后，放入-70～-80℃进行冷藏。
更进一步地，所述S1中培养基选用RPMI1640培养基与DMEM培养基中的一种。
更进一步地，所述S4中的PEG选用PEG6000与PEG8000中的一种。
更进一步地，所述S4中的PEG浓度选用10～40％。
更进一步地，所述S4中的倒扣吸收纸法操作步骤如下：
A、将离心后去除上清液的离心管倒扣在吸水纸上，在2～8℃无菌条件下，风干5～10min；
B、将风干后的底部沉淀中加入0.5～1.0mL的乙醇与***混合溶液(1:1，V/V)，震荡后，在2～6℃、1500～2000×g离心10～20min，弃去离心后上清液，并再次将离心后的离心管倒扣在吸水纸上，并在2～8℃无菌条件下，风干5～10min，获得底部沉淀。
采用上述的技术方案，本发明达到的有益效果是：该发明通过多次离心与沉淀剂结合方法，先通过离心去除细胞以及细胞碎片，通过滤膜，去除大分子的杂质，提高上清液中外泌体的纯度，通过PEG与外泌体的脂质分子层结合，改变外泌体的溶解度或分散性，使外泌体发生沉淀，离心得到初步外泌体，通过初步外泌体与乙醇与***混合溶液混合，去除初步外泌体中少量的低丰度的蛋白质，得到纯度较高的外泌体，通过链霉亲和素沉淀剂与重悬后的纯度较高的外泌体结合，链霉亲和素沉淀剂中的特异性磁性探针与外泌体结合，离心得到沉淀，进而去除低丰度的蛋白质，进一步提高外泌体的纯度。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，包括如下步骤：
S1、将需提取外泌体的细胞放入培养基中，在36℃、5％CO2的无菌条件下贴壁培养70d；
S2、无菌条件下，取S1培养基上清液0.5mL并置于4℃、2000×g离心10min，弃去离心后底部沉淀，获得细胞上清液；
S3、无菌条件下，将S2中的细胞上清液通过0.22μm过滤器后，获得过滤上清液；
S4、无菌条件下，按体积比1:4，将S3中的过滤上清液与20％PEG溶液摇晃均匀，并在2℃静置12h后，在2500×g离心30min，弃去离心后的上清液，通过倒扣吸收纸法，获得底部沉淀；
S5、无菌条件下，将S3中的底部沉淀加入7.5mL的PBS溶液(pH7.3)，进行重悬后，再加入6.0mg/mL的链霉亲和素沉淀剂0.8mL，摇晃均匀后，在2℃下静置27min；
S6、在2℃以及无菌条件下，将S5静置后的获得液体在3000×g离心25min，弃去上清液，并用磁性架除去磁珠，所得沉淀即为所需的外泌体；
S7、在S6中的外泌体中加入1.0mLPBS溶液(pH7.2)，进行重悬后，放入-70℃进行冷藏。
所述S1中培养基选用RPMI1640培养基。
所述S4中的PEG选用PEG6000。
所述S4中的PEG浓度选用30％。
所述S4中的倒扣吸收纸法操作步骤如下：
A、将离心后去除上清液的离心管倒扣在吸水纸上，在6℃无菌条件下，风干10min；
B、将风干后的底部沉淀中加入0.5mL的乙醇与***混合溶液(1:1，V/V)，震荡后，在4℃、1800×g离心15min，弃去离心后上清液，并再次将离心后的离心管倒扣在吸水纸上，并在4℃无菌条件下，风干5min，获得底部沉淀。
实施例2
一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，包括如下步骤：
S1、将需提取外泌体的细胞放入培养基中，在37℃、4％CO2的无菌条件下贴壁培养72d；
S2、无菌条件下，取S1培养基上清液0.6mL并置于6℃、1700×g离心18min，弃去离心后底部沉淀，获得细胞上清液；
S3、无菌条件下，将S2中的细胞上清液通过0.22μm过滤器后，获得过滤上清液；
S4、无菌条件下，按体积比1:6，将S3中的过滤上清液与40％PEG溶液摇晃均匀，并在4℃静置10h后，在3000×g离心26min，弃去离心后的上清液，通过倒扣吸收纸法，获得底部沉淀；
S5、无菌条件下，将S3中的底部沉淀加入5mL的PBS溶液(pH7.4)，进行重悬后，再加入7.0mg/mL的链霉亲和素沉淀剂0.6mL，摇晃均匀后，在4℃下静置24min；
S6、在4℃以及无菌条件下，将S5静置后的获得液体在2500×g离心20min，弃去上清液，并用磁性架除去磁珠，所得沉淀即为所需的外泌体；
S7、在S6中的外泌体中加入0.7mLPBS溶液(pH7.2)，进行重悬后，放入-70℃进行冷藏。
所述S1中培养基选用RPMI1640培养基。
所述S4中的PEG选用PEG6000。
所述S4中的PEG浓度选用20％。
所述S4中的倒扣吸收纸法操作步骤如下：
A、将离心后去除上清液的离心管倒扣在吸水纸上，在2℃无菌条件下，风干8min；
B、将风干后的底部沉淀中加入0.8mL的乙醇与***混合溶液(1:1，V/V)，震荡后，在4℃、2000×g离心10min，弃去离心后上清液，并再次将离心后的离心管倒扣在吸水纸上，并在6℃无菌条件下，风干8min，获得底部沉淀。
实施例3
一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，包括如下步骤：
S1、将需提取外泌体的细胞放入培养基中，在37℃、6％CO2的无菌条件下贴壁培养70d；
S2、无菌条件下，取S1培养基上清液0.8mL并置于2℃、1900×g离心14min，弃去离心后底部沉淀，获得细胞上清液；
S3、无菌条件下，将S2中的细胞上清液通过0.22μm过滤器后，获得过滤上清液；
S4、无菌条件下，按体积比1:7，将S3中的过滤上清液与30％PEG溶液摇晃均匀，并在4℃静置11h后，在2800×g离心24min，弃去离心后的上清液，通过倒扣吸收纸法，获得底部沉淀；
S5、无菌条件下，将S3中的底部沉淀加入6.0mL的PBS溶液(pH7.2)，进行重悬后，再加入9.0mg/mL的链霉亲和素沉淀剂0.5mL，摇晃均匀后，在6℃下静置30min；
S6、在6℃以及无菌条件下，将S5静置后的获得液体在2700×g离心25min，弃去上清液，并用磁性架除去磁珠，所得沉淀即为所需的外泌体；
S7、在S6中的外泌体中加入0.5PBS溶液(pH7.4)，进行重悬后，放入-80℃进行冷藏。
所述S1中培养基选用DMEM培养基。
所述S4中的PEG选用PEG8000。
所述S4中的PEG浓度选用10％。
所述S4中的倒扣吸收纸法操作步骤如下：
A、将离心后去除上清液的离心管倒扣在吸水纸上，在4℃无菌条件下，风干5min；
B、将风干后的底部沉淀中加入0.8mL的乙醇与***混合溶液(1:1，V/V)，震荡后，在6℃、1800×g离心15min，弃去离心后上清液，并再次将离心后的离心管倒扣在吸水纸上，并在2℃无菌条件下，风干8min，获得底部沉淀。
实施例4
一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，包括如下步骤：
S1、将需提取外泌体的细胞放入培养基中，在38℃、3％CO2的无菌条件下贴壁培养72d；
S2、无菌条件下，取S1培养基上清液1.0mL并置于4℃、1500×g离心20min，弃去离心后底部沉淀，获得细胞上清液；
S3、无菌条件下，将S2中的细胞上清液通过0.22μm过滤器后，获得过滤上清液；
S4、无菌条件下，按体积比1:8，将S3中的过滤上清液与10％PEG溶液摇晃均匀，并在6℃静置12h后，在2600×g离心20min，弃去离心后的上清液，通过倒扣吸收纸法，获得底部沉淀；
S5、无菌条件下，将S3中的底部沉淀加入6.5mL的PBS溶液(pH7.3)，进行重悬后，再加入10.0mg/mL的链霉亲和素沉淀剂1.0mL，摇晃均匀后，在8℃下静置20min；
S6、在8℃以及无菌条件下，将S5静置后的获得液体在2900×g离心30min，弃去上清液，并用磁性架除去磁珠，所得沉淀即为所需的外泌体；
S7、在S6中的外泌体中加入0.8mLPBS溶液(pH7.4)，进行重悬后，放入-80℃进行冷藏。
所述S1中培养基选用DMEM培养基。
所述S4中的PEG选用PEG8000。
所述S4中的PEG浓度选用40％。
所述S4中的倒扣吸收纸法操作步骤如下：
A、将离心后去除上清液的离心管倒扣在吸水纸上，在8℃无菌条件下，风干8min；
B、将风干后的底部沉淀中加入1.0mL的乙醇与***混合溶液(1:1，V/V)，震荡后，在2℃、1500×g离心20min，弃去离心后上清液，并再次将离心后的离心管倒扣在吸水纸上，并在8℃无菌条件下，风干10min，获得底部沉淀。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (5)

1.一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，其特征在于：包括如下步骤：
S1、将需提取外泌体的细胞放入培养基中，在36～38℃、3～6％CO2的无菌条件下贴壁培养70～72d；
S2、无菌条件下，取S1培养基上清液0.5～1.0mL并置于2～6℃、1500～2000×g离心10～20min，弃去离心后底部沉淀，获得细胞上清液；
S3、无菌条件下，将S2中的细胞上清液通过0.22μm过滤器后，获得过滤上清液；
S4、无菌条件下，按体积比1:4～8，将S3中的过滤上清液与10～40％PEG溶液摇晃均匀，并在2～6℃静置10～12h后，在2500～3000×g离心20～30min，弃去离心后的上清液，通过倒扣吸收纸法，获得底部沉淀；
S5、无菌条件下，将S3中的底部沉淀加入5mL～7.5mL的PBS溶液(pH7.2～7.4)，进行重悬后，再加入6.0～10.0mg/mL的链霉亲和素沉淀剂0.5～1.0mL，摇晃均匀后，在2～8℃下静置20～30min；
S6、在2～8℃以及无菌条件下，将S5静置后的获得液体在2500～3000×g离心20～30min，弃去上清液，并用磁性架除去磁珠，所得沉淀即为所需的外泌体；
S7、在S6中的外泌体中加入0.5～1.0mLPBS溶液(pH7.2～7.4)，进行重悬后，放入-70～-80℃进行冷藏。
2.根据权利要求1所述的一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，其特征在于：所述S1中培养基选用RPMI1640培养基与DMEM培养基中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，其特征在于：所述S4中的PEG选用PEG6000与PEG8000中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，其特征在于：所述S4中的PEG浓度选用10～40％。
5.根据权利要求1所述的一种基于沉淀试剂法的细胞上清液外泌体提取工艺，其特征在于：所述S4中的倒扣吸收纸法操作步骤如下：
A、将离心后去除上清液的离心管倒扣在吸水纸上，在2～8℃无菌条件下，风干5～10min；
B、将风干后的底部沉淀中加入0.5～1.0mL的乙醇与***混合溶液(1:1，V/V)，震荡后，在2～6℃、1500～2000×g离心10～20min，弃去离心后上清液，并再次将离心后的离心管倒扣在吸水纸上，并在2～8℃无菌条件下，风干5～10min，获得底部沉淀。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112704688A (zh) * 2020-12-02 2021-04-27 焕生汇生物基因技术(北京)有限公司 一种基于自体脂肪干细胞外泌体的生发注射液及制备方法
CN113249302A (zh) * 2021-06-23 2021-08-13 北京求臻医学检验实验室有限公司 一种高效的外泌体分离纯化方法
CN113502256A (zh) * 2021-06-11 2021-10-15 广州市第一人民医院（广州消化疾病中心、广州医科大学附属市一人民医院、华南理工大学附属第二医院） 一种无菌外泌体的提取方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105675774A (zh) * 2016-01-19 2016-06-15 上海交通大学 唾液外泌体的制备方法及其在分子诊断中的应用
CN107007541A (zh) * 2017-05-23 2017-08-04 北京希诺赛尔健康科技推广有限公司 外泌体在皮肤美白制剂中的应用
CN107254430A (zh) * 2017-08-11 2017-10-17 上海浦美生物医药科技有限公司 一种基于正电荷吸附分离外泌体的方法
CN107523536A (zh) * 2017-10-20 2017-12-29 上海市同济医院 一种组织来源外泌体的提取方法及应用
CN107893051A (zh) * 2017-10-11 2018-04-10 北京大学 一种使用免疫磁珠分离血清中外泌体的方法
CN108148809A (zh) * 2017-09-18 2018-06-12 兰州大学 一种从肿瘤细胞上清液中分离外泌体的方法
CN108642004A (zh) * 2018-05-17 2018-10-12 广东芙金干细胞再生医学有限公司 一种外泌体的制备方法及含有外泌体的干细胞增殖试剂
CN108802374A (zh) * 2018-06-25 2018-11-13 中山大学附属第五医院 基于磁富集电化学发光的外泌体核酸检测技术

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105675774A (zh) * 2016-01-19 2016-06-15 上海交通大学 唾液外泌体的制备方法及其在分子诊断中的应用
CN107007541A (zh) * 2017-05-23 2017-08-04 北京希诺赛尔健康科技推广有限公司 外泌体在皮肤美白制剂中的应用
CN107254430A (zh) * 2017-08-11 2017-10-17 上海浦美生物医药科技有限公司 一种基于正电荷吸附分离外泌体的方法
CN108148809A (zh) * 2017-09-18 2018-06-12 兰州大学 一种从肿瘤细胞上清液中分离外泌体的方法
CN107893051A (zh) * 2017-10-11 2018-04-10 北京大学 一种使用免疫磁珠分离血清中外泌体的方法
CN107523536A (zh) * 2017-10-20 2017-12-29 上海市同济医院 一种组织来源外泌体的提取方法及应用
CN108642004A (zh) * 2018-05-17 2018-10-12 广东芙金干细胞再生医学有限公司 一种外泌体的制备方法及含有外泌体的干细胞增殖试剂
CN108802374A (zh) * 2018-06-25 2018-11-13 中山大学附属第五医院 基于磁富集电化学发光的外泌体核酸检测技术

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHUN-YAN LV等: "A PEG-based method for the isolation of urinary exosomes and its application in renal fibrosis diagnostics using cargo miR-29c and miR-21 analysis", 《INT UROL NEPHROL》 *
贺娇等: "外泌体提取方法及鉴定分析研究进展", 《中华实用诊断与治疗杂志》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112704688A (zh) * 2020-12-02 2021-04-27 焕生汇生物基因技术(北京)有限公司 一种基于自体脂肪干细胞外泌体的生发注射液及制备方法
CN113502256A (zh) * 2021-06-11 2021-10-15 广州市第一人民医院（广州消化疾病中心、广州医科大学附属市一人民医院、华南理工大学附属第二医院） 一种无菌外泌体的提取方法
CN113502256B (zh) * 2021-06-11 2023-09-19 广州市第一人民医院（广州消化疾病中心、广州医科大学附属市一人民医院、华南理工大学附属第二医院） 一种无菌外泌体的提取方法
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