CN110483550A - 一种含三甲氧基苯基吴茱萸碱衍生物及其应用 - Google Patents

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CN110483550A CN201910830205.5A CN201910830205A CN110483550A CN 110483550 A CN110483550 A CN 110483550A CN 201910830205 A CN201910830205 A CN 201910830205A CN 110483550 A CN110483550 A CN 110483550A
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彭怡娇
赵婧铎
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Abstract

本发明对吴茱萸碱类化合物进行修饰以及优化，将苯三甲氧基引入吴茱萸碱骨架，通过酰胺键链接吴茱萸碱及其衍生物，开展体内外抗肿瘤活性筛选实验，合成了一系列含三甲氧基苯基吴茱萸碱衍生物，筛选出高效低毒性的抗肿瘤候选药物，拓宽了现有抗癌化合物的范围，可作为先导化合物继续优化；同时本发明的化合物毒副作用小，在抑制癌细胞生长的同时，对人体正常细胞无抑制活性，用药更为安全。

Description

一种含三甲氧基苯基吴茱萸碱衍生物及其应用
技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种含三甲氧基苯基吴茱萸碱衍生物、其制备方法及其用途。
背景技术
癌症是当今世界上主要死亡原因之一。在过去几十年中，化学疗法被认为是提高肿瘤患者存活率最有效的方法。然而，抗癌治疗中的许多化疗药物具有疗效差、毒副作用大等缺点，使其临床应用受到限制。因此，寻找高效低毒的抗癌药物是人类健康面临的最大挑战和迫切需求。
吴茱萸碱(evodiamine)是从芸香科吴茱萸属(Euodia)植物中分离得到的吲哚喹唑酮类生物碱化合物。吴茱萸碱是一种淡黄色针状结晶，不溶于水，易溶于二氯甲烷、氯仿，可溶于甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂。对多种肿瘤细胞均有抑制作用。吴茱萸碱具有抗肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞微管的形成与侵袭，诱导肿瘤细胞凋亡与坏死，增强细胞自噬，是良好的拓扑异构酶抑制剂。研究表明，吴茱萸碱对***细胞、人白血病细胞、肝癌细胞、黑色素瘤细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞等均有一定的抑制作用，其药理活性研究也十分深入，对吴茱萸碱抗肿瘤作用机制的研究也逐渐成为热点。其作用机制可能是抑制PI3K/Akt/caspase、Fas-L/NF-κB信号通路等。随着对吴茱萸碱药理作用研究的深入，吴茱萸碱引起了国内外科学家的极大兴趣，开展了对吴茱萸碱衍生物的合成工作。目的是获得活性更好、毒性更低、性质更稳定的抗肿瘤候选化合物。
现有技术报道了对吴茱萸碱进行了***的结构优化和构效关系研究，开发了一系列具有抗肿瘤活性的吴茱萸碱衍生物。盛春泉等(CN101787025A，CN103992336A，CN105524061A，CN105418610A)通过在吴茱萸碱的N上引入取代基以及在吴茱萸碱骨架的10-位引入羟基，得到了一系列具备抗肿瘤和抗真菌活性的吴茱萸碱衍生物；徐进宜等(CN107365322A)利用骨架跃迁原理，对吴茱萸碱的骨架进行结构修饰，得到了一系列具有抗肿瘤活性的吴茱萸碱衍生物；罗海彬等(CN 107141288 A)通过对吴茱萸碱苯环上的取代基进行结构修饰，得到了一系列具有抗肿瘤活性的吴茱萸碱衍生物；李达翃等将吴茱萸碱的N-13位拼合氮芥衍生物，得到了一系列具有抗肿瘤活性的吴茱萸碱衍生物。
肿瘤的生长与生存均需由血管提供充足的氧气和养分，并排除代谢废物，因此，肿瘤血管靶向疗法应运而生，成为一种有效的肿瘤治疗策略。根据作用机制的不同，肿瘤血管靶向药物(vascular targeted agent，VTA)可分为2种:新生血管抑制剂和血管阻断剂。目前，许多正在临床试验的肿瘤血管破坏剂结构中都具有苯三甲氧基基团，如CA4P及其类似物OXi4503和AVE8062，秋水仙碱类似物ZD6126,BNC-105和CKD-516，苯三甲氧基团对肿瘤药物设计具有重要的研究价值。
本发明人对吴茱萸碱类化合物进行修饰以及优化，将苯三甲氧基引入吴茱萸碱骨架，通过酰胺键链接吴茱萸碱及其衍生物，开展体内外抗肿瘤活性筛选实验，合成了一系列含三甲氧基苯基吴茱萸碱衍生物，筛选出高效低毒性的抗肿瘤候选药物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供了一种含三甲氧基苯基吴茱萸碱衍生物，其能够用作抗癌药物，并且对于人正常细胞有较小的生物毒性。
本发明的第一个方面，是提供一种式12化合物及其药学上可接受的盐：
其中：R选自H、卤素、硝基、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基；
R1选自H、卤素、硝基、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基。
优选地，R选自H、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；更优选地，R选自H、甲氧基；
优选地，R1选自H、卤素、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；更优选地，R1选自H、甲基、Cl、Br、硝基。
优选地，式12化合物选自如下化合物：
本发明的另一方面提供一种制备式12化合物的方法，其合成路线如下：
具体反应步骤如下：
步骤a：将苯胺衍生物(1)在12％盐酸溶液中的搅拌溶液冷却至0-5℃，然后滴加亚硝酸钠溶液反应，TLC检测反应完成后，在室温下将溶液加入亚硫酸钠水溶液中，然后加热至80℃，2小时后，加入浓盐酸，在100℃下搅拌反应2小时，冷却至室温，从溶液中沉淀出苯肼盐酸盐衍生物(2)；
步骤b：苯肼盐酸盐衍生物(2)在30％乙醇溶液中的溶液中加入4-氯-1-羟基-1-丁磺酸钠和Na2HPO4，该混合物在70℃下搅拌5-7小时(优选6小时)，蒸发乙醇后，混合物用二氯甲烷和氯仿洗涤，然后用饱和碳酸氢钠将pH调节至7-8，并将其冷却至4℃，在此期间从该溶液中沉淀出色胺盐酸盐，再将碳酸钾破除盐酸盐，用乙酸乙酯萃取，得到色胺衍生物(3)；
步骤c：将色胺衍生物(3)溶于甲酸乙酯溶液加热至60℃并搅拌反应，TLC监测反应完全后，旋去甲酸乙酯后得到中间体4，将中间体4溶于的CH2Cl2溶液中加入POCl3并在0-5℃下搅拌6小时，然后减压除去溶剂，通过硅胶柱纯化，得到中间体5；
步骤d：将2-羟基苯甲酸衍生物(10)溶于CH2Cl2溶液中加入氯化亚砜并在40℃下搅拌反应0.5-2h，然后减压除去溶剂；将残余物加入到中间体5的CH2Cl2溶液中，并在室温下搅拌反应22-26小时；反应完毕后，减压除去溶剂，粗产物用硅胶柱纯化，得到中间体11；
步骤e：将中间体11溶于N,N-二甲基甲酰胺中，将其冰浴至0℃后向内加入氢化钠并搅拌20分钟；然后再将3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯后投入上述反应中，冰浴搅拌反应，TLC检测反应，反应完毕后，向溶液中加入适量水后析出固体，抽滤后将固体通过硅胶柱层析纯化，得到最终产物12；
其中，所述R、R1如前所述。
在某一实施方式中，步骤a中：苯胺衍生物(1)、亚硝酸钠和亚硫酸钠的摩尔比为1:1-1.2:2-4，优选为1:1-1.1:3；
在某一实施方式中，步骤b中：苯肼盐酸盐衍生物(2)、4-氯-1-羟基-1-丁磺酸钠和Na2HPO4的摩尔比为1:1-1.2:0.03-0.07，优选为1:1-1.1:0.05；
在某一实施方式中，步骤c中：色胺衍生物(3)与甲酸乙酯的摩尔比体积比为1:1-3mmol/mL，优选为1:2mmol/mL；色胺衍生物(3)与POCl3的摩尔比体积比为10:0.5-2mmol/mL，优选为10:1mmol/mL；
在某一实施方式中，步骤d中：2-羟基苯甲酸衍生物(10)和化合物5的摩尔比为1:0.8-1.5，优选为1:1；2-羟基苯甲酸衍生物(10)和氯化亚砜的摩尔比为1:1-3，优选为1:2；
在某一实施方式中，步骤e中：中间体11和3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯的摩尔比为1:1-1.5，优选为1:1.2；步骤e的反应时间为20-30h，优选23-25h。
本发明的另一方面提供一种药物组合物，其包含式12所示的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
本发明另一方面涉及一种式12化合物或包含其的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途；优选地，所述癌症选自肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌；更优选为胃癌。
定义：
“烷基”是指仅仅由碳和氢原子组成，不含有不饱和度。在一些实施方案中，烷基具有1至6或1至4个碳原子。代表性的烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基和正己基、异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基等。
“烷氧基”是指“烷基”通过氧原子与母体分子相连，其中“烷基”具有如上所述的定义。
“卤代烷基”是指其中所有氢原子部分或全部被选自氟代基、氯代基、溴代基和碘代基的卤素置换的烷基。卤代烷基的实例包括CF3、CF2CF3、CF2CF2CF3、CFCl2、CF2Cl等。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供了一类新的含三甲氧基苯基吴茱萸碱衍生物，拓宽了现有抗癌化合物的范围，可作为先导化合物继续优化。本发明的化合物毒副作用小，在抑制癌细胞生长的同时，对人体正常细胞无抑制活性，用药更为安全。
附图说明
图1是化合物12h对HGC-27细胞集落形成的抑制作用。
图2是化合物12h处理48h抑制HGC-27细胞迁移：(A)在显微镜下拍照所得不同浓度划痕伤口的愈合程度；(B)HGC-27细胞迁移率与化合物12h呈负相关关系。Error bas showthe SD,“**”p＜0.01,与对照组相比。
图3是化合物12h处理48h后，对HGC-27细胞形态的影响(用Hoechst 33258染料染色细胞)：A)在荧光显微镜下拍摄的细胞染色图。(B)细胞凋亡总量与化合物12h的浓度呈正相关关系。Error bas show the SD,“**”p＜0.01,与对照组相比。
图4是化合物12h对HGC-27细胞周期分布的影响。(A)流式细胞仪分析显示，12h处理HGC-27细胞48h后其周期的分布受到影响。采用FlowJo软件计算细胞周期不同阶段的百分比。(B)利用Origin 8软件绘制细胞G1/G0，G2/M，S期所占百分比的柱状图。
图5是化合物12h处理HGC-27细胞48h后对其细胞凋亡的影响。(A)采用FlowJo软件计算凋亡细胞的量，Q1、Q2、Q3、Q4分别代表细胞碎片、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞、正常活细胞。(B)细胞凋亡总量与化合物12h的浓度呈正相关关系。Errorbas show the SD,“**”p＜0.01,与对照组相比。
具体实施方式
下面通过实施例来具体说明本发明的内容。在本发明中，以下实施例是为了更好地阐述本发明，并不是用来限制本发明的范围。
实施例1化合物12a的合成
将苯胺(1a，2.80g，0.03mol)在12％盐酸溶液(27mL)中的搅拌溶液冷却至0-5℃。然后滴加亚硝酸钠溶液(2.16g，0.031mol)并反应1小时。反应完成后，在室温下将溶液加入亚硫酸钠水溶液(11.34g，0.09mol)中，然后加热至80℃。2小时后，加入浓盐酸(6mL)，在100℃下搅拌反应2小时。冷却至室温，从溶液中沉淀出苯肼盐酸盐(2a)。收率为94％
苯肼盐酸盐(2a，2.90g，0.02mol)在30％乙醇溶液中的溶液中加入4-氯-1-羟基-1-丁磺酸钠(4.21g，0.02mol)和Na2HPO4(0.14g，0.001mol)，该混合物在70℃下搅拌6小时。蒸发乙醇后，混合物用二氯甲烷和氯仿洗涤，然后用饱和碳酸氢钠将pH调节至7-8，并将其冷却至4℃，在此期间从该溶液中沉淀出色胺盐酸盐。再将碳酸钾破除盐酸盐，用乙酸乙酯萃取，得到色胺(3a)。收率为61％。
将色胺(3a，1.60g，0.01mol)溶于甲酸乙酯(20mL)溶液加热至60℃并搅拌6小时。旋去甲酸乙酯后得到化合物4a。将化合物4a溶于的CH2Cl2(30mL)溶液中加入POCl3(1mL)并在0-5℃下搅拌6小时。然后减压除去溶剂。通过硅胶柱(CH2Cl2/CH3OH＝10：1)纯化粗产物，得到中间体5a；收率为88％；
将2-羟基苯甲酸(10a，0.69g，5mmol)溶于CH2Cl2(25mL)溶液中加入氯化亚砜(1.18g，10mmol)并在40℃下搅拌1小时。然后减压除去溶剂。将残余物加入到中间体5a(0.85g，5mmol)的CH2Cl2(40mL)溶液中，并在室温下搅拌24小时。反应完成后，减压除去溶剂，粗产物用硅胶柱(CH2Cl2)纯化，得到中间体11a。收率为50％。
称取中间体11a(0.29g，1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，将其冰浴至0℃后向内加入氢化钠0.05g并搅拌20分钟；然后再将(0.28g，1.2mmol)3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯投入上述反应中，冰浴搅拌24小时后，向溶液中加入100mL水后析出固体，抽滤后将固体通过硅胶柱层析(洗脱剂：纯二氯甲烷)纯化，得到淡黄色固体(12a)，产率31.6％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.82(dd,J＝7.7,1.3Hz,1H),7.75(d,J＝7.3Hz,1H),7.59(d,J＝8.2Hz,1H),7.53–7.48(m,1H),7.41(dd,J＝11.3,4.1Hz,1H),7.37(t,J＝7.4Hz,1H),7.21–7.01(m,4H),6.26(s,1H),4.75(dd,J＝13.1,4.8Hz,1H),3.81(s,6H),3.67(s,3H),3.30(dd,J＝12.4,3.6Hz,1H),3.08(d,J＝14.9Hz,1H),2.97–2.85(m,1H).MS(ESI):484.50(C28H24N2O6，[M+H+])。
实施例2-14化合物12b-12n的合成
参照化合物12a的制备方法，以取代或未取代的2-羟基苯甲酸(化合物10)、取代或未取代苯胺(化合物1)作为原料，制备得到化合物12b-12n，具体如下表所示：
实施例15体外活性测试
1.MTT法测试本发明化合物体外对不同癌细胞的抑制活性
将本发明合成的含三甲氧基苯基吴茱萸碱衍生物，阴性对照药吴茱萸碱以及阳性对照药5-氟尿嘧啶(5-FU)配制成浓度为33333μmol/L的DMSO溶液。将已经贴壁生长的肿瘤细胞用胰酶消化成细胞悬液，并以每孔5×103个细胞的密度接种于96孔板的中间60孔中，最后在96孔板的外圈每孔加入200μL PBS。置于培养箱中培养24h，之后配置药物浓度梯度为128，64，32，16，8，4，2，1μmol/L的含药培养基，向实验孔中加入200μL不同浓度的含药培养基，每个浓度设置5个复孔。设置6个复孔不含细胞，只加入等体积的培养基作空白对照。设置6个复孔只有细胞，3‰的DMSO作为溶媒组。最后将96孔板放入37℃，5％CO2的培养箱中继续培养。48h后，除外圈外每个孔中加入20μL的浓度为5mg/L的MTT溶液，继续放入培养箱孵育4h。拿出板后吸出培养基，每个孔加入200μL DMSO溶解孔底部的活细胞与MTT形成的甲瓒结晶，摇床避光振荡10min促进溶解，置于多功能酶标仪中测定490nm波长下的吸光度(OD值)。
利用上述公式计算出不同浓度下各药物对每种细胞的抑制率，用GraphPad Prism6.0软件计算各化合物的IC50值。每次实验平行重复进行三次，IC50值取其平均值±标准偏差(SD)。
2.细胞集落实验
用胰酶消化液将HGC-27细胞制成单细胞悬液，并以每孔1000个细胞的密度均匀接种于6孔板中。在二氧化碳培养箱中培育24h后，更换含有不同浓度的12h(3，1.5，0.75μmol/L)的新鲜培养液与含3‰DMSO的培养液作为对照组，每三天更换一次培养液。培养9天后，去除培养液，用4％多聚甲醛固定15min，再用结晶紫染色15min，弃去结晶紫染料，用PBS清洗3次后置于干燥箱中干燥，最后拍照。
如附图1所示，通过集落实验可以更加清晰的看到药物12h对HGC-27细胞的抗增殖作用。作用不同浓度的12h(3，1.5，0.75μmol/L)与对照组无药物但含3‰DMSO作用进行对比，可发现随着12h浓度的升高，结晶紫染色的集落随之减少，甚至至1.5μmol/L的浓度时，可见的集落已经几乎没有。实验结果说明药物12h对胃癌细胞系HGC-27具有较好的抗增殖作用。
3.细胞划痕实验
使用胰酶消化液将HGC-27细胞制成单细胞悬浮液，并以每孔1×105个细胞的密度将其接种于6孔板上。培养24h后，用200μL的替补枪头在6孔板上每孔画上3条直线，用PBS洗去漂浮细胞后再在倒置荧光显微镜下进行拍照。然后更换含不同浓度12h(3，1.5，0.75μmol/L)的新鲜培养液与含3‰DMSO的培养液作为对照组再继续放入培养箱中培养。继续培养48h后，弃去培养基并用PBS清洗除去死去的悬浮细胞，再至倒置显微镜下拍照，并计算迁移率。
通过倒置显微镜观察细胞划痕的愈合程度，并通过0h的划痕宽度与48h的划痕宽度相比，计算迁移率。如图2(A)所示，我们可以明显看出加药组的划痕愈合程度低于不加药的对照组。如图2(B)所示,细胞迁移率(对照组：66.9％，0.75μmol/L：64.3％，1.5μmol/L：24.8％，3μmol/L：12.1％)随着浓度的升高，细胞的迁移率越低。实验结果证明，化合物12h能够抑制HGC-27细胞的迁移。
4.Hoechst 33258染色
将HGC-27细胞制成单细胞悬液，并以每孔1×104个细胞的密度将其接种于6孔板上。培养24h后，用含不同浓度12h(3，1.5，0.75μmol/L)的新鲜培养液更换后继续培养48h并用含3‰DMSO无药物培养液作为对照组。48h后，弃去培养并用PBS清洗除去死去的悬浮细胞，再加入Hoechst 33258染色液覆盖样品，室温避光放置3-5min。然后吸去Hoechst 33258染色液并用PBS清洗样品3次，每次3-5min。最后直接拿至倒置荧光显微镜下观察拍照。
通过Hoechst 33258染色液我们可以直观的看到药物12h作用HGC-27细胞的凋亡情况。如图3所示，对照细胞用Hoechst 33258染色呈现圆形均匀核，正常的蓝色荧光，没有形态学改变，而12h处理的HGC-27细胞表现出明亮的染色质浓缩和核碎裂，这是细胞凋亡的标志。并通过Image J计算凋亡细胞在拍摄图中占总细胞的百分比。染色结果证明化合物12h能够诱导HGC-27细胞的凋亡，并呈现一定的剂量依赖性。
5.细胞周期与细胞凋亡
(1)流式细胞术检测细胞周期
将HGC-27细胞制成单细胞悬液，并以每孔1×105个细胞的密度将其接种于6孔板上。培养24h后，用含不同浓度12h(3，1.5，0.75μmol/L)的新鲜培养液更换后继续培养48h并用含3‰DMSO无药物培养液作为对照组。按照细胞周期检测试剂盒的说明方法对HGC-27细胞进行处理，并用碘化丙啶(PI)对其染色。PI是一种能够与双链DNA结合产生荧光的染料，其产生荧光的强度与DNA的含量成正比。通过流式细胞仪对HGC-27细胞进行检测，根据DNA含量的分布情况来分析细胞周期。
(2)流式细胞术检测细胞凋亡
使用不同浓度12h(3，1.5，0.75μmol/L)对HGC-27细胞处理48h并用含3‰DMSO无药物培养液作为对照组。按照细胞凋亡检测试剂盒的说明方法对细胞进行处理，并用AnnexinV-FITC和PI双染色剂对其染色。带有绿色荧光探针FITC的AnnexinV能够特异性的结合细胞表面的磷脂酰丝氨酸PS，而PI可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞。处理后的样品可通过流式细胞仪定量检测细胞的凋亡程度。
结果与讨论
如图4(A)所示，检测到不同浓度下(3，1.5，0.75μmol/L)的12h与含3‰DMSO的对照组作用HGC-27细胞48h后细胞周期G1期，S期，G2期的分布情况。如图4(B)所示，无药物作用下细胞的周期分布为G1/G0:55.89％，S：22.65％，G2/M：21.49％。当浓度为0.75μmol/L(G1/G0:53.71％，S：23.58％，G2/M：22.28％)，1.5μmol/L(G1/G0:49.32％，S：22.68％，G2/M：27.41％)，3μmol/L(G1/G0:3.04％，S：31.22％，G2/M：66.39％)；通过对不同浓度的周期分布数据分析，处于G0/G1期的HGC-27细胞量随着浓度的增大而逐渐减少，而处于G2/M期的细胞量随着药物浓度的增大而增加。实验结果表明化合物12h能够阻滞HGC-27细胞的G2/M期。
如图5所示，细胞通过AnnexinV-FITC和PI双染色剂染色下在细胞流式仪测得不同浓度下细胞的凋亡情况；图中以十字区别凋亡细胞与正常细胞，其中左下角代表存活细胞比例，左上角代表坏死细胞比例，而右下角与右上角则代表处于早期凋亡和晚期凋亡的细胞。无药物作用下对照组的细胞凋亡百分比为4.53％，0.75μmol/L药物作用下细胞的凋亡百分比为6.66％，1.5μmol/L药物作用下细胞的凋亡百分比为13.63％，3μmol/L药物作用下细胞的凋亡百分比为17.88％；随着药物浓度的增加，细胞的凋亡程度逐渐增高，呈现出对药物12h的浓度依赖性。同时，也说明药物12h具有诱导HGC-27细胞凋亡的能力。

Claims (9)

1.一种式12化合物及其药学上可接受的盐：
其中：R选自H、卤素、硝基、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基；
R1选自H、卤素、硝基、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基。
2.根据权利要求1所述的式12化合物，其特征在于：R选自H、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；更优选地，R选自H、甲氧基；
R1选自H、卤素、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；更优选地，R1选自H、甲基、Cl、Br、硝基。
3.根据权利要求1所述的式12化合物，其选自如下化合物：
4.一种如权利要求1-3任一项所述的式12化合物的制备方法，其反应路线如下：
其中，R、R1的定义，如权利要求1-3任一项所述。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤a：将苯胺衍生物(1)在12％盐酸溶液中的搅拌溶液冷却至0-5℃，然后滴加亚硝酸钠溶液反应，TLC检测反应完成后，在室温下将溶液加入亚硫酸钠水溶液中，然后加热至80℃，2小时后，加入浓盐酸，在100℃下搅拌反应2小时，冷却至室温，从溶液中沉淀出苯肼盐酸盐衍生物(2)；
步骤b：苯肼盐酸盐衍生物(2)在30％乙醇溶液中的溶液中加入4-氯-1-羟基-1-丁磺酸钠和Na2HPO4，该混合物在70℃下搅拌5-7小时(优选6小时)，蒸发乙醇后，混合物用二氯甲烷和氯仿洗涤，然后用饱和碳酸氢钠将pH调节至7-8，并将其冷却至4℃，在此期间从该溶液中沉淀出色胺盐酸盐，再将碳酸钾破除盐酸盐，用乙酸乙酯萃取，得到色胺衍生物(3)；
步骤c：将色胺衍生物(3)溶于甲酸乙酯溶液加热至60℃并搅拌反应，TLC监测反应完全后，旋去甲酸乙酯后得到中间体4，将中间体4溶于的CH2Cl2溶液中加入POCl3并在0-5℃下搅拌6小时，然后减压除去溶剂，通过硅胶柱纯化，得到中间体5；
步骤d：将2-羟基苯甲酸衍生物(10)溶于CH2Cl2溶液中加入氯化亚砜并在40℃下搅拌反应0.5-2h，然后减压除去溶剂；将残余物加入到中间体5的CH2Cl2溶液中，并在室温下搅拌反应22-26小时；反应完毕后，减压除去溶剂，粗产物用硅胶柱纯化，得到中间体11；
步骤e：将中间体11溶于N,N-二甲基甲酰胺中，将其冰浴至0℃后向内加入氢化钠并搅拌20分钟；然后再将3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯后投入上述反应中，冰浴搅拌反应，TLC检测反应，反应完毕后，向溶液中加入适量水后析出固体，抽滤后将固体通过硅胶柱层析纯化，得到最终产物12。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：
步骤a中：苯胺衍生物(1)、亚硝酸钠和亚硫酸钠的摩尔比为1:1-1.2:2-4，优选为1:1-1.1:3；
步骤b中：苯肼盐酸盐衍生物(2)、4-氯-1-羟基-1-丁磺酸钠和Na2HPO4的摩尔比为1:1-1.2:0.03-0.07，优选为1:1-1.1:0.05；
步骤c中：色胺衍生物(3)与甲酸乙酯的摩尔比体积比为1:1-3mmol/mL，优选为1:2mmol/mL；色胺衍生物(3)与POCl3的摩尔比体积比为10:0.5-2mmol/mL，优选为10:1mmol/mL；
步骤d中：2-羟基苯甲酸衍生物(10)和化合物5的摩尔比为1:0.8-1.5，优选为1:1；2-羟基苯甲酸衍生物(5)和氯化亚砜的摩尔比为1:1-3，优选为1:2；
步骤e中：中间体11和3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯的摩尔比为1:1-1.5，优选为1:1.2；步骤b的反应时间为20-30h，优选23-25h。
7.一种药物组合物，其包含权利要求1-3任一项所述的式12化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
8.权利要求1-3任一项所述的式12化合物或权利要求7所述的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述癌症选自肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌；更优选为胃癌。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111620871A (zh) * 2020-06-30 2020-09-04 陕西中医药大学 氨基吴茱萸碱衍生物及其制备方法与应用
CN113683615A (zh) * 2021-09-27 2021-11-23 南华大学 一种吴茱萸碱衍生物及其制备和应用

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS546000A (en) * 1977-06-11 1979-01-17 Sendai Fukusokan Kagaku Kenkiy 1*33benzoxazinee44ones and their preparation
CN101787025A (zh) * 2010-03-04 2010-07-28 中国人民解放军第二军医大学 取代吴茱萸碱类抗肿瘤和抗真菌化合物及其制备方法
CN102311434A (zh) * 2011-07-07 2012-01-11 中国人民解放军第二军医大学 吴茱萸碱类化合物及其制备方法与应用
CN103992336A (zh) * 2014-05-19 2014-08-20 中国人民解放军第二军医大学 氧杂或硫杂吴茱萸碱类抗肿瘤衍生物及其制备方法
CN104031046A (zh) * 2014-05-26 2014-09-10 重庆医科大学 N1-丁酰吴茱萸碱及合成方法
CN107141288A (zh) * 2017-04-14 2017-09-08 中山大学 一类吴茱萸碱类化合物及其制备方法与应用
CN107365322A (zh) * 2016-11-16 2017-11-21 中国药科大学 一类新型的吴茱萸碱类衍生物、其制备方法及用途
CN108558732A (zh) * 2018-06-25 2018-09-21 南华大学 一种可选择性治疗胃癌和***的吲哚酰胺类化合物
CN108853113A (zh) * 2018-06-12 2018-11-23 中国医学科学院医学实验动物研究所 氧杂吴茱萸碱衍生物的用途
CN109734714A (zh) * 2019-01-29 2019-05-10 兰州大学 一种吴茱萸生物碱衍生物及其合成方法和应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS546000A (en) * 1977-06-11 1979-01-17 Sendai Fukusokan Kagaku Kenkiy 1*33benzoxazinee44ones and their preparation
CN101787025A (zh) * 2010-03-04 2010-07-28 中国人民解放军第二军医大学 取代吴茱萸碱类抗肿瘤和抗真菌化合物及其制备方法
CN102311434A (zh) * 2011-07-07 2012-01-11 中国人民解放军第二军医大学 吴茱萸碱类化合物及其制备方法与应用
CN103992336A (zh) * 2014-05-19 2014-08-20 中国人民解放军第二军医大学 氧杂或硫杂吴茱萸碱类抗肿瘤衍生物及其制备方法
CN104031046A (zh) * 2014-05-26 2014-09-10 重庆医科大学 N1-丁酰吴茱萸碱及合成方法
CN107365322A (zh) * 2016-11-16 2017-11-21 中国药科大学 一类新型的吴茱萸碱类衍生物、其制备方法及用途
CN107141288A (zh) * 2017-04-14 2017-09-08 中山大学 一类吴茱萸碱类化合物及其制备方法与应用
CN108853113A (zh) * 2018-06-12 2018-11-23 中国医学科学院医学实验动物研究所 氧杂吴茱萸碱衍生物的用途
CN108558732A (zh) * 2018-06-25 2018-09-21 南华大学 一种可选择性治疗胃癌和***的吲哚酰胺类化合物
CN109734714A (zh) * 2019-01-29 2019-05-10 兰州大学 一种吴茱萸生物碱衍生物及其合成方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GUOQIANG DONG ET AL: "New Tricks for an Old Natural Product: Discovery of Highly Potent Evodiamine Derivatives as Novel Antitumor Agents by Systemic Structure;Activity Relationship Analysis and Biological Evaluations", 《J. MED. CHEM.》 *
JIE-DAN DENG ET AL: "A concise synthesis and biological study of evodiamine and its analogues", 《CHEM. COMM》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111620871A (zh) * 2020-06-30 2020-09-04 陕西中医药大学 氨基吴茱萸碱衍生物及其制备方法与应用
CN111620871B (zh) * 2020-06-30 2023-12-08 陕西中医药大学 氨基吴茱萸碱衍生物及其制备方法与应用
CN113683615A (zh) * 2021-09-27 2021-11-23 南华大学 一种吴茱萸碱衍生物及其制备和应用

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