CN109749964A - 提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法 - Google Patents
提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109749964A CN109749964A CN201910140769.6A CN201910140769A CN109749964A CN 109749964 A CN109749964 A CN 109749964A CN 201910140769 A CN201910140769 A CN 201910140769A CN 109749964 A CN109749964 A CN 109749964A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus acidophilus
- freeze
- hours
- fermentation
- powder
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及菌种培养基技术领域,具体地说是一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法。本发明同现有技术相比,根据嗜酸乳杆菌营养需求,在添加有机豌豆蛋白粉增菌试验的基础上,减少发酵液离心、乳化、冻干后的杂质,以提高嗜酸乳杆菌冻干菌粉的活菌数。
Description
技术领域
本发明涉及菌种培养基技术领域,具体地说是一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法。
背景技术
嗜酸乳杆菌是栖息在人体肠道内的有益菌之一,当存在一定数量时,它能有利地调节肠道内有益和有害微生物菌群间的平衡,从而达到促进宿主健康的功效,它作为目前乳酸菌家族中极为重视研究和开发价值的益生菌,被视为第三代乳酸发酵剂菌种。乳酸菌活菌制剂是以其所含活菌的积极生命活动而达到调节其宿主微生态平衡的,其中活菌含量的高低始终是评定产品质量的一项关键指标。国内关于嗜酸乳杆菌的研究已经不少,但产品活菌数相对较低。因此,优化设计嗜酸乳杆菌增菌培养基是一项十分重要的基础研究工作。
嗜酸乳杆菌有复杂的营养要求,需要较低的氧分压、可发酵的糖类、蛋白质、氨基酸、肽、核酸衍生物、脂肪或脂肪酸类物质、微量元素、大量的B族维生素满足它们的生长。
因此,需要设计一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法,满足嗜酸乳杆菌营养需求,以提高嗜酸乳杆菌冻干菌粉的活菌数。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供了一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法,满足嗜酸乳杆菌营养需求,以提高嗜酸乳杆菌冻干菌粉的活菌数。
为了达到上述目的,本发明是一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法,其特征在于:按如下步骤进行:步骤1,在250ml平底瓶中装200ml的MRS种子培养基,接种保存的嗜酸乳杆菌甘油管,置于37℃恒温培养箱并静置培养12小时,形成嗜酸乳杆菌种子;步骤2,转接2%的嗜酸乳杆菌种子至200ml的MRS种子培养基中,培养6至8小时,形成2%嗜酸乳杆菌种子;步骤3,取10g/L的有机豌豆蛋白粉,倒入含10%质量浓度酒精的水中,搅拌均匀,在35~40℃的温度下,浸泡3小时,浸泡完成后,在60℃~80℃的温度下,蒸煮2小时,形成蒸煮后的有机豌豆蛋白粉;步骤4,蒸煮后的有机豌豆蛋白粉采用6000r/min的速度进行10分钟的离心,离心后,取上清加水定容至2L,加入发酵培养基原料并搅拌均匀,用质量浓度为20%的NaOH溶液调整pH值至7.0,在115℃的温度下进行15分钟的灭菌处理后,冷却至室温,形成发酵培养基;步骤5,将2%嗜酸乳杆菌种子放入发酵培养基中,置于37℃恒温培养箱并静置培养12小时后,检测OD600值、pH值及发酵液活菌数;步骤6,采用6000r/min的速度进行15分钟的离心,形成菌泥,加入菌泥重量20%的乳粉,乳化15分钟,在温度-80℃条件下,预冻4小时,预冻后,在冷阱温度低于-55℃,真空度0.1Pa条件下,冷冻干燥22~30小时,形成冻干粉。
所述的MRS种子培养基包括20 g/L的葡萄糖,10 g/L的牛肉浸粉,10 g/L的蛋白胨,5 g/L的酵母膏,5 g/L的无水乙酸钠,2 g/L的磷酸氢二钾,2 g/L的柠檬酸氢二铵,1 g/L的吐温-80,0.25 g/L的硫酸镁,0.05 g/L的硫酸锰。
所述的发酵培养基原料包括20 g/L的葡萄糖,10 g/L的牛肉浸粉,10 g/L的蛋白胨,14 g/L的酵母膏,5 g/L的无水乙酸钠,2 g/L的磷酸氢二钾,2 g/L的柠檬酸氢二铵,1g/L的吐温-80,0.25 g/L的硫酸镁,0.05 g/L的硫酸锰,1g/L的半胱胺酸盐,1g/L的鱼胶原蛋白肽。
所述的嗜酸乳杆菌的分类名为嗜酸乳杆菌 LA-G80(Lactobacillus acidophilusLA-G80),保藏地点为:中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC NO:M2013337,保藏时间为:2013年7月16日。
本发明同现有技术相比,根据嗜酸乳杆菌营养需求,在添加有机豌豆蛋白粉增菌试验的基础上,减少发酵液离心、乳化、冻干后的杂质,以提高嗜酸乳杆菌冻干菌粉的活菌数。
具体实施方式
现对本发明做进一步描述。
本发明中采用的嗜酸乳杆菌的分类名为LA-G80(Lactobacillus acidophilusLA-G80),保藏地点为:中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC NO:M2013337,保藏时间为:2013年7月16日。
本发明是一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法,按如下步骤进行:
步骤1,在250ml平底瓶中装200ml的MRS种子培养基,接种保存的嗜酸乳杆菌甘油管,置于37℃恒温培养箱并静置培养12小时,形成嗜酸乳杆菌种子。
步骤2,转接2%的嗜酸乳杆菌种子至200ml的MRS种子培养基中,培养6至8小时,形成2%嗜酸乳杆菌种子。
步骤3,取10g/L的有机豌豆蛋白粉,倒入含10%质量浓度酒精的水中,搅拌均匀,在35~40℃的温度下,浸泡3小时,浸泡完成后,在60℃~80℃的温度下,蒸煮2小时,形成蒸煮后的有机豌豆蛋白粉。
步骤4,蒸煮后的有机豌豆蛋白粉采用6000r/min的速度进行10分钟的离心,离心后,取上清加水定容至2L,加入发酵培养基原料并搅拌均匀,用质量浓度为20%的NaOH溶液调整pH值至7.0,在115℃的温度下进行15分钟的灭菌处理后,冷却至室温,形成发酵培养基。
步骤5,将2%嗜酸乳杆菌种子放入发酵培养基中,置于37℃恒温培养箱并静置培养12小时后,检测OD600值、pH值及发酵液活菌数。
步骤6,采用6000r/min的速度进行15分钟的离心,形成菌泥,加入菌泥重量20%的乳粉,乳化15分钟,在温度-80℃条件下,预冻4小时,预冻后,在冷阱温度低于-55℃,真空度0.1Pa条件下,冷冻干燥22~30小时,形成冻干粉。
MRS种子培养基包括20 g/L的葡萄糖,10 g/L的牛肉浸粉,10 g/L的蛋白胨,5 g/L的酵母膏,5 g/L的无水乙酸钠,2 g/L的磷酸氢二钾,2 g/L的柠檬酸氢二铵,1 g/L的吐温-80,0.25 g/L的硫酸镁,0.05 g/L的硫酸锰。
发酵培养基原料包括20 g/L的葡萄糖,10 g/L的牛肉浸粉,10 g/L的蛋白胨,14g/L的酵母膏,5 g/L的无水乙酸钠,2 g/L的磷酸氢二钾,2 g/L的柠檬酸氢二铵,1 g/L的吐温-80,0.25 g/L的硫酸镁,0.05 g/L的硫酸锰,1g/L的半胱胺酸盐,1g/L的鱼胶原蛋白肽。
对有机豌豆蛋白粉进行预处理的原因是有机豌豆蛋白粉沉淀物较多,影响发酵液离心冻干后菌粉活菌数及质量。
经过检测,如未对有机豌豆蛋白粉进行预处理,发酵液的OD600值:有沉淀,pH值:4.16,发酵液活菌数:35.2亿cfu/ml,但由于有较多的沉淀,导致离心乳化后的冻干菌粉中杂质含量超高,冻干菌粉活菌数为1940亿cfu/g,且难以提高。
而经过本发明有机豌豆蛋白粉进行预处理后的发酵液几乎不含杂质沉淀,OD600值:12.3,pH值:4.22,发酵液活菌数:34.9亿cfu/ml,与未对有机豌豆蛋白粉进行预处理的活菌数接近,冻干菌粉活菌数为3670亿cfu/g,远高于未对有机豌豆蛋白粉进行预处理的活菌数。
本发明的活菌计数方法如下:菌粉先用生理盐水溶解混匀,形成发酵液,取0.5mL发酵液加到装有4.5mL生理盐水的试管中混匀,形成10-1浓度的菌悬液。然后从10-1浓度的菌悬液中取0.5mL菌悬液到另外一个装有4.5mL生理盐水的试管中混匀,形成10-2浓度的菌悬液,重复此操作直至得到10-8浓度的菌悬液。取适宜梯度的菌悬液500μL到不同的空平板中,再倒入适量液体的MRS琼脂培养基,摇晃均匀后做好标记置于37℃恒温培养箱中倒置培养2天左右,待单菌落成熟后,进行计数,根据梯度得到最终发酵液活菌数或冻干菌粉活菌数。
Claims (4)
1.一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法,其特征在于:按如下步骤进行:步骤1,在250ml平底瓶中装200ml的MRS种子培养基,接种保存的嗜酸乳杆菌甘油管,置于37℃恒温培养箱并静置培养12小时,形成嗜酸乳杆菌种子;步骤2,转接2%的嗜酸乳杆菌种子至200ml的MRS种子培养基中,培养6至8小时,形成2%嗜酸乳杆菌种子;步骤3,取10g/L的有机豌豆蛋白粉,倒入含10%质量浓度酒精的水中,搅拌均匀,在35~40℃的温度下,浸泡3小时,浸泡完成后,在60℃~80℃的温度下,蒸煮2小时,形成蒸煮后的有机豌豆蛋白粉;步骤4,蒸煮后的有机豌豆蛋白粉采用6000r/min的速度进行10分钟的离心,离心后,取上清加水定容至2L,加入发酵培养基原料并搅拌均匀,用质量浓度为20%的NaOH溶液调整pH值至7.0,在115℃的温度下进行15分钟的灭菌处理后,冷却至室温,形成发酵培养基;步骤5,将2%嗜酸乳杆菌种子放入发酵培养基中,置于37℃恒温培养箱并静置培养12小时后,检测OD600值、pH值及发酵液活菌数;步骤6,采用6000r/min的速度进行15分钟的离心,形成菌泥,加入菌泥重量20%的乳粉,乳化15分钟,在温度-80℃条件下,预冻4小时,预冻后,在冷阱温度低于-55℃,真空度0.1Pa条件下,冷冻干燥22~30小时,形成冻干粉。
2.根据权利要求1所述的一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法,其特征在于:所述的MRS种子培养基包括20 g/L的葡萄糖,10 g/L的牛肉浸粉,10 g/L的蛋白胨,5 g/L的酵母膏,5 g/L的无水乙酸钠,2 g/L的磷酸氢二钾,2 g/L的柠檬酸氢二铵,1g/L的吐温-80,0.25 g/L的硫酸镁,0.05 g/L的硫酸锰。
3.根据权利要求1所述的一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法,其特征在于:所述的发酵培养基原料包括20 g/L的葡萄糖,10 g/L的牛肉浸粉,10 g/L的蛋白胨,14 g/L的酵母膏,5 g/L的无水乙酸钠,2 g/L的磷酸氢二钾,2 g/L的柠檬酸氢二铵,1g/L的吐温-80,0.25 g/L的硫酸镁,0.05 g/L的硫酸锰,1g/L的半胱胺酸盐,1g/L的鱼胶原蛋白肽。
4.根据权利要求1所述的一种提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法,其特征在于:所述的嗜酸乳杆菌的分类名为LA-G80(Lactobacillus acidophilus LA-G80),保藏地点为:中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC NO:M2013337,保藏时间为:2013年7月16日。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910140769.6A CN109749964A (zh) | 2019-02-26 | 2019-02-26 | 提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910140769.6A CN109749964A (zh) | 2019-02-26 | 2019-02-26 | 提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109749964A true CN109749964A (zh) | 2019-05-14 |
Family
ID=66407775
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910140769.6A Pending CN109749964A (zh) | 2019-02-26 | 2019-02-26 | 提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109749964A (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112063547A (zh) * | 2020-08-14 | 2020-12-11 | 润盈生物工程(上海)有限公司 | 一种格氏乳杆菌lg-g12高密度发酵及提高菌粉质量的方法 |
CN114686407A (zh) * | 2022-05-13 | 2022-07-01 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一种提高可培养细胞含量的嗜酸乳杆菌菌粉的制备方法 |
CN116286371A (zh) * | 2023-03-07 | 2023-06-23 | 深圳零一生命科技有限责任公司 | 一种提高菌株冻干效果的冻干保护剂配方 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101390564A (zh) * | 2007-09-18 | 2009-03-25 | 中国食品发酵工业研究院 | 一种玉米分离蛋白的生产方法 |
CN101486986A (zh) * | 2009-02-12 | 2009-07-22 | 上海谱莱生物技术有限公司 | 一种嗜酸乳杆菌冻干菌粉的制备方法 |
CN101974591A (zh) * | 2010-11-11 | 2011-02-16 | 湖北远成药业有限公司 | 一种酶法提取大豆肽的方法 |
CN106035648A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-10-26 | 润盈生物工程(上海)有限公司 | 一种枇杷风味酸奶粉及其制备方法 |
CN109355231A (zh) * | 2018-11-28 | 2019-02-19 | 江苏微康生物科技有限公司 | 有机益生菌菌粉的制备方法 |
-
2019
- 2019-02-26 CN CN201910140769.6A patent/CN109749964A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101390564A (zh) * | 2007-09-18 | 2009-03-25 | 中国食品发酵工业研究院 | 一种玉米分离蛋白的生产方法 |
CN101486986A (zh) * | 2009-02-12 | 2009-07-22 | 上海谱莱生物技术有限公司 | 一种嗜酸乳杆菌冻干菌粉的制备方法 |
CN101974591A (zh) * | 2010-11-11 | 2011-02-16 | 湖北远成药业有限公司 | 一种酶法提取大豆肽的方法 |
CN106035648A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-10-26 | 润盈生物工程(上海)有限公司 | 一种枇杷风味酸奶粉及其制备方法 |
CN109355231A (zh) * | 2018-11-28 | 2019-02-19 | 江苏微康生物科技有限公司 | 有机益生菌菌粉的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
卢菊慧: "影响豌豆蛋白乳化特性的分子机制", 《食品与机械》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112063547A (zh) * | 2020-08-14 | 2020-12-11 | 润盈生物工程(上海)有限公司 | 一种格氏乳杆菌lg-g12高密度发酵及提高菌粉质量的方法 |
CN114686407A (zh) * | 2022-05-13 | 2022-07-01 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一种提高可培养细胞含量的嗜酸乳杆菌菌粉的制备方法 |
CN114686407B (zh) * | 2022-05-13 | 2022-09-06 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一种提高可培养细胞含量的嗜酸乳杆菌菌粉的制备方法 |
CN116286371A (zh) * | 2023-03-07 | 2023-06-23 | 深圳零一生命科技有限责任公司 | 一种提高菌株冻干效果的冻干保护剂配方 |
CN116286371B (zh) * | 2023-03-07 | 2023-07-18 | 深圳零一生命科技有限责任公司 | 一种提高菌株冻干效果的冻干保护剂配方 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105341149B (zh) | 酸奶发酵剂及其制备方法 | |
CN106520633B (zh) | 一种植物乳杆菌冻干粉的制备方法 | |
CN106434463B (zh) | 一种鼠李糖乳杆菌冻干粉的制备方法 | |
CN106244509B (zh) | 鼠李糖乳杆菌培养基及培养方法 | |
CN102318806B (zh) | 一种益生菌发酵南瓜、胡萝卜蔬菜粉的制备方法 | |
CN108277178A (zh) | 一种双歧杆菌和乳酸杆菌的工业化高密度混合发酵培养基、发酵培养方法以及菌粉包埋方法 | |
CN106010997B (zh) | 一种植物乳杆菌及其培养分离方法、筛选方法和应用 | |
CN108102987B (zh) | 一种空间罗伊氏乳杆菌ss23-52及其干粉发酵剂的制备与在纯种益生菌酸奶中的应用 | |
CN106701642A (zh) | 一种嗜酸乳杆菌冻干粉的制备方法 | |
CN109749964A (zh) | 提高嗜酸乳杆菌发酵与冻干活菌数的培养基处理方法 | |
CN110564638A (zh) | 一株具有益生特性的罗伊氏乳杆菌及其用途 | |
CN102265925A (zh) | 一种香蕉益生菌凝固型酸奶及其制备方法 | |
CN108559717A (zh) | 一种嗜酸乳杆菌高密度发酵培养基及其菌粉制备方法 | |
CN109588726B (zh) | 一种用于改善睡眠的干酪乳杆菌组合物及其制备方法 | |
CN112094790B (zh) | 一种调节肠道菌群的植物乳杆菌lp45活菌制剂及应用 | |
CN108641979A (zh) | 一种屎肠球菌、其高密度发酵培养方法及由其制备的微生态制剂 | |
CN108707565A (zh) | 一种两歧双歧杆菌及其应用 | |
CN108753650A (zh) | 屎肠球菌以及由其制备的复合微生态制剂 | |
CN104430847A (zh) | 发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum Lee工作发酵剂制品及其预防便秘保健用途 | |
CN110577907B (zh) | 一种动物双歧杆菌及其应用 | |
CN108546663B (zh) | 一种猪源卷曲乳杆菌及其应用 | |
CN108018248B (zh) | 一种具有调节抗生素引起的菌群结构紊乱的干酪乳杆菌 | |
CN116970512A (zh) | 一种植物乳杆菌、植物乳杆菌的培养方法及其应用 | |
CN1793325A (zh) | 芳香型直投式酸奶发酵剂 | |
CN108239616A (zh) | 一株屎肠球菌菌株及其在酸浆豆腐加工中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20190514 |