CN110229826A - 一个簇毛麦CEBiP1-V基因及其所编码的蛋白和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一个簇毛麦CEBiP1‑V基因及其所编码的蛋白和应用。CEBiP1‑V的cDNA序列为SEQ ID NO.1及其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。通过单细胞瞬时表达技术将CEBiP1‑V基因超表达载体pBI220‑CEBiP1‑V转化感病小麦品种扬麦158，结果表明瞬间超表达CEBiP1‑V可以降低扬麦158的吸器指数。超表达CEBiP1‑V转基因植株中CEBiP1‑V的表达量是扬麦158表达量的9‑65倍，其对小麦白粉病表现出中高抗性水平。因此，CEBiP1‑V可望用于基因工程育种，将其超表达载体pBI220‑CEBiP1‑V导入易感白粉病小麦品种中，有望提高小麦的白粉病抗性。

Description

一个簇毛麦CEBiP1-V基因及其所编码的蛋白和应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，公开了一个簇毛麦CEBiP1-V基因及其所编码的蛋白和应用。

背景技术

小麦白粉病是有由专性寄生真菌小麦白粉病菌(Blumeria graminis DCf.sp.tritici)引起的小麦病害，是我国小麦生产上的三大真菌病害之一，严重威胁我们小麦安全生产。目前，我国小麦白粉病发病面积维持在1亿亩左右，每年造成15-30％的产量损失。

植物形成了两种主动防御机制来保护自身免受病原菌的侵染，即病原相关分子模式激发的免疫反应(Pattern Triggered Immunity,PTI)和效应蛋白激发的免疫反应(Effector Triggered Immunity,ETI)。PTI主要由植物模式识别受体(PatternRecognition Receptors,PRRs)识别病原菌中保守、不可或缺的的分子即病原菌相关分子模式(Pathogen-Associated Molecular Patterns，PAMPs)，如细菌鞭毛蛋白、细菌延长因子以及几丁质触发的免疫反应。由植物体内的R基因识别病原菌所分泌的效应因子，从而触发的免疫反应叫做ETI。病原菌入侵植物时，植物细胞表面的模式识别受体识别病原菌的病原相关分子模式，从而触发植物基础防御。病原菌通过分泌效应因子抑制植物的PTI，或者采用“自我伪装”逃避宿主的免疫防御[4][5]。植物基因组中的NBS-LRR类型的R基因可以通过识别特定的效应因子，触发ETI，并伴随着细胞程序性坏死，目前克隆的小麦白粉病抗性基因Pm2,Pm3,Pm8,Pm21,Pm60均是NBS-LRR类型的R基因。

植物PRRs一般为定位于细胞膜上的类受体蛋白激酶(Receptor Like Kinases,RLKs)以及RLPs(Receptor Like Proteins)。一个典型的RLK通常会包括胞外的配体结合域，一个跨膜结构域以及胞内的激酶结构域，RLP缺乏胞内的激酶结构域。根据PRRs的胞外结构域，目前已克隆的PRRs主要有4类：LRR、EGF-like、LysM和Lectin类型。植物中几丁质的模式识别受体往往包含LysM结构域，因此LysM类基因在白粉病的抗病中可能发挥着重要作用。LysM结构域作为一类古老且普遍存在的结构域，在植物与真菌互作过程中扮演着极其重要的角色。植物细胞中含有LysM结构域的蛋白能够识别不同种类含有N-乙酰葡糖胺结构的配体分子，从而启动植物对病原菌的特异防御反应[9]。几丁质是真菌的细胞壁的主要成分，是一种十分典型的PAMP。而在前人的研究中我们发现，植物体内的LysM类基因可以特异性的识别几丁质并触发免疫反应。

栽培小麦的近缘物种在长期进化和自然选择过程中，保留了大量的抗病虫害、抗逆、优质等有益基因，是普通小麦品种改良的重要基因来源，因此，研究和利用亲缘物种抗病基因，是改良小麦抗病性的重要途径。簇毛麦(Haynaldia villosa L.,2n＝2x＝14,基因组VV,)是普通小麦的二倍体近缘物种，具有高抗白粉病的优良性状，有望从中获得抗白粉病的功能基因。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供一个LysM类受体蛋白基因CEBiP1-V。

本发明的另一目的是提供该基因的超表达载体。

本发明的又一目的是提供该基因和超表达载体的应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

CEBiP1-V(Chitin Elicitor Receptor Kinase 1)基因，来自二倍体簇毛麦。其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

该基因编码的蛋白质CEBiP1-V，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

所述的含有权利要求1所述的CEBiP1-V基因的超表达载体，优选以pBI220为出发载体，将权利要求1所述的CEBiP1-V基因全长(SEQ ID NO.1)正向***pBI220载体的BamHI和Stu I酶切位点间所得。

所述的CEBiP1-V基因的超表达载体在抗白粉病小麦品种中的应用。

有益效果

本研究拟通过分析簇毛麦LysM类受体蛋白基因家族的表达模式，克隆了与白粉病抗性相关的LysM类受体蛋白基因CEBiP1-V。通过单细胞瞬时表达实验初步证明CEBiP1-V正向调控小麦白粉病抗性进一步利用小麦基因枪遗传转化技术，将CEBiP1-V基因的超表达载体pBI220-CEBiP1-V转化小麦品种扬麦158中，获得转基因阳性植株，分子鉴定和抗性鉴定结果表明，超表达该基因可以提高白粉病抗性，表明该基因在小麦白粉病抗性中发挥正向调控功能,可用于基因工程育种,提高小麦对白粉病的抗性。

附图说明

图1 CEBiP1-V在二倍体簇毛麦白粉菌诱导后的叶片中的qPCR分析

X轴：0h、1h、3h、8h、12h、18h、24h、36h、48h分别表示簇毛麦叶片受白粉菌诱导的不同时间段；Y轴：CEBiP1-V基因在不同样品中受白粉菌诱导前后的表达倍数。

图2 CEBiP1-V基因超表达载体构建图谱

图3利用单细胞超表达技术研究CEBiP1-V抗白粉病效应

图4 CEBiP1-V基因超表达载体转化扬麦158的T₁代阳性转基因植株PCR分子鉴定结果

第1泳道为marker:DL2000，第2泳道为扬麦158，泳道3-7依次为阳性转化植株OE-CEBiP1-T₀-12、OE-CEBiP1-T₀-17、OE-CEBiP1-T₀-31、OE-CEBiP1-T₀-50、OE-CEBiP1-T₀-74。

图5 CEBiP1-V基因超表达载体转化扬麦158的T₁代阳性转基因植株qPCR分析结果

X轴：扬麦158、以及上述5棵转基因阳性植株；Y轴：CEBiP1-V基因在转基因植株中相对于扬麦158的表达倍数。

图6 CEBiP1-V基因超表达载体转化扬麦158的T₁代阳性转基因植株白粉病离体鉴定

具体实施方式

实施例1 CEBiP1-V基因克隆及受白粉菌诱导的表达特征

设计了同源克隆引物P1(ATGCCGCTCCCGTCGCCGGC,SEQ ID NO.3)以及P2(TCAAAGGAAGCATACCAAG,SEQ ID NO.4)在簇毛麦叶片收白粉菌诱导后的cDNA中克隆得到1080bp序列，该序列如SEQ ID NO.1所示。该序列编码359个氨基酸，序列如SEQ ID NO.2所示，将该基因命名为CEBiP1-V。

把抗白粉病的簇毛麦种子(参考文献：齐莉莉，陈佩度，等，小麦白粉病新抗源—基因Pm21，作物学报，1995，21(3):257-262)播于培养皿中发芽，露白后移栽到盆钵(周围用圆柱状透明塑料片隔离，顶端用滤纸封闭，形成无白粉菌的环境)。待三叶期，把在感病品种苏麦三号上培养的南京本地混合白粉菌新鲜孢子轻轻抖落在簇毛麦的幼苗上。接种白粉菌后的簇毛麦在16℃继续培养。接种0h、1h、3h、8h、12h、18h、24h、36h、48h取样，置于-70℃冰箱内保存备用。用TRIZOL(Invitrogen)提取受白粉菌诱导的簇毛麦叶片的RNA，利用AMV酶(Takara)合成反转录第一链，得到反转录产物。

应用能特异扩增CEBiP1-V的特异引物P3(ATCGCCACCGCCAACAAGG,SEQ ID NO.5)和P4(GGAGCGGGACATCAAGAACCTG，SEQ ID NO.6)，对该基因在受白粉菌诱导样品中进行qPCR分析。PCR反应在qPCR仪(Roche Light Cycler 480，Roche)上扩增。20μl PCR反应体系中含2μl cDNA,10μl 2×SYBR EX Taq TM(TakaRa)，0.4μl引物P1(10μM)和P2(10μM)。扩增参数为：95℃5min，然后95℃10s、60℃30s，72℃15s，共41个循环。反应结束后，计算相对表达量：根据得到的CT值计算目标基因在处理后的不同时间点相对于未处理的相对表达量，即2^-△△CT。其中，△△C_T＝(C_T.Target-C_T.Tublin)_Timex-(C_T.Target-C_T.Tublin)_{Time 0}。Time x表示任意时间点，Time 0表示未处理点。结果表明：在簇毛麦叶片受白粉菌诱导18h后表达水平达到诱导高峰，为31.3倍。qPCR的结果表明，CEBiP1-V可能正向调控小麦白粉病抗性(附图1)。

实施例2 CEBiP1-V基因超表达载体沉默载体的构建

利用上述CEBiP1-V基因克隆载体pMD18T-CEBiP1-V，以可特异扩增CEBiP1-V基因的引物对P5(CGGGATCCATGCCGCTCCCGTCGCC,SEQ ID NO.7)和P6(GAAGGCCTAAGGAAGCATACCAAG，SEQ ID NO.8)进行PCR扩增，回收扩增片段。用BamHI和StuI双酶切将扩增目标片断***到载体pBI220(参考文献：Jefferson RA,Kavanagh TA,BevanMW.GUS fusions:beta-glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusionmarker in higher plants.EMBO J.1987,6:3901-3907)的35S启动子后面的多克隆位点BamHI和StuI之间。由此获得CEBiP1-V基因超表达载体pBI220-CEBiP1-V(附图2)。

实施例3利用单细胞瞬时表达技术将CEBiP1-V基因超表达载体转入小麦叶片

单细胞瞬时表达技术是一种可靠且快速鉴定基因功能的方法(参考文献：Schweizer,Pokorny et al.A Transient Assay System for the FunctionalAssessment of Defense-Related Genes in Wheat Molecular Plant-MicrobeInteractions.1999,12:647-654)。本研究利用单细胞瞬时表达方法，将质粒DNA包裹到金属微粒外层，借助基因枪将金属微粒轰击到小麦叶片的表皮细胞，然后统计轰击后的GUS细胞的白粉菌吸器指数，明确目标基因是否具有白粉病抗病功能。

载体DNA与金属微粒包裹的程序如下：

制备钨粉：称取30mg的钨粉于1.5ml eppendorf管中，加入1ml 70％酒精，涡旋3-5min后静置15min，使金粉完全沉淀。12,000rpm离心1min后弃上清。加入1ml ddH₂O，涡旋混匀后，离心弃上清(重复3次)。最后加入500μl 50％甘油涡旋混匀，备用。

包裹子弹：吸取5μl涡旋均匀的钨粉于1.5ml的eppendorf管中，加入5μl质粒DNA(总量应为1μg，如质粒浓度较大不够5μl的用ddH₂O稀释成5μl/1μg的浓度)。边涡旋边向eppendorf管内滴加50μl 2.5M CaCl₂，然后加入20μl 0.1M亚精氨(现配现用)，涡旋3min。

静置1min后离心2s，弃上清。加入140μl 70％酒精，充分涡旋，离心2s，弃上清。然后加入140μl 100％酒精，充分涡旋，离心2s，弃上清。最后加入15μl 100％酒精，充分涡旋，以备使用。

实施GUS基因单转化时，将含有GUS基因表达载体pAHC25(参考文献：ChristensenA H,Quail P H.Ubiquitin promoter-based vectors for high-level expression ofselectable and/or screenable marker genes in monocotyledonousplants.Transgenic Research,1996,5:213-218)的质粒DNA与钨粉包裹；实施CEBiP1-V基因超表达载体pBI220-CEBiP1-V与GUS基因共转化时，将含有CEBiP1-V基因超表达载体pBI220-CEBiP1-V质粒DNA与含有GUS基因表达载体pAHC25的质粒DNA按摩尔浓度1:1的比例混合，包裹钨粉。GUS基因与CEBiP1-V基因超表达载体pBI220-CEBiP1-V进行共转化，Marker基因GUS转入的细胞也是CEBiP1-V基因超表达载体pBI220-CEBiP1-V转入的细胞。因GUS基因表达的细胞经GUS染色后整个细胞呈现蓝色，所以本研究以蓝色细胞作为CEBiP1-V基因表达的细胞。

基因枪轰击程序如下：剪下长约6cm的小麦幼苗叶片端部，平行贴在载玻片上，每张玻片贴6片叶片左右。基因枪使用PDS1000/He***，采用1350psi的可裂膜片，真空度为28inHg。轰击后将叶片置于垫有润湿滤纸的瓷盘内，罩以打有小孔的保鲜膜，保湿并透气，18-20℃恢复培养4h后，高密度接种白粉菌分生孢子。接种48h后用GUS染液(配方为：0.1molL Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲液(pH7.0)，含10mmolL EDTA，5mmolL铁***和亚铁***，0.1mg/ml X-Gluc，0.1％Triton X-100，20％甲醇，)真空渗透10min,37℃染色12h，然后用70％酒精脱色2天直至叶片变成白色为止，最后利用浓度为0.6％的考马斯亮蓝对白粉菌孢子染色。

白粉菌侵入小麦叶片表皮细胞后，在表皮细胞中产生的指状物称为吸器。吸器不能正常产生是叶片细胞对白粉菌具有抗性的重要指标。在GUS表达的细胞中，细胞会被GUS染色液染成蓝色，在显微镜下容易辨认。在GUS基因转化细胞后，通过统计与白粉菌互作的GUS表达细胞，其吸器形成的细胞所占的比例(％)，即为“吸器指数”(公知公用,Schweizer,Pokorny et al.A Transient Assay System for the Functional Assessment ofDefense-Related Genes in Wheat Molecular Plant-Microbe Interactions.1999,12:647-654)。吸器指数越小，表明抗病性越强。本研究利用“吸器指数”作为抗病强弱的衡量指标。

当单独转化GUS基因时，感白粉病小麦品种扬麦158中的吸器指数为62.58％；当GUS基因与CEBiP1-V基因超表达载体pBI220-CEBiP1-V共转化感白粉病小麦品种扬麦158后，扬麦158的吸器指数显著下降至31.13％(附图3)。该结果说明，瞬间超表达CEBiP1-V可以显著地降低吸器指数，CEBiP1-V对小麦抗白粉病具有正向调控作用。

实施例4 CEBiP1-V基因超表达载体pBI220-CEBiP1-V稳定遗传转化及基因功能研究

利用基因枪介导的遗传转化方法(邢莉萍.小麦/簇毛麦抗白粉病相关基因的转化及功能鉴定[D].南京农业大学，2007)将pBI220-CEBiP1-V转化感病品种扬麦158的幼胚愈伤组织。挑取预培养7d的约2500个扬麦158幼胚愈伤组织，轰击前在高渗培养基(MS+ABA0.5mg/L+水解酪蛋白500mg/L+2，4-D2mg/L+葡萄糖30g/L+0.4mol/L甘露醇，pH5.8)上预处理6–8h，将CEBiP1-V基因超表达载体pBI220-CEBiP1-V通过基因枪轰击法转化到扬麦158愈伤组织中，轰击后在高渗培养基上继续培养16h。之后将愈伤组织转移至含有除草剂的筛选培养基上(1/2MS+ABA0.5mg/L+水解酪蛋白500mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+4mg/LBialaphos，pH5.8)，筛选培养4周。然后将具有抗性的愈伤组织转移到分化培养基中(1/2MS+L-谷氨酞胺lmmol/L+水解酪蛋白200mg/L+KT 1mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂0.8％，pH5.8)进行分化，待分化芽长至2–4cm时将其转移至生根培养基(1/2MS+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂0.8％，pH5.8)中，至再生苗长约8cm、根系较健壮时，即可开管炼苗1–2d，最后洗去根系携带的培养基残渣便可移栽入盆钵，获得再生植株共86棵。提取所有再生植株基因组DNA，对转化植株利用基因跨内含子内部引物P7(ATCCTCCTTTCTCGCATGCT，SEQ IDNO.9)和水稻内含子序列特异引物P8(CGCTGCAGTTCAAACACCTT，SEQ ID NO.10)进行PCR扩增，鉴定阳性转基因植株。PCR程序：50-100ng/ul基因组模板，10μM的P7和P8各0.5μl；2.5μl10×buffer；2.5μl 2.5mM的dNTP；1.5μl 25mM的Mg²⁺；0.25μl(5U/μl)Taq polymerase(TaKaRa)，加水至25μl。PCR反应条件为：94℃预变性3min；94℃30s，55℃45s，72℃30s，30个循环；72℃延伸10min。PCR产物经8％的聚丙烯凝胶电泳检测，其中5株可以扩增253bp的目的条带，鉴定为阳性植株，株系编号依次为：OE-CEBiP1-T₀-12、OE-CEBiP1-T₀-17、OE-CEBiP1-T₀-31、OE-CEBiP1-T₀-50、OE-CEBiP1-T₀-74(附图4)。提取了这5棵阳性植株的RNA，利用qPCR鉴定各个阳性植株中CEBiP1-V基因的表达情况。结果表明：OE-CEBiP1-T₀-12、OE-CEBiP1-T₀-17、OE-CEBiP1-T₀-31、OE-CEBiP1-T₀-50、OE-CEBiP1-T₀-74转基因阳性植株的CEBiP1-V的表达量为扬麦158的9-65倍(附图5)。

苗期白粉病抗性采用江苏南京地区田间采集的白粉病菌混合菌种，对所有PCR鉴定的T₀代阳性植株以及扬麦158的离体叶片进行白粉病抗性鉴定。苗期白粉病抗性鉴定标准采用“0-5级”白粉病抗性反应型的分级标准，0-1级为高抗、2-3级为中抗、4-5级以上为感病。成株期抗性采用江苏南京地区田间采集的白粉病菌混合菌种在田间接种T0代阳性植株以及扬麦158并进行白粉病抗性鉴定。成株期白粉病抗性鉴定标准采用“0-9级”白粉病抗性反应型的分级标准，0-2级为高抗、3-4级为中抗、5-6级为中感、7-9级以上为高感。苗期离体白粉病抗性鉴定以及成株期白粉病抗性结果表明：扬麦158在苗期和成株期都表现为高感，而OE-CEBiP1-T₀-12、OE-CEBiP1-T₀-17、OE-CEBiP1-T₀-31、OE-CEBiP1-T₀-50、OE-CEBiP1-T₀-74转基因阳性株系的抗性显著高于扬麦158(表1，附图6)。

表1

序列表

<110> 南京农业大学

<120> 一个簇毛麦CEBiP1-V基因及其所编码的蛋白和应用

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1080

<212> DNA

<213> Haynaldia villosa

<400> 1

atgccgctcc cgtcgccggc cgcccgactg gccatccagg ccgccgccct cctcgtcctc 60

ctcaacctcg ccgccacggc cacggcggcc aacttcacct gcagcgcgcc gcggggcacc 120

acctgccgct ccgccatcgg ctaccgcgtg cccaacgcca ccacctacgg ggacctcctc 180

gcgcgcttca acaccaccac cctcgccggc ctcctcggcg ccaacgacct cccgcccgcc 240

acctccccca agaggcgcgt ccccgccaag gccaccgtcc gcatcccctt ccgctgcctc 300

tgcgccggca acggcgtcgg ccagtcggac cacgcgcccg tctacaccgt gcagccgcag 360

gacgggctgg acgccatcgc ccgcaactcc ttcgacgccg tcgtcaccta ccaggagatc 420

gccaccgcca acaaggtcgc cgacgtcaac ctcatcaccg tcggccagaa gctctggatc 480

ccgctgccct gcagctgcga ccccgtcggc ggcgccgacg tcttgcactt cacccacatc 540

gtcgacgccg gggagaccac ctccggcatc gccgccgcct tcggcgtcac cgaggacacg 600

ctcctcaagc tcaacaagat cgccgacccc aagaccctcc agaaggacca ggttcttgat 660

gtcccgctcc ctgtctgcag ctcatcaatc agcaacacct cagctgatca tgatctgcgc 720

ctctccaacg gcacctatgc gctcaccgcg caggactgca tccagtgccg ctgcagttca 780

aacaccttcc agctaaactg caccgcactg caaggaaaaa agggatgccc agcagtgccg 840

ccgtgccgcg aagggctcaa gcttggggac acaaacggca ccggttgcga ctcgactatg 900

tgcgcttaca ctggttattc caacagccct tcgctcggca tacataccac tcttttcaaa 960

aaccagaccg caccagcatg cgagaaagga ggatcttcga ggtcggtgtt cgccgggtcc 1020

atgtggagga tatctgccat ctccttccac atggtgttga tcttggtatg cttcctttga 1080

<210> 2

<211> 359

<212> PRT

<213> 簇毛麦(Haynaldia villosa)

<400> 2

Met Pro Leu Pro Ser Pro Ala Ala Arg Leu Ala Ile Gln Ala Ala Ala

1 5 10 15

Leu Leu Val Leu Leu Asn Leu Ala Ala Thr Ala Thr Ala Ala Asn Phe

20 25 30

Thr Cys Ser Ala Pro Arg Gly Thr Thr Cys Arg Ser Ala Ile Gly Tyr

35 40 45

Arg Val Pro Asn Ala Thr Thr Tyr Gly Asp Leu Leu Ala Arg Phe Asn

50 55 60

Thr Thr Thr Leu Ala Gly Leu Leu Gly Ala Asn Asp Leu Pro Pro Ala

65 70 75 80

Thr Ser Pro Lys Arg Arg Val Pro Ala Lys Ala Thr Val Arg Ile Pro

85 90 95

Phe Arg Cys Leu Cys Ala Gly Asn Gly Val Gly Gln Ser Asp His Ala

100 105 110

Pro Val Tyr Thr Val Gln Pro Gln Asp Gly Leu Asp Ala Ile Ala Arg

115 120 125

Asn Ser Phe Asp Ala Val Val Thr Tyr Gln Glu Ile Ala Thr Ala Asn

130 135 140

Lys Val Ala Asp Val Asn Leu Ile Thr Val Gly Gln Lys Leu Trp Ile

145 150 155 160

Pro Leu Pro Cys Ser Cys Asp Pro Val Gly Gly Ala Asp Val Leu His

165 170 175

Phe Thr His Ile Val Asp Ala Gly Glu Thr Thr Ser Gly Ile Ala Ala

180 185 190

Ala Phe Gly Val Thr Glu Asp Thr Leu Leu Lys Leu Asn Lys Ile Ala

195 200 205

Asp Pro Lys Thr Leu Gln Lys Asp Gln Val Leu Asp Val Pro Leu Pro

210 215 220

Val Cys Ser Ser Ser Ile Ser Asn Thr Ser Ala Asp His Asp Leu Arg

225 230 235 240

Leu Ser Asn Gly Thr Tyr Ala Leu Thr Ala Gln Asp Cys Ile Gln Cys

245 250 255

Arg Cys Ser Ser Asn Thr Phe Gln Leu Asn Cys Thr Ala Leu Gln Gly

260 265 270

Lys Lys Gly Cys Pro Ala Val Pro Pro Cys Arg Glu Gly Leu Lys Leu

275 280 285

Gly Asp Thr Asn Gly Thr Gly Cys Asp Ser Thr Met Cys Ala Tyr Thr

290 295 300

Gly Tyr Ser Asn Ser Pro Ser Leu Gly Ile His Thr Thr Leu Phe Lys

305 310 315 320

Asn Gln Thr Ala Pro Ala Cys Glu Lys Gly Gly Ser Ser Arg Ser Val

325 330 335

Phe Ala Gly Ser Met Trp Arg Ile Ser Ala Ile Ser Phe His Met Val

340 345 350

Leu Ile Leu Val Cys Phe Leu

355

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atgccgctcc cgtcgccggc 20

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tcaaaggaag cataccaag 19

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

atcgccaccg ccaacaagg 19

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

ggagcgggac atcaagaacc tg 22

<210> 7

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

cgggatccat gccgctcccg tcgcc 25

<210> 8

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

gaaggcctaa ggaagcatac caag 24

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

atcctccttt ctcgcatgct 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

cgctgcagtt caaacacctt 20

Claims (6)

1.一个簇毛麦CEBiP1-V基因，其特征在于其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

2.权利要求1所述的CEBiP1-V基因所编码的蛋白质，其特征在于其氨基酸序列为SEQID NO.2。

3.含有权利要求1所述的CEBiP1-V基因的超表达载体。

4.根据权利要求3所述的CEBiP1-V基因的超表达载体，其特征在于以pBI220载体为出发载体，将权利要求1所述的CEBiP1-V基因正向***pBI220载体的BamHI和StuI酶切位点间所得。

5.权利要求1所述的CEBiP1-V在培育抗白粉病小麦品种中的应用。

6.权利要求3、4所述的含CEBiP1-V基因超表达载体在培育抗白粉病小麦品种中的应用。