CN109906224B - ***吡啶化合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
提供式(IA)化合物或其药学上可接受的盐，其已显示可用于治疗PRC2介导的疾病或病症：
其中A、R6、R7和R8如本文所定义。
Description
技术领域
本发明涉及***并吡啶化合物，包含这些化合物的组合物，以及它们用于治疗多梳蛋白抑制复合物2(PRC2)介导的疾病或病症的用途。
背景技术
多梳组(PcG)蛋白是在许多人类癌症中失调的染色质修饰酶。多梳蛋白抑制复合物2(PRC2)包括SUZ12(zeste 12的抑制子)、EED(胚胎外胚层发育)和催化亚基EZH2(zeste同源物2的增强子)，通过在靶基因的启动子区域和周围甲基化核心组蛋白H3赖氨酸27(H3K27me3)来抑制基因。PRC2是参与基因转录的表观遗传调控的细胞机制的关键组成部分，并且在发育、组织分化和再生中起关键作用。虽然EZH2是催化亚基，但对于其甲基转移酶活性PRC2至少需要EED和SUZ12。EED、SUZ12和EZH2在许多癌症中过表达，包括但不限于乳腺癌、***癌、肝细胞癌等。在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和滤泡性淋巴瘤(FL)患者中已经发现EZH2激活突变。DLBCL中与辅因子S-腺苷甲硫氨酸(SAM)竞争的化合物对PRC2甲基转移酶活性的抑制逆转H3K27甲基化，重新激活靶基因的表达，抑制肿瘤生长/增殖。因此，PRC2为DLBCL和其他癌症提供了药理靶点。特别是，需要抑制PRC2活性的小分子。
发明内容
本发明提供式(IA)的化合物:
其中A、R6、R7和R8如本文所定义，包括立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、多晶型或其溶剂化物，它们可用于治疗PRC2介导的疾病或病症。
本发明还提供了制备本发明化合物的方法和中间体。
本发明还提供药物组合物，其包括至少一种本发明的化合物和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。所述药物组合物可进一步包括至少一种附加治疗剂。特别感兴趣的是选自其他抗癌剂、免疫调节剂、抗过敏剂、抗恶心剂(或止吐剂)、止痛剂、细胞保护剂及其组合的附加治疗剂。
本发明的化合物可用于治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症。
本发明的化合物可用于治疗。
本发明的化合物可用于制造用于治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症的药物。
本发明提供一种治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的第一治疗剂，可选有第二治疗剂，其中所述第一治疗剂是本发明化合物，所述第二治疗剂是其他类型的治疗剂。
EED和/或PRC2介导的疾病或病症的示例包括但不限于弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、其他淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌瘤、肝细胞癌、***癌，乳腺癌、胆管癌和胆囊癌、膀胱癌、脑肿瘤包括神经母细胞瘤、神经鞘瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、***、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾细胞癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤，如横纹肌肉瘤(RMS)、卡波济肉瘤、滑膜肉瘤、骨肉瘤和尤因肉瘤。
本发明提供一种治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的第一治疗剂，可选有第二治疗剂，其中所述第一治疗剂是EED抑制剂，所述第二治疗剂是其他类型的治疗剂，其中所述疾病或病症选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、其他淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、胃癌、恶性横纹肌瘤和肝细胞癌。
本发明的化合物可以单独使用，与本发明的其他化合物结合，或者与一种或多种、优选一至两种其他试剂同时或顺序组合使用。
从下面的详细说明书和权利要求中，本发明的其他特征和优点将显而易见。
发明详述
I.化合物
在第一方面，本发明特别提供一种式(IA)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
A是
W独立地是N或CR4；
Y独立地是N或CR3；
Z独立地是N或CR1；
R1独立地是H、卤素或NH2；
R2独立地是H、OCH3或卤素；
R3独立地是H或卤素；
R4独立地是H、卤素、CH3或OCH3；
R5独立地是H、卤素、CH3、OH、OCH3、OCH2F、OCHF2或OCF3；
R6和R7独立地选自：H和卤素；
R8独立地选自：卤素、苯基以及包含碳原子和选自N、NRa、O和S(O)p的1-4个杂原子的5至6元杂芳基，其中所述苯基和杂芳基被0-3R8A取代；
各R8A独立地选自：卤素、CN、OH、-(O)m-(被0-1个R8B取代的C1-C6烷基)、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、R8C、-OR8C、-C(＝O)R8D、NR8ER8F、-C(C1-C4烷基)＝N(C1-C4烷氧基)、-C(＝O)NR8ER8F、-NHC(＝O)R8D、-NHC(＝O)NR8ER8F、-S(＝O)R8D、-S(＝O)2R8D、-S(＝O)2NR8ER8F、-NHS(＝O)2R8D、
-NR8E(S(＝O)2(C1-C4烷基))和-CR8CR8ER8G；
R8B独立地选自：CN、OH、NReRf、C1-C4烷氧基、-C(＝O)NReRf、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、-N(→O)(C1-C4烷基)2、-S(＝O)2(C1-C4烷基)和包括碳原子和1-2个选自N、NRa、O和S(O)p的杂原子的4至6元杂环烷基，其中所述杂环烷基被0-2个Rc取代；
各R8C独立地选自：C3-C6环烷基、苯基和包含碳原子和1-4个选自N、NRa、O和S(O)p的杂原子的4至7元杂环，其中各部分被0-2个Rc取代；
各R8D独立地选自：C1-C4烷基和R8C；
R8E和R8G在每次出现时独立地选自：H和C1-C4烷基；
各R8F独立地选自：H和被0-1个Rd取代的C1-C4烷基；
各Ra独立地选自：H、→O、被0-1个Rb取代的C1-C4烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)(C1-C4烷基)、-CO2(C1-C4烷基)、C3-C6环烷基、苄基和包括碳原子和1-2个选自N、NRg、O和S(O)p的杂原子的4至6元杂环烷基；
Rb独立地选自：卤素、OH、C1-C4烷氧基和
各Rc独立地选自：＝O、卤素、OH、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基和C1-C4卤代烷氧基；
Rd独立地选自：OH和NReRf；
Re和Rf在每次出现时独立地选自：H和C1-C4烷基；
Rg独立地选自：H、C1-C4烷基、-C(＝O)(C1-C4烷基)和-CO2(C1-C4烷基)；
各p独立地选自0、1和2；以及
m独立地选自0或1；
在第二方面，本发明包括在第一方面范围内的式(IA)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
各R8A独立地选自：卤素、CN、OH、-(O)m-(被0-1个R8B取代的C1-C6烷基)、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、R8C、-C(＝O)R8D、NR8ER8F、-C(＝O)NR8ER8F、-NHC(＝O)R8D、-NHC(＝O)NR8ER8F、-S(＝O)R8D、-S(＝O)2R8D、-S(＝O)2NHR8F、-NHS(＝O)2R8D、-NR8E(S(＝O)2(C1-C4烷基))、-O-C3-C6环烷基,和
各Ra独立地选自：H、→O、被0-1个Rb取代的C1-C4烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)(C1-C4烷基)、-CO2(C1-C4烷基)、C3-C6环烷基、苄基、
在第三方面，本发明包括在第一或第二方面范围内的式(IA)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
R1独立地是H、F或Cl；
R2独立地是H、OCH3或F；
R3独立地是H或F；
R4独立地是H、F、CH3或OCH3；
R5独立地是H、F、CH3、OH、OCH3、OCH2F、OCHF2或OCF3；
R6和R7独立地选自：H和F；且
Ra独立地选自：H、被0-1个Rb取代的C1-C4烷基、C3-C6环烷基、
在第四方面，本发明包括在第一、第二和第三方面中任一范围内的式(IA)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
R6和R7是H；
R8独立地选自：苯基以及包含碳原子和选自N和NRa的1-2个杂原子的6元杂芳基，其中所述苯基和杂芳基被0-3个R8A取代；
在第五方面，本发明包括在第一至第三方面任一范围内的式(IA)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
R8独立地选自：
在另一方面，本发明包括在第一至第五方面任一范围内的式(IA)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
R8独立地选自：
在第六方面，本发明包括在第一至第四方面任一范围内的式(IA)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
R8独立地选自：
在第七方面，本发明包括在第一至第六方面任一范围内的式(IA)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
R8独立地选自：
各R8A独立地选自：卤素、CN、OH、-(O)m-(被0-1个R8B取代的C1-C6烷基)、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、NH2、-N(C1-C4烷基)2、C3-C6环烷基、-O-C3-C6环烷基、-C(＝O)(C1-C4烷基)、-C(＝O)NH2、
-C(＝O)NH(C1-C4烷基)、-C(＝O)N(C1-C4烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、
-NHC(＝O)N(C1-C4烷基)2、-S(＝O)(C1-C4烷基)、-S(＝O)2(C1-C4烷基)、-S(＝O)2NH2、
-S(＝O)2NH(被0-1个OH取代的C1-C4烷基)、-S(＝O)2N(C1-C4烷基)2、-NHS(＝O)2(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(S(＝O)2(C1-C4烷基))、四唑基、
R8B独立地选自：CN、OH、C1-C4烷氧基、-N(C1-C4烷基)2、-C(＝O)NH(C1-C4烷基)、-C(＝O)N(C1-C4烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、
-N(→O)(C1-C4烷基)2、-S(＝O)2(C1-C4烷基)、咪唑基、
Ra独立地选自：H和C1-C4烷基；且
RC独立地是C1-C4烷基。
在第八方面，本发明包括在第一至第七方面任一范围内的式(IA)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
R8独立地选自：
各R8A独立地选自：卤素、CN、OH、-(O)m-(被0-1个R8B取代的C1-C6烷基)、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、N(C1-C4烷基)2、C3-C6环烷基、-O-C3-C6环烷基、-C(＝O)NH(C1-C4烷基)、-C(＝O)N(C1-C4烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、-NHC(＝O)N(C1-C4烷基)2、-S(＝O)2(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(S(＝O)2(C1-C4烷基))、
R8B独立地选自：CN、OH、C1-C4烷氧基、-N(C1-C4烷基)2、-C(＝O)NH(C1-C4烷基)、-C(＝O)N(C1-C4烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、
-S(＝O)2(C1-C4烷基)和
Ra独立地选自：H和C1-C4烷基；且
RC独立地是C1-C4烷基。
在第九方面，本发明提供一种式(IA-1)化合物：
或其药学上可接受的盐，在上述任一方面的范围内；其中：
W独立地是N或CR4；
R1独立地是H或F；
R2独立地是H或F；
R3独立地是H或F；
R4独立地是H或F；
R5独立地是H或-OCH3；
R8A独立地选自：C1-C6烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、-N(C1-C4烷基)2、C3-C6环烷基、-O-C3-C6环烷基、
且
Ra独立地选自：H和C1-C4烷基；
在第十方面，本发明包括在第一至第九方面任一范围内的式(IA-1)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
W独立地是CR4；
R4独立地是H或F；
R8A独立地选自：CH3、CH(CH3)2、CH(CH3)(CH2CH3)、OCH3、OCH2CH3、OCH(CH3)2、CHF2、N(CH3)2、环丙基、-O-环丙基、
在第十一方面，本发明包括在第一至第三方面以及第五方面任一范围内的式(IA)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
R6和R7是H；
R8独立地选自：
各R8A独立地选自：被0-1个OH取代的C1-C4烷基，和C1-C4卤代烷基；
Ra独立地选自：H、被0-1个Rb取代的C1-C4烷基、C3-C6环烷基、
且
Rb独立地选自：OH和
在第十二方面，本发明包括在上述方面任一范围内的式(IA)或(IA-1)化合物或其药学上可接受的盐；其中：
R1是F。
在第十三方面，本发明提供从示例性实施例中选择的化合物或其药学上可接受的盐，包括实施例1至374的所有化合物。
在另一个方面，本发明提供了从第十三方面范围内的任何化合物子集列表中选择的化合物。
在一个实施方式中，R1独立地是H、F或Cl。在另一个实施方式中，R1独立地是H或F。
在一个实施方式中，R2独立地是H、OCH3或F。在另一个实施方式中，R1独立地是H或F。
在一个实施方式中，R3独立地是H或F。
在一个实施方式中，R4独立地是H、F、CH3或OCH3。在另一个实施方式中，R4独立地是H或F。
在一个实施方式中，R5独立地是H、F、CH3、OH、OCH3、OCH2F、OCHF2或OCF3。在另一个实施方式中，R5独立地是H或-OCH3。
在一个实施方式中，R6独立地是H或F。在另一个实施方式中，R6是H。
在一个实施方式中，R7独立地是H或F。在另一个实施方式中，R7是H。
在一个实施方式中，Ra独立地选自：H、被0-1个Rb取代的C1-C4烷基、C3-C6环烷基、
在另一个实施方式中，Ra独立地选自：H和C1-C4烷基；
在另一个实施方式中，使用本文公开的EED Alphascreen结合、LC-MS和/或ELISA分析，本发明的化合物具有IC50值≤5μM，优选IC50值≤1μM,更优选IC50值≤0.5μM,甚至更优选IC50值≤0.1μM。
II.其他实施方式
在另一个实施方式中，本发明提供一种组合物，该组合物包含至少一种本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方式中，本发明提供一种药物组合物，包括至少一种本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在另一个实施方式中，本发明提供一种药物组合物，包括治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
药物组合物可用于治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症。
在另一个实施方式中，本发明提供如上所述的药物组合物，进一步包括附加治疗剂。
在另一个实施方式中，本发明提供了一种制备本发明化合物的方法。
在另一个实施方式中，本发明提供了一种用于制备本发明化合物的中间体。
在另一个实施方式中，本发明提供一种本发明的化合物，用于单独或任选地与本发明的另一化合物和/或至少一种其它类型的治疗剂结合的治疗。
在另一个实施方式中，本发明提供一种用于治疗、用于治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症的本发明化合物，单独或任选地与本发明的另一种化合物和/或至少一种其他类型的治疗剂组合。
在另一个实施方式中，本发明提供了一种治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症的方法，包括向需要这种治疗的患者施用治疗有效量的至少一种本发明化合物，单独或任选地与本发明的另一种化合物和/或至少一种其他类型的治疗剂组合。
在另一个实施方式中，本发明提供一种治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的第一和第二治疗剂，其中所述第一治疗剂是本发明化合物，所述第二治疗剂是其他类型的治疗剂。
在另一个实施方式中，本发明还提供本发明化合物的用途，其单独或任选地与本发明的另一种化合物和/或至少一种其他类型的治疗剂组合，用于制造治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症药物。
在另一个实施方式中，本发明提供本发明化合物和额外治疗剂的联合制剂用于治疗。
在另一个实施方式中，本发明提供本发明化合物和额外治疗剂的组合用于同时或分开用于治疗。
在另一个实施方式中，本发明提供本发明化合物和额外治疗剂的联合制剂，用于同时、分开或顺序地用于治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症。所述化合物可以作为本文所述的药物组合物施用。
EED和/或PRC2介导的疾病或病症的示例包括但不限于弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、其他淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌瘤、肝细胞癌、***癌，乳腺癌、胆管癌和胆囊癌、膀胱癌、脑肿瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、***、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾细胞癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和选自横纹肌肉瘤(RMS)、卡波济肉瘤、滑膜肉瘤、骨肉瘤和尤因肉瘤的软组织肉瘤。
在另一个实施方式中，本发明提供一种治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的第一治疗剂，可选有第二治疗剂，其中所述第一治疗剂是EED抑制剂，所述第二治疗剂是其他类型的治疗剂，其中所述疾病或病症选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、其他淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、胃癌、恶性横纹肌瘤和肝细胞癌。
在另一个实施方式中，用于组合药物组合物或组合方法或组合用途的额外治疗剂选自下列一种或多种、优选一至三种治疗剂：其他抗癌剂、免疫调节剂、抗过敏剂、抗恶心剂(或止吐药)、止痛药、细胞保护剂及其组合。
本文描述了本发明的各种(列举的)实施方式。将认识到，每个实施方式中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本发明的进一步实施方式。还应理解，实施方式的每个单独元素是其各自的独立实施方式。
在以上对示例性实施方式的描述过程中，本发明的其他特征将变得显而易见，所述示例性实施方式是为了说明本发明而给出的，并不旨在限制本发明。
III.定义
除非另有说明，否则上文和下文中使用的一般术语优选地在本发明或公开内容的范围内具有以下含义，其中使用的更一般的术语可以彼此独立地由更具体的定义替换或保留，从而定义更多本发明的详细实施方式。
本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另外指出或另外明显与语境相矛盾。本文提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如“诸如”)的使用仅意在更好地说明本发明，而不是对本发明另行要求保护的范围进行限制。
在本发明或公开的语境(特别是在权利要求语境)中使用的术语“一个”、“一种”、“所述”以及类似术语应被解释为涵盖单数和复数，除非另有说明或与语境明显矛盾。
本文所用术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子，特别是氮或氧。
除非另有说明，否则任何具有不饱和化合价的杂原子被认为具有足以满足化合价的氢原子。
如本文所用，术语“烷基”是指具有通式CnH2n+1的烃基。烷基可以是直链或支链的。例如，术语“C1-C10烷基”或“C1至C10烷基”是指含有1至10个碳原子的一价直链或支链脂肪族基团(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、3,3-二甲基丙基、己基、2-甲基戊基、庚基等)。
术语“亚烷基”是指二价烷基。例如，术语“C1-C6亚烷基”或“C1至C6亚烷基”指的是包含1至6个碳原子的二价直链或支链脂肪族基团(例如，亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚正丙基(-CH2CH2CH2-)、亚异丙基(-CH(CH3)CH2-)、亚正丁基、亚仲丁基、亚异丁基、亚叔丁基、亚正戊基、亚异戊基、亚新戊基、亚正己基等)。
术语“烷氧基”是指与氧连接的烷基，也可以表示为-O-R或-OR，其中R表示烷基。“C1-C6烷氧基”或“C1至C6烷氧基”意在包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷氧基基团。示例性烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如，正丙氧基和异丙氧基)和叔丁氧基。类似地，“烷基硫基”或“硫代烷氧基”代表如上文所定义的具有通过硫桥连接的指示数量的碳原子的烷基，例如甲基-S-和乙基-S-。
“卤素”或“卤代”可以是氟、氯、溴或碘(优选作为取代基的卤素是氟和氯)。
“卤代烷基”旨在包括支链和直链的饱和脂肪烃基团，它们具有指定数量的碳原子，被一个或多个卤素取代。卤代烷基的示例包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。卤代烷基的示例还包括“氟烷基”，其旨在包括具有指定数量的碳原子的被一个或多个氟原子取代的支链和直链饱和脂肪族烃基。
“卤代烷氧基”表示如上定义的卤代烷基，其具有通过氧桥连接的指定碳原子数。例如，“C1-C6卤代烷氧基”或“C1至C6卤代烷氧基”意在包括C1、C2、C3、C4、C5和C6卤代烷氧基基团。卤代烷氧基的示例包括但不限于三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基和五氟甲氧基。类似地，“卤代烷基硫基”或“硫代卤代烷氧基”代表如上文所定义的具有通过硫桥连接的指示数量的碳原子的卤代烷基，例如三氟甲基-S-和五氟乙基-S-。
术语“氧代”或–C(O)-是指羰基。例如，酮、醛或酸、酯、酰胺、内酯或内酰胺基团的一部分。
术语“环烷基”是指完全氢化的非芳香族碳环化合物，包括单环、双环或多环体系。“C3-C8环烷基”或“C3至C8环烷基”意在包括C3、C4、C5、C6、C7和C8环烷基基团。示例性环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和降冰片基。
术语“芳基”是指具有单个(例如苯基)或稠环***(例如萘)的6至10元芳香碳环部分。典型的芳基是苯基。
如本文所用，术语“苄基”是指其中一个氢原子被苯基取代的甲基。
“杂环烷基”是指本申请中定义的环烷基，条件是所指示的一个或多个环碳被选自-O-、-N＝、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-和-S(O)2-的部分所取代，其中R是氢、C1-4烷基或氮保护基(例如，羧苄氧基、对甲氧基苄基羰基、叔丁氧基羰基、乙酰基、苯甲酰基、苄基、对甲氧基苄基、对甲氧基苯基、3,4-二甲氧基苄基等)。
例如，3-8元杂环烷基包括环氧、吖丙啶基、氮杂环丁基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻吩基1,1-二氧化物、恶唑烷基、噻唑烷基、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、哌啶基、哌啶基、哌啶基酮、吡唑烷基、六氢嘧啶基、1,4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基、硫代吗啉基、硫代吗啉代-S-单氧化物(sulfanomorpholino)、硫代吗啉代-S,S-二氧化物(sulfonomorpholino)、八氢吡咯并[3,2-b]吡咯基等。
术语“部分饱和的杂环”是指部分氢化并且可以作为单环、双环(包括稠环)存在的非芳族环。除非另有说明，所述杂环通常是包含1-3个选自-O-、-N＝、-NR-和-S-的杂原子的5至10元环(优选1或2个杂原子)。部分饱和的杂环包括基团，如二氢呋喃基、二氢恶唑基、二氢吡啶基、咪唑啉基、1H-二氢咪唑基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、2H-苯并吡喃基、噁嗪基等。部分饱和的杂环还包括其中杂环与芳基或杂芳基环稠合的基团(例如2,3-二氢苯并呋喃基、二氢吲哚基(或2,3-二氢吲哚基)、2,3-二氢苯并噻吩基、2,3-二氢苯并噻唑基)、1,2,3,4-四氢喹啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-b]吡嗪基等)。
术语“部分或完全饱和的杂环”是指部分氢化或完全氢化并且可以作为单环、双环(包括稠环)或螺环存在的非芳族环。除非另有说明，否则杂环通常是含有1至3个独立地选自硫、氧和/或氮的杂原子(优选1或2个杂原子)的3至12元环。当使用术语“部分或完全饱和的杂环”时，意在包括“杂环烷基”和“部分饱和的杂环”。螺旋环的示例包括2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基等。
术语“杂芳基”是指在5至10元芳环***内含有至少一个杂原子(例如，氧、硫、氮或其组合)的芳族部分(例如，吡咯基、吡啶基、吡唑基、吲哚基、吲唑基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、恶唑基、异恶唑基、咪唑基、***基、四唑基、三嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、苯并吡喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并恶唑基、1H-苯并[d][1,2,3]***基等)。杂芳族部分可以由单环或稠环***组成。典型的单个杂芳基环是含有1-4个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的5至6元环，典型的稠合杂芳基环***是独立地含有1-4个选自氧、硫和氮的杂原子的9至10元环***。稠合的杂芳基环***可以由两个稠合在一起的杂芳基环或与芳基(例如苯基)稠合的杂芳基组成。
当使用术语“杂环”时，意在包括“杂环烷基”、“部分或完全饱和的杂环”、“部分饱和的杂环”、“完全饱和的杂环”和“杂芳基”。
术语“反离子”用于表示带负电的物质，如氯离子、溴离子、氢氧化物、乙酸根和硫酸根，或带正电的物质，如钠(Na+)、钾(K+)、铵(RnNHm+，其中n＝0-4，m＝0-4且m+n＝4)等。
当在环结构内使用虚线环时，这表明环结构可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的。
如本文所提及的，术语“取代的”是指至少一个氢原子被非氢基团取代，条件是保持正常的价态并且该取代产生稳定的化合物。当取代基是酮基(即＝O)时，原子上的2个氢被取代。酮取代基不存在于芳族部分上。当环***(例如碳环或杂环)被称为被羰基或双键取代时，意指羰基或双键是环的一部分(即，在其内)。如本文所用，环双键是在两个相邻环原子之间形成的双键(例如，C＝C、C＝N或N＝N)。
在本发明化合物上存在氮原子(例如胺)的情况下，可以通过用氧化剂(例如mCPBA和/或过氧化氢)处理将它们转化为N-氧化物，得到本发明的其它化合物。因此，所示和要求保护的氮原子被认为涵盖所示的氮及其N-氧化物(N→O)衍生物。
当任何变量在化合物的任何成分或公式中出现一次以上时，它在每次出现时的定义独立于它在其他每次出现时的定义。因此，例如，如果显示基团被0-3个R基团取代，则所述基团可以是未取代的或至多被三个R基团取代，并且在每次出现时R独立地选自R的定义。例如，参考第一方面，这适用于R8定义中的0-4个R8A，使得当R8是苯基或5-至6-元杂芳基时，这些基团是未取代的(未被R8A取代)或被一个、两个、三个或四个R8A基团所取代，其在每次出现时从R8A的给定定义中独立选择。这类似地适用于R8B和R8C定义中的0-2个Rc的定义，以及R8F定义中的0-1个Rd的定义。
当连接取代基的键显示为穿过连接环中两个原子的键时，则该取代基可键合到环上的任何原子。当列出取代基而没有表明该取代基与其他给定化学式的化合物键合的原子时，则该取代基可以通过该取代基中的任何原子键合。
只有当取代基和/或变量的组合产生稳定化合物时，才允许这种组合。
如本领域普通技术人员将能够理解的，例如，分子中的酮(-CH-C＝O)基团可以互变异构为其烯醇形式(-C＝C-OH)。因此，本发明旨在覆盖所有可能的互变异构体，即使当结构仅描绘其中之一时。
短语“药学上可接受的”表示该物质或组合物必须在化学和/或毒理学上与包含制剂的其他成分和/或用其治疗的哺乳动物相容。
除非另有说明，否则术语“本发明化合物”或“本公开化合物”是指式(I)、(IA)或(IA-1)的化合物，以及异构体，例如立体异构体(包括非对映异构体、对映异构体和外消旋体)，几何异构体，构象异构体(包括旋转异构体和阻转异构体)，互变异构体，同位素标记的化合物(包括氘代)和固有形成的部分(例如，多晶型物、溶剂化物和/或水合物)。当存在能够形成盐的部分时，盐特别是药学上可接受的盐也包括在内。
本领域技术人员将认识到，本发明化合物可含有手性中心，因此可以以不同的异构形式存在。如本文所用，术语“异构体”是指具有相同分子式但原子的排列和构型不同的不同化合物。
“对映异构体”是一对彼此不可重叠镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是一种“外消旋”混合物。该术语在适当时用于指定外消旋混合物。当指定本发明化合物的立体化学时，使用常规RS***(例如(1S,2S))指定具有两个手性中心的已知相对和绝对构型的单一立体异构体；用星号表示具有已知相对构型但未知绝对构型的单一立体异构体(例如(1R*,2R*))；用两个字母表示外消旋体(例如(1RS,2RS)为(1R,2R)和(1S,2S)的外消旋混合物；(1RS,2SR)为(1R,2S)和(1S,2R)的外消旋混合物))。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子的立体异构体，但其不是彼此的镜像。根据Cahn-lngold-Prelog R-S***确定绝对立体化学。当化合物为纯对映体时，每个手性碳上的立体化学可以由R或S指定。绝对构型未知的拆分化合物可以根据它们在钠D线的波长处旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)命名为(+)或(-)。或者，拆分的化合物可以通过手性HPLC的相应对映异构体/非对映异构体的相应保留时间来定义。
本文所述的某些化合物含有一个或多个不对称中心或轴，并因此可产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式，其可根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-。
当化合物含有双键或一些赋予分子一定量结构刚性的其他特征时，可能产生几何异构体。如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。
构象异构体(或构象异构体)是可以通过围绕一个或多个键的旋转而不同的异构体。旋转异构体是构象异构体，它们通过仅仅一个键的旋转而不同。
术语“阻转异构体”是指基于轴向或平面手性的结构异构体，其由分子中的受限旋转产生。
除非另有说明，否则本发明化合物意在包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯形式和中间体混合物。光学活性(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术来拆分(例如，在手性SFC或HPLC色谱柱(例如可从DAICEL Corp.获得的
和
)上分离，使用适当的溶剂或溶剂混合物以实现良好的分离)。
本发明化合物可以以光学活性形式或外消旋形式分离。光学活性形式可以通过拆分外消旋形式或通过从光学活性的原料合成来制备。用于制备本发明化合物和其中制备的中间体的所有方法都被认为是本发明的一部分。当制备对映体或非对映体产物时，它们可以通过常规方法分离，例如通过色谱法或分级结晶。
根据工艺条件，本发明的最终产物以游离(中性)或盐形式获得。这些最终产物的游离形式和盐都在本发明的范围内。如果需要，可将化合物的一种形式转化为另一种形式。游离碱或酸可以转化成盐；盐可以转化成游离化合物或另一种盐；本发明的异构化合物的混合物可被分离成单独的异构体。
药学上可接受的盐是优选的。然而，其他盐也可用于例如可在制备过程中使用的分离或纯化步骤中，且因此也考虑在本发明的范围内。
如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中所述母体化合物通过制备其酸或碱盐来修饰。例如，药学上可接受的盐包括但不限于乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘化物/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐/羟基丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、苯乙酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、氨基磺酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、三氟乙酸盐或昔萘酸盐形式。
药学上可接受的酸加成盐可以用无机和有机酸形成。可由其衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
药学上可接受的碱加成盐可以用无机和有机碱形成。可以衍生盐的无机碱包括例如铵盐和来自元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施方式中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可以衍生盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星青霉素、胆碱、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的合适碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备；通常，优选非水介质如***、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。合适的盐的列表可参见Allen,L.V.,Jr.,ed.,Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第22版，Pharmaceutical Press，London，UK(2012)，其公开内容在此引入作为参考。
含有能够充当氢键供体和/或受体的基团的本发明化合物可以能够与合适的共晶形成物形成共晶。这些共晶可以由本发明化合物通过已知的共晶形成过程制备。此类过程包括研磨、加热、共升华、共熔融或在结晶条件下于溶液中使本发明化合物与共晶形成物接触并分离由此形成的共晶。合适的共晶形成物包括在WO 2004/078163中描述的那些。因此，本发明进一步提供了包含本发明化合物的共晶。
本文给出的任何化学式也旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式表示的结构，除了一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子代替。可以掺入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。本发明包括如本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如存在放射性同位素如3H、13C和14C的那些化合物。这些同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射性治疗。具体地，18F或标记的化合物可能对于PET或SPECT研究是特别理想的。同位素标记的本发明化合物通常可以用容易获得的同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂，通过下述方案或实施例和制备中公开的方法制备。
此外，用较重同位素特别是氘(即2H或D)取代可以提供由更大的代谢稳定性产生的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求或改善的治疗指数。可以理解的是，该语境中的氘被认为是本发明化合物的取代基。这种较重同位素特别是氘的浓度可以由同位素富集因子来定义。如本文所用的术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本发明化合物中的取代基被表示为氘，则这种化合物对于指定的各氘原子具有至少3500的氘同位素富集因子(在每个指定的氘原子处52.5％的氘掺入)，至少4000(60％的氘掺入)，至少4500(67.5％氘掺入)，至少5000(75％氘掺入)，至少5500(82.5％氘掺入)，至少6000(90％氘掺入)，至少6333.3(95％氘掺入)，至少6466.7(97％的氘掺入)，至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)。
同位素标记的本发明化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于本文所述的方法、使用适当的同位素标记试剂代替另外使用的未标记试剂来制备。这些化合物具有多种潜在用途，例如作为标准和试剂，用于确定潜在药物化合物与靶标蛋白或受体结合的能力，或用于成像体内或体外与生物受体结合的本发明化合物。
“稳定的化合物”和“稳定的结构”是指化合物足够稳固以经受从反应混合物中分离到有用的纯度，并配制成有效的治疗剂。优选本发明化合物不含有N-卤代、S(O)2H或S(O)H基团。
术语“溶剂化物”是指本发明化合物与一种或多种溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。这种物理缔合包括氢键。在某些情况下，溶剂化物能够分离，例如当一种或多种溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。溶剂化物中的溶剂分子可以以规则排列和/或无序排列存在。溶剂化物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂化物”包括溶液相和可分离的溶剂化物。示例性的溶剂化物包括但不限于水合物、乙醇化物、甲醇化物和异丙醇化物。溶剂化方法通常是本领域已知的。
如本文所用，“多晶型物”是指具有相同化学结构/组成但形成晶体的分子和/或离子的空间排列不同的晶体形式。本发明化合物可以无定形固体或结晶固体形式提供。可用冻干提供本发明化合物的固体。
“EED”是指基因胚胎外胚层发育的蛋白质产物。
“PRC2”是指多梳蛋白抑制复合物2。
术语“PRC2介导的疾病或病症”是指由PRC2直接或间接调节的任何疾病或病症。这包括但不限于由EED直接或间接调节的任何疾病或病症。
术语“由EED和/或PRC2介导的疾病或病症”是指由EED和/或PRC2直接或间接调节的疾病或病症。
如本文所用，术语“患者”包括所有哺乳动物物种。
本文所用术语“对象”是指动物。通常动物是哺乳动物。“对象”还指可能受益于用EED抑制剂治疗的任何人或非人有机体。对象还指例如灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方式中，对象是灵长类动物。在其他实施方式中，对象是人。示例性对象包括具有癌症疾病风险因素的任何年龄的人。
如本文所用，如果对象会从某种治疗中于生物学、医学或生活质量上受益，则该对象对该治疗“有需要”(优选人)。
如本文所用，术语“抑制”是指减少或抑制给定的病状、症状或病状或疾病，或者显著降低生物活动或过程的基线活性。
如本文所用，术语“治疗”或“处理”任何疾病/病症是指在哺乳动物特别是人类中的疾病/病症的治疗，并且包括：(a)改善疾病/病症，(即减缓或阻止或减少疾病/病症或其至少一种临床症状的发展)；(b)缓解或调节疾病/病症(即导致疾病/病症在身体上(例如可辨别症状的稳定)、生理上(例如物理参数的稳定)或两者都消退)；(c)减轻或改善至少一个物理参数，包括患者可能无法辨别的物理参数；和/或(d)预防或延迟疾病或病症的发作或发展或进展在哺乳动物中发生，特别是当此类哺乳动物易患该疾病或病症但尚未被诊断为患有该疾病或病症时。
如本文所用，“预防”或“阻止”涵盖哺乳动物特别是人类中亚临床疾病状态的预防性治疗(即预防和/或降低风险)，旨在降低发生临床疾病状态的可能性。根据已知与普通人群相比增加患有临床疾病状态的风险的因素，选择患者进行预防性治疗。“预防”疗法可分为(a)一级预防和(b)二级预防。一级预防定义为在尚未呈现临床疾病状态的患者中的治疗，而二级预防定义为预防第二次发生相同或相似的临床疾病状态。
如本文所用，“风险降低”或“降低风险”包括降低临床疾病状态发展的发病率的疗法。因此，一级和二级预防疗法是降低风险的示例。
“治疗有效量”意在包括本发明化合物将引发对象的生物或医学反应的量，例如减少或抑制EED和/或PRC2活性，或改善症状，减轻病症，减缓或延缓疾病进展，或预防由PRC2介导的疾病或病症等。当应用于组合时，该术语是指引起预防或治疗效果的活性成分的组合量，无论是组合、连续或同时施用。
本文使用的缩写定义如下：“1x”表示一次，“2x”表示两次，“3x”表示三次，“℃”表示摄氏度，“aq”表示水性的，“Col”表示列，“eq”表示当量，“g”表示克，“毫克”表示毫克，“L”表示升，“mL”表示毫升，“μL”表示微升，“N”表示正常，“M”表示摩尔浓度，“nM”表示纳摩尔浓度，“mol”表示摩尔，“mmol”表示毫摩尔，“min”表示分钟，“h”表示小时，“rt”表示室温，“RT”表示保留时间，“ON”表示过夜，“atm”表示大气压，“psi”表示磅每平方英寸，“conc.”表示浓缩物，“aq”表示水溶液，“sat”或“sat’d”表示饱和，“MW”表示分子量，“mw”或“μwave”表示微波，“mp”表示熔点，“Wt”表示重量，“MS”或“Mass Spec”表示质谱，“ESI”表示电喷雾电离质谱，“HR”表示高分辨率，“HRMS”表示高分辨率质谱，“LCMS”表示液相色谱质谱，“HPLC”表示高压液相色谱，“RP HPLC”表示反相HPLC，“TLC”或“tlc”表示薄层色谱，“NMR”表示核磁共振光谱，“nOe”表示核的奥氏效应光谱，“1H”表示质子，“δ”表示Δ，“s”代表单峰，“d”代表双峰体，“t”代表三重峰，“q”代表四重峰，“m”代表多重峰，“br”代表宽，“Hz”代表赫兹，“ee”代表对映体过量，且“α”、“β”、“R”、“S”、“E”和“Z”是本领域技术人员熟悉的立体化学名称。
本文以下使用的下述缩写具有相应的含义：
B2Pin2 双(频那醇合)二硼
Bn 苄基
Boc 叔丁氧羰基
Boc2O 二碳酸二叔丁酯
Bu 丁基
CDI N,N'-羰基二咪唑
Cs2CO3 无水碳酸铯
CHCl3 氯仿
DAST 二乙胺基三氟化硫
DBU 2,3,4,6,7,8,9,10-八氢嘧啶并[1,2-a]氮杂
DCM 二氯甲烷
DIEA N,N-二异丙基乙胺
DMAc 二甲基乙酰胺
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DPPA 叠氮磷酸二苯酯
Et 乙基
EtOH 乙醇
EtOAc 乙酸乙酯
HATU 2-(7-氮杂-1H-苯并***-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯
HCl 盐酸
i-Bu 异丁基
i-Pr 异丙基
KOAc 醋酸钾
LDA 二异丙基氨基锂
LiAlH4 氢化铝锂
Me 甲基
MeMgBr 甲基溴化镁
mCPBA 3-间氯过氧苯甲酸
MeCN 乙腈
MnO2 二氧化锰
N2 氮气
NaBH4 硼氢化钠
NaHCO3 碳酸氢钠
NaHMDS 双(三甲基硅基)氨基钠
NaOMe 甲醇钠
Na2SO4 硫酸钠
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
Pd2(dba)3 三(二亚苄基丙酮)二钯
PE 石油醚
Ph 苯基
PPh3 三苯基膦
Ph3P＝O 三苯基氧膦
pTSA 对甲苯磺酸
pTSH 对甲苯磺酰肼
s-Phos 2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯
TBAF 四丁基氟化铵
t-Bu或But 叔丁基
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
Xant-phos 9,9-二甲基-4,5-双(二苯基膦)氧杂蒽
X-phos 2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯
IV.合成
根据本文提供的方法、反应式和实施例，本发明的化合物可以以有机合成领域技术人员已知的多种方式制备。本发明的化合物可以使用下述方法，与合成有机化学领域中已知的合成方法，或本领域技术人员所理解的其变化来合成。优选的方法包括但不限于下面描述的那些。反应在适合于所用试剂和材料的溶剂或溶剂混合物中进行，并且适合于进行转化。有机合成领域的技术人员将理解，分子上存在的官能度应当与所提出的转化一致。为获得所需的本发明化合物，这有时需要判断以改变合成步骤的顺序或选择一种特定的工艺方案而不是另一种。
起始原料通常可从例如Sigma-Aldrich Chemicals(Milwaukee,Wis.)的商业来源获得，或者使用本领域技术人员熟知的方法容易地制备(例如通过以下一般描述的方法制备：Louis F.Fieser和Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis，v.1-19，Wiley，New York(1967-1999ed.),Larock,RC,Comprehensive Organic Transformations，2nd-ed.,Wiley-VCH Weinheim，Germany(1999)，或Beilsteins Handbuch der organischenChemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin，包括增刊(也可通过Beilstein在线数据库获得))。
为说明目的，下述反应式提供了合成本发明化合物以及关键中间体的潜在途径。有关各个反应步骤的更详细说明，请参阅下面的“实施例”部分。本领域技术人员将理解，可以使用其他合成途径来合成本发明化合物。尽管在反应式中描述了特定的起始材料和试剂并在下面讨论，但是可以容易地替换其他起始材料和试剂以提供各种衍生物和/或反应条件。此外，通过下述方法制备的许多化合物可以使用本领域技术人员熟知的常规化学方法根据本发明进一步修饰。
在制备本发明化合物时，可能需要保护中间体的远端官能。这种保护的需求将根据远端官能的性质和制备方法的条件而变化。本领域技术人员容易确定对该保护的需要。关于保护基团及其用途的一般描述，参见Greene,T.W.等人,Protecting Groups inOrganic Synthesis,第4版,Wiley(2007)。在制备本发明化合物时引入的保护基团，例如三苯甲基保护基，可以显示为一种区域异构体，但也可以以区域异构体的混合物形式存在。
反应式1-4(下文)描述了制备本发明化合物包括式(IA)化合物的潜在途径。通过使用基本上光学纯的起始原料或通过本领域熟知的分离色谱、重结晶或其他分离技术，可以使式(IA)化合物基本上光学纯。有关更详细说明，请参阅下面的“实施例”部分。
反应式1
反应式2
反应式3
反应式4
通常，在反应式1下，用肼处理取代的吡啶1以形成中间体2，其在用原甲酸三甲酯或原甲酸三乙酯处理后转化为环化产物3。随后，用合适的胺处理3以产生4，其通过与适当的R8试剂(例如各种硼酸或具有适当R8基团的等同物)的交叉偶联反应转化为产物5。在某些情况下，受保护的4'用于偶联或置换步骤，得到化合物5'，其在脱保护后得到化合物5。
或者，在反应式2下，由适当取代和保护的中间体6构建C8芳基取代，得到化合物5'，随后将其转化为5。
在其他情况下，在反应式3下，可首先进行C-8取代以得到中间体7，其通过相应的置换转化为化合物5。
在其它情况下，如反应式4中所述，化合物5可以通过从不同取代的吡啶1a开始，以类似于反应式1中所述的反应顺序获得。在最后的步骤中通过各种方法构建C-8芳基环，得到化合物5。
一般方法
除非另有说明，否则在示例性实施例中使用以下方法。
中间体和最终产物的纯化通过正相或反相色谱进行。除非另有说明，否则使用预填充的SiO2柱进行正相色谱，用己烷和乙酸乙酯或DCM和MeOH的梯度洗脱。对于高极性胺，使用DCM和MeOH中1M NH3的梯度。反相制备型HPLC使用C18柱、UV 214nm和254nm或制备型LCMS检测，用以下梯度洗脱：溶剂A(含0.1％TFA的水)和溶剂B(含0.1％TFA的乙腈)，或溶剂A(含0.05％TFA的水)和溶剂B(含0.05％TFA的乙腈)，或溶剂A(含0.05％氨的水)和溶剂B(含0.05％氨的乙腈)。
用于表征实施例的LC/MS方法
反相分析HPLC/MS在与6110(方法A-D)或6120(方法E和F)或6130(方法G)质谱联用的Agilent LC1200***上进行。
方法A：在1.2分钟内5％至95％B的线性梯度，在95％B下保持1分钟；
在214nm和254nm下UV可视化
柱:
C18 4.6 x 50mm 3.5μm
流速：2mL/分钟
溶剂A:0.1％三氟乙酸,99.9％水
溶剂B：0.1％三氟乙酸,99.9％乙腈
方法B：在1.5分钟内5％至95％B的线性梯度，在95％B下保持1分钟；
在214nm和254nm下UV可视化
柱:
C18 4.6 x 50mm 3.5μm
流速：2mL/min
溶剂A：含10mM碳酸氢铵的水
溶剂B：乙腈。
方法C：在1.2分钟内5％至95％B的线性梯度，在95％B下保持1.3分钟，在0.01分钟内95％至5％B；
在214nm和254nm下UV可视化
柱:
C18 4.6 x 50mm 3.5μm
流速：2mL/min
溶剂A：0.1％三氟乙酸,99.9％水
溶剂B：0.1％三氟乙酸,99.9％乙腈。
方法D：在1.4分钟内5％至95％B的线性梯度，在95％B下保持1.6分钟，在0.01分钟内95％至5％B；
在214nm和254nm下UV可视化
柱:
C18 4.6 x 50mm 3.5μm
流速：1.8mL/min
溶剂A：含10mM碳酸氢铵的水
溶剂B：乙腈。
方法E：在1.5分钟内5％至95％B的线性梯度，在95％B下保持1分钟；
在214nm和254nm下UV可视化
柱:
C18 4.6 x 50mm 3.5μm
流速：2mL/min
溶剂A：含10mM碳酸氢铵的水
溶剂B：乙腈。
方法F：在1.5分钟内5％至95％B的线性梯度，在95％B下保持1分钟；
在214nm、254nm和300nm下UV可视化
柱:
C18 4.6 x 30mm 2.5μm
流速：1.8mL/min
溶剂A：含0.1％氨的水
溶剂B：乙腈。
方法G：在2分钟内10％至95％B的线性梯度，在95％B下保持1分钟；
在214nm、254nm和300nm下UV可视化
柱:
C18 4.6 x 30mm 2.5μm
流速：1.8mL/min
溶剂A：水
溶剂B：含0.1％甲酸的MeOH
用于表征实施例的NMR
1H NMR光谱用Bruker傅立叶变换光谱仪以如下频率操作获得：1H NMR:400MHz(Bruker).13C NMR:100MHz(Bruker).光谱数据以以下格式报告：化学位移(多重性、氢数)。化学位移以四甲基硅烷内标的ppm低场(δ单位，四甲基硅烷＝0ppm)和/或参考溶剂峰来指定，所述参考溶剂峰在1H NMR光谱中对于CD2HSOCD3为2.49ppm，对于CD2HOD为3.30ppm，对于CD3CN为1.94和CDCl3为7.24ppm，在13C NMR谱中CD3SOCD3为39.7ppm，CD3OD为49.0ppm，CDCl3为77.0ppm。所有13C NMR光谱都是质子去耦合的。
V.实施例
使用本文公开的方法制备、分离和表征以下实施例。以下实施例说明了本发明的部分范围，并不意味限制本发明的范围。
除非另有说明，否则起始材料通常可从非排他的商业来源获得，例如TCI FineChemicals(日本)，Shanghai Chemhere Co.,Ltd.(中国上海)，Aurora Fine ChemicalsLLC(圣地亚哥，加州)，FCH Group(乌克兰)，Aldrich Chemicals Co.(密尔沃基，威斯康星州)，Lancaster Synthesis，Inc.(温德姆，新罕布什尔州)，Acros Organics(费尔劳恩，新泽西州)，Maybridge Chemical Company,Ltd.(康沃尔，英格兰)，Tyger Scientific(普林斯顿，新泽西州)，AstraZeneca Pharmaceuticals(伦敦，英国)，Chembridge Corporation(美国)，Matrix Scientific(美国)，Conier Chem&Pharm Co.,Ltd(中国)，Enamine Ltd(乌克兰)，Combi-Blocks，Inc.(美国圣地亚哥)，Oakwood Products，Inc.(美国)，ApolloScientific Ltd.(英国)，Allichem LLC.(美国)和Ukrorgsyntez Ltd(拉脱维亚).Sigma-Aldrich Corporation，PharmaBlock(南京)R&D Co.Ltd，Accela ChemBio Co.,Ltd，Alputon(上海)Phamatech Co.,Ltd.，J&K Scientific Ltd。
中间体
中间体A1:(2,4-二氟-6-甲氧基苯基)甲胺
1,3-二氟-5-甲氧基苯(A1.2):向搅拌的A1.1(12.5g,96mmol)和K2CO3(66.0g,480mmol)在丙酮(400mL)中的悬液一次性加入甲基碘(27mL,480mmol)。然后反应混合物在60℃加热18小时。冷却至室温后，在真空下除去过量溶剂，加入150mL H2O，用Et2O(2×300mL)萃取。合并的有机层依次用NaOH水溶液(0.1M,100mL)和H2O(100mL)洗涤,经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到目标化合物(12.0g,80％)为无色油状物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.81(s,3H),6.43-6.46(m,3H).
2,4-二氟-6-甲氧基苯甲醛(A1.3):在0℃下，向A1.2(11.0g,76.4mmol)在100mLDCM的溶液中滴加TiCl4(12.5mL,114.8mmol)，然后加入二氯(甲氧基)甲烷(9.0mL,91.7mmol)。将混合物在0℃下搅拌90分钟并使其温热至室温30分钟。用150mL DCM稀释后，将混合物倒入碎冰中。收集有机层并用盐水(50mL)洗涤并减压浓缩。将残余物用硅胶色谱柱纯化，用PE/EtOAc＝10/1洗脱，得到目标化合物(4.5g,31％)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.95(s,3H),6.50-6.53(m,2H),10.35(s,1H).
(E)-2,4-二氟-6-甲氧基苯甲醛肟(A1.4):向A1.3(4.5g,26.2mmol)、NH2OH·HCl(3.6g,52.4mmol)在MeOH(50mL)和H2O(50mL)混合溶剂中的混合物中加入NaOH(3.1g,78.5mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩溶剂，残余物用EtOAc(100mL)稀释。所得溶液用HCl(1N,80mL)、NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤。浓缩合并的有机相，得到目标化合物(4.8g,96％)。LC-MS:[MH]+＝188.1.
中间体A1:在室温下，将A1.4(1000mg,5.2mmol)和Raney Ni(0.92g,10.7mmol)在MeOH(100mL)和NH3·H2O(14mL)中的混合物在H2气球下搅拌过夜。将悬浮液通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，得到目标化合物(900mg,98％)。LC-MS:[MH]+＝174.1.
中间体A2:(2,3-二氟-6-甲氧基苯基)甲胺
1,3-二氟-5-甲氧基苯(A2.2):在-70℃和N2下，向LDA(23.4mL)的25mL THF溶液中滴加A2.1(4.68g,32.5mmol)的10mL THF溶液。将混合物在-70℃下搅拌1小时，然后逐滴加入DMF(3.74mL)，将反应混合物在-70℃下再搅拌1小时，然后温热至室温。通过3mL CH3COOH和40mL H2O淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，将合并的有机层用H2O(100mL)、1N HCl(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc＝5：1)，得到目标化合物(2.9g,51.8％)，为黄色固体。LC-MS:[MH]+＝173.2.
(E)-2,3-二氟-6-甲氧基苯甲醛肟(A2.3):室温下，A2.2(2.9g,16.9mmol)、NH2OH.HCl(2.3g,33.8mmol)、CH3OH(45mL)和NaOH(2.7g,67.6mmol)在水(45mL)中的混合物搅拌3小时。浓缩混合物，向残余物中加入乙酸乙酯(200ml)。然后有机层用1N HCl(50mL×2)、饱和NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4干燥，蒸发得到目标化合物(2.2g,70％)，为白色固体。LC-MS:[MH]+＝187.8.
中间体A2:在20℃、H2氛围下，A2.3(2.2g,11.8mmol)、CH3OH(200mL)、NH4OH(30mL)和Raney Ni(1.5g)的混合物搅拌16小时。过滤混合物，浓缩滤液，得到目标化合物(2g，98％)，为无色油状物。LCMS:[MH]+＝173.9.
中间体A3:(2,4-二氟-5-甲氧基苯基)甲胺
2,4-二氟-5-甲氧基苯甲醛(A3.2):通过类似于A1.3的方法，用A3.1代替A1.2来制备目标化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.94(s,3H),6.99(t,1H),7.44(dd,1H),10.31(s,1H).
(E)-2,4-二氟-5-甲氧基苯甲醛肟(A3.3):通过类似于A1.4的方法，用A3.2代替A1.3来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝188.1.
2,4-二氟-5-甲氧基苄基氨基甲酸叔丁酯(A3.4):向A3.3(11.7g,62.6mmol)和Boc2O(20.5g,93.9mmol)的400mL MeOH溶液中加入Pd/C(2.5g,10％wt)。将混合物在真空下抽空，然后通过气球用H2回填四次。然后将其在40℃、H2(4.0Mpa)下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用MeOH(200mL×2)洗涤。减压浓缩滤液，得到目标化合物(15.6g，91％)，为白色固体。LC-MS:[MH]+＝218.1.
中间体A3:向A3.4(4.0g,14.65mmol)的二氧六环(120mL)溶液中加入30mL HCl(4mol/L)。将反应物在室温下搅拌2小时，然后在减压下浓缩，得到粗产物，为HCl盐形式。剩余物用MeOH/MeCN(1/4,250mL)稀释，然后加入K2CO3(6.7g,43.95mmol)并在60℃搅拌3h。冷却至室温后，滤出固体，并将滤液真空抽空，通过快速柱色谱(MeOH/EtOAc＝0％-25％)纯化，得到目标化合物(2.0g，80.0％)，为黄色油状物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.88(s,2H),3.90(s,3H),6.86(dd,1H),6.98(dd,1H).LC-MS:[MH]+＝174.1.
中间体A4:(3,6-二氟-2-甲氧基苯基)甲胺
3,6-二氟-2-甲氧基苄腈(A4.2):用钠(162mg,7mmol)分批处理甲醇(10mL)。将甲醇钠溶液冷却至室温并在室温下滴加到A4.1(1g,6.4mol)的甲醇(10mL)溶液中。将混合物在60℃下搅拌16小时，浓缩以在减压下除去溶剂。通过柱色谱(EA/PE＝0-50％)纯化残余物，得到目标化合物(600mg,55％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.18(s,3H),6.80-6.85(m,1H),7.27-7.34(m,1H).
中间体A4:向A4.2(600mg,3.55mmol)和NH4OH(5mL)的CH3OH(50mL)溶液中加入Raney Ni(0.6g),混合物在20℃、H2氛围下搅拌16h。过滤混合物，浓缩滤液，得到目标化合物(400mg，65％)。LC-MS:[MH]+＝174.1.
中间体A5:(2-氯-6-甲氧基苯基)甲胺
2-氯-6-甲氧基苄腈(A5.2):向A5.1(1.55g,10.0mmol)的100mL无水甲醇溶液中加入甲醇钠(4.32g,80mmol)。将混合物在85℃加热并搅拌过夜，然后在减压下浓缩以除去溶剂。将残余物用400mL DCM稀释，用饱和NH4Cl(2×20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。粗产物用柱色谱纯化(PE/EtOAc＝10：1)，得到目标化合物(1.5g,89.8％)，为淡黄色固体。LC-MS:[MH]+＝168.0.
中间体A5:向A5.2(334mg,2.0mmol)的10.0mL THF溶液中加入硼烷(2.0mol/L)。将混合物在90℃加热3小时，然后冷却至室温并用甲醇淬灭。将混合物真空浓缩，将残余物用另外50mL甲醇稀释，然后再除去。将该过程重复四次，得到目标化合物(300mg，88％)，为粗产物，其不经进一步纯化用于下一步骤。LC-MS:[MH]+＝172.1.
中间体A6:(2-氟-6-甲氧基苯基)甲胺
2-氟-6-甲氧基苄腈(A6.2):向A6.1(500g,3.6mol)的2.5L MeOH溶液中缓慢分批加入甲醇钠(388g,7.2mol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入15L H2O中，滤出沉淀物，用2.0L H2O洗涤两次，得到目标化合物(1140g)，为白色固体，粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.96(s,3H),6.79(dd,2H),7.52(dd,1H).
中间体A6:向A6.2(228g,粗)和145mL NH4OH的1.0L MeOH溶液中加入30g RaneyNi。将混合物在高压釜中在40℃、氢气氛(25atm)下搅拌8小时。过滤后，将滤液减压浓缩，得到浅黄色油状物，将其通过减压蒸馏纯化，得到目标化合物(60g，54％)，为无色油状物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.58(s,2H),3.67(s,1H),6.75(t,1H),6.82(d,1H),7.22(dd,1H).LC-MS:[MH]+＝156.1.
中间体B1:5-(二氟甲基)-2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶
4-氯-6-甲基烟酰氯(B1.2):将B1.1(15.3g,0.1mol)在POCl3(200mL)中的混合物加热到120℃并搅拌3小时。将混合物冷却至室温并浓缩。将残余物用DCM(100mL)稀释并浓缩，得到目标化合物(18g，100％)，为浅黄色油状物。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。
4-氯-6-甲基烟酸甲酯(B1.3):在B1.2(18g,0.1mol)的DCM(150mL)混合物中加入MeOH(30mL)并在室温搅拌20分钟。移除溶剂。将残余物用硅胶色谱法纯化，用PE/EtOAc＝5/1洗脱，得到目标化合物，为无色油状物(15.9g，86％)。LC-MS:[MH]+＝186.1.
4-氯-6-甲基吡啶-3-基)甲醇(B1.4):室温下向B1.3(1.0g,5.4mmol)的30mL甲醇中加入NaBH4(1.0g,27.0mmol)。然后反应混合物在室温搅拌5小时。移除溶剂。加入EtOAc(20mL)和水(15mL)。分离有机相并浓缩得到目标化合物(700mg，82％)，为无色油状物。LC-MS:[MH]+＝158.1.
4-氯-6-甲基烟碱醛(B1.5):室温下向B1.4(700mg,4.458mmol)的DCM(15mL)混合物中加入MnO2(1.94g,22.29mmol)。将混合物在室温下搅拌18小时，过滤，除去滤液，得到目标化合物(650mg，93％)，为浅黄色固体。LC-MS:[MH]+＝174.1.
4-氯-5-(二氟甲基)-2-甲基吡啶(B1.6):在0℃下，向B1.5(650mg,4.19mmol)的DCM(10mL)混合物中加入DAST(1.1mL,8.38mmol)。然后将混合物在0℃搅拌2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)。分离并浓缩有机相。将残余物用硅胶色谱法纯化，用PE/EtOAc＝3/1洗脱，得到目标化合物(600mg,81％)，为浅黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.60(s,3H),6.93(t,1H),7.26(s,1H),8.71(s,1H).
中间体B1:将B1.6(150mg,0.85mmol)、B2Pin2(237mg,0.93mmol)、KOAC(250mg,2.55mmol)、s-Phos(15mg,0.037mmol)和Pd(OAc)2(40mg,0.18mmol)在1,4-二氧六环(6mL)中的混合物用N2吹扫3次。然后将密封的反应在120℃下搅拌2小时。移除溶剂，残余物用DCM(5mL)溶解。过滤固体，浓缩滤液，得到目标化合物(300mg，60％)，为褐色油状物。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。LC-MS:[MH]+＝270.1.
中间体B2:2-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)乙腈
2-(3-溴吡啶-2-基)乙腈(B2.2):在-78℃，向MeCN(87mg,2.13mmol)的THF(8mL)溶液中加入n-BuLi(1.78mL,4.26mmol)并在-78℃搅拌1小时。然后在-78℃下，缓慢加入在THF(2mL)中的B2.1(500mg,2.13mmol)。将反应在-78℃搅拌1.5h，并温热至室温，用饱和NH4Cl溶液淬灭，用EA(100mL×3)萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过制备HPLC(流动相:MeCN/H2O(10nM)NH4HCO3))纯化以得到目标化合物(110mg,22％)，为白色固体。LCMS:[MH]+＝197.
中间体B2:向B2.2(110mg,0.56mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼烷)(285mg,1.12mmol)的6mL二氧六环溶液中加入KOAc(165mg,1.68mmol)和Pd(dppf)Cl2(41mg,0.056mmol)。悬液在95℃、N2下搅拌2小时。真空浓缩反应，残余物用PE(20mL×2)洗涤。将过滤在真空下浓缩，得到目标化合物(200mg，48％)，为黄色油状物。LC-MS:[MH]+＝245.
中间体B3:2-(6-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)乙腈
2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)乙腈(B3.2):在-78℃下向MeCN(142mg,3.47mmol)的THF(5mL)溶液中加入n-BuLi(3.47mL,3.47mmol)并搅拌1小时，然后在-78℃缓慢加入B3.1(200mg,1.05mmol)。混合物温热至室温并在室温搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，用EtOAc(100mL×3)萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过制备HPLC(流动相:MeCN/H2O(10nM NH4HCO3))纯化以得到目标化合物(220mg,64％)，为白色固体。LC-MS:[MH]+＝211.1.
中间体B3:通过类似于B2的方法，用B3.2代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝259.2.
中间体B4:2-甲基-2-(6-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)丙腈
2-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-2-甲基丙腈(B4.2):向B4.1(1.0g,5.26mmol)和异丁腈(1.87mL)的甲苯(20mL)溶液中加入NaHMDS(5mL,15.8mmol)，在120℃下搅拌2h。浓缩混合物并用水(20mL)稀释，然后用EA(20mL×3)萃取。将有机层干燥并浓缩，将其通过快速色谱法(正相，硅胶；EtOAc:PE＝1:4)纯化，得到目标化合物(480mg，38％)，为灰色油状物。LC-MS:[MH]+＝241.1.
中间体B4:通过类似于B2的方法，用B4.2代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝287.1.
中间体B5:1,1-二甲基-3-(6-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)脲
3-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-1,1-二甲基脲(B5.2):在N2下，将B5.1(502mg,2.0mmol)、1,1-二甲基脲(352mg,4.0mmol)、Pd2(dba)3(280mg,0.4mmol)、Xant-phos(23mg,0.4mmol)和Cs2CO3(1.3g,4.0mmol)的二氧六环(10mL)溶液密封在管中并在100℃搅拌1小时。浓缩混合物并用水(10mL)稀释，然后用EA(10mL×3)萃取。将有机层干燥并浓缩，通过快速色谱法(正相，硅胶；EA:PE＝1:17)纯化，得到目标化合物(68mg，13％)，为黄色固体。LC-MS:[MH]+＝257.7.
中间体B5:通过类似于B2的方法，用B5.2代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝306.2.
中间体B6:2-(氟甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶
(3-溴吡啶-2-基)甲醇(B6.2):将MeOH(10mL)中的B6.1(480mg,2.58mmol)和THF(5mL)混合物冷却至0℃，分批加入NaBH4(390mg,10.32mmol)。混合物搅拌4小时，然后浓缩，并用水(30mL)稀释，然后用DCM(30mL×3)萃取。有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4干燥，蒸发得到目标化合物(400mg,82％)，为白色固体。LC-MS:[MH]+＝188.0.
3-溴-2-(氟甲基)吡啶(B6.3):在0℃下，向B6.2(300mg,1.6mmol)的DCM(20mL)混合物中滴加DAST(1.03g,6.4mmol)。将混合物在0℃下搅拌3小时，然后用饱和NaHCO3(40mL)淬灭。用DCM(40mL×2)萃取，有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并在硅胶上纯化(0-50％EtOAc的PE溶液)，得到目标化合物(120mg，39％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 5.60(d,2H),7.22(dd,1H),7.93(d,1H),8.61(d,1H).
中间体B6:通过类似于B2的方法，用B6.3代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝238.2.
中间体B7:(4-(二氟甲基)嘧啶-5-基)硼酸
6-(二氟甲基)嘧啶-4-醇(B7.2):甲基B7.1(6.4g,38.5mmol)、甲脒(4.0g,38.5mmol)和CH3ONa(2.7g,50.1mmol)的MeOH(100mL)的混合物在室温搅拌18小时。移除溶剂。将残余物溶于50mL水中。将溶液调节至pH～4。冷却至5℃后，过滤固体得到目标化合物(6.0g，98％)，为黄色固体。LC-MS:[MH]+＝147.1.
5-溴-6-(二氟甲基)嘧啶-4-醇(B7.3):B7.2(6.0g,38.5mmol)和NBS(7.5g,42.4mmol)在DMF(15mL)中的混合物在40℃搅拌4h。加入水(100mL)和EA(100mL)。分离有机相并浓缩得到目标化合物(4.5g，49％)，为黄色固体。LC-MS:[MH]+＝224.9.
5-溴-4-氯-6-(二氟甲基)嘧啶(B7.4):B7.3(4.5g，20.1mmol)在POCl3(20mL)中的混合物在110℃下搅拌2小时。冷却至室温后，浓缩混合物，将残余物倒入冰水(10mL)中，然后用DCM(20mL×2)萃取。浓缩有机相并用硅胶色谱柱纯化，用PE/EA＝5/1洗脱，得到目标化合物(3.2g,67％)，为黄色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 6.87(t,1H),9.02(s,1H).
5-溴-4-(二氟甲基)-6-肼基嘧啶(B7.5):在0℃下，向B7.4(2.0g,8.2mmol)的EtOH(10mL)混合物中滴加EtOH(10mL)中的水合肼(1.03g,20.6mmol)。搅拌10分钟后，加入H2O(5mL)。过滤固体得到目标化合物(1.8g，90％)，为黄色固体。LC-MS:[MH]+＝239.1.
5-溴-4-(二氟甲基)嘧啶(B7.6):在0℃下，向MnO2(6.6g,75.3mmol)在CHCl3(20ml)中的混合物加入CHCl3(10ml)中的B7.5(1.8g,7.53mmol)。混合物室温搅拌0.5小时。然后过滤MnO2，浓缩滤液。将残余物用硅胶色谱柱纯化，用PE/EtOAc＝5/1洗脱，得到目标化合物(0.7g,44％)，为黄色油状物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 6.80(t,1H),9.00(s,1H),9.25(s,1H).
中间体B7:通过类似于B2的方法，用B7.6代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝175.1.
中间体B8:5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-2-(三氟甲基)吡啶
4-氯-2-(三氟甲基)吡啶(B8.2):将B8.1(2.0g,12.3mmol)在POCl3(10mL)中的混合物在110℃下搅拌2h。然后除去额外的POCl3。将残余物倒入冰水(30mL)中。过滤固体得到目标化合物(1.5g，68％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.54(d,1H),7.74(s,1H),8.68(d,1H).
4-氯-5-甲基-2-(三氟甲基)吡啶(B8.3):在-78℃下，向B8.2(1.5g,8.3mmol)的THF(20mL)溶液中滴加LDA(6mL,12mmol)。混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后加入甲基碘(1.4g，9.96mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜，然后用饱和NH4Cl(15mL)淬灭，用Et2O(20mL×2)萃取。浓缩合并的有机相，得到目标化合物(1.5g,94％)，为黄色油状物。
中间体B8:通过类似于B2的方法，用B8.3代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝288.1.
中间体B9:2-氟-5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶
4-溴-2-氟-5-甲基吡啶(B9.2):在-78℃下，向B9.1(300mg,1.596mmol)的THF(10mL)溶液中加入LDA(2M,0.8mL)，且混合物在-78℃搅拌2小时。将混合物用10mL H2O淬灭并用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层浓缩得到粗产物，将其通过快速色谱法(正相，硅胶；PE:EtOAc＝0-100％,UV254&UV280)纯化，得到目标化合物(130mg，43％)，为黄色油状物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.37(s,3H),7.19(d,1H),8.05(s,1H).
中间体B9:通过类似于B2的方法，用4-溴-2-氟-5-甲基吡啶(B9.2)代替2-(3-溴吡啶-2-基)乙腈来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝238.1.
中间体B10:4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶
6-乙基嘧啶-4-醇(B10.2):甲基B10.1(20g,154mmol)、醋酸甲脒(20g,192mmol)、CH3ONa(20g,370mmol)和MeOH(160mL)的混合物在20℃搅拌16小时。将混合物用水(40mL)稀释，加入CH3COOH(20mL)以将pH调至7，蒸发，然后用水(40mL)稀释，用EA(100mL x 4)萃取，经Na2SO4干燥并浓缩。所得固体用EtOAc(30mL)研磨，过滤得到目标化合物(7g，37％)，为白色固体。LC-MS:[MH]+＝125.2.
5-溴-6-乙基嘧啶-4-醇(B10.3):在0℃下，向B10.2(5g,40mmol)、NaHCO3(3.36g,40mmol)在H2O(15mL)中的混合物中滴加Br2(6.39g,40mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时，用EtOAc(30mL×3)萃取，浓缩并在硅胶上纯化(PE/EA＝0-100％)，得到目标化合物(4g，47％)，为白色固体。LC-MS:[MH]+＝205.2.
5-溴-4-氯-6-乙基嘧啶(B10.4):将B10.3(2g,10mmol)在POCl3(10mL)中的混合物加热到70℃并搅拌16小时。将混合物倒入冰水中并在0℃下用30％NaOH溶液中和至pH＝5-7，用EA(50mL×2)萃取，浓缩并在硅胶上纯化(PE/EA＝0-50％)得到目标化合物(1.3g，58％)，为无色油状物。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.22(t,3H),2.93(q,2H),8.89(s,1H).
5-溴-4-乙基嘧啶(B10.5):将B10.4(1.3g,5.9mmol)、pTSH(3.3g,17.7mmol)在CH3Cl(20mL)中的混合物加热到90℃并搅拌16小时。浓缩混合物，然后加入10％Na2CO3(20mL)并在90℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc(30mL×3)萃取，合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并在硅胶上纯化(PE/EtOAc＝0-30％)，得到目标化合物(450mg，40％)，为无色油状物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.31(t,3H),2.95(q,2H),8.72(s,1H),9.02(s,1H).
中间体B10:通过类似于B2的方法，用B10.5代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝235.1.
中间体B11:2-氟-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶
4-溴-2-氟-3-甲基吡啶(B11.2):在-78℃下，向B11.1(2g,11.3mmol)的THF(40mL)混合物中滴加LDA(2M,8.5mL)。混合物在-78℃下搅拌1小时,然后滴加甲基碘(4.8g,34mmol)。混合物在-78℃下搅拌1小时,并在1小时内温热至室温。在0℃下用饱和NH4Cl(50mL)淬灭混合物，然后用EA(60mL×3)萃取，将有机层用盐水(60mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。残余物用硅胶纯化(PE/EtOAc＝0-50％)，得到目标化合物(1g,47％)，为黄色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.35(s,3H),7.36(d,1H),7.86(d,1H).
中间体B11:通过类似于B2的方法，用B11.2代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝238.1.
中间体B12:2,4-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶
5-溴-2,4-二甲基吡啶(B12.2):向三颈烧瓶中加入无水THF(50mL)中的B12.1(2.51g,10.0mmol)和Pd(PPh3)4(1.15g,1.0mmol)。将混合物在N2下保护并在0℃下搅拌。缓慢加入MeMgBr/THF(15mL,15.0mmol,1mol/L)。添加后，将混合物回流3小时，冷却至室温，用1N HCl淬灭反应混合物并用EtOAc(100mL×3)萃取。将有机层用H2O(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥并在真空下浓缩，并通过Biotage快速色谱法纯化粗产物。得到目标化合物(301mg，16.2％)，为无色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.35(d,3H),2.47(s,3H),7.04(s,1H),8.50(s,1H).
中间体B12:通过类似于B2的方法，用B12.2代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝234.2.
中间体B13:2-(2-乙基-4-(甲基磺酰基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷
(3-乙基苯基)(甲基)硫烷(B13.2):在-78℃下，向B13.1(3g,16mmol)的THF(30mL)混合物中滴加n-BuLi(7.7mL)。混合物在-78℃下搅拌1小时,然后滴加1,2-二甲基砜(3g,32mmol)。混合物在-78℃下搅拌1小时,并在1小时内温热至室温。将混合物冷却至0℃，加入饱和NH4Cl(50mL)，然后用EA(50mL×3)萃取，将有机层用H2O(10mL)和盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。残余物用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc＝0-20％)，得到目标化合物(1.7g,70％)，为无色油状物。
(4-溴-3-乙基苯基)(甲基)硫烷(B13.3):将AcOH(10mL)中的B13.2(456g,3mmol)混合物冷却至0℃，滴加Br2(479g,3mmol)。将混合物在25℃下搅拌3小时，浓缩并通过硅胶柱色谱法(PE)纯化，得到目标化合物(600mg，86％)，为无色油状物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.25(t,3H),2.49(s,3H),2.75(q,2H),6.95(dd,1H),7.14(d,1H),7.44(d,1H).
1-溴-2-乙基-4-(甲基磺酰基)苯(B13.4):在0℃下，向B13.3(600mg,2.6mmol)的DCM(20mL)混合物中加入mCPBA(1.34g,7.8mmol)。混合物在25℃搅拌16小时，然后加入1NNaOH(40mL)，用DCM(50mL×2)萃取。用盐水(50mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，浓缩。残余物用硅胶纯化(PE/EtOAc＝0-50％)，得到目标化合物(350mg,51％)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.21(t,3H),2.81(q,2H),3.25(s,3H),7.67(dd,1H),7.87-7.90(m,1H).
中间体B13:通过类似于B2的方法，用1-溴-2-乙基-4-(甲基磺酰基)苯(B13.4)代替2-(3-溴吡啶-2-基)乙腈(B2.2)来制备目标化合物。
中间体B14:2-异丁基-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶
5-溴-4-甲基-2-(甲硫基)嘧啶(B14.2):在0℃下，将甲硫醇钠(1.04g,11.6mmol)分批加入到B14.1(2.0g,9.66mmol)的DMF(20mL)溶液中。添加后，将混合物在室温下搅拌16小时，然后倒入水(100mL)中并用EtOAc(50mL×3)萃取。将有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，然后真空浓缩，得到目标化合物(2.0g，94.5％)，为黄色油状物。LC-MS:[MH]+＝218.8.
5-溴-4-甲基-2-(甲基磺酰基)嘧啶(B14.3):在0℃下，将m-CPBA(7.4g,36.5mmol)加入到B14.2(2.0g,9.1mmol)的DCM(100mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌16小时，然后用H2O(200mL)淬灭，用DCM(100mL×3)萃取。将有机层用Na2CO3水溶液(100mL×2)、H2O(100mL)、盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并在真空下浓缩。通过快速色谱法(PE/EtOAc＝10％～30％)纯化粗产物，得到目标化合物，为淡黄色固体(1.8g，71.4％)。LC-MS:[MH]+＝251.0.
5-溴-2-异丁基-4-甲基嘧啶(B14.4):在0℃下，向B14.3(1.2g,4.78mmol)的无水***(100mL)悬液中滴加异丁基溴化镁(5.74mL,5.74mmol)。添加后，将混合物在室温搅拌2小时，用NH4Cl溶液淬灭并用EtOAc(50mL×3)萃取。将有机层用H2O(50mL)、盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并在真空下浓缩。通过快速色谱法(PE/EtOAc＝10:1)纯化粗产物，得到目标化合物，为无色油状物(1.0g，75.6％)。LC-MS:[MH]+＝229.1.
中间体B14:通过类似于B2的方法，用B14.4代替B2.2来制备目标化合物。LC-MS:[MH]+＝277.2.
中间体B15:三异丙氧基锂(3-甲基吡啶-2-基)硼酸基)嘧啶
B15.1(1g,5.81mmol)溶于THF(5mL)中。将所得溶液冷却至-78℃，保持10分钟，此时在20分钟内缓慢加入n-BuLi/环己烷(2M，3.2mL)。在将温度保持在-78℃以下40分钟后，在10分钟内逐滴加入硼酸三异丙酯，然后在-78℃下搅拌1小时，随后温热至室温并在室温下搅拌18小时。加入异丙醇(1mL)，然后将反应混合物搅拌10分钟，再使其静置不搅拌10分钟。过滤收集所得沉淀物，然后用THF洗涤，在N2下干燥1.5小时，得到目标化合物(1.2g，72％)。LC-MS:[MH]+＝138(来自于对应硼酸的质量).
中间体B16:2,4-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)嘧啶
5-溴-2,6-二甲基嘧啶-4-醇(B16.2):向B16.1(100g,0.8mol,1.0eq)的1.0L氯仿溶液中滴加溴(153.4g,0.96mol,1.2eq)。然后将混合物在50℃搅拌过夜。冷却至室温后，蒸发过量溶剂并加入500mL乙酸乙酯，再在减压下除去。该过程重复三次。室温下将黄色固体在100mL乙酸乙酯中搅拌30分钟。过滤后，将残余物用乙酸乙酯(100mL×2)洗涤，得到目标化合物(135g，82％)，为白色固体。LC-MS:[MH]+＝205.
5-溴-4-氯-2,6-二甲基嘧啶(B16.3):将B16.2(134g,0.66mol)在500mL POCl3中的混合物在110℃下搅拌18小时。在真空下除去过量的POCl3，将残余物倒入1000g碎冰中。然后小心加入固体NaHCO3以将pH调节至8-9。用乙酸乙酯(1.5L×3)萃取水层，合并的有机层用盐水(1.0L×2)洗涤,经Na2SO4干燥，浓缩得到目标化合物(71g,48％)，为白色固体。LC-MS:[MH]+＝223.
5-溴-4-肼基-2,6-二甲基嘧啶(B16.4):在0℃下，向350mL乙醇中的水合肼(NH2NH2·H2O,32g,0.64mol,98％)滴加B16.3(70g,0.32mol)的350mL甲醇溶液。反应混合物室温搅拌16小时。减压除去溶剂，将残余物用500mL水稀释，用CHCl3(500mL×3)萃取。合并的有机层用500mL盐水洗涤,经Na2SO4干燥，浓缩得到目标化合物(63g,91％)，为黄色固体。LC-MS:[MH]+＝219.
5-溴-2,4-二甲基嘧啶(B16.5):在0℃下，向MnO2(96g,1.1mol)的1.0L CHCl3悬液中滴加B16.4(47g,0.22mol)的1.0L CHCl3溶液。混合物室温搅拌2小时。过滤并浓缩后，将残余物在100-200目硅胶柱(PE:EA＝100:0至50:50)上纯化，得到目标化合物(30g，73％)，为黄色固体。LC-MS:[MH]+＝189.
中间体B16:在90℃下，将B16.5(12g,64mmol)、双(频哪醇合)二硼(22.8g,89.6mmol,1.4eq)、KOAc(18.8g,192mmol,3.0eq)和Pd(dppf)Cl2(2.34g,3.2mmol)在200mL无水二氧六环中的混合物加热并在N2下搅拌4小时。减压除去溶剂，将残余物用300mL混合溶剂(PE:EtOAc＝4:1)稀释，过滤并浓缩。粗产物用快速柱色谱纯化(PE:EtOAc＝2:1至1:1)，得到目标化合物(10g,66％)，为黄色油状物。LC-MS:[MH]+＝235.
中间体4'a:(8-溴-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-基)(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯
3-溴-6-氯-2-肼基吡啶(2a):将EtOH(80mL)中1a(4g,17.63mmol)和水合肼(4mL,98％)的混合物在80℃下加热18小时。冷却后，过滤固体并用EtOH(10mL)洗涤。将固体真空干燥，得到目标化合物(2.1g，44％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 4.30(s,2H),6.57(d,1H),7.73(d,1H),7.84(s,1H).LC-MS:[MH]+＝222.
8-溴-5-氯-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶(3a):将2a(2.1g,9.44mmol)在原甲酸三甲酯(15mL,137mmol)中的混合物在110℃下加热搅拌1.5小时。冷却后，过滤固体并用PE洗涤，然后将固体真空干燥，得到目标化合物(1.5g，68％)。LC-MS:[MH]+＝232.
8-溴-N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺(4a):向3a(1g,4.33mmol)的EtOH(0.5mL)溶液中加入(2-氟-6-甲氧基苯基)甲胺(1.5g,9.68mmol)，且混合物在85℃搅拌8小时。加入5mL EtOAc并过滤，得到白色固体，将其通过快速色谱法纯化，得到目标化合物(0.45g，30％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.88(s,3H),4.45(s,2H),5.98(d,1H),6.89(t,1H),6.96(d,1H),7.36-7.45(m,1H),7.60(d,1H),9.55(s,1H).LC-MS:[MH]+＝351.
中间体4'a:将4a(4.9g,14.0mmol)、(Boc)2O(6.1g,28.0mmol)、DIEA(5.4g,42.0mmol)和DMAP(340mg,2.8mmol)在MeCN(100mL)中的混合物用N2脱气，并在90℃搅拌18小时。反应混合物倒入饱和NH3Cl溶液中，用EtOAc(150mL×3)萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。残余物用硅胶色谱纯化(PE:EtOAc＝5:1至1:2)，得到目标化合物(5.8g,92％)，为黄色固体。LCMS:[MH]+＝453.0.
中间体4b和4c用与4a类似的方法制备，并从其各自的中间体3b和3c进行改性。例如中间体3b:5-氟-8-碘-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶如下制备：
6-氟-2-肼基-3-碘吡啶(2b):向1b(3.5g,12.78mmol)的EtOH(28mL)的混合物中加入水合肼(3.5mL)。将混合物在30℃加热4小时，然后通过过滤收集固体并用冷EtOH洗涤。将粗产物用EtOH重结晶，得到目标化合物(900mg，28％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.14(dd,1H),7.99(t,1H).LC-MS:[MH]+＝254.
中间体3b:将2b(840mg,3.32mmol)在原甲酸三甲酯(0.8mL)中的混合物在100℃下加热搅拌80分钟。然后在100℃下向混合物中加入一滴TFA。在100℃下搅拌10分钟后，浓缩混合物以除去原甲酸三甲酯和TFA，得到目标化合物(830mg，95％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.74(dd,1H),7.97(dd,1H),9.65(s,1H).LC-MS:[MH]+＝264.
制备6-氟化中间体4d:8-溴-6-氟-N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺(4d)
在5分钟内，缓慢向MeOH(24mL)中的4a(540mg,1.6mmol)和MeCN(36mL)的混合物中加入1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷四氟硼酸盐(544mg,1.6mmol)。然后混合物在室温搅拌10分钟。除去溶剂并通过制备TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化残余物，得到目标化合物，为黄色固体(150mg，26％)。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 3.68(s,3H),4.62(d,2H),6.78-6.86(m,3H),7.31(dd,1H),7.92(d,1H),9.55(s,1H).LC-MS:[MH]+＝369.1.
实施例1
N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
在N2下，向4a(50mg,0.142mmol)、1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(59.2mg,0.285mmol)和NaHCO3(35.9mg,0.427mmol)的二氧六环(2mL)与H2O(1mL)的溶液中加入PdCl2(dppf)(15.63mg,0.021mmol)。反应混合物加热到90℃搅拌1小时。反应混合物浓缩并通过制备HPLC纯化，得到目标化合物(22mg，35％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.79(s,3H),3.90(s,3H),4.55(d,2H),6.34-6.36(m,1H),6.50(s,1H),6.88-6.93(t,1H),6.98(d,1H),7.41(dd,1H),7.53(s,1H),7.62-7.64(m,1H),8.02(s,1H),9.62(s,1H).LC-MS:[MH]+＝353.1.
实施例2
N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
将4a(8g,22.78mmol)、2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(6.99g,31.9mmol)、PdCl2(dppf)(1.667g,2.278mmol)和Na2CO3(7.24g,68.3mmol)在二氧六环(100mL)和H2O(50mL)中的混合物置于N2下，密封并用油浴在120℃加热5小时。将混合物冷却至室温，用Et萃取(100mL×3)。合并有机萃取物，用Na2SO4干燥。通过柱色谱(用DCM:MeOH,100:3至100:10洗脱，柱：120g硅胶)纯化残余物，得到目标化合物(5.8g，70％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.37(s,3H),3.89(s,3H),4.50(s,2H),6.14(d,1H),6.90(t,1H),6.97(d,1H),7.27-7.33(m,2H),7.38-7.44(m,1H),7.52(s,1H),7.73(dd,1H),8.48(dd,1H),9.50(s,1H).LC-MS:[MH]+＝364.1.
实施例3
8-(2,4-二甲基嘧啶-5-基)-N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
在N2下，向搅拌的B16(42g,120mmol)、4a(56.2g,240mmol)和NaHCO3(30.2g,360mmol)在1,4-二氧六环(500mL)和H2O(250mL)混合溶液中的悬液中加入Pd(dppf)Cl2(8.8g,12mmol)。在110℃下搅拌1小时后，将混合物在真空下蒸发以除去1,4-二氧六环，用DCM/MeOH(600mL,v/v＝10/1)稀释并过滤。将滤饼依次在室温下用水(600mL)、在70℃下用MeOH(1000mL)浆化30分钟。将所得固体在回流下溶解在MeOH(2000mL)中，通过硅藻土过滤并立即浓缩。将残余物用丙酮(200mL)稀释，在50℃下加热并搅拌2小时。冷却至室温后，过滤混合物得到目标化合物(19g，42％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δ2.35(s,3H),2.63(s,3H),3.89(s,3H),4.51(d,2H),6.15(d,1H),6.89(t,1H),6.96(d,1H),7.30-7.45(m,2H),7.58(t,1H),8.58(s,1H),9.51(s,1H).LC-MS:[MH]+＝379.1.
实施例4
N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-8-(2-异丁基-4-甲基嘧啶-5-基)-[1,2,4]***并[4,3a]-吡啶-5-胺
4a(381.5mg,1.09mmol)、B14(601.7mg,2.18mmol)、PdCl2(dppf)·CH2Cl2(100mg,0.11mmol)和NaHCO3(275mg,3.27mmol)在二氧六环/H2O(30mL/15mL)中的混合物用N2吹扫，温热至100℃并搅拌2h。将所得混合物冷却至室温并过滤。通过制备HPLC纯化滤液得到目标化合物(230mg，50.2％)，为米黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.95(d,2H),2.24-2.29(m,1H),2.37(s,3H),2.75(d,2H),3.89(s,3H),4.50(s,2H),6.15(d,1H),6.87-6.98(m,2H),7.37-7.42(m,2H),7.59(s,1H),8.61(s,1H),9.52(s,1H).LC-MS:[MH]+＝421.3.
实施例5
N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-8-(吡啶-2-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
向4a(30mg,0.085mmol)、6-甲基-2-(吡啶-2-基)-1,3,6,2-二恶唑硼烷-4,8-二酮(40.0mg,0.171mmol)、2,2'-氮杂二基二乙醇(13.47mg,0.128mmol)和X-Phos预催化剂(氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2-氨基乙基)苯基]钯(II)甲基叔丁基醚加合物)(3.16mg,4.27μmol)在DMF(1.5mL)中的混合物中快速加入K3PO4(109mg,0.513mmol)和Cu(OAc)2(11.64mg,0.064mmol)。然后将混合物用N2吹扫30秒。将反应混合物在120℃下加热3小时。冷却至室温后，将混合物用H2O(10mL)稀释，用EA(20mL×3)萃取，并浓缩EA层。用酸性制备HPLC纯化残余物，得到目标化合物(4.2mg，10％)，为三氟乙酸盐。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.90(s,3H),4.61(d,2H),6.49(d,1H),6.89-6.95(m,1H),6.99(d,1H),7.39-7.47(m,2H),8.03(s,1H),8.59(d,1H),8.72(s,2H),9.69(s,1H).LC-MS:[MH]+＝350.0.
实施例6
N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-8-(3-甲基吡啶-2-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
向DMF(2mL)中依此加入B15(65.4mg,0.228mmol)、CuCl(3.38mg,0.034mmol)和ZnCl2(15.52mg,0.114mmol)并脱气5分钟。顺序加入Cs2CO3(74.2mg,0.228mmol)和4a(40mg,0.114mmol)，溶液再脱气5分钟。然后加入PdCl2(dppf)(4.17mg,5.70μmol)。将反应混合物在120℃下加热3小时。将反应混合物冷却至室温，加入盐水(10mL)和EA(10mL)，并过滤。用EA(20mL×3)萃取所得混合物。将有机层合并，干燥(Na2SO4),过滤并浓缩。用碱性制备HPLC纯化残余物，得到目标化合物(2.5mg，6％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.19(s,3H)3.90(s,3H),4.52(s,2H),6.17(d,1H),6.91(t,1H),6.98(d,1H),7.32-7.45(m,3H),7.72(d,1H),8.48(d,1H),9.50(s,1H).LCMS:[MH]+＝364.1.
实施例7
8-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
8-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-基(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯(7.1):将Pd2(dba)3(18mg,0.02mmol)和Me4-t-BuXPhos(二叔丁基(2',4',6'-三异丙基-3,4,5,6-四甲基-[1,1'-联苯基]-2-基)膦)(19.2mg,0.04mmol)的1.0mL无水二氧六环悬液加热到120℃保持10分钟。然后将其转入搅拌的4'a(90mg,0.2mmol)、2,4-二甲基-1H-咪唑(85mg,0.88mmol)和K3PO4(110mg,0.52mmol)在2.0mL无水二氧六环中的悬液。将反应混合物在120℃搅拌过夜，然后减压蒸发，得到黑色残余物，将其通过快速色谱(硅胶，DCM:CH3OH＝0-25％,UV214&UV254)纯化，得到目标化合物(27mg，15％)，为黄色油状物。LC-MS:[MH]+＝467.2.
实施例7将7.1(27mg,0.06mmol)在6mL 1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇中的溶液在Biotage微波反应器中在120℃下加热1h。将混合物真空蒸发，得到黄色油状物，将其通过制备HPLC纯化，得到目标化合物(9mg，42％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm 2.06–2.16(m,6H),3.88(s,3H),4.49(d,2H),6.05(d,1H),6.90(dd,2H),6.96(d,1H),7.40(dd,2H),7.65(t,1H),9.54(s,1H).LC-MS:[MH]+＝367.2.
实施例8
(N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-8-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
4'a(90mg,0.2mmol)、1-甲基-1H-咪唑(38mg,0.4mmol)、KOAc(60mg,0.6mmol)和Pd(OAc)2(15mg,0.062mmol)在DMAc(0.5mL)中用N2吹扫1分钟。然后将密封反应瓶在150℃搅拌5小时。混合物依次通过制备TLC(DCM/MeOH＝10/1)和制备HPLC(MeCN:H2O:NH4HCO3＝1/1/0.05)纯化以得到目标化合物(10mg,14％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm3.64(s,3H),3.88(s,3H),4.49(d,2H),6.10(d,1H),6.89(t,1H),6.96(d,1H),7.13(s,1H),7.35(d,1H),7.40(dd,1H),7.54(t,1H),7.72(s,1H),9.50(s,1H).LC-MS:[MH]+＝352.8.
实施例9
N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-8-(5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
5-(叔丁氧羰基(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-8羧酸甲酯(9.1):将4'a(4.8g,10.6mmol)、TEA(7.09g,70.2mmol)和PdCl2(dppf)(288mg,1.06mmol)在MeOH(20mL)中的混合物置于15atm CO下并在85℃搅拌12h。将所得混合物冷却至室温并倒入饱和NaHCO3溶液中。混合物用EtOAc(100mL×3)萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。残余物用硅胶色谱纯化(PE:EA＝1:1)，得到目标化合物4.0g(87％)，为灰色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.20(s,9H),3.38(s,3H),3.93(s,3H),4.88(d,1H),5.08(d,1H),6.69–6.72(m,2H),7.00(s,1H),7.21-7.26(dd,1H),8.05(d,1H),8.96(s,1H).LC-MS:[MH]+＝431.
5-(叔丁氧羰基(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-8-羧酸(9.2):将9.1(3.0g,6.98mmol)和LiOH.H2O(1.17g,27.9mmol)在MeOH/THF/H2O(10mL/10mL/10mL)的混合溶剂中的混合物在室温下搅拌2小时。将所得混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭并用EtOAc(100mL x 3)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并过滤。浓缩滤液得到目标化合物(2.5g，86％)，为黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.30(s,9H),3.41(s,3H),4.82(d,1H),5.07(d,1H),6.69–6.72(m,2H),6.97(s,1H),7.22-7.26(dd,1H),7.99(d,1H),8.92(s,1H).LC-MS:[MH]+＝417.
8-(2-乙酰肼羰基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-基(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯(9.3):向9.2(200mg,0.48mmol)和DIEA(124mg,0.96mmol)的DCM(10mL)溶液中加入氯甲酸异丙酯(72mg,0.53mmol)并搅拌。将所得混合物在室温下搅拌1小时，然后加入乙酰肼(53mg,0.72mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后倒入NaHCO3饱和溶液，并用EtOAc(50mL×3)萃取。合并有机萃取物并用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到目标化合物(220mg，92％)，将其不经进一步纯化用于下一步骤。LC-MS:[MH]+＝473.
实施例9将13(100mg,0.21mmol)的POCl3(5mL)溶液在110℃下搅拌3小时。冷却至室温后，浓缩混合物，倒入冰中，小心地用饱和NaHCO3溶液中和。用EA(50mL×3)萃取混合物。合并有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。残余物通过制备HPLC(MeCN/H2O(10nM)NH4HCO3))纯化以得到目标化合物(16mg,22％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm2.59(s,3H),3.88(s,3H),4.56(s,2H),6.25(d,1H),6.89(t,1H),6.96(d,1H),7.41(dd,1H),8.04(d,1H),8.17(s,1H),9.61(s,1H).LC-MS:[MH]+＝355.1.
实施例10
8-(5-乙基-1,2,4-恶二唑-3-基)-N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
8-氰基-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-基(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯(10.1):将4'a(500mg,1.1mmol)、ZnCN2(1.28g,11.0mmol)和Pd(PPh3)4(254mg,0.22mmol)在DMF(10mL)中的混合物在120℃下搅拌3h。过滤反应混合物并通过制备HPLC(MeCN/H2O(10nM)NH4HCO3))纯化以得到目标化合物(140mg,32％)，为白色固体。LC-MS:[MH]+＝398.
2-氟-6-甲氧基苄基(8-(N-羟基甲脒基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(10.2):将10.1(140mg,0.35mmol)、羟胺盐酸盐(73mg,1.06mmol)和DIEA(137mg,1.06mmol)在EtOH(10mL)中的混合物在90℃下搅拌18h。将得到的混合物冷却至室温，浓缩，加入饱和NaHCO3溶液，然后用DCM(50mL×3)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并过滤。浓缩滤液，得到目标化合物(120mg,80％)。LC-MS:[MH]+＝431.
8-(5-乙基-1,2,4-恶二唑-3-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-基(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯(10.3):10.2(100mg,0.23mmol)和丙酸酐(90mg,0.698mmol)在甲苯(2mL)中的混合物在125℃搅拌18小时。将得到的混合物冷却至室温，倒入饱和NaHCO3溶液中，然后用EtOAc(50mL×3)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到目标化合物(130mg)，将其不经进一步纯化用于下一步骤。LC-MS:[MH]+＝469.
实施例10将10.3(130mg,0.28mmol)的HCl/二氧六环(10mL)溶液在室温下搅拌4h。将混合物浓缩，用饱和NaHCO3溶液淬灭，然后用EA(50mL×3)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。残余物通过制备HPLC(MeCN/H2O(10nM)NH4HCO3))纯化以得到目标化合物(4mg,4％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm 1.35(t,3H),3.00(q,2H),3.87(d,3H),),4.55(d,2H),6.24(d,1H 6.89(t,1H),6.96(d,1H),7.40(dd,1H),8.03(t,,1H),(d,1H),8.09(d,1H),9.57(s,1H).LC-MS:[MH]+＝369.
实施例11
N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-8-(3-甲基-1,2,4-恶二唑-5-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
(E)-8-((1-氨基亚乙基氨基氧基)羰基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-基(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯(11.2):9.2(250mg,0.6mmol)和CDI(116mg,0.72mmol)在DCM(15mL)中的混合物在室温搅拌2小时。加入(Z)-N'-羟基乙脒(133mg,1.80mmol)并在室温搅拌18小时。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液中，然后用EtOAc(50mL×3)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到目标化合物(260mg,93％)，为黄色油状物，将其不经进一步纯化用于下一步骤。LC-MS:[MH]+＝473.
2-氟-6-甲氧基苄基(8-(3-甲基-1,2,4-恶二唑-5-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(11.3):11.2(100mg,0.21mmol)和TBAF(0.21mL,0.21mmol)在MeCN(5mL)中的混合物在室温搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液中，然后用EtOAc(50mL×3)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并过滤。浓缩滤液得到目标化合物(100g)，为黄色油状物，其不经进一步纯化用于下一步骤。LC-MS:[MH]+＝455.
实施例11将11.3(100mg,0.22mmol)的HCl于二氧六环(10mL)中的溶液在室温下搅拌4小时。将混合物浓缩，用饱和NaHCO3溶液淬灭，用EA(50mL×3)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并过滤。浓缩滤液，残余物通过制备HPLC(MeCN/H2O(10nM)NH4HCO3))纯化以得到目标化合物(25mg,32％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.39(s,3H),3.88(s,3H),4.59(s,2H),6.30(d,1H),6.89(t,1H),6.96(d,1H),7.41(dd,1H),8.24(d,1H),8.44(s,1H),9.61(s,1H).LCMS:[MH]+＝355.1.
实施例12
8-溴-6-氟-N-(2-氟-6-甲氧基苄基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
将PdCl2(dppf)(15mg,0.021mmol)加入到B16(41mg,0.18mmol)、4d(50mg,0.14mmol)和NaHCO3(36mg,0.42mmol)在1,4-二氧六环(2mL)和H2O(1mL)的搅拌的悬液中。在氮气下，将混合物在110℃下在密封管中搅拌40分钟，并冷却至室温。浓缩所得混合物并通过制备HPLC(MeCN:H2O:NH4HCO3＝1/1/0.05)纯化以得到目标化合物(27mg,49％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.37(s,3H),2.65(s,3H),3.71(s,3H),4.71(d,2H),6.91-6.81(m,3H),7.34(dd,1H),7.62(d,1H),8.63(s,1H),9.52(s,1H).LC-MS[MH]+＝397.1.
实施例13
N-(2,3-二氟-6-甲氧基苄基)-8-(4-((二甲基氨基)甲基)苯基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺
1-(4-(5-氯-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-8-基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(13.1)3a(800mg,3.44mmol)、相应硼酸(742mg(盐酸盐),3.44mmol)、PdCl2(dppf)(20mg,0.027mmol)和NaHCO3(1156mg,13.77mmol)在二氧六环(8mL)和H2O(4mL)中的混合物用N2吹扫，然后用油浴加热到95℃保持6小时。浓缩混合物以除去溶剂，通过快速色谱法纯化残余物，得到目标化合物(800mg，81％)。LC-MS:[MH]+＝286.9.
N-(2,3-二氟-6-甲氧基苄基)-8-(4-((二甲基氨基)甲基)苯基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺(13):将13.1(50mg,0.17mmol)、A2(61mg,0.28mmol)和Cs2CO3(165mg,0.51mmol)、Pd2(dba)3(10mg,0.016mmol)、Mix-phos(20mg,注:Mix-phos是X-phos、S-phos和Xant-phos质量比为1:1:1的混合物)的二氧六环(2mL)溶液置于N2下。将反应混合物在120℃加热2小时，浓缩并通过制备HPLC纯化，得到目标化合物(10mg，14％)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.17(s,6H),3.42(s,2H),3.87(s,3H),4.54(d,2H),6.14(d,1H),6.92-6.96(m,1H),7.36(d,2H),7.43-7.45(m,1H),7.49-7.52(m,1H),7.66(d,1H),8.09(d,2H),9.47(s,1H).LCMS:[MH]+＝424.7.
使用一般方法以及上述实施例的方法和适当的起始原料和试剂制备如表2中所示的下列化合物。
表2
VI.药理学和用途
作为PRC2复合物的关键组分，EED没有内在的酶活性。但是，它对于恰当的PRC2功能至关重要。EED直接与H3K27me3结合，并且该结合事件将PRC2复合物定位于染色质底物并且变构地激活甲基转移酶活性。靶向PRC2调节EED亚基内的变构位点，可以提供新颖和独特的角度，以有利于或补充直接靶向EZH2或PRC2的SAM竞争机制。因此，靶向EED代表了用于开发治疗多种癌症的新疗法的极具吸引力的策略。特别是，需要通过靶向EED抑制PRC2活性的小分子。现已发现，在此公开的***并嘧啶衍生物可用于靶向EED治疗EED或PRC2介导的疾病或病症，特别是癌症。
本发明的化合物的用途可以用下列任何试验步骤来证明。在生化测定中，评估了本发明化合物抑制EZH2、SUZ12、EED、Rbap48和AEBP五聚体复合物中PRC2活性的能力。通过在人细胞系中分析组蛋白H3赖氨酸27的甲基化来评估本发明化合物抑制PRC2细胞活性的能力。本发明化合物抑制癌症的能力来源于它们调节人癌细胞系活性的能力，该细胞系特异性依赖于PRC2活性以维持癌细胞生长。
通过AlphaScreen(α-筛选)进行EED-H3K27Me3肽竞争结合试验
为了评估化合物在EED-H3K27Me3竞争结合测定中的效力，将化合物在DMSO中连续稀释3倍以获得总共12个浓度。然后将每种浓度的化合物(每种75nL)通过Mosquito转移到384孔Perkin Elmer ProxiPlate 384plus板中。将在缓冲液(25mM HEPES，pH 8,0.02％Tween-20,0.5％BSA)中含有30nM EED(1-441)-His蛋白和15nM生物素-H3K27Me3(19-33)肽的8uL溶液加入孔中，然后与化合物一起温育20分钟。在临使用前通过将镍螯合物受体珠和链霉亲和素蛋白供体珠以1：1的比例(Perkin Elmer，产品号6760619C/M/R)混合到上述缓冲液中来制备AlphaScreen检测珠混合物。然后将4μL检测珠混合物加入板中并在黑暗中室温下孵育1小时。供体和受体珠的最终浓度分别为10μg/mL。在680nm的样品激发之后，使用适于用615nm滤波器进行最佳信号检测的AlphaScreen设置在EnVision(PerkinElmer)上读板。615nm处的发射信号被用来定量化合物抑制。AlphaScreen信号根据来自阳性(最大信号控制)和阴性对照(最小信号控制)的读数进行标准化，以给出剩余活性的百分比。然后使用程序Helios(Novartis)将数据拟合到剂量响应方程以获得IC50值。Helios是Novartis内部化验数据分析软件，其使用以下中描述的方法：Normolle，D.P.，Statistics in Medicine，12：2025-2042(1993)；Formenko,I.等人,Computer Methods and Programs inBiomedicine,82,31-37(2006)；Sebaugh,J.L.,Pharmaceutical Statistics,10:128-134(2011)；Kelly,C.等人,Biometrics,46(4):1071-1085(1990)；和Kahm,M.等人,Journal ofStatistical Software,33(7):(2010)(grofit:Fitting Biological Growth Curveswith R,第1-21页,获自http://www.jstatsoft.org/)。
对每种化合物进行反筛选以确定其是否干扰AlphaScreen珠子。如前面部分所述稀释化合物，通过在上述缓冲液中加入12μL 10nM生物素-miniPEG-His6肽，并在每次加入10μg/mL的珠子之前在室温孵育20分钟，进行测定。然后将板在室温下黑暗中温育1小时，然后在EnVison上读数。
EED LC-MS测定
本发明代表性化合物在DMSO中连续并分别稀释3倍，得到总共8或12个浓度。然后将每种浓度的测试化合物(每种120nL)通过Mosquito转移到384孔Perkin ElmerProxiPlate 384plus板中。将反应缓冲液(20mM Tris，pH 8.0，0.1％BSA，0.01％Triton，0.5mM DTT)中的24nM野生型PRC2(wtPRC2)复合物和2μM SAM的溶液(6μL)加入孔中，然后与测试化合物孵育20分钟。加入在反应缓冲液中的3μM肽底物H3K27Me0(组蛋白H3[21-44]-生物素的6μL溶液以引发每个反应。反应溶液中的最终组分包括12nM wtPRC2复合物、1μMSAM、1.5μM H3K27me0肽以及不同浓度的化合物。阳性对照在不存在测试化合物的情况下由酶、1μM SAM和1.5μM底物组成，阴性对照仅由1μM SAM和1.5μM底物组成。每个反应在室温下孵育120分钟，然后通过每种淬灭溶液(含320nM d4-SAH的2.5％TFA)添加3μL而停止。将反应混合物在2000rpm下离心(Eppendorf离心机5810，Rotor A-4-62)2分钟，并用TurbulonSpray(Applied Biosystem)与Prominence UFLC(Shimadzu)偶联的API 4000三重四极杆质谱读数。然后基于来自阳性和阴性对照的值将SAH产生水平标准化以得到酶活性百分比。然后使用程序Helios将数据拟合至剂量响应方程以获得测试化合物的IC50值。
ELISA(H3K27甲基化)测定
将本发明代表性化合物在DMSO中连续并分别稀释3倍，得到总共8或12个浓度。然后将化合物加入到在384孔板中以1：500稀释培养的G401细胞中，以获得20μM的最高浓度。在ELISA步骤之前将细胞进一步培养48小时。
组蛋白提取：用PBS(10x PBS缓冲液(80g NaCl(Sigma,S3014)、2g KCl(Sigma,60128)、14.4g Na2HPO4(Sigma,S5136)、2.4g KH2PO4(Sigma,P9791)至1L水,pH至7.4)洗涤384孔板中的细胞)，并加入裂解缓冲液(0.4N HCl；每孔45μL)裂解。将板在4℃温和搅动30分钟。用中和缓冲液(0.5M磷酸氢二钠，pH 12.5,1mM DTT；每孔36μL)中和细胞裂解物。搅动板以确保在ELISA方案之前将裂解物充分混合。
ELISA方案：将细胞裂解物转移至384孔板的孔中，用PBS将最终体积调节至每孔50μL。将板密封，以2,000rpm离心2分钟，并在4℃下孵育约16小时。将板用TBST缓冲液(1×TBS(10×TBS：24.2g Tris(Sigma，T6066)，80g NaCl(Sigma，S3014)至1L水并用HCl调节pH至7.6)含有0.1％吐温-20)洗涤。加入封闭缓冲液(TBST，5％BSA；每孔50μL)并将板在室温下温育1小时。除去封闭缓冲液并加入一抗(每孔30μL)。用封闭缓冲液进行以下稀释：对于抗H3K27me3抗体(Cell Signaling Technology,#9733),稀释度为1:1000；对于抗H3K27me2抗体(Cell Signaling Technology,#9288),稀释度为1:100；对于抗H3抗体(Abcam,Cat#24834)，稀释度为1:1000。将一抗在板中在室温下孵育1小时。用TBST洗涤孔并在室温下与二抗孵育1小时。对于二抗，用封闭缓冲液进行以下稀释：抗兔抗体(JacksonImmunoResearch,#111-035-003),稀释度为1:2000；抗小鼠抗体(Cell signalingtechnology,#7076)，稀释度为1:1000。在室温下孵育1小时后，用TBST洗涤孔。以30μL/孔加入ECL底物(Pierce，#34080)，并将板以2,000rpm离心2分钟。使用PerkinElmer EnvisionReader读取信号。使用H3信号对H3K27甲基化读数进行标准化，然后对照用DMSO处理的样品计算抑制百分比。然后使用程序Helios将数据拟合至剂量响应曲线以获得测试化合物的IC50值。
蛋白质印迹分析
分析了本发明的代表性化合物选择性抑制PRC2的能力。使用标准分子生物学技术进行蛋白质印迹。将细胞在SDS裂解缓冲液(Millipore,Cat#20-163)中裂解，并通过BCA蛋白质测定法测量蛋白质浓度(Pierce,Cat#PI-23221)。用于蛋白质印迹的抗体：抗EZH2(#3147)、抗H3(#9715)、抗H3K4me1(#9723)、抗H3K4me2(#9725)、抗H3K4me3(#9727)、抗H3K9me2(#9753)、抗H3K36me2(#9758)、抗H3K27me2(#9755)和抗H3K27me3(#9756)购自CellSignaling Technology(Danvers,MA,USA)。抗H3K9me1(#07-395)、抗H3K27me1(#07-448)和抗H3K36me1(#07-548)购自Millipore(Billerica,MA,USA)。抗H3K36me3(ab9050-100)购自Abcam(Cambridge,UK)。抗H3K9me3(#39161)购自Active Motif(Carlsbad,CA,USA)。
本发明化合物特异性地抑制PRC2底物H3K27的甲基化。这可以通过它们在许多人癌细胞系中抑制H3K27me2和H3K27me3的能力来证明，示例包括横纹肌样细胞(G401)和淋巴瘤细胞(WSU-DLCL2,KARPAS422,SU-DHL4)。选择性与许多其他甲基化标记相对应，例如：H3K4me2、H3K9me2、H3K36me3和H3K79me3。
细胞增殖分析
B细胞淋巴瘤细胞KARPAS422使用标准细胞培养条件在补充有15％FBS(Invitrogen，目录号10099-141)的RPMI-1640(Invitrogen，目录号#11875)中在37℃、5％CO2的潮湿培养箱中培养。为了评估PRC2抑制对细胞增殖的影响，将指数生长的细胞以1×105个细胞/mL的密度接种在12孔板(Corning，登记号CLS3513)中。细胞接种后，将本发明化合物加入细胞培养基中(浓度范围为0至100μM，3倍稀释系列)。使用Vi-CELL(BeckmanCoulter)每3-4天测定活细胞数，持续长达14天。在细胞计数的天数，补充新鲜生长培养基和化合物并将细胞拆分回1×105个细胞/mL的密度。总细胞数表示为拆分-调整的每mL活细胞。使用Prism产生剂量反应曲线和IC50值。
药代动力学性质分析
本发明化合物的药代动力学性质可通过使用下述方案确定。
将本发明的代表性化合物溶于10％PEG300、10％Solutol HS15和80％pH 4.65乙酸盐缓冲液中，得到0.2mg/mL的终浓度，用于静脉内(IV)和口服(PO)施用。
对于大鼠PK研究，总共三只雄性Sprague Dawley大鼠各自分别用于大鼠IV和POPK研究。制剂溶液通过1mg/kg的单次推注IV和2mg/kg的单次口服强饲(PO)给药。在适当的时间点通过颈静脉插管收集血样(约150μL)。
对于小鼠PK研究，总共十二只雄性ICR小鼠分别用于IV和PO研究。制剂溶液通过1mg/kg的单次推注IV和2mg/kg的单次口服强饲(PO)给药。在适当的时间点于异氟醚麻醉后通过眼眶后穿刺(～150μL/小鼠)或通过心脏穿刺(终末收集)(n＝3)收集血样(约150μL)。
将样品收集在含有K3-EDTA的试管中并储存在冰上直至离心。将血样在2-8℃下以约8000rpm离心6分钟，分离所得血浆并在约-80℃冷冻保存。添加内标后，使用校准曲线通过LC-MS/MS定量血浆样品。PK参数包括浓度曲线下面积(AUC)、平均停留时间(MRT)、血浆清除率(Cl)、稳态分布容积(Vdss)、消除半衰期(t1/2)、最大浓度(Cmax)、最大浓度时间(Tmax)和口服生物利用度(F％)，使用以下等式计算：
t是时间C是时间(t)时的血浆浓度；
剂量iv是静脉内给药的剂量，剂量口服是口服给药的剂量。
CI＝剂量iv/AUC
t1/2＝0.693x MRT
Vdss＝Cl*MRT
F％＝(剂量iv x AUC口服)/剂量口服x AUCiv)x 100％
高通量平衡溶解度测定方案
首先将本发明化合物以10mM溶解在纯DMSO中。然后将20μL每种DMSO储备溶液转移到96孔板上的6个孔中。用GeneVac溶剂蒸发器在30℃、1毫巴真空下干燥DMSO溶剂1小时。在加入200μL缓冲溶液(pH 6.8或FaSSIF)后，将板密封并在室温下以160rpm摇动24小时。将板以3750rpm离心20分钟，将5μL上清液与495μL MeOH/H2O(1:1)混合。通过一系列稀释制备0.01μM、0.1μM、1μM、10μM储备溶液用于校准曲线。使用校准曲线通过HPLC或LC/MS定量上清液。根据上清液的浓度确定高通量平衡溶解度。
小鼠异种移植模型的功效研究
进行的所有实验均在AAALAC认证的设施中在雌性无胸腺Nude-nu小鼠中进行。将动物在SPF条件下保持在恒定温度和湿度(即20-26℃；40-70％)的各个通气笼中，每个笼中有5只或更少的动物。动物可以自由获得辐照灭菌的干燥颗粒食物和无菌饮用水。所有步骤和方案均经机构动物护理和使用及内部委员会批准。
将细胞Karpas 422人B细胞淋巴瘤在补充有15％FBS(Gibco；10099-141)和1％PenStrep(Gibco；15140-122)的RPMI-1640培养基(Gibco；11875-093)在37℃空气中5％CO2的气氛中培养。将细胞维持在悬浮培养物中，浓度为0.5-2×106个细胞/ml。细胞在每2～4天以1:3拆分。为了建立异种移植肿瘤模型，收集细胞，悬浮于PBS中，与Matrigel(BDBioscience)以1:1的体积比以1x108个细胞/mL的浓度混合，然后以每只动物5×106个细胞的浓度皮下注射到balb/c裸小鼠(Vital River)的右侧。
将该化合物配制成0.5％甲基纤维素(MC)和0.5％Tween 80的50mM pH6.8缓冲液(根据USP内部制备)中的悬浮液，并通过管饲法以特定剂量口服给药。
当平均肿瘤体积达到100-300mm3时开始治疗。定期监测肿瘤生长和体重。用卡尺手动测量异种移植肿瘤的两个最大直径，宽度(W)和长度(L)，并使用下式估算肿瘤体积：0.5x L x W2.
适用时，结果表示为平均值±SEM。使用GraphPad Prism 5.00(GraphPadSoftware)进行图形化和统计学分析。统计分析肿瘤和体重变化数据。如果数据的方差是正态分布的(Bartlett等方差检验)，则使用单因素方差分析和事后Dunnet检验对数据进行分析，以比较治疗组与对照组。事后Tukey检验用于组内比较。否则，使用Kruskal-Wallis排名检验事后Dunn's。
作为效力的度量，％T/C值在实验结束时根据以下公式计算：
(Δ肿瘤体积治疗/Δ肿瘤体积对照)*100
根据以下公式计算肿瘤消退：
-(Δ肿瘤体积治疗/Δ肿瘤体积治疗开始时)*100
其中Δ肿瘤体积代表评估日的平均肿瘤体积减去实验开始时的平均肿瘤体积。
以下公开的示例性实施例在上述EED Alphascreen结合、LC-MS和/或ELISA测定中测试，并发现具有EED抑制活性。观察到≤5μM(5000nM)的IC50值范围。
对于以下实施例，下表3列出了EED(a)Alphascreen结合合格，(b)LC-MS合格和/或(c)ELISA合格测定中测得的IC50值。“N/A”代表“未评估”。
表3
因此，已发现本发明化合物抑制EED，因此可用于治疗与EED和PRC2相关的疾病或病症，包括但不限于弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、其他淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌瘤、肝细胞癌、***癌，乳腺癌、胆管癌和胆囊癌、膀胱癌、脑肿瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、***、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾细胞癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和选自横纹肌肉瘤(RMS)、卡波济肉瘤、滑膜肉瘤、骨肉瘤和尤因肉瘤的软组织肉瘤。
VI.药物组合物和组合
本发明化合物通常用作药物组合物(例如，本发明化合物和至少一种药学上可接受的载体)。“药学上可接受的载体(稀释剂或赋形剂)”是指本领域通常接受的用于将生物活性剂递送至动物、特别是哺乳动物的介质，包括通常认为是安全的(GRAS)溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、缓冲剂(如马来酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、醋酸、碳酸氢钠，碳酸氢钠等)、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等及其组合，如本领域技术人员所已知(参见，例如，Allen,L.V.,Jr.等人，Remington：The Science and Practice of Pharmacy(2卷)，第22版，Pharmaceutical Press(2012)。出于本发明的目的，溶剂化物和水合物被认为是包含本发明化合物和溶剂(即溶剂化物)或水(即水合物)的药物组合物。
可以使用常规的溶解和混合步骤制备制剂。例如，在存在上述一种或多种赋形剂的情况下，将原料药物质(即，本发明化合物或化合物的稳定形式(例如，与环糊精衍生物或其它已知络合剂的络合物))溶解在适当的溶剂中。
本发明化合物可通过任何适当的方法用于以本文描述的任何用途施用，例如口服，例如片剂、胶囊(每个胶囊包括缓释或定时释放制剂)、丸剂、粉末、颗粒、酏剂、酊剂、混悬液(包括纳米混悬液、微悬浮液、喷雾干燥分散体)、糖浆和乳剂；舌下；颊部；肠胃外，如皮下注射、静脉内注射、肌内注射或胸骨内注射或输注技术(如无菌注射水溶液或非水溶液或混悬剂)；鼻腔，包括鼻腔膜的给药，如吸入喷雾；局部的，如乳膏或软膏的形式；或直肠，如栓剂形式。它们可以单独给药，但通常与基于所选给药途径和标准药学实践与所选的药物载体一起给药。
通常将本发明化合物配制成药物剂型，以提供易于控制的药物剂量，并为患者提供优雅且易于操作的产品。当然，本发明化合物的剂量方案将根据已知的因素而变化，例如特定制剂的药效学特征及其给药方式和途径；接受者的物种、年龄、性别、健康、医疗条件和重量；症状的性质和程度；同时治疗的种类；治疗频率；给药途径、患者的肾和肝功能以及期望的效果。本发明的化合物可以单日剂量给药，或者总日剂量可以每天分两次、三次或四次分剂量给药。
在某些情况下，将本发明的化合物与至少一种另外的药物(或治疗)试剂，例如其他抗癌剂、免疫调节剂、抗过敏剂、抗恶心剂(或抗呕吐剂)、止痛剂、细胞保护剂及其组合联合应用可能是有利的。
术语“组合疗法”是指施用两种或更多种治疗剂以治疗本发明中描述的治疗性疾病、病症或病状。这种施用包括以基本上同时的方式共同施用这些治疗剂，例如在具有固定比例的活性成分的单一胶囊中。或者，这种施用包括对每个活性成分在多个或分开的容器(例如胶囊、粉末和液体)中进行联合施用。本发明化合物和另外的治疗剂可以通过相同的施用途径或不同的施用途径来施用。在施用前可以将粉末和/或液体重溶或稀释到所需的剂量。此外，这种施用也包括以顺序方式在大约同时或不同时间使用每种类型的治疗剂。无论哪种情况，治疗方案将提供药物组合在治疗本文所述病状或病症中的有益效果。
考虑用于联合治疗的一般化疗剂包括阿那曲唑
比卡鲁胺
硫酸博来霉素
白消安
白消安注射液
卡培他滨
N4-戊氧羰基-5-脱氧-5-氟胞苷、卡铂
卡莫司汀
苯丁酸氮芥
顺铂
克拉屈滨
环磷酰胺(
或
)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿糖胞苷
阿糖胞苷脂质体注射液
达卡巴嗪
放线菌素(放线菌素D，Cosmegan)、盐酸柔红霉素
柠檬酸柔红霉素脂质体注射液
***、多西他赛
盐酸多柔比星
依托泊苷
磷酸氟达拉滨
5-氟尿嘧啶
氟他胺
替扎他滨、吉西他滨(二氟脱氧胞苷)、羟基脲
伊达比星
异环磷酰胺
伊立替康
L-天冬酰胺酶
甲酰四氢叶酸钙、美法仑
6-巯基嘌呤
甲氨蝶呤
米托蒽醌
麦罗塔、紫杉醇
白蛋白结合型紫杉醇
菲尼克斯(Yttrium90/MX-DTPA)、喷司他丁、以聚本苯丙生20为载体的卡莫司汀植入剂
柠檬酸他莫昔芬
替尼泊苷
6-硫鸟嘌呤、噻替派、替拉扎明
注射用托泊替康盐酸盐
长春碱
长春新碱
和长春瑞滨
特别感兴趣的与本发明化合物组合的抗癌剂包括：
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂：(Chen,S.等人,Nat Cell Biol.,12(11):1108-14(2010)；Zeng,X.等人,Cell Cycle,10(4):579-83(2011))Aloisine A；Alvocidib(也称为夫拉平度或HMR-1275、2-(2-氯苯基)-5,7-二羟基-8-[(3S,4R)-3-羟基-1-甲基-4-哌啶基]-4-色烯酮，并描述于美国专利5,621,002)；克唑替尼(PF-02341066,CAS 877399-52-5)；2-(2-氯苯基)-5,7-二羟基-8-[(2R,3S)-2-(羟基甲基)-1-甲基-3-吡咯烷基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮,盐酸盐(P276-00,CAS 920113-03-7)；1-甲基-5-[[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]-4-吡啶基]氧基]-N-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-苯并咪唑-2-胺(RAF265,CAS927880-90-8)；Indisulam(E7070)；Roscovitine(CYC202)；6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮,盐酸盐(PD0332991)；Dinaciclib(SCH727965)；N-[5-[[(5-叔丁基恶唑-2-基)甲基]硫代]噻唑-2-基]哌啶-4-甲酰胺(BMS 387032,CAS 345627-80-7)；4-[[9-氯-7-(2,6-二氟苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂-2-基]氨基]-苯甲酸(MLN8054,CAS 869363-13-3)；5-[3-(4,6-二氟-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吲唑-5-基]-N-乙基-4-甲基-3-吡啶甲胺(AG-024322,CAS 837364-57-5)；4-(2,6-二氯苯甲酰氨基)-1H-吡唑-3-羧酸N-(哌啶-4-基)酰胺(AT7519,CAS 844442-38-2)；4-[2-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-咪唑-5-基]-N-[4-(甲基磺酰基)苯基]-2-嘧啶胺(AZD5438,CAS 602306-29-6)；帕博西尼(PD-0332991)和(2R,3R)-3-[[2-[[3-[[S(R)]-S-环丙基磺酰亚胺基]-苯基]氨基]-5-(三氟甲基)-4-嘧啶基]氧基]-2-丁醇(BAY10000394)。
检查点激酶(CHK)抑制剂：(Wu,Z.等人,Cell Death Differ.,18(11):1771-9(2011))7-羟基星形孢菌素(UCN-01)；6-溴-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(3R)-3-哌啶基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(SCH900776,CAS 891494-63-6)；5-(3-氟苯基)-3-脲基噻吩-2-羧酸N-[(S)-哌啶-3-基]酰胺(AZD7762,CAS 860352-01-8)；4-[((3S)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基)氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氯喹啉-2(1H)-酮(CHIR 124,CAS 405168-58-3)；7-氨基放线菌素(7-AAD),Isogranulatimide,debromohymenialdisine；N-[5-溴-4-甲基-2-[(2S)-2-吗啉基甲氧基]-苯基]-N'-(5-甲基-2-哌嗪基)脲(LY2603618,CAS 911222-45-2)；莱菔硫烷(CAS 4478-93-7,4-甲基亚磺酰基丁基异硫氰酸盐)；9,10,11,12-四氢-9,12-环氧基-1H-二吲哚[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]吡咯并[3,4-i][1,6]苯并二氮杂-1,3(2H)-二酮(SB-218078,CAS 135897-06-2)；和TAT-S216A(YGRKKRRQRRRLYRSPAMPENL)，以及CBP501((d-Bpa)sws(d-Phe-F5)(d-Cha)rrrqrr)和(αR)-α-氨基-N-[5,6-二氢-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-氧代-1H-吡咯并[4,3,2-ef][2,3]苯并二氮杂-8-基]-环己烷乙酰胺(PF-0477736)。
蛋白激酶B(PKB)或AKT抑制剂：(Rojanasakul,Y.,Cell Cycle,12(2):202-3(2013)；Chen B.等人,Cell Cycle,12(1):112-21(2013))8-[4-(1-氨基环丁基)苯基]-9-苯基-1,2,4-***并[3,4-f][1,6]萘啶-3(2H)-酮(MK-2206,CAS 1032349-93-1)；哌立福辛(KRX0401)；4-十二烷基-N-1,3,4-噻二唑-2-基-苯磺酰胺(PHT-427,CAS1191951-57-1)；4-[2-(4-氨基-1,2,5-恶二唑-3-基)-1-乙基-7-[(3S)-3-哌啶基甲氧基]-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基]-2-甲基-3-丁炔-2-醇(GSK690693,CAS 937174-76-0)；8-(1-羟乙基)-2-甲氧基-3-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-6H-二苯并[b,d]吡喃-6-酮(palomid 529,P529或SG-00529)；Tricirbine(6-氨基-4-甲基-8-(β-D-呋喃核糖基)-4H,8H-吡咯并[4,3,2-de]嘧啶并[4,5-c]哒嗪)；(αS)-α-[[[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-吡啶基]氧基]甲基]-苯乙胺(A674563,CAS 552325-73-2)；4-[(4-氯苯基)甲基]-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-4-哌啶胺(CCT128930,CAS 885499-61-6)；4-(4-氯苯基)-4-[4-(1H吡唑-4-基)苯基]-哌啶(AT7867,CAS 857531-00-1)；和Archexin(RX-0201,CAS 663232-27-7)。
C-RAF抑制剂：(Chang,C.等人,Cancer Cell,19(1):86-100(2011))索拉非尼
3-(二甲基氨基)-N-[3-[(4-羟基苯甲酰)氨基]-4-甲基苯基]-苯甲酰胺(ZM336372,CAS 208260-29-1)；和3-(1-氰基-1-甲基乙基)-N-[3-[(3,4-二氢-3-甲基-4-氧代-6-喹唑啉基)氨基]-4-甲基苯基]-苯甲酰胺(AZ628,CAS 1007871-84-2)。
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂：(Gonzalez,M.等人,Cancer Res.,71(6):2360-2370(2011))4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉(也称为GDC 0941并描述于PCT公开案WO 09/036082和WO 09/055730)；2-甲基-2-[4-[3-甲基-2-氧代-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氢咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]苯基]丙腈(也称为BEZ235或NVP-BEZ 235,描述于PCT公开案WO 06/122806)；4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺(也称为BKM120或NVP-BKM120,描述于PCT公开案WO2007/084786)；陶扎色替(VX680或MK-0457,CAS 639089-54-6)；(5Z)-5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亚甲基]-2,4-噻唑烷二酮(GSK1059615,CAS 958852-01-2)；(1E,4S,4aR,5R,6aS,9aR)-5-(乙酰氧基)-1-[(二-2-丙烯基氨基)亚甲基]-4,4a,5,6,6a,8,9,9a-八氢-11-羟基-4-(甲氧基甲基)-4a,6a-二甲基-环戊[5,6]萘并[1,2-c]吡喃-2,7,10(1H)-三酮(PX866,CAS502632-66-8)；8-苯基-2-(吗啉-4-基)-色烯-4-酮(LY294002,CAS154447-36-6)；2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(SAR 245409或XL 765)；1,3-二氢-8-(6-甲氧基-3-吡啶基)-3-甲基-1-[4-(1-哌嗪基)-3-(三氟甲基)苯基]-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮,(2Z)-2-丁烯二酸酯(1:1)(BGT 226)；5-氟-3-苯基-2-[(1S)-1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-4(3H)-喹唑啉酮(CAL101)；2-氨基-N-[3-[N-[3-[(2-氯-5-甲氧基苯基)氨基]喹喔啉-2-基]氨磺酰基]苯基]-2-甲基丙酰胺(SAR 245408或XL 147)；和(S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(BYL719)。
BCL-2抑制剂：(Béguelin,W.等人,Cancer Cell,23(5):677-92(2013))4-[4-[[2-(4-氯苯基)-5,5-二甲基-1-环己烯-1-基]甲基]-1-哌嗪基]-N-[[4-[[(1R)-3-(4-吗啉基)-1-[(苯硫基)甲基]丙基]氨基]-3-[(三氟甲基)磺酰基]苯基]磺酰基]苯甲酰胺(也称为ABT-263并描述于PCT公开案WO 09/155386)；四制癌素A；抗霉素；棉酚((-)BL-193)；奥巴克拉；2-氨基-6-环戊基-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基)-4H-色酮-3-羧酸乙酯(HA14–1)；Oblimersen(G3139,
)；Bak BH3肽；(-)-棉酚乙酸(AT-101)；4-[4-[(4'-氯[1,1'-联苯基]-2-基)甲基]-1-哌嗪基]-N-[[4-[[(1R)-3-(二甲基氨基)-1-[(苯硫基)甲基]丙基]氨基]-3-硝基苯基]磺酰基]-苯甲酰胺(ABT-737,CAS 852808-04-9)；和Navitoclax(ABT-263,CAS 923564-51-6)。
丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂：(Chang,C.J.等人,Cancer Cell,19(1):86-100(2011))XL-518(也称为GDC-0973,Cas号1029872-29-4,获自ACC Corp.)；司美替尼(5-[(4-溴-2-氯苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺,也称为AZD6244或ARRY 142886,描述于PCT公开案WO2003077914)；Benimetinib(6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺,也称为MEK162,CAS1073666-70-2,描述于PCT公开案WO2003077914)；2-[(2-氯-4-碘苯基)氨基]-N-(环丙基甲氧基)-3,4-二氟-苯甲酰胺(也称为CI-1040或PD184352并描述于PCT公开案WO2000035436)；N-[(2R)-2,3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-苯甲酰胺(也称为PD0325901并描述于PCT公开案WO2002006213)；2,3-双[氨基[(2-氨基苯基)硫代]亚甲基]-丁二腈(也称为U0126并描述于US专利2,779,780)；N-[3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6-甲氧基苯基]-1-[(2R)-2,3-二羟基丙级]-环丙烷磺酰胺(也称为RDEA119或BAY869766，且描述于PCT公开案WO2007014011)；(3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(乙基氨基)-8,9,16-三羟基-3,4-二甲基-3,4,9,19-四氢-1H-2-苯并氧杂环十四烷基-1,7(8H)-二酮](也称为E6201并描述于PCT公开案WO2003076424)；2’-氨基-3’-甲氧基黄酮(也称为PD98059，购自Biaffin GmbH&Co.,KG,德国)；维莫非尼(PLX-4032,CAS918504-65-1)；(R)-3-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733,CAS1035555-63-5)；Pimasertib(AS-703026,CAS1204531-26-9)；曲美替尼二甲基亚砜(GSK-1120212,CAS1204531-25-80)；2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(AZD 8330)；和3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-N-(2-羟基乙氧基)-5-[(3-氧代-[1,2]恶嗪烷-2-基)甲基]苯甲酰胺(CH 4987655或Ro4987655)。
芳香酶抑制剂：(Pathiraja,T.等人,Sci.Transl.Med.,6(229):229ra41(2014))依西美坦
来曲唑
和阿那曲唑
拓扑异构酶II抑制剂：(Bai,J.等人,Cell Prolif.,47(3):211-8(2014))依托泊苷(VP-16和磷酸依托泊苷,
和
)；替尼泊苷(VM-26,
)；和Tafluposide。
SRC抑制剂:(Hebbard,L.,Oncogene,30(3):301-12(2011))达沙替尼
塞卡替尼(AZD0530,CAS 379231-04-6)；博舒替尼(SKI-606,CAS 380843-75-4)；5-[4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-2-吡啶乙酰胺(KX2-391,CAS 897016-82-9)；和4-(2-氯-5-甲氧基苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(AZM475271,CAS 476159-98-5)。
组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂：(Yamaguchi,J.等人,Cancer Sci.,101(2):355-62(2010))伏立诺他
罗米地辛
Treichostatin A(TSA)；Oxamflatin；伏立诺他(
辛二酰苯胺异羟肟酸)；Pyroxamide(辛二酰-3-氨基吡啶酰胺异羟肟酸)；Trapoxin A(RF-1023A)；Trapoxin B(RF-10238)；环[(αS,2S)-α-氨基-η-氧代-2-环氧乙烷辛酰-O-甲基-D-酪氨酰-L-异亮氨酰-L-脯氨酰](Cyl-1)；环[(αS,2S)-α-氨基-η-氧代-2-环氧乙烷辛酰-O-甲基-D-酪氨酰-L-异亮氨酰-(2S)-2-哌啶羰基](Cyl-2)；环[L-丙氨酰-D-丙氨酰-(2S)-η-氧代-L-α-氨基环氧乙烷辛酰-D-脯氨酰](HC-毒素)；环[(αS,2S)-α-氨基-η-氧代-2-环氧乙烷辛酰-D-苯基丙氨酰-L-亮氨酰-(2S)-2-哌啶羰基](WF-3161)；Chlamydocin((S)-环(2-甲基丙氨酰-L-苯基丙氨酰-D-脯氨酰-η-氧代-L-α-氨基环氧乙烷辛酰)；Apicidin(环(8-氧代-L-2-氨基癸酰-1-甲氧基-L-色氨酰-L-异亮氨酰-D-2-哌啶羰基)；罗米地辛(
FR-901228)；4-苯丁酸；Spiruchostatin A；Mylproin(丙戊酸)；恩替诺特(MS-275,N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基-甲氧基羰基)-氨基-甲基]-苯甲酰胺)和Depudecin(4,5:8,9-二脱氢-1,2,6,7,11-五去氧-D-苏-D-艾杜-十一碳-1,6-二烯醇)。
抗肿瘤抗生素：(Bai,J.等人,Cell Prolif.,47(3):211-8(2014))阿霉素(
和
)；博来霉素
柔红霉素(盐酸多柔比星、道诺霉素和盐酸鲁维多霉素，
)；柔红霉素脂质体(柠檬酸柔红霉素脂质体,
)；米妥蒽醌(DHAD,
)；表柔比星(EllenceTM)；伊达比星(
Idamycin
)；丝裂霉素C
格尔德霉素；除莠霉素；拉维霉素和去乙酰基拉维霉素。
去甲基化剂：(Musch,T.等人,PLoS One,(5):e10726(2010))
5-氮杂胞苷
和地西他滨
抗***：(Bhan,A.等人,J Mol Biol.,S0022-2836(14)00373-8(2014))他莫昔芬
托瑞米芬
和氟维司群
一些患者在给药期间或之后可能经历对本发明化合物和/或其他抗癌剂的过敏反应；因此，通常施用抗过敏剂以最小化过敏反应的风险。合适的抗过敏剂包括皮质类固醇(Knutson,S.等人，PLoS One，DOI:10.1371/journal.pone.0111840(2014))，例如***(例如
)，倍氯米松(例如
)，氢化可的松(也称为可的松，氢化可的松琥珀酸钠，氢化可的松磷酸钠，以商品名
磷酸氢化可的松、
和
出售)，***龙(以商品名
和
出售)，***(以商品名
和
销售)，甲基强的松龙(也称为6-甲基强的松龙，甲基强的松龙醋酸酯，甲基强的松龙琥珀酸钠，以商品名
和
销售)；抗组胺药，例如苯海拉明(例如
)，羟嗪和赛庚啶；和支气管扩张剂，例如β-肾上腺素能受体激动剂，沙丁胺醇(例如
)和特布他林
特别感兴趣的与本发明化合物组合的免疫调节剂包括以下一或多种：共刺激分子的激活剂或免疫检查点分子的抑制剂(例如，PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3或CTLA4的一或多种抑制剂)或其任何组合。
在某些实施方式中，免疫调节剂是共刺激分子的激活剂。在一个实施方式中，共刺激分子的激动剂选自OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体的激动剂(例如，激动剂抗体或其抗原结合片段，或可溶性融合物)。
在某些实施方式中，免疫调节剂是免疫检查点分子的抑制剂。在一个实施方式中，免疫调节剂是PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFRβ的抑制剂。在一个实施方式中，免疫检查点分子的抑制剂抑制PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3或CTLA4，或其任何组合。术语“抑制”或“抑制剂”包括给定分子(例如免疫检查点抑制剂)的某些参数(例如活性)的减少。例如，该术语包括至少5％、10％、20％、30％、40％或更多的活性(例如PD-1或PD-L1活性)的抑制。因此，抑制不需要是100％。
一些患者在施用本发明的化合物和/或其他抗癌剂期间和之后可能感到恶心；因此，用抗呕吐剂预防恶心(上胃)和呕吐。合适的止吐药包括阿瑞匹坦
昂丹司琼
盐酸格拉司琼
劳拉西泮
***
丙氯拉嗪
卡索匹坦(
和
)，及其组合。
通常处方用于缓解治疗期间所经历疼痛的药物以使患者更舒适。通常使用常见的非处方镇痛药，如
然而，阿片类镇痛药如氢可酮/醋氨酚或氢可酮/对乙酰氨基酚(如
)、***(如
或
)、羟考酮(如
或
)、盐酸羟***酮
芬太尼(如
)也适用于中度或重度疼痛。
为了保护正常细胞免受治疗毒性并限制器官毒性，可以使用细胞保护剂(例如神经保护剂、自由基清除剂、心脏保护剂、蒽环类外渗中和剂、营养素等)作为辅助疗法。合适的细胞保护剂包括氨磷汀
谷氨酰胺、地美司钠
美司钠
右雷佐生(
或
)、扎利罗登
和甲酰四氢叶酸(也称为亚叶酸钙、亚叶酸因子和亚叶酸)。
通过编号、通用名或商品名识别的活性化合物的结构可以取自标准纲要“TheMerck Index”的实际版本或来自数据库，例如国际专利(例如IMS World Publications)。
在一个实施方式中，本发明提供药物组合物，其包含至少一种本发明化合物(例如，本发明化合物)或其药学上可接受的盐以及适于施用于人或动物对象的药学上可接受载体，单独使用或与其他抗癌药物一起使用。
在一个实施方式中，本发明提供治疗患有细胞增殖性疾病(例如癌症)的人或动物对象的方法。本发明提供治疗需要这种治疗的人或动物对象的方法，包括向对象施用治疗有效量的本发明化合物(例如，本发明化合物)或其药学上可接受的盐，单独使用或与其他抗癌药物联合使用。
特别地，组合物可以作为组合治疗剂一起配制或分开施用。
在用于治疗恶性肿瘤的组合疗法中，本发明化合物和其他抗癌剂可以同时、同步或没有特定的时间限制地顺序施用，其中这种施用在对象体内提供治疗有效水平的两种化合物。
在一个优选的实施方式中，本发明化合物和其他抗癌剂通常通过输注或口服以任何顺序依次施用。给药方案可根据疾病的阶段、患者的身体状况、个体药物的安全性、各药物的耐受性以及施用组合的主治医师和医疗从业人员所熟知的其他标准而变化。本发明化合物和其他抗癌剂可以根据用于治疗的特定周期在彼此间隔几分钟、小时、天甚至几周内给药。此外，该周期可以包括在治疗周期中以一种药物比另一种药物更频繁地施用，并且在每次给药时以不同的剂量施用。
在本发明的另一个方面，提供了包括本发明的一种或多种化合物和本文所公开的组合伴侣的试剂盒。代表性试剂盒包括(a)本发明化合物或其药学上可接受的盐，(b)至少一种组合伴侣，例如如上所述，其中所述试剂盒可包含包装说明书或包括施用说明的其他标记。
本发明化合物还可以与已知的治疗方法有利地结合使用，例如施用激素或特别是放射。本发明化合物尤其可以用作放射增敏剂，特别是用于治疗对放射疗法表现出差的敏感性的肿瘤。
在本发明的另一个方面，提供了包括本发明的一种或多种化合物和本文所公开的组合伴侣的试剂盒。代表性试剂盒包括(a)本发明化合物或其药学上可接受的盐，(b)至少一种组合伴侣，例如如上所述，其中所述试剂盒可包含包装说明书或包括施用说明的其他标记。
在本发明的组合疗法中，本发明的化合物和其他治疗性联合试剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，可以将本发明的化合物和其他治疗剂(或药剂)一起放入联合疗法中：(i)在向医师发布组合产品之前(例如在药盒包含本发明化合物和其他治疗剂的情况下)；(ii)在施用前不久由医师自己(或在医师指导下)；(iii)患者本身，例如在顺序施用本发明化合物和其他治疗剂的过程中。
在涉及EED和/或PRC2的测试或测定中，本发明化合物也可用作标准或参考化合物，例如作为质量标准或对照。这些化合物可以在商业试剂盒中提供，例如，用于涉及髓过氧化物酶活性的药物研究。例如，本发明化合物可用作测定中的参考，以将其已知活性与具有未知活性的化合物进行比较。这将确保实验者正确地进行测定并提供比较基础，特别是如果测试化合物是参考化合物的衍生物。当开发新的测定或方案时，可以使用根据本发明的化合物来测试它们的有效性。本发明化合物也可用于涉及EED和/或PRC2的诊断测定。
用于应用的药物组合物(或制剂)可以根据用于施用药物的方法以多种方式包装。通常，用于分配的制品包括其中以适当的形式置有药物制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员熟知的，包括诸如瓶子(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属圆筒等材料。容器还可以包括防篡改组件，以防止对包装内容物的不当访问。此外，容器在其上放置了描述容器内容的标签。标签还可以包括适当的警告。
Claims (19)
1.式(IA)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
A是
W独立地是N或CR4；
Y独立地是N或CR3；
Z独立地是N或CR1；
R1独立地是H或卤素；
R2独立地是H、OCH3或卤素；
R3独立地是H或卤素；
R4独立地是H、卤素或OCH3；
R5独立地是H、卤素、CH3、OCH3或OCHF2；
R6选自：H和卤素；
R7为H；
R8独立地选自：苯基以及包含碳原子和选自N、NRa和O的1-4个杂原子的5至6元杂芳基，其中所述苯基和杂芳基被0-4个R8A取代；
各R8A独立地选自：卤素、CN、OH、-(O)m-(被0-1个R8B取代的C1-C6烷基)、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、R8C、-OR8C、-C(＝O)R8D、NR8ER8F、-C(C1-C4烷基)＝N(C1-C4烷氧基)、-C(＝O)NR8ER8F、-NHC(＝O)R8D、-NHC(＝O)NR8ER8F、-S(＝O)R8D、-S(＝O)2R8D、-S(＝O)2NR8ER8F、-NHS(＝O)2R8D和
-NR8E(S(＝O)2(C1-C4烷基))和-CR8CR8ER8G；
R8B独立地选自：CN、OH、NReRf、C1-C4烷氧基、-C(＝O)NReRf、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、-N(→O)(C1-C4烷基)2、-S(＝O)2(C1-C4烷基)和包括碳原子和1-2个选自N、NRa和O的杂原子的4至6元杂环烷基，其中所述杂环烷基被0-2个Rc取代；
各R8C独立地选自：C3-C6环烷基和包含碳原子和1-4个选自N、NRa和O的杂原子的4至7元杂环，其中所述环烷基和杂环被0-2个Rc取代；
各R8D独立地选自：C1-C4烷基和R8C；
R8E在每次出现时独立地选自：H和C1-C4烷基；
R8G为H；
各R8F独立地选自：H和被0-1个Rd取代的C1-C4烷基；
各Ra独立地选自：H、→O、被0-1个Rb取代的C1-C4烷基、-CO2(C1-C4烷基)和C3-C6环烷基；
Rb独立地选自：卤素、OH和
各Rc独立地选自：＝O、卤素和C1-C4烷基；
Rd为OH；
Re和Rf在每次出现时独立地选自：H和C1-C4烷基；以及
m独立地选自0或1。
2.根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
各R8A独立地选自：卤素、CN、OH、-(O)m-(被0-1个R8B取代的C1-C6烷基)、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、R8C、-C(＝O)R8D、NR8ER8F、-C(＝O)NR8ER8F、-NHC(＝O)R8D、-NHC(＝O)NR8ER8F、-S(＝O)R8D、-S(＝O)2R8D、-S(＝O)2NHR8F、-NHS(＝O)2R8D、-NR8E(S(＝O)2(C1-C4烷基))、-O-C3-C6环烷基,和
和
各Ra独立地选自：H、→O、被0-1个Rb取代的C1-C4烷基、-CO2(C1-C4烷基)和C3-C6环烷基。
3.根据权利要求1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1独立地是H、F或Cl；
R2独立地是H、OCH3或F；
R3独立地是H或F；
R4独立地是H、F或OCH3；
R5独立地是H、F、CH3、OCH3或OCHF2；
R6选自：H和F；
R7为H；且
Ra独立地选自：H、被0-1个Rb取代的C1-C4烷基和C3-C6环烷基。
4.根据权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R6和R7是H；
R8独立地选自：苯基以及包含碳原子和选自N和NRa的1-2个杂原子的6元杂芳基，其中所述苯基和杂芳基被0-3个R8A取代。
5.根据权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R8独立地选自：
6.根据权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R8独立地选自：
7.根据权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R8独立地选自：
各R8A独立地选自：卤素、CN、OH、-(O)m-(被0-1个R8B取代的C1-C6烷基)、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、NH2、-N(C1-C4烷基)2、C3-C6环烷基、-O-C3-C6环烷基、-C(＝O)(C1-C4烷基)、-C(＝O)NH2、
-C(＝O)NH(C1-C4烷基)、-C(＝O)N(C1-C4烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、
-NHC(＝O)N(C1-C4烷基)2、-S(＝O)(C1-C4烷基)、-S(＝O)2(C1-C4烷基)、-S(＝O)2NH2、
-S(＝O)2NH(被0-1个OH取代的C1-C4烷基)、-S(＝O)2N(C1-C4烷基)2、-NHS(＝O)2(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(S(＝O)2(C1-C4烷基))、四唑基、
R8B独立地选自：CN、OH、C1-C4烷氧基、-N(C1-C4烷基)2、-C(＝O)NH(C1-C4烷基)、-C(＝O)N(C1-C4烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、
-N(→O)(C1-C4烷基)2、-S(＝O)2(C1-C4烷基)、
Ra独立地选自：H和C1-C4烷基；且
RC独立地是C1-C4烷基。
8.根据权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R8独立地选自：
各R8A独立地选自：卤素、CN、OH、-(O)m-(被0-1个R8B取代的C1-C6烷基)、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、N(C1-C4烷基)2、C3-C6环烷基、-O-C3-C6环烷基、-C(＝O)NH(C1-C4烷基)、-C(＝O)N(C1-C4烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、-NHC(＝O)N(C1-C4烷基)2、-S(＝O)2(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(S(＝O)2(C1-C4烷基))、
R8B独立地选自：CN、OH、C1-C4烷氧基、-N(C1-C4烷基)2、-C(＝O)NH(C1-C4烷基)、-C(＝O)N(C1-C4烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C4烷基)、
-S(＝O)2(C1-C4烷基),和
Ra独立地选自：H和C1-C4烷基；且
RC独立地是C1-C4烷基。
9.根据权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
W独立地是N或CR4；
R1独立地是H或F；
R2独立地是H或F；
R3独立地是H或F；
R4独立地是H或F；
R5独立地是H或-OCH3；
R8A独立地选自：C1-C6烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、-N(C1-C4烷基)2、C3-C6环烷基、-O-C3-C6环烷基、
且
Ra独立地选自：H和C1-C4烷基。
10.根据权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
W独立地是CR4；
R4独立地是H或F；
R8A独立地选自：CH3、CH(CH3)2、CH(CH3)(CH2CH3)、OCH3、OCH2CH3、OCH(CH3)2、CHF2、N(CH3)2、环丙基、-O-环丙基、
11.根据权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R6和R7是H；
R8独立地选自：
各R8A独立地选自：被0-1个OH取代的C1-C4烷基，和C1-C4卤代烷基；
Ra独立地选自：H、被0-1个Rb取代的C1-C4烷基和C3-C6环烷基；且
Rb独立地选自：OH和
12.根据权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1是F。
13.根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自下组：。
14.药物组合物，其包含一种或多种药学上可接受的载体和权利要求1-13中任一项的化合物。
15.如权利要求14所述的药物组合物，其特征在于进一步包括至少一种附加治疗剂。
16.如权利要求15的药物组合物，其中所述至少一种附加治疗剂选自其他抗癌剂、免疫调节剂、抗过敏剂、止吐剂、止痛剂、细胞保护剂及其组合。
17.根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗。
18.根据权利要求1-13中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由EED和/或PRC2介导的疾病或病症的药物中的用途。
19.如权利要求18的用途，其中所述疾病或病症选自弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、其他淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌瘤、肝细胞癌、***癌，乳腺癌、胆管癌和胆囊癌、膀胱癌、脑肿瘤包括神经母细胞瘤、神经鞘瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、***、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾细胞癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤。
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