摩罗丹质量标准及其检测方法
技术领域
本发明涉及摩罗丹的质量控制方法,特别涉及麦冬、三七、地榆、当归、川芎、延胡索的薄层鉴别方法和白芍中芍药苷(C23H28O11)的含量测定。
背景技术
慢性萎缩性胃炎是一种常见病、多发病,一般认为萎缩性胃炎为胃癌前期病变或认为可能是胃癌的潜伏因素。因此,本病在国内外已引起医学界的广泛重视。对于慢性萎缩性胃炎,迄今国内外尚无满意的治疗方法,也缺乏有效的中西药物,摩罗丹经过多年的临床应用证明对治疗萎缩性胃炎和一般性的胃病均有显著的效果。
摩罗丹是由百合、茯苓、玄参、乌药、泽泻、麦冬、当归、茵陈、延胡索、白芍、石斛、九节菖蒲、川芎、鸡内金、三七、白术、地榆、蒲黄十八药组成,具有和胃降逆,健脾消胀,通络定痛之功效。用于慢性萎缩性胃炎及胃疼,胀满,痞闷,纳呆,暖气,烧心等症。
摩罗丹原质量标准对茯苓、泽泻、茵陈、石斛、鸡内金、地榆、玄参、蒲黄进行了显微鉴别,对延胡索进行了薄层鉴别,检测指标少且没有含量测定指标,不能有效的控制产品质量。
发明内容
本发明目的在于提供摩罗丹的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现
本发明摩罗丹的质量控制方法包括如下鉴别和/或含量测定方法:
鉴别包括如下方法中的一种或几种:
A.取摩罗丹,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm;薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;非腺毛丁字形,头部细胞呈纤维状;纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅块,排列成行;无色不规则块状物易查见;木栓细胞深黄棕色,呈长方形或长多角形,有的胞腔内充满黄棕色内容物及油粒状物;石细胞黄棕色或无色,类长方形、类圆形或形状不规则,直径约至94μm;花粉粒黄棕色,呈类圆形,直径约至30μm,外壁有似网状雕纹;
B.取摩罗丹9-18g,剪碎,加硅藻土6-12g,研匀,加水40-60ml,加盐酸4-6ml,超声处理或热回流或冷浸提取30分钟,滤过,滤液每次加溶剂***、正丁醇或乙酸乙酯30-50ml,提取2-4次,合并溶剂***、正丁醇或乙酸乙酯,蒸干,残渣加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5~12μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以20-4∶5-1的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以8-12%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹9-18g,剪碎,加硅藻土6-12g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为10-5:5-2:3-1的下层溶液50-70ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤2-4次,每次20-30ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2-4次,每次20-30ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5-7:1-3:1-2:1-2的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取第B项下残渣,残渣加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯制成1ml含0.3-0.7mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以6-30:3-15:1-5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹5~10g,剪碎,加硅藻土1-5g,研匀,加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯50-70ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯0.4-0.6ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以9-45:1-5的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
质量控制方法中的含量测定如下:
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以15-60:40-85的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于1000~5000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯制成每1ml含30-50μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸,剪碎,精密称取1~10g,加入硅藻土1~10g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯15-25ml,密塞,称重,超声处理或热回流或冷浸提取30分钟,取出放至室温后称重,用溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯补足至15-25ml摇匀,滤过,精密吸取续滤液4-6ml,置10ml量瓶中,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。
本发明摩罗丹的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定方法:
鉴别优选如下方法中的一种或几种:
A.取摩罗丹,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm;薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;非腺毛丁字形,头部细胞呈纤维状;纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅块,排列成行;无色不规则块状物易查见;木栓细胞深黄棕色,呈长方形或长多角形,有的胞腔内充满黄棕色内容物及油粒状物;石细胞黄棕色或无色,类长方形、类圆形或形状不规则,直径约至94μm;花粉粒黄棕色,呈类圆形,直径约至30μm,外壁有似网状雕纹;
B.取摩罗丹9g,剪碎,加硅藻土6g,研匀,加水50ml,加盐酸5ml,超声处理或热回流或冷浸提取30分钟,滤过,滤液加溶剂***、正丁醇或乙酸乙酯提取2次,每次40ml,合并溶剂***、正丁醇或乙酸乙酯,蒸干,残渣加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以4:1的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹18g,剪碎,加硅藻土12g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为10:2:1的下层溶液60ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤2次,每次25ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次25ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5:3:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取第B项下残渣,残渣加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯制成1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以6:3:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹5g,剪碎,加硅藻土3g,研匀,加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯60ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯0.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以9:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
质量控制方法中的含量测定优选如下:
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以15:85的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸,剪碎,精密称取1g,加入硅藻土1g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯20ml,密塞,称重,频率40KHz,功率250W的超声处理或热回流或冷浸提取30分钟,取出放至室温后称重,用溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯补足至20ml,摇匀,滤过,精密吸取续滤液5ml,置10ml量瓶中,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。
本发明摩罗丹的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定方法:
鉴别优选如下方法中的一种或几种:
A.取摩罗丹,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm;薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;非腺毛丁字形,头部细胞呈纤维状;纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅块,排列成行;无色不规则块状物易查见;木栓细胞深黄棕色,呈长方形或长多角形,有的胞腔内充满黄棕色内容物及油粒状物;石细胞黄棕色或无色,类长方形、类圆形或形状不规则,直径约至94μm;花粉粒黄棕色,呈类圆形,直径约至30μm,外壁有似网状雕纹;
B.取摩罗丹10g,剪碎,加硅藻土11g,研匀,加水45ml,加盐酸5ml,超声处理或热回流或冷浸提取30分钟,滤过,滤液每次加溶剂***、正丁醇或乙酸乙酯45ml,提取4次,合并溶剂***、正丁醇或乙酸乙酯,蒸干,残渣加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各6μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以9:1的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以9%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹16g,剪碎,加硅藻土11g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为9:3:2的下层溶液55ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤2次,每次28ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次22ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5.5:2.5:1.1:1.9的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取第B项下残渣,残渣加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯制成1ml含0.4mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以28:5:4的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹6g,剪碎,加硅藻土4g,研匀,加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯52ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯0.45ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以44:2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
质量控制方法中的含量测定如下:
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以58∶41的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于1000~5000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯制成每1ml含32μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸,剪碎,精密称取2g,加入硅藻土8g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯16ml,密塞,称重,超声处理或热回流或冷浸提取30分钟,取出放至室温后称重,用溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯补足至16ml,摇匀,滤过,精密吸取续滤液4.5ml,置10ml量瓶中,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。
本发明摩罗丹的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定方法:
鉴别优选如下方法中的一种或几种:
A.取摩罗丹,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm;薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;非腺毛丁字形,头部细胞呈纤维状;纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅块,排列成行;无色不规则块状物易查见;木栓细胞深黄棕色,呈长方形或长多角形,有的胞腔内充满黄棕色内容物及油粒状物;石细胞黄棕色或无色,类长方形、类圆形或形状不规则,直径约至94μm;花粉粒黄棕色,呈类圆形,直径约至30μm,外壁有似网状雕纹;
B.取摩罗丹17g,剪碎,加硅藻土7g,研匀,加水55ml,加盐酸6ml,超声处理或热回流或冷浸提取30分钟,滤过,滤液每次加溶剂***、正丁醇或乙酸乙酯35ml,提取2次,合并溶剂***、正丁醇或乙酸乙酯,蒸干,残渣加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各9μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5:4的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以11%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹11g,剪碎,加硅藻土8g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为6:4∶1的下层溶液65ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤4次,每次22ml,再用正丁醇饱和的水洗涤4次,每次28ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以6.8:1.2:1.9:1.1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取第B项下残渣,残渣加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯制成1ml含0.6mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以7:14:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹9g,剪碎,加硅藻土2g,研匀,加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯68ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯0.55ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,加溶剂甲醇、乙醇、石油醚、***、三氯甲烷或乙酸乙酯20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以10:4的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
质量控制方法中的含量测定优选如下:
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以16:83的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于1000~5000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯制成每1ml含45μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸,剪碎,精密称取7g,加入硅藻±3g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯22ml,密塞,称重,超声处理或热回流或冷浸提取30分钟,取出放至室温后称重,用溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯补足至22ml,摇匀,滤过,精密吸取续滤液5.5ml,置10ml量瓶中,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。
上述摩罗丹由百合、茯苓、玄参、乌药、泽泻、麦冬、当归、白术(麸炒)、茵陈、白芍、石斛、九节菖蒲、川芎、三七、地榆、延胡索(醋炙)、蒲黄、鸡内金(炒香)等原料药制成,为棕色的大蜜丸或小蜜丸;味甜、微苦。
本发明摩罗丹的质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定,所要解决的技术问题在于克服了摩罗丹原检测指标少且没有含量测定指标,不能有效的控制产品质量的不足之处,改进原有的质量标准,提高产品质量的可控性。在原有的基础上增加了麦冬、三七、地榆、当归、川芎的薄层鉴别,对延胡索的薄层鉴别进行了修订,并建立了白芍中芍药苷(C23H28O11)的含量测定。
本发明质量控制方法依据试验结果表明其准确度高,具有良好的回收率;线性试验表明芍药苷在0.1658μg~0.8288μg范围内线性关系良好,专属性强,供试品溶液在24小时内基本稳定。
附图说明:
图1线性图。
图2对照品色谱图。
图3样品色谱图。
图4阴性色谱图。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1 准确度试验
1.1 仪器与试药
仪器:日本岛津HPLC色谱仪LC-10ATVP泵,SPD-10ATVP紫外检测器,N2010浙江大学色谱数据工作站。色谱柱:大连依特利(250nm×4.6nm×5μm)
对照品:芍药苷为中国药品生物制品检定所提供(110736-200628供含量测定用),使用前置五氧化二磷减压干燥12小时以上使用。
试剂:乙腈为色谱纯试剂,乙醇为分析纯试剂,水为重蒸水。
1.2 色谱条件
实验条件选择
(1)色谱柱:Hypersil C18(250nm×4.6nm×5μm);流动相:乙腈—水(15:85);流速:1.0ml/min。柱温:室温;检测波长:230nm;灵敏度:0.01AUFS。在选定条件下,芍药苷与样品中其他组分色谱峰可基线分离。芍药苷与其相邻色谱峰的分离度大于1.5,芍药苷峰理论塔板数为3000以上。
(2)流动相的选择:分别考察了甲醇—异丙醇—36%乙酸—水(25:2:2:71);乙腈—0.1%磷酸液(14:86);甲醇—水(33:67);乙腈—水(15:85)作为流动相,经过多次反复试验,得出,以乙腈-水(60-15:40-85)为流动相,色谱分离效果最好,保留时间较适宜,所以收入正文。
(3)检测波长:按中国药典2005年版一部收载的白芍含量项下的检测波长进行测定,即得。
1.3 对照品溶液的制备
精密称取干燥的芍药苷对照品0.02590g置50ml量瓶中,加溶剂(甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯)溶解至刻度,摇匀,制成每1ml含0.518mg。精密量取2ml,置25ml量瓶中,加溶剂(甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯)稀释至刻度,摇匀,即得,每1ml含芍药苷0.04144mg。
1.4 供试品溶液的制备
取摩罗丹小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸,剪碎,精密称取约1g,加硅藻土1g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入溶剂(甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯)20ml,密塞,称定重量,提取(超声处理或热回流或冷浸)30分钟,取出放至室温后称重,用溶剂(甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯)补足重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液5ml,置10ml量瓶中,加溶剂(甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯)至刻度,摇匀,即得。
1.5 方法学验证
精密称取已知芍药苷含量的同一批号样品(1221)约0.5g,分别精密加入芍药苷对照品溶液(0.518mg/ml)1ml,2ml,3ml,按上述测定条件,制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪,并计算回收率,计算结果见表1:
表1 准确度试验结果
试验表明:本发明方法具有良好的回收率。
实验例2 精密度试验
取同一批号样品6份,分别按实验例1条件制备供试品溶液,测得峰面积值并计算含量,RSD<2%(n=6)结果见表2:
表2 样品重现性试验
实验表明:样品重现性好。
实验例3 线性试验
精密量取芍药苷对照品溶液(0.04144mg/ml)4μl、8μl、12μl、16μl、20μl,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积值,以芍药苷微克数为横坐标,峰面积值为纵坐标,得一直线,计算回归方程,Y=1.53348×10-5x+1.56485×10-8,r=0.99990(n=5)。
结果表明芍药苷在0.1658μg~0.8288μg范围内线性关系良好。(见图1)
实验例4 专属性试验
按处方中药味比例称取不含白芍的药味,按制剂工艺制成阴性对照,再按供试品溶液制备方法制备缺白芍的阴性对照溶液。吸取对照品,供试品溶液,阴性对照品溶液各20μl,分别注入色谱仪中,按上述色谱条件进行测定,结果阴性对照溶液与芍药苷对照品相同保留时间处未显色谱峰,故认为无干扰。(见图2、3、4)
实验例5 耐用性试验
取摩罗丹按上述条件制备供试品溶液(批号1222),注入液相色谱仪,测定峰面积值,然后于0、4、8、16、24小时测定一次,测的样品中芍药苷峰面积值的RSD<2%,结果见表3:
表3 耐用性试验结果(n=4)
结果表明供试品溶液在24小时内基本稳定。
实验例6 白芍含量测定试验
取摩罗丹依法制备供试品溶液,吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪测定峰面积,计算样品芍药苷含量。见表4:
表4 摩罗丹含量测定结果
根据样品含量监测数据,将摩罗丹含量限度确定为:本品每克含白芍以芍药苷(C23H18O11)计,不得少于0.8mg。
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
具体实施方式
实施例1:摩罗丹的质量控制方法
鉴别方法:
A.取摩罗丹,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm;薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;非腺毛丁字形,头部细胞呈纤维状;纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅块,排列成行;无色不规则块状物易查见;木栓细胞深黄棕色,呈长方形或长多角形,有的胞腔内充满黄棕色内容物及油粒状物;石细胞黄棕色或无色,类长方形、类圆形或形状不规则,直径约至94μm;花粉粒黄棕色,呈类圆形,直径约至30μm,外壁有似网状雕纹;
B.取摩罗丹9g,剪碎,加硅藻土6g,研匀,加水50ml,加盐酸5ml,超声处理30分钟,滤过,滤液加溶剂***提取2次,每次40ml,合并***液,蒸干,残渣加三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以4:1的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹18g,剪碎,加硅藻土12g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为10:2:1的下层溶液60ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤2次,每次25ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次25ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5:3:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取第B项下残渣,加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以6:3:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹5g,剪碎,加硅藻土3g,研匀,加***60ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,加溶剂***20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以9:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
含量测定:
照高效液相色谱法测定;色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以15:85的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹重量差异项下的大蜜丸,剪碎,精密称取1g,加入硅藻土1g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇20ml,密塞,称重,频率40KHz,功率250W超声处理30分钟,取出放至室温后称重,用乙醇补足至20ml,摇匀,滤过,精密吸取续滤液5ml,置10ml量瓶中,加溶剂乙醇稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。
实施例2:摩罗丹的质量控制方法
鉴别方法:
B.取摩罗丹10g,剪碎,加硅藻土11g,研匀,加水45ml,加盐酸5ml,热回流提取30分钟,滤过,滤液每次加乙酸乙酯45ml,提取4次,合并溶剂乙酸乙酯,蒸干,残渣加溶剂三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各6μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以9:1的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以9%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取第B项下残渣,残渣加溶剂甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加溶剂甲醇制成1ml含0.4mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以28:5:4的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹6g,剪碎,加硅藻土4g,研匀,加石油醚52ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加三氯甲烷0.45ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,加溶剂石油醚20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以44:2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
含量测定:
照高效液相色谱法测定;色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以58:41的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加正丁醇制成每1ml含32μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹小蜜丸,剪碎,精密称取2g,加入硅藻土8g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入水16ml,密塞,称重,冷浸提取30分钟,取出放至室温后称重,用溶剂正丁醇补足至16ml,摇匀,滤过,精密吸取续滤液4.5ml,置10ml量瓶中,加溶剂乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。
实施例3:摩罗丹的鉴别方法:
B.取摩罗丹17g,剪碎,加硅藻土7g,研匀,加水55ml,加盐酸6ml,冷浸提取30分钟,滤过,滤液每次加乙酸乙酯35ml,提取2次,合并溶剂乙酸乙酯,蒸干,残渣加三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各9μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5:4的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以11%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹11g,剪碎,加硅藻土8g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为6:4:1的下层溶液65ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤4次,每次22ml,再用正丁醇饱和的水洗涤4次,每次28ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以6.8:1.2:1.9:1.1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取第B项下残渣,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加溶剂乙酸乙酯制成1ml含0.6mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以7:14:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹9g,剪碎,加硅藻土2g,研匀,加溶剂***68ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加三氯甲烷0.55ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,加***20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以10:4的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
实施例4:摩罗丹的质量控制方法
鉴别方法:
A.取摩罗丹,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm;薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;非腺毛丁字形,头部细胞呈纤维状;纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅块,排列成行;无色不规则块状物易查见;木栓细胞深黄棕色,呈长方形或长多角形,有的胞腔内充满黄棕色内容物及油粒状物;石细胞黄棕色或无色,类长方形、类圆形或形状不规则,直径约至94μm;花粉粒黄棕色,呈类圆形,直径约至30μm,外壁有似网状雕纹;
B.取摩罗丹10g,剪碎,加硅藻土11g,研匀,加水45ml,加盐酸5ml,超声处理30分钟,滤过,滤液每次加正丁醇45ml,提取4次,合并正丁醇,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各6μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以9:1的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以9%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹6g,剪碎,加硅藻土4g,研匀,加溶剂甲醇52ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加***0.45ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,加溶剂甲醇20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以44:2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
含量测定:
照高效液相色谱法测定;色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以58:41的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于4000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加溶剂正丁醇制成每1ml含32μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹小蜜丸,剪碎,精密称取2g,加入硅藻土8g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入溶剂乙酸乙酯16ml,密塞,称重,热回流提取30分钟,取出放至室温后称重,用溶剂正丁醇补足至16ml,摇匀,滤过,精密吸取续滤液4.5ml,置10ml量瓶中,加三氯甲烷稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。
实施例5:摩罗丹的鉴别方法
A.取摩罗丹,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm;薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;非腺毛丁字形,头部细胞呈纤维状;纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅块,排列成行;无色不规则块状物易查见;木栓细胞深黄棕色,呈长方形或长多角形,有的胞腔内充满黄棕色内容物及油粒状物;石细胞黄棕色或无色,类长方形、类圆形或形状不规则,直径约至94μm;花粉粒黄棕色,呈类圆形,直径约至30μm,外壁有似网状雕纹;
B.取摩罗丹9g,剪碎,加硅藻土6g,研匀,加水50ml,加盐酸5ml,冷浸提取30分钟,滤过,滤液加溶剂正丁醇提取2次,每次40ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加溶剂乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以4:1的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹18g,剪碎,加硅藻土12g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为7:3:2的下层溶液60ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤2次,每次25ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次25ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5:3:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹5g,剪碎,加硅藻土3g,研匀,加溶剂三氯甲烷60ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣乙醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,加溶剂***20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以9:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
实施例6:摩罗丹的质量控制方法
鉴别方法:
A.取摩罗丹,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm;薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;非腺毛丁字形,头部细胞呈纤维状;纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅块,排列成行;无色不规则块状物易查见;木栓细胞深黄棕色,呈长方形或长多角形,有的胞腔内充满黄棕色内容物及油粒状物;石细胞黄棕色或无色,类长方形、类圆形或形状不规则,直径约至94μm;花粉粒黄棕色,呈类圆形,直径约至30μm,外壁有似网状雕纹;
C.取摩罗丹18g,剪碎,加硅藻土12g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为10:2:1的下层溶液60ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤2次,每次25ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次25ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5:3:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取摩罗丹9g,剪碎,加硅藻土6g,研匀,加水50ml,加盐酸5ml,超声处理提取30分钟,滤过,滤液加溶剂乙酸乙酯提取2次,每次40ml,合并乙酸乙酯,蒸干,残渣加溶剂甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加溶剂乙醇制成1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以6:3:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
实施例7:摩罗丹的质量控制方法
鉴别方法:
B.取摩罗丹9g,剪碎,加硅藻土6g,研匀,加水50ml,加盐酸5ml,热回流30分钟,滤过,滤液加溶剂乙酸乙酯提取2次,每次40ml,合并乙酸乙酯,蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各8μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以4:1的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹12g,剪碎,加硅藻土12g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为10:2:1的下层溶液60ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤2次,每次25ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次25ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5:3:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取第B项下残渣,残渣加三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加溶剂三氯甲烷制成1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以6:3:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
含量测定:
照高效液相色谱法测定;色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以15:85的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品,加溶剂甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹重量差异项下的大蜜丸,剪碎,精密称取1g,加入硅藻土1g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入三氯甲烷20ml,密塞,称重,热回流提取30分钟,取出放至室温后称重,用三氯甲烷补足至20ml,摇匀,滤过,精密吸取续滤液5ml,置10ml量瓶中,加三氯甲烷稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。
实施例8:摩罗丹的质量控制方法
鉴别方法:
B.取摩罗丹9g,剪碎,加硅藻土6g,研匀,加水50ml,加盐酸5ml,冷浸提取30分钟,滤过,滤液加溶剂乙酸乙酯提取2次,每次40ml,合并乙酸乙酯,蒸干,残渣加溶剂三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以4:1的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹18g,剪碎,加硅藻土12g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为10:2:1的下层溶液60ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤2次,每次25ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次25ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5:3:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹5g,剪碎,加硅藻土3g,研匀,加溶剂乙酸乙酯60ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加溶剂石油醚0.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,分别加乙酸乙酯20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以9:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
含量测定:
照高效液相色谱法测定;色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以15:85的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品,加正丁醇制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹小蜜丸,剪碎,精密称取1g,加入硅藻土1g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入溶剂正丁醇20ml,密塞,称重,冷浸提取30分钟,取出放至室温后称重,用正丁醇补足至20ml,摇匀,滤过,精密吸取续滤液5ml,置10ml量瓶中,加正丁醇至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。
实施例9:摩罗丹的质量控制方法
鉴别方法:
A.取摩罗丹,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm;薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;非腺毛丁字形,头部细胞呈纤维状;纤维表面类圆形细胞中含细小圆形硅块,排列成行;无色不规则块状物易查见;木栓细胞深黄棕色,呈长方形或长多角形,有的胞腔内充满黄棕色内容物及油粒状物;石细胞黄棕色或无色,类长方形、类圆形或形状不规则,直径约至94μm;花粉粒黄棕色,呈类圆形,直径约至30μm,外壁有似网状雕纹;
B.取摩罗丹17g,剪碎,加硅藻土7g,研匀,加水55ml,加盐酸6ml,超声处理提取30分钟,滤过,滤液每次加溶剂***35ml,提取2次,合并***液,蒸干,残渣加溶剂乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取麦冬对照药材1g,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各9μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5:4的三氯甲烷-丙酮为展开剂,展开,取出,晾干,喷以11%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C.取摩罗丹11g,剪碎,加硅藻土8g,研匀,加三氯甲烷-甲醇-水为6:4:1的下层溶液65ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水饱和的正丁醇25ml使溶解,置分液漏斗中,用1%的氢氧化钠溶液洗涤4次,每次22ml,再用正丁醇饱和的水洗涤4次,每次28ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取延胡索乙素对照品、人参皂苷Rg1对照品加甲醇分别制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液,供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以6.8:1.2:1.9:1.1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品延胡索乙素色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,再喷以5%的硫酸香草醛-乙醇溶液为2:8显色,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品人参皂苷Rg1色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D.取第B项下残渣,残渣加溶剂三氯甲烷、甲醇、乙醇或乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;另取没食子酸对照品,加溶剂三氯甲烷制成1ml含0.6mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以7:14:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E.取摩罗丹9g,剪碎,加硅藻土2g,研匀,加***68ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加三氯甲烷0.55ml使溶解,作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材各0.5g,分别加***20ml,同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以10:4的正己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
实施例10:摩罗丹的含量测定方法:
照高效液相色谱法测定;色谱条件与***适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以16:83的乙腈-水为流动相;检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于4500;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、水、三氯甲烷或乙酸乙酯制成每1ml含45μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取摩罗丹小蜜丸,剪碎,精密称取7g,加入硅藻土3g,研匀,置具塞锥形瓶中,精密加入乙酸乙酯22ml,密塞,称重,冷浸提取30分钟,取出放至室温后称重,用乙酸乙酯补足至22ml,摇匀,滤过,精密吸取续滤液5.5ml,置10ml量瓶中,加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;摩罗丹每1g含白芍以芍药苷C23H28O11计,不得少于0.8mg。