CN110172491A - 一种多元生物蛋白肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及蛋白制备领域，特别涉及一种多元生物蛋白肽及其制备方法，一种多元生物蛋白肽，所述多元生物蛋白肽由动物蛋白和植物蛋白组成的多元生物蛋白经酶解后制得。按重量份含量计，所述多元生物蛋白包括：海参蛋白20‑30份、鱼胶原蛋白15‑20份、牛骨胶原蛋白15‑20份、酪蛋白10‑15份、核桃蛋白5‑10份、小麦蛋白20‑30份和牡丹蛋白5‑10份；多元生物蛋白肽制备，利用碱性条件胰蛋白酶酶解充分，等电点蛋白溶解度小和乙醇钙沉淀法，使制得的多元生物蛋白肽各种蛋白肽含量高，且多元生物蛋白肽具备较强的降血压活性，降血糖活性，抗疲劳活性，抗氧化活性等。

Description

一种多元生物蛋白肽及其制备方法

技术领域

本发明涉及蛋白制备领域，特别涉及一种多元生物蛋白肽及其制备方法。

背景技术

分离蛋白是生产肽的原料，普通蛋白粉的人体吸收率只有30-40％，而蛋白多肽吸收率几乎可达100％，与蛋白粉相比，经酶解得到的蛋白多肽具有显著的功能活性，包括降血压活性，降血糖活性，抗氧化活性等，这些功能活性是蛋白粉无法比拟的。生物活性肽由两个以上的氨基酸组成，活性肽的化学结构差异、氨基酸组成以及氨基酸序列与多肽生物活性的关系受到了广泛关注。由于化学结构、作用机制的差异，不同结构的多肽具有不同的生物活性。生物活性肽可以通过肠壁吸收，因而进入血液***发挥相应的生理作用，或直接在胃肠道发挥作用。生物活性肽具有广泛的药理活性，包括降血压，抗血栓，发挥免疫调节，抗菌，抗氧化，抗病毒和抗肿瘤等活性。一些活性肽有多重活性，这取决于它们亲水和疏水性特征、电荷等特性。从天然产物中获得的多种活性肽及其在功能活性的深入研究，使得活性肽作为药品和保健食品原料的前景非常广阔。目前，单一原料来源的多肽是研究和生产的主流，对以多重原料来源，功能活性互为补充的多元生物蛋白肽尚鲜见报道。

发明内容

本发明针于以上问题，提供一种多元生物蛋白肽。

本发明的另一个目的在于提供一种多元生物蛋白肽的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种多元生物蛋白肽，由动物蛋白和植物蛋白组成的多元生物蛋白经酶解后制得，按重量份含量计，所述多元生物蛋白包括：海参蛋白20-30份、鱼胶原蛋白15-20份、牛骨胶原蛋白15-20份、酪蛋白10-15份、核桃蛋白5-10份、小麦蛋白20-30份和牡丹蛋白5-10份。

海参富含蛋白质，矿物质，维生素等50多种天然珍贵活性物质，其中酸性粘多糖和软骨素可明显降低心脏组织中脂褐素和皮肤脯氨酸的数量，起到延缓衰老的作用。海参体内所含的18种氨基酸能够增强组织的代谢功能，增强机体细胞活力，适宜于生长发育中的青少年。海参能调节人体水份平衡，适宜于孕期腿脚浮肿的女士。海参能消除疲劳，提高人体免疫力，增强人体抵抗疾病的能力，因此非常适合经常处于疲劳状态的中年女士与男士、易感冒、体质虚弱的老年人和儿童等亚健康人群。

鱼胶原蛋白（多肽）富含19种氨基酸，具有很高的消化吸收性，在水溶液中的热稳定性极好，与人体皮肤有极好的亲和性，能够很好的发挥其渗透、保湿、修复等功能。

牛骨胶原蛋白，是以牛***中的胶原蛋白为原料制得，其含有的18种氨基酸中有7种是人体必需的，它还含有人体所必需的部分金属微量元素。牛骨胶原蛋白营养价值高，不含胆固醇，性能优越，是良好的天然生理活性物质，其水解产物具有优良的胶体保护性、浸润性。

酪蛋白是乳中含量最高的蛋白质，目前主要作为食品原料或微生物培养基使用，利用生物酶解技术制得的酪蛋白磷酸肽（CPPs）具有防止矿物质流失、预防龋齿、防治骨质疏松与佝偻病、调节血压、治疗缺铁性贫血、缺镁性神经炎等多种生理功效，尤其是其促进常量元素（Ca、Mg）与微量元素（Fe、Zn、Cu、Cr、Ni、Co、Mn、Se）高效吸收的功能特性使其具有“矿物质载体”的美誉，它可以和金属离子，特别是钙离子结合形成可溶性复合物，一方面有效避免了钙在小肠中性或微碱性环境中形成沉淀，另一方面还可在没有维生素D参与的条件下使钙被肠壁细胞吸收，所以CPPs是最有效的促钙吸收因子之一，它的发现为补钙制品的研发提供了一种新方法。目前，CPPs已被公认为国内外研究最多，最深入的活性多肽物质之一。

核桃蛋白是由球蛋白、清蛋白、谷蛋白和的醇溶蛋白组成，这些蛋白成分有解毒、提高脑神经功能、增强细胞活力、健脑益智的作用。核桃蛋白是一种优质蛋白，富含18种氨基酸，包括人体必需的8种氨基酸，其中精氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸等含量较高且对人体健康有益作用显著，是一种极具开发潜力的植物蛋白，它的氨基酸含量齐全且合理。

小麦蛋白是从小麦(面粉)中提取出来的天然蛋白质，由多种氨基酸组成，蛋白质含量高达75%～85%，含有人体必须的15种氨基酸，是营养丰富的植物蛋白资源。

优选的，一种多元生物蛋白肽，由动物蛋白和植物蛋白组成的多元生物蛋白经酶解后制得，按重量份含量计，所述多元生物蛋白包括：海参蛋白25份，鱼胶原蛋白18份，牛骨胶原蛋白18份，酪蛋白12份，核桃蛋白8份，小麦蛋白25份，牡丹蛋白8份。

一种多元生物蛋白肽制备方法，包括以下步骤：

S1: 多元生物蛋白加入体积比1：4-5的纯化水，水温保持45-50℃，搅拌溶解1-2h，得混合液体；

S2:用NaOH溶液，将上述混合液体调节pH值至7.8-8.5，得碱性液体；

S3:在所述碱性液体中加入胰蛋白酶搅拌酶解，用NaOH溶液调节pH值，保持pH值至7.8-8.5，酶解时间2.5-3.5h，得酶解液；

S4:用HCl将所述酶解液调节pH值至4.6-5.0,得酸性液体；

S5:将所述酸性液体，升温至85-90℃，保持40min,得高温液体；

S6:将所述高温液体降温至30℃以下，过滤，得滤液；

S7:将所述滤液加入NaOH溶液调节pH值至5.3-5.6，加入10%氯化钙溶液，加入无水乙醇，降温至5-10℃，保持6-10h,得醇沉液；

S8:将所述醇沉液过滤，得沉淀，沉淀干燥，得多元生物蛋白肽。

一种多元生物蛋白肽制备方法，将多元生物蛋白加入纯化水溶解，加入NaOH溶液调节pH值7.8-8.5，使胰蛋白酶在碱性条件下更好酶解多元生物蛋白，酶解后再加入HCl溶液调节pH值至4.6-5.0，到达蛋白质的等点电，因为没有相同电荷而互相排斥的影响，所以最不稳定，溶解度最小；继而升温，灭酶，降温，过滤，钙离子在肽分子间形成桥连，在适当的温度和pH下，加入一定浓度的乙醇即可使桥连状的肽分子团沉淀下来，过滤，干燥，制得多元生物蛋白肽。

进一步，所述NaOH溶液质量百分比为10-15%。

进一步，所述HCl溶液质量百分比为1%。

进一步，所述胰蛋白酶与所述多元生物蛋白的质量比为0.0002：1。

进一步，所述氯化钙与所述滤液的体积比为1:4-5。

进一步，所述无水乙醇与所述氯化钙和滤液总体积等量。

进一步，所述胰蛋白酶酶活力为1.0-2.4AU/g。

相对于现有技术，本发明具有如下的优点及效果：

一种多元生物蛋白肽，多元生物蛋白包括：海参蛋白，鱼胶原蛋白，牛骨胶原蛋白，酪蛋白，核桃蛋白，小麦蛋白，牡丹蛋白； 多元生物蛋白肽制备方法，利用碱性条件胰蛋白酶酶解充分，等电点蛋白溶解度小，和乙醇钙沉淀法，使制得的多元生物蛋白肽各种蛋白肽含量高，且多元生物蛋白肽具备较强的降血压活性，降血糖活性，抗疲劳活性，抗氧化活性等。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂，方法和设备为本技术领域常规试剂，方法和设备。

除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。

实施例1

一种多元生物蛋白肽，按重量份含量计，所述多元生物蛋白包括：海参蛋白20份、鱼胶原蛋白15份、牛骨胶原蛋白15份、酪蛋白10份、核桃蛋白5份、小麦蛋白20份和牡丹蛋白5份。

一种多元生物蛋白肽制备方法：

S1: 多元生物蛋白加入体积比1：4的纯化水，水温保持45℃，搅拌溶解1h，得混合液体；

S2:用10%NaOH溶液，将上述混合液体，调节pH值至7.8，得碱性液体；

S3:在所述碱性液体加入胰蛋白酶搅拌酶解，胰蛋白酶与多元生物蛋白的质量比为0.0002：1，胰蛋白酶酶活力为1.0AU/g，用10%NaOH溶液调节pH值，保持pH值至7.8，酶解时间2.5h，得酶解液；

S4:用1%HCl溶液将所述酶解液调节pH值至4.6,得酸性液体；

S5:将所述酸性液体，升温至85℃，保持40min,得高温液体；

S6:将所述高温液体降温至30℃以下，过滤，得滤液；

S7:将所述滤液加入10%NaOH溶液，调节pH值至5.3，加入10%氯化钙溶液，氯化钙与所述滤液的体积比为1:4，加入无水乙醇，无水乙醇与所述氯化钙和滤液总体积等量，降温至5℃，保持6h,得醇沉液；

S8:将所述醇沉液过滤，得沉淀，沉淀干燥，得多元生物蛋白肽。

实施例2

一种多元生物蛋白肽，按重量份含量计，所述多元生物蛋白包括：海参蛋白25份、鱼胶原蛋白18份、牛骨胶原蛋白18份、酪蛋白12份、核桃蛋白8份、小麦蛋白25份和牡丹蛋白8份。

一种多元生物蛋白肽制备方法：

S1: 多元生物蛋白加入体积比1：4.5的纯化水，水温保持48℃，搅拌溶解1.5h，得混合液体；

S2:用10%NaOH溶液，将上述混合液体调节pH值至8.1，得碱性液体；

S3:在所述碱性液体加入胰蛋白酶搅拌酶解，胰蛋白酶与多元生物蛋白的质量比为0.0002：1，胰蛋白酶酶活力为1.6AU/g，用10%NaOH溶液调节pH值，保持pH值至8.1，酶解时间3h，得酶解液；

S4:用1%HCl溶液将所述酶解液调节PH值至4.8,得酸性液体；

S5:将所述酸性液体，升温至88℃，保持40min,得高温液体；

S6:将所述高温液体降温至30℃以下，过滤，得滤液；

S7:将所述滤液加入10%NaOH溶液，调节pH值至5.5，加入10%氯化钙溶液，氯化钙与所述滤液的体积比为1:4.5，加入无水乙醇，无水乙醇与所述氯化钙和滤液总体积等量，降温至8℃，保持8h,得醇沉液；

S8:将所述醇沉液过滤，得沉淀，沉淀干燥，得多元生物蛋白肽。

实施例3

一种多元生物蛋白肽，按重量份含量计，所述多元生物蛋白包括：海参蛋白30份、鱼胶原蛋白20份、牛骨胶原蛋白20份、酪蛋白15份、核桃蛋白10份、小麦蛋白30份和牡丹蛋白10份。

一种多元生物蛋白肽制备方法：

S1: 多元生物蛋白加入体积比1：5的纯化水，水温保持50℃，搅拌溶解2h，得混合液体；

S2: 用10%NaOH溶液，将上述混合液体调节pH值至8.5，得碱性液体；

S3:在所述碱性液体中加入胰蛋白酶搅拌酶解，胰蛋白酶与多元生物蛋白的质量比为0.0002：1，胰蛋白酶酶活力为2.4AU/g，用10%NaOH溶液调节pH值，保持pH值至8.5，酶解时间3.5h，得酶解液；

S4:用1%HCl溶液将所述酶解液调节pH值至5.0,得酸性液体；

S5:将所述酸性液体，升温至90℃，保持40min,得高温液体；

S6:将所述高温液体降温至30℃以下，过滤，得滤液；

S7:将所述滤液加入10%NaOH溶液，调节pH值至5.6，加入10%氯化钙溶液，氯化钙与所述滤液的体积比为1:5，加入无水乙醇，无水乙醇与所述氯化钙和滤液总体积等量，降温至10℃，保持10h,得醇沉液；

S8:将所述醇沉液过滤，得滤渣；

S9:将所述滤渣干燥，得多元生物蛋白肽。

对比例1

一种多元生物蛋白肽，其特征在于，按重量份含量计，所述多元生物蛋白包括：海参蛋白30份、鱼胶原蛋白20份和牛骨胶原蛋白20份。

一种多元生物蛋白肽制备方法：

S1: 多元生物蛋白加入体积比1：5的纯化水，水温保持50℃，搅拌溶解2h，得混合液体；

S2:用10%NaOH溶液，将上述混合液体调节pH值至8.5，得碱性液体；

S3:在所述碱性液体中加入胰蛋白酶搅拌酶解，胰蛋白酶与多元生物蛋白的质量比为0.0002：1，胰蛋白酶酶活力为2.4AU/g，用10%NaOH溶液调节pH值，保持pH值至8.5，酶解时间3.5h，得酶解液；

S4:用1%HCl溶液将所述酶解液调节pH值至5.0,得酸性液体；

S5:将所述酸性液体，升温至90℃，保持40min,得高温液体；

S6:将所述高温液体降温至30℃以下，过滤，得滤液；

S7:将所述滤液干燥，得多元生物蛋白肽。

对比例2

一种多元生物蛋白肽，按重量份含量计，所述多元生物蛋白包括：海参蛋白25份、鱼胶原蛋白18份、酪蛋白12份和牡丹蛋白8份。

一种多元生物蛋白肽制备方法：

S1: 多元生物蛋白加入体积比1：4.5的纯化水，水温保持48℃，搅拌溶解1.5h，得混合液体；

S2:用10% NaOH溶液，将上述混合液体调节pH值至8.1，得碱性液体；

S3:在所述碱性液体中加入胰蛋白酶搅拌酶解，胰蛋白酶与多元生物蛋白的质量比为0.0002：1，胰蛋白酶酶活力为1.6AU/g，用10%NaOH溶液调节pH值，保持pH值至8.1，酶解时间3h，得酶解液；

S4:将所述酶解液，过滤，得滤液；

S5:将所述滤液加入10%NaOH溶液调节PH值至5.5，加入10%氯化钙溶液，氯化钙与所述滤液的体积比为1:4.5，加入无水乙醇，无水乙醇与所述氯化钙和滤液总体积等量，降温至8℃，保持8h,得醇沉液；

S6:将所述醇沉液过滤，得沉淀，沉淀干燥，得多元生物蛋白肽。

实验例1

抗疲劳作用

取60只昆明种小鼠，清洁级，雄性，体重 18±22 g，于洁净动物实验室适应性饲养一周，每 8-10 只/笼，分笼饲养，保持垫料干燥卫生，每三天换洗一次。每天按时打扫，做好消毒灭菌等工作，保证洁净动物实验室干净整洁。室温 25±2℃，相对湿度50±5%，光照明暗间隔为 12 h，以鼠标准饲料常规饲养，自由进食和饮水。

经过一周的适应期后，60只小鼠随机分为 3 组，即空白组，实施例组，对比例组，实施例组和对比例组150mg/kg/d，每天上午9:00-10:30 期间灌胃，空白组小鼠灌胃等量的生理盐水。灌胃 30 天后，检测受试样品的抗疲劳功效，负重游泳实验结果，可判定该受试样品具有缓解体力疲劳功能的作用。

负重游泳实验

末次给样 30 min 后，从各组中随机取 10 只小鼠，将其尾根部缠绕 5%体重的铅皮后，放置于游泳箱中游泳。水深不少于 30 cm，水温 25±1 °C，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间。

表1 小鼠负重游泳时间

由表1可知，实施例组比对比例组的小鼠负重游泳时间长，说明实施例制得的多元生物蛋白肽能贮存更多的能源物质，延缓体力疲劳。

实验例2

降血压作用

取60只原发性高血压昆明种小鼠，清洁级，雄性，体重 18±22 g，于洁净动物实验室适应性饲养一周，每 8-10 只/笼，分笼饲养，保持垫料干燥卫生，每三天换洗一次。每天按时打扫，做好消毒灭菌等工作，保证洁净动物实验室干净整洁。室温 25±2 °C，相对湿度50±5%，光照明暗间隔为 12 h，以鼠标准饲料常规饲养，自由进食和饮水。

经过一周的适应期后，60只小鼠随机分为 3 组，即空白组，实施例组，对比例组，实施例组和对比例组50mg/kg/d，每天上午9:00-10:30 期间灌胃，空白组小鼠灌胃等量的生理盐水。记录受试样品的降血压效果。

高血压（hypertension）是指以体循环动脉血压（收缩压和/或舒张压）增高为主要特征（收缩压≥140毫米汞柱，舒张压≥90毫米汞柱），可伴有心，脑，肾等器官的功能或器质性损害的临床综合征。

表2 小鼠血压表

由表2可知，实施例组比对比例组降血压和保持血压稳定效果更好，实施例组制得的多元生物蛋白肽具有降血压稳定血压的效果。

本公开中涉及的器件，装置，设备，***的方框图仅作为示例性的例子并且不意图要求或暗示必须按照方框图示出的方式进行连接，布置，配置。如本领域技术人员将认识到的，可以按任意方式连接，布置，配置这些器件，装置，设备，***。诸如“包括”，“包含”，“具有”等等的词语是开放性词汇，指“包括但不限于”，且可与其互换使用。这里所使用的词汇“或”和“和”指词汇“和/或”，且可与其互换使用，除非上下文明确指示不是如此。这里所使用的词汇“诸如”指词组“诸如但不限于”，且可与其互换使用。

另外，如在此使用的，在以“至少一个”开始的项的列举中使用的“或”指示分离的列举，例如“A，B或C的至少一个”的列举意味着A或B或C，或AB或AC或BC，或ABC（即A和B和C）。此外，措辞“示例的”不意味着描述的例子是优选的或者比其他例子更好。

提供所公开的方面的以上描述以使本领域的任何技术人员能够做出或者使用本公开。对这些方面的各种修改对于本领域技术人员而言是非常显而易见的，并且在此定义的一般原理可以应用于其他方面而不脱离本公开的范围。因此，本公开不意图被限制到在此示出的方面，而是按照与在此公开的原理和新颖的特征一致的最宽范围。

为了示例和描述的目的已经给出了以上描述。此外，此描述不意图将本公开的实施例限制到在此公开的形式。尽管以上已经讨论了多个示例方面和实施例，但是本领域技术人员将认识到其某些变型，修改，改变，添加和子组合。

Claims (9)

1.一种多元生物蛋白肽，其特征在于，所述多元生物蛋白肽由动物蛋白和植物蛋白组成的多元生物蛋白经酶解后制得，按重量份含量计，所述多元生物蛋白包括：海参蛋白20-30份、鱼胶原蛋白15-20份、牛骨胶原蛋白15-20份、酪蛋白10-15份、核桃蛋白5-10份、小麦蛋白20-30份和牡丹蛋白5-10份。

2.根据权利要求1所述多元生物蛋白肽，其特征在于，所述多元生物蛋白，按重量份含量计包括：海参蛋白25份、鱼胶原蛋白18份、牛骨胶原蛋白18份、酪蛋白12份、核桃蛋白8份、小麦蛋白25份和牡丹蛋白8份。

3.一种权利要求1或2所述多元生物蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1: 多元生物蛋白加入体积比1：4-5的纯化水，水温保持45-50℃，搅拌溶解1-2h，得混合液体；

S2:用NaOH溶液，将上述混合液体调节pH值至7.8-8.5，得碱性液体；

S3:在所述碱性液体中加入胰蛋白酶搅拌酶解，用NaOH溶液调节pH值，保持pH值至7.8-8.5，酶解时间2.5-3.5h，得酶解液；

S4:用HCl将所述酶解液调节pH值至4.6-5.0,得酸性液体；

S5:将所述酸性液体，升温至85-90℃，保持40min,得高温液体；

S6:将所述高温液体降温至30℃以下，过滤，得滤液；

S7:将所述滤液加入NaOH溶液，调节pH值至5.3-5.6，加入10%氯化钙溶液，加入无水乙醇，降温至5-10℃，保持6-10h,得醇沉液；

S8:将所述醇沉液过滤，得沉淀，沉淀干燥，得多元生物蛋白肽。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述NaOH溶液质量百分比为10-15%。

5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述HCl溶液质量百分比为1%。

6.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述胰蛋白酶与所述多元生物蛋白的质量比为0.0002：1。

7.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述氯化钙与所述滤液的体积比为1:4-5。

8.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述无水乙醇与所述氯化钙和滤液总体积等量。

9.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述胰蛋白酶酶活力为1.0-2.4AU/g。