CN109953991B - 钩吻素子治疗淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病症的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及钩吻素子治疗淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病症的用途。

Description

钩吻素子治疗淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病 症的用途

技术领域

本发明涉及钩吻生物碱单体钩吻素子(koumine)或其药学可接受的盐的新用途，特别是涉及钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于治疗淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病症、特别是阿尔茨海默病的药物中的用途。

背景技术

“淀粉样变性”是一种特征为各种不溶性纤维状蛋白(淀粉样)在患者的组织中累积的病症。通过淀粉样蛋白的累积，之后的累积物和/或淀粉样蛋白进一步合并形成淀粉样沉积。淀粉样蛋白在活组织中的累积是多种所谓的淀粉样蛋白病(例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病以及朊病毒病)的病理学的原因或主要因素。某些类型的淀粉样变性可以主要在中枢神经***中发生，如阿尔茨海默病中的β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein，Aβ)的聚集、进行性核上性麻痹中的tau蛋白的聚集、帕金森病中的α突触核蛋白的聚集、亨廷顿病中的亨廷顿蛋白的聚集、以及克雅二氏病和其他朊病毒病中的阮病毒蛋白的聚集。β淀粉样蛋白亦称作淀粉样β肽(amyloidβ-peptide，Aβ)。其他类型的淀粉样变性本质上是全身性的，如老年性全身性淀粉样变性中的转甲状腺素蛋白的聚集。

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)亦称老年性痴呆症，是一种常见的中枢神经***退行性疾病，主要临床表现为进行性记忆力减退、认知功能障碍以及人格改变等症状。AD的主要病理特征包括：在大脑皮层和海马出现Aβ聚集形成的老年斑(senileplaques,SP)，tau蛋白异常聚集形成的神经纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)以及脑皮层和海马区神经细胞减少。微管相关蛋白tau异常学说认为tau蛋白具有合成和稳定神经元细胞的作用，老年痴呆病人中该蛋白总量显著增加，且以异常过度磷酸化形式为主。过度磷酸化的tau蛋白与tau的其它线状结构成对，最后在神经细胞体内形成神经纤维缠结。当该情况发生时，微管崩解，使神经元的转运***瓦解。这可能先导致神经元之间的生化通信交流失常，之后导致细胞死亡。Aβ毒性学说认为该病是一种淀粉样变性病，它由膜内淀粉样前体蛋白(APP)的异常水解和错误折叠所致。越来越多的证据表明Aβ在AD的发生、发展中起到主导的作用。Aβ的神经毒性涉及到复杂的分子机制主要包括破坏细胞内的Ca²⁺稳态，促进自由基的形成，降低K⁺通道的功能，增强致炎细胞因子引起的炎症反应等。目前认为Aβ的异常沉积是阿尔茨海默病主要发病机制之一。

另外，研究表明淀粉样蛋白球体(ASPD)，一种对非神经细胞和幼稚神经细胞不显示毒性而选择性地引起功能上成熟的神经细胞死亡的独特的Aβ聚集体，在阿尔茨海默病发病的不可逆性阶段中发挥着重要作用。此外，还从路易体痴呆患者的脑中检测到天然的淀粉样蛋白球体，因而考虑淀粉样蛋白球体也在路易体痴呆的发病中发挥着重要作用。

帕金森病的神经***病理改变也涉及淀粉样蛋白。例如，脂褐质、淀粉样蛋白、丝状物等沉积在神经元内和神经元周围，使其功能减退直至丧失，最终可损伤患者的近期记忆力，逐渐发展到痴呆。另外，淀粉样蛋白和一些不规则、疏松排列的神经元共同构成老年斑。编码tau蛋白基因的突变引起帕金森综合征，其病理表现为脑组织中出现大量的神经原纤维缠结。有研究认为，帕金森病的认知障碍可能与α-突触核蛋白、tau蛋白及Aβ的联合作用相关。阿尔茨海默病和帕金森病等也被称作淀粉样蛋白病(Amyloid Diseases)。

类似地，脑淀粉样血管病(CAA)患者脑部病理检查常有老年斑(SP)和神经纤维缠结(NFT)等老年变化，有时与AD难以区别。CAA是特征在于中枢神经***的血管壁中的淀粉样蛋白沉积的病症，特别是在柔脑膜和皮质动脉中。CAA主要作为老年人的分散病症发生，其发病率与年龄增长相关。这些分散性CAA病例归因于Aβ的沉积。CAA的遗传形式通常是家族性的，比分散性CAA更严重并且发病更早。最近，CAA也被认为是AD发展的潜在贡献者。

淀粉样蛋白沉积和/或tau病变还可能是多种神经退行性疾病或其他病症的特征。

钩吻素子是发现于中国钩吻(Gelsemium elegans Benth.)中的一种吲哚类生物碱，是中国钩吻总生物碱中含量最高且毒性较低的一种单体。中国专利CN 101323618B公开了从钩吻植物中提取分离钩吻素子的方法。本申请的发明人发现了钩吻素子在淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病症、特别是阿尔茨海默病中的新用途。

发明内容

在本发明的一方面，提供钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于治疗有此需要的个体的淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病症的药物中的用途。

在本发明的另一方面，提供钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于减少有此需要的个体中的淀粉样蛋白、例如抑制或减少淀粉样蛋白的产生和/或沉积的药物中的用途。

在本发明的又一方面，提供钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于抑制或减少有此需要的个体中的神经纤维缠结的药物中的用途。

在本发明的又一方面，提供钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于治疗或减轻有此需要的个体中的认知功能障碍的药物中的用途。

附图简要说明

图1显示钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠学习获取能力的影响。图中横坐标表示时间(天)，纵坐标表示逃避潜伏期(秒)；Ctrl：对照组；OA：冈田酸；KMH：钩吻素子盐酸盐。^###P＜0.001，与对照组比较；^*P＜0.05，^***P＜0.001，与模型组比较。

图2显示钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠空间记忆能力的影响。图中纵坐标表示穿越原平台所在位置区域的次数；Ctrl：对照组；OA：冈田酸；KMH：钩吻素子盐酸盐。^###P＜0.001，与对照组比较；^*P＜0.05，^***P＜0.001，与模型组比较。

图3显示钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠海马组织病理变化的影响。Ctrl：对照组；OA：冈田酸；KMH：钩吻素子盐酸盐；CA：海马角；DG：齿状回。

具体实施方式

现在详细地参照本发明的代表性实施方案描述本发明。这些实施方案仅仅是例示性的，不应理解为以任何方式限制本发明的范围。相反地，本发明意图涵盖权利要求书所限定的在本发明范围内的所有替代、修改和等同。

除非另外指明，本文所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解相同的含义。

本文中所用术语“钩吻素子”具有以下结构式，分子式为C₂₀H₂₂N₂O，其是得自钩吻的生物碱单体，也可以通过合成得到：

如本文所用的，钩吻素子的药学可接受的盐包括钩吻素子与有机酸或无机酸形成的盐。示例性的药学可接受的盐包括、但不限于：盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐。优选地，所述药学可接受的盐是钩吻素子盐酸盐。

本文所用的“药学上可接受”表示化合物、组合物或载体适于向个体给药以实现本文所述的用途或方法而没有不当的有害副作用。

本申请的发明人通过药理学实验发现，钩吻素子能剂量依赖性降低阿尔茨海默病认知障碍等临床主要症状，明显地抑制、逆转老年斑和神经纤维缠结等主要特征性病理改变。

因此，在一些实施方案中，本发明提供钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于治疗有此需要的个体的淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病症的药物中的用途。

在另一些实施方案中，本发明提供治疗有此需要的个体的淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病症的方法，所述方法包括向所述个体给药治疗有效量的钩吻素子或包含治疗有效量的钩吻素子的药物。

术语“个体”是指哺乳动物，包括但不限于灵长类动物(如人、猴、黑猩猩、大猩猩等)、啮齿动物(如大鼠、小鼠、沙鼠、仓鼠、白鼬和类似啮齿动物)、兔形目动物、猪科动物(如猪、小型猪)、马科动物、犬科动物、猫科动物等，优选为人。

术语“治疗”是指疾病的完全或部分治愈，包括但不限于选自下列中的一种、或者两种或更多种的组合：减轻或消除引起疾病或病症的病因；改善或消除其病理学改变；减轻或消除其一种或多种症状；延缓或停滞其进展；减轻其严重性；降低其发病率；减少其复发；以及改善其预后。

“淀粉样蛋白沉积相关性疾病或病症”是与淀粉样蛋白沉积相关的疾病或病症，其可以发生在中枢神经***(CNS)，也可以发生在CNS以外。在一些实施方案中，所述淀粉样蛋白选自β淀粉样蛋白、胰岛淀粉样多肽、淀粉样A蛋白、血清淀粉样蛋白A、α-突触核蛋白、Sc型朊病毒蛋白(PrP^Sc)、亨廷顿蛋白、降钙素、心钠素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2-微球蛋白、钙结合微丝蛋白、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和淀粉样轻链蛋白(AL)，优选的是β淀粉样蛋白。在一些实施方案中，所述淀粉样蛋白沉积涉及β淀粉样蛋白、胰岛淀粉样多肽、淀粉样A蛋白、血清淀粉样蛋白A、α-突触核蛋白、Sc型朊病毒蛋白(PrP^Sc)、亨廷顿蛋白、降钙素、心钠素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2-微球蛋白、钙结合微丝蛋白、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或淀粉样轻链蛋白(AL)，优选β淀粉样蛋白。所述淀粉样蛋白沉积相关性疾病或病症可包括但不限于：阿尔茨海默病，包括早发性阿尔茨海默病、迟发性阿尔茨海默病和症状前阿尔茨海默病；帕金森病，包括脑炎后帕金森病；亨廷顿病；多发性骨髓瘤；淀粉样多神经病；***性神经炎淀粉样变、淀粉样心肌病；全身性老年性淀粉样变性；遗传性脑出血伴淀粉样变性；唐氏综合症；羊搔痒症；甲状腺髓样癌；孤立性心房淀粉样变性；透析患者β2-微球蛋白淀粉样变；包涵体肌炎；朊病毒病，包括库鲁病、克雅二氏病、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克综合征(Gertsmann-Straussler-Scheinkersyndrome)、致死性家族性失眠症；肌肉萎缩病中的β2-淀粉样蛋白沉积；II型糖尿病；糖尿病认知功能障碍；家族性地中海热；穆-韦二氏综合征；分离的心脏淀粉样变性；胰岛淀粉样多肽(胰岛淀粉样变性)；胰岛素瘤；家族性淀粉样变性；家族性淀粉样多发性神经病变；家族性淀粉样肾病伴荨麻疹；家族性淀粉样变心肌病；路易体痴呆；纤维蛋白原相关淀粉样变性；牛海绵状脑炎；进行性核上性麻痹；额颞叶痴呆(FTD)；额颞叶退化症(FTLD)；英国/丹麦痴呆；SAA淀粉样变性；肌萎缩性侧索硬化症(ALS)；脊髓小脑性共济失调(SCA1、SCA3、SCA6或SCA7)；齿状核红核苍白球丘脑下部核萎缩症；脊髓延髓肌肉萎缩症；淀粉样脑血管病，包括遗传性淀粉样脑血管病；脱髓鞘病；甲状腺功能减退导致的痴呆；中毒性痴呆，包括急性和慢性酒精中毒；正常颅压脑积水；脑外伤性痴呆；艾滋病痴呆综合征；以及麻痹性痴呆。

“tau病变相关性疾病或病症”是涉及tau蛋白病变的神经退行性疾病。在优选的实施方案中，所述tau蛋白病变是神经纤维缠结。所述tau病变相关性疾病或病症包括但不限于：阿尔茨海默病；血管性痴呆；肌萎缩性侧索硬化症；帕金森病性痴呆；嗜银颗粒性痴呆；皮质基底核退化症；克雅二氏病；拳击手痴呆；弥漫性神经原纤维缠结伴随钙化；唐氏综合征；额颞叶痴呆，包括额颞叶痴呆伴随第17号染色体相关的帕金森病；杰茨曼-斯脱司勒-史茵克综合征；哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatz disease)；肌强直性营养不良；C型尼曼皮克病(Niemann-Pick disease type C)；非关岛型运动神经元病伴随神经原纤维缠结；皮克氏病(Pick's disease)；脑炎后帕金森病；朊病毒大脑淀粉样蛋白血管病变；进行性皮质下胶质增生；进行性核上性麻痹；亚急性硬化性全脑炎；神经缠结型痴呆；糖尿病认知功能障碍；中毒性痴呆，包括急性和慢性酒精中毒；以及肝豆状核变性。一些所述疾病还包括Aβ沉积。例如，阿尔茨海默病、血管性痴呆、糖尿病认知功能障碍、酒精中毒、肝豆状核变性同时发生Aβ沉积与tau病变。同样地，朊病毒介导的疾病如克雅二氏病、朊病毒大脑淀粉样蛋白血管病变和杰茨曼-斯脱司勒-史茵克综合征以及正常颅压脑积水、脑外伤性痴呆、艾滋病痴呆综合征和麻痹性痴呆还具有tau病变。

优选地，所述淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病症选自：阿尔茨海默病，血管性痴呆，帕金森病，亨廷顿病，唐氏综合症，路易体痴呆，进行性核上性麻痹，额颞叶痴呆，帕金森病性痴呆，淀粉样脑血管病，神经缠结型痴呆，克雅二氏病，及其组合。特别优选地，所述疾病或病症是阿尔兹海默病。

在一些实施方案中，本发明提供钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于减少有此需要的个体中的淀粉样蛋白、例如抑制或减少淀粉样蛋白的产生和/或沉积的药物中的用途。在一些实施方案中，所述淀粉样蛋白选自β淀粉样蛋白、胰岛淀粉样多肽、淀粉样A蛋白、血清淀粉样蛋白A、α-突触核蛋白、Sc型朊病毒蛋白(PrP^Sc)、亨廷顿蛋白、降钙素、心钠素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2-微球蛋白、钙结合微丝蛋白、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和淀粉样轻链蛋白(AL)，优选的是β淀粉样蛋白。在一些实施方案中，所述淀粉样蛋白沉积涉及β淀粉样蛋白、胰岛淀粉样多肽、淀粉样A蛋白、血清淀粉样蛋白A、α-突触核蛋白、Sc型朊病毒蛋白(PrP^Sc)、亨廷顿蛋白、降钙素、心钠素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2-微球蛋白、钙结合微丝蛋白、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或淀粉样轻链蛋白(AL)，优选β淀粉样蛋白。

在另一些实施方案中，本发明提供钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于抑制或减少有此需要的个体中的神经纤维缠结的药物中的用途。

在一些实施方案中，本发明提供减少有此需要的个体中的淀粉样蛋白、例如抑制或减少淀粉样蛋白的产生和/或沉积的方法，所述方法包括向所述个体给药治疗有效量的钩吻素子或其药学可接受的盐、或者治疗有效量的包含钩吻素子或其药学可接受的盐的药物。

在另一些实施方案中，本发明提供用于抑制或减少有此需要的个体中的神经纤维缠结的方法，所述方法包括向所述个体给药治疗有效量的钩吻素子或其药学可接受的盐、或者治疗有效量的包含钩吻素子或其药学可接受的盐的药物。

在一些实施方案中，本发明提供钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于治疗或减轻有此需要的个体中的认知功能障碍的药物中的用途。

在另一些实施方案中，本发明提供用于治疗或减轻有此需要的个体中的认知功能障碍的方法，所述方法包括向所述个体给药治疗有效量的钩吻素子或其药学可接受的盐、或者治疗有效量的包含钩吻素子或其药学可接受的盐的药物。

认知功能是涉及神经学或符号运算的心理或智力过程，包括但不限于沟通、洞察、理解、推理、学习、记忆、思考、意识、集中、注意、警觉、动机、做出结论、执行功能、建立意象以及判断能力。在动物模型体系中，可通过本领域已知的多种常规方式来测量认知功能，包括使用Morris水迷宫、Barnes圆形迷宫、高架放射臂迷宫或T形迷宫。本领域已知的其他试验也可用于评价认知功能，例如新物体识别和气味识别任务。在优选的实施方案中，所述认知功能障碍选自：学习障碍、记忆障碍、记忆障碍、定向障碍、语言功能障碍、视空间功能障碍、人格异常、情感障碍、认识功能降低和痴呆。认知功能障碍是上述认知功能的缺陷或异常，包括学习和记忆障碍。在一些实施方案中，所述认知功能障碍是在选自下列的疾病或病症中的认知功能障碍：

阿尔茨海默病，包括早发性阿尔茨海默病、迟发性阿尔茨海默病和症状前阿尔茨海默病；帕金森病，包括脑炎后帕金森病；亨廷顿病；遗传性脑出血伴淀粉样变性；唐氏综合症；朊病毒病，包括库鲁病、克雅二氏病、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克综合征、致死性家族性失眠症；糖尿病认知功能障碍；家族性淀粉样多发性神经病变；牛海绵状脑炎；进行性核上性麻痹；血管性痴呆，包括脑缺血性痴呆、脑出血性痴呆和低灌流性痴呆，例如多梗塞性痴呆、腔隙状态和Binswanger病；路易体痴呆；额颞叶痴呆；额颞叶退化症；英国/丹麦痴呆；脊髓小脑性共济失调(SCA1、SCA3、SCA6或SCA7)；齿状核红核苍白球丘脑下部核萎缩症；淀粉样脑血管病，包括遗传性淀粉样脑血管病；帕金森病性痴呆；嗜银颗粒性痴呆；皮质基底核退化症；拳击手痴呆；弥漫性神经原纤维缠结伴随钙化；哈勒沃登-施帕茨病；C型尼曼皮克病；皮克氏病；朊病毒大脑淀粉样蛋白血管病变；进行性皮质下胶质增生；亚急性硬化性脑炎；神经缠结型痴呆；正常颅压脑积水；脑外伤性痴呆；脱髓鞘病；甲状腺功能减退导致的痴呆；维生素缺乏导致的痴呆；中毒性痴呆，包括急性或慢性酒精中毒；感染性疾病所致的痴呆，包括艾滋病痴呆综合征和麻痹性痴呆；肝豆状核变性；卒中；副肿瘤综合征；线粒体脑肌病；脊髓小脑变性；原发性基底节钙化；抑郁和其他精神疾病所致的痴呆；多发性硬化；HIV脑病；脑脓肿；中毒和代谢性脑病，包括***脑病、肝性脑病和***性脑病；肌萎缩侧索硬化痴呆症；苍白球黑质色素变性；神经梅毒；神经钩端螺旋体病；莱姆病；病毒性脑炎；真菌和细菌性脑膜炎/脑炎后；进行性多灶性白质脑病；及其组合。

所述药物包含作为唯一活性成分的所述钩吻素子或其药学可接受的盐，或者所述钩吻素子或其药学可接受的盐与一种或多种其他活性成分的组合，以及任选存在的药学可接受的载体。在一些实施方案中，所述药物仅包含钩吻素子作为活性成分。在另一些实施方案中，所述药物包含钩吻素子和一种或多种其他活性成分；在这样的实施方案中，钩吻素子或其药学可接受的盐和一种或多种其他活性成分可以分开配制从而分别包含在多个单独的组合物中，或者一起配制成包含它们的单一组合物。

在本发明的方法的一些实施方案中，钩吻素子或其药学可接受的盐作为唯一活性成分，或者与一种或多种其他活性成分组合在一起，给药于所述个体。在组合治疗的情况下，钩吻素子或其药学可接受的盐与一种或多种其他活性成分可以同时或依次给药于所述个体。组合给药包括使用分别包含钩吻素子或其药学可接受的盐和一种或多种其他活性成分的分开的组合物，或者包含上述活性成分的单一组合物，同时地或以任意顺序相继地给药。

所述一种或多种其理活性成分是本领域已知的对于上述疾病或病症具有治疗效力的一种或多种化学治疗剂、生物治疗剂或其组合。通过与钩吻素子组合使用，可以实现包括但不限于下列效果：联合治疗以提高每种药物组分所带来的整体疗效；降低其他药理活性组分的剂量以避免副作用；以及保持治疗效力。

所述一种或多种其他活性成分可以选自：胆碱酯酶抑制剂；***素；他汀类药剂；β分泌酶抑制剂；γ分泌酶抑制剂；Aβ聚集抑制剂；Aβ-肽特异性抗体；选择性***受体分子；抗高血压药剂；抗炎剂；抗氧化剂；及其组合。

胆碱酯酶抑制剂包括但不限于盐酸他克林、多奈哌齐、利斯的明或加兰他敏。

***素可以是外源性***素和内源性***素。内源性***素例如可以是花生四烯酸乙醇胺、四氢***酚、2-花生四烯酸甘油、2-花生四烯酸甘油醚、N-花生四烯酸-多巴胺或Virodhamine。

他汀类药剂可以是例如阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀。

β分泌酶可以对APP分子N端的第一个氨基酸进行剪切，是产生Aβ的限速酶。β分泌酶抑制剂包括例如CTS-21166、NB-53、KMI-429和GSK188909、GRL-8234、TAK-070和罗格列酮。

γ分泌酶执行Aβ产生的最后一步剪切，决定Aβ的长度，对调节Aβ40和Aβ42的比例起着关键作用。司马西特(Semagacestat)(LY-450139)是一种γ分泌酶抑制剂。另一些γ分泌酶抑制剂是BMS-708163、R-氟比洛芬(Tarenflurbil)和NIC 5-15(惠曼公司(Humanetics))。

Aβ聚集抑制剂的实例包括高牛磺酸(3-氨基-1-丙磺酸、Tramiprosate或NC-531)、鲨肌醇(Scyllo-inositol或ELN D005)，和金属离子螯合剂，包括Cu²⁺、Zn²⁺或Fe³⁺螯合剂，例如氯碘羟喹和PBT2。

Aβ-肽特异性抗体的示例包括：巴品珠单抗(bapineuzumab)(伊兰公司(Elan)/强生公司)、索拉珠单抗(solanezumab)(LY2062430)(礼来公司)、γ球蛋白IV(Baxter)和PF-4360365(辉瑞公司)。

选择性***受体分子(SERM)可以是例如雷洛昔芬。

抗高血压药剂包括α-阻滞剂、β-阻滞剂、α,β阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂(如缬沙坦)、钙通道阻滞剂和利尿剂。

可用于本发明的抗炎剂包括但不限于：

肥大细胞稳定剂，如色甘酸、色甘酸衍生物、色甘酸类似物、丁香酚、奈多罗米、哌罗来斯、奥洛他定、草莓素G1、草霉素B1、草莓素M1、脱氧瓜萎镰菌醇(deoxynivalenol)、玉米赤霉烯酮、赭曲毒素A、伏马菌素B1、水解伏马菌素B1、展青霉素和麦角胺；

甾体类抗炎剂，如***；

非甾体类抗炎剂(NSAID)，如乙酰水杨酸、二氟尼柳、双水杨酯、布洛芬、右布洛芬、萘普生、非诺洛芬、吲哚洛芬、右酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦、氯索洛芬、吲哚美辛、托美汀、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、双氯芬酸、萘丁美酮、吡罗昔康、美洛昔康、替诺昔康、屈噁昔康、氯诺昔康、伊索昔康、甲芬那酸、甲氯灭酸、氟灭酸、氟芬那酸、塞来考昔、利克飞龙(licofelone)和贯叶金丝桃素；

抗氧化剂，如维生素E或司立吉林也可改善个体的认知功能、情绪和/或社交行为。可用于本发明的其他抗氧化剂包括：大蒜提取物，姜黄素，褪黑素，白藜芦醇，银杏提取物，绿茶提取物，维生素C等。

所述药物还任选地包含药学可接受的载体，例如赋形剂、崩解剂、稀释剂、粘合剂、助流剂、润滑剂、pH调节剂、防腐剂、分散剂、助悬剂、软膏基质、乳化剂、润肤剂、促渗剂、表面活性剂、抛射剂、调味剂、甜味剂、药物释放调节剂，等等。本领域技术人员可以根据所述药物的期望的制剂形式、给药方式和药物释放特征等选择合适的载体。

所述药物可以配制成适于通过本领域可用的任何公认的给药方式给药的固体、半固体或者液体形式的剂型，包括但不限于：(1)适于口服给药的：例如片剂、胶囊、散剂、颗粒、含片、含水或无水溶液或混悬剂、糖浆，等等；(2)适于肠胃外给药的：例如皮下、肌肉或者静脉注射，比如无菌溶液剂或混悬剂；(3)适于局部给药的：例如用于皮肤或者粘膜的硬膏剂、软膏剂、乳膏剂、喷雾剂或凝胶剂等；(4)适于经皮给药的：例如贴剂、凝胶膏剂等；(5)适于经***或直肠给药的：例如栓剂、乳剂、凝胶剂或者泡腾片等。

如本文中所使用，术语“治疗有效量”指被给药后会实现所述用途或方法所期望的治疗效力的活性成分的量。

在本文所述的用途或方法中，所述钩吻素子或其药学可接受的盐和/或所述一种或多种其他活性成分的剂量一般取决于多种因素，包括所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率及处方医师的判断。一般而言，有效剂量在每日每kg体重约0.0001至约50mg，例如约0.0005至约25mg/kg/日或约0.001至约5mg/kg/日(单次或分次给药)。对70kg的人而言，这会合计为约0.007mg/日至约3500mg/日，例如约0.035mg/日至约1750mg/日或约0.07mg/日至约350mg/日。在一些情况下，不高于前述范围的下限的剂量水平可以是足够的，而在其他情况下，仍可在不引起任何有害副作用的情况下采用较大剂量，必要时，可以将所述较大剂量分成数个较小剂量以在一整天中给药。

所述钩吻素子或其药学可接受的盐和/或所述一种或多种其他活性成分在所述药物中的含量或在所述方法中的用量可以是约0.001mg至约500mg，例如约0.01-200mg、约0.1-20mg或约0.5-10mg，优选约0.1-20mg，例如约0.1mg、0.5mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、8mg、10mg、12mg、15mg或约20mg等。

下面通过实施例更详细地说明本发明，但这些实施例并不对本发明构成任何限制，本发明的范围仅由权利要求书定义。

实施例

实施例1：

冈田酸(okadaic acid，OA)诱导的阿尔茨海默病模型，可模拟阿尔茨海默病主要临床表现——认知功能障碍和主要病理特征——老年斑和神经纤维缠结，因而是适合筛选阿尔茨海默病治疗药物的模型。本实施例在大鼠阿尔茨海默病模型上，以学习记忆能力(学习获取能力和空间记忆能力)和海马组织病理改变为指标，研究钩吻素子对阿尔茨海默病的治疗作用。

1.材料

1.1动物

健康雄性Sprague-Dawley大鼠，清洁级，体质量160-180g，购自福建医科大学实验动物中心[许可证号：SCXK(闽)2012-0001]。实验前适应性饲养5天，体质量达200-220g开始实验，光暗周期12/12h(光照时间8∶00-20∶00)、恒温(23±2℃)、恒湿度(50±5％)环境饲养，自由饮水饮食。实验操作遵循国际和本地实验动物使用和保护委员会颁布的条例。

1.2药品和试剂

钩吻素子盐酸盐(koumine hydrochloride,KMH)由申请人自闽产野生钩吻植物中提取纯化获得，实验室批号201503(高效液相测定纯度99.9％)。冈田酸购自美国sigma公司。

1.3实验仪器

数显型脑立体定位仪、KDS310型微量注射泵、78001微型手持式颅骨钻、微量进样器(1μl平头)、R510-25型麻醉机空气泵、68623型定位仪用麻醉面罩-大鼠、V101型麻醉诱导盒-大鼠，购自深圳市瑞沃德生命科技有限公司。RD1101型Morris水迷宫，购自上海移数信息科技有限公司。小动物麻醉机，购自美国MIDMARK公司。TP1020型半自动脱水机、EG1150型全自动石蜡包埋机、RM2235型全自动石蜡包埋机，购自Leica公司。80i型生物显微镜，购自Nicon公司。

2.方法

清洁级雄性Sprague Dawley大鼠经5天适应性饲养后，经一天四轮的Morris水迷宫初筛，把漂浮、不怎么游动的大鼠及四次逃避潜伏期的平均值过短或过长的大鼠剔除。行侧脑室导管埋置术(手术当天记为第1天)，术后连续3天腹腔注射青霉素钠抗感染。大鼠随机分为对照组、模型组、钩吻素子高、中、低剂量处理组。侧脑室导管埋置术后第3天，向模型组及钩吻素子处理组大鼠的侧脑室注射0.4mM的OA，每次1μl，每2天注射1次，共4次，以建立大鼠阿尔茨海默病模型；对照组注射等体积溶媒。末次侧脑室注射OA后的次日，钩吻素子处理组分别灌胃给予0.056、0.28或1.4mg/kg钩吻素子盐酸盐溶液，1天1次，连续10天；其他组别灌胃给予等体积溶媒。

观测指标：

(1)钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠的学习记忆障碍的影响

①钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠的学习获取能力的影响

侧脑室末次注射2周后，以Morris法检测大鼠的定向航行能力。实验前一天将大鼠放入不含平台的水槽中90s，使其适应迷宫环境及游泳。实验共5天，前4天进行定位航行试验：为了测试大鼠学***台所需时间，即逃避潜伏期。若大鼠在90s内不能找到平台，则由实验者用棒引导其上平台并停留10s，再放回笼中，逃避潜伏期记为90s。每次测试完成后，迅速用烘干器将大鼠烘干。每只大鼠每天训练四次，即从四个不同入水点入水进行训练各一次，取其平均值为大鼠的每天逃避潜伏期。

②钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠空间记忆能力的影响

以Morris法检测大鼠的空间探索能力。Morris实验第5天进行空间探索试验：为了测试大鼠学***台，将大鼠从最远端入水点面向池壁放入水池，记录120s内穿越原平台所在位置区域的次数。

(2)钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠海马组织病理变化的影响

上述行为学实验结束后，取对照组、模型组和钩吻素子中剂量处理组大鼠的海马，以Bielschowsky染色法行组织化学染色，在显微镜下观察各组大鼠海马组织病理变化情况。

3.结果

3.1钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠学习记忆障碍的作用

①钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠学习获取能力的作用

定向航行实验的结果见图1。造模前各组大鼠的平均逃避潜伏期无显著性差别。造模后，模型组大鼠的逃避潜伏期较稳定地维持在较高水平，对照组从训练第1天开始呈进行性降低；钩吻素子处理组大鼠的逃避潜伏期亦呈进行性下降，水平介于模型组和对照组之间，其中钩吻素子中剂量组(0.28mg/kg)的效果较显著，表明钩吻素子对阿尔茨海默病的学习获取能力低下的症状具有改善作用。

②钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠空间记忆能力的作用

空间探索实验的结果见图2。对照组大鼠穿越原平台的次数最多，模型组显著少于对照组，钩吻素子处理组介于对照组和模型组之间，其中钩吻素子中剂量组的疗效最明显，表明钩吻素子对阿尔茨海默病的空间记忆能力低下的症状具有改善作用。

空间探索实验的结果与定向航行实验的结果相符合，提示钩吻素子具有改善阿尔茨海默病的学习记忆障碍的作用。

3.2钩吻素子对阿尔茨海默病样大鼠海马组织病理变化的影响

行为学实验结束后，取对照组、模型组和钩吻素子中剂量处理组大鼠的海马，以Bielschowsky染色法观察各组大鼠海马组织病理变化。海马CA1、CA2、CA3区和DG病理结果见图3。经400倍放大观察，发现对照组大鼠海马各区染色很浅，未见老年斑和神经纤维缠结现象。模型组大鼠海马各区锥体神经元都出现明显的颜色深染，特别是CA1区和DG，细胞内出现神经纤维缠结；CA3区细胞外可见老年斑。钩吻素子处理组大鼠中上述病变减轻，各区胞内神经纤维缠结及CA3区细胞胞外老年斑明显减少。上述结果提示，钩吻素子处理组对阿尔茨海默病的典型病理变化老年斑和神经纤维缠结的形成有明显的抑制作用。

综上，钩吻素子对阿尔茨海默病的主要临床症状学习记忆障碍和特征性病理变化具有改善作用，表明钩吻素子具有治疗阿尔茨海默病的作用。

在本申请中引用的所有出版物和专利申请指明了本公开内容所属领域的技术水平。它们都通过援引以其整体加入本文。

根据以上描述，本领域技术人员可确定本发明的必要特征，并可在不背离本发明精神和范围下对本发明进行各种变化和修改以使其适于各种用途和条件。所有这样的修改和修改也包括在本发明的范围中。因此，本发明的范围应当由所附的权利要求和它们的法律等同方案来确定。

Claims (17)

1.具有以下结构的钩吻素子或其药学可接受的盐在制备用于治疗有此需要的个体的阿尔茨海默病的药物中的用途：

2.根据权利要求1的用途，其中所述阿尔茨海默病选自早发性阿尔茨海默病、迟发性阿尔茨海默病和症状前阿尔茨海默病。

3.根据权利要求1的用途，其中所述药物减少所述个体中的β淀粉样蛋白。

4.根据权利要求1的用途，其中所述药物抑制或减少β淀粉样蛋白的产生和/或沉积。

5.根据权利要求1的用途，其中所述药物抑制或减少所述个体中的神经纤维缠结。

6.根据权利要求1的用途，其中所述药物治疗或减轻所述个体的认知功能障碍。

7.根据权利要求6的用途，其中所述认知功能障碍选自学习障碍和记忆障碍、定向障碍、认知功能降低和痴呆。

8.根据权利要求1至7中任一项的用途，其中所述药物包含作为唯一活性成分的所述钩吻素子或其药学可接受的盐、或者所述钩吻素子或其药学可接受的盐与一种或多种其他活性成分的组合，以及任选存在的药学可接受的载体。

9.根据权利要求8的用途，其中所述药学可接受的盐选自盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐。

10.根据权利要求9的用途，其中所述药学可接受的盐是盐酸盐。

11.根据权利要求8的用途，其中所述其他活性成分选自：胆碱酯酶抑制剂；他汀类药剂；β分泌酶抑制剂；γ分泌酶抑制剂；Aβ聚集抑制剂；Aβ-肽特异性抗体；选择性***受体分子；抗高血压药剂；抗炎剂；抗氧化剂；及其组合。

12.根据权利要求11的用途，其中所述其他活性成分选自：α-阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、利尿剂、甾体抗炎剂和非甾体抗炎剂。

13.根据权利要求11的用途，其中所述其他活性成分选自：

盐酸他克林、多奈哌齐、利斯的明和加兰他敏；***、乙酰水杨酸、二氟尼柳、双水杨酯、布洛芬、右布洛芬、萘普生、非诺洛芬、右酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦、氯索洛芬、吲哚美辛、托美汀、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、双氯芬酸、萘丁美酮、吡罗昔康、美洛昔康、替诺昔康、氯诺昔康、伊索昔康、甲芬那酸、甲氯灭酸、氟芬那酸、塞来考昔、贯叶金丝桃素；阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀；CTS-21166、GRL-8234、TAK-070和罗格列酮；NIC 5-15；金属离子螯合剂；巴品珠单抗、索拉珠单抗；雷洛昔芬；缬沙坦；大蒜提取物，姜黄素，褪黑素，白藜芦醇，银杏提取物，绿茶提取物，维生素C，维生素E，司立吉林；及其任意组合。

14.根据权利要求13的用途，其中所述金属离子螯合剂为Cu²⁺、Zn²⁺或Fe³⁺螯合剂。

15.根据权利要求13的用途，其中所述金属离子螯合剂为氯碘羟喹或PBT2。

16.根据权利要求1至7中任一项的用途，其中所述个体是哺乳动物。

17.根据权利要求1至7中任一项的用途，其中所述个体是人。

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