CN110003177B

CN110003177B - 含有脲基的苯并咪唑类化合物及应用

Info

Publication number: CN110003177B
Application number: CN201910455053.5A
Authority: CN
Inventors: 胡春; 王旭康; 张传明; 谭孝雨; 曹小龙; 张春旺; 徐文; 李凤荣
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2019-05-28
Filing date: 2019-05-28
Publication date: 2021-11-19
Anticipated expiration: 2039-05-28
Also published as: CN110003177A

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及含有脲基的苯并咪唑类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤疾病的药物中应用。所述的含有脲基的苯并咪唑类化合物、其前体药物和药物活性代谢物和药学上可接受的盐的结构通式如下所示：R可以选自氢，苯基，4‑氯苯基，4‑甲基苯基，3‑(三氟甲基)苯基。R₃、R₅可选自氢，甲基。本发明的化合物的合成方法简便，适于工业化生产，生物活性测试显示此类化合物具有抗肿瘤活性，是一类新型抗肿瘤药物。

Description

含有脲基的苯并咪唑类化合物及应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及含有脲基的苯并咪唑类化合物及其制备方法，还涉及其作为BRaf激酶，血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelial growth factorreceptor-2，VEGFR-2)，血小板衍生生长因子受体-β(Platelet-derived growth factorreceptors-β，PDGFR-β)和T-LAK细胞源蛋白激酶(T-LAK cell-originated proteinkinase,TOPK)抑制剂的应用。

背景技术

近几年来，随着肿瘤发病机制的不断阐明和抗肿瘤作用靶点的不断发现，多靶点抑制肿瘤信号转导成为肿瘤药物开发的重要方向。相对于单靶点药物和多种单靶点药物联用来说，多靶点药物具有更多优越性：可避免产生药物相互作用，减少不良反应，治疗作用全面等。在各种分子靶点中，蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)是目前效果明显且前景广阔的抗肿瘤药物靶点之一。

PTK根据其结构可以分为受体PTK和非受体PTK。受体PTK通常具有一个可以和特定配体结合的细胞外结构域、一个跨膜区及一个可以选择性与底物结合并将其磷酸化的细胞内激酶域。当相应的特异性配体与受体PTK细胞外结构域结合时，受体PTK细胞结构发生改变，形成二聚体，之后细胞内激酶区域与ATP结合发生磷酸化，进而产生一系列酶催化作用。常见的受体PTK有：(1)表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR；ErbB-1；HER1)家族，包括ErbB-1(EGFR)、ErbB-2(HER-2)、ErbB-3(HER-3)和ErbB-4(HER-4)，此类受体高表达于上皮细胞肿瘤；(2)血小板衍生生长因子受体(platelet derivedgrowth factor receptor，PDGFR)家族，包括PDGFRα、PDGFRβ、集落刺激因子-1受体(colonystimulating factor1receptor，CSF-1R)和干细胞生长因子受体(stem cell growthfactor receptor，SCFR；C-Kit)，PDGF可通过多种效应作用于内皮细胞和***，促进血管形成；(3)胰岛素受体(insulin receptor，IR)家族，包括胰岛素受体、***受体(insulin-like growth factor receptor，IGFR)和胰岛素相关受体(insulinrelated receptor，IRR)，此类受体常在血液***肿瘤中高表达；(4)血管内皮细胞生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR)家族，包括VEGFR-1(FLT-1)、VEGFR-2(FLK-1)和VEGFR-3(FLT-4)，VEGF在许多肿瘤组织中过度表达，如肝癌、肺癌、乳腺癌等，并在肿瘤新生血管生成中起关键作用；(5)成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor，FGFR)家族，包括FGFR-1、FGFR-2、FGFR-3和FGFR-4，FGFR是一种能调节细胞***、增殖、迁移及分化的多效生长因子，此类受体在血管生成方面起重要作用。除以上常见的受体PTK外，还有原肌球蛋白受体激酶(the orginal myosinreceptor kinase，TRK)家族、肝细胞生长因子受体(hepatocyte growth factorreceptor，HGFR)家族和白细胞酪氨酸激酶(1eukocyte tyrosine kinase，LTK)家族等，它们在肿瘤细胞的信号传递、转移和血管生成等方面也发挥着重要作用。

非受体PTK一般没有细胞外结构，它们通常持续或暂时位于胞浆，或在细胞膜内侧与跨膜受体结合，所以又称为胞浆型PTK，其通过细胞因子受体、T细胞受体及其他信号通路执行信号转导功能，主要包括SRC，ABL，JAK，ACK，CSK，FAK，FRK，TEC和SYK等家族。

目前，已上市的多靶点酪氨酸激酶抑制剂主要有：

甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate，Gleevec)：甲磺酸伊马替尼属于2-苯基氨基嘧啶类化合物，是一种特异性很强的酪氨酸激酶抑制剂。它可以选择性的抑制bcr-abl、C-kit和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)等酪氨酸激酶，其抗肿瘤机制是作为ATP竞争性抑制剂.阻滞酪氨酸激酶的磷酸化，抑制bcr-abl表达。从而阻止细胞的增殖和肿瘤形成。

索拉菲尼(sorafenib，Nexavar)：索拉菲尼是第一个口服的多靶点酪氨酸激酶抑制剂，结构为一种双芳基尿素类化合物。临床使用的为索拉菲尼的甲苯磺酸盐。它具有双重的抗肿瘤作用。一方面通过抑制RAF/MEK/ERK信号转导通路直接抑制肿瘤的生长，另一方面通过抑制血管内皮生长因子和血小板衍生生长因子受体而阻断肿瘤新生血管的形成，切断肿瘤细胞的营养供应而达到抑制肿瘤的目的。

舒尼替尼(sunitinib,Sutent)：舒尼替尼是目前已知的作用靶点最多的靶向抗肿瘤药物之一，具有广谱的抗肿瘤活性。是血管内皮生长因子受体、血小板衍生生长因子受体、干细胞因子受体、酪氨酸激酶等的抑制剂。

拉帕替尼(lapatinib,Tykerb)：拉帕替尼是针对EGFR/ErbB-2的双靶点酪氨酸激酶抑制剂。拉帕替尼是4-苯胺基喹唑啉类激酶抑制剂，以甲苯磺酸盐水化物的形式存在。它是可逆的多靶点酪氨酸激酶抑制剂。其作用机制是抑制细胞内的EGFR(ErbB-1)/HERE(ErbB-2)的ATP位点，阻止肿瘤细胞磷酸化和激活，通过EGFR(ErbB-1)/HERE(ErbB-2)的同质和异质二聚体阻断下调信号.从而抑制乳腺癌细胞的增生，诱导凋亡以达到抗肿瘤的目的。

尼罗替尼(nilotinib,Tasigna)：尼罗替尼是苯胺嘧啶类衍生物，其作用机制是选择性的抑制酪氨酸激酶Bcr-Abl，并对干细胞因子受体Kit和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)激酶有拮抗作用。

达沙替尼(dasatinib，Sprycel)：达沙替尼是替尼类ABL和SRC激酶双重抑制剂。

帕唑帕尼(pazopanib,votrient)：帕唑帕尼是英国GlaxoSmithKline公司开发的一种选择性多靶点TKI，对PDGFRα、PDGFRβ、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3和C-Kit多种PTK均有抑制作用。

多靶点酪氨酸激酶抑制剂药物的研究与开发是目前抗肿瘤药物的主要研究热点之一。这类药的发现为肿瘤患者的治疗带来了新的选择与光明，从而开辟了抗肿瘤药物研究的新天地。多靶点酪氨酸激酶抑制剂与传统的抗肿瘤药物相比具有特异性和有效性。同时对胃肠道反应和血液学不良反应少等优点，因此它具有更为广阔的发展前景。

此外，近期研究表明TOPK是从活化型淋巴因子激活的杀伤性T细胞(lymphokine-activated killer T cells,T-LAK cells)的cDNA文库中鉴定出的一种新的丝-苏氨酸蛋白激酶，科学家在HeLa细胞cDNA文库中发现一个能与hDig的PDZ2区域结合的激酶PBK(PDZ-bindingkinase,PBK)与TOPK为同一分子，因此又称作PBK/TOPK。T-cell-originatedprotein kinase(TOPK)在许多恶性肿瘤中均呈高表达，如肺癌、乳腺癌、淋巴瘤、膀胱癌、结肠癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、***癌、卵巢癌等，且TOPK表达程度与肿瘤预后相关，尤其是乳腺癌和肺癌，TOPK表达越高，预后越差，但在正常组织中TOPK表达水平很低，且仅在睾丸和胸腺中表达。所以TOPK成为肿瘤治疗的新靶点，并且目前还没有专门针对该靶点的药物上市，因此能与TOPK特异性结合的抑制剂成为新型抗肿瘤药物的研究热点。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种如式I所示的化合物、其前体药物和药物活性代谢物以及其药学上可接受的盐，并提供了其在制备预防和治疗与BRaf激酶，血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelial growth factor receptor-2，VEGFR-2)，血小板衍生生长因子受体-β(Platelet-derived growth factor receptors-β，PDGFR-β)和T-LAK细胞源蛋白激酶(T-LAK cell-originated protein kinase,TOPK)失调相关的疾病的药物中的应用。

其中，

R可以选自氢，苯基，卤素取代的苯基，C1-C4烷基取代的苯基,卤素取代的C1-C4烷基取代的苯基。

R₃、R₅可选自H，C1-C4烷基。

进一步地，本发明优选具有如下的式I化合物及其药学上可接受的盐：

R可以选自氢，苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，3-(三氟甲基)苯基。

R₃、R₅可选自氢，甲基。

进一步地，本发明优选如下化合物：

1-{3-{[2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-苯基脲；

1-{3-{[2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-(4-氯苯基)脲；

1-{3-{[2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲；

1-{3-{{2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-(对甲苯基)脲；

“药物可接受的盐”指保留了式I化合物的生物效力和性质，并与合适的非毒性有机或无机酸或有机或无机碱形成的常规酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐的实例包括苹果酸盐，顺丁烯二酸盐，对氨基苯磺酸盐，盐酸盐，醋酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，富马酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢氯酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，草酸盐，扑酸盐，果胶酯酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐和十一酸盐等。碱盐包括铵盐，碱金属盐，例如钠和钾盐，碱土金属盐，例如钙和镁盐，有机碱的盐，例如二环己胺盐，N-甲基-D-葡糖胺盐，和氨基酸的盐，例如精氨酸，赖氨酸等，而且，碱性含氮基团可以用这样的试剂季铵化，例如低级烷基卤化物，如甲基，乙基，丙基和丁基的氯，溴和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯，二乙酯，二丁酯和二戊酯；长链卤化物，如癸基，月桂基，肉豆蔻基和硬脂酰基的氯，溴和碘化物；芳烷基卤化物，如苄基和苯乙基的溴化物等。优选用于生成酸加成盐的酸包括盐酸和醋酸。

“药学上可接受的”如药学上可接受的载体、赋形剂、前体药物等，指药理学上可接受的、并对给药具体化合物的患者基本上无毒性。

“药学活性代谢物”指药学上可接受并有效的式I化合物的代谢产物。

本发明也涉及抑制BRaf激酶，血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelialgrowth factor receptor-2，VEGFR-2)，血小板衍生生长因子受体-β(Platelet-derivedgrowth factor receptors-β，PDGFR-β)和T-LAK细胞源蛋白激酶的药用组合物，该组合物含有式I化合物或衍生物或其药学上适用的酸加成盐以及药学上适用的载体。

本发明中应用的术语“卤素”包括氟、氯、溴或碘。

本发明化合物可以通过不同的方法给患者服用，例如以胶囊剂或片剂口服，以无菌溶液剂或混悬剂给药，并且在某些情况下，可以以溶液剂形式静脉注射。可以将本发明的游离碱化合物以其药学上适用的酸加成盐形式进行配制和服用。

本发明所述化合物作为全新结构类型的BRaf激酶，血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelial growth factor receptor-2，VEGFR-2)和血小板衍生生长因子受体-β(Platelet-derived growth factor receptors-β，PDGFR-β)以及T-LAK细胞源蛋白激酶(T-LAK cell-originated protein kinase,TOPK)抑制剂，具有结构类型新颖，且能够作用于多个靶点等特点，可用于治疗或预防与BRaf激酶，血管内皮生长因子受体-2(Vascularendothelial growth factor receptor-2，VEGFR-2)和血小板衍生生长因子受体-β(Platelet-derived growth factor receptors-β，PDGFR-β)以及T-LAK细胞源蛋白激酶(T-LAK cell-originated protein kinase,TOPK)相关的肿瘤疾病如小细胞肺癌，鳞癌，腺癌，大细胞癌，结肠直肠癌、乳腺癌，卵巢癌，肾细胞癌，具有良好的应用价值和开发应用前景。

具体实施方式

流程概括了制备本发明化合物的制备步骤。

其中，R、R₃、R₅如前所述。

以下述实例详细叙述本发明。但是，应当明白，本发明不限于具体叙述的下述实例。

实施例1：1-{3-{[2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-苯基脲(化合物X01)的制备

步骤A：2-{[4-(3-甲氧基丙氧基)-3-甲基吡啶-2-基]甲硫基}-1H-苯并咪唑的制备

将2-氯甲基-4-(3-甲氧基丙氧基)-3-甲基吡啶盐酸盐(0.50g，1.88mmol)置于125ml茄形瓶中，加入11ml乙醇使之溶解，再加入1H-苯并咪唑-2-硫酚(0.28g，1.88mmol)和4ml NaOH(80g/L)，于68℃回流4h，TLC监测反应完全。将反应液倒入100ml烧杯中，自然冷却至室温，析出白色固体，乙酸乙酯和石油醚(2:1)重结晶得到白色针状晶体0.58g，收率89.3％。m.p.:115～118℃(文献值：116～118℃)。

步骤B：3-{{2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基吡啶-4-基}氧基}丙-1-醇的制备

将2-{[4-(3-甲氧基丙氧基)-3-甲基吡啶-2-基]甲硫基}-1H-苯并咪唑(3.00g，9.12mmol)置于100ml茄形瓶中，加入30ml二氯甲烷使之溶解，冰水浴下缓慢滴加三溴化硼(6.80g，27.2mmol)，自然恢复至室温，反应5h，TLC监测反应完全。加入20ml冰水猝灭反应，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8，抽滤得白色固体2.56g，收率85.3％。m.p.:97.0～99.2℃。未经纯化，直接用于下一步反应。

步骤C：3-{{2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙-1-胺的制备

将3-{{2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基吡啶-4-基}氧基}丙-1-醇(0.5g，1.52mmol)溶解于20mL二氯甲烷中，室温下滴加二氯亚砜5mL，滴加完毕后，加热回流反应3h，反应完全后，减压蒸除剩余的二氯亚砜和二氯甲烷，剩余物溶解于20mL DMF中，加入无水碳酸钾(0.63g，4.56mmol)和邻苯二甲酰亚胺钾(0.28g，1.52mmol)，于90℃搅拌反应3h，反应完全后，减压蒸除DMF，剩余物水洗，抽滤，滤饼溶解于30mL无水乙醇中，加入水合肼(5mL)，加热回流反应6h，反应完全后，减压蒸除乙醇，剩余物加入20mL水，二氯甲烷萃取(20mL×2次)，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，抽滤，蒸除溶剂，剩余物柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝60:1)得白色固体0.25g，收率50.2％。

步骤D：1-{3-{[2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-苯基脲(化合物X01)的制备

将苯基异氰酸酯(0.12g，1mmol)溶解于10mL二氯甲烷溶液中，室温下滴加3-{{2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙-1-胺(0.33g，1mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)，滴加完毕后继续搅拌反应3h，反应完全后，加入30mL水，搅拌5min，分液，有机相饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液浓缩，剩余物经柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝60：1)，得白色固体0.39g，收率86.7％。m.p.:104.1-105.5℃；ESI-MS:m/z448.6[M+H]⁺,470.4[M+Na]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.63(s,1H),8.41(s,1H),8.25(d,J＝5.6Hz,1H),7.56–7.33(m,4H),7.25–7.16(m,2H),7.16–7.09(m,2H),6.97(d,J＝5.7Hz,1H),6.92–6.83(m,1H),6.25(t,J＝5.8Hz,1H),4.70(s,2H),4.11(t,J＝6.1Hz,2H),3.27(q,J＝6.4Hz,2H),2.24(s,3H),1.93(p,J＝6.4Hz,2H).

实施例2：1-{3-{[2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-(4-氯苯基)脲(化合物X02)的制备

参照实施例01的制备方法，得到白色固体0.32g，收率76.2％，m.p.:165.8-167.3℃；ESI-MS:m/z 600.7,602.0,[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.23(d,J＝5.6Hz,1H),7.59(dt,J＝7.2,3.5Hz,1H),7.45(dd,J＝6.1,3.1Hz,1H),7.39–7.32(m,2H),7.23–7.12(m,3H),6.97(d,J＝5.7Hz,1H),5.23(s,2H),4.70(s,2H),4.59(t,J＝5.1Hz,1H),4.12(t,J＝6.2Hz,2H),3.77(d,J＝5.0Hz,2H),3.62(t,J＝4.9Hz,2H),3.57(q,J＝5.9Hz,2H),3.11(d,J＝4.9Hz,2H),2.98(t,J＝5.0Hz,2H),2.20(s,3H),1.89(p,J＝6.2Hz,2H).

实施例3：1-{3-{[2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲(化合物X03)的制备

参照实施例01的制备方法，得到白色固体0.44g，收率83％，m.p.:96.1-97.2℃；ESI-MS:m/z 516.3[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.74(s,1H),8.87(s,1H),8.26(d,J＝5.6Hz,1H),7.96(d,J＝2.0Hz,1H),7.53–7.39(m,4H),7.21(d,J＝7.5Hz,1H),7.18–7.08(m,2H),6.98(d,J＝5.8Hz,1H),6.43(t,J＝5.8Hz,1H),4.71(s,2H),4.12(t,J＝6.0Hz,2H),3.31–3.25(m,2H),2.24(s,3H),1.95(p,J＝6.4Hz,2H).

实施例4：1-{3-{{2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基-吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-(对甲苯基)脲(化合物X04)的制备

参照实施例01的制备方法，得到白色固体0.32g，收率84.1％，m.p.:103.2-104.3℃；ESI-MS:m/z 462.3[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.23(d,J＝5.6Hz,1H),7.59(dt,J＝7.2,3.5Hz,1H),7.45(dd,J＝6.1,3.1Hz,1H),7.39–7.32(m,2H),7.23–7.12(m,3H),6.97(d,J＝5.7Hz,1H),5.23(s,2H),4.70(s,2H),4.59(t,J＝5.1Hz,1H),4.12(t,J＝6.2Hz,2H),3.77(d,J＝5.0Hz,2H),3.62(t,J＝4.9Hz,2H),3.57(q,J＝5.9Hz,2H),3.11(d,J＝4.9Hz,2H),2.98(t,J＝5.0Hz,2H),2.20(s,3H),1.89(p,J＝6.2Hz2H).

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

药理实施例

实施例5：受试化合物对A549、HCT-116、PC3细胞增殖的抑制活性

(1)实验材料

细胞系：A549、HCT-116、PC3细胞，以3000/孔的密度铺于96孔板，每孔100ul，24h后使用。

编号X01至X04目标化合物：以DMSO溶解，用培养液稀释配制为50μM、20μM、10μM、5μM、2μM五个不同浓度保存于-20℃待用，DMSO在培养液中的终浓度低于0.1％。

阳性对照药：索拉非尼(sorafenib)。

MTT：以PBS溶解为5mg/mL，保存于-20℃。

(2)实验方法

利用MTT方法，选取A549、HCT-116、PC3细胞来评价供试样品的抗肿瘤增值活性。细胞株在RPMI 1640培养基上进行培养，该培养基包含10％小牛血清(FBS)。当细胞增殖至80-90％时使其合并随后进行不超过20代的传代培养，然后在下一步处置前使它们适应环境达到24h。将这些细胞置于96孔板上(8×10⁴/mL)，然后在含有5％CO₂的湿润环境中培养过夜并控温在37℃。24h过后加入不同浓度的发明代表性化合物。再经过24h的培养，向其中加入MTT(5mg/mL)并继续培养4h。移除培养基质，将晶体溶解于DMSO中，利用酶标仪(TECANSPECTRA,WetDar,德国)在490nm波长下测量吸光度。根据公式：细胞生长抑制率＝(1-药物组OD值/对照组OD值)×100％，计算相应浓度下的细胞生长抑制率，以受试化合物的不同浓度及对细胞的抑制率作对数曲线，计算受试化合物相对应的IC₅₀值。按照上述方法测定本发明代表性化合物，结果示于表1：

表1

实施例6：受试化合物对BRaf，VEGFR-2，PDGFR-β和TOPK激酶的抑制活性

(1)实验材料

激酶：BRaf激酶(野生型)，VEGFR-2，PDGFR-β和TOPK激酶。

编号X01至X04目标化合物：以DMSO溶解，对照品做同样处理。

阳性对照药：索拉非尼(sorafenib)。

激酶缓冲液：含有50mM HEPES，pH7.5,10mM MgCl2,0.0015％Brij-35和2mM DTT。

终止缓冲液：含有100mM HEPES，pH7.5,0.015％Brij-35,0.2％涂层试剂#3和50mM乙二胺四乙酸(EDTA)。

(2)实验方法

所有激酶测定均在96孔板中50μL反应体积中进行。用DMSO将化合物稀释至500μM，然后将10μL化合物转移至作为中间板的新96孔板中，并向每个孔中加入90μL激酶缓冲液。将5微升中间板的每个孔转移到384孔板中。每孔包含以下的酶和底物：激酶碱缓冲液，FAM标记的肽，ATP和酶溶液。含有底物，酶和不含化合物的DMSO孔用作DMSO对照。仅含有不含酶的底物的孔用作低对照。将化合物在室温下孵育10分钟。向每个孔中加入10μL肽溶液，并在28℃下孵育指定的一段时间，并用25μL终止缓冲液终止反应。最后，使用Caliper程序收集数据，该程序将测得数据值转换为抑制率。

抑制率(％)＝(max-conversion)/(max-min)×100,其中“max”代表DMSO控制；“min”代表低控制。

按照上述方法测定本发明代表性化合物，结果示于表2：

表2

制剂实施例

下列制剂实施例仅举例说明本发明的保护范围，但不以任何方式构成限定。

实施例7：明胶胶囊

硬明胶胶囊的制备采用：

可以根据所提供的合理变化来改进上述制剂。

实施例8：片剂

片剂的制备采用：

将上述组分混合并压制成片剂。

实施例9：片剂

每片中含有2.5-1000mg活性组分的片剂制备如下：

使活性成分、淀粉和纤维素通过美国45号目筛并彻底混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，随后经美国14号目筛。将生成的颗粒在50-60℃下干燥并经美国18号目筛。将预先经过美国60号目筛的羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁和滑石粉加入到上述颗粒中，随后混合，在压片机上压制得到片剂。

实施例10：组合片剂

对于上述说明，本领域技术人员可容易地理解本发明的必要特征，不背离本发明的精神和范围，本发明可进行各种改变和改进以适应不同的应用和条件。

Claims

1.一种式Ⅰ的化合物，以及上述化合物的药学上可接受的盐：

其中，

R选自氢，苯基，卤素取代的苯基，C1-C4烷基取代的苯基，卤素取代的C1-C4烷基取代的苯基;

R₃、R₅选自H，C1-C4烷基。

2.权利要求1的式I化合物，以及上述化合物的药学上可接受的盐：

其中，

R选自氢，苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，3-(三氟甲基)苯基。

3.权利要求1的式I化合物，以及上述化合物的药学上可接受的盐：

其中，

R₃、R₅选自氢，甲基。

4.权利要求1所述的化合物，及药学上可接受的盐，选自：

1-{3-{{2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-苯基脲；

1-{3-{{2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-(4-氯苯基)脲；

1-{3-{{2-{[(1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲；

1-{3-{{2-{[ (1H-苯并咪唑-2-基)硫基]甲基}-3-甲基吡啶-4-基}氧基}丙基}-3-(对甲苯基)脲。

5.一种药物组合物，包括作为活性成分的权利要求1-4任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学可接受的载体或稀释剂。

6.权利要求1所述的化合物的制备方法，其流程如下：

其中，R、R₃、R₅如权利要求1所述。

7.权利要求1-4任何一项所述的化合物，及药学上可接受的盐或权利要求5所述的药物组合物在制备***药物中的应用。

8. 权利要求1-4任何一项所述的化合物，及药学上可接受的盐或药物组合物在制备BRaf激酶，血管内皮生长因子受体-2，血小板衍生生长因子受体-β或T-LAK 细胞源蛋白激酶抑制剂中的应用。

9. 权利要求1-4任何一项所述的化合物，及药学上可接受的盐或药物组合物在制备与BRaf激酶，血管内皮生长因子受体-2，血小板衍生生长因子受体-β或T-LAK 细胞源蛋白激酶失调的相关疾病药物中的应用。

10. 如权利要求9所述的应用，其中，与BRaf激酶，血管内皮生长因子受体-2，血小板衍生生长因子受体-β或T-LAK 细胞源蛋白激酶失调的相关疾病为肺癌，肝癌，黑色素瘤，结肠癌，直肠癌，乳腺癌，卵巢癌，肾癌。