CN110101084B - 由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉及其制备方法与应用 - Google Patents

由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉及其制备方法与应用。该方法将脱脂蛋黄蛋白粉分散于水中加胰蛋白酶进行酶解；沸水浴灭酶后进行冷却、离心、透析及冻干处理，制成蛋黄蛋白肽颗粒粉末；把蛋黄蛋白肽粉末溶解于水中，并加入海藻油与之混合搅拌；预均质后采用高压微射流处理，得到由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的纳米尺度海藻油皮克林乳液；对该纳米乳液进行喷雾干燥处理，得富含ω‑3不饱和脂肪酸的油脂粉末制品。本发明工艺条件简单温和，原料天然安全，能够进行快速连续化生产；实现蛋黄提油后废弃物蛋黄蛋白粉进行再利用，并制备富含ω‑3不饱和脂肪酸的纳米皮克林乳液及油粉配料，可应用在功能性食品、医药及化妆品中。

Description

由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉及其 制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的粒度小于200nm的纳米皮克林乳液，特别是涉及一种由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的富含ω-3多不饱和脂肪酸(DHA)的海藻油纳米皮克林乳液及油粉的制备方法；属于食品、医药及化妆品加工技术领域。
背景技术
作为一种安全食品，鸡蛋中含有较高的蛋白质及丰富的脂质，是很好的维生素及矿物质的供给源，同时鸡蛋又兼具易于吸收，价格低廉等特点，因此，它被人们誉为维持生命的营养食品。近些年来，全世界有许多国家在鸡蛋的深加工方面有了突破性的进展。鸡蛋经过深加工如提取药用卵磷脂和蛋黄油后的脱脂蛋黄粉因其功能性差，不易溶于水，难于加以利用，常作废弃物处理。脱脂蛋黄粉含有丰富的鸡蛋蛋白质，具有丰富的营养价值，据相关文献报道，蛋黄蛋白可以增加成骨细胞数量并促进骨骼和牙齿的生成；激活骨骼自身的原动力、促进骨骼的伸长；促进骨骼的钙质沉结，强化骨骼的韧性；抑制破骨细胞的生长，维持骨骼成分的平衡。因此有必要充分利用脱脂蛋黄粉，将蛋黄蛋白粉酶解使其转化为功能性和利用率较好的肽是开发利用脱脂蛋黄粉的有效途径之一。
海藻油从海藻中提取得来，富含植物性DHA，缓解炎症能力强，容易被人体吸收。DHA是二十二碳六烯酸，属于ω-3多不饱和脂肪酸，是人脑和视网膜脂质的主要组分，能促进儿童大脑发育，并且能抑制血小板聚集，降低血液粘稠度，延缓血栓形成，改善机体的微循环功能，对防治冠心病和心脑血管的栓塞有显著作用，甚至能使已形成的脑粥样化的斑块消退。同时海藻油具有显著的抗炎作用，可以有效的降低血糖、血脂，改善胰岛素抵抗现象，提高胰岛素敏感性，保护胰岛β细胞。海藻油含有丰富的DHA，但因难溶于水、极易氧化、风味难以接受等使其难以在食品中得到大范围应用。制备海藻油乳液及油粉是解决这个问题的良好策略。
纳米乳液(直径一般在20-200nm)的研究近几年也受到广泛关注；相较于传统乳液，纳米乳液具有更好的抵抗沉降和乳析的物理稳定性，可用于荷载、包封和保护疏水性活性物质，提高其水溶性及生物利用度，也可用于包埋药物及用于化妆品的生产。但目前纳米乳液的制备往往需要大量的合成表面活性剂(20-30wt％)，对人体健康不利。皮克林(Pickering)乳液是一种由固态胶体颗粒稳定的乳液，由于固态颗粒不可逆的吸附在油/水界面，该类型乳液对聚结、乳析及Ostwald熟化均不敏感，乳液稳定性可长达数月或数年，基于此皮克林乳液被广泛应用在食品、医药及化妆品等领域中用于功能性成分的输送、包埋、控释等。近五年由食品级胶体颗粒如蛋白颗粒稳定的皮克林乳液成为食品胶体与乳液领域的研究热点，常见的用于制备食品级皮克林乳液的颗粒稳定剂包括玉米醇溶蛋白颗粒、大豆蛋白颗粒、乳清蛋白微胶颗粒、小麦醇溶蛋白颗粒、淀粉颗粒等。由于食品胶体颗粒的尺度限制，例如蛋白或淀粉颗粒的粒度一般在100-300nm，制备出的皮克林乳液均为微米尺度的乳液，油滴粒度约在10-100μm，因此目前还无法利用食品级胶体颗粒制备出尺度小于200nm的纳米皮克林乳液。因此，利用食品级原料如蛋白(肽)等形成的胶体颗粒制备高稳定性、高安全性且可食的纳米皮克林乳液，以更好地用于功能性成分的输送与稳定，已成为功能食品及食品乳液领域广泛关注的热点问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种由天然、安全、营养、稳定性良好的蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液及油粉的制备方法。
本发明另一目的在于提供由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉在制备富含ω-3不饱和脂肪酸的乳剂及粉体油脂配料中的应用。
本发明以酶解后形成蛋黄蛋白肽颗粒为结构单元，与富含DHA的海藻油复配，通过高压均质制备出由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液。纳米级的油滴中富含DHA，可提高其稳定性及水分散性。该发明首次发现蛋黄加工副产物脱脂蛋黄粉经酶解后获得的蛋黄蛋白肽呈现颗粒化状态，可用于制备水包油纳米皮克林乳液，用于稳定海藻油等富含ω-3不饱和脂肪酸的功能性油脂，这扩展了脱脂蛋黄粉的应用范围。该发明不仅能获得稳定性良好的纳米级皮克林乳液，还可经喷雾干燥后获得复溶性好、富含DHA的油脂粉剂。
本发明从食品营养与健康角度出发，利用蛋黄蛋白肽颗粒的界面乳化功能特性，通过操控简单的工艺条件制备出贮藏稳定性好且天然安全的海藻油纳米皮克林乳液。同时对该乳液进行喷雾干燥处理可制得富含DHA的油脂粉末，使DHA在海藻油纳米皮克林乳液中具有更高的生物利用度。
鸡蛋被认为是天然的完美食物。蛋黄中含有丰富的蛋白质，通过蛋白酶水解制备得到蛋黄蛋白酶解产物(egg yolk protein hydrolysate，EYPH)，其中含有大量的生物活性物质；据报道EYPH具有抗氧化、降血压、降血脂与矿物结合等生物功能。在提取药用卵磷脂和蛋黄油后，得到大量的高蛋白含量的脱脂蛋白黄粉，其功能性差，不易溶于水，难于加以利用，成为鸡蛋深加工过程中的废弃物。本发明通过酶解脱脂蛋黄粉得到水溶性良好且高生物活性的蛋黄蛋白肽，与富含ω-3不饱和脂肪酸的海藻油混合制成纳米皮克林乳液及油粉，对极易氧化的海藻油起到很好的的稳定作用，因此可有效降低海藻油氧化酸败产生的不良风味。
本发明对蛋黄提油加工后的废弃物脱脂蛋黄蛋白粉进行胰蛋白酶酶解，得到具备两亲性的蛋黄蛋白肽，该两亲性肽可自组装形成尺度在10-50nm(平均粒径在20nm)的蛋黄蛋白肽纳米颗粒，该颗粒可吸附在油水界面，进一步结合高压微射流处理可制备出粒度小于200nm的食品级皮克林纳米乳液。目前已报道的食品级皮克林乳液均是粒度在10-100μm的微米级皮克林乳液，可能受限于蛋白或淀粉等胶体颗粒的尺度(平均粒径在100-300nm)。本发明首次利用食品级的胶体颗粒(蛋黄蛋白肽颗粒)制备出粒度小于200nm的纳米级皮克林乳液，这将显著拓展皮克林乳液在食品领域的应用范围。
纳米乳液载运体系，能够改善活性成分的稳定性、溶解性和生物利用度，天然蛋白质、多糖等可用作乳化剂构建安全性较高的纳米乳液，在食品领域受到广泛关注。食品中常见的功能活性成分一般稳定性、水溶性和生物利用度较差，易受环境因素和胃肠道消化的影响，在应用时面临着保持活性、增加稳定性、改善溶解性、提高分散性和生物利用度等问题。常用的解决方法是构建一种载运体系，如微胶囊、水凝胶、乳液和脂质体等，减少外界因素的影响。因此将纳米技术应用于食品工业能够丰富产品种类，改善感官性状和加工性能，为食品领域的生产加工和新产品开发提供方向，在功能因子载运方面，出现了纳米乳液、纳米凝胶、纳米微胶囊、纳米脂质体、纳米晶体、脂质纳米粒等方式。纳米级皮克林乳液与微米级皮克林乳液相比具有明显的优势：纳米级的粒径小具有较高的动力学稳定性，失稳速率较慢；乳滴粒径小于入射光波长，散射光较弱，在合适的粒径及油水相组成时，能够获得具有一定光学透性的产品；乳化后界面面积增大，利于消化液作用，改善功能活性成分的生物利用度。ω-3不饱和脂肪酸的海藻油等油脂，富含多不饱和脂肪酸，具有预防心血管疾病等慢性疾病的功能性质，但不饱和度较高，极易氧化酸败，构建功能油脂纳米乳液可明显改善氧化稳定性和生物利用度，改善DHA的吸收速率、吸收量和生物利用度。
本发明涉及的富含ω-3不饱和脂肪酸的海藻油等是一类易发生油脂氧化的液态功能性油，纯的液态海藻油因油脂氧化现象导致其储存稳定性、运输性及再加工性等均较差，限制了其在功能食品领域的应用。本发明利用蛋黄蛋白肽颗粒稳定的纳米皮克林乳液可有效改善海藻油等富含ω-3不饱和脂肪酸功能性油存在的上述问题。首先，蛋黄蛋白颗粒在油-水界面吸附形成由多肽颗粒稳定的界面膜，可通过皮克林稳定机制实现海藻油纳米乳液长期的物理稳定性，乳液外观均一、无分层；同时蛋黄蛋白肽颗粒在油滴表面的紧密包裹可使海藻油纳米乳液在冷冻干燥及喷雾干燥过程中保持乳滴的稳定性，从而可制备出粉体分散性好、表面无漏油且复溶性良好的海藻油粉。另外需要指出的是，大量研究已表明蛋黄蛋白水解物是一种具有抗氧化等生物活性的肽混合物，因此由两亲蛋黄蛋白肽自组装形成的胶体颗粒包裹在海藻油滴表面可一定程度上减缓油脂氧化程度，进一步提升海藻油纳米乳液的氧化稳定性，最终改善海藻油及其纳米乳液、油粉的产品品质。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉的制备方法，包括如下步骤：
1)蛋黄蛋白肽的制备：将脱脂蛋黄粉分散于去离子水中，水浴加热并搅拌，调节PH，加入胰蛋白酶酶解，酶解结束后，沸水浴灭酶，冷却，离心，取上清液透析，冻干，得到蛋黄蛋白肽颗粒粉末；
2)纳米皮克林乳液的制备：蛋黄蛋白肽粉末溶于10mM磷酸缓冲液(pH7.0)中，室温下搅拌1h,4℃过夜充分水合，加入海藻油，控制蛋黄蛋白肽与海藻油的质量比为1:1-1:20；均质机预处理后，采用高压微射流处理，得到由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液。
3)油粉的制备：对由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液进行喷雾干燥处理；制备一种分散性、稳定性均良好的富含ω-3不饱和脂肪酸的油脂粉末。
为进一步实现本发明目的，优选地，脱脂蛋黄粉的浓度为0.01-0.08g/mL，脱脂蛋黄粉末与胰蛋白酶的质量比为80:1-120:1，氢氧化钠浓度为0.5-3mol/L。
优选地，pH调至6.0-10.0，水浴温度为35-45℃，反应时间为0.5-3h，透析时间为10-50h。
优选地，离心的速度为6000-10000rpm，离心次数为1-3次，离心时间为10-40min。
优选地，蛋黄蛋白肽的浓度为1-100mg/mL，蛋黄蛋白肽与海藻油的质量比为1:1-1:20，磷酸盐缓冲液的浓度为5-12mmol，磷酸盐缓冲液的pH为6.0-9.0。
优选地，所述均质机预处理的速度为5000-20000rpm，时间为1-4min。
优选地，所述高压微射流的压力为70-150MPa，高压微射流的次数为2-5次。
由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉，所述纳米乳液稳定了海藻油中的DHA，呈淡黄色，未出现悬浮物，乳液细腻均一，粒径范围为150-300nm；乳液经长期放置，粒径仍为150-300nm，且在放置过程中也没有出现乳析现象。
所述的由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液经喷雾干燥后得到分散性良好的DHA油脂；所述喷雾干燥的进口温度为140-180℃，出口温度为60-80℃。
所述的由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉用于制备富含ω-3不饱和脂肪酸的乳剂及粉体油脂配料，应用于ω-3不饱和脂肪酸强化的功能食品(包括特殊医学用途配方食品)、药物及化妆品等领域。本发明由颗粒化蛋黄蛋白肽稳定的海藻油纳米皮克林乳液尺度小，将DHA包裹在蛋黄蛋白肽颗粒稳定的纳米尺度油滴中，提高海藻油的稳定性及水分散性。本发明采用的微射流高压均质能够制有效降低乳液的粒径，工业化生产功能性食品时，可采用本发明的技术方法生产出富含DHA的功能性油脂配料；同时，该纳米皮克林乳液经喷雾干燥后获得复溶性好的油粉剂，可制备富含DHA的粉剂配料，添加至功能性食品中，提高ω-3不饱和脂肪酸含量，对于降低人体内血糖、改善胰岛素抵抗现象、改善高血脂症状等均具有良好的作用。
本发明原理：本发明中的脱脂蛋黄粉富含高质量的蛋白质，但其功能性差，不易溶于水，难于加以利用，本发明利用胰蛋白酶对其进行酶解。本发明发现脱脂蛋黄粉酶解后会形成具有两亲性的蛋黄蛋白肽，该两亲性肽可自组装形成尺度在10-50nm的肽纳米颗粒，显示出良好的界面吸附及界面稳定能力，结合高压微射流处理后，可制备出由蛋黄蛋白肽颗粒稳定尺度小于200nm的纳米级皮克林乳液，该纳米皮克林乳液可有效地稳定海藻油中的DHA。这种稳定性主要是由多尺度分布的蛋黄蛋白肽纳米颗粒在油-水界面形成的颗粒界面层赋予的，总体上蛋黄蛋白肽(肽颗粒)是以皮克林机制稳定海藻油乳滴。对稳定的纳米皮克林乳液进行喷雾干燥处理可获得复溶性好、富含DHA的油脂粉末产品。
相对于现有技术，本发明具有如下优点和有益效果：
1、本发明提供了一种新型的由纯天然蛋黄蛋白肽颗粒稳定的富含ω-3不饱和脂肪酸的海藻油纳米乳液及粉末，巧妙利用脱脂蛋黄粉酶解后形成的两亲性蛋黄蛋白肽及其自组装颗粒，制备出天然、可食的纳米皮克林乳液。
2、本发明整体工艺为酶解、高压乳化、干燥，制备工艺简单，原料天然、安全、健康，无需添加其他合成抗氧化剂或辅助添加剂；产品为具有良好的稳定性、粒径小、富含DHA的纳米乳液。干燥后可获得颗粒均匀、外观淡黄色、复溶性好的粉末制品。
3、本发明工艺条件简单温和，不涉及有毒有害的试剂以及乳化剂等化学成分，绿色安全；且能够进行快速连续化生产，可通过简单操控过程条件制备应用在功能性食品或化妆品中的纳米乳液产品，具有工业化和规模化的应用价值。
4、本发明制备的纳米皮克林乳液尺度小，具有良好的贮藏稳定性，可用于稳定富含ω-3不饱和脂肪酸的海藻油，使DHA在海藻油纳米皮克林乳液中有高的水分散性及可利用度。本发明中利用蛋黄蛋白肽颗粒的界面稳定及其生物活性对海藻油进行稳定，减少与氧气的接触，提高海藻油氧化稳定性。
5、工业化生产功能性食品时，可采用本发明的技术方法生产出富含ω-3不饱和脂肪酸的纳米皮克林乳液及油粉等功能性油配料；蛋黄蛋白肽颗粒稳定的纳米皮克林乳液经喷雾干燥后获得复溶性好的油粉，可添加至功能性食品中强化ω-3不饱和脂肪酸含量。同时，本发明可扩展蛋黄提油加工副产物脱脂蛋黄蛋白粉的应用范围。
附图说明
图1为实施例1酶解前后脱脂蛋黄蛋白粉溶液及制备的蛋黄蛋白肽纳米颗粒粒径分布图。
图2为实施例1酶解时间为60min的蛋黄蛋白肽稳定的纳米皮克林乳液粒径分布图。
图3a为实施例1中0.5wt％肽-5wt％海藻油乳液油粉的表观图。
图3b为实施例1中1wt％肽-5wt％海藻油乳液油粉的表观图。
图3c为实施例1中0.5wt％肽-5wt％葵花籽油乳液油粉的表观图。
图3d为实施例1中0.5wt％肽-5wt％葵花籽油乳液油粉的表观图。
图4为实施例1中0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油纳米皮克林乳液的表观图。
图5a为实施例1中0.5wt％肽-5wt％海藻油纳米皮克林乳液经喷雾干燥处理后得到的粉末制品的扫描电镜图。
图5b为实施例1中1wt％肽-5wt％海藻油纳米皮克林乳液经喷雾干燥处理后得到的粉末制品的扫描电镜图。
图5c为实施例1中0.5wt％肽-5wt％葵花籽纳米皮克林乳液经喷雾干燥处理后得到的粉末制品的扫描电镜图。
图5d为实施例1中1wt％肽-5wt％葵花籽纳米皮克林乳液经喷雾干燥处理后得到的粉末制品的扫描电镜图。
图6为实施例2中1wt％肽(10min)-5wt％海藻油、1wt％肽(30min)-5wt％海藻油、1wt％肽(60min)-5wt％海藻油、1wt％肽(120min)-5wt％海藻油、1wt％肽(180min)-5wt％海藻油、1wt％肽(300min)-5wt％海藻油皮克林乳液油粉的表观图。
图7为实施例2含1wt％含量不同酶解时间蛋黄蛋白肽稳定的含5wt％海藻油的纳米皮克林乳液，经喷雾干燥得到的粉末制品的表观图。
图8a-图8f分别为1wt％蛋黄蛋白肽(10min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(30min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(60min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(120min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(180min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(300min)-5wt％海藻油纳米皮克林乳液，经喷雾干燥得到的粉剂的扫描电镜图。
具体实施方式
为更好地理解本发明，以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不限如此。
以下各实施例中，粒径的测定方法如下：
对纳米乳液进行200倍稀释，采用纳米粒度仪(Nano-ZS&MPT-2型纳米粒度仪，英国Malvern公司)测定其粒度分布，颗粒折射率为1.473，颗粒吸收率为0.001，分散剂为水，分散剂折射率为1.330，测试温度为25℃，得到平均粒度值(nm)及粒度体积分布图。
实施例1
蛋黄蛋白肽的制备：将60g脱脂蛋黄粉分散于1800mL去离子水中，40℃水浴加热并搅拌0.5h，1M氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入0.6g胰蛋白酶酶解60min，酶解过程中保持pH恒定不变，酶解结束后，加1M盐酸调PH至7.0，沸水浴灭酶，冷却，在转速为8000rpm下离心30min，取上清液透析48h，冻干，得到蛋黄蛋白肽颗粒粉末；
纳米皮克林乳液的制备：蛋黄蛋白肽粉末溶于10mM磷酸缓冲液(pH7.0)中，室温下搅拌1h，4℃过夜充分水合，得到2wt％的蛋黄蛋白肽溶液。加入10mM磷酸缓冲液(pH7.0)后，分别加入不同量的海藻油以及不同量的葵花籽油，分别得到含0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油的溶液；均质机6000rpm预处理2min后，采用高压微射流处理，压力为100MPa，均质次数为3次，获得相应纳米乳液；将纳米乳液置于室温下静置放置过夜后，进行测定。
油粉的制备：对0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油纳米皮克林乳液进行喷雾干燥处理，进口温度150℃，出口温度80℃；将油粉置于室温下静置放置过夜后，进行测定。
图1是实施例1中脱脂蛋黄蛋白粉10mM磷酸缓冲液(pH7.0)中，未加入胰蛋白酶进行酶解以及加入胰蛋白酶酶解60min得到蛋黄蛋白肽溶液的表观图及制备的蛋黄蛋白肽纳米颗粒粒径分布图。可知，未加入胰蛋白酶进行酶解的脱脂蛋黄蛋白粉溶液有淡黄色沉淀，而加入胰蛋白酶进行酶解得到的蛋黄蛋白肽溶液呈透明状，没有淡黄色沉淀，说明酶解前的脱脂蛋黄蛋白粉不易溶于水。由蛋黄蛋白肽纳米颗粒粒径分布图可知，蛋黄蛋白肽纳米颗粒粒径大小为7-50nm，平均粒径在20nm。
图2是实施例1中酶解时间为60min的蛋黄蛋白肽颗粒稳定的纳米乳液粒径分布图。由图2可知，乳液平均粒径大小为169.2nm。
图3a-3d是实施例1含0.5wt％、1wt％含量蛋黄蛋白肽颗粒稳定的含5wt％含量海藻油以及葵花籽油的纳米乳液经喷雾干燥得到的粉末制品的表观图。由图3a-3d可知，由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液粉末呈淡黄色；由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的葵花籽纳米皮克林乳液粉末呈乳白色。
图4是实施例1含0.5wt％、1wt％蛋黄蛋白肽颗粒稳定的含5wt％含量海藻油以及葵花籽油的纳米皮克林乳液表观图。由图4可知，由0.5wt％颗粒化蛋黄蛋白肽稳定的海藻油纳米皮克林乳液呈淡黄色，表面出现油析现象；由1wt％蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液呈淡黄色、均一，无油析出；由0.5％、1％蛋黄蛋白肽颗粒稳定的葵花籽油纳米皮克林乳液呈乳白色、均一，无油析出。
图5a-5d分别为0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油纳米皮克林乳液，经喷雾干燥得到的粉剂的扫描电镜图。从图5a-5d可以看出0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油的粉剂扫描电镜图有孔洞，但1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油的粉剂都能看到球状的颗粒，且没有出现孔洞，说明1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％海藻油、0.5wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油、1wt％蛋黄蛋白肽-5wt％葵花籽油纳米皮克林乳液经喷雾干燥得到的粉剂能很好的荷载富含DHA的海藻油。
脱脂蛋黄粉经过酶解后形成的蛋黄蛋白肽颗粒在油水界面能起到稳定界面的作用；在均质作用下，油水两相充分混合，可制备出水包油型皮克林乳液。微射流均质是在高压剪切作用下，进一步有效降低油滴大小，制备出纳米尺度的皮克林乳液，使海藻油及葵花籽油油滴很好地被蛋黄蛋白肽颗粒覆盖。
从实施例1的制备方法可以看到，本发明所使用的原料和试剂本身天然、绿色、安全，而且加工过程操作简便，便于进行快速连续化生产。
本实施例中以脱脂蛋黄粉经过酶解后形成的蛋黄蛋白肽颗粒为结构单元，采用微射流均质制备纳米级皮克林乳液。本实施例制备的纳米乳液可将DHA稳定在纳米油滴中，从而很好的减少DHA与氧气的接触，提高其稳定性。可为工业化生产富含DHA的功能性食品、医药及化妆品配料提供一定的技术支持。本发明可实现对蛋黄加工废弃产物——脱脂蛋黄蛋白粉的深度利用，促进该食品工业的可持续发展。食品纳米乳液作为一种功能活性成分载运体系，可以包埋脂溶性物质，显著提高稳定性和生物利用度，此处的蛋黄蛋白肽粉末经酶解后可以制备稳定性较高的纳米乳液，在食品领域具有广阔的应用前景，如功能食品研发、提高功能活性成分的生物利用度、改善产品品质等。
实施例2
蛋黄蛋白肽的制备：将50g脱脂蛋黄粉分散于1500mL去离子水中，40℃水浴加热并搅拌0.5h，1M氢氧化钠调节PH至8.0，加入0.5g胰蛋白酶酶解，在酶解过程中保持pH8.0恒定不变，不同时间(10/30/60/120/180/300min)定点取样，1M盐酸调PH至7.0，沸水浴灭酶，冷却，在转速为8000rpm下离心30min，取上清液透析48h，冻干，得到不同酶解时间(10/30/60/120/180/300min)的蛋黄蛋白肽颗粒粉末；
纳米皮克林乳液的制备：蛋黄蛋白肽粉末溶蛋黄蛋白肽粉末溶于10mM磷酸缓冲液(pH7.0)中，室温下搅拌1h，4℃过夜充分水合，得到2wt％的蛋黄蛋白肽溶液。加入10mM磷酸缓冲液(pH7.0)和海藻油，分别得到含1wt％蛋黄蛋白肽(10min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(30min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(60min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(120min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(180min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(300min)-5wt％海藻油的溶液；均质机6000rpm预处理2min后，采用高压微射流处理，压力为100MPa，均质次数为3次，获得相应纳米乳液；将纳米乳液置于室温下静置放置过夜后，进行测定。
油粉的制备：对1wt％蛋黄蛋白肽(10min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(30min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(60min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(120min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(180min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(300min)-5wt％海藻油纳米皮克林乳液进行喷雾干燥处理，进口温度160℃，出口温度70℃；将油粉置于室温下静置放置过夜后，进行测定。
本实施例乳液粒径大小由纳米粒度仪测得。图6是不同酶解时间的颗粒化蛋黄蛋白肽稳定的海藻油纳米皮克林乳液粒径分布图。由图6可知，随着酶解时间的延长，乳液粒径体积分数右移，粒径增大，乳液的粒径分布逐渐由单峰分布变成双峰分布。
图7是实施例2含1wt％含量不同酶解时间蛋黄蛋白肽颗粒稳定的含5wt％海藻油的乳液，经喷雾干燥得到的粉末制品的表观图。由图7可知，由不同酶解时间得到的颗粒化蛋黄蛋白肽稳定的海藻油纳米皮克林乳液粉末呈淡黄色；
图8a-图8f分别为1wt％蛋黄蛋白肽(10min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(30min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(60min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(120min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(180min)-5wt％海藻油、1wt％蛋黄蛋白肽(300min)-5wt％海藻油纳米皮克林乳液，经喷雾干燥得到的粉剂的扫描电镜图。从图8a-图8f可以看出不同酶解时间得到的颗粒化蛋黄蛋白肽稳定的海藻油纳米乳液的粉剂都能看到球状的颗粒，且没有出现孔洞，说明纳米皮克林乳液喷雾干燥得到的粉剂能较好地稳定富含DHA的功能性油。
本发明制备的海藻油纳米皮克林乳液具有良好的贮藏稳定性，可通过干燥处理得到一种分散性、稳定性均良好的油脂粉末制品。本发明中采用的蛋黄蛋白肽颗粒具有抗氧化等生物活性，可提升纳米乳液中海藻油的氧化稳定性。
实施例3
蛋黄蛋白肽的制备：将50g脱脂蛋黄粉分散于1700mL去离子水中，37℃水浴加热并搅拌0.5h，1M氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入0.5g胰蛋白酶酶解60min，酶解过程中保持pH恒定不变，酶解结束后，加1M盐酸调PH至7.0，沸水浴灭酶，冷却，在转速为8000rpm下离心30min，取上清液透析48h，冻干，得到蛋黄蛋白肽颗粒粉末；
纳米皮克林乳液的制备：蛋黄蛋白肽粉末溶蛋黄蛋白肽粉末溶于10mM磷酸缓冲液(pH7.0)中，室温下搅拌1h，4℃过夜充分水合，得到4wt％的蛋黄蛋白肽溶液。加入10mM磷酸缓冲液(pH7.0)和海藻油，分别得到含3wt％蛋黄蛋白肽10wt％海藻油；均质机5000rpm预处理2min后，采用高压微射流处理，压力为100MPa，均质次数为3次，获得相应纳米皮克林乳液；
油粉的制备：对2wt％蛋黄蛋白肽10wt％海藻油纳米皮克林乳液进行喷雾干燥处理，进口温度150℃，出口温度70℃，也可得到较好的油粉。
本发明采用的微射流高压均质能够制有效降低乳液的粒径，此技术在食品、药物、化妆品生产等领域已广泛应用。进一步对该纳米皮克林乳液进行喷雾干燥处理可制备一种分散性、稳定性均良好的富含ω-3不饱和脂肪酸的油脂粉末制品。本发明工艺条件简单温和，原料天然安全，能够进行快速连续化、大批量生产，可通过操控过程条件制备富含ω-3不饱和脂肪酸的纳米皮克林乳液及油粉等油脂配料，并应用在功能性食品、医药及化妆品中，具有工业化和规模化的应用价值，如功能食品研发、提高功能活性成分的生物利用度、改善产品品质等。
本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。

Claims (7)

1.由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)蛋黄蛋白肽颗粒的制备：将脱脂蛋黄蛋白粉分散于去离子水中，水浴加热并搅拌，调节pH至6.0-10.0，加入胰蛋白酶酶解，酶解过程保持PH恒定不变，酶解结束后，沸水浴灭酶，冷却，离心，取上清液透析，冻干，得到蛋黄蛋白肽颗粒粉末；所述的脱脂蛋黄蛋白粉的蛋白质量分数在90%以上；脱脂蛋黄蛋白粉的浓度为0.01-0.08g/mL，脱脂蛋黄粉末与胰蛋白酶的质量比为80:1-120:1，氢氧化钠浓度为0.5-3mol/L；水浴温度为35-45℃，反应时间为0.5-3h；
2)纳米皮克林乳液的制备：蛋黄蛋白肽粉末溶于磷酸盐缓冲液中，室温下搅拌1h,4℃过夜充分水合，加入海藻油，控制蛋黄蛋白肽与海藻油的质量比为1:1-1:20；均质机预处理后，采用高压微射流处理，得到由蛋黄蛋白肽稳定的海藻油纳米皮克林乳液；蛋黄蛋白肽颗粒的浓度为1-100mg/mL，蛋黄蛋白肽溶液与海藻油的质量比为1:1-1:20，磷酸盐缓冲液的浓度为5-12mmoL，磷酸盐缓冲液的pH为6.0-9.0；所述高压微射流的压力为70-150MPa，高压微射流的次数为2-5次；
3)油粉的制备：对由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液进行喷雾干燥处理；可制备一种分散性、稳定性均良好的富含ω-3不饱和脂肪酸的油脂粉末制品。
2.根据权利要求1所述的由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉的制备方法，其特征在于，步骤1）中，透析时间为10-50h；所述的调节pH至6.0-10.0是通过加入氢氧化钠溶液调节。
3.根据权利要求1所述的由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉的制备方法，其特征在于，步骤1）中，离心的速度为6000-10000rpm，离心次数为1-3次，离心时间为10-40min。
4.根据权利要求1所述的由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉的制备方法，其特征在于，步骤2）中，所述均质机预处理的速度为5000-20000rpm，时间为1-4min。
5.权利要求1-4任一项所述制备方法制得的由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉，其特征在于，所述海藻油纳米皮克林乳液呈淡黄色，未出现悬浮物，乳液细腻均一，粒径为150-300nm；乳液经长期放置，粒径仍为150-300nm，且在放置过程中也未出现乳析现象，显示出良好的稳定性。
6.根据权利要求5所述的由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉，其特征在于，由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液经喷雾干燥后得到分散性良好的油脂粉末制品；所述喷雾干燥的进口温度为140-180℃，出口温度为60-80℃。
7.权利要求5所述的由蛋黄蛋白肽颗粒稳定的海藻油纳米皮克林乳液与油粉在制备富含ω-3不饱和脂肪酸的乳剂及粉体油脂配料中的应用；所述的富含ω-3不饱和脂肪酸的乳剂及粉体油脂配料应用于功能性食品或化妆品中。
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