CN109879887B - 含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一种结构通式(I)所示新型的含吲哚结构的噻吩并[3,2‑d]嘧啶类衍生物，其可药用加酸成盐及其应用，药理活性筛选结果显示其对人肺腺癌细胞A549、人胃癌细胞MKN‑45和人结肠癌细胞HT‑29具有显著抑制作用，在研制抗肿瘤药物方面具有良好的开发应用前景。

Description

含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其应用

技术领域

本发明属医药领域，具体涉及含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐，它们的制备方法以及含有所述化合物的药物组合物。本发明还涉及该类化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

背景技术

随着世界范围内发病率和死亡率的增加，癌症已成为主要的死亡原因和全球公共卫生问题。为了攻克癌症，挽救更多正在遭受癌症折磨的病患，科学家们做出了不懈的努力。虽然涌现出了许多种类的抗肿瘤药物，但由于肿瘤细胞独特的转移机制、患者易产生耐药性、药物的选择性不好等原因，使得癌症一直没有得到理想的治疗。因此，设计和合成具有高效、高选择性和低副作用的抗肿瘤药物是医学及化学领域中一项重大的挑战和亟待解决的问题。含氮和硫原子的杂环化合物在新药设计和开发中占有重要地位。其中，含有噻吩并嘧啶，特别是含有噻吩并[3,2-d]嘧啶结构单元的化合物一直是药物化学家的关注焦点，常常具有抗肿瘤、抗菌、抗疟疾、抗氧化及抗病毒等广泛的生物活性，因此引起了化学家、药学家们的高度关注。在抗肿瘤药物应用方面，目前已经有多种含有噻吩并[3,2-d]嘧啶结构单元的抗肿瘤药物上市或进入不同阶段的临床研究阶段，比如：由韩美制药公司研发的奥莫替尼(Olmutinib，BI-1482694)于2016年5月获韩国食品药品***(MFDS)批准上市，用于肿瘤表皮生长因子受体(EGFR)突变的非小细胞肺癌的治疗。SNS-314是一种有效的极光激酶(Aurora kinases)A、B和C抑制剂，目前用于晚期实体瘤的治疗正处于一期临床试验阶段。GDC-0941(Pictilisib)是一种口服有效的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂，具有很好的ADME性质，目前该药物用于晚期实体瘤、转移性乳腺癌和非霍奇金淋巴瘤处于瘤的二期临床试验中。基于GDC-0941改造而获得的另外两个噻吩并[3,2-d]嘧啶类化合物GNE-490和GNE-493，这两个衍生物能够高效、选择性抑制PI3K通路并显示出了良好的药代动力学(pk)参数，这两个化合物用于乳腺癌的治疗目前处于二期临床研究阶段。此外，还有许多具有抗肿瘤活性的噻吩并[3,2-d]嘧啶类化合物，如PF-03758309、Fimepinostat(CUDC-907)和Apitolisib等化合物用于不同肿瘤的治疗均进入了临床研究阶段。另一方面，吲哚类衍生物也是一类重要的杂环化合物，含有吲哚结构的化合物常常具有广泛的生物活性。例如已经上市的由英国阿斯利康公司研发的肿瘤表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂奥斯替尼(AZD9291)就含有该结构片段。该药对服用吉非替尼和盐酸厄洛替尼的晚期肺癌病人耐药后的治疗效果非常明显。

发明内容

本发明的目的在于设计并合成一系列新的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物。经过体外活性筛选，表明该类化合物具有抗肿瘤活性，可用于抗肿瘤药物的开发。

本发明提供一种含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐，结构式如通式(I)所示：

其中：

R₁选自氢、C₁-C₁₀烷基、C₃-C₇环烷基、或被卤代的C₁-C₁₀烷基；

R₂选自氢、C₁-C₁₀烷基、C₃-C₇环烷基、或被卤代的C₁-C₁₀烷基；

Ar选自C₆-C₁₀芳基或5-10元杂芳基；其中，所述杂芳基含有1-3个选自N、O或S的杂原子，并且Ar被1-3个相同或不同的R₃取代；

所述R₃选自氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲磺酰基、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷基硫基、被羟基取代或被氨基取代或被卤代的C₁-C₆烷基、被羟基取代或被氨基取代或被卤代的C₁-C₆烷氧基、被单或双C₁-C₆烷基取代的氨基、被单或双C₁-C₆烷基取代的氨基甲酰基、C₁-C₆烷氧基甲酰基或被单或双C₁-C₆烷基取代的氨基甲酰基。

上述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐，其中：

R₁选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基或环丁基；

R₂选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基或环丁基；

Ar选自呋喃基、吡咯基、噻吩基、苯基、吡啶基、萘基或喹啉基，并且Ar任选被1-3个相同或不同的R₃取代；

所述R₃选自氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲磺酰基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、丙烯基、烯丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基哌嗪基、吗啉基、1-吡咯烷基、甲氧基甲酰基、乙氧基甲酰基、甲氨基甲酰基或二甲氨基甲酰基。

上述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐，其中：

R₁选自氢或甲基；

R₂选自氢或甲基；

Ar选自苯基，并且苯基任选被1-3个相同或不同的R₃取代；

所述R₃为氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲磺酰基、甲基、甲氧基、二甲氨基、N-甲基哌嗪基、吗啉基、1-吡咯烷基或甲氧基甲酰基。

上述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐，具有如下结构，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制：

(E)-2-(2-苄叉肼基)-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-氟苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-甲氧基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(2,4-二氟苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-二甲氨基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(2,4-二甲氧基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(2-氟苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(2,4-二羟基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(3,4,5-三甲氧基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-甲磺酰基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(1-苯基亚乙基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-{2-[1-(4-氟苯基)亚乙基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-{2-[1-(2-氟苯基)亚乙基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-{2-[1-(4-甲氧基苯基)亚乙基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-{2-[4-(1-甲基哌嗪基)苄叉基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-吗啉苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-{2-[4-(1-吡咯烷基)苄叉基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-甲氧基甲酰基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶。

一种包括含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物或药学上接受的盐的药物组合物，包括上述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物或药学上接受的盐作为活性成分或药学上可接受的赋形剂。

上述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐或上述的药物组合物在制备治疗和/或预防增生性疾病药物中的应用。

上述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐或上述的药物组合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的应用。

上述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐或上述的药物组合物在制备治疗和/或预防肺癌、胃癌和结肠癌的药物中的应用。

而且，按照本发明所属领域的一些通常方法，本发明中通式(I)所示的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物可以与酸生成药学上可接受的盐。可药用加成盐包括无机酸和有机酸加成盐，与下列酸加成的盐是特别优选的：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。

本发明中“卤素是指氟、氯、溴或碘代；“烷基”是指直链或支链的烷基；“亚烷基”是指直链或支链的亚烷基；“环烷基”是指取代或未取代的环烷基；“芳基”是指无取代基或连有取代基的苯基；“杂芳基”是指含有一个或多个选自N、O、S杂原子的单环或多环的环状体系，环状体系是芳香性的，如咪唑基、吡啶基、吡唑基、(1,2,3)-和(1,2,4)-***基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、苯并噻唑基、噁唑基、异噁唑基、萘基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基和苯并噁唑基等；“饱和或部分饱和的杂环基”是指含有一个或多个选自N、O、S的杂原子的单环或多环的环状体系，如吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡唑烷基、咪唑烷基和噻唑啉基等。

本发明的有益效果是：

本发明将噻吩并[3,2-d]嘧啶和吲哚两个常用具有抗肿瘤活性的结构片段拼合到一个分子中，制备结构新颖的具有抗肿瘤开发前景的化合物。

本发明通过体外抑制人肺腺癌细胞A549、人胃癌细胞MKN-45和人结肠癌细胞HT-29活性试验，证明本发明化合物对人肺腺癌细胞、人胃癌细胞和人结肠癌细胞具有显著抑制作用，特别用于制备治疗和/或预防肺癌、胃癌和结肠癌的药物。

下面的合成路线描述了本发明的通式(I)衍生物的制备，所有的原料都是通过下述的合成路线、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终衍生物都是通过下述的合成路线或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。下述的合成路线中应用的全部可变因数如下文的定义或如权利要求中的定义。

合成路线如下所示：

具体实施方式

下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下述实例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。下列实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。化合物的核磁共振氢谱用Bruker ARX-300或ARX-600测定，质谱用Agilent 6460QQQ测定；化合物的红外光谱用Perkin-Elmer Spectrum one FT-IR测定(溴化钾压片法)，所用试剂均为分析纯或化学纯。

制备通法

步骤A 2,4-二羟基噻吩并[3,2-d]嘧啶(a)

将3-氨基-2-噻吩甲酸甲酯(124.8g,0.79mmol)与脲(275.4g,3.97mol)混合均匀，加热至190℃搅拌反应2小时。冷却反应至120℃时，趁热加入到600mL 7.5％的氢氧化钠溶液中，搅拌至大部分固体溶解，抽滤，滤去不溶物，调节pH至3，析出大量的乳白色固体，抽滤，滤饼水洗至中性，干燥得淡黄色固体2,4-二羟基噻吩并[3,2-d]嘧啶(a)121.0g，收率90.6％。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.58(s,1H),11.24(s,1H),8.06(d,J＝5.2Hz,1H),6.92(d,J＝5.2Hz,1H)。

步骤B 2,4-二氯噻吩并[3,2-d]嘧啶(b)

将2,4-二羟基噻吩并[3,2-d]嘧啶(14.8g,88.0mmol)缓慢地加入到80mL的三氯氧磷中，加热回流10小时。减压蒸发除去溶剂，将残留物缓慢地倒入冰水中，剧烈搅拌，析出大量的白色固体，抽滤，滤饼水洗至中性，干燥得到浅黄色的固体2,4-氯噻吩并[3,2-d]嘧啶(b)12.72g，收率为70.5％。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.71(d,J＝5.4Hz,1H),7.74(d,J＝5.4Hz,1H)。

步骤C 2-氯-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(c)

将2,4-氯噻吩并[3,2-d]嘧啶(12.30g,60.00mmol)和三氯化铝(9.60g,72.00mmol)溶于干燥的1,4-二氧六环(150mL)中，室温搅拌10-20分钟，向上述混合物中缓慢加入1-甲基吲哚(8.70g,66.30mmol)，加热至80℃搅拌反应3小时。将反应液冷却至室温，缓慢地倒入冰水中，剧烈搅拌，析出大量固体，抽滤，滤饼水洗至中性，干燥得粗产物，粗产物经过硅胶柱层析分离得到到浅黄色的固体2-氯-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(c)14.10g，收率为78.5％。MS(ESI)m/z(％):300.1[M+H]⁺。

步骤D 2-肼基-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(d)

将2-氯-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(10.20g,34.00mmol)用100mL乙醇溶解，慢慢加入80％水合肼(8.0mL)，回流反应15小时，将反应液冷却至10℃以下，过滤出沉淀，水洗，真空干燥，得7.00g淡黄色固体2-肼基-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(d)，收率为69.7％。¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.69(d,J＝7.9Hz,1H),7.95(s,1H),7.79(d,J＝5.4Hz,1H),7.43–7.27(m,4H),6.43(s,1H),4.57–3.93(m,2H),3.90(s,3H)；MS(ESI)m/z(％):296.1[M+H]⁺。

步骤E：实施例1–18化合物制备通法：

将2-肼基-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(0.30g,1.02mmol)和1.2当量的醛或酮加入到5.0mL乙醇中，加入适量冰醋酸，回流反应5-8小时，反应完毕，冷却至室温，过滤出沉淀，干燥得白色固体产物。

按照实施制备通法，分别制得实施例1–18化合物。

实施例1：(E)-2-(2-苄叉肼基)-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物1)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):3445.3,1526.4,1361.5,1305.3,1237.7,1138.5,1053.5,738.3；¹HNMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.27(s,1H),9.25(s,1H),8.36(s,1H),8.32(d,J＝5.4Hz,1H),8.23(s,1H),7.81(d,J＝7.5Hz,2H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.45–7.32(m,4H),4.01(s,3H).

实施例2：(E)-2-[2-(4-氟苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物2)，结构式如下：

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.27(s,1H),9.22(s,1H),8.36(s,1H),8.32(d,J＝5.4Hz,1H),8.23(s,1H),7.88–7.81(m,2H),7.64–7.57(m,1H),7.48–7.29(m,5H),4.01(s,3H)；MS(ESI)m/z(％):402.1[M+H]⁺.

实施例3：(E)-2-[2-(4-甲氧基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物3)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):3436.5,1576.3,1529.6,1467.3,1359.5,1303.8,1244.4,1121.4,1037.1,744.4；MS(ESI)m/z(％):414.1[M+H]⁺.

实施例4：(E)-2-[2-(2,4-二氟苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物4)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):3201.3,3038.5,1575.0,1521.2,1469.6,1413.7,1352.7,1304.8,1273.8,1255.2,1236.8,1204.9,1131.5,1087.4,1055.7,962.0,914.8,842.9,788.3,751.9,773.5,706.7,658.3；¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.37(s,1H),9.12(s,1H),8.45–8.20(m,3H),8.17–8.00(m,1H),7.53(d,J＝7.5Hz,1H),7.40–7.09(m,5H),3.94(s,3H).

实施例5：(E)-2-[2-(4-二甲氨基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物5)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):3444.8,1608.2,1533.2,1357.5,1304.0,1234.9,1138.3,946.5,743.5；¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ10.93(s,1H),9.24(s,1H),8.33(s,1H),8.28(d,J＝5.4Hz,1H),8.11(s,1H),7.68–7.56(m,3H),7.42–7.30(m,3H),6.82(d,J＝8.7Hz,2H),4.00(s,3H),2.99(s,6H).

实施例6：(E)-2-[2-(2,4-二甲氧基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物6)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):344.9,1606.0,1523.8,1408.1,1349.1,1303.8,1278.1,1237.4,1208.1,1123.1,746.7；MS(ESI)m/z(％):444.1[M+H]⁺.

实施例7：(E)-2-[2-(2-氟苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物7)，结构式如下：

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.45(s,1H),9.22(s,1H),8.45(s,1H),8.37(s,1H),8.33(d,J＝5.4Hz,1H),8.15(t,J＝7.2Hz,1H),7.61(d,J＝7.2Hz,1H),7.48–7.25(m,6H),4.01(s,3H)；MS(ESI)m/z(％):402.1[M+H]⁺.

实施例8：(E)-2-[2-(2,4-二羟基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物8)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):3429.1,1628.8,1527.5,1370.3,1236.2,797.4,752.7；；MS(ESI)m/z(％):416.1[M+H]⁺.

实施例9：(E)-2-[2-(3,4,5-三甲氧基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物9)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):344.6,1524.7,1369.8,1303.7,1233.0,1089.8,949.3,872.6,793.4,742.6,659.7；MS(ESI)m/z(％):474.2[M+H]⁺.

实施例10：(E)-2-[2-(4-甲磺酰基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物10)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):3434.1,1523.3,1413.2,1357.0,1306.3,1239.2,1140.0,750；¹HNMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.51(s,1H),9.16(s,1H),8.33–8.26(m,2H),8.22(s,1H),7.97(s,4H),7.58–7.53(m,1H),7.38(d,J＝5.4Hz,1H),7.35–7.30(m,2H),3.95(s,3H),3.21(s,3H).

实施例11：(E)-2-[2-(1-苯基亚乙基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物11)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):344.4,1610.4,1528.3,1474.4,1413.1,1368.2,1301.6,1235.4,1146.6,792.3,736.2,695.6；MS(ESI)m/z(％):398.1[M+H]⁺.

实施例12：(E)-2-{2-[1-(4-氟苯基)亚乙基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物12)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):3426.7,1531.9,1416.9,1356.4,,1302.9,1234.9,1148.1,833.9,787.5,745.5；MS(ESI)m/z(％):416.1[M+H]⁺.

实施例13：(E)-2-{2-[1-(2-氟苯基)亚乙基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物13)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):3433.1,3283.1,1613.4,1527.0,1413.3,1365.7,1302.8,1234.6,1104.0,1150.2,1123.4,1075.3,1054.9,833.8,792.9,748.2,696.8,661.4；MS(ESI)m/z(％):416.1[M+H]⁺.

实施例14：(E)-2-{2-[1-(4-甲氧基苯基)亚乙基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物14)，结构式如下：

IR(KBr,cm^-1):3426.0,1609.0,1531.4,1476.1,1417.0,1363.0,1304.3,1246.8,1182.0,1127.3,1028.3,824.9,791.5,749.8,708.9,656.9；MS(ESI)m/z(％):428.1[M+H]⁺.

实施例15：(E)-2-{2-[4-(1-甲基哌嗪基)苄叉基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物15)，结构式如下：

MS(ESI)m/z(％):482.2[M+H]⁺.

实施例16：(E)-2-[2-(4-吗啉苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物16)，结构式如下：

MS(ESI)m/z(％):467.2[M+H]⁺.

实施例17：(E)-2-{2-[4-(1-吡咯烷基)苄叉基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物17)，结构式如下：

MS(ESI)m/z(％):453.1[M+H]⁺.

实施例18：(E)-2-[2-(4-甲氧基甲酰基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物18)，结构式如下：

MS(ESI)m/z(％):442.1[M+H]⁺.

实施例19：本发明含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物的体外抗肿瘤细胞活性

对部分所合成的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物进行了体外抑制人肺腺癌细胞A549、人胃癌细胞MKN-45和人结肠癌细胞HT-29活性筛选。

(1)细胞复苏并传代2-3次稳定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其从培养瓶底部消化下来。将细胞消化液倒入离心管中，之后加入培养液以终止消化。将离心管在800r/min下离心10min，弃去上清液后加入5mL培养液，吹打混匀细胞，吸取10μL细胞混悬液加入细胞计数板中计数，调整细胞浓度为10⁴个/孔。96孔板中除A1孔为空白孔不加细胞外，其余皆加入100μL细胞混悬液。将96孔板放入培养箱中培养24h。

(2)用50μL二甲基亚砜溶解受试样品，然后加入适量培养液，使样品溶解成2mg/mL药液，然后在24孔板中将样品稀释为20,4,0.8,0.16,0.032μg/mL。

每个浓度加入3孔，其中周围两行两列细胞长势受环境影响较大，只和为空白细胞孔使用。将96孔板放入培养箱中培养72h。

(3)将96孔板中带药培养液弃去，用磷酸缓冲溶液(PBS)将细胞冲洗两遍，在每孔中加入MTT(四氮唑)(0.5mg/mL)100μL放入培养箱中4h后，弃去MTT溶液，加入二甲基亚砜100μL。在磁力振荡器上振荡使存活细胞与MTT反应产物甲臜充分溶解，放入酶标仪中测定结果。通过Bliss法可求出药物IC₅₀值。

实施化合物及阳性对照药索拉菲尼的抑制人肺腺癌细胞A549、人胃癌细胞MKN-45和人结肠癌细胞HT-29活性结果见表1。

表1

从表1可以清楚地看出，本发明所要保护的通式(I)的化合物在体外对人肺腺癌细胞A549、人胃癌细胞MKN-45和人结肠癌细胞HT-29均具有良好的抑制活性。该类化合物具有良好的抗肿瘤药物开发应用前景。

尽管已经通过特定实施方案描述了本发明，但修改和等价变化对于精通此领域的技术人员而言是显见的，且它们都包含在本发明范围之。

Claims (8)

1.含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐，其特征在于，结构式如通式（I）所示：

其中：

R₁选自氢、C₁-C₁₀烷基、C₃-C₇环烷基、或被卤代的C₁-C₁₀烷基；

R₂选自氢、C₁-C₁₀烷基、C₃-C₇环烷基、或被卤代的C₁-C₁₀烷基；

Ar选自C₆-C₁₀芳基或5-10元杂芳基；其中，所述杂芳基含有1-3个选自N、O或S的杂原子，并且Ar被1-3个相同或不同的R₃取代；

所述R₃选自氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲磺酰基、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷基硫基、被羟基取代或被氨基取代或被卤代的C₁-C₆烷基、被羟基取代或被氨基取代或被卤代的C₁-C₆烷氧基、被单或双C₁-C₆烷基取代的氨基、被单或双C₁-C₆烷基取代的氨基甲酰基、C₁-C₆烷氧基甲酰基或被单或双C₁-C₆烷基取代的氨基甲酰基。

2.根据权利要求1所述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐，其特征在于，

R₁选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基或环丁基；

R₂选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基或环丁基；

Ar选自呋喃基、吡咯基、噻吩基、苯基、吡啶基、萘基或喹啉基，并且Ar任选被1-3个相同或不同的R₃取代；

所述R₃选自氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲磺酰基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、丙烯基、烯丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、二甲氨基、二乙氨基、甲氧基甲酰基、乙氧基甲酰基、甲氨基甲酰基或二甲氨基甲酰基。

3.根据权利要求2所述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐，其特征在于，

R₁选自氢或甲基；

R₂选自氢或甲基；

Ar选自苯基，并且苯基任选被1-3个相同或不同的R₃取代；

所述R₃选自氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲磺酰基、甲基、甲氧基、二甲氨基。

4.根据权利要求1所述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐，其特征在于，具有如下结构：

(E)-2-(2-苄叉肼基)-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-氟苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-甲氧基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(2,4-二氟苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-二甲氨基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(2,4-二甲氧基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(2-氟苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(2,4-二羟基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(3,4,5-三甲氧基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-甲磺酰基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(1-苯基亚乙基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-{2-[1-(4-氟苯基)亚乙基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-{2-[1-(2-氟苯基)亚乙基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-{2-[1-(4-甲氧基苯基)亚乙基]肼基}-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶；

(E)-2-[2-(4-甲氧基甲酰基苄叉基)肼基]-4-(1-甲基-1H-3-吲哚基)噻吩并[3,2-d]嘧啶。

5.一种包括含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物或药学上接受的盐的药物组合物，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐作为活性成分或药学上可接受的赋形剂。

6.权利要求1-4任一项所述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐或权利要求5所述的药物组合物在制备治疗和/或预防增生性疾病药物中的应用。

7.权利要求1-4任一项所述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐或权利要求5所述的药物组合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的应用。

8.权利要求1-4任一项所述的含吲哚结构的噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其药学上接受的盐或权利要求5所述的药物组合物在制备治疗和/或预防肺癌、胃癌和结肠癌的药物中的应用。