CN109897096A - 一种制备高效价绒促性素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备高效价绒促性素的方法。本发明的技术方法是将绒促性素中间品经溶解、预过滤、超滤、纳滤、沉淀、离心脱水以及干燥步骤制得的绒促性素。该技术的优点在于用超滤机进行超滤、用冷乙醇进行沉淀，能够有效的去除杂质，并保证蛋白活性。本方法提取的绒促性素质量标准符合中国药典、美国药典、英国药典及欧洲药典所规定的各项指标，本发明方法具有选择性好、产品纯度和收率高、能耗消耗量低、操作简单等优点。效价可达7000iu/mg以上。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及一种制备高效价绒促性素的方法。
背景技术
绒促性激素是从受精卵着床第1天，即受孕的第8天开始，由胎盘滋养层合体细胞分泌的。受孕后第20天尿中可测得HCG，当妊娠45天时，尿中HCG的浓度升高，60-70天时达到高峰
绒促性素是一种糖蛋白，由α-链和β-链两个亚基组成。其核心部分由氨基酸组成，以共价键与寡糖链相结合，此寡糖链由甘露糖、岩藻糖、半乳糖、乙酰氨基半乳糖、已酰氨基葡萄糖组成，在糖链的末端有一带负电的唾液酸，每个分子约含有20个分子的唾液酸。HCG的分子中，糖占30％，唾液酸有时达9％-10％，葡萄糖胺与半乳糖胺比例为4：1，其中氨基糖、中性糖、唾液酸含量几乎相等。
成品呈白色或类白色粉末，易溶于水，不溶于乙醇、***和丙酮等有机溶剂。干品稳定，稀溶液不稳定，过酸、过碱或受热都易被破坏，但在胶体溶液中能保护其活力不受损失，如在甘油溶液中，100℃能保持1小时。
临床主要用于男性垂体机能不足所致的性机能过低症和隐睾症，用于由黄体功能不全引起的功能性子宫出血病和习惯性流产。与自孕马血清、绝经期妇女尿中提取的促性激素合用，可诱发***，治疗不育症，亦可用于皮肤搔痒症、神经性皮炎等。
发明内容
本发明的目的是提供了一种制备高效价绒促性素的方法。
本发明的技术方案是：将绒促性素中间品经溶解、预过滤、超滤、纳滤、沉淀、离心脱水以及干燥最终得到高效价的绒促性素。包括以下步骤：
（1）溶解：将绒促性素中间品按1g：0.02-0.03L的比例加入pH为7.0-7.5的磷酸盐缓冲液溶解。
（2）预过滤：溶解后的产品用0.22um滤芯过滤，预过滤的压力不超过0.2Mpa。
（3）超滤：将预过滤后的液体用10KD超滤膜进行超滤浓缩，进口压力为0.1-0.2Mpa，浓缩至原体积的15%-20%。
（4）纳滤：将超滤后的液体用20nm的滤芯进行过滤，压力为0.2-0.3Mpa。
（5）沉淀：将纳滤后的液体按1L：6-7L的比例加入温度不超过-15℃的95%乙醇进行沉淀，沉淀时间在24h以上，产品最终温度不超过15℃。
（6）离心脱水：沉淀后，虹吸上层乙醇，下层沉淀物用冷冻离心机离心，离心后收集离心固体物，然后按固体物重量1g:0.003-0.005L的比例加入无水乙醇脱水两次，离心收集固体物。
（7）干燥工序：将离心固体物置真空干燥箱中干燥，用五氧化二磷作吸水剂，干燥12h后的产品即为高效价绒促性素成品。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：
传统工艺制得的绒促性素，工艺较复杂，成本较高，杂质较多，效价达不到5000iu/mg，而采用本方法制备的绒促性素成品，工艺简单，成本低，纯度高，制得的绒促性素成品效价达7000iu/mg以上。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例
所述的高效价绒促性素成品经溶解、预过滤、超滤、纳滤、沉淀、离心脱水、干燥即得，包括如下步骤：
1.溶解：将100g绒促性素中间品加入2.1LpH为7.0的磷酸盐缓冲液溶解。
2.预过滤：将溶解后的产品，用0.22um滤芯预过滤，压力为0.1Mpa。
3.超滤：将预过滤后的液体用10KD超滤膜进行过滤浓缩，压力为0.1Mpa，得到超滤液0.4L。
4.纳滤：用20nm滤芯纳滤，压力为0.2Mpa。纳滤后的液体为0.4L。
5.沉淀：将纳滤后的0.4L液体加入2.5L温度为-16℃的95%的乙醇，静置沉淀25h，沉淀最终温度为13℃。
6.离心脱水：沉淀后，虹吸上层乙醇，下层沉淀物用冷冻离心机离心,离心后收集离心固体物280g，然后加入无水乙醇共1.4L脱水两次，收集固体物。
7.干燥：将脱水后收集的固体物置真空干燥箱中干燥，用五氧化二磷作吸水剂，干燥13h后得到绒促性素成品93.8g。经测定效价为9050iu/mg。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (10)
1.一种制备高效价绒促性素的方法，其特征在于：将绒促性素中间品经溶解、预过滤、超滤、纳滤、沉淀、离心脱水以及干燥最终得到高效价的绒促性素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（1）溶解：将绒促性素中间品加入磷酸盐缓冲液溶解；
（2）预过滤：溶解后的产品，用滤芯进行预过滤；
（3）超滤：将预过滤后的液体用超滤膜进行超滤浓缩；
（4）纳滤：将超滤后的液体用滤芯进行纳滤；
（5）沉淀：将纳滤后的液体加入无水乙醇进行沉淀；
（6）离心脱水：虹吸上清液，沉淀物离心，收集离心固体物，再加入无水乙醇脱水两次，离心收集固体物；
（7）干燥：将固体物置干燥箱中进行干燥，干燥后的即为高效价的绒促性素成品。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中绒促性素中间品与磷酸盐缓冲液的比例为1g：0.02-0.03L，磷酸盐缓冲液的pH为7.0-7.5。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于：步骤（2）中，所用的滤芯为0.22um的滤芯，预过滤的压力不超过0.2Mpa。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，超滤膜为10KD超滤膜，进口压力为0.1-0.2Mpa，浓缩体积至原体积的15%-20%。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（4）中，所用滤芯为20nm滤芯，压力为0.2-0.3Mpa。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（5）中，加入的乙醇为95%以上的冷乙醇，乙醇温度不超过-15℃，乙醇加入量为纳滤后液体量的6-7倍；沉淀时间为24h以上；产品最终温度不超过15℃。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（6）中，固体物重量与无水乙醇的比例为1g：0.003-0.005L。
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（7）中，真空干燥时所用的吸水剂为五氧化二磷，干燥时间要大于12h。
10.根据权利要求1-9所述的方法，其特征在于，所制得的绒促性素成品，效价为7000iu/mg以上。
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