CN110609106A - 利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法 - Google Patents

利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110609106A
CN110609106A CN201910871450.0A CN201910871450A CN110609106A CN 110609106 A CN110609106 A CN 110609106A CN 201910871450 A CN201910871450 A CN 201910871450A CN 110609106 A CN110609106 A CN 110609106A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
ion pair
mobile phase
volume
sample
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910871450.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110609106B (zh
Inventor
沈君子
殷红
陈永建
马长雨
孙光财
武晓剑
钱勇
谢天培
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHANGHAI BAINIAN SHIDANDE INSPECTION TECHNOLOGY CO LTD
SHANGHAI NATURE STANDARD BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Shanghai Stunt Standards Technical Services Co Ltd
NINGBO LIWAH PHARMACEUTICAL CO Ltd
Original Assignee
SHANGHAI BAINIAN SHIDANDE INSPECTION TECHNOLOGY CO LTD
SHANGHAI NATURE STANDARD BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Shanghai Stunt Standards Technical Services Co Ltd
NINGBO LIWAH PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHANGHAI BAINIAN SHIDANDE INSPECTION TECHNOLOGY CO LTD, SHANGHAI NATURE STANDARD BIOTECHNOLOGY CO Ltd, Shanghai Stunt Standards Technical Services Co Ltd, NINGBO LIWAH PHARMACEUTICAL CO Ltd filed Critical SHANGHAI BAINIAN SHIDANDE INSPECTION TECHNOLOGY CO LTD
Priority to CN201910871450.0A priority Critical patent/CN110609106B/zh
Publication of CN110609106A publication Critical patent/CN110609106A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110609106B publication Critical patent/CN110609106B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/884—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample organic compounds

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种利用超高效液相色谱‑质谱联用技术同时检测白芍中11种有机磷类农药残留的方法，包括以下步骤：白芍药材用丙酮超声提取，提取溶液置于装有90mg石墨化碳黑的离心管中，涡旋净化，取上清液氮吹至干，加乙腈定容，用超高效液相色谱‑串联质谱在多反应监测模式下检测，基质标准曲线外标法定量。11种有机磷农药在2.5‑200ng/mL范围内线性拟合度高，11种农药在浓度为0.05mg/kg时的回收率在70％‑130％，相对标准偏差≤15％，方法检出限≤0.002mg/kg。该方法快速简便，灵敏度高，精密度高，准确度高，适合于白芍中11种有机磷类农药的分析检测。

Description

利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷 农药残留的方法
技术领域
本发明涉及一种利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法，属于化学分析及检测领域。
背景技术
白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。夏、秋二季采挖，洗净，除去头尾和细根，置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，晒干。白芍具养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳的功能。用于血虚萎黄，***，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕。白芍在种植过程中易感染多种病虫害且发病率高，滥用农药造成了白芍的直接污染，此外，白芍生长周期长(一般3-4年)，土壤和空气中残留的农药容易在植物组织中富集，又会对白芍产生间接污染。
目前对于有机磷农药的检测多采用气相色谱或气相质谱法，其中气相色谱一般联用氮磷检测器(NPD)或火焰光度检测器(FPD)，而NPD或FPD均为专用检测器，使用范围受限，且容易出现假阳性结果；汪佳凤等人通过气相串联质谱法测定白芍中10种有机磷类农药残留，方法检出限均大于0.02mg/kg，且白芍前处理需要用到凝胶渗透色谱仪进行净化，成本高且操作复杂；刘小勤等人通过气相色谱-三重四级杆串联质谱法测定白芍中99种农药残留，该方法可以实现99种农药残留的同时测定，但部分农药的重复性RSD大于15％，重现性差，因此有必要探索出快速进行样品处理且准确定量的检测方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种前处理简单、灵敏度高、精密度高、准确度高的有机磷类农药残留检测方法，同时为中药中有机磷类农药残留分析检测提供新的思路。
为解决上述技术问题，本发明提供的利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药的方法，可以通过下列方法来实现：
(1)溶液的制备：
混合标准品溶液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品适量，配制成含有所述11种有机磷农药标准品的混合标准品溶液；
供试品溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品，经提取、用石墨化炭黑吸附纯化、稀释并定容，得供试品溶液；
基质标准曲线溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品至少五份，按一定梯度分别加入不同体积的混合标准品溶液，然后按所述供试品溶液的制备相同的方法，配制得具有一定浓度梯度的至少五个基质标准曲线溶液；
(2)采用超高效液相色谱-质谱联用技术测定；
色谱条件：色谱柱为Proshell HPH-C18 2.7μm 3x100mm；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为乙腈；流动相B为甲酸铵-甲酸水溶液，其中甲酸铵浓度为8～12mmol/L，甲酸体积百分浓度为0.05～0.2％；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0～20min，流动相A体积百分比由10％递增至75％；20～20.1min，流动相A体积百分比由75％递增至100％；20.1～25min，流动相A体积百分比保持100％；25～25.1min，流动相A体积百分比由100％递减至10％；25.1～30min，流动相A体积百分比保持10％；柱温为30～40℃；进样量为0.5～2μL；流速为0.3～0.5mL/min。
质谱条件：ESI源，质谱多反应监测模式；
(3)数据分析：
将所述至少五个基质标准曲线溶液以及供试品溶液按所述色谱条件和质谱条件依次进样，记录图谱数据；根据至少五个基质标准曲线溶液的峰响应强度数据和浓度数据绘制出11种有机磷农药的基质标准曲线；根据基质标准曲线分别代入供试品溶液的峰响应强度数据分别计算并得出供试品溶液中11种有机磷农药的浓度；
所述11种有机磷农药及其对应的响应峰离子对分别为：甲胺磷，离子对142/125，离子对142/94；久效磷，离子对224.1/193，离子对224.1/127；氧倍硫磷亚砜，离子对279.1/264，离子对279.1/247；氧丰索磷，离子对293.1/237，离子对293.1/281；氧倍硫磷砜，离子对295/217.1，离子对295/104.1；氧丰索磷砜，离子对309.1/281，离子对309.1/253；马拉氧磷，离子对315.1/269，离子对315.1/127；倍硫磷亚砜，离子对295/280，离子对295/109；乙基对氧磷，离子对276.1/248，离子对276.1/220；氧倍硫磷，离子对263/231，离子对263/216；乙基谷硫磷，离子对346.1/289，离子对346.1/261。
具体的，所述混合标准品溶液中，11种有机磷农药标准品的浓度均为1μg/mL。
具体的，所述混合标准品溶液配制时，先用丙酮稀释定容至10μg/mL，再用乙腈稀释定容至1μg/mL。
在一种具体的实施方式中，混合标准品溶液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品各10mg置于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，使11种农药标准品储备液的浓度均为1000μg/mL；农药标准品储备液-18℃保存；取上述1000μg/mL各100μL，用丙酮定容至10mL，稀释到10μg/mL；再取1mL 10μg/mL溶液，加乙腈定容至10mL，得到1μg/mL混合标准品溶液。
具体的，所述供试品溶液配制时，以丙酮为提取溶剂。
具体的，所述供试品溶液配制时，用石墨化炭黑吸附纯化后的上清溶液，除去溶剂后，再用乙腈溶解、稀释定容。
在一种具体的实施方式中，白芍供试品溶液的制备：称取2g白芍供试品置于15mL离心管中，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min；取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min；取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，得到供试品溶液。
在一种具体的实施方式中，白芍基质标准曲线溶液的制备：称取2g白芍供试品七份，置于15mL离心管中，分别加入1μg/mL混合标准品溶液5μL、10μL、20μL、50μL、100μL、200μL、400μL，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL。涡旋混匀，过0.22μm滤膜，得到呈浓度梯度的七个基质标准曲线溶液。其中，具体的，基质标准曲线的浓度梯度为：2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL。
优选的，流动相B为甲酸铵-甲酸水溶液，其中甲酸铵浓度为10mmol/L，甲酸体积百分浓度为0.1％。
优选的，所述色谱条件中，进样量为0.5μL。
优选的，所述色谱条件中，柱温为35℃。
优选的，所述色谱条件中，流速为0.4mL/min。
优选的，所述质谱条件还包括干燥气温度350℃，干燥气流量5L/min，喷雾压力：45psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：11L/min，毛细管电压：3500v。
具体的，所述方法在进行准确度和/或精密度试验时，进样白芍供试品加标溶液。所述白芍供试品加标溶液是通过在供试品溶液配制过程中加入混合标准品溶液配制得到。在一种具体的实施方式中，所述白芍供试品加标溶液的制备方法为：称取2g样品置于15mL离心管中(制备6份)，分别加入1μg/mL混合标准品溶液100μL，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL。涡旋混匀，过0.22μm滤膜，上LC-MS/MS分析。其中，具体的，加标溶液的浓度为0.05mg/kg，本发明的方法回收率在70％～130％，重复性RSD≤15％，中间精密度RSD≤15％。
具体的，所述方法在进行检出限试验时，进样白芍供试品检出限溶液。在一种具体的实施方式中，所述白芍供试品检出限溶液的制备方法为：分别移取基质标准曲线的最低浓度20/50/100/200/500μL，用乙腈定容至1mL，分别制备出浓度分别为0.005/0.125/0.25/0.5/1.25ppb的低浓度供试品检出限溶液，分别进样六针，以基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法LOD＝3.3δ/S确定检出限。其中，本发明的方法检出限均低于0.002mg/kg。
本发明提供的11种有机磷类农药残留的检测方法具有下列优点：(1)前处理简单(2)灵敏度高(3)精密度高(4)准确度高，适合于白芍中11种有机磷类农药残留的分析检测。
有机磷类农药残留检测大多采用气相色谱法或气相质谱法，气相色谱法灵敏度高，但前处理复杂，且需要专用的氮磷检测器或火焰光度检测器来进行专门的检测，过程比较繁琐；气相质谱法检测有机磷类农药灵敏度低，且部分农药的重复性差，本发明采用丙酮直接提取白芍中的11种有机磷农药，结合石墨化碳黑对提取溶液进行净化，并利用超高效液相色谱-质谱联用技术进行检测，解决了气相色谱法或气相质谱法检测有机磷类农药所存在的以上问题。
本发明的方法可同时检测白芍中11种有机磷农药残留，检测效率高，30min即可得出检测结果。
本发明的方法用于11种有机磷农药残留的基质标准曲线线性好，定量准确，相关系数R2均大于0.98。其中，除氧倍硫磷之外的其它10种有机磷农药残留的相关系数R2均大于0.99；其中6种有机磷农药残留的相关系数R2大于0.999。
本发明的方法重复性好，考察不同日期、不同分析人员对精密度的影响，两个检测人员用对重复性下浓度的各6份平行进行检测，12次重复的相对标准偏差(RSD)不大于15％。
本发明的方法用于11种有机磷农药残留的检出限低，可有效检测出有机磷农药残留浓度低至0.002mg/kg的白芍样品，对其中部分有机磷农药残留的检出限可低至0.0005mg/kg。
附图说明
图1-1为本发明方法实施例1中的专属性对应的空白溶剂图。
图1-2为本发明方法实施例1中的专属性对应的400ng/mL混合对照品图。
图1-3为本发明方法实施例1中的专属性对应的空白供试品溶液图。
图1-4为本发明方法实施例1中的专属性对应的供试品加标溶液图。
图2位本发明方法实施例2中的不同进样量对应的理论塔板数比较图。
图3-1为本发明方法实施例3中不同填料条件下甲胺磷的回收率比较图。
图3-2为本发明方法实施例3中不同填料条件下久效磷的回收率比较图。
图3-3为本发明方法实施例3中不同填料条件下氧倍硫磷亚砜的回收率比较图。
图3-4为本发明方法实施例3中不同填料条件下氧丰索磷的回收率比较图。
图3-5为本发明方法实施例3中不同填料条件下氧倍硫磷砜的回收率比较图。
图3-6为本发明方法实施例3中不同填料条件下氧丰索磷砜的回收率比较图。
图3-7为本发明方法实施例3中不同填料条件下马拉氧磷的回收率比较图。
图3-8为本发明方法实施例3中不同填料条件下倍硫磷亚砜的回收率比较图。
图3-9为本发明方法实施例3中不同填料条件下乙基对氧磷的回收率比较图。
图3-10为本发明方法实施例3中不同填料条件下氧倍硫磷的回收率比较图。
图3-11为本发明方法实施例3中不同填料条件下乙基谷硫磷(益棉磷)的回收率比较图。图4-1为本发明方法实施例4中甲胺磷的基质标准曲线。
图4-2为本发明方法实施例4中久效磷的基质标准曲线。
图4-3为本发明方法实施例4中氧倍硫磷亚砜的基质标准曲线。
图4-4为本发明方法实施例4中氧丰索磷的基质标准曲线。
图4-5为本发明方法实施例4中氧倍硫磷砜的基质标准曲线。
图4-6为本发明方法实施例4中氧丰索磷砜的基质标准曲线。
图4-7为本发明方法实施例4中马拉氧磷的基质标准曲线。
图4-8为本发明方法实施例4中倍硫磷亚砜的基质标准曲线。
图4-9为本发明方法实施例4中乙基对氧磷的基质标准曲线。
图4-10为本发明方法实施例4中氧倍硫磷的基质标准曲线。
图4-11为本发明方法实施例4中乙基谷硫磷(益棉磷)的基质标准曲线。
图5-1为本发明方法实施例5中甲胺磷的方法检出限质谱图。
图5-2为本发明方法实施例5中久效磷的方法检出限质谱图。
图5-3为本发明方法实施例5中氧倍硫磷亚砜的方法检出限质谱图。
图5-4为本发明方法实施例5中氧丰索磷的方法检出限质谱图。
图5-5为本发明方法实施例5中氧倍硫磷砜的方法检出限质谱图。
图5-6为本发明方法实施例5中氧丰索磷砜的方法检出限质谱图。
图5-7为本发明方法实施例5中马拉氧磷的方法检出限质谱图。
图5-8为本发明方法实施例5中倍硫磷亚砜的方法检出限质谱图。
图5-9为本发明方法实施例5中乙基对氧磷的方法检出限质谱图。
图5-10为本发明方法实施例5中氧倍硫磷的方法检出限质谱图。
图5-11为本发明方法实施例5中乙基谷硫磷(益棉磷)的方法检出限质谱图。
具体实施方式
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：专属性的考察
11种有机磷农药储备液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品各10mg置于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，使11种农药标准品储备液的浓度均为1000μg/mL，农药标准品储备液-18℃保存；
1μg/mL混合对照品溶液的制备：取上述1000μg/mL各100μL，用丙酮定容至10mL，得到10μg/mL混合标准品溶液的制备；取1mL10μg/mL混合标准品溶液，加乙腈定容至10mL，得到1μg/mL混合标准品溶液，具体见附表1；
400ng/mL混合对照品溶液的制备：取上述1μg/mL混合对照品溶液400μL，加入乙腈溶解并定容至1mL，制得400ng/mL混合对照品溶液；
白芍供试品溶液的制备：称取2g样品置于15mL离心管中，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，上LC-MS/MS分析；
白芍供试品加标溶液的制备：称取2g样品置于15mL离心管中，分别加入1μg/mL混合标准品溶液100μL，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，上LC-MS/MS分析；
色谱条件：色谱柱：Proshell HPH-C18 2.7μm 3x100mm；流动相：乙腈-0.1％甲酸(含10mmol/L甲酸铵)梯度洗脱，0～20min保持10％-75％乙腈，20.1～25min100％乙腈，25.1～30min10％乙腈；柱温为35℃；进样量；0.5μL；流速：0.4mL/min；
质谱条件：ESI源，MRM模式，干燥气温度350℃，干燥气流量5L/min，喷雾压力：45psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：11L/min，毛细管电压：3500v，具体母离子、子离子及碎裂电压见附表2。
结果：按照上述方法对空白溶剂、400ng/mL对照品混标溶液、空白样品制备的供试品溶液、供试品加标溶液进行分析和比对，结果见图1-1～1-4；结果表明，采用MRM模式下空白溶液、空白样品无干扰，该方法能够明确评估白芍饮片中的11种有机磷农药。
表1 11种对照品配制信息
表2 11种化合物多反应监测离子对、碰撞电压参考值
实施例2：进样量的考察
11种有机磷农药储备液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品各10mg置于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，使11种农药标准品储备液的浓度均为1000μg/mL，农药标准品储备液-18℃保存；
1μg/mL混合标准品溶液的制备：取上述1000μg/mL各100μL，用丙酮定容至10mL，得到10μg/mL混合标准品溶液的制备；取1mL10μg/mL混合标准品溶液，加乙腈定容至10mL，得到1μg/mL混合标准品溶液，具体见附表1；
50ng/mL混合标准品溶液的制备：取上述1μg/mL50μL，用乙腈至1mL，得到50ng/mL混合标准品溶液；
色谱条件：色谱柱：Proshell HPH-C18 2.7μm 3x100mm；流动相：乙腈-0.1％甲酸(含10mmol/L甲酸铵)梯度洗脱，0～20min保持10％-75％乙腈，20.1～25min100％乙腈，25.1～30min10％乙腈；柱温为35℃；进样量；0.5μL；流速：0.4mL/min；
质谱条件：ESI源，MRM模式，干燥气温度350℃，干燥气流量5L/min，喷雾压力：45psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：11L/min，毛细管电压：3500v，具体母离子、子离子及碎裂电压见附表2。
测定法：在不同进样量0.5μL、1μL、2μL条件下，比较50ng/mL混标中每个化合物的理论塔板数及拖尾因子。
结果：当进样量为0.5μL、1μL时，多数化合物的理论塔板数高于2μL进样量，综合考虑到后续供试品溶液中会有基质影响，选择0.5μL作为最佳进样量，见附图2。
实施例3：净化填料的考察
11种有机磷农药储备液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品各10mg置于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，使11种农药标准品储备液的浓度均为1000μg/mL，农药标准品储备液-18℃保存；
1μg/mL混合标准品溶液的制备：取上述1000μg/mL各100μL，用丙酮定容至10mL，得到10μg/mL混合标准品溶液的制备；取1mL10μg/mL混合标准品溶液，加乙腈定容至10mL，得到1μg/mL混合标准品溶液，具体见附表1；
色谱条件：色谱柱：Proshell HPH-C18 2.7μm 3x100mm；流动相：乙腈-0.1％甲酸(含10mmol/L甲酸铵)梯度洗脱，0～20min保持10％-75％乙腈，20.1～25min100％乙腈，25.1～30min10％乙腈；柱温为35℃；进样量；0.5～2μL；流速：0.4mL/min；
质谱条件：ESI源，MRM模式，干燥气温度350℃，干燥气流量5L/min，喷雾压力：45psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：11L/min，毛细管电压：3500v，具体母离子、子离子及碎裂电压见附表2。
测定法：分别称取表3中不同填料至15mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入6mL丙酮，分别加入混合对照溶液(1000ppb)100μL，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液，置氮吹仪上于40℃水浴氮吹至干，加乙腈定容至1mL，涡旋混匀，用微孔滤膜(0.22μm)滤过，取续滤液，即得，以不加填料的空白作为对照，计算不同填料的回收率。
结果：当填料为900mg无水硫酸镁时，11种化合物的回收率范围为24％～101％，当填料为300mgPSA时，11种化合物的回收率范围为20％～104％，当填料为300mgC18时，11种化合物的回收率范围为22％～119％，当填料为300mg硅胶1时，11种化合物的回收率范围为77％～114％，当填料为300mg硅胶2时，11种化合物的回收率范围为37％～126％，当填料为90mg石墨化炭黑时，11种化合物的回收率范围为71％～111％，当填料为900mg无水硫酸镁加300mg硅胶1时，11种化合物的回收率范围为28％～92％，当填料为表3中前6种填料的混合填料时，11种化合物的回收率范围为12％～77％，当填料为购买的农残净化管时，11种化合物的回收率范围为38％～59％；从以上结果可知，单一填料的回收率优于混合填料；从不同填料的比对结果来看，300mg硅胶1与90mg石墨化炭黑的回收率相对较高，由于石墨化炭黑既可以吸附非极性和弱极性的化合物又可以吸附极性化合物，对化合物表现出很广的吸附，因此选用90mg石墨化炭黑作为净化填料。11种化合物用不同填料净化的回收率比较图见附图3-1～3-11。
表3不同填料及质量
实施例4：基质标准曲线及准确度、精密度的考察
11种有机磷农药储备液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品各10mg置于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，使11种农药标准品储备液的浓度均为1000μg/mL，农药标准品储备液-18℃保存；
1μg/mL混合标准品溶液的制备：取上述1000μg/mL各100μL，用丙酮定容至10mL，得到10μg/mL混合标准品溶液的制备；取1mL10μg/mL混合标准品溶液，加乙腈定容至10mL，得到1μg/mL混合标准品溶液，具体见附表1；
白芍基质标准曲线溶液的制备：称取2g样品置于15mL离心管中，分别加入1μg/mL混合标准品溶液5/10/20/50/100/200/400μL，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，上LC-MS/MS分析；
白芍供试品溶液的制备：称取2g样品置于15mL离心管中，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，上LC-MS/MS分析；
白芍供试品加标溶液的制备：称取2g样品置于15mL离心管中(制备6份)，分别加入1μg/mL混合标准品溶液100μL，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，上LC-MS/MS分析；
色谱条件：色谱柱：Proshell HPH-C18 2.7μm 3x100mm；流动相：乙腈-0.1％甲酸(含10mmol/L甲酸铵)梯度洗脱，0～20min保持10％-75％乙腈，20.1～25min100％乙腈，25.1～30min10％乙腈；柱温为35℃；进样量；0.5～2μL；流速：0.4mL/min；
质谱条件：ESI源，MRM模式，干燥气温度350℃，干燥气流量5L/min，喷雾压力：45psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：11L/min，毛细管电压：3500v，具体母离子、子离子及碎裂电压见附表2。
测定法：绘制标准浓度与信号强度的曲线，计算相关系数R2，计算回收率及重复性RSD；在不同时间，由不同人员用同样的上述方法进行比对，测试方法的中间精密度。
结果：该方法在覆盖样品制备的溶液中农药浓度的范围内具有良好的线性，详见下表4，11种化合物的基质校准曲线见附图4-1～4-11。每种农药的平均回收率详见下表，回收率范围为83％～124％。每种农药的相对标准偏差详见下表，均符合验收标准≤15％。本次验证考察不同日期、不同分析人员对精密度的影响，两个检测人员用对重复性下浓度的各6份平行进行检测，12次重复的相对标准偏差(RSD)不大于15％，结果见表5。
表4基质标准曲线及重复性、回收率结果
表5不同日期、不同分析人员准确度和精密度结果
实施例5：检出限的考察
11种有机磷农药储备液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品各10mg置于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，使11种农药标准品储备液的浓度均为1000μg/mL，农药标准品储备液-18℃保存；
1μg/mL混合标准品溶液的制备：取上述1000μg/mL各100μL，用丙酮定容至10mL，得到10μg/mL混合标准品溶液的制备；取1mL10μg/mL混合标准品溶液，加乙腈定容至10mL，得到1μg/mL混合标准品溶液，具体见附表1；
白芍方法检出限溶液的制备：称取2g样品置于15mL离心管中，分别加入1μg/mL混合标准品溶液5μL，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，分别移取上述溶液20/50/100/200/500μL，用乙腈定容至1mL，分别制备出浓度分别为0.005/0.125/0.25/0.5/1.25ppb的低浓度标准曲线。
色谱条件：色谱柱：Proshell HPH-C18 2.7μm 3x100mm；流动相：乙腈-0.1％甲酸(含10mmol/L甲酸铵)梯度洗脱，0～20min保持10％-75％乙腈，20.1～25min100％乙腈，25.1～30min10％乙腈；柱温为35℃；进样量；0.5～2μL；流速：0.4mL/min；
质谱条件：ESI源，MRM模式，干燥气温度350℃，干燥气流量5L/min，喷雾压力：45psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：11L/min，毛细管电压：3500v，具体母离子、子离子及碎裂电压见附表2。
测定法：分别进样六针，以基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法LOD＝3.3δ/S相应浓度确定检出限。
结果：每种农药的检出限均低于0.002mg/kg，每种化合物的检出限详下表6及见附图5-1～5-11。
表6白芍饮片中11种有机磷农药残留方法检出限
实施例6一未知样品进行定量检测
11种有机磷农药储备液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品各10mg置于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，使11种农药标准品储备液的浓度均为1000μg/mL，农药标准品储备液-18℃保存；
1μg/mL混合标准品溶液的制备：取上述1000μg/mL各100μL，用丙酮定容至10mL，得到10μg/mL混合标准品溶液的制备；取1mL10μg/mL混合标准品溶液，加乙腈定容至10mL，得到1μg/mL混合标准品溶液，具体见附表1；
白芍基质标准曲线溶液的制备：称取2g样品置于15mL离心管中，分别加入1μg/mL混合标准品溶液5/10/20/50/100/200/400μL，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，上LC-MS/MS分析；
白芍供试品溶液的制备：称取2g样品(样品批号：P1712003)置于15mL离心管中，加入10mL丙酮，涡旋混匀，超声10min，4000r/min离心5min，取上清液，置于装有90mg石墨化炭黑的离心管中，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液置于氮吹仪上40℃氮吹至干，加乙腈定容至2mL，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，上LC-MS/MS分析；
结果：P1712003批次白芍样品中11种有机磷类农药均未检出，具体见下表7。
表7白芍饮片(P1712003)中11种有机磷农药残留检测结果
(注意：N.D代表未检出)
综上所述，上述各实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)溶液的制备：
混合标准品溶液的制备：分别称取11种有机磷农药标准品适量，配制成含有所述11种有机磷农药标准品的混合标准品溶液；
供试品溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品，经提取、用石墨化炭黑吸附纯化、稀释并定容，得供试品溶液；
基质标准曲线溶液的制备：精密称取适量白芍粉末供试品至少五份，按一定梯度分别加入不同体积的混合标准品溶液，然后按所述供试品溶液的制备相同的方法，配制得具有一定浓度梯度的至少五个基质标准曲线溶液；
(2)采用超高效液相色谱-质谱联用技术测定；
色谱条件：色谱柱为ProshellHPH-C18 2.7μm 3x100mm；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为乙腈；流动相B为甲酸铵-甲酸水溶液，其中甲酸铵浓度为8～12mmol/L，甲酸体积百分浓度为0.05～0.2％；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0～20min，流动相A体积百分比由10％递增至75％；20～20.1min，流动相A体积百分比由75％递增至100％；20.1～25min，流动相A体积百分比保持100％；25～25.1min，流动相A体积百分比由100％递减至10％；25.1～30min，流动相A体积百分比保持10％；柱温为30～40min℃；进样量为0.5～2μL；流速为0.3～0.5mL/min；
质谱条件：ESI源，质谱多反应监测模式；
(3)数据分析：
将所述至少五个基质标准曲线溶液以及供试品溶液按所述色谱条件和质谱条件依次进样，记录图谱数据；根据至少五个基质标准曲线溶液的峰响应强度数据和浓度数据绘制出11种有机磷农药的基质标准曲线；根据基质标准曲线分别代入供试品溶液的峰响应强度数据分别计算并得出供试品溶液中11种有机磷农药的浓度；
所述11种有机磷农药及其对应的响应峰离子对分别为：甲胺磷，离子对142/125，离子对142/94；久效磷，离子对224.1/193，离子对224.1/127；氧倍硫磷亚砜，离子对279.1/264，离子对279.1/247、氧丰索磷，离子对293.1/237，离子对293.1/281、氧倍硫磷砜，离子对295/217.1，离子对295/104.1、氧丰索磷砜，离子对309.1/281，离子对309.1/253、马拉氧磷，离子对315.1/269，离子对315.1/127；倍硫磷亚砜，离子对295/280，离子对295/109；乙基对氧磷，离子对276.1/248，离子对276.1/220；氧倍硫磷，离子对263/231，离子对263/216；乙基谷硫磷，离子对346.1/289，离子对346.1/261。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合标准品溶液中，11种有机磷农药标准品的浓度均为1μg/mL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合标准品溶液配制时，先用丙酮稀释定容至10μg/mL，再用乙腈稀释定容至1μg/mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液配制时，以丙酮为提取溶剂。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液配制时，用石墨化炭黑吸附纯化后的上清溶液，除去溶剂后，再用乙腈溶解、稀释定容。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基质标准曲线溶液为七个，浓度梯度为：2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流动相B为甲酸铵-甲酸水溶液，其中甲酸铵浓度为10mmol/L，甲酸体积百分浓度为0.1％。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，进样量为0.5μL。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，柱温为35℃。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，流速为0.4mL/min。
CN201910871450.0A 2019-09-16 2019-09-16 利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法 Active CN110609106B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910871450.0A CN110609106B (zh) 2019-09-16 2019-09-16 利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910871450.0A CN110609106B (zh) 2019-09-16 2019-09-16 利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110609106A true CN110609106A (zh) 2019-12-24
CN110609106B CN110609106B (zh) 2021-08-17

Family

ID=68891297

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910871450.0A Active CN110609106B (zh) 2019-09-16 2019-09-16 利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110609106B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111151222A (zh) * 2020-03-06 2020-05-15 福州海关技术中心 一种磁性复合吸附材料的制备及在茶叶多农残检测中的应用
CN111707768A (zh) * 2020-07-03 2020-09-25 宁波立华制药有限公司 利用气相色谱-质谱联用技术检测白芍总苷原料药中22种有机氯农药残留的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5177019A (en) * 1991-05-20 1993-01-05 Eastman Kodak Company Method of quantitative analysis of organophosphorus compounds
US20100087526A1 (en) * 2008-04-07 2010-04-08 Nararius Saah Lamango Inhibitors of polyisoprenylated methylated protein methyl esterase
CN101832991A (zh) * 2010-05-20 2010-09-15 中国农业大学 一种利用石墨烯检测水体中有机磷农药残留的方法
CN103901137A (zh) * 2012-12-28 2014-07-02 中粮营养健康研究院有限公司 检测有机磷类农药中茶叶的前处理方法及其应用以及检测茶叶中有机磷类农药的方法
CN105675742A (zh) * 2015-04-19 2016-06-15 盐城市农产品质量监督检验测试中心 蔬果中农药残留定量检测快速前处理方法
CN106918656A (zh) * 2015-12-28 2017-07-04 天士力制药集团股份有限公司 一种检测益心复脉颗粒中153种农药残留的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5177019A (en) * 1991-05-20 1993-01-05 Eastman Kodak Company Method of quantitative analysis of organophosphorus compounds
US20100087526A1 (en) * 2008-04-07 2010-04-08 Nararius Saah Lamango Inhibitors of polyisoprenylated methylated protein methyl esterase
CN101832991A (zh) * 2010-05-20 2010-09-15 中国农业大学 一种利用石墨烯检测水体中有机磷农药残留的方法
CN103901137A (zh) * 2012-12-28 2014-07-02 中粮营养健康研究院有限公司 检测有机磷类农药中茶叶的前处理方法及其应用以及检测茶叶中有机磷类农药的方法
CN105675742A (zh) * 2015-04-19 2016-06-15 盐城市农产品质量监督检验测试中心 蔬果中农药残留定量检测快速前处理方法
CN106918656A (zh) * 2015-12-28 2017-07-04 天士力制药集团股份有限公司 一种检测益心复脉颗粒中153种农药残留的方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIACHUN LI ET AL: "Simultaneous determination of 35 ultra-trace level organophosphorus pesticide residues in Sanjie Zhentong capsules of traditional Chinese medicine using ultra high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry", 《J. SEP. SCI.》 *
JIE LIU ET AL: "Comparison of two extraction methods for the determination of 135 pesticides in Corydalis Rhizoma, Chuanxiong Rhizoma and Angelicae Sinensis Radix by liquid chromatography-triple quadrupole-mass spectrometry.", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 *
LINA CHEN ET AL: "Multi-residue method for fast determination of pesticide residues in plants used in traditional chinese medicine by ultra-high-performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *
YING WANG ET AL: "Determination of 195 pesticide residues in Chinese herbs by gas chromatography–mass spectrometry using analyte protectants", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *
刘小勤 等: "气相色谱－三重四极杆串联质谱法测定白芍中 99 种农药残留", 《色谱》 *
李爱军 等: "气相色谱-质谱法测定动物源食品中10种有机磷农药残留量", 《理化检验(化学分册)》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111151222A (zh) * 2020-03-06 2020-05-15 福州海关技术中心 一种磁性复合吸附材料的制备及在茶叶多农残检测中的应用
CN111707768A (zh) * 2020-07-03 2020-09-25 宁波立华制药有限公司 利用气相色谱-质谱联用技术检测白芍总苷原料药中22种有机氯农药残留的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110609106B (zh) 2021-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110609106B (zh) 利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中11种有机磷农药残留的方法
CN110187041B (zh) 一种痰热清注射液指纹图谱的建立方法
CN116429943A (zh) 一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法
Von Minden et al. Simultaneous determination of ***e and benzoylecgonine in urine by gas-liquid chromatography
CN110045037A (zh) 一种检测干血斑中尼洛替尼药物浓度的试剂盒及检测方法
CN116183805B (zh) 一种桑菊感冒颗粒成分的检测和评价方法
CN117250288A (zh) 一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法和应用
CN111337610B (zh) 一种复杂环境基质中痕量***、壬基酚及双酚a的检测方法
KR100902571B1 (ko) 액체크로마토그래피를 이용한 디메틸암페타민 및 암페타민 유도체의 다성분 동시분석방법
CN114216980B (zh) 一种银柴胡hplc-elsd指纹图谱建立方法
CN111707768B (zh) 检测白芍总苷原料药中22种有机氯农药残留的方法
Dahlström et al. Simultaneous determination of codeine and morphine in biological samples by gas chromatography with electron capture detection
CN112611814B (zh) 一种干血片中1,5-脱水葡萄糖醇的测定方法
CN114544816A (zh) 一种小柴胡胶囊糖类成分的定量指纹图谱检测方法
Pellizzari et al. An evaluation of the gas chromatographic analysis of plasma amino acids
CN112362724A (zh) 一种快速检测人体尿液中3,4-亚甲基二氧甲基***含量的方法
CN112782326A (zh) 同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法
CN109324139A (zh) 一种烟叶中玉米素核苷液液萃取-液相色谱-串联质谱的测定方法
CN117347532B (zh) 归知糖疽颗粒制剂的hplc特征图谱的检测方法
CN114910578B (zh) 一种葡萄籽提取物中原花青素c1的测定方法
CN111537593B (zh) 一种延胡索提取液中延胡索乙素和四氢小檗碱手性对映体含量测定的方法
CN109541104B (zh) 一种半夏糖浆中半夏的鉴别方法
CN108398499B (zh) 一种化妆品中贝美格及其盐类的测定方法
CN117630187A (zh) 补肾填精制剂中生物碱的测定方法
CN115236238A (zh) 一种血浆中牡荆素和异牡荆素的液相色谱串联质谱检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant