CN110376319A - 一种陈皮对照提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种陈皮对照提取物及其制备和应用,所述提取物为黄绿色干燥粉末,其是由含重量百分比陈皮提取物65‑84%和助流剂16‑35%组成,所述陈皮提取物中包括黄酮苷和黄酮苷元成分,所述黄酮苷中不含新橙皮苷和柚皮苷。该陈皮对照提取物一致性好、性状稳定、均匀,可用于陈皮药材、陈皮制剂的质量控制,对有效化合物定性定量的分析测定。
Description
技术领域
本发明属于化学领域,尤其是涉及一种陈皮对照提取物及其制备方法。
背景技术
药品检验是验证药品质量的一个重要手段,随着仪器分析的广泛使用,越来越多地使用 药品标准物质。在药品检验工作中常会用对照品作为检查药品质量的特殊参照物,以它作为 确定药品真伪优劣的对照标准。对照品在药品检验中具有十分重要的地位。
现在中药标准中,单一成分控制质量的模式难以很好的反映中药质量,采用多种成分或 特征色谱峰综合控制质量的方法越来越引起人们的重视。然而,商品化的对照品的供不应求 和高昂的检测成本限制了多成分的质量控制在实际生产、科研和监管领域的应用。使用对照 提取物既可以解决单体对照品制备难度大、紧缺的问题,又可以达到对指标成分控制的目的, 对中药的质量控制和标准执行都有重要的意义。
现行中药质量控制模式基本上是沿着天然药物化学的发展,对中药某一种或几种有效成 分为目标的分析方法和既有定性又可定量的质量标准的构思,参照国外植物药的质量控制方 法,借鉴化学药品质量控制的模式,并借助文献报道建立相应的简单理化鉴别,再发展到以 光谱、色谱为主的鉴别和含量测定的质量标准。每一味中药材都是多成分的综合体,这决定 了其特有的整体性和模糊性,也表明以药材中一两个甚至几个成分作为药材质量的评价方法 存在很大的局限性。
1990版《中国药典》增加了对照药材的薄层色谱鉴别,使得中药及中成药的鉴别有了很 大的进展。目前中药和国外的草药越来越重视多成分或多组分的检测,例如德国银杏叶提取 物的质量控制。指纹图谱的分析方法,可以从整体上对药材进行质量控制,现在仍然有很大 的研究价值。目前中国药典在控制药材质量方面有两种“对照品”,化学对照品和中药对照 药材。其中化学对照品可用于药材的定性鉴别和定量分析,中药对照药材则用于显微鉴别和 薄层鉴别。然而,化学对照品和中药对照药材在中药质量控制上都有其局限性。首先,中药 中化学成分多样化,单一或者几个化合物并不能反映药材的全貌,而现有的标准往往有很多 漏洞,以次充好的现象时有发生。中药对照药材受到产地、生长环境的影响,很难保证每一 批的质量一致,而且只能用于定性鉴别,无法反映药材成分含量的高低。
中药对照提取物有四个基本要求(ASCS):Authenticity,药材来源可靠,具有代表性; Specificity,使用的检测方法具有专属性;Con-sistency,不同批次对照提取物应保持一致; Stability,性状稳定、均匀、便于使用。运用薄层色谱指纹图谱以及高效液相色谱指纹图谱 的方法,中药对照提取物能满足定性鉴别的需要。通过标化的对照提取物还可以进一步进行 半定量甚至定量的分析。中药对照提取物将对中药质量控制有重要意义。
陈皮为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮。药材分为“陈皮”和“广陈皮”。 采摘成熟果实,剥取果皮,晒干或低温干燥。新会古井陈皮是广东省江门市新会区所产的大 红柑的干果皮,具有很高的药用价值,又是传统的香料和调味佳品。陈皮药用历史悠久,有 理气、健脾、燥湿、化痰功能。国家药典委员会发布的中国药典质量标准中,对陈皮作为药 材时有效成分之一的橙皮苷的含量做了规定,但是也正由于中药对照提取物有上述特定的要 求,目前现有技术还未有或未有成熟的陈皮对照提取物的制备方法。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明的目的在于提供一种为了解决上述技术问题,本发明对 陈皮制剂或陈皮药材检测中存在的检测标准不全面,使用多种对照品检测成本高的问题,本 发明提供一种对陈皮药材、陈皮提取物及其陈皮制剂中的化合物同时进行检测的陈皮对照提 取物,该陈皮对照提取物一致性好、性状稳定、均匀,可用于陈皮药材、陈皮处方的质量控 制,对有效化合物定性定量的分析测定。
本发明还提供了陈皮对照提取物的制备方法。该方法操作简便、成本低、重复性好且提 取率高。
本发明还提供了用陈皮对照提取物代替对照药材检测含陈皮成分的样品的控制方法。
本发明是通过下述技术方案实现的:
本发明的一种陈皮对照提取物,所述提取物为黄绿色干燥粉末,其是由含重量百分比陈 皮提取物65-84%和助流剂16-35%组成,所述陈皮提取物中包括黄酮苷和黄酮苷元成分,所述 黄酮苷中不含新橙皮苷和柚皮苷。
本发明所述的一种陈皮对照提取物,其中所述黄酮苷元类成是川陈皮素和/或红橘素;所 述黄酮苷类成分是橙皮苷。
本发明所述的一种陈皮对照提取物,其中橙皮苷含量14%~22%,优选16%~20%。
本发明所述的陈皮对照提取物通过下述方法制备得到的:
(1)粗提:取不同来源及批次的陈皮药材粉末用醇超声提取,滤过得滤液1;药渣再用醇超 声提取1-3次,收集的1-3次滤液与滤液1混合、蒸干得到粗提物;
(2)精制:粗提物溶解于水,抽滤得到滤渣;将滤渣用水冲洗至无色,收集滤液2和沉淀物; 滤液2上大孔树脂柱,先用水冲洗大孔树脂,弃去洗脱液1,再用含水醇洗脱大孔树脂,收 集洗脱液2,洗脱液2与沉淀物混合,蒸干得到陈皮提取物;
(3)混合:在陈皮提取物中添加助流剂,研磨过滤,即得陈皮提取物混合物;
(4)调配:将不同来源或批次的陈皮提取物混合物进行调配,得到陈皮对照提取物。
上述步骤(1)所述的醇包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇等,优选甲醇。
进一步优选,陈皮药材粉末与甲醇的重量体积比为1:8~1:50(优选1:10);所述超声时 间为30~60min,功率为100W~3kW,优选超声时间为30min,功率为500W。所述蒸干温度为20~ 50℃。
步骤(1)中所述的过滤是用中速滤纸或者2000目筛网过滤。
上述步骤(2)中所述的滤液2是用其重量1~4倍的大孔树脂层析。是先用5~10个柱体积 纯净水冲洗大孔树脂,收集洗脱液1弃去;再用3~10个柱体积70%~100%甲醇冲洗大孔树脂, 收集洗脱液2;
所述大孔树脂为非极性大孔树脂,孔径为100~1000nm;包括但不限于AB-8型、D101型: 优选D101型。
所述步骤(2)中洗脱液2和沉淀混合低温蒸干所用温度为20~60℃。
上述步骤(3)中助流剂与陈皮提取物重量比为(2-5):10。
所述助流剂为粉硅胶。
所述助流剂填加能够保证提取物性状稳定、均匀且便于使用。
上述步骤(4)所述的调配具体指:将不同来源或批次的陈皮提取物进行调配,应使最终 的陈皮对照提取物中橙皮苷的重量百分比含量维持在14%~22%。
为保证本发明的陈皮对照提取物的可靠性、成分一致性、均一性,优选在步骤(1)前增 加不同药材来源的筛选步骤:将不同来源或批次的原料药材以薄层色谱法和/或高效液相色谱 法进行检测;然后对不同来源或批次的原料药材的通过薄层色谱法和/或高效液相色谱法得到 的色谱图和/或测定的含量进行比较分析,剔除色谱图和/或测定的含量异常的原料药材,保 留色谱图和/或测定的含量一致的原料药材进行下一步的粗提。
优选所述陈皮对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中的川陈皮素、红橘素和橙 苷位置处的荧光斑点和采用高效液相色谱法检测得到的色谱图在橙皮苷位置处的色谱峰应分 别与其对应的化学对照品或其对应的原料药材一致。见附图1-3。
本发明所述的陈皮对照提取物的薄层色谱图是通过下述方法获得的:
(1)化学对照品溶液:取橙皮苷、新陈皮苷、柚皮苷、川陈皮素和红橘素精密称定,加甲醇 超声处理至完全溶解,放冷,配制成0.1mg/ml浓度的溶液,过0.22μm滤膜即得;
(2)陈皮对照提取物溶液:取陈皮提取物对照品适量,精密称定,甲醇配制成8mg/ml浓度 的溶液,过0.22μm滤膜即得陈皮提取物对照品溶液;
(3)所述黄酮苷类检测条件为:
薄层板:硅胶预制板
展开剂:氯仿:甲醇:水:冰乙酸=13:4:1:1.5
检视:5%AlCl3乙醇显色,UV366nm下检视
(4)所述黄酮苷元类检测条件为:
薄层板:硅胶预制板
展开剂:展开剂1:甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:20:1:1
展开剂2:甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:10:1:1
检视:366nmUV下检视。
进一步优选,(3)所述黄酮苷类检测条件为:
薄层板:TLC G60普通硅胶预制板
点样:药材供试品溶液点样量1μl,条带状点样
展开剂:氯仿:甲醇:水:冰乙酸=13:4:1:1.5(10℃以下分层,取下层)
展开:于双槽展开缸(10cm×10cm)一侧加展开剂10ml,预平衡15分钟,展开上行8.5cm
检视:喷以5%AlCl3乙醇溶液,薄层板置薄层加热板上105℃加热5分钟,置于UV紫外 光灯366nm下检视。
进一步优选(4)所述黄酮苷元类检测条件为:
薄层板:TLC G60普通硅胶预制板
点样:药材供试品溶液点样量1μl,条带状点样
展开剂:
展开剂1:甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:20:1:1(10℃以下分层取上层)
展开剂2:甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:10:1:1(10℃以下分层取上层)
展开:先用展开剂1展开8.5cm,再用展开剂2展开8.5cm。每次展开前双槽展开缸(10cm×10cm)应用10ml展开剂预平衡15分钟,薄层板置薄层加热板上50℃加热15分钟。
检视:展开后挥干薄层板表面溶剂,于UV紫外光灯366nm下检视,拍照。
本发明所述的陈皮对照提取物的高效液相色谱图是通过下述方法获得的:
(1)化学对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品精密称定,用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液; (2)陈皮对照提取物供试品溶液的制备:取对照提取物适量,精密称定,加入溶液超声处理 30分钟,放冷,配制成浓度为0.5mg/ml的溶液,过0.22μm的滤膜,取续滤液,即得;
(3)色谱条件:
高效液相色谱仪;检测器:DAD检测器;检测波长:280nm;
色谱柱:C18(4.6×250mm,5μm);
流动相:流动相A为乙腈,流动相B为水,按照以下表1的洗脱程序进行:
流速:0.8ml/min;进样量:10μl;柱温:20℃;运行时间:65min。
表1
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 5 | 95 |
30 | 25 | 75 |
55 | 95 | 5 |
65 | 95 | 5 |
(4)检测方法:精密吸取药材供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
本发明的陈皮对照提取物中所述的陈皮来源于包括但不限于新会古井陈皮药材。
本发明的陈皮对照提取物以单位剂量形式存在,所述单位剂量形式是指制剂的单位,如 片剂的每片、胶囊的每粒等。
本发明的制剂包括但不限于片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶 囊剂、软胶囊剂、口服液、***剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉 剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。
本发明的药物组合物,其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂,诸如粘合剂、填充剂、 稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂,必要时可对片剂进行包衣。适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物,例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括,例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。可通过混合,填充,压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。
口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂,或者 可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的 添加剂,诸如悬浮剂,例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维 素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪,乳化剂,例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或***胶; 非水性载体(它们可以包括食用油),例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙 二醇或乙醇;防腐剂,例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸,并且如果需要,可 含有常规的香味剂或着色剂。
对于注射剂,制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度, 可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中,在将 其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒,然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和 缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性,可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻, 并在真空下将水除去。
本发明的陈皮对照提取物,在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体, 所述药物可接受的载体选自:甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐 酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠,一价碱金属的碳酸盐、 醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍 生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、 碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、 硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明的陈皮对照提取物还可以作为陈皮标准提取物,用于原料药使用或作为药物组合 物的有效成分,其重量比为0.01-99.9%。
本发明提供了陈皮对照提取物的制备方法步骤如下:见图4工艺流程图
(1)原料药材的筛选:采用薄层色谱法和高效液相色谱法结合对原料药材进行筛选得到不同 来源及批次的陈皮药材;
(2)粗提:取不同来源及批次的陈皮药材粉末用含水醇超声提取,滤过得滤液1;药渣再用 含水醇超声提取1-3次,收集的1-3次滤液与滤液1混合、蒸干得到粗提物;
(3)精制:粗提物溶解于水,抽滤得到滤渣;将滤渣用水冲洗至无色,收集滤液2和沉淀物; 滤液2上大孔树脂柱,先用水冲洗大孔树脂,弃去洗脱液1,再用含水醇洗脱大孔树脂,收 集洗脱液2,洗脱液2与沉淀物混合,蒸干得到陈皮提取物;
(4)混合:在陈皮提取物中添加助流剂,研磨过滤,即得陈皮提取物混合物;
(5)调配:将不同来源或批次的陈皮提取物混合物进行调配,得到陈皮对照提取物。
上述步骤(1)中所述的原药材的薄层色谱法包括如下步骤:
1.化学对照品溶液的制备:取橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和红橘素对照品精 密称定,分别用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液;
2.药材供试品溶液的制备:陈皮药材粉末加甲醇浸泡,超声处理,离心,取上清液即得 药材供试品溶液,或不离心直接过滤膜即得药材供试品溶液;
3.薄层色谱检测:
3.1针对黄酮苷类
薄层板:硅胶预制板
点样:药材供试品溶液点样量1μl,条带状点样
展开剂:氯仿:甲醇:水:冰乙酸=13:4:1:1.5(10℃以下分层,取下层)
展开:于双槽展开缸,一侧加展开剂10ml,预平衡15分钟,展开上行8.5cm
检视:喷以5%AlCl3乙醇溶液,薄层板置薄层加热板上105℃加热5分钟,置于UV紫外 光灯366nm下检视;
3.2针对黄酮苷元类
薄层板:硅胶预制板
点样:药材供试品溶液点样量1μl,条带状点样
展开剂:
展开剂1,甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:20:1:1(10℃以下分层,取上层)
展开剂2,甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:10:1:1(10℃以下分层,取上层)
展开:先用展开剂1展开8.5cm,再用展开剂2展开8.5cm,每次展开前双槽展开缸,应 用10ml展开剂预平衡15分钟,薄层板置薄层加热板上50℃加热15分钟
检视:展开后挥干薄层板表面溶剂,于UV紫外光灯366nm下检视,拍照。
上述步骤(1)中所述的高效液相色谱法包括如下步骤:
1.化学对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品精密称定,用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液;
2.药材供试品溶液的制备:陈皮药材粉末,精密称定,置于锥形瓶中,加入(60-80℃) 石油醚回流提取,过滤,弃滤液,滤渣用(60-80℃)石油醚5ml冲洗,挥干药渣,加甲醇,回流提取,放冷,过滤,用甲醇冲洗容器,置于100ml容量瓶中,加甲醇至刻度线,定容, 摇匀,滤膜即得药材供试品溶液;
3.高效液相色谱法检测条件如下:
色谱仪器:高效液相色谱仪;检测器:DAD检测器;检测波长:280nm
色谱柱:C18(4.6×250mm,5μm);柱温:20℃
流动相:流动相A为乙腈,流动相B为水;按照表1的梯度洗脱程序进行:流速:0.8ml/min;
进样量:10μl;运行时间:65min
表1
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 5 | 95 |
30 | 25 | 75 |
55 | 95 | 5 |
65 | 95 | 5 |
检测方法:精密吸取药材供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
上述步骤(2)所述的醇包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇等,优选甲醇。陈皮药材粉末与 甲醇的重量体积比为1:8~1:50(优选1:10);所述超声时间为30~60min,功率为100W~3kW, 优选超声时间为30min,功率为500W。所述蒸干温度为20~50℃。
步骤(2)中所述的过滤是用中速滤纸或者2000目筛网过滤
上述步骤(3)中所述的滤液2是用其重量1~4倍的大孔树脂层析,是先用5~10个柱体积 纯净水冲洗大孔树脂,收集洗脱液1弃去;再用3~10个柱体积70%~100%甲醇冲洗大孔树脂, 收集洗脱液2。
所述大孔树脂为非极性大孔树脂,孔径为100~1000nm;包括但不限于AB-8型、D101型: 优选D101型。
所述步骤(3)中洗脱液2和沉淀混合低温蒸干所用温度为20~60℃。
上述步骤(4)中助流剂与陈皮提取物重量比为(2-5):10。
所述助流剂为微粉硅胶。
所述助流剂填加能够保证提取物性状稳定、均匀且便于使用。
上述步骤(5)所述的调配具体指::将不同来源或批次的陈皮提取物进行调配,应使最 终的陈皮对照提取物中橙皮苷的重量百分比含量维持在14%~22%。
本发明还提供了一种药材或中药制剂的鉴别方法,或陈皮或含陈皮有效成分的药材或中 药制剂的质量控制方法,将上述制备得到的所述陈皮对照提取物、待测样品以薄层色谱法和/ 或高效液相色谱法进行检测,对比判别。
本发明的有益效果通过下述试验例阐述
试验例一、本发明陈皮对照提取物代替对照药材的对比试验
目的:用薄层色谱法以及高效液相色谱法分别以化学对照品和陈皮对照提取物为参照物 质对市售药材进行分析。
1薄层色谱
1.1样品制备
化学对照品溶液:取橙皮苷、新陈皮苷、柚皮苷、川陈皮素和红橘素精密称定,加甲醇 超声处理至完全溶解,放冷,配制成0.1mg/ml浓度的溶液,过0.22μm滤膜即得。
陈皮对照提取物溶液:取陈皮提取物对照品适量,精密称定,甲醇配制成8mg/ml浓度的 溶液,过0.22μm滤膜即得陈皮提取物对照品溶液。
药材供试品溶液:取市售13批药材各0.5g,加甲醇5ml于15ml离心管中,室温浸15分钟,超声15分钟后取出,离心10分钟(转速为每分钟4000转),取上清液过0.22μm滤膜 即得。药材购于新会古井以及广州市区10个药店。性状见图18-27。
1.2薄层色谱检测
检测条件如下:
针对黄酮苷类的检测,条件同实施例1步骤五中1.2.1;针对黄酮苷元类的检测,条件 同实施例1步骤五中1.2.2。
针对黄酮苷类的薄层色谱检测结果如图5所示,针对黄酮苷元类的检测结果如图6所示。
检测结果:陈皮对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中的橙皮苷、红橘素、川 陈皮素位置处有相应的荧光斑点。新会古井陈皮的特点在于其黄酮苷元部分含量较高,橙皮 苷的含量较低。
2高效液相色谱
2.1供试品溶液制备
化学对照品溶液:精密称取橙皮苷、新陈皮苷、柚皮苷2.5mg,置于25ml容量瓶,加入 20ml甲醇,超声处理至完全溶解,放冷,定容到刻度线并过0.22μm滤膜即得。
陈皮对照提取物溶液:精密称取陈皮对照提取物25mg,置于50ml容量瓶中,加入30ml 甲醇,超声15分钟,放冷,加甲醇到刻度,定容并过0.22μm滤膜即得。
药材供试品溶液:取药材细粉约1g,精密称定,置于锥形瓶中,加入(60-80℃)石油醚80ml,加热回流1小时,过滤,弃滤液,滤渣用(60-80℃)石油醚5ml冲洗3次,挥干 药渣,加80ml甲醇,回流1小时,放冷,过滤,用甲醇冲洗容器,一并置于100ml容量瓶中, 加甲醇至刻度线,定容,摇匀并通过0.22μm滤膜即得。
2.2高效液相色谱检测
检测条件及检测方法同实施例1的步骤五的2.2。
检测结果如图7所示。
分别利用化学对照品以及对照提取物对药材的橙皮苷含量进行含量测定,结果如表2所 示:
表2
将两个测定结果用SPSS进行独立样本t-检验,计算结果P=0.903>0.05,说明两种测定 方法的结果无显著性差异。
结果分析:
根据TLC及HPLC指纹图谱的结果可知,对所述陈皮对照提取物与正品新会古井陈皮药材及 正品新会古井陈皮的TLC及HPLC图谱一致,更确切的说,对所述陈皮对照提取物采用薄层色谱 法检测得到的色谱图中的橙皮苷、红橘素、川陈皮素位置处的荧光斑点和采用高效液相色谱 法检测得到的色谱图在橙皮苷位置处的色谱峰分别与其对应的化学对照品或其对应的原料药 材一致,因此本发明的陈皮对照提取物可应用于药材或中药制剂的定性鉴别,例如对药材或 中药制剂的黄酮苷类成分和/或黄酮苷元类成分进行定性分析,所述黄酮苷元类成可以是川陈 皮素和/或红橘素;所述黄酮苷类成分可以是橙皮苷。
根据HPLC测定结果以及统计分析,说明使用本发明的陈皮对照提取物与正品新会古井陈 皮可用于对药材进行橙皮苷的含量测定,因此本发明的陈皮对照提取物可应用于药材或中药 制剂的半定量鉴别分析,也可应用于陈皮及含陈皮/陈皮有效成分的药材或中药制剂的质量控 制中,例如对药材或中药制剂的黄酮苷类成分进行半定量鉴别分析,或者对陈皮及含陈皮/ 陈皮有效成分的药材或中药制剂进行半定量检测进而控制其质量,所述黄酮苷类成分可以是 橙皮苷。
试验例二、陈皮对照提取物的性状分析
1表观状态:实施例1得到的陈皮对照提取物为黄绿色干燥粉末。
2.水分测定:按照2010版中国药典附录IX G(减压干燥法)进行。检测结果为 ECP-20151201含水量为1.99%。
3.一致性测试:按照实施例1的方法制备陈皮对照提取物(10批次),经测定各批次间的针对黄酮苷类成分和黄酮苷元类成分的薄层色谱检测结果差异很小,橙皮苷、红橘素和 川陈皮素的荧光斑点均有明显的显示,且分布非常一致;经高效液相色谱检测其橙皮苷含量 均在调配标准范围之内如图4-6。因此利用本发明的陈皮对照提取物的制备方法制备得到的 陈皮对照提取物一致性非常好。
4.稳定性测试:
取10个不同批次的陈皮对照提取物供试品,按照国家药典委员会制订的“国家药品标准 物质研制技术要求”的相关规定,考察指标包括性状和溶解性。
供试品开口置适宜的洁净容器中,60℃温度下放置10天,于第5天和第10天取样,按稳定性重点考察项目进行检测。
结果显示,高温试验前后供试品性状无明显变化,高温试验前后薄层色谱图也无明显变 化,溶出率测定结果用SPSS进行独立样本t-检验,计算结果P>0.05,说明无显著性差异。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明的陈皮对照提取物的制备方法采用了粗提、精制、加辅料干燥、研磨过筛和调配 的步骤,操作简便、重复性好且提取率高。用此制备方法制备得到的陈皮对照提取物因是多 次或不同批次的提取物进行调配而成,克服了因中药对照药材受到产地、生长环境的影响, 很难保证每一批的质量一致的缺陷,从而保证了不同批次的陈皮对照提取物的一致性;同时 通过添加适当的溶剂,保证提取物与药材成分的一致性;选取具有代表性的药材作为原料, 得到的产物具有代表性,作为对照提取物更能直观反映待检测药材的质量;通过添加辅料, 保证提取物性状稳定、均匀且便于使用。采用本发明的陈皮对照提取物的制备方法最终得到 的对照提取物中橙皮苷的含量在14%~22%,且对照提取物薄层色谱指纹图谱、HPLC指纹图谱 与药材对应一致;且与对照药材相比使用方便,对照提取物只需要简单的溶解即可使用而不 需要繁琐的提取过程。本发明还提供了药材或中药制剂的鉴别方法,或陈皮或含陈皮/陈皮有 效成分的药材或中药制剂的质量控制方法,不仅可以对药材或中药制剂进行定性鉴别,而且 还可以用于半定量甚至定量分析。
附图说明
图1为针对黄酮苷类的陈皮对照提取物TLC色谱图,S:从上至下依次为:橙皮苷、新橙皮苷、 柚皮苷对照品;1:陈皮对照提取物;2~4:正品新会陈皮药材。
图2为针对黄酮苷元类的陈皮对照提取物TLC色谱图,S:从上至下分别为红橘素、川陈皮素; 1:陈皮对照提取物;2~4:正品新会陈皮药材。
图3为陈皮对照提取物HPLC图谱,下:橙皮苷对照品;上:陈皮对照提取物。
图4为陈皮对照提取物制备流程图。
图5为陈皮对照提取物与市售药材TLC色谱图,1:从上到下为:橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷 对照品;2:陈皮对照提取物;3~5:正品新会陈皮;6~15:陈皮1~10(广州市区药店,编 号1~10)。
图6为陈皮对照提取物与市售药材TLC色谱图,1:从上到下为:红橘素,川陈皮素;2:陈 皮对照提取物;3-5:正品新会陈皮;6~15:陈皮1~10(广州市区药店,编号1~10)。
图7为陈皮对照提取物与市售药材的HPLC色谱图。从下到上为:陈皮ERS、新会古井陈皮2006、 新会古井陈皮2010、新会古井陈皮2013、陈皮1~10(广州市区药店,编号1~10)。
图8为针对黄酮苷类的新会古井陈皮药材TLC图谱,条带1-2:新会古井陈皮(年份:2013); 条带3-4:新会古井陈皮(年份:2010);条带5-6:新会古井陈皮(年份:2006)。
图9为针对黄酮苷元类的新会古井陈皮药材TLC图谱,条带1-2:新会古井陈皮(年份:2013); 条带3-4:新会古井陈皮(年份:2010);条带5-6:新会古井陈皮(年份:2006)。
图10为新会古井陈皮药材的HPLC图谱,从上至下分别为新会古井陈皮(年份:2013)、新 会古井陈皮(年份:2010)、新会古井陈皮(年份:2006)。
图11为第一批、第二批、第三批和第四批的陈皮粗提物、提取物2和陈皮提取物的得率柱状 图。
图12为四批陈皮提取物TLC图谱。条带1:从上至下依次为:橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷对 照品;条带2:陈皮提取物第一批;条带3:陈皮提取物第二批;条带4:陈皮提取物第三批; 条带5:陈皮提取物第四批。
图13为针对四批陈皮提取物的TLC图谱,条带1:从上至下依次为:红橘素和川陈皮素对照 品;条带2-5:陈皮提取物第一批、陈皮提取物第二批、陈皮提取物第三批、陈皮提取物第 四批。
图14为针对四批陈皮提取物的HPLC图谱,从下到上为:第一批陈皮提取物、第二批陈皮提 取物、第三批陈皮提取物、第四批陈皮提取物。
图15为药材新会古井陈皮(年份:2013)的表型特征。
图16为药材新会古井陈皮(年份:2010)的表型特征。
图17为药材新会古井陈皮(年份:2006)的表型特征。
图18为药材陈皮1(购买于广州某药店,编号1)的表型特征。
图19为药材陈皮2(购买于广州某药店,编号2)的表型特征。
图20为药材陈皮3(购买于广州某药店,编号3)的表型特征。
图21为药材陈皮4(购买于广州某药店,编号4)的表型特征。
图22为药材陈皮5(购买于广州某药店,编号5)的表型特征。
图23为药材陈皮6(购买于广州某药店,编号6)的表型特征。
图24为药材陈皮7(购买于广州某药店,编号7)的表型特征。
图25为药材陈皮8(购买于广州某药店,编号8)的表型特征。
图26为药材陈皮9(购买于广州某药店,编号9)的表型特征。
图27为药材陈皮10(购买于广州某药店,编号10)的表型特征。
具体实施方式
下面结合附图,对本发明的具体实施方式进行详细描述,但应当理解本发明的保护范围 并不受具体实施方式的限制。
除非另有其它明确表示,否则在整个说明书和权利要求书中,术语“包括”或其变换如 “包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分,而并未排除其它元件 或其它组成部分。
实施例1
1原料药材的薄层色谱法筛选
1.1供试品的制备
化学对照品溶液的制备:取橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和红橘素对照品精密 称定,分别用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液。
药材供试品溶液的制备:新会古井陈皮(年份:2013图15);新会古井陈皮(年份:2010 图16);新会古井陈皮(年份:2006图17)药材粉末各0.5g,分别加甲醇5ml于15ml离心管中,室温浸泡15分钟,超声(功率500w)处理15分钟后取出,离心10分钟(转速为每 分钟4000转),取上清液即得药材供试品溶液,或不离心直接过0.22μm滤膜即得药材供试 品溶液。
1.2薄层色谱检测
1.2.1针对黄酮苷类
检测条件如下:
薄层板:TLC G60普通硅胶预制板(Merck)
点样:药材供试品溶液点样量1μl,条带状点样
展开剂:氯仿:甲醇:水:冰乙酸=13:4:1:1.5(10℃以下分层,取下层)
展开:于双槽展开缸(10cm×10cm)一侧加展开剂10ml,预平衡15分钟,展开上行8.5cm。
检视:喷以5%AlCl3乙醇溶液,薄层板置薄层加热板上105℃加热5分钟。置于UV紫外 光灯366nm下检视。
检测结果如图8所示,为UV366nm下检视薄层色谱图。1~2:新会古井陈皮(年份:2013); 3~4:新会古井陈皮(年份:2010);5~6:新会古井陈皮(年份:2006)。
结果分析:由图8可知,新会古井陈皮(年份:2013)黄酮苷含量较高。
1.2.2针对黄酮苷元类
薄层板和点样同步骤一的1.2.1。
其余检测条件如下:
展开剂:
展开剂1:甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:20:1:1(10℃以下分层,取上层)
展开剂2:甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:10:1:1(10℃以下分层,取上层)
展开:先用展开剂1展开8.5cm,再用展开剂2展开8.5cm。每次展开前双槽展开缸(10cm×10cm)应用10ml展开剂预平衡15分钟,薄层板置薄层加热板上50℃加热15分钟。
检视:展开后挥干薄层板表面溶剂,于UV紫外光灯366nm下检视,拍照。
检测结果如图9所示,为UV366nm下检视薄层色谱图。1-2:新会古井陈皮(年份:2013); 3-4:新会古井陈皮(年份:2010);5-6:新会古井陈皮(年份:2006)。
结果分析:由图9可知,三种新会古井陈皮的黄酮苷元类成分含量比较一致。
2原料药材的高效液相色谱法筛选
2.1供试品制备
化学对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品精密称定,用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液。
药材供试品溶液的制备:新会古井陈皮(年份:2013)、新会古井陈皮(年份:2010)和新会古井陈皮(年份:2006)药材粉末各0.5g,精密称定,置于锥形瓶中,加入(60-80℃)石油醚80ml,加热回流1小时,过滤,弃滤液,滤渣用(60-80℃)石油醚5ml冲洗3次, 挥干药渣,加80ml甲醇,回流1小时,放冷,过滤,用甲醇冲洗容器,一并置于100ml容量 瓶中,加甲醇至刻度线,定容,摇匀并通过0.22μm滤膜即得药材供试品溶液。
2.2高效液相色谱检测
高效液相色谱法检测条件如下:
色谱仪器:安捷伦HPLC1260高效液相色谱仪;检测器:Agilent DAD检测器;
色谱柱:Zorbax SB C18(4.6×250mm,5μm;Agilent);
流动相:流动相A为乙腈,流动相B为水;
按照以下表1的梯度洗脱程序进行:
表1
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 5 | 95 |
30 | 25 | 75 |
55 | 95 | 5 |
65 | 95 | 5 |
流速:0.8ml/min;进样量:10μl;柱温:20℃;检测波长:280nm;运行时间:65min。
高效液相色谱法检测方法:精密吸取药材供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色 谱图。
高效液相色谱法检测结果:
(1)测定,记录色谱图,即得图10所示的陈皮药材HPLC图谱,从上到下分别对应新会 古井陈皮(年份:2013)、新会古井陈皮(年份:2010)、新会古井陈皮(年份:2006)。
(2)计算新会古井陈皮(年份:2013)、新会古井陈皮(年份:2010)、新会古井陈皮(年份:2006)中的橙皮苷的含量(含量以wt%计),结果如下表3所示。
表3
药材名称 | 橙皮苷含量(%) |
新会古井陈皮(年份:2006) | 2.11 |
新会古井陈皮(年份:2010) | 1.10 |
新会古井陈皮(年份:2013) | 1.65 |
高效液相色谱法检测结果分析:
图10所示HPLC图谱及橙皮苷含量测定结果显示新会古井陈皮(年份:2010)中橙皮苷 含量较低,与TLC图谱显示一致。新会古井陈皮(年份:2006)样品因年份较久难以得到,综合TLC及HPLC的图谱及测定结果,最终选用新会古井陈皮(年份:2013)用于陈皮对照提取物的制备。
二:粗提
根据步骤一的筛选结果选取新会古井陈皮(年份:2013)药材,制成粉末,药材粉末过 二号筛(850±29μm,24目),然后加入其质量10倍体积的的甲醇(即固液比为1:10(w/V)), 超声(功率500w,常温)提取30min后中速定性滤纸过滤,收集滤渣和滤液1,滤渣按相同方 法再次提取二次,并将收集的滤液与滤液1合并即为提取液,将提取液用旋转蒸发仪40℃蒸干 得到陈皮粗提物。
三:精制
取陈皮粗提物,用纯净水溶解并抽滤得到滤渣,滤渣再用纯净水冲洗至水无色(陈皮粗 提物与总共用的纯净水的质量体积比为1:5,共冲洗5次),收集沉淀,合并多次滤液得到溶 液,溶液用其2倍重量的D101型大孔树脂层析,先用8个柱体积(1100ml)的纯净水洗脱,洗 脱液弃去;再用4个柱体积(550ml)的体积百分浓度为100%的甲醇洗脱,得到洗脱液2,然后 将洗脱液2和沉淀混合,40℃蒸干,得到陈皮精制物即提取物2。
四:拌硅胶研磨过滤
在提取物2中添加微粉硅胶,添加量为陈皮精制物重量的20%,研磨并过110目筛网,即得 陈皮提取物。
五:陈皮提取物分析
1陈皮提取物分析
1.1薄层色谱分析
1.1.1样品制备
化学对照品溶液的制备:取橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和红橘素对照品精密 称定,分别用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液。
陈皮提取物供试品溶液的制备:按照实施例1中的步骤,制备四批新会古井陈皮(年份: 2013)的陈皮提取物(各步骤参数如表4所示,各提取物得率如图11所示)。取四批陈皮提 取物各20mg,精密称定,置2ml量瓶中,加甲醇1.5ml,超声处理15分钟,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,过0.22μm滤膜即得陈皮提取物溶液。
表4
1.1.2薄层色谱检测
检测条件如下:
针对黄酮苷类的检测,薄层板、展开剂、展开方法同实施例1步骤一中1.2.1;针对黄 酮苷元类的检测,薄层板、展开剂、展开方法同实施例1步骤一中1.2.2。
点样:化学对照品供试品溶液点样量5μl,陈皮提取物供试品溶液点样量1μl,条带状 点样。
显色:针对黄酮苷类的检测,方法与实施例1步骤一中1.2.1中的一致;针对黄酮苷元 类的检测,方法与实施例1步骤一中1.2.2中的一致。
针对黄酮苷类的薄层色谱检测结果如图12所示,针对黄酮苷元类的检测结果如图13所 示。
1.2高效液相色谱法(HPLC)含量测定
1.2.1供试品制备
化学对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品精密称定,用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液。
陈皮提取物供试品溶液的制备:取陈皮对照提取物第一批(0.058g)、第二批(0.081g)、 第三批(0.076g)第四批(0.084g)精密称定,于100ml容量瓶中,加入80ml甲醇,超声 30分钟,放冷,甲醇定容至刻度,通过0.22μm即得陈皮提取物供试品溶液。
1.1.2高效液相色谱检测
检测条件及测定方法同实施例1步骤一中的2.2。
高效液相色谱法检测结果:
(1)测定,记录色谱图,即得图14所示的陈皮提取物HPLC图谱,从下到上分别为:第一批陈皮提取物,第二批陈皮提取物,第三批陈皮提取物,第四批陈皮提取物。
(2)计算陈皮中的橙皮苷的含量(含量以wt%计),结果如下表5所示。
表5
陈皮提取物 | 橙皮苷含量(%) |
第一批陈皮提取物 | 8.91 |
第二批陈皮提取物 | 17.08 |
第三批陈皮提取物 | 16.33 |
第四批陈皮提取物 | 16.52 |
分析结果:
四批陈皮提取物的TLC色谱一致,但第一批提取物橙皮苷斑点亮度相对其他三批为低, HPLC图谱及数据表明陈皮第一批提取物中橙皮苷含量比其他三批低。综合两个结果,将第二 批、第三批、第四批陈皮提取物进行调配,得到陈皮对照提取物(ERS)。
六:调配
经过薄层色谱TLC法和高效液相色谱HPLC法检测,合格来源或批次的陈皮提取物按一定 比例混合得到陈皮对照提取物。调配标准为:应使最终的陈皮对照提取物中橙皮苷的含量维 持在14%~22%范围内。此调配标准中的橙皮苷的含量的范围也是经过多次反复实验综合保持 稳定性、一致性以及后面的应用等得出的最佳数据。
实施例2
对陈皮对照提取物(ERS)进行色谱分析:
1薄层色谱分析
1.1样品准备
化学对照品(CRS)溶液:取橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和红橘素对照品精密 称定,分别用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液。
对照提取物(ERS)溶液:取实施例1陈皮对照提取物适量精密称定,加入甲醇超声提取 30分钟,定容,配制成8mg/ml浓度的溶液,通过0.22μm滤膜,取滤液作为对照提取物溶液。 1.2薄层色谱检测
1.2.1黄酮苷类
薄层板:TLC G60普通硅胶预制板(Merck)。
点样:化学对照品溶液:5μl,条带点样。
对照提取物溶液:1μl,条带点样。
展开剂:氯仿:甲醇:水:冰乙酸=13:4:1:1.5(10℃以下分层,取下层)。
展开:于双槽展开缸(10cm×10cm)一侧加展开剂10ml,预平衡15分钟。展开上行8.5cm。
检视:先喷以5%AlCl3乙醇溶液,置薄层加热板上105℃加热5分钟,于UV366nm下检视, 拍照。检测结果如图1所示。
1.2.2黄酮苷元类
薄层板和点样同本实施例步骤一1.2.1。
展开剂1:甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:20:1:1(10℃以下分层,取上层)
展开剂2:甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:10:1:1(10℃以下分层,取上层)
展开:先用展开剂1展开8.5cm,再用展开剂2展开8.5cm。每次展开前双槽展开缸(10cm×10cm)应用10ml展开剂预平衡15分钟,薄层板置薄层加热板上50℃加热15分钟。
检视:展开后挥干薄层板表面溶剂,于366nmUV下检视,拍照。
检测结果如图2所示。
黄酮苷类与黄酮苷元的检测结果分析:陈皮对照提取物(ERS)及化学对照品薄层色谱图 显示,橙皮苷、川陈皮素、红橘素化学对照品色谱相应的位置上,陈皮对照提取物(ERS)色 谱显相同颜色的荧光斑点。陈皮对照提取物(ERS)中未找到与新橙皮苷、柚皮苷相应位置显 相同颜色的荧光斑点。两种薄层色谱方法显示陈皮对照提取物与正品新会古井陈皮药材图谱 一致。
2HPLC指纹图谱及含量测定
2.1样品制备
对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品适量,精密称定,用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液即 可。
供试品溶液的制备:取提取物适量,精密称定,加入溶液超声处理30分钟,放冷,配制 成浓度为0.5mg/ml的溶液,过0.22μm的滤膜,取续滤液,即得供试品溶液。
2.2高效液相色谱检测
检测条件:
色谱仪器:安捷伦HPLC1260高效液相色谱仪;检测器:Agilent DAD检测器;
色谱柱:Zorbax SB C18(4.6×250mm,5μm;Agilent);流动相:流动相A为乙腈,流动相B为水;
流动相梯度如表1所示。
表1
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 5 | 95 |
30 | 25 | 75 |
55 | 95 | 5 |
65 | 95 | 5 |
流速:0.8ml/min;进样量:10μl;柱温:20℃;检测波长:280nm;运行时间:65min。
高效液相色谱法检测方法:分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色 谱仪。
高效液相色谱法检测结果:
(1)测定,记录色谱图,即得图3所示的陈皮药材HPLC图谱,下代表橙皮苷;上:陈皮对照提取物。
(2)并以参照物作为对照品的HPLC的色谱峰计算上述陈皮ERS中的橙皮苷的含量(以干 燥品计算,含量以wt%计),结果如下表6所示。
表6
因此,本实施例制备得到的陈皮ERS经薄层色谱检测黄酮苷类成分和黄酮苷元类成分均 符合要求,经高效液相色谱法检测其橙皮苷含量在调配标准范围之内,可作为陈皮及含陈皮/ 陈皮有效成分的中药制剂的对照提取物。
实施例3
对实施例1中的步骤一中采用70%乙醇代替甲醇进行,最后得到的陈皮提取物中橙皮苷的 含量为3.15%(远小于本发明的14%~22%),由此可见,其值明显比甲醇提取的得率低的多, 只有加大提取量或者次数才有可能调配其橙皮苷含量以达到调配标准范围之内。
实施例4
与实施例1的区别在于:对实施例1中的步骤一中采用90%甲醇代替100%甲醇进行,最后得 到的陈皮提取物中橙皮苷的含量为8.91%(小于本发明的14%~22%)由此可见,其值明显比甲 醇提取的得率低的多,只有加大提取量或者次数才有可能调配其橙皮苷含量以达到调配标准 范围之内。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想 将本发明限定为所公开的精确形式,并且很显然,根据上述教导,可以进行很多改变和变化。 对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用,从而使得 本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择 和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
Claims (10)
1.一种陈皮对照提取物,其特征在于,所述提取物为黄绿色干燥粉末,其是由含重量百分比陈皮提取物65-84%和助流剂16-35%组成,所述陈皮提取物中包括黄酮苷和黄酮苷元成分,所述黄酮苷中不含新橙皮苷和柚皮苷。
2.如权利要求1所述的一种陈皮对照提取物,其特征在于,所述黄酮苷元类成是川陈皮素和/或红橘素;所述黄酮苷类成分是橙皮苷。
3.如权利要求1所述的一种陈皮对照提取物,其特征在于,其中橙皮苷含量14%~22%,优选16%~20%。
4.如权利要求1所述的一种陈皮对照提取物,其特征在于,是通过下述方法制备得到的:
(1)粗提:取不同来源及批次的陈皮药材粉末用醇超声提取,滤过得滤液1;药渣再用醇超声提取1-3次,收集的1-3次滤液与滤液1混合、蒸干得到粗提物;
(2)精制:粗提物溶解于水,抽滤得到滤渣;将滤渣用水冲洗至无色,收集滤液2和沉淀物;滤液2上大孔树脂柱,先用水冲洗大孔树脂,弃去洗脱液1,再用含水醇洗脱大孔树脂,收集洗脱液2,洗脱液2与沉淀物混合,蒸干得到陈皮提取物;
(3)混合:在陈皮提取物中添加助流剂,研磨过滤,即得陈皮提取物混合物;
(4)调配:将不同来源或批次的陈皮提取物混合物进行调配,得到陈皮对照提取物。
5.如权利要求4所述的一种陈皮对照提取物,其特征在于,
步骤(1)中陈皮药材粉末与甲醇的重量体积比为1:8~1:50;所述超声时间为30~60min,功率为100W~3kW;所述蒸干温度为20~50℃;
步骤(2)中所述的滤液2是用其重量1~4倍的大孔树脂层析,是先用5~10个柱体积纯净水冲洗大孔树脂,收集洗脱液1弃去;再用3~10个柱体积70%~100%甲醇冲洗大孔树脂,收集洗脱液2;
步骤(3)中助流剂与陈皮提取物重量比为(2-5):10;
步骤(4)所述的调配具体指:将不同来源或批次的陈皮提取物进行调配,应使最终的陈皮对照提取物中橙皮苷的重量百分比含量在14%~22%。
6.如权利要求5所述的一种陈皮对照提取物,其特征在于,在步骤(1)前增加不同陈皮药材来源的筛选步骤:将不同来源或批次的原料药材以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测;然后对不同来源或批次的原料药材的通过薄层色谱法和/或高效液相色谱法得到的色谱图和/或测定的含量进行比较分析,剔除色谱图和/或测定的含量异常的原料药材,保留色谱图和/或测定的含量一致的原料药材进行下一步的粗提。
7.如权利要求6所述的一种陈皮对照提取物,其特征在于,所述的原药材的薄层色谱法包括如下步骤:
(1)化学对照品溶液的制备:取橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和红橘素对照品精密称定,分别用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液;
(2)药材供试品溶液的制备:陈皮药材粉末加甲醇浸泡,超声处理,离心,取上清液即得药材供试品溶液,或不离心直接过滤膜即得药材供试品溶液;
(3)薄层色谱检测:
a针对黄酮苷类:
薄层板:硅胶预制板
点样:药材供试品溶液点样量1μl,条带状点样
展开剂:氯仿:甲醇:水:冰乙酸=13:4:1:1.5(10℃以下分层,取下层)
展开:于双槽展开缸,一侧加展开剂10ml,预平衡15分钟,展开上行8.5cm
检视:喷以5%AlCl3乙醇溶液,薄层板置薄层加热板上105℃加热5分钟,置于UV紫外光灯366nm下检视;
b针对黄酮苷元类
薄层板:硅胶预制板
点样:药材供试品溶液点样量1μl,条带状点样
展开剂:
展开剂1,甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:20:1:1,10℃以下分层,取上层;
展开剂2,甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:10:1:1,10℃以下分层,取上层;
展开:先用展开剂1展开8.5cm,再用展开剂2展开8.5cm,每次展开前双槽展开缸,应用10ml展开剂预平衡15分钟,薄层板置薄层加热板上50℃加热15分钟;
检视:展开后挥干薄层板表面溶剂,于UV紫外光灯366nm下检视,拍照;
(4)所述的高效液相色谱法包括如下步骤:
化学对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品精密称定,用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液;
药材供试品溶液的制备:陈皮药材粉末,精密称定,置于锥形瓶中,加入60-80℃石油醚回流提取,过滤,弃滤液,滤渣用60-80℃石油醚5ml冲洗,挥干药渣,加甲醇,回流提取,放冷,过滤,用甲醇冲洗容器,置于100ml容量瓶中,加甲醇至刻度线,定容,摇匀,滤膜即得药材供试品溶液;
高效液相色谱法检测条件如下:
色谱仪器:高效液相色谱仪;检测器:DAD检测器;检测波长:280nm
色谱柱:C184.6×250mm,5μm;柱温:20℃
流动相:流动相A为乙腈,流动相B为水;梯度洗脱程序进行:流速:0.8ml/min;进样量:10μl;运行时间:65min
检测方法:精密吸取药材供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
8.如权利要求7所述的一种陈皮对照提取物,其特征在于,所述的原药材的薄层色谱法包括如下步骤:所述陈皮对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中的川陈皮素、红橘素和橙苷位置处的荧光斑点和采用高效液相色谱法检测得到的色谱图在橙皮苷位置处的色谱峰应分别与其对应的化学对照品或其对应的原料药材一致。
9.一种陈皮或含陈皮有效成分的药材或中药制剂的质量控制方法,其特征在于:权利要求1所述陈皮对照提取物、待测样品以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测,对比判别。
10.如权利要求9所述的一种陈皮或含陈皮有效成分的药材或中药制剂的质量控制方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)化学对照品溶液的制备:取橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和红橘素对照品精密称定,分别用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液;
(2)陈皮对照提取物溶液的制备:陈皮提取物,精密称定,置2ml量瓶中,加甲醇1.5ml,超声处理15分钟,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,过0.22μm滤膜即得陈皮提取物溶液;
(3)待测样品供试品溶液制备:陈皮药材粉末或含陈皮制剂加甲醇浸泡,超声处理,离心,取上清液即得供试品溶液,或不离心直接过滤膜即得供试品溶液;
(4)薄层色谱检测:
a针对黄酮苷类:
薄层板:硅胶预制板
点样:对照品、供试品溶液点样量1μl,条带状点样
展开剂:氯仿:甲醇:水:冰乙酸=13:4:1:1.5(10℃以下分层,取下层)
展开:于双槽展开缸,一侧加展开剂10ml,预平衡15分钟,展开上行8.5cm
检视:喷以5%AlCl3乙醇溶液,薄层板置薄层加热板上105℃加热5分钟,置于UV紫外光灯366nm下检视;
b针对黄酮苷元类
薄层板:硅胶预制板
点样:对照品,供试品溶液点样量1μl,条带状点样
展开剂:
展开剂1,甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:20:1:1,10℃以下分层,取上层;
展开剂2,甲苯:乙酸乙酯:甲酸:水=20:10:1:1,10℃以下分层,取上层;
展开:先用展开剂1展开8.5cm,再用展开剂2展开8.5cm,每次展开前双槽展开缸,应用10ml展开剂预平衡15分钟,薄层板置薄层加热板上50℃加热15分钟;
检视:展开后挥干薄层板表面溶剂,于UV紫外光灯366nm下检视,拍照;
(5)所述的高效液相色谱法包括如下步骤:
化学对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品精密称定,用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液;
陈皮对照提取物溶液的制备:陈皮对照提取物,精密称定,于100ml容量瓶中,加入80ml甲醇,超声30分钟,放冷,甲醇定容至刻度,通过0.22μm即得陈皮提取物供试品溶液;
待测样品供试品溶液制备:陈皮药材粉末或含陈皮制剂,精密称定,置于锥形瓶中,加入60-80℃石油醚回流提取,过滤,弃滤液,滤渣用60-80℃石油醚5ml冲洗,挥干药渣,加甲醇,回流提取,放冷,过滤,用甲醇冲洗容器,置于100ml容量瓶中,加甲醇至刻度线,定容,摇匀,滤膜即得供试品溶液;
高效液相色谱法检测条件如下:
色谱仪器:高效液相色谱仪;检测器:DAD检测器;检测波长:280nm
色谱柱:C184.6×250mm,5μm;柱温:20℃
流动相:流动相A为乙腈,流动相B为水;梯度洗脱程序进行:流速:
0.8ml/min;进样量:10μl;运行时间:65min
检测方法:精密吸取化学对照品、陈皮对照提取物,供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
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CN111830188A (zh) * | 2020-07-31 | 2020-10-27 | 广州白云山敬修堂药业股份有限公司 | 一种儿童清肺丸的质量检测方法 |
Citations (1)
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CN106841433A (zh) * | 2017-01-17 | 2017-06-13 | 广州浩意万医药科技有限公司 | 一种青皮对照提取物及其应用 |
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Title |
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国家药典委员会: "陈皮", 《中国药典2015年版 一部》 * |
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CN111830188A (zh) * | 2020-07-31 | 2020-10-27 | 广州白云山敬修堂药业股份有限公司 | 一种儿童清肺丸的质量检测方法 |
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