CN110343141B - 一种高含量罗汉果皂苷单体产品的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
一种高含量罗汉果皂苷单体产品的制备方法，包括以下步骤：（1）分散与溶解；（2）沉淀与精密过滤；（3）稀释与纳滤：将陶瓷膜滤液加水稀释，再用纳滤膜过滤，收集纳滤膜截留液；（4）制备色谱的上样；（5）制备色谱的洗脱与收集；（6）浓缩与干燥。本发明还包括所述高含量罗汉果皂苷单体产品制备复配甜味剂的应用。本发明工艺简单，绿色环保，产品中罗汉果皂苷各单体含量高、收率高，适宜于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种罗汉果皂苷的制备方法，具体涉及一种高含量罗汉果皂苷单体产品的制备方法及其应用。
背景技术
罗汉果是我国特有的一种植物，主要产于桂林市的临桂县和永福县，被人们誉为神仙果，是***首批公布的药食两用名贵的中药材。罗汉果的果实和和叶均含有罗汉果三萜皂苷，还有大量的果糖、十多种人体必需氨基酸、脂肪酸、黄酮类化合物、维生素C、微量元素等。罗汉果皂苷作为罗汉果甜味剂的主要成分，是一种具有甜味的三萜烯葡萄糖苷，甜度最高比蔗糖甜300倍，但是不产生热量，是一种饮料、糖果行业的名贵原料，是蔗糖的最佳替代品。常饮罗汉果茶可以防多种疾病，适用于痰多咳嗽以及百日咳患者饮用。罗汉果不仅是一种止咳化痰的中药，更是一种口味甘甜的茶饮，具体的功效包括：清热润肺、利咽开音、润肠通便、提高免疫功能、保护肝脏、抑菌、降血糖、抗肿瘤等。
罗汉果皂苷作为属低热量、高甜度、非营养、非发酵型的甜味剂，作为食品，是安全无毒的，在国家强制标准《GB2760食品添加剂使用标准》中规定，罗汉果甜可不限量用于各类食品。
目前市场上常见的罗汉果提取物的种类及含量规格，通常是罗汉果苷V、含量≤50%。含量超过50%的罗汉果苷V产品，以及罗汉果苷V以外的其他罗汉果皂苷产品很少。这主要是因为生产技术的制约，尽管有文献公开报道高含量罗汉果苷V的制备方法，但是，这些技术仅仅停留在实验室阶段，并不具备批量工业化的可行性。此外，对罗汉果苷V以外的其他罗汉果皂苷（即：11-O-罗汉果苷V、罗汉果苷VI、赛门苷I、罗汉果苷IV、罗汉果苷III）的分离及纯化，尤其是工业化制备方法的报道，尚未见到。
CN107936079A公开了一种制备高纯度罗汉果甜苷V的方法，是以鲜罗汉果为原料，通过预处理、逆流提取、多级过滤、强碱性阴离子交换树脂脱色、浓缩、干燥，得到含量在65%-68%罗汉果甜苷V产品。该方法虽然有提取过程，但是没有富集罗汉果甜苷V的过程，后续处理完全是依靠杂质的除去而提高罗汉果甜苷V的含量。在除去杂质的过程，罗汉果甜苷V同样有跟杂质一起被除去的风险，因此，该方法的收率和产品中的罗汉果甜苷V的含量都偏低。
CNCN104892717A公开了一种罗汉果甜苷V的工业级制备液相色谱分离方法，是以罗汉果粗制品为原料，通过溶解过滤、离心超滤、制备液相色谱分离、浓缩、干燥等步骤，得到纯度≥95%的罗汉果甜苷V。该方法只能制备一种高含量的罗汉果皂苷单体。
CN106967142A公开了一种同时提取罗汉果甜苷V、Ⅵ和11-O基苷V的方法，是以罗汉果甜苷V精制母液为原料，通过正丁醇萃取、浓缩析晶、聚酰胺层析、梯度洗脱、浓缩、干燥等步骤，得到罗汉果苷V、罗汉果苷Ⅵ和11-O基苷V三种高含量的单体。该方法只能制备三种高含量的罗汉果皂苷单体，无法得到其余的三种罗汉果皂苷单体——赛门苷I、罗汉果苷IV和罗汉果苷III。
目前尚未见到有关同时提取制备高含量罗汉果皂苷各单体（即：11-O-罗汉果苷V、罗汉果苷V、罗汉果苷VI、赛门苷I、罗汉果苷IV、罗汉果苷III）方法及复配甜味剂的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种工艺简单，可操作性强，无污染，不使用有毒有害的化学溶剂，绿色环保，产品中罗汉果皂苷各单体含量高、收率高，适宜于工业化生产的高含量罗汉果皂苷单体产品的制备方法。同时，提供一种用高含量罗汉果皂苷单体制备的复配甜味剂。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种高含量罗汉果皂苷的制备方法，包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物，加入乙醇搅拌分散，得罗汉果粗提物乙醇混合溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇混合溶液静置，沉淀，析出不溶物，用陶瓷膜精密过滤，收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加水稀释，再用纳滤膜过滤，收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液；
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液分别浓缩，干燥，得到不同种类的高含量罗汉果皂苷单体。
优选地，步骤（1）中，所述罗汉果粗提物中罗汉果总皂苷的质量百分比含量为20%～95%，其中罗汉果苷V的质量百分比含量为25%～70%。
优选地，步骤（1）中，所述乙醇的体积百分比浓度为60%～90%，所述乙醇的体积与罗汉果粗提物的重量之比为5～10，乙醇的体积用量单位为L ，罗汉果粗提物的重量kg。研究表明，所用乙醇的浓度较高时，对罗汉果粗提物进行分散与溶解的效果较好：第一是，可将罗汉果粗提物中的总皂苷最大限度溶解于乙醇，第二是，高浓度乙醇无法溶解果胶、蛋白质等大分子物质，据此，使罗汉果粗提物中的果胶、蛋白质等大分子物质悬浮于高浓度乙醇溶液中，减少溶液中溶解的杂质，以降低后续制备色谱分离的难度。若乙醇的体积百分比浓度过低，将导致果胶、蛋白质等大分子物质部分溶解于乙醇，无法达到彻底悬浮和游离果胶、蛋白质等杂质的目的；若乙醇的体积百分比浓度过高，又会导致罗汉果总皂苷无法充分溶解。若高浓度乙醇的用量过少，同样会导致罗汉果总皂苷无法充分溶解；若高浓度乙醇的用量过多，将造成物料和能源的浪费。
优选地，步骤（2）中，所述静置沉淀的时间为0.5～2.0小时。静置沉淀的目的是使高度乙醇不溶解的果胶、蛋白质等大分子物质充分析出并沉降。若静置沉淀的时间过短，果胶、蛋白质等大分子物质的析出将不彻底；若静置沉淀的时间过长，将延长生产的周期。
优选地，步骤（2）中，所述陶瓷膜的材质为氧化锆、氧化铝或氧化钛，陶瓷膜的孔径为0.1～1.0μm，精密过滤的压力为0.1～0.3Mpa。使用陶瓷膜精密过滤的目的，是除去乙醇溶液中析出和沉降的果胶、蛋白质等大分子物质。
优选地，步骤（3）中，所述加水的量为陶瓷膜滤液体积的0.5～4倍（进一步优选1～3倍）；稀释后的陶瓷膜滤液中，乙醇的体积分数为10%～50%。用水稀释陶瓷膜滤液的目的，是降低陶瓷膜滤液中乙醇的体积分数，使稀释后的低陶瓷膜滤液中的乙醇的体积分数，与后续步骤（5）所用洗脱剂中的乙醇的体积分数一致。
优选地，步骤（3）中，所述纳滤膜的截留分子量为300～1000Da（进一步优选500～800 Da），纳滤的压力为0.4～0.6Mpa。纳滤的目的是除去低陶瓷膜滤液中的葡萄糖、果糖和无机盐等小分子物质（来自于罗汉果粗提物）。若纳滤膜的截留分子量过小或纳滤的压力过小，都将导致葡萄糖、果糖和无机盐等小分子物质无法透过纳滤膜而除去；若纳滤膜的截留分子量过大或纳滤的压力过大，都将导致罗汉果总皂苷透过纳滤膜，造成罗汉果总皂苷的损失。
优选地，步骤（4）中，所述制备色谱柱为低压、中压或高压压缩柱，柱压为0.1Mpa～50Mpa（进一步优选柱压为0.5～35 Mpa，更进一步优选柱压为35 Mpa）。
优选地，步骤（4）中，所述的色谱填料类型为C4、C6、C8、C12或C18，色谱填料的粒度为5～30μm。
优选地，步骤（4）中，所述色谱填料的用量为罗汉果粗提物重量的5～20倍。将纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱的目的，是将纳滤膜截留液中的罗汉果总皂苷吸附并富集在制备色谱柱中。若色谱填料的用量过少，将导致罗汉果总皂苷无法完全被吸附，造成各个单一罗汉果皂苷成分的洗脱收率偏低；若色谱填料的用量过多，不但会造成资源的浪费，还将增大洗脱的难度，延长洗脱的时间，造成浪费。
优选地，步骤（4）中，所述色谱填料装柱的高径比为1～20∶1（优选2.5～11∶1）。
优选地，步骤（4）中，所述上样的流速为5～20BV/h（进一步优选8～13BV/h）；1BV=色谱填料装柱体积。
优选地，步骤（5）中，所述的洗脱剂为乙醇-水溶液，其中乙醇的体积分数为10%～50%。使用乙醇-水溶液对制备色谱柱洗脱的目的是，将吸附在制备色谱柱中的罗汉果皂苷单体按顺序依次洗脱，并分段收集，从而得到单一的高含量罗汉果皂苷单体。若乙醇的体积分数过小，将无法对吸附在制备色谱柱中的多个罗汉果皂苷单体解吸；若乙醇的体积分数过大，吸附在制备色谱柱中的多个罗汉果皂苷单体将快速的被解吸，不同的罗汉果皂苷单体可能会同时被解吸，或者先后流出的时间间隙过短，导致无法分段收集，从而无法得到高含量的罗汉果皂苷单体。
优选地，步骤（5）中，所述的洗脱为等度洗脱。等度洗脱的目的是，简化操作的难度，有利于溶剂回收后的重复利用。
优选地，步骤（5）中，所述洗脱流速为5～20BV/h（进一步优选13～18BV/h）。若洗脱的流速过慢，将导致收集的总时间过长，造成生产周期过长；若洗脱的流速过快，将不利于精准的分段收集，造成罗汉果皂苷单体的含量偏低。
优选地，步骤（5）中，所述的分段收集指的是，从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，15～23min为洗脱液A段，20～35 min为洗脱液B段，32～40 min为洗脱液C段，38～45 min为洗脱液D段，45～65 min为洗脱液E段，65～85 min为洗脱液F段。
优选地，步骤（6）中，所述的浓缩为真空减压浓缩。
优选地，步骤（6）中，所述的干燥为微波干燥。
优选地，步骤（6）中，所述的分段浓缩与干燥中，洗脱液A段浓缩、干燥后，得到的高含量罗汉果皂苷单体为11-O-罗汉果苷V。
优选地，步骤（6）中，所述的分段浓缩与干燥中，洗脱液B段浓缩、干燥后，得到的高含量罗汉果皂苷单体为罗汉果苷V。
优选地，步骤（6）中，所述的分段浓缩与干燥中，洗脱液C段浓缩、干燥后，得到的高含量罗汉果皂苷单体为罗汉果苷VI。
优选地，步骤（6）中，所述的分段浓缩与干燥中，洗脱液D段浓缩、干燥后，得到的高含量罗汉果皂苷单体为赛门苷I。
优选地，步骤（6）中，所述的分段浓缩与干燥中，洗脱液E段浓缩、干燥后，得到的高含量罗汉果皂苷单体为罗汉果苷IV。
优选地，步骤（6）中，所述的分段浓缩与干燥中，洗脱液F段浓缩、干燥后，得到的高含量罗汉果皂苷单体为罗汉果苷III。
优选地，步骤（6）中，所述干燥后得到的不同种类的高含量罗汉果皂苷单体均为白色固体，其含量范围均为75.0%～99.9%。
本发明方法的机理：罗汉果粗提取物中的成分，除了罗汉果总皂苷，还含有蛋白质、果胶等大分子杂质，以及果糖、葡萄糖、无机盐等小分子杂质。本发明先利用适当的高浓度乙醇不溶解蛋白质、果胶等大分子物质的原理，通过精密过滤除去这一类大分子杂质；再利用纳滤膜可以透过果糖、葡萄糖、无机盐等小分子物质的原理，截留分子量相对比较大的罗汉果皂苷，由此将果糖、葡萄糖、无机盐等小分子杂质除去；大分子杂质和小分子杂质都除去之后，乙醇溶液中剩余的成分为罗汉果总皂苷。将罗汉果总皂苷吸附并富集在制备色谱柱中，用洗脱剂对制备色谱柱进行洗脱。由于各个罗汉果皂苷的极性大小各有不同，被洗脱的顺序各不相同。在洗脱的过程中，总是极性最大的皂苷最先被洗脱而流出制备色谱柱，极性最小的皂苷最后被洗脱而流出制备色谱柱。因此，在不同的时间段收集洗脱液，可以得到不同的罗汉果皂苷单体。
本发明制备的高含量罗汉果皂苷单体用于制备复配甜味剂，所述复配甜味剂是指一种或多种高含量罗汉果皂苷单体，与一种或多种天然高倍甜味剂、合成甜味剂、糖醇、单糖、双糖、多糖或植物/微生物提取物，以任意比例组合成的含有甜味剂的混合物（液体或固体）。
优选的，所述高含量罗汉果皂苷单体是11-O-罗汉果苷V、罗汉果苷V、罗汉果苷VI、赛门苷I、罗汉果苷IV、罗汉果苷III中的一种或多种，其含量范围均为75.0%～99.9%。
优选的，所述的天然高倍甜味剂是甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷、甘草甜素、奇甜蛋白、应乐果甜蛋白、马槟榔甜蛋白、仙茅甜蛋白、倍他丁、布拉齐因中的一种或几种。
优选的，所述的合成甜味剂是三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、糖精钠、纽甜、安赛蜜、甜蜜素、新橙皮苷二氢查耳酮。
优选的，所述的糖醇是山梨糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、异麦芽糖醇、甘露糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇。
优选的，所述的单糖是葡糖糖、果糖、阿洛酮糖、半乳糖、核糖、脱氧核糖中的一种或几种。
优选的，所述的双糖是蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖中的一种或几种。
优选的，所述的多糖是淀粉、糊精、糖元、纤维素、半纤维素、壳多糖、多聚果糖（菊粉）、低聚果糖、多聚半乳糖、低聚半乳糖、糖胺聚糖中的一种或几种。
优选的，所述的植物/微生物提取物是罗汉果提取物（罗汉果苷V含量≤25%）、博落回提取物、穿心莲提取物、洋葱提取物、瓜拉纳提取物、常春藤提取物、刺蒺藜提取物、芦丁提取物、人参提取物、绿茶提取物、葡萄籽提取物、缬草提取物、辣椒红色素、钩藤提取物、朝鲜蓟提取物、水飞蓟提取物、两面针提取物、羊栖菜提取物、红景天提取物、松树皮提取物、石榴皮提取物、柿叶提取物、黄芪提取物、灵芝提取物、绿咖啡豆提取物、刺五加提取物、厚朴提取物、五味子提取物、雨生红球藻提取物、酵母浸出物、小球藻提取物、银杏叶提取物、藤黄果提取物、柔毛水杨梅提取物、亚麻籽提取物、千层塔提取物、燕麦提取物、桑葚提取物、麦芽提取物、莴苣提取物、薄荷提取物、菊花提取物、虎杖提取物、生姜提取物、白桦树皮提取物、皱叶酸模提取物、山药提取物、枸杞提取物、白柳皮提取物、育亨宾提取物、丝兰提取物、葫芦巴提取物、淫羊藿提取物、杜仲提取物、灯盏花提取物、月见草提取物、吴茱萸提取物、满山红提取物、钩果草提取物、蔓越橘提取物、玉米须提取物、可可提取物、枳实提取物、蛇床子提取物、接骨木提取物、菊苣提取物、积雪草提取物、白屈菜提取物、水皂角提取物、卡图巴提取物、西红柿提取物、辣椒提取物、大麦草提取物、杨梅树皮提取物、白桦树提取物、越橘提取物、苦橙提取物、黑加仑提取物、黑苦薄荷提取物、黑芝麻提取物、红茶提取物、黑莓提取物、墨角藻提取物、赐福蓟草提取物、蓝旗提取物、蓝莓提取物、玻璃苣籽提取物、乳香提取物、蓝升麻提取物、苎麻根提取物、地瓜儿苗提取物、牛蒡根提取物、金雀花提取物、艳紫铆提取物、蜂斗菜提取物、紫花苜蓿提取物、知母提取物、泽泻提取物、药蜀葵提取物、西印度樱桃提取物、西洋参提取物、天门冬提取物、山金车提取物、芹菜提取物、苹果提取物、芦荟提取物、茴香籽提取物、葛根提取物、多香果提取物、当归提取物、菜蓟叶提取物、白术提取物、巴西莓提取物、艾叶提取物、南非醉茄提取物、巴拿巴提取物、罗勒提取物、苦瓜提取物、东革阿里提取物、红景天提取物、加纳籽提取物、仙人掌提取物、射干提取物、竹茹提取物、巴戟天提取物、车前草提取物、黄柏提取物、地黄提取物、花生衣提取物、芙蓉花提取物、木槿提取物、山楂提取物、圣罗勒提取物、栀子提取物、龙胆根提取物、老鹤草提取物、高良姜提取物、大蒜提取物、浙贝母提取物、芒果籽提取物、小麦草提取物、白芸豆提取物、艾草提取物、葫芦巴提取物、何首乌提取物、紫锥菊提取物、土木香提取物、桉树叶提取物、小米草提取物、蒲公英提取物、达米阿拉提取物、菟丝子提取物、番红花提取物、延胡索提取物、痉挛树皮提取物、山茱萸提取物、香菜提取物、冬虫夏草提取物、黄连提取物、款冬提取物、党参提取物、丁香提取物、猪殃殃提取物、肉桂提取物、猴面包提取物、繁缕提取物、圣洁莓提取物、洋甘菊提取物、矢车菊提取物、猫爪草提取物、决明子提取物、胡萝卜提取物、甘蓝提取物、假马齿笕提取物、竹子提取物、伏牛花提取物、大麦芽提取物、蜂花粉、甜菜根提取物、槟榔子提取物、黑升麻提取物、黑萝卜提取物、黑胡桃提取物、天竺葵提取物、波尔多叶提取物、芥兰提取物、糙米提取物、西印度醋粟提取物、西洋龙芽草提取物、甜杏仁提取物、木通提取物、轮叶沙参提取物、菠萝提取物、槟榔提取物、熊果叶提取物中的一种或若干种。
本发明的复配甜味剂，可运用于食品、药品、调味品、保健品、化妆品、香精香料中。
本发明的有益效果如下：（1）所得罗汉果皂苷单体的最高含量可达到99.1%，最高收率将近95%；（2）可同时获得六种高含量的罗汉果皂苷单体，填补了行业的空白，意义深远；（3）工艺简单，可操作性强，无污染，不使用有毒有害的化学溶剂，绿色环保，适宜于工业化生产。
附图说明
图1为实施例1罗汉果粗提物的HPLC图谱；
图2为实施例1制备的11-O-罗汉果苷V的HPLC图谱；
图3为实施例1制备的罗汉果苷V的HPLC图谱；
图4为实施例1制备的罗汉果苷VI的HPLC图谱；
图5为实施例1制备的赛门苷I的HPLC图谱；
图6为实施例1制备的罗汉果苷IV的HPLC图谱；
图7为实施例1制备的罗汉果苷III的HPLC图谱。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
本发明实施例所使用的化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
实施例中，采用高效液相色谱（HPLC）外标法测定罗汉果总皂苷和各个罗汉果皂苷单体的含量。
实施例1
本实施例包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物0.5kg，罗汉果总皂苷含量为82.26%（其中，11-O-罗汉果苷V的含量为7.71%，罗汉果苷V的含量为65.25%，罗汉果苷VI的含量为3.90%，赛门苷I的含量为2.21%，罗汉果苷IV的含量为1.76%，罗汉果苷III的含量为1.43%），加入体积分数为80%的乙醇5L，搅拌分散，得罗汉果粗提物高浓度乙醇溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇溶液静置沉淀1小时，析出大量不溶物，用陶瓷膜精密过滤；所用陶瓷膜的材质为氧化铝，陶瓷膜的孔径为0.5μm，陶瓷膜过滤的压力为0.2Mpa；收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加入1.67倍体积的纯水，将乙醇的体积分数稀释至30%，再用纳滤膜过滤；所用纳滤膜的截留分子量为500Da，纳滤的压力为0.5 Mpa；收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；所用的色谱填料类型为C18，填料的粒径为10μm，填料的用量为4kg，色谱填料装柱的高径比为2.5∶1；所用的制备色谱柱为高压压缩柱，柱压35Mpa；上样的流速为12BV/小时（1BV=3.75L）；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液； 所用的洗脱剂为体积分数为30%的乙醇-水溶液，洗脱的流速为15BV/小时。从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，15～22min为洗脱液A段， 23～34 min为洗脱液B段，35～40 min为洗脱液C段，41～45 min为洗脱液D段，46～63 min为洗脱液E段，67～80 min为洗脱液F段。
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液（A段、B段、C段、D段、E段、F段）分别真空减压浓缩，微波干燥，得到不同种类的高含量罗汉果皂苷单体。
洗脱液A段浓缩、干燥后，得到11-O-罗汉果苷V（白色固体），重量36.25g，含量97.55%。
洗脱液B段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷V（白色固体），重量315.58g，含量98.21%。
洗脱液C段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷VI（白色固体），重量18.73g，含量96.76%。
洗脱液D段浓缩、干燥后，得到赛门苷I（白色固体），重量10.45g，含量97.11%。
洗脱液E段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷IV（白色固体），重量8.74g，含量95.56%。
洗脱液F段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷III（白色固体），重量7.13g，含量96.03%。
实施例2
本实施例包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物0.5kg，罗汉果总皂苷含量为82.26%（其中，11-O-罗汉果苷V的含量为7.71%，罗汉果苷V的含量为65.25%，罗汉果苷VI的含量为3.90%，赛门苷I的含量为2.21%，罗汉果苷IV的含量为1.76%，罗汉果苷III的含量为1.43%）。加入体积分数为70%的高浓度乙醇4.5L，搅拌分散，得罗汉果粗提物高浓度乙醇溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇溶液静置沉淀1.5小时，析出大量不溶物，用陶瓷膜精密过滤；所用陶瓷膜的材质为氧化锆，陶瓷膜的孔径为0.2μm，陶瓷膜过滤的压力为0.3Mpa。收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加入1倍体积的纯水，将乙醇的体积分数稀释至35%，再用纳滤膜过滤；所用纳滤膜的截留分子量为800Da，纳滤的压力为0.4Mpa。收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；所用的色谱填料类型为C12，填料的粒径为20μm，填料的用量为4.5kg，色谱填料装柱的高径比为3∶1；所用的制备色谱柱为中压压缩柱，柱压10Mpa。上样的流速为10BV/小时（1BV=4.4L）；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液； 所用的洗脱剂为体积分数为35%的乙醇-水溶液，洗脱的流速为17BV/小时；从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，17～22min为洗脱液A段， 23～34 min为洗脱液B段，35～39 min为洗脱液C段，40～44 min为洗脱液D段，45～63 min为洗脱液E段，65～83 min为洗脱液F段；
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液（A段、B段、C段、D段、E段、F段）分别真空减压浓缩，微波干燥，得到不同种类的高含量罗汉果皂苷单体。
洗脱液A段浓缩、干燥后，得到11-O-罗汉果苷V（白色固体），重量35.75g，含量97.52%。
洗脱液B段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷V（白色固体），重量312.29g，含量99.10%。
洗脱液C段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷VI（白色固体），重量17.52g，含量97.67%。
洗脱液D段浓缩、干燥后，得到赛门苷I（白色固体），重量9.83g，含量97.28%。
洗脱液E段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷IV（白色固体），重量8.60g，含量96.19%。
洗脱液F段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷III（白色固体），重量6.92g，含量97.33%。
实施例3
本实施例包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物0.5kg，罗汉果总皂苷含量为82.26%（其中，11-O-罗汉果苷V的含量为7.71%，罗汉果苷V的含量为65.25%，罗汉果苷VI的含量为3.90%，赛门苷I的含量为2.21%，罗汉果苷IV的含量为1.76%，罗汉果苷III的含量为1.43%）；加入体积分数为65%的高浓度乙醇4L，搅拌分散，得罗汉果粗提物高浓度乙醇溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇溶液静置沉淀2小时，析出大量不溶物，用陶瓷膜精密过滤；所用陶瓷膜的材质为氧化钛，陶瓷膜的孔径为0.8μm，陶瓷膜过滤的压力为0.1Mpa；收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加入1倍体积的纯水，将乙醇的体积分数稀释至32.5%，再用纳滤膜过滤；所用纳滤膜的截留分子量为300Da，纳滤的压力为0.6Mpa；收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；所用的色谱填料类型为C8，填料的粒径为30μm，填料的用量为5kg，色谱填料装柱的高径比为3.3∶1；所用的制备色谱柱为低压压缩柱，柱压0.5Mpa。上样的流速为8BV/小时（1BV=4.8L）；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液；所用的洗脱剂为体积分数为32.5%的乙醇-水溶液，洗脱的流速为18BV/小时。从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，18～23min为洗脱液A段， 24～35 min为洗脱液B段，36～40 min为洗脱液C段，42～45 min为洗脱液D段，46～65 min为洗脱液E段，67～85 min为洗脱液F段；
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液（A段、B段、C段、D段、E段、F段）分别真空减压浓缩，微波干燥，得到不同种类的高含量罗汉果皂苷单体。
洗脱液A段浓缩、干燥后，得到11-O-罗汉果苷V（白色固体），重量35.07g，含量97.87%。
洗脱液B段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷V（白色固体），重量313.37g，含量98.59%。
洗脱液C段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷VI（白色固体），重量18.10g，含量97.67%。
洗脱液D段浓缩、干燥后，得到赛门苷I（白色固体），重量10.07g，含量96.91%。
洗脱液E段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷IV（白色固体），重量8.55g，含量96.87%。
洗脱液F段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷III（白色固体），重量6.99g，含量97.24%。
实施例4
本实施例包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物1kg，罗汉果总皂苷含量为65.08%（其中，11-O-罗汉果苷V的含量为6.11%，罗汉果苷V的含量为51.77%，罗汉果苷VI的含量为3.10%，赛门苷I的含量为1.69%，罗汉果苷IV的含量为1.33%，罗汉果苷III的含量为1.08%）；加入体积分数为85%的高浓度乙醇8L，搅拌分散，得罗汉果粗提物高浓度乙醇溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇溶液静置沉淀1小时，析出大量不溶物，用陶瓷膜精密过滤；所用陶瓷膜的材质为氧化铝，陶瓷膜的孔径为0.5μm，陶瓷膜过滤的压力为0.2Mpa；收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加入1.43倍体积的纯水，将乙醇的体积分数稀释至35%，再用纳滤膜过滤；所用纳滤膜的截留分子量为500Da，纳滤的压力为0.45 Mpa。收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；所用的色谱填料类型为C8，填料的粒径为10μm，填料的用量为12kg，色谱填料装柱的高径比为5.5∶1；所用的制备色谱柱为高压压缩柱，柱压35Mpa。上样的流速为11BV/小时（1BV=11.5L）；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液；所用的洗脱剂为体积分数为35%的乙醇-水溶液，洗脱的流速为13BV/小时。从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，17～22min为洗脱液A段， 23～33 min为洗脱液B段，34～38 min为洗脱液C段，39～44 min为洗脱液D段，45～64 min为洗脱液E段，65～83 min为洗脱液F段。
洗脱液A段浓缩、干燥后，得到11-O-罗汉果苷V（白色固体），重量57.03g，含量97.50%。
洗脱液B段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷V（白色固体），重量490.93g，含量98.07%。
洗脱液C段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷VI（白色固体），重量29.52g，含量96.60%。
洗脱液D段浓缩、干燥后，得到赛门苷I（白色固体），重量15.79g，含量97.36%。
洗脱液E段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷IV（白色固体），重量12.93g，含量96.69%。
洗脱液F段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷III（白色固体），重量10.63g，含量96.52%。
实施例5
本实施例包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物1kg，罗汉果总皂苷含量为65.08%（其中，11-O-罗汉果苷V的含量为6.11%，罗汉果苷V的含量为51.77%，罗汉果苷VI的含量为3.10%，赛门苷I的含量为1.69%，罗汉果苷IV的含量为1.33%，罗汉果苷III的含量为1.08%）；加入体积分数为75%的高浓度乙醇7L，搅拌分散，得罗汉果粗提物高浓度乙醇溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇溶液静置沉淀2小时，析出大量不溶物，用陶瓷膜精密过滤；所用陶瓷膜的材质为氧化锆，陶瓷膜的孔径为0.2μm，陶瓷膜过滤的压力为0.3Mpa；收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加入1.27倍体积的纯水，将乙醇的体积分数稀释至33%，再用纳滤膜过滤；所用纳滤膜的截留分子量为800Da，纳滤的压力为0.4 Mpa。收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；所用的色谱填料类型为C6，填料的粒径为20μm，填料的用量为15kg，色谱填料装柱的高径比为5.8∶1；所用的制备色谱柱为中压压缩柱，柱压10Mpa；上样的流速为12BV/小时（1BV=14.7L）；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液； 所用的洗脱剂为体积分数为33%的乙醇-水溶液，洗脱的流速为14BV/小时。从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，18～23min为洗脱液A段， 25～34 min为洗脱液B段，35～39 min为洗脱液C段，40～44 min为洗脱液D段，45～64 min为洗脱液E段，65～82 min为洗脱液F段；
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液（A段、B段、C段、D段、E段、F段）分别真空减压浓缩，微波干燥，得到不同种类的高含量罗汉果皂苷单体。
洗脱液A段浓缩、干燥后，得到11-O-罗汉果苷V（白色固体），重量56.17g，含量98.15%。
洗脱液B段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷V（白色固体），重量478.79g，含量98.83%。
洗脱液C段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷VI（白色固体），重量28.38g，含量97.49%。
洗脱液D段浓缩、干燥后，得到赛门苷I（白色固体），重量15.36g，含量97.07%。
洗脱液E段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷IV（白色固体），重量12.31g，含量96.41%。
洗脱液F段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷III（白色固体），重量10.25g，含量96.24%。
实施例6
本实施例包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物1kg，罗汉果总皂苷含量为65.08%（其中，11-O-罗汉果苷V的含量为6.11%，罗汉果苷V的含量为51.77%，罗汉果苷VI的含量为3.10%，赛门苷I的含量为1.69%，罗汉果苷IV的含量为1.33%，罗汉果苷III的含量为1.08%）；加入体积分数为60%的高浓度乙醇7.5L，搅拌分散，得罗汉果粗提物高浓度乙醇溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇溶液静置沉淀1.5小时，析出大量不溶物，用陶瓷膜精密过滤；所用陶瓷膜的材质为氧化钛，陶瓷膜的孔径为0.8μm，陶瓷膜过滤的压力为0.1Mpa；收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加入1倍体积的纯水，将乙醇的体积分数稀释至30%，再用纳滤膜过滤；所用纳滤膜的截留分子量为300Da，纳滤的压力为0.55Mpa；收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；所用的色谱填料类型为C18，填料的粒径为30μm，填料的用量为13kg，色谱填料装柱的高径比为6.4∶1；所用的制备色谱柱为低压压缩柱，柱压0.5Mpa；上样的流速为11BV/小时（1BV=12.8L）；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液；所用的洗脱剂为体积分数为30%的乙醇-水溶液，洗脱的流速为15BV/小时；从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，16～21min为洗脱液A段， 22～33 min为洗脱液B段，34～39 min为洗脱液C段，40～44 min为洗脱液D段，45～65 min为洗脱液E段，66～85 min为洗脱液F段；
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液（A段、B段、C段、D段、E段、F段）分别真空减压浓缩，微波干燥，得到不同种类的高含量罗汉果皂苷单体。
洗脱液A段浓缩、干燥后，得到11-O-罗汉果苷V（白色固体），重量56.25g，含量97.68%。
洗脱液B段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷V（白色固体），重量489.64g，含量98.27%。
洗脱液C段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷VI（白色固体），重量28.69g，含量96.42%。
洗脱液D段浓缩、干燥后，得到赛门苷I（白色固体），重量15.17g，含量96.71%。
洗脱液E段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷IV（白色固体），重量12.24g，含量97.35%。
洗脱液F段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷III（白色固体），重量9.98g，含量96.97%。
实施例7
本实施例包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物2kg，罗汉果总皂苷含量为32.76%（其中，11-O-罗汉果苷V的含量为3.21%，罗汉果苷V的含量为25.65%，罗汉果苷VI的含量为1.63%，赛门苷I的含量为0.89%，罗汉果苷IV的含量为0.78%，罗汉果苷III的含量为0.60%）；加入体积分数为80%的高浓度乙醇14L，搅拌分散，得罗汉果粗提物高浓度乙醇溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇溶液静置沉淀2小时，析出大量不溶物，用陶瓷膜精密过滤；所用陶瓷膜的材质为氧化铝，陶瓷膜的孔径为0.5μm，陶瓷膜过滤的压力为0.2Mpa；收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加入1.67倍体积的纯水，将乙醇的体积分数稀释至30%，再用纳滤膜过滤；所用纳滤膜的截留分子量为500Da，纳滤的压力为0.5 Mpa。收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；所用的色谱填料类型为C18，填料的粒径为10μm，填料的用量为10kg，色谱填料装柱的高径比为9.7∶1；所用的制备色谱柱为高压压缩柱，柱压35Mpa；上样的流速为13BV/小时（1BV=9.5L）；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液；所用的洗脱剂为体积分数为30%的乙醇-水溶液，洗脱的流速为14BV/小时；从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，15～22min为洗脱液A段， 23～34 min为洗脱液B段，35～40 min为洗脱液C段，41～45 min为洗脱液D段，46～63 min为洗脱液E段，67～80 min为洗脱液F段；
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液（A段、B段、C段、D段、E段、F段）分别真空减压浓缩，微波干燥，得到不同种类的高含量罗汉果皂苷单体。
洗脱液A段浓缩、干燥后，得到11-O-罗汉果苷V（白色固体），重量65.72g，含量76.20%。
洗脱液B段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷V（白色固体），重量503.34g，含量80.50%。
洗脱液C段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷VI（白色固体），重量33.21g，含量77.56%。
洗脱液D段浓缩、干燥后，得到赛门苷I（白色固体），重量18.31g，含量79.35%。
洗脱液E段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷IV（白色固体），重量15.26g，含量81.74%。
洗脱液F段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷III（白色固体），重量11.75g，含量80.67%。
实施例8
本实施例包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物2kg，罗汉果总皂苷含量为32.76%（其中，11-O-罗汉果苷V的含量为3.21%，罗汉果苷V的含量为25.65%，罗汉果苷VI的含量为1.63%，赛门苷I的含量为0.89%，罗汉果苷IV的含量为0.78%，罗汉果苷III的含量为0.60%）；加入体积分数为70%的高浓度乙醇12L，搅拌分散，得罗汉果粗提物高浓度乙醇溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇溶液静置沉淀1小时，析出大量不溶物，用陶瓷膜精密过滤；所用陶瓷膜的材质为氧化锆，陶瓷膜的孔径为0.2μm，陶瓷膜过滤的压力为0.3Mpa；收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加入1倍体积的纯水，将乙醇的体积分数稀释至35%，再用纳滤膜过滤；所用纳滤膜的截留分子量为800Da，纳滤的压力为0.4Mpa；收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；所用的色谱填料类型为C12，填料的粒径为20μm，填料的用量为14kg，色谱填料装柱的高径比为11∶1；所用的制备色谱柱为中压压缩柱，柱压10Mpa；上样的流速为11BV/小时（1BV=13.6L）；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液；所用的洗脱剂为体积分数为35%的乙醇-水溶液，洗脱的流速为16BV/小时；从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，17～22min为洗脱液A段， 23～34 min为洗脱液B段，35～39 min为洗脱液C段，40～44 min为洗脱液D段，45～63 min为洗脱液E段，65～83 min为洗脱液F段；
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液（A段、B段、C段、D段、E段、F段）分别真空减压浓缩，微波干燥，得到不同种类的高含量罗汉果皂苷单体。
洗脱液A段浓缩、干燥后，得到11-O-罗汉果苷V（白色固体），重量63.65g，含量77.39%。
洗脱液B段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷V（白色固体），重量501.57g，含量82.72%。
洗脱液C段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷VI（白色固体），重量32.87g，含量76.91%。
洗脱液D段浓缩、干燥后，得到赛门苷I（白色固体），重量17.58g，含量80.65%。
洗脱液E段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷IV（白色固体），重量14.96g，含量80.69%。
洗脱液F段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷III（白色固体），重量11.07g，含量81.43%。
实施例9
本实施例包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物2kg，罗汉果总皂苷含量为32.76%（其中，11-O-罗汉果苷V的含量为3.21%，罗汉果苷V的含量为25.65%，罗汉果苷VI的含量为1.63%，赛门苷I的含量为0.89%，罗汉果苷IV的含量为0.78%，罗汉果苷III的含量为0.60%）；加入体积分数为65%的高浓度乙醇13L，搅拌分散，得罗汉果粗提物高浓度乙醇溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇溶液静置沉淀1.5小时，析出大量不溶物，用陶瓷膜精密过滤；所用陶瓷膜的材质为氧化钛，陶瓷膜的孔径为0.8μm，陶瓷膜过滤的压力为0.1Mpa；收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加入1倍体积的纯水，将乙醇的体积分数稀释至32.5%，再用纳滤膜过滤；所用纳滤膜的截留分子量为300Da，纳滤的压力为0.6Mpa；收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；所用的色谱填料类型为C8，填料的粒径为30μm，填料的用量为12kg，色谱填料装柱的高径比为10.6∶1；所用的制备色谱柱为低压压缩柱，柱压0.5Mpa；上样的流速为9BV/小时（1BV=11.7L）；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液；所用的洗脱剂为体积分数为32.5%的乙醇-水溶液，洗脱的流速为17BV/小时；从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，18～23min为洗脱液A段， 24～35 min为洗脱液B段，36～40 min为洗脱液C段，42～45 min为洗脱液D段，46～65 min为洗脱液E段，67～85 min为洗脱液F段；
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液（A段、B段、C段、D段、E段、F段）分别真空减压浓缩，微波干燥，得到不同种类的高含量罗汉果皂苷单体。
洗脱液A段浓缩、干燥后，得到11-O-罗汉果苷V（白色固体），重量63.75g，含量77.65%。
洗脱液B段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷V（白色固体），重量502.07g，含量82.69%。
洗脱液C段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷VI（白色固体），重量32.98g，含量78.78%。
洗脱液D段浓缩、干燥后，得到赛门苷I（白色固体），重量17.06g，含量80.75%。
洗脱液E段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷IV（白色固体），重量13.89g，含量82.61%。
洗脱液F段浓缩、干燥后，得到罗汉果苷III（白色固体），重量10.23g，含量82.36%。
实施例10
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
罗汉果苷V（重量百分比含量：98.21%）：11.5%；
瑞鲍迪苷A（重量百分比含量：98.06%）：32.0%；
赤藓糖醇：50.0%；
阿洛酮糖：6.5%。
实施例11
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
11-O-罗汉果苷V（重量百分比含量：97.55%）：23.0%；
新橙皮苷二氢查尔酮（重量百分比含量：98.06%）：5.0%；
低聚果糖：72.0%。
实施例12
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
罗汉果苷V（重量百分比含量：98.21%）：15.0%；
11-O-罗汉果苷V（重量百分比含量：97.55%）：2.5%；
瑞鲍迪苷A（重量百分比含量：98.06%）：82.5%。
实施例13
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
罗汉果苷V（重量百分比含量：98.21%）：10.0%；
11-O-罗汉果苷V（重量百分比含量：97.55%）：1.5%；
瑞鲍迪苷A（重量百分比含量：98.06%）：38.5%
赤藓糖醇：50%。
实施例14
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
罗汉果苷V（重量百分比含量：98.21%）：15.0%；
甘草甜素（重量百分比含量：98.06%）：22.0%；
赤藓糖醇：63.0%。
实施例14
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
罗汉果苷V（重量百分比含量：98.21%）：15.0%；
新橙皮苷二氢查尔酮（重量百分比含量：98.06%）：5.0%；
多聚果糖：40%；
绿茶提取物：40%。
实施例14
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
11-O-罗汉果苷V（重量百分比含量：97.55%）：12.0%；
三氯蔗糖：35.0%；
海藻糖：38%；
酵母浸出物：15%。
实施例15
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
赛门苷I（重量百分比含量： 97.11%）：8%；
瑞鲍迪苷D（重量百分比含量： 96.67%）:15%；
赤藓糖醇：50.0%；
菊花提取物：27.0%。
实施例16
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
罗汉果苷V（重量百分比含量： 80.50%）：50.0%
罗汉果提取物（罗汉果苷V含量=20.3%）：50.0%。
实施例17
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
罗汉果苷V（重量百分比含量：98.21%）：5.0%
罗汉果提取物（罗汉果苷V含量=20.3%）：5.0%
瑞鲍迪苷A（重量百分比含量：98.06%）：90.0%。
实施例18
本实施提供一种含有高含量罗汉果皂苷单体的复配甜味剂，其包括以下重量百分比的各组分：
罗汉果苷V（重量百分比含量：98.21%）：10.0%
11-O-罗汉果苷V（重量百分比含量：97.55%）：2.0%
罗汉果提取物（罗汉果苷V含量=15.7%）：10.0%
瑞鲍迪苷A（重量百分比含量：98.06%）：60.0%
赤藓糖醇:18.0%。
Claims (17)
1.一种罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）分散与溶解：取罗汉果粗提物，加入乙醇搅拌分散，得罗汉果粗提物乙醇混合溶液；
（2）沉淀与精密过滤：将步骤（1）所得的罗汉果粗提物乙醇混合溶液静置，沉淀，析出不溶物，用陶瓷膜精密过滤，收集陶瓷膜滤液；
（3）稀释与纳滤：将步骤（2）所得的陶瓷膜滤液加水稀释，再用纳滤膜过滤，收集纳滤膜截留液；
（4）制备色谱的上样：将步骤（3）所得的纳滤膜截留液上样至装有色谱填料的制备色谱柱；
（5）制备色谱的洗脱与收集：用洗脱剂对步骤（4）中的制备色谱柱进行洗脱，分段收集不同时间段的洗脱液；
（6）浓缩与干燥：将步骤（5）所得的不同时间段的洗脱液分别浓缩，干燥，得不同种类的罗汉果皂苷单体；
步骤（5）中，所述的洗脱剂为乙醇-水溶液，其中乙醇的体积分数为10%～50%；所述的洗脱为等度洗脱；所述洗脱流速为5～20BV/小时；所述的分段收集指的是，从洗脱剂进入制备色谱柱开始计时，15～23min为洗脱液A段， 20～35 min为洗脱液B段，32～40 min为洗脱液C段，38～45 min为洗脱液D段，45～65 min为洗脱液E段，65～85 min为洗脱液F段；
步骤（6）中，所述的分段浓缩与干燥中，洗脱液A段浓缩、干燥后，得到的罗汉果皂苷单体为11-O-罗汉果苷V；洗脱液B段浓缩、干燥后，得到的罗汉果皂苷单体为罗汉果苷V；洗脱液C段浓缩、干燥后，得到的罗汉果皂苷单体为罗汉果苷VI；洗脱液D段浓缩、干燥后，得到的罗汉果皂苷单体为赛门苷I；洗脱液E段浓缩、干燥后，得到的罗汉果皂苷单体为罗汉果苷IV；洗脱液F段浓缩、干燥后，得到的罗汉果皂苷单体为罗汉果苷III。
2.根据权利要求1所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述罗汉果粗提物中罗汉果总皂苷的质量百分比含量为20%～95%，其中罗汉果苷V的质量百分比含量为25%～70%；所述乙醇的体积百分比浓度为60%～90%，所述乙醇的体积与罗汉果粗提物的重量之比为5～10，乙醇的体积单位为L ，罗汉果粗提物的重量单位为kg。
3.根据权利要求1或2所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述静置沉淀的时间为0.5～2.0小时；所述陶瓷膜的材质为氧化锆、氧化铝或氧化钛，陶瓷膜的孔径为0.1～1.0μm，精密过滤的压力为0.1～0.3Mpa。
4.根据权利要求1或2所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述加入水的量为陶瓷膜滤液体积的0.5～4倍，稀释后的乙醇溶液中，乙醇的体积分数为10%～50%；所述纳滤膜的截留分子量为300～1000Da，纳滤的压力为0.4～0.6Mpa。
5.根据权利要求3所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述加入水的量为陶瓷膜滤液体积的0.5～4倍，稀释后的乙醇溶液中，乙醇的体积分数为10%～50%；所述纳滤膜的截留分子量为300～1000Da，纳滤的压力为0.4～0.6Mpa。
6.根据权利要求1或2所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述制备色谱柱为低压、中压或高压压缩柱，柱压为0.1Mpa～50Mpa；所述的色谱填料类型为C4、C6、C8、C12、C18，色谱填料的粒度为5～30μm；所述色谱填料的用量为罗汉果粗提物重量的5～20倍；所述色谱填料装柱的高径比为1～20：1；所述上样的流速为5～20BV/h，所述1BV=色谱填料装柱体积。
7.根据权利要求3所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述制备色谱柱为低压、中压或高压压缩柱，柱压为0.1Mpa～50Mpa；所述的色谱填料类型为C4、C6、C8、C12、C18，色谱填料的粒度为5～30μm；所述色谱填料的用量为罗汉果粗提物重量的5～20倍；所述色谱填料装柱的高径比为1～20：1；所述上样的流速为5～20BV/h，所述1BV=色谱填料装柱体积。
8.根据权利要求4所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述制备色谱柱为低压、中压或高压压缩柱，柱压为0.1Mpa～50Mpa；所述的色谱填料类型为C4、C6、C8、C12、C18，色谱填料的粒度为5～30μm；所述色谱填料的用量为罗汉果粗提物重量的5～20倍；所述色谱填料装柱的高径比为1～20：1；所述上样的流速为5～20BV/h，所述1BV=色谱填料装柱体积。
9.根据权利要求1或2所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述的浓缩为真空减压浓缩；所述的干燥为微波干燥。
10.根据权利要求3所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述的浓缩为真空减压浓缩；所述的干燥为微波干燥。
11.根据权利要求4所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述的浓缩为真空减压浓缩；所述的干燥为微波干燥。
12.根据权利要求6所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述的浓缩为真空减压浓缩；所述的干燥为微波干燥。
13.根据权利要求1或2所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述干燥后得到的不同种类的罗汉果皂苷单体均为白色固体，其含量范围均为75.0%～99.9%。
14.根据权利要求3所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述干燥后得到的不同种类的罗汉果皂苷单体均为白色固体，其含量范围均为75.0%～99.9%。
15.根据权利要求4所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述干燥后得到的不同种类的罗汉果皂苷单体均为白色固体，其含量范围均为75.0%～99.9%。
16.根据权利要求6所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述干燥后得到的不同种类的罗汉果皂苷单体均为白色固体，其含量范围均为75.0%～99.9%。
17.根据权利要求9所述的罗汉果皂苷单体产品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述干燥后得到的不同种类的罗汉果皂苷单体均为白色固体，其含量范围均为75.0%～99.9%。
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