CN109674870A - 一种抗菌促生长中药组合物及其制备方法和检测方法 - Google Patents

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Abstract

一种抗菌促生长中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料组成：枯草芽孢杆菌2‑10份；白头翁提取物5‑35份；黄芩提取物5‑40份；黄连提取物5‑35份；杜仲叶提取物30‑70份；山楂提取物20‑50份；陈皮提取物5‑35份；秦皮提取物5‑35份；甘草提取物5‑30份。该中药组合物为药学上可接受的剂型：片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、液体剂。本发明还提供一种抗菌促生长中药组合物的制备方法和检测方法。本发明能减少抗生素或部分替代抗生素及化学合成类药物在饲料中的添加，减少或避免动物产品药物残留，能有效解决乳猪、断奶仔猪、育肥猪、禽腹泻问题，使猪禽腹泻率和死亡率显著下降，主要用于猪、禽，作为混合饲料添加剂，可直接添加于饲料或养殖场拌料使用。

Description

一种抗菌促生长中药组合物及其制备方法和检测方法
技术领域
本发明涉及饲料添加剂，尤其与一种中药复方提取物与益生菌组合物及其的制备方法和检测方法有关。
背景技术
养殖常见问题：免疫力低下，容易患病；幼龄动物易腹泻，成活率需提高；料肉比高，饲养成本高；易受到环境、气温等影响，应激反应强。随着养殖密度增加，疾病预防和控制难度加大，造成抗生素滥用及高剂量锌制剂滥用，肉品污染（抗生素及重金属）、环境污染（动物***物重金属污染土地）事件频发。针对养殖中存在的食品安全隐患和环境污染问题，国家政策方针相继出台，导向为限制抗生素和高锌的添加，未来逐步使抗生素和高锌退出。“绿色、安全、健康、无抗”的要求不断被提出和倡导，采用优质的中药类及微生物类环保型添加剂替代抗生素及高锌成为行业转型的发展方向。
目前市场上常见中草药提取物作为添加剂的剂型为粉剂，在实际应用中，常对用户造成粉尘困扰，对其他物料、产品、生产人员及产品造成不小的影响，粉剂流动性与分散性较差，造成混合不均匀，影响终产品质量，普通粉剂被动物采食后，直接进入动物的胃中，与胃酸直接接触，很多活性物质会受到破坏，临床应用效果不理想。
发明内容
针对上述现有技术缺陷，本发明提出一种动物保健型添加剂替代抗生素，达到与抗生素相同的抗菌促生长效果，具体是提供一种中药复方提取物与益生菌组合物。本发明另一个目的是提供一种该组合物的制备方法与检测方法。
本发明采用以下技术：
一种抗菌促生长中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料组成：
枯草芽孢杆菌2-10份；
白头翁提取物5-35份；
黄芩提取物5-40份；
黄连提取物5-35份；
杜仲叶提取物30-70份；
山楂提取物20-50份；
陈皮提取物5-35份；
秦皮提取物5-35份；
甘草提取物5-30份。
进一步，所述枯草芽孢杆菌的含量要求为：不低于1.0×109CFU/g；
所述白头翁提取物的含量要求为：含白头翁皂苷B4不低于10%；
所述黄芩提取物的含量要求为：含黄芩苷不低于80%；
所述黄连提取物的含量要求为：含盐酸小檗碱不低于50%；
所述杜仲叶提取物的含量要求为：含绿原酸不低于1%；
所述山楂提取物的含量要求为：含有机酸以枸橼酸计不低于15%；
所述陈皮提取物的含量要求为：含橙皮苷不低于50%；
所述秦皮提取物的含量要求为：含秦皮甲素与秦皮乙素总和不低于10%；
所述甘草提取物的含量要求为：含甘草酸不低于8%。
进一步，该中药组合物为药学上可接受的剂型：片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、液体剂。
本发明还提供一种抗菌促生长中药组合物的制备方法，其特征在于：
取填充剂、粘合剂、助流剂，以及如权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物，过60~100目筛网，备用；
称取中药组合物8.2~34重量份、填充剂60~90.3重量份，混合均匀，加入1~4.5重量份的粘合剂经制软材、制颗粒、干燥、整粒，加入0.5~1.5重量份的助流剂经总混后，制得中药组合物的颗粒剂；
其中：
所述填充剂为淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠中的一种或多种；
所述粘合剂为水、聚维酮、羟丙甲纤维素、羟丙纤维素中的一种；
所述助流剂为微粉硅胶、硬脂酰富马酸钠、硬脂酸镁、滑石粉中的一种。
进一步，粘合剂的加入方法为：将粘合剂加入到中药组合物和填充剂的混合物中，混合均匀，加入水引发各原料的粘性；或是将粘合剂溶于水后，再加入到中药组合物和填充剂的混合物中产生粘性。
本发明提供的抗菌促生长中药组合物的另一种制备方法，其特征在于：
取填充剂、粘合剂、助流剂，以及如权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物，过60~100目筛网，备用；
取肠溶包衣材料5~15重量份、抗黏剂3.5~6.5重量份和增塑剂0.5~1.5重量份，加水，配制成固含量5%~25%的肠溶包衣液，备用；
称取中药组合物8.2~34重量份、填充剂38.5~81.8重量份，混合均匀；
加入1~4.5重量份的粘合剂至中药组合物和填充剂的混合物中制备软材、并使用挤出滚圆制丸机制备微丸，或是将中药组合物和填充剂的混合物加入离心制丸机中、并喷入1~4.5重量份的粘合剂制备微丸；
干燥；
将干燥获得的微丸，置于包衣设备中，喷入配制的肠溶包衣液进行包衣，使其包衣增重达到5%~40%，制得中药组合物的丸剂。
其中，
填充剂为淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠中的一种或多种；
粘合剂为水、聚维酮、羟丙甲纤维素、羟丙纤维素中的一种；
助流剂为微粉硅胶、硬脂酰富马酸钠、硬脂酸镁、滑石粉中的一种；
肠溶包衣材料为甲基丙烯酸共聚物A型、甲基丙烯酸共聚物B型、甲基丙烯酸共聚物C型、羟丙甲纤维素酞酸酯中的一种或多种；
抗黏剂为滑石粉、单硬脂酸甘油酯中的一种；
增塑剂为丙二醇、柠檬酸三乙酯、聚乙二醇6000中的一种。
本发明还提供这一种抗菌促生长中药组合物的检测方法，其特征在于，所述检测方法采用高效液相色谱法检测中药组合物白头翁皂苷B4、黄芩苷、绿原酸、盐酸小檗碱的含量：
（1）白头翁皂苷B4，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水64：36为流动相；检测波长为201nm；理论塔板数按白头翁皂苷B4峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备，取白头翁皂苷B4对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备，取本品0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇10ml，密塞，超声处理，功率150W、频率40KHZ、25分钟，放冷，滤过，滤液置250ml量瓶中，用少量流动相洗涤容器及残渣，洗液并入同一量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
（2）黄芩苷，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液47：53为流动相；检测波长为280nm；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1000；
对照品溶液的制备，取黄芩苷对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备，取本品0.5g，精密称定，置250ml量瓶中，加甲醇200ml超声10分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取续滤液，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
（3）绿原酸，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4％磷酸溶液13：87为流动相；检测波长为327nm；理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备，取绿原酸对照品5mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇20ml超声20分钟，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备，取本品2.5g，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇20ml超声20分钟，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
（4）盐酸小檗碱，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液50：50，每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0，为流动相；检测波长为345nm；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备，取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml含90.5μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备，取本品约0.2g，精密称定，加入150ml量瓶中，精密加入甲醇-盐酸100:1 50ml，密闭，称重；超声处理30min，放冷；称重，用甲醇补足减失的重量；摇匀，滤过，取续滤液1ml，加入50ml量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明有益效果：
1、本发明的中药组合物能有效解决乳猪、断奶仔猪、育肥猪、禽腹泻问题，使猪禽腹泻率和死亡率显著下降；能有效提高日采食量，使猪只增重速度明显加快，并能显著提高饲料转化率、降低料肉比，使猪只出栏时间明显缩短，可用于治疗动物腹泻拉稀、胃肠道感染、上呼吸道感染、促进消化、增加采食量、增强免疫力、提高抗应激能力；
2、本发明的中药组合物，减少抗生素或部分替代抗生素及化学合成类药物在饲料中的添加，减少或避免动物产品药物残留，增强免疫力，防病治病；高效止泻，降低幼龄动物腹泻发生率，提高成活率和健康活力；提高饲料转化率，降低料肉比，促进动物生长，提高日增重；提高动物抗应激能力，显著改善或提高动物健康状态；辅助提高临床用药效果，如伊维菌素、四环素类、大环内酯类；影响内分泌***，改善动物胴体组成，提高畜禽产品品质，主要用于猪、禽，作为混合饲料添加剂，可直接添加于饲料或养殖场拌料使用；
3、本发明的中药组合物，添加量少、原料来源稳定，严格进厂检验，药味合理搭配，并与益生菌配合使用，不受霉菌污染，易贮存，无重金属残留，多重功效，效果稳定；
4、白头翁皂苷B4、黄芩苷、盐酸小檗碱、绿原酸等成分含量明确，均建立了科学、准确的检测方法；
5、本发明制得的中药组合物颗粒，颗粒流动性好，外观美观，分散均匀，水分不超过8%，避免结块，霉变；本发明制得的中药组合物肠溶微丸，微丸流动性好，外观美观，分散均匀，剂量准确，水分不超过3%，避免结块，霉变；肠道内释放，释放完全，通过包衣掩盖异味，提高动物采食量，生物利用度高。
附图说明
图1为对照品黄芩苷的HPLC谱图。
图2为对照品盐酸小檗碱的HPLC谱图。
图3为对照品绿原酸的HPLC谱图。
图4为实施例1黄芩苷含量测定的HPLC谱图。
图5为实施例1盐酸小檗碱含量测定的HPLC谱图。
图6为实施例1绿原酸含量测定的HPLC谱图。
具体实施方式
为了使本申请的目的、技术方案和具体实施方法更为清楚，结合具体实施例对本申请进行进一步详细说明。
实施例1
按照以下重量份原料组成中药组合物：枯草芽孢杆菌2份；白头翁提取物5份；黄芩提取物5份；黄连提取物5份；杜仲叶提取物30份；山楂提取物20份；陈皮提取物5份；秦皮提取物5份；甘草提取物5份。
其中，所述枯草芽孢杆菌的含量要求为：不低于1.0×109CFU/g。所述白头翁提取物的含量要求为：含白头翁皂苷B4不低于10%；所述黄芩提取物的含量要求为：含黄芩苷不低于80%；所述黄连提取物的含量要求为：含盐酸小檗碱不低于50%；所述杜仲叶提取物的含量要求为：含绿原酸不低于1%；所述山楂提取物的含量要求为：含有机酸以枸橼酸计不低于15%；所述陈皮提取物的含量要求为：含橙皮苷不低于50%；所述秦皮提取物的含量要求为：含秦皮甲素与秦皮乙素总和不低于10%；所述甘草提取物的含量要求为：含甘草酸不低于8%。
取填充剂-淀粉、粘合剂-聚维酮、助流剂-微粉硅胶，以及配置的抗菌促生长中药组合物，过60目筛网，备用；
称取中药组合物8.2重量份、填充剂60重量份，混合均匀，加入1重量份的粘合剂，具体是，将粘合剂加入到中药组合物和填充剂的混合物中，混合均匀，加入水引发各原料的粘性；经制软材、制颗粒、干燥、整粒，加入0.5重量份的助流剂经总混后，制得中药组合物的颗粒剂。
实施例2
按照以下重量份原料组成中药组合物：枯草芽孢杆菌10份；白头翁提取物35份；黄芩提取物40份；黄连提取物35份；杜仲叶提取物70份；山楂提取物50份；陈皮提取物35份；秦皮提取物35份；甘草提取物30份。
其中，所述枯草芽孢杆菌的含量要求为：不低于1.0×109CFU/g。所述白头翁提取物的含量要求为：含白头翁皂苷B4不低于10%；所述黄芩提取物的含量要求为：含黄芩苷不低于80%；所述黄连提取物的含量要求为：含盐酸小檗碱不低于50%；所述杜仲叶提取物的含量要求为：含绿原酸不低于1%；所述山楂提取物的含量要求为：含有机酸以枸橼酸计不低于15%；所述陈皮提取物的含量要求为：含橙皮苷不低于50%；所述秦皮提取物的含量要求为：含秦皮甲素与秦皮乙素总和不低于10%；所述甘草提取物的含量要求为：含甘草酸不低于8%。
取填充剂-交联羧甲基纤维素钠、粘合剂-羟丙甲纤维素、助流剂-硬脂酸镁，以及配置的抗菌促生长中药组合物，过100目筛网，备用；
称取中药组合物34重量份、填充剂90.3重量份，混合均匀，加入4.5重量份的粘合剂，具体是，将粘合剂溶于水后，再加入到中药组合物和填充剂的混合物中产生粘性；经制软材、制颗粒、干燥、整粒，加入1.5重量份的助流剂经总混后，制得中药组合物的颗粒剂。
实施例3
按照以下重量份原料组成中药组合物：枯草芽孢杆菌6份；白头翁提取物15份；黄芩提取物25份；黄连提取物25份；杜仲叶提取物50份；山楂提取物35份；陈皮提取物25份；秦皮提取物25份；甘草提取物15份。
其中，所述枯草芽孢杆菌的含量要求为：不低于1.0×109CFU/g。所述白头翁提取物的含量要求为：含白头翁皂苷B4不低于10%；所述黄芩提取物的含量要求为：含黄芩苷不低于80%；所述黄连提取物的含量要求为：含盐酸小檗碱不低于50%；所述杜仲叶提取物的含量要求为：含绿原酸不低于1%；所述山楂提取物的含量要求为：含有机酸以枸橼酸计不低于15%；所述陈皮提取物的含量要求为：含橙皮苷不低于50%；所述秦皮提取物的含量要求为：含秦皮甲素与秦皮乙素总和不低于10%；所述甘草提取物的含量要求为：含甘草酸不低于8%。
取填充剂-乳糖、粘合剂-水、助流剂-硬脂酰富马酸钠，以及所配置的抗菌促生长中药组合物，过80目筛网，备用；
称取中药组合物25重量份、填充剂80重量份，混合均匀，加入2重量份的粘合剂，具体是，将粘合剂溶于水后，再加入到中药组合物和填充剂的混合物中产生粘性；经制软材、制颗粒、干燥、整粒，加入1重量份的助流剂经总混后，制得中药组合物的颗粒剂。
实施例4
按照以下重量份原料组成中药组合物：枯草芽孢杆菌5份；白头翁提取物10份；黄芩提取物20份；黄连提取物20份；杜仲叶提取物40份；山楂提取物30份；陈皮提取物20份；秦皮提取物20份；甘草提取物20份。
其中，所述枯草芽孢杆菌的含量要求为：不低于1.0×109CFU/g。所述白头翁提取物的含量要求为：含白头翁皂苷B4不低于10%；所述黄芩提取物的含量要求为：含黄芩苷不低于80%；所述黄连提取物的含量要求为：含盐酸小檗碱不低于50%；所述杜仲叶提取物的含量要求为：含绿原酸不低于1%；所述山楂提取物的含量要求为：含有机酸以枸橼酸计不低于15%；所述陈皮提取物的含量要求为：含橙皮苷不低于50%；所述秦皮提取物的含量要求为：含秦皮甲素与秦皮乙素总和不低于10%；所述甘草提取物的含量要求为：含甘草酸不低于8%。
取填充剂-微晶纤维素、粘合剂-羟丙纤维素、助流剂-滑石粉，以配置的抗菌促生长中药组合物，过70目筛网，备用；
取肠溶包衣材料-甲基丙烯酸共聚物A型5重量份、抗黏剂-单硬脂酸甘油酯3.5重量份和增塑剂-丙二醇0.5重量份，加水，配制成固含量5%的肠溶包衣液，备用；
称取中药组合物8.2重量份、填充剂38.5重量份，混合均匀；
加入1重量份的粘合剂至中药组合物和填充剂的混合物中制备软材、并使用挤出滚圆制丸机制备微丸；干燥；将干燥获得的微丸，置于包衣设备中，喷入配制的肠溶包衣液进行包衣，使其包衣增重达到5%，制得中药组合物的丸剂。
实施例5
按照以下重量份原料组成中药组合物：枯草芽孢杆菌6份；白头翁提取物15份；黄芩提取物25份；黄连提取物25份；杜仲叶提取物50份；山楂提取物35份；陈皮提取物25份；秦皮提取物25份；甘草提取物15份。
其中，所述枯草芽孢杆菌的含量要求为：不低于1.0×109CFU/g。所述白头翁提取物的含量要求为：含白头翁皂苷B4不低于10%；所述黄芩提取物的含量要求为：含黄芩苷不低于80%；所述黄连提取物的含量要求为：含盐酸小檗碱不低于50%；所述杜仲叶提取物的含量要求为：含绿原酸不低于1%；所述山楂提取物的含量要求为：含有机酸以枸橼酸计不低于15%；所述陈皮提取物的含量要求为：含橙皮苷不低于50%；所述秦皮提取物的含量要求为：含秦皮甲素与秦皮乙素总和不低于10%；所述甘草提取物的含量要求为：含甘草酸不低于8%。
取填充剂-糊精、粘合剂-聚维酮、助流剂-硬脂酸镁，以及配置的抗菌促生长中药组合物，过90目筛网，备用；
取肠溶包衣材料-甲基丙烯酸共聚物B型15重量份、抗黏剂-滑石粉6.5重量份和增塑剂-柠檬酸三乙酯1.5重量份，加水，配制成固含量25%的肠溶包衣液，备用；
称取中药组合物34重量份、填充剂81.8重量份，混合均匀；
将中药组合物和填充剂的混合物加入离心制丸机中、并喷入4.5重量份的粘合剂制备微丸；干燥；将干燥获得的微丸，置于包衣设备中，喷入配制的肠溶包衣液进行包衣，使其包衣增重达到40%，制得中药组合物的丸剂。
实施例6
按照以下重量份原料组成中药组合物：枯草芽孢杆菌5份；白头翁提取物30份；黄芩提取物10份；黄连提取物10份；杜仲叶提取物60份；山楂提取物28份；陈皮提取物10份；秦皮提取物10份；甘草提取物10份。
其中，所述枯草芽孢杆菌的含量要求为：不低于1.0×109CFU/g。所述白头翁提取物的含量要求为：含白头翁皂苷B4不低于10%；所述黄芩提取物的含量要求为：含黄芩苷不低于80%；所述黄连提取物的含量要求为：含盐酸小檗碱不低于50%；所述杜仲叶提取物的含量要求为：含绿原酸不低于1%；所述山楂提取物的含量要求为：含有机酸以枸橼酸计不低于15%；所述陈皮提取物的含量要求为：含橙皮苷不低于50%；所述秦皮提取物的含量要求为：含秦皮甲素与秦皮乙素总和不低于10%；所述甘草提取物的含量要求为：含甘草酸不低于8%。
取填充剂-淀粉、粘合剂-羟丙纤维素、助流剂-硬脂酰富马酸钠，以所配置的抗菌促生长中药组合物，过100目筛网，备用；
取肠溶包衣材料-羟丙甲纤维素酞酸酯10重量份、抗黏剂-单硬脂酸甘油酯5重量份和增塑剂-聚乙二醇6000 1重量份，加水，配制成固含量15%的肠溶包衣液，备用；
称取中药组合物20重量份、填充剂60重量份，混合均匀；
加入3重量份的粘合剂至中药组合物和填充剂的混合物中制备软材、并使用挤出滚圆制丸机制备微丸；干燥；将干燥获得的微丸，置于包衣设备中，喷入配制的肠溶包衣液进行包衣，使其包衣增重达到25%，制得中药组合物的丸剂。
含量检测
对实施例1~6获得的样品进行检测，采用高效液相色谱法检测中药组合物白头翁皂苷B4、黄芩苷、绿原酸、盐酸小檗碱的含量：
（1）白头翁皂苷B4，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水64：36为流动相；检测波长为201nm；理论塔板数按白头翁皂苷B4峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备，取白头翁皂苷B4对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备，分别取实施例1~6获得的样品0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇10ml，密塞，超声处理，功率150W、频率40KHZ、25分钟，放冷，滤过，滤液置250ml量瓶中，用少量流动相洗涤容器及残渣，洗液并入同一量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和实施例1~6的供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
（2）黄芩苷，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液47：53为流动相；检测波长为280nm；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1000；
对照品溶液的制备，取黄芩苷对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备，分别取实施例1~6获得的样品0.5g，精密称定，置250ml量瓶中，加甲醇200ml超声10分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取续滤液，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和实施例1~6的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
（3）绿原酸，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4％磷酸溶液13：87为流动相；检测波长为327nm；理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备，取绿原酸对照品5mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇20ml超声20分钟，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备，分别取实施例1~6获得的样品2.5g，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇20ml超声20分钟，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和实施例1~6的供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
（4）盐酸小檗碱，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液50：50，每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0，为流动相；检测波长为345nm；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备，取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml含90.5μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备，分别取实施例1~6获得的样品约0.2g，精密称定，加入150ml量瓶中，精密加入甲醇-盐酸100:150ml，密闭，称重；超声处理30min，放冷；称重，用甲醇补足减失的重量；摇匀，滤过，取续滤液1ml，加入50ml量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和实施例1~6的供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
如图1~3分别为对照品的黄芩苷、盐酸小檗碱、绿原酸的HPLC谱图。
如图4~6分别为实施例1的黄芩苷、盐酸小檗碱、绿原酸的HPLC谱图。
检测结果：
临床试验
实施例3制备的抗菌促生长中药组合物颗粒剂断奶仔猪应用临床试验
一、试验目的：
考察本中药组合物颗粒产品在正常添加剂量下的临床效果，从促生长、防治泄痢、提高免疫力、促进采食、改善料肉比等方面进行考察。
二、试验材料：
1、试验动物
品种：猪（三元杂交猪、PIC猪、黑猪）。
年龄与性别：
断奶乳猪：30日龄左右，体重8.5kg左右，公母对半；
健康状况：选用健康良好的猪只。
2、药物
试验用药：实施例3制备的饲料添加剂：抗菌促生长中药组合物颗粒剂；
对照用药：饲用抗生素：15%金霉素。
3、试验设计
选用 30 日龄平均体质量为(8.5±0.5) kg的健康良好的三元杂交断奶仔猪120头(公母各占一半)，随机分为2组，每组6个重复，每重复10头猪，每个重复为1栏。饲喂采用自由采食，每日喂2次，自由饮水。
1组为试验组，在基础日粮上添加1000g/t的中药组合物颗粒饲料添加剂；
2组为对照组，在基础日粮上按照500g/t的剂量添加金霉素。
试验分为预试期(3d)，正试期(28d)。
分组不变，预试期结束后按照各个分组饲喂相应饲料，直至试验结束。
三、试验指标
1、生长性能：试验第4日与第31日于早晨空腹逐只称重猪只体重，作为初期体重和末期体重；每天准确记录每重复乳仔猪采食量，计算各重复乳仔猪平均日采食量、平均日增质量和料肉比。
计算公式：
平均日增重=（末次称重-初次称重）/试验天数
平均日采食量=总采食量/试验天数
料肉比=平均日采食量/平均日增重
2、应激反应：根据试验期间记录的腹泻（头数、时间、轻重程度）、死亡及其它发病数等，计算各组的腹泻率、死亡率及其它发病率。
腹泻率/% = (腹泻头数×腹泻天数) /(试验猪头数×试验天数)×100%
四、试验结果
1、生长性能
*与对照组比较有显著差异，P<0.05
2、应激反应
未出现病死情况及其它发病，因此仅统计腹泻率。
*与对照组比较有显著差异，P<0.05
五、试验结论
在断奶仔猪日粮中组合使用本中药组合物颗粒饲料添加剂替代抗生素，可显著提高断奶仔猪的生长性能和降低腹泻率，说明本中药组合物颗粒替代抗生素可达到与抗生素相同的抗菌促生长效果。
本发明的中药组合物的适应症：
1、针对断奶健康仔猪：抗应激及其引起的腹泻拉稀，增强免疫；
2、针对拉稀仔猪：抗菌药物辅助用药，提高抗菌药物疗效，辅助止泻；增加采食量，促进消化；
3、针对疫苗接种初期保育猪：抗生素停用7天内使用，提高免疫，增强疫苗活力；
4、针对育肥猪：增加采食量，促进消化及生长；
5、对家禽：清热、解毒、止痢；显著提高采食量，降低料肉比，提高免疫力；
6、作为保健佳品，可长期使用，应对各类应激，增强免疫并可作为疫苗应用时的增效剂和保护剂。
本发明的中药组合物，以传统中医药理论为基础，以多种天然植物提取物为原料，采用现代工艺并参照近30年来中药对动物影响的研究，精选广谱消炎抗菌提取物为主药，防治胃肠道和上呼吸道感染提取物为臣药，辅之以健脾益气药；采用杜仲叶等8味天然植物提取物复方，富含植物类黄酮、有机酸、多糖及生物碱等生物活性物质。
本发明的中药组合物在“色、形、味、效”方面均具有特点及优势：
颜色呈淡黄色，与饲料相近；耐高温，流动性好，利于饲料加工生产；无毒、无残留、适口性好、具草药味，绿色环保；功效显著，多重功效，效果稳定。

Claims (10)

1.一种抗菌促生长中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料组成：
枯草芽孢杆菌2-10份；
白头翁提取物5-35份；
黄芩提取物5-40份；
黄连提取物5-35份；
杜仲叶提取物30-70份；
山楂提取物20-50份；
陈皮提取物5-35份；
秦皮提取物5-35份；
甘草提取物5-30份。
2.根据权利要求1所述的抗菌促生长中药组合物，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌的含量要求为：不低于1.0×109CFU/g。
3.根据权利要求1所述的抗菌促生长中药组合物，其特征在于：
所述白头翁提取物的含量要求为：含白头翁皂苷B4不低于10%；
所述黄芩提取物的含量要求为：含黄芩苷不低于80%；
所述黄连提取物的含量要求为：含盐酸小檗碱不低于50%；
所述杜仲叶提取物的含量要求为：含绿原酸不低于1%；
所述山楂提取物的含量要求为：含有机酸以枸橼酸计不低于15%；
所述陈皮提取物的含量要求为：含橙皮苷不低于50%；
所述秦皮提取物的含量要求为：含秦皮甲素与秦皮乙素总和不低于10%；
所述甘草提取物的含量要求为：含甘草酸不低于8%。
4.根据权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物，其特征在于：该中药组合物为药学上可接受的剂型：片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、液体剂。
5.一种如权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物的制备方法，其特征在于：
取填充剂、粘合剂、助流剂，以及如权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物，过60~100目筛网，备用；
称取中药组合物8.2~34重量份、填充剂60~90.3重量份，混合均匀，加入1~4.5重量份的粘合剂经制软材、制颗粒、干燥、整粒，加入0.5~1.5重量份的助流剂经总混后，制得中药组合物的颗粒剂；
其中：
所述填充剂为淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠中的一种或多种；
所述粘合剂为水、聚维酮、羟丙甲纤维素、羟丙纤维素中的一种；
所述助流剂为微粉硅胶、硬脂酰富马酸钠、硬脂酸镁、滑石粉中的一种。
6.根据权利要求5所述的抗菌促生长中药组合物的制备方法，其特征在于，粘合剂的加入方法为：将粘合剂加入到中药组合物和填充剂的混合物中，混合均匀，加入水引发各原料的粘性；或是将粘合剂溶于水后，再加入到中药组合物和填充剂的混合物中产生粘性。
7.一种如权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物的制备方法，其特征在于：
取填充剂、粘合剂、助流剂，以及如权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物，过60~100目筛网，备用；
取肠溶包衣材料5~15重量份、抗黏剂3.5~6.5重量份和增塑剂0.5~1.5重量份，加水，配制成固含量5%~25%的肠溶包衣液，备用；
称取中药组合物8.2~34重量份、填充剂38.5~81.8重量份，混合均匀；
加入1~4.5重量份的粘合剂至中药组合物和填充剂的混合物中制备软材、并使用挤出滚圆制丸机制备微丸，或是将中药组合物和填充剂的混合物加入离心制丸机中、并喷入1~4.5重量份的粘合剂制备微丸；
干燥；
将干燥获得的微丸，置于包衣设备中，喷入配制的肠溶包衣液进行包衣，使其包衣增重达到5%~40%，制得中药组合物的丸剂；
其中，
填充剂为淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠中的一种或多种；
粘合剂为水、聚维酮、羟丙甲纤维素、羟丙纤维素中的一种；
助流剂为微粉硅胶、硬脂酰富马酸钠、硬脂酸镁、滑石粉中的一种；
肠溶包衣材料为甲基丙烯酸共聚物A型、甲基丙烯酸共聚物B型、甲基丙烯酸共聚物C型、羟丙甲纤维素酞酸酯中的一种或多种；
抗黏剂为滑石粉、单硬脂酸甘油酯中的一种；
增塑剂为丙二醇、柠檬酸三乙酯、聚乙二醇6000中的一种。
8.一种如权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物的检测方法，其特征在于，所述检测方法采用高效液相色谱法检测中药组合物白头翁皂苷B4、黄芩苷、绿原酸、盐酸小檗碱的含量：
（1）白头翁皂苷B4，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水64：36为流动相；检测波长为201nm；理论塔板数按白头翁皂苷B4峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备，取白头翁皂苷B4对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备，取本品0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇10ml，密塞，超声处理，功率150W、频率40KHZ、25分钟，放冷，滤过，滤液置250ml量瓶中，用少量流动相洗涤容器及残渣，洗液并入同一量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
（2）黄芩苷，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液47：53为流动相；检测波长为280nm；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1000；
对照品溶液的制备，取黄芩苷对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备，取本品0.5g，精密称定，置250ml量瓶中，加甲醇200ml超声10分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取续滤液，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
（3）绿原酸，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4％磷酸溶液13：87为流动相；检测波长为327nm；理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备，取绿原酸对照品5mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇20ml超声20分钟，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备，取本品2.5g，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇20ml超声20分钟，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
（4）盐酸小檗碱，照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版第二部附录47）测定：
色谱条件与***适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液50：50，每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0，为流动相；检测波长为345nm；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备，取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml含90.5μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备，取本品0.2g，精密称定，加入150ml量瓶中，精密加入甲醇-盐酸100:1 50ml，密闭，称重；超声处理30min，放冷；称重，用甲醇补足减失的重量；摇匀，滤过，取续滤液1ml，加入50ml量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，即得；
测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
9.根据权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物在制备治疗动物腹泻拉稀、胃肠道感染、上呼吸道感染、促进消化、增加采食量、增强免疫力、提高抗应激能力的药物中的用途。
10.含有如权利要求1~3中任意一项所述的抗菌促生长中药组合物的饲料添加剂。
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