CN109988718A - 一种淡紫拟青霉属真菌菌株及其应用 - Google Patents

一种淡紫拟青霉属真菌菌株及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种淡紫拟青霉属真菌菌株及其应用，所述的淡紫拟青霉属真菌菌株分类命名为Paecilomyces lilacinus，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2018年12月28日，保藏编号：CGMCC No.17069，所述淡紫拟青霉属真菌属于菌物界，真菌门，半知菌类，丝孢菌目，丛梗孢科，拟青霉属。应用为所述的淡紫拟青霉属真菌菌株在制备生物防治三角枫材小蠹生物制剂中的应用。

Description

一种淡紫拟青霉属真菌菌株及其应用
技术领域
本发明属于微生物分离培养技术领域，具体涉及一种淡紫拟青霉属真菌菌株及其应用。
背景技术
昆明市重要园林树种三角枫受到小蠹虫的危害，严重破坏了昆明市园林风景建设和造成巨大的经济损失，对小蠹虫的治理刻不容缓。由于小蠹身体微小难以发现，加之生活隐蔽，寄主为其完成生活史提供了很好的屏障，导致防治困难；而小圆胸小蠹因其寄主植物众多且分布广泛，防治难度更大（Walgama R S.等，2012）。小蠹虫仅在新成虫的一段时间内活动于外界，一生中绝大部分时间营隐蔽生活，通常在树皮下交配、取食。根据小蠹所表现出的生物学特性可以看出其危害具有隐蔽性的特点，对于长期蛀于寄主树种中的小蠹防治使用化学药剂防治往往效果不好，且化学防治有着环境污染这一大弊端。而物理防治方法中的辐射与熏蒸针对的是检疫性小蠹虫的防治，也不适用于活体寄主植物的防治，病枝条修剪的物理方法控虫效果也不是太好。而生物防治方法，是随着国家对环保意识的提高，成为逐渐被人们认可的绿色防治方法。虫生真菌是害虫种群自然调节的重要因子和害虫生物防治的重要材料，利用虫生真菌防治害虫，已逐步成为一种以生物防治为主导的综合治理重要途径。旨在为该害虫的生物防治提供菌种资源，本研究通过从死的小蠹成虫上分离培养出能对小蠹虫患病致死的菌株来作为生防菌。该菌株分离自死的小蠹虫上，通过回接试验，经统计学分析，对材小蠹致死作用有显著作用的菌株，经形态学及分子鉴定为淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus），以此作为三角枫材小蠹筛选出的有效生防菌株。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种淡紫拟青霉属真菌菌株；第二目的在于提供所述的淡紫拟青霉属真菌菌株的应用。
除非另有说明外，本发明中所采用的百分数均为体积百分数。
本发明的第一目的是这样实现的，所述的淡紫拟青霉属真菌菌株 (Paecilomyces lilacinus）PLXDCSFJ04，命名为PLXDCSFJ04,经鉴定为淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus），是从自然发病致死三角枫材小蠹身上分离得到；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2018年12月 28日，保藏编号：CGMCCNo.17069，所述淡紫拟青霉属真菌属于菌物界，真菌门，半知菌纲，丝孢菌目，丛梗孢科，拟青霉属。
本发明所述的淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus），命名为PLXDCSFJ04,是从自然得病死亡的三角枫材小蠹上分离得到，已于2018年 12月28日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心(China General Microbiological CultureCollection Center,简称 CGMCC。地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100080)。其保藏编号为CGMCC No：17069。
所述菌株对三角枫材小蠹的致病效果好，在短时间内即可穿透三角枫材小蠹体节处，并寄生三角枫材小蠹并繁殖。
所述菌株在接触到三角枫材小蠹之后能快速繁殖。
所述菌株在三角枫材小蠹体表产孢，产孢之后在三角枫材小蠹体表收集分生孢子，回接到三角枫材小蠹。通过柯赫氏法则验证，回接菌株分生孢子侵染其它健康实验用三角枫材小蠹具备同样毒力致死效果。
所述菌株是通过下述具体步骤获得的：
A、三角枫材小蠹采集：采集回枯的三角枫枝条剥出健康的三角枫材小蠹活虫体及自然病死虫体，带回实验室内饲养。
B、菌株分离与筛选：高压高温灭菌所有需要的实验材料，并在无菌操作台中操作所有步骤。
将配比浓度为75%的乙醇溶液清洗自然病死三角枫材小蠹5秒，然后将配比为0.1%的升汞溶液对虫体表面消毒2-3分钟，无菌水缓慢冲淋3次，用灭菌的镊子将三角枫材小蠹虫体按头、胸、腹不同部位分开，并且将分开后的三角枫材小蠹不同的身体部位小心放置到培养基中。
培养基为普通PDA培养基。
一起移送至25℃±恒温培养箱中培养5-7d。重复纯化两次。
C、菌种保存：及时在实验室进行三角枫材小蠹致病菌株保存，挑取繁殖培养基中生长旺盛菌株接种至保存培养基中，在25℃±黑暗中静置培养7天，于4℃冰箱中冻存；保存培养基为PDA培养基；在无菌操作箱中将菌株接种至普通PDA试管斜面，25℃±培养7d后放进4℃冰箱中保存。
PDA固态培养基成分以g/L计为：马铃薯160～240g、葡萄糖10～20g、琼脂15～20g、PH自然。
PDA固态培养基成分以g/L计优选为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、PH自然。
步骤A所述的标本采集自昆明市翠湖公园、黑龙潭公园、植物园等各大公园内三角枫种植园。
步骤A所述的标本采集是在翠湖公园、黑龙潭公园、植物园等各大公园内三角枫种植园三角枫回枯枝条。
步骤A所述的标本采集是在干燥，光照充足的环境下。
步骤A所述的室内饲养为带虫的回枯枝条。
步骤B所述无菌操作台中步骤为，酒精灯下操作，并在酒精灯火焰外焰上灼烧接种针，接种环，在酒精周围等下操作所有分离步骤。
步骤B所述的灭菌，是将接种针、接种环、无菌水、镊子、培养基等试验所需材料置于高压蒸汽式灭菌器中，在121℃下灭菌处理30分钟以上。
步骤B所述无菌操作台中步骤为，接种至培养基，美国进口封口膜密封所有繁殖培养基。
步骤B所述的繁殖培养条件的优选；25℃±黑暗中静置培养7-9d。
步骤C所述的保存培养的条件优选；25℃±黑暗静置培养7-9d。
一株淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04及其在生物防治三角枫材小蠹的方法，包括菌株的活化与扩繁、孢子悬浮液制作、致三角枫材小蠹死亡毒力检测、具体包括以下步骤：
A、菌株活化与扩繁：将淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04接种到活化与扩繁培养基上，在25℃±下培养7-15d至大量分生孢子产生，获得活化与扩繁产孢菌株。
B、孢子悬浮液的配制：将菌株接种于PDA培养基上，在25℃±培养箱中恒温培养7-15d。
活化与扩繁培养基为普通PDA培养基。
用添加0.05%Tween-80的无菌水溶液冲洗培养皿中的分生孢子。将培养皿中的菌液和孢子都倒入杯中并且不停震荡30min,用擦镜纸过滤,最终得到未计数的孢子悬浮液。用血球计数板，放置在显微镜下，记录内部400小格中的所有分生孢子数量。最终计算出所配制的孢子悬浮液的总孢子数量，稀释配置成1.0×107个·mL−1孢子悬浮液。
生防效果测定：在培养皿中铺上滤纸，每个皿里放入少许饲料，将试虫（三角枫材小蠹Xyleborus sp．）放于杯皿中（每皿3头），室温下进行饲养。用牙签将实验菌（菌液浓度1.0×107个·mL−1孢子悬浮液）挑到虫体身上，再挑取部分菌与喂食的饲料相混合，以便虫取食时一同吃入，进行室内观察。另外，以不挑入菌的试虫作为对照（CK），每个处理重复3次，处理后1-7天，每天定时观察并记录虫体发病和死亡情况。
移送至培养箱中恒温培养8d,每24小时开箱拿出杯皿，记录死亡的材小蠹数量。并将死亡的材小蠹挑出保湿培养，查看是否有真菌长出，对比出导致三角枫材小蠹死亡的原因。计算材小蠹累计死亡率。试验重复三次。
所述的制备方法，还可以包括制作成其他浓度的孢子悬浮液。
步骤B所述的血球计数板品牌为上海求精，16格×25格的血球计数板。
步骤B所述Tween-80做真菌分生孢子分散剂，Tween-80 聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯。
本发明的第二目的是这样实现的，所述的淡紫拟青霉属真菌菌株在制备生物防治三角枫材小蠹生物制剂中的应用。
本发明的生防效果包括以下几个方面。
1、本发明所述菌株对三角枫材小蠹的致病效果好，在短时间内即可穿透三角枫材小蠹体节处，并寄生于三角枫材小蠹体内并繁殖。
2、本发明所述菌株生长迅速，产孢量大，有利于大规模生产和推广应用。
3、本发明所述三角枫材小蠹生防菌来源于自然环境条件下三角枫材小蠹自然感病死亡分离获得，因此，加以利用，能够做为三角枫材小蠹生物防治的方法，并且操作流程简单，防治效果好。
附图说明
图1为实施例1中淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）PLXDCSFJ04在普通PDA培养基上，培养7d时的菌株菌落正面形态；
图2为实施例1中淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）PLXDCSFJ04分生孢子显微图；
图3为实施例5中淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）PLXDCSFJ04分生孢子梗和分生孢子；
图4为实施例6中淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）PLXDCSFJ04菌株在枝干中侵染三角枫材小蠹，在三角枫材小蠹身上生长发育的显微镜下观察的形态特征；
图5为实施例6中淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）PLXDCSFJ04在枝干中侵染三角枫材小蠹导致材小蠹死亡。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
本发明所述的淡紫拟青霉属真菌菌株分类命名为Paecilomyces lilacinus，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2018年12月28日，保藏编号：CGMCC No.17069，所述淡紫拟青霉属真菌属于菌物界，真菌门，半知菌纲，丝孢菌目，丛梗孢科，拟青霉属。
本发明所述的淡紫拟青霉属真菌菌株的应用为所述的淡紫拟青霉属真菌菌株在制备生物防治三角枫材小蠹生物制剂中的应用。
所述的淡紫拟青霉属真菌菌株制备生物防治三角枫材小蠹生物制剂包括菌株活化与扩繁、孢子悬浮液的配制和生防效果测定步骤，具体包括：
A、菌株活化与扩繁：将所述的淡紫拟青霉属真菌菌株接种到活化及扩繁培养基上，于20~30℃下培养10~20天得到活化与扩繁产孢菌株；
B、孢子悬浮液的配制：将活化与扩繁产孢菌株接种到PDA培养基上，在20~30℃下恒温培养10~20天，用添加0.05%Tween-80的无菌水溶液冲洗培养皿中的孢子，将培养皿中的菌液和孢子都倒入杯中并且不停震荡30min,用擦镜纸过滤,最终得到未计数的孢子悬浮液，放置在显微镜下，血球计数板计数，记录内部400小格中的所有孢子数，最终计算出所制作的孢子悬浮液的总孢子数量，稀释配置成不同浓度梯度孢子悬浮液；
C、生防效果测定：在培养皿中铺上滤纸，每个皿里放入少许饲料，将试虫三角枫材小蠹（小圆胸小蠹Euwallacea fornicatus）放于皿中（每皿3头），室温下进行饲养，用牙签将实验菌挑到虫体身上，再挑取部分菌与喂食的饲料相混合，以便虫取食时一同吃入，进行室内观察；另外，以不挑入菌的试虫作为对照（CK），每个处理重复3次，处理后1-7天，每天定时观察并记录虫体发病和死亡情况。
下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：
实施例1
淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04的获得、鉴定与保藏。
（1）淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04的获得、鉴定。
本发明所述的淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04真菌，自三角枫材小蠹罹病虫体上获得，三角枫材小蠹罹病虫体采自昆明市翠湖公园、黑龙潭公园、植物园等各大公园内三角枫种植园，采集有回枯症状的三角枫枝条带回实验室解剖，健康的室内饲养，病死的进行病原菌分离培养。
将配比浓度为75%的乙醇溶液清洗红火蚁5秒，然后将配比为0.1%的升汞溶液对虫体表面消毒2-3分钟，无菌水缓慢冲淋3次，用灭菌的镊子将三角枫材小蠹虫体按头、胸、腹不同部位分开，并且将分开后的材小蠹不同的身体部位小心放置到培养基中进行分离培养。
接种至繁殖培养基中25℃±黑暗静置培养7-9d，至菌落长出。繁殖培养基为PDA培养基。待菌落长出后，挑取长势好的菌株至保存培养基中，保存培养，保存培养基为PDA培养基。
PDA固态培养基成分以g/L计优选为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、PH自然。
对上述分离的菌株PLXDCSFJ04，通过生物学特性观察，进行进一步的形态学鉴定及分子鉴定，实验结果记录如下。
A、形态特征：淡紫拟青霉菌种斜面培养后呈粉状, 平坦, 表面没有分泌物。平板培养菌落较大, 圆形、***, 较致密, 菌落表面无分泌物。在28℃条件下, 一般第3天长出白色菌落, 第四天渐成较深的颜色。其分生孢子梗末端膨大，分生孢子为单细胞, 呈链状、平滑、无色至黄色， 孢梗上具有瓶颈状不规则的分枝或轮生分枝，瓶梗基部较宽。轮生分枝由圆柱形的部分组成，有时分枝向远离主轴方向弯曲。
B、培养特征：在PDA培养基上，于25℃±培养7-10d菌落直径5cm，生长缓慢，粉紫色，反面淡黄色。PDA培养基中初期白色菌落，后逐渐变为粉色，菌丝体边缘呈毛绒状，菌丝较细。孢子梗直立，排列密集的瓶梗成分枝状。小梗瓶状或稍膨大，轮状分枝。由基部到顶端逐渐变尖形成纤细的颈。分生孢子串生，椭圆形。分生孢子为单胞链状。
C、菌株的稳定性：该菌生长温度范围在15～35℃，适宜生长温度为20℃～30℃，生长PH值在5.5～7.5，最适宜PH值为6.5～7。
D、5.8S r DNA序列分析：对该菌株进行DNA序列测定，该菌株PLXDCSFJ04的总DNA为模板，在引物ITS1（5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG3'）和ITS4（5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3'）的引导下PCR扩增该菌株的5.8S r DNA序列，PCR反应体系为：2 × Taq Master Mix 25μL，去离子水20μL，引物ITS1 1.5μL，引物ITS4 1.5μL，DNA 2μL，共50ul。PCR反应条件: a、94℃3 min；b、94℃30 s，56℃40s，72℃50s，35个循环；c、72℃10 min，4℃保存。
DNA序列分析：将PCR反应产物送到生物公司测序得ITS序列，经复检，在美国国家生物技术信息中心（NCBI）中比对，比对结果表明，菌株PLXDCSFJ04与淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）的5.8S r DNA序列的相似性达到了99%。通过序列比对和形态特征将菌株PLXDCSFJ04鉴定为淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）。本发明所述的菌株PLXDCSFJ04其5.8S r DNA序列如下：
（2）淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）PLXDCSFJ04的保藏。
通过上述鉴定结果，确认菌株PLXDCSFJ04为淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）的一种，编号为PLXDCSFJ04，于2018年12月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心(China General Microbiological CultureCollection Center,简称 CGMCC。地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100080)。其保藏编号为CGMCC No：17069。
实施例2
淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04制备生防菌剂
（1）孢子悬浮液的配制。
首先，将淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04接种于普通PDA培养基上，在25℃±培养箱中恒温培养7-15d。
PDA固态培养基成分以g/L计优选为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、PH自然。
然后将灭菌的无菌水添加0.05%Tween-80。
无菌水溶液冲洗培养皿中的孢子。
将培养皿中的菌液和孢子都倒入杯中并且不停震荡30min,用擦镜纸过滤,最终得到未计数的孢子悬浮液。
拿出血球计数板，放置在显微镜下，记录内部400小格中的所有孢子数。
最终计算出所制作的孢子悬浮液的总孢子数量，稀释配置成1.0×106个·mL−1孢子悬浮液。
（2）结果核准检验。
载玻片滴加未稀释浓度的孢子悬浮液和稀释之后的孢子悬浮液。在显微镜下观察未稀释浓度的孢子悬浮液和稀释之后的孢子悬浮液载玻片上孢子数量，检测是否明显差异。
实施例3
淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04制备生防菌剂。
（1）孢子悬浮液的配制。
首先，将淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04接种于普通PDA培养基上，在26℃培养箱中恒温培养7-15d。
PDA固态培养基成分以g/L计优选为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、PH自然。
然后将灭菌的无菌水添加0.05%Tween-80。
无菌水溶液冲洗培养皿中的孢子。
将培养皿中的菌液和孢子都倒入杯中并且不停震荡30min,用擦镜纸过滤,最终得到未计数的孢子悬浮液。拿出血球计数板，放置在显微镜下，记录内部400小格中的所有孢子数。
最终计算出所制作的孢子悬浮液的总孢子数量，稀释配置成1.0×107个·mL−1孢子悬浮液。
（2）结果核准检验。
载玻片滴加未稀释浓度的孢子悬浮液和稀释之后的孢子悬浮液。在显微镜下观察未稀释浓度的孢子悬浮液和稀释之后的孢子悬浮液载玻片上孢子数量，检测是否明显差异。
实施例4
以淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04进行生物防治效果测定。
在培养皿中铺上滤纸，每个皿里放入少许饲料，将试虫（三角枫材小蠹Xyleborussp．）放于杯皿中（每皿3头），室温下进行饲养。用牙签将实验菌（菌液浓度1.0×107个·mL−1孢子悬浮液）挑到虫体身上，再挑取部分菌与喂食的饲料相混合，以便虫取食时一同吃入，进行室内观察。另外，以不挑入菌的试虫作为对照（CK），每个处理重复3次，处理后1-7天，每天定时观察并记录虫体发病和死亡情况。
移送至培养箱中恒温培养8d,每24小时开箱拿出杯皿，记录死亡的材小蠹数量。并将死亡的材小蠹挑出保湿培养，查看是否有真菌长出，对比出导致三角枫材小蠹死亡的原因。计算材小蠹累计死亡率。试验重复三次。
实施例5
淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04进行生物防治效果测定。
在培养皿中铺上滤纸，每个皿里放入少许饲料，将试虫（三角枫材小蠹Xyleborussp．）放于杯皿中（每皿3头），室温下进行饲养。用牙签将实验菌（菌液浓度1.0×107个·mL−1孢子悬浮液）挑到虫体身上，再挑取部分菌与喂食的饲料相混合，以便虫取食时一同吃入，进行室内观察。另外，以不挑入菌的试虫作为对照（CK），每个处理重复3次，处理后1-7天，每天定时观察并记录虫体发病和死亡情况。
移送至培养箱中恒温培养8d,每24小时开箱拿出杯皿，记录死亡的材小蠹数量。并将死亡的材小蠹挑出保湿培养，查看是否有真菌长出，对比出导致三角枫材小蠹死亡的原因。计算材小蠹累计死亡率。试验重复三次。
实施例6
淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04进行真实枝条喷洒生物防治。
1、按照上述实施例2中步骤(1)制备分生孢子的方法，将淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04分生孢子加入0 .05％的吐温-80溶液中，按以下浓度或方法设置实验组和对照组：
1.0×106个·mL−1孢子悬浮液、1.0×107个·mL−1孢子悬浮液、空白对照:清水。
每个处理30枝条，分别喷洒不同浓度的淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04的分生孢子悬浮液，目测枝条完全湿透，停止喷洒。
生物防治处理15d后，剥开回枯枝条健康部分，查看并统计死亡三角枫材小蠹死虫数量。
实施例7
以淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04生物防治效果数据的分析。
在实验室内，将三角枫材小蠹在不同的浓度孢子悬浮液中进行喷雾法处理，连续10-15d记录三角枫材小蠹的死亡率；敲击枝条，使材小蠹爬出枝条表面，分别喷洒不同浓度的淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04分生孢子悬浮液，用SPSS 22.0软件分析计算各浓度的致死率。采用SPSS 22.0软件处理试验数据,进行差异显著性分析。
计算公式如下：
死亡率(％)＝死亡虫数/处理前虫数×100％
校正死亡率(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100％
结果显示，喷雾法处理10-15d后淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04菌株分生孢子对材小蠹毒力效果：
1.0×106个·mL−1孢子悬浮液、1.0×107个·mL−1孢子悬浮液浓度分别对应校正死亡率为67.05%和70.55%。如表1显示。结果表明，淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04对三角枫材小蠹的致死效果非常迅速。
表1不同浓度的PLXDCSFJ04菌株孢子悬浮液对材小蠹的毒力测定
注:数据后不同字母表示在0.05 水平上差异显著
用SPSS 22.0软件对分生孢子浓度与三角枫材小蠹校正死亡率进行回归分析。回归方程为Y＝11.125X+2.143。
浓度X使用底数为10的对数来转换。
结果显示，喷雾法处理10-15d后，淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04菌株分生孢子对三角枫材小蠹整体的毒力效果：
菌株对三角枫材小蠹的野外药效毒力，1.0×106个·mL−1孢子悬浮液、1.0×107个·mL−1孢子悬浮液浓度分别对应三角枫材小蠹死亡数为212和284只。结果表明，淡紫拟青霉真菌菌株(Paecilomyces lilacinus）真菌菌株PLXDCSFJ04能够对实验室饲养三角枫材小蠹和回枯三角枫枝条中的材小蠹造成集中大量死亡。致死速度快。

Claims (3)

1.一株淡紫拟青霉属真菌菌株，其特征在于所述的淡紫拟青霉属真菌菌株分类命名为Paecilomyces lilacinus，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2018年 12月28日，保藏编号：CGMCC No.17069，所述淡紫拟青霉属真菌属于菌物界，真菌门，半知菌类，丝孢菌目，丛梗孢科，拟青霉属。
2.一种权利要求1所述的淡紫拟青霉属真菌菌株的应用，其特征在于所述的淡紫拟青霉属真菌菌株在制备生物防治三角枫材小蠹生物制剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的淡紫拟青霉属真菌菌株的应用，其特征在于所述的淡紫拟青霉属真菌菌株制备生物防治三角枫材小蠹生物制剂包括菌株活化与扩繁、孢子悬浮液的配制和生防效果测定步骤，具体包括：
A、菌株活化与扩繁：将所述的淡紫拟青霉属真菌菌株接种到活化及扩繁培养基上，于20~30℃下培养10~20天得到活化与扩繁产孢菌株；
B、孢子悬浮液的配制：将活化与扩繁产孢菌株接种到PDA培养基上，在20~30℃下恒温培养10~20天，用添加0.05%Tween-80的无菌水溶液冲洗培养皿中的孢子，将培养皿中的菌液和孢子都倒入杯中并且不停震荡30min,用擦镜纸过滤,最终得到未计数的孢子悬浮液，放置在显微镜下，血球计数板计数，记录内部400小格中的所有孢子数，最终计算出所制作的孢子悬浮液的总孢子数量，稀释配置成不同浓度梯度孢子悬浮液；
C、生防效果测定：在培养皿中铺上滤纸，每个皿里放入少许饲料，将试虫三角枫材小蠹（小圆胸小蠹Euwallacea fornicatus）放于皿中（每皿3头），室温下进行饲养，用牙签将实验菌挑到虫体身上，再挑取部分菌与喂食的饲料相混合，以便虫取食时一同吃入，进行室内观察；另外，以不挑入菌的试虫作为对照（CK），每个处理重复3次，处理后1-7天，每天定时观察并记录虫体发病和死亡情况。
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