CN110716057A - 基于胶乳增强免疫比浊法测定hbp的试剂盒及其制备使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2;反应缓冲液R1包括缓冲液、无机盐、增浊剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂;胶乳试剂R2包括至少两种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种组成液分别包括胶乳保存液以及保存在胶乳保存液中的相应HBP单抗标记的胶乳微球;其中,每种组成液之间的混合比例为1:1。本发明还公开了一种上述基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒的制备使用方法。本发明可在全自动生化分析仪上使用,操作简单、成本低廉,且自动化高、节省检测时间;并且,在高稳定性和高精密度情况下,相比他类产品,本发明具有更高的灵敏度和特异性。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测试剂制备领域,尤其涉及一种基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒及其制备使用方法。
背景技术
肝素结合蛋白(heparin-binding protein,HBP)是中性粒细胞来源的颗粒蛋白,其结构包含222个氨基酸的单链蛋白,含有8个半胱氨酸残基,在第100、114或145位天冬氨酸残基上具有糖基化位点,其结构类似于中性粒细胞弹性蛋白,与其同源性为45%。
HBP主要是由PMN受外界刺激所释放,所以正常人血中HBP含量很低,一般不超过10ng/mL;当有感染发生时,部分细菌侵入到血管内,菌体本身或者细菌释放的毒素等物质刺激中细粒细包释放HBP,从而导致血中HBP含量升高。HBP在一般感染时能达到20-30ng/mL,ICU中严重感染会更高,可能超过100ng/mL。HBP在临床上的具体应用如下:
1)HBP作为局部感染的诊断指标:当脑脊液HBP水平超过20ng/mL时,诊断急性细菌性脑膜炎可以达到100%的敏感性、99.2%的特异性、96.2%的阳性预测值与100%的阴性预测值。因此,脑脊液中HBP水平可以提高区分细菌性和病毒性神经***感染的准确性。
2)HBP辅助诊断尿道感染:U-HBP作为判断***的敏感性和特异性分别是93.3%和90.3%,同时阴性预测值也达到98.3%,但U-HBP的阳性预测值不太理想,只能达到70%,与亚硝酸盐结合起来将是一个很好的生化指标。
3)HBP对感染性休克发生的预测:对比健康人(对照组)和没有伴休克的患者(包括***、肺炎、肠胃炎等局部感染但没有伴休克的患者)的血清中HBP水平,发现组间HBP水平并没有显著差异,而患有非脓毒性休克和脓毒性休克患者之间血清HBP水平却有显著差异;因此,发生感染的病人血中HBP水平不一定显著升高,但发生休克的病人HBP水平一定会显著升高,造成这一现象发生的原因与HBP改变血管通透性密不可分。
4)HBP对败血症中循环衰竭的预测:对伴休克的严重败血症、未伴休克的严重败血症、败血症、感染但未伴全身炎症反应综合征、全身炎症反应综合征但未发生感染这5组血液中HBP、PCT、IL-6、CRP水平以及WBC研究发现,伴休克的严重败血症病人的HBP水平显著高于未伴休克的严重败血症病人,同时这两组病人HBP水平显著高于其他三组病人。目前,临床上将HBP作为严重败血症的标志,其敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别可以达到87.1%、95.1%、88.4%以及94.5%。
5)近期有研究发现肝素结合蛋白可以作为新兴的诊断严重脓毒血症及脓毒血症性休克的早期生物标志物,可以对严重感染患者即将发生的休克进行预测。血液中PCT、HBP和血乳酸水平与脓毒症患者病情严重程度密切相关,通过联合检测PCT、HBP和血乳酸能够提高脓毒症诊断效能,并且能够用来鉴别不同病原菌感染所致的脓毒症,对脓毒症患者早期确诊和病情评估有重要意义。
现有的肝素结合蛋白HBP检测方法以免疫学方法为主,包括免疫荧光层析法和酶联免疫法等。其中,免疫荧光层析法可以实现HBP的快速检测,但是只能进行定性或者半定量的检测,准确度低,无法提供精确的临床判断依据;同时受限于方法本身,其检测的精密度差,使得测试的重复性和一致性不能得到保障。而酶联免疫分析法,虽然可以准确地检测样品中的HBP浓度,但其操作相对复杂,且耗时长,不能满足门诊或者急诊的快速检测的需求。
胶乳増强免疫比独法是一种动态测定抗原抗体结合的检测方法:在特定的稀释***中,抗原抗体发生结合,并且在结合比例合适时,会形成微粒从液相析出;在抗原和抗体结合的前后,会发生浊度的变化;通过全自动生化分析仪检测这种浊度变化,并利用标准品绘制线性曲线,可得出相应样品中待测物质的含量。该方法不需要特殊的仪器,操作上简单便捷。此外,胶乳增强免疫比浊法能够利用胶乳载体增强反应的吸光度,使检测的敏感性大大提高,通过全自动生化分析仪进行检测实现了检测的自动化,更加方便、快捷、节省时间,能够满足临床大样本检测的需求。
发明内容
本发明的主要目的是提出一种基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒及其制备使用方法,旨在解决现有HBP检测方法存在的操作复杂、检测时间长、精密度差、重复性与一致性差的问题。
为实现上述目的,本发明提出一种基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2;
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:缓冲液0.5-5g/L,无机盐10-25g/L,增浊剂15-40g/L,防腐剂0.5-2mL/L,稳定剂25-50g/L,表面活性剂0.5-4mL/L,溶剂为纯化水;
所述胶乳试剂R2包括至少两种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为0.8-1.0m g/mL的相应HBP单抗标记的胶乳微球;所述胶乳保存液包括的成分及相应含量为:缓冲液5-20g/L,无机盐4-15g/L,稳定剂20-90g/L,防腐剂0.2-1.0mL/L,表面活性剂1-5mL/L,溶剂为纯化水;其中,在所述胶乳试剂R2中,每种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。
作为本发明的优选方式之一,在所述反应缓冲液R1中:
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-***啉)乙磺酸缓冲液(MES缓冲液)、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液(MOPSO缓冲液)中的一种;
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种;
所述增浊剂为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一种或多种;
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种或多种;
所述稳定剂为BSA和蔗糖中的一种;
所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。
作为本发明的优选方式之一,所述反应缓冲液R1的pH为7.3-7.7。
作为本发明的优选方式之一,在所述胶乳保存液中:
所述缓冲液为3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液;
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种;
所述稳定剂为BSA、蔗糖、甘露醇中一种或多种;
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中一种或多种;
所述表面活性剂为吐温-20,吐温-80,曲拉通X-100中的一种或多种。
作为本发明的优选方式之一,所述胶乳保存液的pH为7.4-7.7。
作为本发明的优选方式之一,所述HBP单抗标记的胶乳微球中使用的胶乳微球直径为100-300nm。
作为本发明的优选方式之一,所述胶乳试剂R2的制备方法为:
①取固含量为10%的胶乳微球,并加至清洗缓冲液中;离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,并加入活化剂活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球;
②取至少两种HBP单抗,各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀,并进行一定时间的偶联,制取偶联后的胶乳微球;其中,所述活化胶乳微球与各HBP单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),偶联时间为2h;
③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭;封闭结束后,再次离心、去上清,并加入胶乳保存液重悬超声,制取各自的胶乳试剂组成液;然后,将制取的各胶乳试剂组成液混合,即得所需的胶乳试剂R2。
一种上述基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
(1)配制反应缓冲液R1:
按照反应缓冲液R1的组分含量,将各组分物质于同一容器中混合,混合均匀后,制得反应缓冲液R1;
(2)配制胶乳试剂R2:
①取固含量为10%的胶乳微球,并加至清洗缓冲液中;离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,并加入活化剂活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球;
②取至少两种HBP单抗,各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀,并进行一定时间的偶联,制取偶联后的胶乳微球;其中,所述活化胶乳微球与各HBP单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),偶联时间为2h;
③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭;封闭结束后,再次离心、去上清,并加入胶乳保存液重悬超声,制取各自的胶乳试剂组成液;然后,将制取的各胶乳试剂组成液混合,即得所需的胶乳试剂R2。
作为本发明的优选方式之一,在所述步骤①中,所述清洗缓冲液、活化缓冲液与偶联缓冲液均采用磷酸盐缓冲液;所述活化剂采用EDAC/NHS,相应胶乳微粒与活化剂的比例为1:(10-20)(重量比);所述封闭缓冲液采用BSA、甘氨酸中的一种或多种,封闭时间1h。
一种上述基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒的使用方法,包括如下具体步骤:
(1)吸取20μL样本,加入240μL试剂R1,37℃孵育5min;
(2)加入60μL试剂R2,置37℃孵育;
(3)孵育30s后读取吸光值A1;再孵育4.5min,读取吸光值A2;最后,计算ΔA,△A=A2-A1,根据ΔA测算样本中HBP含量。
作为本发明的优选方式之一,本发明中采用的各种HBP单抗抗体均来源于本领域可直接购买得到的常规HBP单抗抗体。
作为本发明的优选方式之一,本发明试剂盒的反应原理:
样本中的肝素结合蛋白与抗人肝素结合蛋白单克隆抗体胶乳颗粒发生抗原抗体反应,在特定波长下检测其吸光度,其变化程度与样本中的HBP含量成正比。
本发明相比现有技术的优点在于:
(1)本发明可在全自动生化分析仪上使用,成本低廉,且自动化高,可节省检测时间,便于临床应用;
(2)相比其他方法,本发明试剂盒利用胶乳增强免疫比浊法测定HBP,不仅操作简单、检测速度快,而且精密度高,重复性与一致性好;
(3)通过本发明方法制备出的试剂盒,可以同时提高检测的灵敏度和特异性,使得试剂盒的线性范围更宽,准确度更高,更好满足临床的需求;
(4)在胶乳增强免疫比浊法应用中,若采用多抗进行标记可以有效提高试剂灵敏度,但会造成特异性不强,使检测结果准确度下降;若采用一株单抗对胶乳进行标记,可以使特异性提高,但灵敏度又会受到影响;针对上述问题,本发明试剂盒中,选择采用至少两株特异性较强的HBP单抗对胶乳进行分别标记,然后混合在一起;其优点在于,首先,避免了多抗造成的特异性不强,使检测结果准确度下降的情况,通过本发明方法制备的试剂在性能评估时准确度很高,相对偏差能控制在5﹪以内,远低于其它检测方法的10-15﹪的要求;其次,避免了一株单抗造成的灵敏度不高的要求,通过本发明方法制备的试剂在性能评估时线性高端能达到300ng/mL,低端检测达到2ng/mL,在试剂性能评估时,线性相关系数R2>0.99。
附图说明
图1是实施例6中基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒的线性范围线性回归图。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明,本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的一种基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2。
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:三羟甲基氨基甲烷缓冲液0.5g/L,氯化钠10g/L,聚乙二醇1000 15g/L,Proclin300 0.5mL/L,BSA 25g/L,吐温-20 0.5mL/L,溶剂为纯化水,pH 7.3。
所述胶乳试剂R2包括两种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在胶乳保存液中、且终浓度为0.8m g/mL的相应HBP单抗标记的胶乳微球。其中,胶乳保存液包括的成分及相应含量为:MOPSO缓冲液5g/L,氯化钠4g/L,BSA 20g/L,Proclin300 0.2mL/L,吐温-20 1mL/L,溶剂为纯化水,pH7.4。
进一步地,在胶乳试剂R2中,每种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。
进一步地,在胶乳试剂R2中,使用的胶乳微球直径为100nm。
实施例2
本实施例的一种基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2。
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:甘氨酸缓冲液或MES缓冲液5g/L,氯化镁或氯化钾25g/L,增浊剂(聚乙二醇2000或聚乙二醇6000 40g/L,硫柳汞2mL/L,蔗糖50g/L,吐温-80 4mL/L,溶剂为纯化水,pH 7.7。
所述胶乳试剂R2包括三种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在胶乳保存液中、且终浓度为1.0m g/mL的相应HBP单抗标记的胶乳微球。其中,胶乳保存液包括的成分及相应含量为:MOPSO缓冲液20g/L,氯化镁或氯化钾15g/L,蔗糖90g/L,硫柳汞1.0mL/L,吐温-80 5mL/L,溶剂为纯化水,pH 7.7。
进一步地,在胶乳试剂R2中,每种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1:1。
进一步地,在胶乳试剂R2中,使用的胶乳微球直径为300nm。
实施例3
本实施例的一种基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2。
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:MOPSO缓冲液2.56g/L,氯化锌或氯化钙15.4g/L,聚乙二醇8000 25g/L,Proclin300,0.8mL/L,BSA 36g/L,曲拉通X-1001.5mL/L,溶剂为纯化水,pH 7.5。
所述胶乳试剂R2包括两种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在胶乳保存液中、且终浓度为0.9m g/mL的相应HBP单抗标记的胶乳微球。其中,胶乳保存液包括的成分及相应含量为:MOPSO缓冲液11.2g/L,氯化锌或氯化钙8.9g/L,甘露醇20-90g/L,Proclin300 0.5mL/L,曲拉通X-1003.5mL/L,溶剂为纯化水,pH 7.6。
进一步地,在胶乳试剂R2中,每种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。
进一步地,在胶乳试剂R2中,使用的胶乳微球直径为150nm。
实施例4
本实施例的一种上述实施例1-3中基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
(1)配制反应缓冲液R1:
按照反应缓冲液R1的组分含量,将各组分物质于同一容器中混合,混合均匀后,用0.22um滤膜过滤,制得反应缓冲液R1。
(2)配制胶乳试剂R2:
清洗:取固含量为10%的胶乳微球0.5mL,并加至3.0mL清洗缓冲液中;20000r/min下离心30min,去上清;用3.0mL活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声。该步骤中,清洗缓冲液和活化缓冲液采用磷酸盐缓冲液。
活化:量取一定量的活化剂加入到上述清洗好的胶乳微粒中,混匀,对胶乳微粒进行活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球。该步骤中,偶联缓冲液采用磷酸盐缓冲液;活化剂采用2%的EDAC 0.1mL或4%NHS 0.2mL,活化时间0.5h;相应胶乳微粒与活化剂的比例为1:(10-20)(重量比)。
偶联:取至少两株经筛选好的特异性强的HBP单抗各自与活化好的胶乳微粒进行偶联,制取偶联后的胶乳微球。该步骤中,活化胶乳微球与各HBP单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),偶联时间为2h。
封闭:偶联时间结束后开始离心,20000r/min下离心30min,去上清;接着,取5.0mL封闭缓冲液对胶乳微粒沉淀物重悬超声,然后进行封闭,封闭时间1h。该步骤中,封闭缓冲液采用BSA、甘氨酸中的一种或多种,优选为1%BSA。
定溶:封闭结束后开始离心,20000r/min下离心30min,去上清;加入40mL胶乳保存液对胶乳微粒进行重悬超声,最后定溶,制取各自的胶乳试剂组成液;最后,将制取的各胶乳试剂组成液按照1:1比例混合,即得所需的胶乳试剂R2。
实施例5
本实施例的一种上述实施例1-3中基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒的使用方法。
检测仪器:日立7180。
温度:37℃。
比色杯:1cm。
分析方法:两点终点法。
测光点:19-34。
主副波长:600/0。
样本量/R1/R2:20uL/240uL/60uL。
反应方向:(+)。
使用步骤:如表1所示。
表1本发明试剂盒的使用步骤
校准方式为样条函数Spline;采用多点校准模式,用纯化水为零点,建立工作曲线。
计算方法:以校准品浓度对相应△A拟合校准曲线,样本浓度值通过校准曲线得出。
实施例6
本实施例用以评价上述实施例中基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒:
(1)线性相关性验证
线性相关系数:在[2.0ng/mL-300.0ng/mL]范围内用接近线性区间下限的低值标本稀释接近线性区间上限的高值标本,混合成至少5个不同浓度(Xi)的标本,每个标本重复测定3次,分别计算测定结果的均值(yi),见表2。以稀释浓度(Xi)为自变量,以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程,按公式(1)计算线性回归的相关系数r,所得结果应符合r≥0.9900。
表2本发明试剂盒的线性相关性比对值
图1是本发明试剂盒的线性范围线性回归图,如图1所示,本试剂盒的直线拟合曲线为:y=0.9888x+0.4202,R2=0.9999R2>0.99,满足临床要求。
(2)精密度、重复性验证
在重复条件下,取(15.0±3.0)ng/mL和(100.0±20.0)ng/mL浓度的样本(质控品、校准品或其他定值样本),用同一批号试剂重复测定10次,分别计算测定值的平均值和标准差,按公式(2)计算批内变异系数(CV),所得结果应CV应≤8.0%。
dn为同水平各次所测值的偏差,计算公式为
xn为同水平各次所测值;
结果如表3所示。
表3本发明试剂盒的重复性检测结果总结表
由表3可以看出,低值样本的CV为6.38%,高值样本的CV为2.6%,均小于8%,满足临床要求。
(3)准确度验证
取高、低两个水平的质控品,按照说明书操作步骤进行测定,用同一批号试剂重复测定3次,测试结果记为(xi),按公式(3)式求出相对偏差(Bi),3次结果均应符合测定值与质控品靶值相对偏差应≤15.0%;如果3次结果中有2次符合要求,1次不符合要求,应重新连续测试20次,并分别按照公式(3)式计算相对偏差(Bi),当大于等于19次结果符合要求,准确度被验证即符合测定值与质控品靶值相对偏差应≤15.0%的要求。
式中:xi为测定结果;
T为靶值。
结果如表4所示。
表4本发明试剂盒的准确度检测结果总结表
从表4可以看出,低值质控的相对偏差为0.7%,高值质控的相对偏差为0.5%,均小于15%,故满足临床要求。
综上所述,本发明提供一种一种基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒及其制备使用方法,能有效的提升HBP检测试剂的灵敏度与特异性。本发明采用了创新的用至少两珠特异性强的单抗通过标记胶乳微粒偶联然后混合在一起的技术来制备检测HBP的试剂盒,实现了上全自动生化仪,自动检测,并有效提高试剂的灵敏度与特异性,具有极高的应用价值与广阔的市场前景。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,其特征在于,包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2;
所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为:缓冲液0.5-5g/L,无机盐10-25g/L,增浊剂15-40g/L,防腐剂0.5-2mL/L,稳定剂25-50g/L,表面活性剂0.5-4mL/L,溶剂为纯化水;
所述胶乳试剂R2包括至少两种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液,每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为0.8-1.0m g/mL的相应HBP单抗标记的胶乳微球;所述胶乳保存液包括的成分及相应含量为:缓冲液5-20g/L,无机盐4-15g/L,稳定剂20-90g/L,防腐剂0.2-1.0mL/L,表面活性剂1-5mL/L,溶剂为纯化水;其中,在所述胶乳试剂R2中,每种通过HBP单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。
2.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,其特征在于,在所述反应缓冲液R1中:
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-***啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种;
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种;
所述增浊剂为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一种或多种;
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种或多种;
所述稳定剂为BSA和蔗糖中的一种;
所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,其特征在于,所述反应缓冲液R1的pH为7.3-7.7。
4.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,其特征在于,在所述胶乳保存液中:
所述缓冲液为3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液;
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种;
所述稳定剂为BSA、蔗糖、甘露醇中一种或多种;
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中一种或多种;
所述表面活性剂为吐温-20,吐温-80,曲拉通X-100中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,其特征在于,所述胶乳保存液的pH为7.4-7.7。
6.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,其特征在于,所述HBP单抗标记的胶乳微球中使用的胶乳微球直径为100-300nm。
7.根据权利要求1-6任一所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒,其特征在于,所述胶乳试剂R2的制备方法为:
①取固含量为10%的胶乳微球,并加至清洗缓冲液中;离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,并加入活化剂活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球;
②取至少两种HBP单抗,各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀,并进行一定时间的偶联,制取偶联后的胶乳微球;其中,所述活化胶乳微球与各HBP单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),偶联时间为2h;
③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭;封闭结束后,再次离心、去上清,并加入胶乳保存液重悬超声,制取各自的胶乳试剂组成液;然后,将制取的各胶乳试剂组成液混合,即得所需的胶乳试剂R2。
8.一种如权利要求1-7任一所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)配制反应缓冲液R1:
按照反应缓冲液R1的组分含量,将各组分物质于同一容器中混合,混合均匀后,制得反应缓冲液R1;
(2)配制胶乳试剂R2:
①取固含量为10%的胶乳微球,并加至清洗缓冲液中;离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,并加入活化剂活化;再次离心,用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声,制得活化胶乳微球;
②取至少两种HBP单抗,各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀,并进行一定时间的偶联,制取偶联后的胶乳微球;其中,所述活化胶乳微球与各HBP单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6),偶联时间为2h;
③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭;封闭结束后,再次离心、去上清,并加入胶乳保存液重悬超声,制取各自的胶乳试剂组成液;然后,将制取的各胶乳试剂组成液混合,即得所需的胶乳试剂R2。
9.根据权利要求8所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒的制备方法,其特征在于,在所述步骤①中,所述清洗缓冲液、活化缓冲液与偶联缓冲液均采用磷酸盐缓冲液;所述活化剂采用EDAC/NHS,相应胶乳微粒与活化剂的比例为1:(10-20);所述封闭缓冲液采用BSA、甘氨酸中的一种或多种,封闭时间1h。
10.一种如权利要求1-7任一所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定HBP的试剂盒的使用方法,其特征在于,包括如下具体步骤:
(1)吸取20μL样本,加入240μL试剂R1,37℃孵育5min;
(2)加入60μL试剂R2,置37℃孵育;
(3)孵育30s后读取吸光值A1;再孵育4.5min,读取吸光值A2;最后,计算ΔA,△A=A2-A1,根据ΔA测算样本中HBP含量。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111596072A (zh) * | 2020-06-11 | 2020-08-28 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定pth的试剂盒及其制备使用方法 |
CN111856026A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-10-30 | 安徽大千生物工程有限公司 | 基于胶乳增强免疫比浊法测定iii c的试剂盒及其制备使用方法 |
CN111999501A (zh) * | 2020-08-20 | 2020-11-27 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定人血清脂蛋白磷脂酶a2试剂盒及其制备和使用方法 |
CN112595853A (zh) * | 2020-12-04 | 2021-04-02 | 安徽大千生物工程有限公司 | 基于重组单克隆抗体制备的il-6免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108008130A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-05-08 | 海格德生物科技(深圳)有限公司 | 基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒及其制备方法 |
CN108152512A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-06-12 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 |
CN108956978A (zh) * | 2018-04-11 | 2018-12-07 | 中翰盛泰生物技术股份有限公司 | 一种应用胶乳免疫比浊法的肝素结合蛋白测定试剂盒及测定方法 |
CN109613259A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-04-12 | 北京贝尔生物工程股份有限公司 | 一种高灵敏度、宽检测范围的人肝素结合蛋白测定试剂盒 |
-
2019
- 2019-11-05 CN CN201911069850.6A patent/CN110716057A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108008130A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-05-08 | 海格德生物科技(深圳)有限公司 | 基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒及其制备方法 |
CN108152512A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-06-12 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 |
CN108956978A (zh) * | 2018-04-11 | 2018-12-07 | 中翰盛泰生物技术股份有限公司 | 一种应用胶乳免疫比浊法的肝素结合蛋白测定试剂盒及测定方法 |
CN109613259A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-04-12 | 北京贝尔生物工程股份有限公司 | 一种高灵敏度、宽检测范围的人肝素结合蛋白测定试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
任玮等: "肝素结合蛋白、降钙素原和白细胞计数在脓毒症早期的临床对比初探", 《国际检验医学杂志》 * |
张国辉: "血液HBP,CRP和WBC联合检测对儿童脓毒血症早期诊断价值研究", 《现代检验医学杂志》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111856026A (zh) * | 2020-02-28 | 2020-10-30 | 安徽大千生物工程有限公司 | 基于胶乳增强免疫比浊法测定iii c的试剂盒及其制备使用方法 |
CN111596072A (zh) * | 2020-06-11 | 2020-08-28 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于胶乳增强免疫比浊法测定pth的试剂盒及其制备使用方法 |
CN111999501A (zh) * | 2020-08-20 | 2020-11-27 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定人血清脂蛋白磷脂酶a2试剂盒及其制备和使用方法 |
CN112595853A (zh) * | 2020-12-04 | 2021-04-02 | 安徽大千生物工程有限公司 | 基于重组单克隆抗体制备的il-6免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
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