CN110669675B - 金龟子绿僵菌mangs71814及其在马铃薯块茎蛾防治方面的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种金龟子绿僵菌MANGS71814及其在马铃薯块茎蛾防治方面的应用,该金龟子绿僵菌MANGS71814于2019年08月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC No.18121,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。金龟子绿僵菌MANGS71814的获得过程为:从采集到的罹病马铃薯块茎蛾3龄幼虫体分离获得野生金龟子绿僵菌菌株,在萨氏培养基上培养,将分生孢子转接到新的培养基上进行纯化,然后进行单孢分离获得纯化的金龟子绿僵菌MANGS71814。本发明提供的金龟子绿僵菌MANGS71814是一种能用于防治马铃薯块茎蛾的生防真菌,具有对马铃薯块茎蛾致病性强、环保无污染、不易产生抗药性的特点,可以广泛地用于马铃薯块茎蛾卵、幼虫和蛹的防治。
Description
技术领域
本申请属于微生物技术领域,具体地说,涉及一种金龟子绿僵菌MANGS71814及其在马铃薯块茎蛾防治方面的应用。
背景技术
马铃薯块茎蛾[Phthorimaea operculella(Zeller)]隶属于鳞翅目,麦蛾科,麦茎蛾属,是一种主要分布于热带和亚热带的茄科植物害虫,尤其对马铃薯的危害较为严重。近年来,随着全球气候变化,该虫的分布范围逐渐扩散,对茄科经济作物番茄和烟草的危害也逐年增大。
现有技术中,目前对于马铃薯块茎蛾的防治主要采用化学防治方式,该虫已对许多农药产生了较强的抗药性。另外,采用化学防治方式带来的农药残留等问题,存在人畜安全隐患和生态环境影响的风险。
发明内容
针对现有技术的上述缺陷,本申请提供一种金龟子绿僵菌MANGS71814及其在马铃薯块茎蛾防治方面的应用。
本发明提供的金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)MANGS71814,于2019年08月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCCNo.18121,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
所述金龟子绿僵菌MANGS71814的获得过程为:从采集到的罹病马铃薯块茎蛾3龄幼虫体分离获得野生金龟子绿僵菌菌株,在萨氏培养基上培养,将分生孢子转接到新的培养基上进行纯化,然后进行单孢分离获得纯化的金龟子绿僵菌MANGS71814。
如上所述的金龟子绿僵菌MANGS71814,在马铃薯块茎蛾[Phthorimaeaoperculella(Zeller)]防治方面的应用;
将马铃薯块茎蛾卵置于浓度为2.0×103个孢子/mL–2.0×108个孢子/mL的金龟子绿僵菌MANGS71814孢子悬浮液中浸渍5s;
将马铃薯块茎蛾3龄幼虫置于浓度为2.0×103个孢子/mL–2.0×108个孢子/mL的金龟子绿僵菌MANGS71814孢子悬浮液中浸渍5s;
将马铃薯块茎蛾蛹置于浓度为2.0×103个孢子/mL–2.0×108个孢子/mL的金龟子绿僵菌MANGS71814孢子悬浮液中浸渍5s。
本发明提供的金龟子绿僵菌MANGS71814及其在马铃薯块茎蛾防治方面的应用具有以下优点:
1、分离获得的金龟子绿僵菌MANGS71814菌株是对马铃薯块茎蛾卵、幼虫和蛹均具有强致病性的真菌菌株。
2、金龟子绿僵菌MANGS71814菌株培养简单,生长快速,产孢量大,孢子萌发率高,易于在室内大量培养繁殖。
3、金龟子绿僵菌MANGS71814菌株的分生孢子对马铃薯块茎蛾卵、幼虫和蛹的致病力均很强,环保无污染、不易产生抗药性,可以广泛地用于马铃薯块茎蛾卵、幼虫和蛹的防治。
具体实施方式
以下将配合实施例来详细说明本申请的实施方式,藉此对本申请如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
昆虫病原真菌是一类能通过昆虫体表感染昆虫并在其体表和体内繁殖,导致昆虫发病死亡的真菌。因其对环境友好,对害虫具有持续的控制能力,不易产生抗药性,被认为是最有可能替代化学农药的下一代新型生物农药。
金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)属于半知菌亚门丝孢纲绿僵菌属。本申请发明人于2019年8月8日在云南省西双版纳自治州勐远镇南贡山从罹病鳞翅目害虫蛹体上采集到金龟子绿僵菌MANGS71814菌株。本申请发明人所在的课题组在调查采集到了田间自然罹病的鳞翅目昆虫的蛹体后,经过分离、纯化、毒力测定和筛选,发现该菌在田间具有流行性强、侵染致病力强的云南本地金龟子绿僵菌MANGS71814菌株对马铃薯块茎蛾幼虫的侵染致病力高于课题组之前发现的从罹病棕色鳃金龟幼虫上分离获得的金龟子绿僵菌KMa0107菌株。
下面给出的是本发明提供的金龟子绿僵菌MANGS71814及其在马铃薯块茎蛾防治方面的应用的实施例。
实施例一、金龟子绿僵菌MANGS71814的分离及鉴定
1.1材料
1.1.1供试菌株
菌株于2019年8月8日采自云南省西双版纳自治州勐远镇南贡山罹病鳞翅目害虫蛹。
1.1.2菌株的分离培养
将采集到的罹病马铃薯块茎蛾3龄幼虫体置于5mL无菌EP管中带回实验室,采用划线法,在萨氏(SDAY)培养基(葡萄糖40g,蛋白胨10g,酵母浸粉10g,琼脂20g,pH自然)上,于(25±1)℃,L//D=16h//8h,湿度80%的光照培养箱中培养。培养7d后,将分生孢子转接到新的培养基上进行纯化。纯化的菌株采用SDAY斜面培养基保存于4℃冰箱。
1.1.3菌落形态观察
将分离并纯化的真菌分别接于SDAY培养基(葡萄糖40g,蛋白胨10g,酵母浸粉10g,琼脂20g,pH自然),置于(25±1)℃,L//D=16h//8h光照培养箱中培养,于3、7和14d时,分别测定菌落直径并观察菌落形态特征。
1.2结果
1.2.1形态学鉴定结果
获得纯培养金龟子绿僵菌MANGS71814菌株后,对其形态特征进行鉴定。在SDAY培养基上,菌落绒毛状至絮状,初为白色,产孢时呈橄榄绿色。在光学显微镜40倍下可以看到分隔分枝菌丝,透明,直径1.5~2.0μm。分生孢子梗直径约为2μm,末端产生瓶形小梗,大小为8~16(-25)×1.5~2(2.2)μm。分生孢子从瓶梗末端以向基式产生,常常相互联成长串链。分生孢子长椭圆形至圆柱状,两端钝截至钝圆,大小变化幅度为5~7(-9)×2~3(4.5)μm。孢子单个存在时色亮,而成堆存在时呈现橄榄绿色,脱落的分生孢子常聚成菱形的孢子团块。
实施例二、金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾卵、幼虫和蛹的致病性测定
1材料
1.1.1供试昆虫
马铃薯块茎蛾均采集于云南省宣威市马铃薯田,并于室内连续饲养5代,试验在温度25±1℃、相对湿度(RH)60±5%、光周期L∶D=16∶8条件下的智能人工培养箱(RG-300)中进行。马铃薯块茎蛾用新鲜马铃薯薯块及叶片进行饲养。
1.1孢子悬浮液制备
将分离获得的菌株接种于SDAY培养基,待其产生大量的分生孢子后(约20d),用无菌解剖刀刮取培养基表面的分生孢子置于0.02%无菌吐温-80中,配制成2×103–2×108个/mL孢子悬浮液。
1.1.2浸渍法
挑选大小一致、健康的马铃薯块茎蛾3龄幼虫,采用浸渍法进行接种,将马铃薯块茎蛾幼虫置于孢子悬浮液中浸渍5s,取出后用灭菌滤纸吸干虫体表面多余水分。然后,将其置于加有马铃薯叶的12孔细胞培养板中,置于25℃、L//D=16h//8h光照培养箱中饲养。每天定时观察,并将死亡虫体在(25±1)℃、L//D=16h//8h条件下保湿培养,根据虫体是否长出目的菌确定各虫的死亡原因。设置3个重复,每重复20头虫。
1.1.3数据分析
采用Excel 2010进行数据整理,毒力回归方程采用DPS数据处理***14.0软件的机值分析进行计算。
2.结果
2.1金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾卵的感染致死率
由表1可知,在2.0×103–2.0×108个/mL孢子浓度下,金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾卵均表现出感染致病作用,感染致死率随着接种深度的增加而升高。在2.0×106、2.0×107、2.0×108个/mL孢子浓度下,接种后第3天时,马铃薯块茎卵的死亡率即达83.33%、96.67%和100%。由此可以看出,金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾卵具有很强的致病性。
表1金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾卵的致死率(%)
2.2金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾幼虫的感染致死率
由表2可知,在2.0×103–2.0×108个/mL孢子浓度下,金龟子绿僵菌MANGS71814侵染马铃薯块茎蛾3龄幼虫第第3天时,接种2.0×103、2.0×104、2.0×105、2.0×106、2.0×107和2.0×108个/mL孢子浓度接种后,马铃薯块茎蛾3龄幼虫的死亡率分别(83.33±0.60)%、(90.00±0.30)%、(93.33±0.68)%、(98.33±0.47)%、100%和100%。由此表明,金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾幼虫具有很强的感染致病性。
表2金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾幼虫的致死率(%)
2.3金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾蛹的感染致死率
由表3可结果可以看出,在2.0×103–2.0×108个/mL孢子浓度下,金龟子绿僵菌MANGS71814侵染马铃薯块茎蛾蛹第1天的累积死亡率,分别为(15.00±0.34)%、(28.33±1.16)%、(51.66±1.35)%、(85.00±0.77)%、100%和100%。即在2.0×107和2.0×108个/mL孢子浓度接种后,第3天时对马铃薯块茎蛾蛹的感染致死率达到100%。由此表明,金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾幼虫具有很强的感染致病性。
表3金龟子绿僵菌MANGS71814对马铃薯块茎蛾蛹的致死率(%)
综上所述,本发明提供的金龟子绿僵菌MANGS71814是一种能用于防治马铃薯块茎蛾的生防真菌,具有对马铃薯块茎蛾致病性强、环保无污染、不易产生抗药性的特点,可以广泛地用于马铃薯块茎蛾卵、幼虫和蛹的防治。
上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例,但如前所述,应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改,并能够在本申请构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围,则都应在本申请所附权利要求的保护范围内。
Claims (1)
1.一种金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)MANGS71814,于2019年08月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC No. 18121,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号;
所述金龟子绿僵菌MANGS71814的获得过程为:从采集到的罹病马铃薯块茎蛾3龄幼虫体分离获得野生金龟子绿僵菌菌株,在萨氏培养基上培养,将分生孢子转接到新的培养基上进行纯化,然后进行单孢分离获得纯化的金龟子绿僵菌MANGS71814;
所述的金龟子绿僵菌MANGS71814在马铃薯块茎蛾[Phthorimaea operculella(Zeller)]防治方面的应用:
将马铃薯块茎蛾卵置于浓度为2.0×107个孢子/mL–2.0×108个孢子/mL的金龟子绿僵菌MANGS71814孢子悬浮液中浸渍5s;
将马铃薯块茎蛾3龄幼虫置于浓度为2.0×106个孢子/mL–2.0×108个孢子/mL的金龟子绿僵菌MANGS71814孢子悬浮液中浸渍5s;
将马铃薯块茎蛾蛹置于浓度为2.0×107个孢子/mL–2.0×108个孢子/mL的金龟子绿僵菌MANGS71814孢子悬浮液中浸渍5s。
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