CN109929777A - 一种盐单胞菌株h6、组合物及其在耐盐促生中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是通过分离筛选获得一株盐单胞菌（Halomonas sp.）新菌种，该菌种具有分泌吲哚乙酸、产ACC脱氨酶等能力。能够在低温或高温、盐碱条件下良好生长。利用该菌种的组合物及利用液体发酵技术制备的微生物菌肥，缓解盐对作物造成的盐碱胁迫，促进作物在盐胁迫下的生长。本发明提供的新菌种或者组合物在适宜于特殊地理气候条件并改善土壤理化性质和供肥能力、有效利用环境资源及减少农药污染等作用，且具有效果好、周期短、环境兼容性好的特点，对于解决目前土壤盐渍化具有重要的实用价值。

Description

一种盐单胞菌株H6、组合物及其在耐盐促生中的应用

技术领域：

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种具有耐盐促生作用 的盐单胞菌新菌株、组合物，及其在提高农作物盐胁迫耐受性并促进 作物苗期生长方面的应用。

背景技术：

土壤盐渍化以及因灌溉引起的土壤次生盐渍化问题是一个重要 的生态环境问题，通常出现在气候干旱、土壤蒸发强度大、地下水位 高且含有较多可溶性盐类的地区。土壤盐渍化问题现已成为影响干旱、 半干旱地区农业、畜牧业和经济可持续发展、威胁生态安全和稳定的 重要因素。

土壤盐渍化是由自然或人类活动引起的一种主要的环境风险。根 据***教科文组织和粮农组织不完全统计，全世界盐碱地的面积为 9.5亿hm²。我国盐渍土的分布范围广、面积大、类型多，总面积约1 亿hm²，其中现代盐渍土约占37％，残积盐渍土约占45％，潜在盐渍 土约占18％，主要发生在干旱、半干旱和半湿润地区。盐渍土对植物 生长的危害主要表现在植物的盐害和植物的抗盐性方面。土壤中盐分 过多，可导致植物根部细胞对土壤内水分吸收比较困难，甚至出现脱 水情况，同时也使植物产生单盐毒害作用，造成正常生理代谢的破坏。 植物发生盐害后，轻则生长发育受到影响，重则导致植物死亡。

新疆是我国最大的绿洲农耕区，近年来随着农业用地开发强度加 大，水资源不合理利用等因素使土壤盐渍化和土壤退化问题逐渐显现。 它们都具有盐渍化和荒漠化并存、积盐和表聚性较强烈以及土壤盐成 分复杂等特点，从而带来一系列生态环境问题并制约着农业生产和社 会经济发展。新疆盐渍化土壤主要是利用节水灌溉和物理、化学、生 物等一系列措施进行综合治理改良。经过多年的改良，新疆盐碱地虽 然有不同程度的改善，但随着大规模节水灌溉的实施，土壤盐渍化发 展又呈现出新的问题和规律，例如膜下滴灌条件下的积盐问题、干涸 盆地内陆盐分出路问题等，且对资金投入和技术要求都很高，对大面 积盐碱地的修复实施起来比较困难。同时盲目开荒、土地不平整、种 植作物单一等造成的土壤用养失调、有机肥施用量减少导致的作物抗 盐性能降低等问题也日益严重。而作为盐渍化土地恢复的最经济有效 措施，采用耐盐碱植物品种以及采用生物制剂以提高植物耐盐碱特性， 从而克服盐碱对植物胁迫作用的生物改良技术，是新疆可大力开发和 利用的技术之一。

但如何提高农作物的耐盐碱性、抗盐碱性已成为科研工作者面临 的重大课题。无论从改良土壤的角度，还是提高作物耐盐碱性的角度， 促进植物在盐生环境的生长都是解决问题的关键。植物根际促生菌 (Plantgrowth-promoting rhizobacteria，PGPR)是植物根际土壤中一 类可以促进植物生长、防治病害、增加作物产量的微生物。应用PGPR 将有助于减轻盐分对植物的不良影响，促进土壤有机质分解、养分循 环和植物养分的利用，进而提高植物生物量或产量，目前已成为一种 环境友好、经济有效的促进植物在盐渍化土壤中生长的发展策略。研 究表明，根际促生菌通过非共生固氮、溶解无机磷酸盐和提高养分的吸收、产生植物激素等几种不同机制促进盐生土壤中植物生长，增加 作物产量，通过提高植物渗透调节物质的积累、增加K⁺浓度和维持高 K⁺/Na⁺比等减轻盐胁迫对作物的影响，根际细菌产生ACC脱氨酶、诱 导***抗性、诱导***耐受和对植物病原微生物的控制也有助于植物 缓解盐胁迫。

虽然国内外已发现大量植物促生菌资源，但在微生物防治产业中， 筛选促进植物在干旱、盐分胁迫条件下生长的PGPR菌株、并将菌株 真正应用到大田的研究与开发已势在必行。由于新疆地区环境干旱， 盐碱多样，存在相关微生物适应性差、效果不佳的问题。因此，筛选 并开发适宜于新疆特殊地理气候条件并对植物有良好缓解盐胁迫、促 进作物生长、改善土壤理化性质和供肥能力、有效利用环境资源及减 少农药污染等作用，且具有效果好、周期短、环境兼容性好的微生物 新菌种，对于解决目前土壤盐渍化具有重要的实用价值。

发明内容：

本发明的目的是通过分离筛选获得一株盐单胞菌(Halomonas sp.) 新菌种，该菌种具有分泌吲哚乙酸、产ACC脱氨酶等能力，利用该 菌种的组合物及利用液体发酵技术制备的微生物菌肥，能明显提高植 物的耐盐特性，并可促进作物生长。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的技术方案：通过从新疆和硕地区盐生植物根际分离筛选 获得一株盐单胞菌新菌种(Halomonas sp.)H6，利用液体发酵技术 制备了耐盐促生微生物菌肥，获得良好的效果。本发明综合解决了微 生物菌肥在盐碱地的适应性及促生的效果，同时制作简单，方便实用。

具体的，本发明提供了一株分离自新疆和硕地区盐生植物根际的 新菌种盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758。该菌株具 有耐盐促生和分泌吲哚乙酸和产ACC脱氨酶等能力，可应用于提高 植物盐碱抗性和促进生长，具有被开发为生物肥料的良好应用前景。

本发明所提供的新菌种盐单胞菌(Halomonas sp.)H6 CGMCC No.15758，从新疆和硕县盐碱荒漠地区植物根际分离、筛选、驯化 获得，菌种编号为H6，经微生物分类学检测鉴定，确定为细菌盐单 胞菌(Halomonas sp.)属的潜在新种。目前，该菌株已于申请日前 保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西 路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏日 期为2018年05月14日，保藏号为CGMCC No.15758。

本发明具体提供的新菌种耐盐促生菌盐单胞菌(Halomonas sp.) H6CGMCCNo.15758为革兰氏染色阳性，杆状，0.3-0.8×1.4-2.5μm， 不形成内孢子。生长在含有2％NaCl的TSA培养基上培养3-5d后， 菌落为圆形、边缘整齐、略微凸起的淡黄色菌落。菌体生长温度范围 在10-45℃，最适温度生长是28℃；pH生长范围5.0-10，最佳pH值 为7.0，可耐受1-20％的NaCl。

以新菌种盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758菌株 的基因组总DNA为模板扩增其16S rDNA序列，进行测序，获取长 度为1431bp的16S rDNA序列，见序列表，其与GenBank数据库收 录的相关菌株进行同源性比对分析，确定该菌隶属Halomonas菌属， 与该属标准模式菌Halomonas titanicae BH1^T与Halomonas neptunia Eplume1^T同源性分别为98.6％和98.3％，目前尚未对该菌株进行正式 的微生物分类学命名，暂定菌株名称为盐单胞菌(Halomonas sp.) H6。

同时，本发明提供利用上述的盐单胞菌(Halomonas sp.)H6菌 株的培养物。

本发明进一步提供利用上述的盐单胞菌(Halomonas sp.)H6菌 株培养物的组合物，所述组合物为液体、冷冻或干燥粉末形式。

本发明中，上述组合物中包含助剂。

本发明中，所述组合物为冷冻或干燥粉末形式时，其还包括固态 载体。

本发明中，所述固态载体包括泥炭、草皮、滑石、褐煤、叶蜡石、 蒙脱土、藻酸盐、压滤泥浆、锯屑、珍珠岩、云母、硅石、石英粉、 钙基膨润土、蛭石、高岭土、轻质碳酸钙、硅藻土、麦饭石、方解石、 沸石、白炭黑、细沙以及粘土中的一种或多种。

本发明中，所述助剂包括十二烷基苯磺酸钠、丁基萘磺酸钠、海 藻糖、甘油、木质素磺酸钠、烷基萘磺酸钠缩聚物、烟酸、醇、缓冲 盐、氯化钠、氨基酸、维生素类、蛋白质、多肽、多糖或单糖、酵母 膏、白炭黑、茶皂素、脱脂奶中的一种或多种。

本发明中，利用上述提供系列的组合物，其还包含农业有效量的 选自以下的化合物或组合物：营养素、肥料、微生物菌肥。

本发明中，利用上述提供的盐单胞菌(Halomonas sp.)H6或者 组合物在提高棉花盐胁迫耐受性并促进作物苗期生长方面的应用。

具体的，本发明所述的新菌种盐单胞菌(Halomonas sp.)H6 CGMCC No.15758菌株特点在于能够在低温或高温、盐碱条件下良好 生长，能明显缓解盐对以棉花为主的经济作物造成的盐碱胁迫，特别 是能通过生长代谢分泌植物生长素以促进棉花在盐胁迫下的生长。

本发明中，利用上述提供的盐单胞菌(Halomonas sp.)H6或者 组合物在提高棉花或小麦盐胁迫耐受性并促进作物苗期生长方面的 应用。

本发明具有以下有益的技术效果：

(1)本发明提供的新菌种盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758菌株，具有低温、高温生长的特点，耐高盐和高pH，因而 能明显缓解盐碱胁迫，促进作物生长。并具有能够合成吲哚乙酸、产 ACC脱氨酶，起到促植物生长的作用。

(2)本发明提供的新菌种盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758菌株，能使经菌液稀释液浸泡的棉种生长15天后，具有明显 的促进作用。与对照组相比，使用了菌剂的处理组根长和株重分别显 著增加了11.54％和15.38％；小麦经盐单胞菌H6菌剂稀释液浸泡生长15天后，根长和鲜重的促进作用明显，分别显著增加了23.08％和 41.67％。证明使用菌剂盐单胞菌(Halomonas sp.)H6能明显提高棉 花在盐胁迫下生长，具有明显耐盐促生作用。

(3)本发明利用提供的盐单胞菌(Halomonas sp.)H6或者组合 物在提高棉花和小麦盐胁迫耐受性并促进作物苗期生长方面的应用， 具有明显耐盐促生作用，这不仅可以减少化学肥料的用量，还可以节 省农民开支，增加经济收入，还具有良好的生态效益和社会效益。

附图说明：

图1所示为盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758系 统发育树。

图2所示为盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758的 菌落形态。

图3所示为不同NaCl浓度对盐单胞菌(Halomonas sp.)H6 CGMCC No.15758生长的影响。

图4所示为不同pH值对盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758生长的影响。

图5所示为盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758在发 酵培养基中的生长曲线。

图6所示为盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758对 棉花幼苗的促生作用。

图7所示为盐单胞菌(Halomonas sp.)H6CGMCC No.15758对 小麦幼苗的促生作用。

具体实施方式：

为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明 的主要内容，但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。若未特别指 明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段， 所用原料均为市售商品，均可通过公共渠道购买，工艺中所采用的设 备和仪器均为本领域常见的设备。

2％NaCl TSA培养基：胰酪蛋白胨15g，大豆蛋白胨5g，NaCl 20g， 琼脂15g，H₂O1000mL，pH 7.3。

发酵培养基组分(g/L)：葡萄糖3.0，蛋白胨5.0，酵母浸粉2.0， K₂HPO₄ 3.0，NaCl20.0，pH7.0-7.2。

DF培养基(g/L)：KH₂PO₄ 4.0，Na₂HPO₄ 6.0，MgSO₄·7H₂O 0.2， 葡萄糖2，葡萄糖酸钠2，柠檬酸2，(NH₄)₂SO₄ 2.0，FeSO₄·7H₂O 0.001， 组分一和二微量元素溶液各0.1mL，样品逐个加入，充分溶解，121℃ 高压灭菌20min。微量元素溶液：组分一：H₃BO₃ 10mg、MnSO₄·H₂O 11.19mg、ZnSO₄·7H₂O 124.6mg、CuSO₄·5H₂O 78.22mg、MoO₃ 10mg、 H₂O 100mL，溶于100mL无菌蒸馏水中。组分二：将100mg FeSO₄·7H₂O 溶于100mL无菌蒸馏水中。

实施例一：盐单胞菌(Halomonas sp.)H6的分离、筛选及鉴定

(一)分离、筛选：

采集新疆和硕县盐碱荒漠地区植物根际土壤样品，通过梯度稀释 法进行微生物的分离和纯化。称取土样10g，放入100mL无菌水中， 加入灭菌的玻璃珠，150rpm，30℃，震荡20min，使样品充分分散。 无菌操作吸取上清液100μL加入900μL无菌水中，用无菌水稀释制成10^-2-10^-5浓度的稀释液。取100μL的各浓度稀释液，采用常规涂 布法在含2％NaCl的TSA固体培养基平板上涂布，放置于30℃恒温 培养箱内培养48小时后，待平板上长出菌落后，挑取平板上的单菌 落进行纯化培养，直至无杂菌落。从中优选出一株编号为H6的菌株， 转接到含2％NaCl TSA培养基斜面上保存备用。

(二)分类、鉴定：

1、盐单胞菌(Halomonas sp.)H6的16S rDNA的序列测定与分 析：

(1)PCR模板DNA的提取：

将纯化后的菌种H6接种到2％NaCl的TSA培养基中，30℃摇 床培养2天，收集菌体，采用DNA抽提试剂盒提取基因组总DNA。

(2)PCR扩增

采用特异性引物:

27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，

1492R:5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'；

PCR反应体系总体积25μL，PCR扩增条件为，94℃5min；94℃ 45s，56℃45s，72℃45s，30个循环；72℃10min。

(3)序列测定

PCR扩增产物经电泳检测和纯化后测序，获取长度为1431bp的16S rDNA序列，序列参见附后提供的SEQ ID NO:1所示，所得序列 经常见的NCBI网站进行比对分析，并构建***发育树，该菌的*** 发育树参见附图1，经比对分析发现，菌株H6与标准模式菌Halomonas titanicae BH1^T与Halomonas neptunia Eplume1^T亲缘关系 最近，16S rDNA序列与两者同源性分别为98.6％和98.3％，利用本 领域常见采用的MEGA 5.0软件通过Neighbor-Joining方法建立*** 进化树，结果经比对分析发现，菌株H6与Halomonastitanicae BH1^T聚类在一个分枝上，置信值分别为86％，表明该菌种作为新菌种的可 能性极高，在进化树中体现极好的稳定性和极高的支持率，经过系列 菌种分子水平鉴定可将该菌株H6确定为盐单胞菌(Halomonas sp.) 新种，具有新菌种具有的典型性特点，从分类学角度暂命名为盐单胞 菌(Halomonas sp.)H6。

2、生理生化测定

(1)通过生长条件研究结果显示盐单胞菌(Halomonas sp.)H6， 革兰氏染色阳性，杆状，0.3-0.8×1.4-2.5μm，不形成内孢子。生长在 含有2％NaCl TSA培养基上培养3-5d后，菌落为圆形、边缘整齐、 略微凸起的淡黄色菌落，菌落形态参见附图2所示。菌体生长温度范 围在10-45℃，最适温度生长是28℃；pH生长范围5.0-10，最佳pH 值为7.0，可耐受1-20％的NaCl。

(2)氧化氢酶和氧化酶活性为阳性，可水解酪七叶皂苷。

(3)使用Biolog菌种鉴定仪GNIII测试板鉴定，确定盐单胞菌 (Halomonas sp.)H6能利用的碳源为a-D-葡萄糖、D-山梨醇、果胶、 ρ-羟基-苯乙酸、D-甘露醇、D-半乳糖醛酸、γ-氨基-丁酸、D-果糖、 D-***醇、L-丙氨酸、L-半乳糖醛酸内酯、D-乳酸甲酯、D-海藻糖、 D-半乳糖、肌醇、L-精氨酸、D-葡萄糖酸、L-乳糖、β-羟基-d,L丁酸、 D-纤维二糖、3-甲酰葡萄糖、甘油、L-天冬氨酸，D-葡萄糖醛酸、柠 檬酸、D-果糖、D-葡萄糖-6-磷酸、L-谷氨酸、α-酮戊二酸、乙酰乙酸、 蔗糖、N-乙酰-β-D-甘露糖胺、L-果糖、D-苹果酸、丙酸、D-松二糖、 奎宁酸、L-苹果酸、乙酸、肌苷、L-丝氨酸。

综合16S rDNA序列分析、***发育分析、微生物学特性分析结 果，表明本发明提供的盐单胞菌H6确为盐单胞菌属的一株典型的细 菌新种，将其暂命名为盐单胞菌(Halomonas sp.)H6。该菌于2018 年05月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院 微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC No.15758。

实施例二：盐单胞菌(Halomonas sp.)H6菌株的促生能力检测

(1)分泌吲哚乙酸(IAA)能力

将盐单胞菌H6接种于含100mg/L L-色氨酸的2％NaCl的TSA液体 培养基中，180r/min摇床30℃培养1d后，取50μL菌悬液滴于白色陶瓷 板上，同时加入等体积的Salkowski比色液，Salkowski比色液为50mL 35％HClO₄和1mL 0.5mol/L FeCl₃混合，并以加入50μL未接菌的2％的 TSA液体培养基与等体积比色液的混合溶液为对照。将白色陶瓷板于 室温避光放置30min后，加入50μL盐单胞菌H6菌悬液的白色陶瓷板内 颜色变红。

(2)产ACC脱氨酶试验

将盐单胞菌H6接种于含3mM ACC的DF固体培养基，传代3次后， 盐单胞菌H6在ACC为唯一氮源培养基上的生长良好，生长的菌株为 产脱氨酶阳性菌株。

研究表明：盐单胞菌(Halomonas sp.)H6具有分泌吲哚乙酸和 ACC脱氨酶的能力。

实施例三：盐单胞菌(Halomonas sp.)H6菌株耐盐能力检测

将盐单胞菌Halomonas sp.H6CGMCC No.15758接种于TSA液体 培养基中，30℃，180rpm条件下培养24h后，将菌悬液分别接入含1％、 5％、10％、15％、20％NaCl浓度的TSA液体培养基中，30℃，180rpm 振荡培养24h，测600nm处的OD值，观察盐单胞菌Halomonassp.H6 的生长情况，以确定其耐盐程度。

研究结果如附图3所示，在NaCl浓度为1-20％的范围内，盐单胞 菌Halomonassp.H6均能生长，但随着盐浓度的升高，菌的生长量呈 显著下降趋势，

实施例四：盐单胞菌(Halomonas sp.)H6菌株耐pH能力检测

将盐单胞菌Halomonas sp.H6CGMCC No.15758接种于TSA液体 培养基中，30℃，180rpm条件下培养24h后，将菌悬液分别接入pH值 分别为3、5、7、9的TSA液体培养基中，30℃，180rpm振荡培养24h， 测600nm处的OD值，观察盐单胞菌Halomonas sp.H6的生长情况，以 确定其耐pH的能力。

研究结果如附图4所示，盐单胞菌Halomonas sp.H6更偏向于在弱 碱性条件下生长，pH值为7-9的范围内均生长良好，最适生长pH值为 7。当pH值等于或小于5时，其生长量明显降低。

实施例五：盐单胞菌(Halomonas sp.)H6的生长曲线和菌剂制 备

将盐单胞菌Halomonas sp.H6CGMCC No.15758接种在含2％ NaCl的TSA固体培养基上进行活化后，转接于TSA液体培养基中 (500mL三角瓶装100mL)，30℃下180rpm培养18h，获得种子液。 将种子液按1:100比例接种于发酵培养基中，30℃，200rpm培养24h， 菌剂最高浓度可达6×10⁹，即得微生物菌剂。在实际使用中可根据需 要，将发酵菌剂稀释一定倍数后使用。参见附图5为该菌在发酵培养 基中的生长曲线(稀释10倍)。

实施例六：盐单胞菌(Halomonas sp.)H6对棉花幼苗的促生作 用

选择颗粒饱满且无明显破损的棉种，使用0.1％的升汞消毒5min， 无菌水洗净后，用1/100浓度菌液浸泡种子4h；不接菌的对照处理种 子浸于灭菌蒸馏水中。

采用4×5穴的穴栽盆，以水洗黄沙烘干后为穴栽土壤。土壤用适 量5％NaCl溶液浸润后，添加过夜放置自来水并混匀，最终使土壤 含水量达到20％，含盐量达到0.75％。实验设计各处理10穴，将各 处理棉种点植入穴栽盆中，每穴4粒，深度约1.5cm，并用塑料薄膜覆盖，置于人工气候室中培养。培养条件20℃、无光照8h；22℃、30％光照2h；25℃、100％光照12h；30％光照2h。至种子发芽后， 揭去薄膜，每隔5天浇灌一次(每穴约10mL)。待发芽15d后测量试 验组和对照组棉花植株的根长和株重。

如附图6所示，实验结果表明，与对照处理相比，经盐单胞菌 H6 1/100浓度菌剂浸泡后的棉花种子后，生长15天根长和株重分别 显著增加了11.54％和15.38％，说明盐单胞菌菌剂稀释液浸泡对棉种 有明显的促进作用。

实施例七：盐单胞菌(Halomonas sp.)H6对小麦的促生作用

选择颗粒饱满且无明显破损的小麦种子，使用0.1％的升汞消毒 5min，无菌水洗净后，用1/100浓度菌液浸泡种子4h；不接菌的对照 处理种子浸于灭菌蒸馏水中。

采用4×5穴的穴栽盆，以水洗黄沙烘干后为穴栽土壤。土壤用适 量5％NaCl溶液浸润后，添加过夜放置自来水并混匀，最终使土壤 含水量达到20％，含盐量达到0.75％。实验设计各处理10穴，将各 处理小麦种子点植入穴栽盆中，每穴4粒，深度约1.5cm，并用塑料薄膜覆盖，置于人工气候室中培养。培养条件20℃、无光照8h；22℃、 30％光照2h；25℃、100％光照12h；30％光照2h。至种子发芽后， 揭去薄膜，每隔5天浇灌一次(每穴约10mL)。待发芽15d后测量试 验组和对照组小麦植株的各种形态学参数，包括株高、根长和鲜重。

如附图7所示，实验结果表明，与对照处理相比，经盐单胞菌 H6 1/100浓度菌剂浸泡后的小麦种子后，生长15天，株高的促进作 用相对较弱，仅增加了3.06％，但对根长和鲜重的促进作用明显，分 别显著增加了23.08％和41.67％，说明盐单胞菌菌剂稀释液浸泡对小 麦有明显的促进生长的作用。

实施例八：一种包含盐单胞菌(Halomonas sp.)H6菌株的组合 物

在上述实施例的基础上，利用上述实施例一提供的盐单胞菌 (Halomonas sp.)H6菌株的培养物。

所述的盐单胞菌(Halomonas sp.)H6菌株培养物的组合物，所 述组合物为液体、冷冻或干燥粉末形式。

上述组合物中包含助剂。

所述组合物为冷冻或干燥粉末形式时，其还包括固态载体。

所述固态载体包括泥炭、草皮、滑石、褐煤、叶蜡石、蒙脱土、 藻酸盐、压滤泥浆、锯屑、珍珠岩、云母、硅石、石英粉、钙基膨润 土、蛭石、高岭土、轻质碳酸钙、硅藻土、麦饭石、方解石、沸石、 白炭黑、细沙以及粘土中的一种或多种。

所述助剂包括十二烷基苯磺酸钠、丁基萘磺酸钠、海藻糖、甘油、 木质素磺酸钠、烷基萘磺酸钠缩聚物、烟酸、醇、缓冲盐、氯化钠、 氨基酸、维生素类、蛋白质、多肽、多糖或单糖、酵母膏、白炭黑、 茶皂素、脱脂奶中的一种或多种。

利用上述提供系列的组合物，其还包含农业有效量的选自以下的 化合物或组合物：营养素、肥料、微生物菌肥。

如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发 明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱 离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方 案作出的各种变形和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。

序列表

<110> 新疆农业科学院微生物应用研究所（中国新疆-亚美尼亚生物工程研究开发中心）

<120> 一种盐单胞菌株H6、组合物及其在耐盐促生中的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1431

<212> DNA

<213> 盐单胞菌(Halomonas sp)

<400> 1

cggaaccacc gttggtgatc gccctcttgc gttaggctaa ccacttctgg tgcagtccac 60

tcccatggtg tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg tgacattctg 120

attcacgatt actagcgatt ccgacttcac ggagtcgagt tgcagactcc gatccggact 180

gagaccggct ttaagggatt cgctgactct cgcgagctcg cagccctttg taccggccat 240

tgtagcacgt gtgtagccct acccgtaagg gccatgatga cttgacgtcg tccccacctt 300

cctccggttt gtcaccggca gtctccttag agttcccgac attactcgct ggcaaataag 360

gacaagggtt gcgctcgtta cgggacttaa cccaacattt cacaacacga gctgacgaca 420

gccatgcagc acctgtctta cagttcccga aggcacacca gaatctcttc cggcttctgt 480

agatgtcaag ggtaggtaag gttcttcgcg ttgcatcgaa ttaaaccaca tgctccaccg 540

cttgtgcggg cccccgtcaa ttcatttgag ttttaacctt gcggccgtac tccccaggcg 600

gtcgacttat cgcgttaact tcgccacaaa gtgctctagg cacccaacgg ctggtcgaca 660

tcgtttacgg cgtggactac cagggtatct aatcctgttt gctacccacg ctttcgcacc 720

tcagtgtcag tgtcagtcca gaaggccgcc ttcgccactg gtattcctcc cgatctctac 780

gcatttcacc gctacaccgg gaattctacc ttcctctcct gcactctagc ctgacagttc 840

cggatgccgt tcccaggttg agcccggggc tttcacaacc ggcttatcaa gccacctacg 900

cgcgctttac gcccagtaat tccgattaac gcttgcaccc tccgtattac cgcggctgct 960

ggcacggagt tagccggtgc ttcttctgcg agtgatgtct ttcctaccgg gtattaaccg 1020

ataggcgttc ttcctcgctg aaagtgcttt acaacccgag ggccttcttc acacacgcgg 1080

catggctgga tcagggttgc ccccattgtc caatattccc cactgctgcc tcccgtagga 1140

gttcgggccg tgtctcagtc ccgatgtggc tgatcatcct ctcagaccag ctacggatcg 1200

ttgccttggt aagccattac cttaccaact agctaatccg acataggctc atccaatagc 1260

gggagccgga gccccctttc tcccgtagga cgtatgcggt attagcctgg gtttccccag 1320

gttatccccc actatcgggc agattcctat gcattactca cccgtccgcc gctcgtcagc 1380

atgtagcaag ctagccctgt taccgctcga cttgcatgtg gttaggcccc g 1431

Claims (10)

1.一种盐单胞菌（Halomonas sp.）H6，其特征在于，所述的盐单胞菌（Halomonas sp.）H6的菌种保藏号为CGMCC No.15758，盐单胞菌（Halomonas sp.）H6的16S rDNA序列，基因序列如SEQ ID NO:1所示。

2.如权利要求1所述的盐单胞菌（Halomonas sp.）H6，其特征在于，所述的菌株能够可耐受1-20%的NaCl。

3.组合物，其含有权利要求1至2任一项所述的盐单胞菌（Halomonas sp.）H6菌株的培养物。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物为液体、冷冻或干燥粉末形式。

5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述组合物中包含助剂。

6.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述组合物为冷冻或干燥粉末形式时，其还包括固态载体。

7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述固态载体包括泥炭、草皮、滑石、褐煤、叶蜡石、蒙脱土、藻酸盐、压滤泥浆、锯屑、珍珠岩、云母、硅石、石英粉、钙基膨润土、蛭石、高岭土、轻质碳酸钙、硅藻土、麦饭石、方解石、沸石、白炭黑、细沙以及粘土中的一种或多种。

8.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述助剂包括十二烷基苯磺酸钠、丁基萘磺酸钠、海藻糖、甘油、木质素磺酸钠、烷基萘磺酸钠缩聚物、烟酸、醇、缓冲盐、氯化钠、氨基酸、维生素类、蛋白质、多肽、多糖或单糖、酵母膏、白炭黑、茶皂素、脱脂奶中的一种或多种。

9.根据权利要求3~8任意一项所述的组合物，其特征在于，其还包含农业有效量的选自以下的化合物或组合物：营养素、肥料、微生物菌肥。

10.如权利要求3或8任意一项所述的盐单胞菌（Halomonas sp.）H6在提高棉花或小麦盐胁迫耐受性并促进作物苗期生长方面的应用。