CN109729912A - 一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法 - Google Patents
一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及食用菌菌种技术领域，尤其是一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，包括S1种菇选择、S2组织分离培养、S3制备母种、S4制备一级种、S5第一次转管培养、S6第二次转管培养、S7第三次转管培养、S8第四次转管培养、S9扩展原种、S10制备生产种等步骤。本发明，在选育时，以富硒山区的树木伴生的野生优良香菇菇体为种菇，并提取母种，在母种多次复壮培养过程中，利用培养基的不断变化，来提高富硒香菇菌种与生产培养基的适应性，实现野生富硒香菇菌种的复壮，提高菌种对硒肥的吸收利用率，生产的香菇含硒量、风味、品质高，针对性强，污染报废率低，菌菇转化率高，经济效益好。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌菌种技术领域，尤其是一种杨木木屑袋料栽培 的野生富硒香菇菌种的复壮方法。
背景技术
香菇产量在世界人工栽培食用菌中居第二位。随着生活品质的提 高，人们开始逐渐认识到香菇的营养价值，由于其独特的风味和增强 人体免疫功能的作用，成为人们最喜爱的健康食品之一。
近年来，由于野生香菇市场的供应不求，因此将香菇从野外自然 生长逐步变为人工驯化栽培，因此香菇的产量大幅度的提高，为了更 加满足日益增长的市场需求，则越来越多的种植户为了提高产量应用 各种化肥以及农药，使得香菇产量虽然增加但是香菇风味与野生香菇 相比相差较远，随着人们不断追求健康生活理念，广大的消费者更加 青睐于野生香菇，因此野生香菇资源大范围的遭到严重破坏。
硒是人体必须的微量元素，硒及硒化物除具有抗氧化性能外，还 具有抗肿瘤、延长寿命和提高机体免疫力等功能。世界上有40多个 国家土壤中缺硒，我国有70％地区属于缺硒地区，寻找和开发富硒 产品，以保证人体摄入充足的硒，正被各国科学工作者所关注。
目前，以食用菌作为富集硒元素的载体，在我国正处于研究中。 尤其是香菇栽培面积广，操作简单，富集能力显著，将香菇作为富集 硒元素的载体，研究者较多。而目前的富硒香菇的研究，主要集中在 富硒香菇的种植方面，对野生富硒香菇菌种驯化复壮方面的研究较 少。同时研究生产的香菇虽然含硒量较高，但是香菇的风味、品质较 差；在生产转接种中，香菇菌种退化问题严重，对硒肥的吸收利用率 也较低，易遭污染，抗逆性差，菌菇转化率低，种植户的经济效益不 高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇 菌种的复壮方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，包括以 下步骤：
S1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富 硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度 适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回；
S2、组织分离培养：将选取的种菇，采用组织分离法分离种菇伞 盖与菌柄交界处小块菌肉组织，置于培养皿中的基础PDA培养基上， 培养一段时间并及时去除遭污染的培养物；
S3、制备母种：用接种针挑选上一步骤中制得的性状优良的组织 培养菌种，置于试管中的含杨树叶汁液、富硒营养液、基础PDA培 养基的混合培养基上，再次移入18～22℃的恒温箱中，常规斜面培 养10～15天，最后置于超低温-80～-50℃保藏，制得野生富硒香菇 母种；以质量百分比计，所述混合培养基，其组分包括：杨树叶汁液 1.0％～3.0％、富硒营养液0.5％～0.8％、余量为基础PDA培养基；
S4、制备一级种：用接种针挑选上一步骤中制得的野生富硒香菇 母种，以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混 合物为培养基，接种，常规斜面培养10～15天，制得一级种；以质 量百分比计，所述杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培 养基的混合物，其组分包括：杨树叶汁液3.0％～5.0％、富硒营养液 0.8％～1.2％、小米粉1.0％～3.0％、余量为基础PDA培养基；
S5、第一次转管培养：用接种针挑选上一步骤中制得的一级种， 以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混合物为 培养基，接种，常规斜面培养10～15天；
S6、第二次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、磷酸二 氢钾、硫酸镁、维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15 天；
S7、第三次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、石膏、 维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；
S8、第四次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树树叶粉、杨树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、石膏、维生素、 水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；
S9、扩展原种：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种，以杨 树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、米糠、石膏、维生素、水为培养基， 接种，广口瓶常规培养，至广口瓶中菌丝发满为止；
S10、制备生产种：选取步骤S9培养的香菇菌种，以杨树木屑、 富硒营养液、米糠、石膏、维生素、水为培养基，装袋、灭菌、接种， 常规培养，直至菌袋中菌丝发满为止，即制得可应用于杨木木屑袋料 栽培大生产的复壮的野生富硒香菇菌种。
优选地，在S5步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分 包括：杨树叶汁液5.0％～8.0％、富硒营养液1.2％～1.5％、小米粉 3.0％～5.0％、余量为基础PDA培养基。
优选地，在S6步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分 包括：杨树叶汁液8.0％～10.0％，杨树树叶粉3.0％～5.0％，富硒营 养液1.5％～1.8％，小米粉5.0％～8.0％，米糠粉2.0％～4.0％，余量 为磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素和水。
优选地，在S7步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分 包括：杨树叶汁液8.0％～10.0％，杨树树叶粉5.0％～8.0％，富硒营 养液1.8％～2.2％，小米粉5.0％～8.0％，米糠粉4.0％～8.0％，余量 为石膏、维生素、和水。
优选地，在S8步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分 包括：杨树树叶粉10.0％～15.0％，杨树木屑粉8.0％～15.0％，富硒 营养液2.2％～2.5％，米糠粉8.0％～12.0％，余量为石膏、维生素、 和水。
优选地，在S9步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分 包括：杨树木屑粉18.0％～30.0％，富硒营养液2.5％～3.5％，米糠粉 4.0％～8.0％、米糠3.0％～7.0％，余量为石膏、维生素、和水。
优选地，在S10步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分 包括：杨树木屑30.0％～50.0％，富硒营养液3.5％～5.0％，米糠 10.0％～20.0％，余量为石膏、维生素、和水。
优选地，所述基础PDA培养基，其制备方法为：称取洗净去皮 的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤， 在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、磷 酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分； 最后分装、灭菌、备用，即制得基础琼脂培养基。
优选地，所述富硒营养液为***钠溶液。
本发明的有益效果在于：
本发明一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法， 在选育时，以富硒山区的树木伴生的野生优良香菇菇体为种菇，并提 取母种，在母种多次复壮培养过程中，利用培养基的不断变化，来提 高富硒香菇菌种与生产培养基的适应性，实现针对杨木木屑袋料栽培 生产的香菇菌种的复壮，提高中的香菇菌种对硒肥的吸收利用率，生 产的香菇含硒量、风味、品质高，针对性强，污染报废率低，菌菇转 化率高，经济效益好，具有实际指导意义和推广应用价值。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员理解，下面结合具体实施例对本发明作 进一步的说明。
实施例1：
一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，包括以 下步骤：
S1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富 硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度 适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回；
S2、组织分离培养：将选取的种菇，采用组织分离法分离种菇伞 盖与菌柄交界处小块菌肉组织，置于培养皿中的基础PDA培养基上， 培养一段时间并及时去除遭污染的培养物；
S3、制备母种：用接种针挑选上一步骤中制得的性状优良的组织 培养菌种，置于试管中的含杨树叶汁液、富硒营养液、基础PDA培 养基的混合培养基上，再次移入18～22℃的恒温箱中，常规斜面培 养10～15天，最后置于超低温-80～-50℃保藏，制得野生富硒香菇 母种；以质量百分比计，所述混合培养基，其组分包括：杨树叶汁液 1.0％、富硒营养液0.5％、余量为基础PDA培养基；
S4、制备一级种：用接种针挑选上一步骤中制得的野生富硒香菇 母种，以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混 合物为培养基，接种，常规斜面培养10～15天，制得一级种；以质 量百分比计，所述杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培 养基的混合物，其组分包括：杨树叶汁液3.0％、富硒营养液0.8％、 小米粉3.0％、余量为基础PDA培养基；
S5、第一次转管培养：用接种针挑选上一步骤中制得的一级种， 以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混合物为 培养基，接种，常规斜面培养10～15天；以质量百分比计，所述培 养基，其组分包括：杨树叶汁液5.0％、富硒营养液1.2％、小米粉5.0％、 余量为基础PDA培养基。
S6、第二次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、磷酸二 氢钾、硫酸镁、维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15 天；以质量百分比计，所述培养基，其组分包括：杨树叶汁液8.0％， 杨树树叶粉5.0％，富硒营养液1.5％，小米粉8.0％，米糠粉2.0％， 余量为磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素和水。
S7、第三次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、石膏、 维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；以质量百分 比计，所述培养基，其组分包括：杨树叶汁液8.0％，杨树树叶粉8.0％， 富硒营养液1.8％，小米粉5.0％，米糠粉8.0％，余量为石膏、维生素、 和水。
S8、第四次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树树叶粉、杨树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、石膏、维生素、 水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；以质量百分比计，所 述培养基，其组分包括：杨树树叶粉10.0％，杨树木屑粉8.0％，富硒营养液2.2％，米糠粉12.0％，余量为石膏、维生素、和水。
S9、扩展原种：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种，以杨 树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、米糠、石膏、维生素、水为培养基， 接种，广口瓶常规培养，至广口瓶中菌丝发满为止；以质量百分比计， 所述培养基，其组分包括：杨树木屑粉18.0％，富硒营养液2.5％， 米糠粉4.0％、米糠7.0％，余量为石膏、维生素、和水。
S10、制备生产种：选取步骤S9培养的香菇菌种，以杨树木屑、 富硒营养液、米糠、石膏、维生素、水为培养基，装袋、灭菌、接种， 常规培养，直至菌袋中菌丝发满为止，即制得可应用于杨木木屑袋料 栽培大生产的复壮的野生富硒香菇菌种。以质量百分比计，所述培养 基，其组分包括：杨树木屑30.0％，富硒营养液3.5％，米糠20.0％， 余量为石膏、维生素、和水。
其中，上述所述基础PDA培养基，其制备方法为：称取洗净去 皮的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过 滤，在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、 磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分；最后分装、灭菌、备用，即制得基础琼脂培养基。
其中，上述所述富硒营养液为***钠溶液。
实施例2：
一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，包括以 下步骤：
S1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富 硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度 适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回；
S2、组织分离培养：将选取的种菇，采用组织分离法分离种菇伞 盖与菌柄交界处小块菌肉组织，置于培养皿中的基础PDA培养基上， 培养一段时间并及时去除遭污染的培养物；
S3、制备母种：用接种针挑选上一步骤中制得的性状优良的组织 培养菌种，置于试管中的含杨树叶汁液、富硒营养液、基础PDA培 养基的混合培养基上，再次移入18～22℃的恒温箱中，常规斜面培 养10～15天，最后置于超低温-80～-50℃保藏，制得野生富硒香菇 母种；以质量百分比计，所述混合培养基，其组分包括：杨树叶汁液 3.0％、富硒营养液0.8％、余量为基础PDA培养基；
S4、制备一级种：用接种针挑选上一步骤中制得的野生富硒香菇 母种，以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混 合物为培养基，接种，常规斜面培养10～15天，制得一级种；以质 量百分比计，所述杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培 养基的混合物，其组分包括：杨树叶汁液5.0％、富硒营养液1.2％、 小米粉1.0％、余量为基础PDA培养基；
S5、第一次转管培养：用接种针挑选上一步骤中制得的一级种， 以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混合物为 培养基，接种，常规斜面培养10～15天；以质量百分比计，所述培 养基，其组分包括：杨树叶汁液8.0％、富硒营养液1.5％、小米粉3.0％、 余量为基础PDA培养基。
S6、第二次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、磷酸二 氢钾、硫酸镁、维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15 天；以质量百分比计，所述培养基，其组分包括：杨树叶汁液10.0％， 杨树树叶粉3.0％，富硒营养液1.8％，小米粉5.0％，米糠粉4.0％， 余量为磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素和水。
S7、第三次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、石膏、 维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；以质量百分 比计，所述培养基，其组分包括：杨树叶汁液10.0％，杨树树叶粉5.0％， 富硒营养液2.2％，小米粉8.0％，米糠粉4.0％，余量为石膏、维生素、 和水。
S8、第四次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树树叶粉、杨树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、石膏、维生素、 水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；以质量百分比计，所 述培养基，其组分包括：杨树树叶粉15.0％，杨树木屑粉15.0％，富硒营养液2.5％，米糠粉8.0％，余量为石膏、维生素、和水。
S9、扩展原种：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种，以杨 树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、米糠、石膏、维生素、水为培养基， 接种，广口瓶常规培养，至广口瓶中菌丝发满为止；以质量百分比计， 所述培养基，其组分包括：杨树木屑粉30.0％，富硒营养液3.5％， 米糠粉8.0％、米糠3.0％，余量为石膏、维生素、和水。
S10、制备生产种：选取步骤S9培养的香菇菌种，以杨树木屑、 富硒营养液、米糠、石膏、维生素、水为培养基，装袋、灭菌、接种， 常规培养，直至菌袋中菌丝发满为止，即制得可应用于杨木木屑袋料 栽培大生产的复壮的野生富硒香菇菌种。以质量百分比计，所述培养 基，其组分包括：杨树木屑50.0％，富硒营养液5.0％，米糠10.0％， 余量为石膏、维生素、和水。
其中，上述所述基础PDA培养基，其制备方法为：称取洗净去 皮的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过 滤，在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、 磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分；最后分装、灭菌、备用，即制得基础琼脂培养基。
其中，上述所述富硒营养液为***钠溶液。
实施例3：
一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，包括以 下步骤：
S1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富 硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度 适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回；
S2、组织分离培养：将选取的种菇，采用组织分离法分离种菇伞 盖与菌柄交界处小块菌肉组织，置于培养皿中的基础PDA培养基上， 培养一段时间并及时去除遭污染的培养物；
S3、制备母种：用接种针挑选上一步骤中制得的性状优良的组织 培养菌种，置于试管中的含杨树叶汁液、富硒营养液、基础PDA培 养基的混合培养基上，再次移入18～22℃的恒温箱中，常规斜面培 养10～15天，最后置于超低温-80～-50℃保藏，制得野生富硒香菇 母种；以质量百分比计，所述混合培养基，其组分包括：杨树叶汁液 2.0％、富硒营养液0.65％、余量为基础PDA培养基；
S4、制备一级种：用接种针挑选上一步骤中制得的野生富硒香菇 母种，以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混 合物为培养基，接种，常规斜面培养10～15天，制得一级种；以质 量百分比计，所述杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培 养基的混合物，其组分包括：杨树叶汁液4.0％、富硒营养液1.0％、 小米粉2.0％、余量为基础PDA培养基；
S5、第一次转管培养：用接种针挑选上一步骤中制得的一级种， 以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混合物为 培养基，接种，常规斜面培养10～15天；以质量百分比计，所述培 养基，其组分包括：杨树叶汁液6.5％、富硒营养液1.35％、小米粉4.0％、余量为基础PDA培养基。
S6、第二次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、磷酸二 氢钾、硫酸镁、维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15 天；以质量百分比计，所述培养基，其组分包括：杨树叶汁液9.0％， 杨树树叶粉4.0％，富硒营养液1.65％，小米粉6.5％，米糠粉3.0％， 余量为磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素和水。
S7、第三次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、石膏、 维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；以质量百分 比计，所述培养基，其组分包括：杨树叶汁液9.0％，杨树树叶粉6.5％， 富硒营养液2.0％，小米粉6.5％，米糠粉6.0％，余量为石膏、维生素、 和水。
S8、第四次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种， 以杨树树叶粉、杨树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、石膏、维生素、 水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；以质量百分比计，所 述培养基，其组分包括：杨树树叶粉12.5％，杨树木屑粉12.0％，富硒营养液2.35％，米糠粉10.0％，余量为石膏、维生素、和水。
S9、扩展原种：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种，以杨 树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、米糠、石膏、维生素、水为培养基， 接种，广口瓶常规培养，至广口瓶中菌丝发满为止；以质量百分比计， 所述培养基，其组分包括：杨树木屑粉24.0％，富硒营养液3.0％， 米糠粉6.0％、米糠5.0％，余量为石膏、维生素、和水。
S10、制备生产种：选取步骤S9培养的香菇菌种，以杨树木屑、 富硒营养液、米糠、石膏、维生素、水为培养基，装袋、灭菌、接种， 常规培养，直至菌袋中菌丝发满为止，即制得可应用于杨木木屑袋料 栽培大生产的复壮的野生富硒香菇菌种。以质量百分比计，所述培养 基，其组分包括：杨树木屑40.0％，富硒营养液4.2％，米糠15.0％， 余量为石膏、维生素、和水。
其中，上述所述基础PDA培养基，其制备方法为：称取洗净去 皮的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过 滤，在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、 磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分；最后分装、灭菌、备用，即制得基础琼脂培养基。
其中，上述所述富硒营养液为***钠溶液。
上述对发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述 方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的这种非 实质改进，或未经改进将发明的构思和技术方案直接应用于其他场合 的，均在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回；
S2、组织分离培养：将选取的种菇，采用组织分离法分离种菇伞盖与菌柄交界处小块菌肉组织，置于培养皿中的基础PDA培养基上，培养一段时间并及时去除遭污染的培养物；
S3、制备母种：用接种针挑选上一步骤中制得的性状优良的组织培养菌种，置于试管中的含杨树叶汁液、富硒营养液、基础PDA培养基的混合培养基上，再次移入18～22℃的恒温箱中，常规斜面培养10～15天，最后置于超低温-80～-50℃保藏，制得野生富硒香菇母种；以质量百分比计，所述混合培养基，其组分包括：杨树叶汁液1.0％～3.0％、富硒营养液0.5％～0.8％、余量为基础PDA培养基；
S4、制备一级种：用接种针挑选上一步骤中制得的野生富硒香菇母种，以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混合物为培养基，接种，常规斜面培养10～15天，制得一级种；以质量百分比计，所述杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混合物，其组分包括：杨树叶汁液3.0％～5.0％、富硒营养液0.8％～1.2％、小米粉1.0％～3.0％、余量为基础PDA培养基；
S5、第一次转管培养：用接种针挑选上一步骤中制得的一级种，以杨树叶汁液、富硒营养液、小米粉、基础PDA培养基的混合物为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；
S6、第二次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种，以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；
S7、第三次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种，以杨树叶汁液、杨树树叶粉、富硒营养液、小米粉、米糠粉、石膏、维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；
S8、第四次转管培养：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种，以杨树树叶粉、杨树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、石膏、维生素、水为培养基，接种，常规斜面培养10～15天；
S9、扩展原种：以上一步骤中制得的斜面培养菌丝为菌种，以杨树木屑粉、富硒营养液、米糠粉、米糠、石膏、维生素、水为培养基，接种，广口瓶常规培养，至广口瓶中菌丝发满为止；
S10、制备生产种：选取步骤S9培养的香菇菌种，以杨树木屑、富硒营养液、米糠、石膏、维生素、水为培养基，装袋、灭菌、接种，常规培养，直至菌袋中菌丝发满为止，即制得可应用于杨木木屑袋料栽培大生产的复壮的野生富硒香菇菌种。
2.根据权利要求1所述一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，其特征在于，在S5步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分包括：杨树叶汁液5.0％～8.0％、富硒营养液1.2％～1.5％、小米粉3.0％～5.0％、余量为基础PDA培养基。
3.根据权利要求1所述一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，其特征在于，在S6步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分包括：杨树叶汁液8.0％～10.0％，杨树树叶粉3.0％～5.0％，富硒营养液1.5％～1.8％，小米粉5.0％～8.0％，米糠粉2.0％～4.0％，余量为磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素和水。
4.根据权利要求1所述一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，其特征在于，在S7步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分包括：杨树叶汁液8.0％～10.0％，杨树树叶粉5.0％～8.0％，富硒营养液1.8％～2.2％，小米粉5.0％～8.0％，米糠粉4.0％～8.0％，余量为石膏、维生素、和水。
5.根据权利要求1所述一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，其特征在于，在S8步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分包括：杨树树叶粉10.0％～15.0％，杨树木屑粉8.0％～15.0％，富硒营养液2.2％～2.5％，米糠粉8.0％～12.0％，余量为石膏、维生素、和水。
6.根据权利要求1所述一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，其特征在于，在S9步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分包括：杨树木屑粉18.0％～30.0％，富硒营养液2.5％～3.5％，米糠粉4.0％～8.0％、米糠3.0％～7.0％，余量为石膏、维生素、和水。
7.根据权利要求1所述一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，其特征在于，在S10步骤中，以质量百分比计，所述培养基，其组分包括：杨树木屑30.0％～50.0％，富硒营养液3.5％～5.0％，米糠10.0％～20.0％，余量为石膏、维生素、和水。
8.根据权利要求1所述一种杨木木屑袋料栽培的野生富硒香菇菌种的复壮方法，其特征在于，所述基础PDA培养基，其制备方法为：称取洗净去皮的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤，在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分；最后分装、灭菌、备用，即制得基础琼脂培养基。
9.根据权利要求1-7任意一项所述的一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，其特征在于，所述富硒营养液为***钠溶液。
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