CN110373346A - 枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A‑5及其用途。所述枯草芽孢杆菌Bacillus sp. A‑5的保藏号为CCTCC NO：M2019157。采用枯草芽孢杆菌Bacillus sp. A‑5发酵制备γ‑聚谷氨酸转化率超过75%，分子量超过4000 KDa，远远高于现有技术中的转化率。

Description

枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5及其用途

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5及其用途，属于生物工程领域。

背景技术

γ-聚谷氨酸是一种由若干个谷氨酸单体(D型或L型)通过γ-酰胺键连接而成的一类阴离子型多肽聚合物，可由化学方法或微生物发酵合成，分子量多在100-1000kDa之间，其平均分子量约为1.23×10⁴KDa。γ-聚谷氨酸没有典型的肽链结构，基本骨架呈直链纤维状。γ-聚谷氨酸作为一种对环境无污染的新型高分子绿色生物产品，具有可降解性、成膜性、成纤性、可塑性、粘结性等独特的理化性能，可应用于医药制造、食品加工保鲜、化妆品、制造业、农业等许多领域。

微生物发酵生产制备γ-聚谷氨酸的优点在于生产成本低，环境污染小，可控性强。国内外已对γ-聚谷氨酸的发酵工艺进行了广泛的研究，包括液体深层发酵和固体发酵的配方和培养工艺为主。γ-聚谷氨酸的生产菌株分为谷氨酸依赖型和谷氨酸非依赖型，由于后者的γ-聚谷氨酸产量较低，因此生产和研究多为谷氨酸依赖型菌株。谷氨酸依赖型菌株需要在发酵培养基中添加一定量的谷氨酸作为前体，且谷氨酸添加量较大，转化率较低，利用率不足50％，使生产成本居高不下，严重阻碍了γ-聚谷氨酸的应用发展。重要的是，分子量的大小与γ-聚谷氨酸的用途密切相关。例如低分子量的γ-聚谷氨酸最适合应用到农业中，而用在其他领域则效果不佳。而用作污水处理方面的γ-聚谷氨酸要求分子量特别大(1500KDa以上)，否则絮凝杂质的效果会显著降低。而以往微生物发酵中菌株自身特性、通气量问题及发酵体系中存在的γ-聚谷氨酸分解酶对γ-聚谷氨酸产生水解作用等，使得γ-聚谷氨酸在大量生产中存在产量、分子量不稳定的问题。因此，探索发酵产高分子量γ-聚谷氨酸及其稳定充分表达的最优培养条件是发酵生产的基础和关键。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5及其用途，用于解决现有技术中γ-聚谷氨酸生产效率低的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5，所述枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5的保藏号为CCTCC NO：M2019157。

本发明采用的微生物是发明人从家庭自制纳豆中筛选得到。同时对其分泌物进行分离纯化，通过溶解性试验、紫外-可见光谱扫描(UV)和化学鉴定、傅里叶红外扫描光谱分析(FTIR)、凝胶渗透色谱(GPC)、高效液相色谱(HPLC)和UPLC-Q-TOF-MS对纯化产物进行了结构鉴定，最终确定其分泌物为γ-聚谷氨酸。

本发明的芽孢杆菌菌株于2018年12月送交浙江大学嗜极微生物实验室进行形态特征鉴定，鉴定结果为：

形态特征为：37℃培养箱培养过夜，菌落呈不规则圆形，乳白色，边缘不整齐，不透明；革兰氏染色呈阳性；显微镜下观察呈杆状，可形成芽孢；大小为(1.20～3.00)μm×(0.45～1.40)μm，两端钝圆。

A-5菌株的主要生理特性为：碱性磷酸酶，酯酶(C4)，酯酶脂肪酶(C8)，酸性磷酸酶，naphthol-AS-BI-phosphohydrolase均为阳性；能还原硝酸盐，水解精氨酸、尿素、β-葡萄糖苷的能力，有明胶液化能力，且同化葡萄糖，麦芽糖和葡萄糖酸盐反应为阳性，V-P试验、接触酶试验和甲基红试验均为阳性。

经形态学鉴定和16s rRNA扩增序列发育树分析，确定该菌株为枯草芽孢杆菌，按照国际命名规则：属名+种名+株名对该菌株进行命名，属名、种名、株名分别为Bacillus、sp.和A-5，命名为Bacillus sp.A-5，保藏号为：CCTCC NO：M2019157。本发明分离的枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5菌株的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5已于2019年3月15日在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)注册保藏，保藏号为CCTCC NO：M2019157。

本发明的另外一个方面提供了上述枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5用于制备γ--聚谷氨酸的用途。

本发明的另外一个方面提供了一种制备γ-聚谷氨酸的方法，所述方法为采用上述枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5发酵制得。

进一步地，所述方法包括以下步骤：菌种活化、菌种培养、菌种发酵以及提取收集γ-聚谷氨酸。

进一步地，所述菌种活化可以采用以下方法：将Bacillus sp.A-5划线接种于斜面培养基上，30～38℃下培养12～24h。更进一步地，所述斜面培养基含有牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，pH值7.0～7.4，例如可以是牛肉膏3.0g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5.0g/L，pH值7.2的斜面培养基。

进一步地，所述菌种培养可以采用以下方法：将单菌落接种于含有适量谷氨酸盐(10-80g/L)的种子培养基中，30-38℃下培养至对数中后期。更进一步地，所述种子培养基碳源为葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油、或柠檬酸中的至少一种，优选碳源为葡萄糖；氮源为酵母抽提物、牛肉膏、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、或NH₄Cl中的至少一种，优选氮源为酵母抽提物；无机盐为K₂HPO₄或MgSO₄中的至少一种或两种。进一步地，所述培养时培养基摇床转速为150-220rpm。

进一步地，所述菌种发酵可以采用以下方法：将菌种溶液接入发酵培养基中，接种量1-5％，摇瓶装液量50-100mL/500mL，摇床转速150-220rpm，30-38℃下培养24-48h。

例如发酵培养基包括以下组分：碳源20-40g/L，氮源3-7g/L，谷氨酸钠10-80g/L，无机盐0.1-2g/L，其余为水，pH值为7.0-7.2。

更进一步地，所述发酵培养基碳源为葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油、或柠檬酸中的至少一种，优选碳源为葡萄糖；氮源为酵母抽提物、牛肉膏、大豆蛋白胨、胰蛋白胨或NH₄Cl中的至少一种，优选氮源为酵母抽提物；无机盐为K₂HPO₄或MgSO₄中的至少一种或两种。

例如发酵培养基包括以下组分：碳源20-40g/L，氮源3-7g/L，谷氨酸钠10-40g/L，无机盐0.1-2g/L，其余为水，pH值为7.0-7.2。

进一步地，所述提取收集γ-聚谷氨酸的方法可以为：将发酵液酸化至pH 2.0-4.0，降低发酵液粘度；10000-12000rpm，4℃离心10-20min，去除菌体。

更进一步地，所述方法还包括将提取收集的γ-聚谷氨酸纯化，所述纯化的方法为采用预冷的有机溶剂溶解收集物，收集沉淀，真空冷冻干燥，制得γ-聚谷氨酸成品。更进一步地，所述有机溶剂为乙醇、甲醇、异丙醇中的至少一种，优选为乙醇。

如上所述，本发明的枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5及其用途，具有以下有益效果：

采用枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5发酵制备γ-聚谷氨酸转化率超过75％，分子量超过4000KDa，远远高于现有技术中的转化率。

本发明菌株保藏信息如下：

菌株名称：枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5；

保藏号为：：CCTCC NO：M2019157；

保藏日期：2019年3月15日；

保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心；

保藏单位简称：CCTCC；

保藏单位地址：武汉市武昌珞珈山街道武汉大学生命科学学院。

附图说明

图1显示为本发明实施例1Bacillus sp.A-5在LB平板上的菌落形态。

图2显示为本发明Bacillus sp.A-5第一张扫描电镜图。

图3显示为本发明Bacillus sp.A-5第二张扫描电镜图。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等

MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENTPROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodicupdates；the series METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS IN ENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，Academic Press，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，Chromatin Protocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。

实施例1

一种合成γ-聚谷氨酸菌株，从家庭自制纳豆中筛选得到，分类命名为枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5。该菌株已于2019年3月15日在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)注册保藏，保藏号为CCTCC NO：M2019157。

本发明的芽孢杆菌菌株于2018年12月送交浙江大学嗜极微生物实验室进行形态特征鉴定，鉴定结果为：

形态特征为：37℃培养箱培养过夜，菌落呈不规则圆形，乳白色，边缘不整齐，不透明；革兰氏染色呈阳性；显微镜下观察呈杆状，可形成芽孢；大小为(1.20～3.00)μm×(0.45～1.40)μm，两端钝圆。如图1所示。

A-5菌株的主要生理特性为：碱性磷酸酶，酯酶(C4)，酯酶脂肪酶(C8)，酸性磷酸酶，naphthol-AS-BI-phosphohydrolase均为阳性；能还原硝酸盐，水解精氨酸、尿素、β-葡萄糖苷的能力，有明胶液化能力，且同化葡萄糖，麦芽糖和葡萄糖酸盐反应为阳性，V-P试验、接触酶试验和甲基红试验均为阳性。

扫描电镜结果如图2和3。

16S rDNA序列分析：测得16S rDNA大部分序列约1.5kb，如SEQ ID NO.1所示。将所得序列与Genbank数据库中进行BLAST，构建以16S***发育进化树。结果表明该菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus sp.)同源性为99％。结合形态、细胞化学成分及16S rDNA序列研究结果，可以将其分类定位为枯草芽孢杆菌，命名为Bacillus sp.A-5。

Bacillus sp.A-5 16S rDNA，SEQ ID NO.1：

cctaaaggttacctcaccgacttccgggtgttacaaactctcgtggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcgattactagcgattccagcttcacgcagtcgagttgcagactgcgatccgaactgagaacagatttgtgggattggcttaacctcgcggtttcgctgccctttgttctgtccattgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgatttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtcaccttagagtgcccaactgaatgctggcaactaagatcaagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacaaccatgcaccacctgtcactctgcccccgaaggggacgtcctatctctaggattgtcagaggatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcagtcttgcgaccgtactccccaggcggagtgcttaatgcgttagctgcagcactaaggggcggaaaccccctaacacttagcactcatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgttcgctccccacgctttcgctcctcagcgtcagttacagaccagagagtcgccttcgccactggtgttcctccacatctctacgcatttcaccgctacacgtggaattccactctcctcttctgcactcaagttccccagtttccaatgaccctccccggttgagccgggggctttcacatcagacttaagaaaccgcctgcgagccctttacgcccaataattccggacaacgcttgccacctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccgtggctttctggttaggtaccgtcaaggtaccgccctattcgaacggtacttgttcttccctaacaacagagctttacgatccgaaaaccttcatcactcacgcggcgttgctccgtcagactttcgtccattgcggaagattccctactgctgcctcccgtaggagtctgggccgtgtctcagtcccagtgtggccgatcaccctctcaggtcggctacgcatcgtcgccttggtgagccgttacctcaccaactagctaatgcgccgcgggtccatctgtaagtggtagccgaagccaccttttatgtttgaaccatgcggttcaaacaaccatccggtattagccccggtttcccggagttatcccagtcttacaggcaggttacccacgtgttactcacccgtccgccgctaacatcagggagcaagctcccatctgtccgctcga

本发明的芽孢杆菌属于厚壁菌门Firmicutes，杆菌纲Bacilli，芽孢杆菌目Bacillales，芽孢杆菌科Bacillaceae，芽孢杆菌属Bacillus。

实施例2

(1)γ-聚谷氨酸溶液在合适浓度下可以与阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的氢氧化钠溶液反应形成混悬液。

其原理为，在溶液中，CTAB的氮原子与γ-聚谷氨酸中羧基的氧原子配对，形成不溶于水的γ-聚谷氨酸-CTAB络合物。本实验中，γ-聚谷氨酸与CTAB形成的悬浊液在250nm处的吸光度大小与γ-聚谷氨酸浓度呈正比，并具有良好的线性关系。首先配置一定浓度梯度的γ-聚谷氨酸标准液，与等体积的CTAB氢氧化钠溶液混匀后，室温静置3-4min，测定其在250nm处的吸光度大小，并绘制标准曲线为y＝0.0166x-0.134(R²＝0.9996)。

表1不同浓度γ-聚谷氨酸在250nm处的吸光度

将制备的γ-聚谷氨酸成品复溶于等体积的去离子水中，稀释适当倍数后作为待测液。

配置8％的NaOH溶液，并以此为溶剂，加入CTAB，待CTAB溶解后配置成6％的CTAB溶液。取2mLγ-聚谷氨酸待测液，准确加入2mL CTAB溶液，自加入时开始计时，充分振荡，静置3-4min，然后在波长250nm处测定此时的吸光度。通过对实施例1中枯草芽孢杆菌Bacillussp.A-5发酵获得的沉淀物的分析发现，沉淀物在250nm处的吸光度与标准品完全一致。通过标准曲线得到发酵γ-聚谷氨酸的浓度，浓度>30g/L。

(2)将制备的γ-聚谷氨酸成品复溶于等体积的去离子水中，采用凝胶渗透色谱(GPC)测定γ-聚谷氨酸分子量。流动相用50mM NaCl和乙腈(4:1)，流速0.7mL/min。γ-聚谷氨酸溶液用0.45μm滤膜过滤后上样，以聚乙二醇(PEG)为标准品制作标准曲线，测定γ-聚谷氨酸分子量，分子量>4000KDa。

实施例3

利用实施例1中的γ-聚谷氨酸合成菌株高效制备γ-聚谷氨酸的方法，步骤如下：

(1)斜面活化：用接种环将Bacillus sp.A-5划线接种于斜面培养基上，37℃下培养过夜。斜面培养基组分为：牛肉膏3.0g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5.0g/L，pH值7.2。

(2)种子培养：从斜面培养基上挑单菌落接种于含有适量的谷氨酸的种子培养基中，200rpm，37℃下培养过夜至对数中后期。种子培养基组分为：葡萄糖10g/L，酵母抽提物2g/L，谷氨酸钠10g/L，pH值7.2，115℃灭菌15min。

(3)发酵培养：将步骤(2)中获得的种子液接入到发酵培养基中，接种量5％，摇瓶装液量100mL/摇瓶体积500mL，摇床转速200rpm，37℃下培养36-48h。发酵培养基组分为：葡萄糖40g/L，酵母抽提物7g/L，谷氨酸钠40g/L，K₂HPO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.25g/L，pH值7.2，115℃灭菌15min。

(4)γ-聚谷氨酸的提取与纯化：

①将发酵液酸化至pH 2.0-4.0，降低发酵液粘度；

②离心转速10000-12000rpm，4℃离心10-20min，取上清液；

③发酵液采用3倍体积预冷无水乙醇进行沉淀，收集产物沉淀；将沉淀物真空冷冻干燥，经过采用与实施例2中相同的沉淀物分析(CTAB法)，沉淀物在250nm处的吸光度与标准品完全一致，证明制得γ-聚谷氨酸成品。

其中发酵制备的γ-聚谷氨酸产量31.51g/L，转化率超过75％，分子量约为4600KDa。

实施例4

利用实施例1中的γ-聚谷氨酸合成菌株高效制备γ-聚谷氨酸的方法，步骤如下：

(1)斜面活化：用接种环将Bacillus sp.A-5划线接种于斜面培养基上，37℃下培养过夜。斜面培养基组分为：牛肉膏3.0g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5.0g/L，pH值7.2。

(2)种子培养：从斜面培养基上挑单菌落接种于含有适量的谷氨酸的种子培养基中，200rpm，37℃下培养过夜至对数中后期。种子培养基组分为：葡萄糖10g/L，酵母抽提物2g/L，谷氨酸钠10g/L，pH值7.2，115℃灭菌15min。

(3)发酵培养：将步骤(2)中获得的种子液接入到发酵培养基中，接种量5％，摇瓶装液量100mL/摇瓶体积500mL，摇床转速200rpm，37℃下培养36-48h。发酵培养基组分为：葡萄糖40g/L，大豆蛋白胨5g/L，谷氨酸钠40g/L，K₂HPO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.25g/L，pH值7.2,115℃灭菌15min。

(4)γ-聚谷氨酸的提取与纯化：

①将发酵液酸化至pH 2.0-4.0，降低发酵液粘度；

②离心转速10000-12000rpm，4℃离心10-20min，取上清液；

③发酵液采用3倍体积预冷甲醇进行沉淀，收集产物沉淀；将沉淀物真空冷冻干燥，经过采用与实施例2中相同的沉淀物分析(CTAB法)，沉淀物在250nm处的吸光度与标准品完全一致，证明，认为制得γ-聚谷氨酸成品。

其中发酵制备的γ-聚谷氨酸产量29.38g/L，转化率73.45％，分子量4600KDa左右。

以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。

序列表

<110> 上海市农业科学院

<120> 枯草芽孢杆菌Bacillus sp. A-5及其用途

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1402

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

cctaaaggtt acctcaccga cttccgggtg ttacaaactc tcgtggtgtg acgggcggtg 60

tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg gcatgctgat ccgcgattac tagcgattcc 120

agcttcacgc agtcgagttg cagactgcga tccgaactga gaacagattt gtgggattgg 180

cttaacctcg cggtttcgct gccctttgtt ctgtccattg tagcacgtgt gtagcccagg 240

tcataagggg catgatgatt tgacgtcatc cccaccttcc tccggtttgt caccggcagt 300

caccttagag tgcccaactg aatgctggca actaagatca agggttgcgc tcgttgcggg 360

acttaaccca acatctcacg acacgagctg acgacaacca tgcaccacct gtcactctgc 420

ccccgaaggg gacgtcctat ctctaggatt gtcagaggat gtcaagacct ggtaaggttc 480

ttcgcgttgc ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc cgtcaattcc 540

tttgagtttc agtcttgcga ccgtactccc caggcggagt gcttaatgcg ttagctgcag 600

cactaagggg cggaaacccc ctaacactta gcactcatcg tttacggcgt ggactaccag 660

ggtatctaat cctgttcgct ccccacgctt tcgctcctca gcgtcagtta cagaccagag 720

agtcgccttc gccactggtg ttcctccaca tctctacgca tttcaccgct acacgtggaa 780

ttccactctc ctcttctgca ctcaagttcc ccagtttcca atgaccctcc ccggttgagc 840

cgggggcttt cacatcagac ttaagaaacc gcctgcgagc cctttacgcc caataattcc 900

ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag ccgtggcttt 960

ctggttaggt accgtcaagg taccgcccta ttcgaacggt acttgttctt ccctaacaac 1020

agagctttac gatccgaaaa ccttcatcac tcacgcggcg ttgctccgtc agactttcgt 1080

ccattgcgga agattcccta ctgctgcctc ccgtaggagt ctgggccgtg tctcagtccc 1140

agtgtggccg atcaccctct caggtcggct acgcatcgtc gccttggtga gccgttacct 1200

caccaactag ctaatgcgcc gcgggtccat ctgtaagtgg tagccgaagc caccttttat 1260

gtttgaacca tgcggttcaa acaaccatcc ggtattagcc ccggtttccc ggagttatcc 1320

cagtcttaca ggcaggttac ccacgtgtta ctcacccgtc cgccgctaac atcagggagc 1380

aagctcccat ctgtccgctc ga 1402

Claims (10)

1.一种枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5，所述枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5的保藏号为CCTCC NO：M2019157。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5为乳白色，边缘不整齐，不透明，呈杆状，可形成芽孢；大小为(1.20～3.00)μm×(0.45～1.40)μm，两端钝圆。

4.如权利要求1～3任意一项所述的枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5用于制备γ-聚谷氨酸的用途。

5.一种制备γ--聚谷氨酸的方法，所述方法为采用如权利要求1～3任意一项所述的枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5发酵制得。

6.根据权利要求5所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

菌种活化、菌种培养、菌种发酵以及提取收集γ-聚谷氨酸。

7.根据权利要求6所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述菌种活化采用以下方法：将枯草芽孢杆菌Bacillus sp.A-5划线接种于斜面培养基上，30～38℃下培养12～24h。

8.根据权利要求6所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述菌种培养采用以下方法：将单菌落接种于含有10-80g/L谷氨酸盐的种子培养基中，30-38℃下培养至对数中后期。

9.根据权利要求6所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述菌种发酵采用以下方法：将菌种溶液接入发酵培养基中，接种量1-5％，摇床转速150-220rpm，30-38℃下培养24-48h。

10.根据权利要求6所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述方法还包括将提取收集的γ-聚谷氨酸纯化，所述纯化的方法为采用预冷的有机溶剂溶解收集物，收集沉淀，真空冷冻干燥，制得γ-聚谷氨酸成品，所述有机溶剂为乙醇、甲醇、异丙醇中的至少一种。