CN109628558B - 一种用于高通量测序检测基因突变的捕获探针及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种用于高通量测序检测基因突变的捕获探针及其应用。本发明提供一种用于高通量测序检测基因突变的捕获探针，其为单链探针混合物，包括从待测DNA的一端开始，分别针对待测DNA的正义链和反义链的核苷酸序列，依次设计的针对正义链的探针和针对反义链的探针；每两个相邻的单链探针中，一个为针对正义链的核苷酸序列设计的单链探针，另一个为针对反义链的核苷酸序列设计的单链探针；每两个相邻的单链探针所针对的待测DNA没有重叠；单链探针混合物能够覆盖全部待测DNA。本发明提供的捕获探针能够显著提高捕获文库的库容、捕获效率和测序数据有效深度，降低测序数据的重复率，具有很高的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种用于高通量测序检测基因突变的捕获探针及其应用。
背景技术
全基因组测序可以获得全基因组水平范围的突变、***、缺失以及结构变异。然而，由于基因组容量较大，以30×进行测序就会产生接近100G的数据量。而肿瘤等相关的低突变频率测序则需要至少1000×的覆盖度，如果进行全基因组测序，则会产生多达3000G的数据量。这样规模的数据量除了会对数据的分析工作造成极大的困难之外，还会产生巨大的测序成本。
目标区域液相杂交捕获技术是根据DNA序列互补原理，设计与目标序列互补的特异性探针，并合成在固相或液相芯片上，打断样品基因组DNA，加上测序接头后与探针杂交，最终将目标区域捕获下来，后续经过回收、构建文库并直接用于高通量测序。目前国内外提供液相杂交捕获技术的公司有很多，如安捷伦、罗氏、IDT、TWIST bioscience等国外试剂厂商以及艾吉泰康、迈基诺等国内厂商。
上述厂商的应用于杂交捕获的最关键的探针各有不同，也各有特色。比如：安捷伦和艾吉泰康使用是RNA探针，罗氏和IDT采用的是DNA单链探针。RNA探针和DNA单链探针设计的原则基本上是基于叠瓦式的设计方式，保持与参考基因组正义链一致或者相反，只能捕获到与参考基因组的正义链或者反义链一致的文库部分，另一条链则被丢弃，此种情况下，如果捕获效果不好，则会导致文库的两条链全部丢失，降低了文库的丰富度。TWISTbioscience、迈基诺采用双链探针进行文库捕获，这样能保证文库的两条链都被捕获，但是由于双链探针是反向互补结构，会有很多探针之间互相进行杂交，导致需要探针的用量较大或者导致捕获效率偏低。因此，开发捕获效率高、能够避免探针之间的相互作用，且能够提高文库丰富度的捕获探针具有重要意义。
发明内容
为了解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的是提供一种用于高通量测序检测基因突变的捕获探针及其应用。
为解决现有技术中的单链捕获探针和双链捕获探针存在的技术问题，即：(1)单链探针只能捕获目的片段的一条链，导致捕获的模板少，由于探针只有针对反义链的探针，只有片段1和片段2的两条反义链可以被捕获，而两条正义链由于与探针序列相同无法被捕获而丢失(如图1所示)。(2)双链探针虽然能够捕获目的片段1和片段2的正义链和反义链(如图2所示)，但由于双链探针是反向互补结构，会有很多探针之间互相进行杂交，导致需要探针的用量较大或者导致捕获效率偏低。本发明创造性地提出一种全新的捕获探针设计方法，本发明采用针对正义链的单链探针和针对反义链的单链探针交错排列、覆盖全部目的区域的形式，既避免了探针之间的互相杂交，导致捕获效率以及探针利用率降低，又能同时捕获文库中目的片段的两条链，提高文库总量和丰富度，本发明的探针设计示意图如图3所示。
首先，本发明提供一种用于高通量测序检测基因突变的捕获探针，所述捕获探针为单链探针混合物，所述单链探针混合物包括从待测DNA的一端开始，分别针对待测DNA的正义链和反义链的核苷酸序列，依次设计的针对正义链的探针和针对反义链的探针；每两个相邻的单链探针中，一个为针对正义链的核苷酸序列设计的单链探针，另一个为针对反义链的核苷酸序列设计的单链探针；每两个相邻的单链探针所针对的待测DNA没有重叠；所述单链探针混合物能够覆盖全部待测DNA。
合适的探针长度和混合比例能够更好地提高探针捕获效率，本发明中，所述单链探针的长度为90～120nt；所述单链探针混合物中每个单链探针以相同的摩尔比例混合。
优选地，本发明中，所述单链探针的长度为110～120nt。
在此基础上，本发明还提供所述捕获探针在基因组测序文库构建或高通量测序检测基因突变中的应用。
本发明还提供一种基因突变测序文库的构建方法，其为将基因组DNA打断，采用本发明所述的捕获探针构建测序文库。
具体地，基因突变测序文库的构建方法包括如下步骤：
(1)提取基因组DNA，将其打断为小片段；
(2)对步骤(1)得到的小片段DNA进行文库制备；
(3)将步骤(2)得到的小片段DNA文库与本发明所述的捕获探针进行杂交，捕获目的片段；
(4)对步骤(3)捕获的片段进行扩增，将扩增产物上机测序。
在上述捕获探针及其制备方法的指导下，本发明以EGFR基因突变检测为例，开发针对EGFR基因的捕获探针。
本发明提供一种EGFR基因的特异性捕获探针，其包括如SEQ ID NO.172～SEQ IDNO.228所示的单链探针。
本发明中，所述捕获探针可以采用任意本领域允许的生物标记物进行标记，作为本发明的一种实施方式，本发明采用生物素标记上述单链探针。
在上述捕获探针的基础上，本发明提供一种检测EGFR基因突变的试剂盒，其包括所述EGFR基因的特异性捕获探针。
优选地，所述捕获探针由如SEQ ID NO.172～SEQ ID NO.228所示的单链探针等摩尔比例混合组成。
更优选地，所述捕获探针的工作浓度为0.1pM～0.75pM。
为便于实现EGFR基因突变的高通量测序，本发明中，所述试剂盒还包括杂交缓冲液、洗脱缓冲液、阳性质控品、阴性质控品。
进一步地，本发明还提供所述EGFR基因的特异性捕获探针或包含EGFR基因的特异性捕获探针的试剂盒在高通量测序检测EGFR基因突变或构建检测EGFR基因突变的测序文库中的应用。
作为本发明的一种实施方式，利用本发明所述的捕获探针进行测序文库的构建和高通量测序的方法包括如下步骤：
(1)探针设计、合成与标记；
(2)捕获前文库构建：将基因组DNA打断为小片段，进行测序文库构建；
(3)步骤(2)构建的文库与捕获探针杂交，进行捕获文库的构建；
(4)上机测序和数据分析。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种全新的捕获探针制备方法，将针对正义链的探针和针对反义链的探针交错分布、覆盖全部目的区域，既避免了由于探针之间的互相杂交导致的捕获效率及探针利用率降低，又能同时捕获文库中目的片段的两条链，提高文库总量和丰富度，能够同时保证捕获文库的丰富度和捕获效率。采用本发明提供的捕获探针设计方法制备的EGFR特异性捕获探针，在进行测序文库构建和高通量测序时，能够同时实现文库库容大、捕获效率高、数据重复率低和数据有效深度高的技术效果，有利于提高高通量测序的工作效率，具有很高的应用价值。
附图说明
图1为本发明发明内容中传统单链探针的设计示意图。
图2为本发明发明内容中传统双链探针的设计示意图。
图3为本发明发明内容中针对正义链和反义链的单链探针交错分布的探针设计示意图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
本实施例以表皮生长因子受体EGFR为例，验证本发明提供的捕获探针的设计方法。针对EGFR全外显子区域分布设计三种形式的探针：传统的单链探针(对照组1)、双链探针(对照组2)以及本发明提供的正义链探针和反义链探针交错排列的单链探针(实验组)，并进行人类基因组文库构建以及EGFR杂交捕获文库的测序分析，对构建的文库库容、捕获效率、重复率、数据有效深度等进行分析，比较不同捕获探针的捕获效果。
一、探针设计
(1)采用传统单链探针的设计方法，设计单链探针，针对EGFR的单链探针如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.57所示。
(2)采用传统双链探针的设计方法，设计双链探针，双链探针比上述单链探针增加了反向互补探针，针对EGFR的双链探针如SEQ ID NO.58～SEQ ID NO.171所示。
(3)采用本发明的探针设计方法设计正义链和反义链交错分布的捕获探针，探针如SEQ ID NO.172～SEQ ID NO.228所示。
上述探针通过对EGFR基因的全外显子区域进行分区，设计多条长度为120nt或120bp的探针，保证EGFR基因外显子的每个区域均被探针覆盖。使用IDT在线探针设计软件(https://sg.idtdna.com/site/order/ngs)进行探针的设计，固定参数如下：探针长度120bp、乘数1×、参考基因组为人参考基因组Human(Feb.2009GRCh37/hg19)、全外(不包括UTR)。EGFR基因的外显子被多个内含子分隔产生28个长度不同的外显子分区，在上述(3)中正义链和反义链交错分布的捕获探针的设计时，当外显子分区的长度刚好被一条探针覆盖时，则出现该分区仅有一条正义链探针的情况。上述所有探针的5’端均采用生物素标记。
二、文库构建
1、捕获前文库构建：以人的全血细胞为样本，提取基因组DNA，将其打断为200bp的片段。取9份上述打断片段为200bp的基因组DNA，每份1μg，进行常规illumina文库构建，具体方法如下：
(1)末端修复及加A：在PCR管里按表1所示的反应体系配置反应液，用枪轻柔地上下吹吸混匀。将上述反应体系放入PCR仪，按表2所示的条件参数设置程序，进行反应。
表1末端修复及加A反应体系
表2末端修复及加A反应程序
(2)adaptor连接：在PCR管里按表3所示的反应体系配置反应液，用枪轻柔地上下吹吸混匀。将上述反应体系均分成2管，放于PCR仪上，20℃温浴15min。用1倍体积的AMPureXP磁珠纯化DNA样本，用23μl无核酸酶的水洗脱。
表3adaptor连接反应体系
(3)PCR扩增连接adaptor的文库：在PCR管里按表4所示的反应体系配置反应液，用枪轻柔地上下吹吸混匀。将上述反应体系放入PCR仪，按表5所示的反应程序设置程序进行反应。用1.8倍AMPure XP磁珠纯化扩增产物，30μl无核酸酶的水洗脱，将得到的9个文库分别编号为Y1-Y9。
表4 PCR扩增连接adaptor的文库的反应体系
表5 PCR扩增连接adaptor的文库的反应程序
2、文库杂交捕获和洗脱
分别取500ng上述构建的Y1-Y9文库于一个新的离心管中，用真空抽干机进行浓缩直至文库蒸干。使用IDT杂交捕获试剂盒，按照说明书的方法进行杂交捕获和洗脱。杂交过程中务必保证管盖盖紧，最小化减少杂交混合液体积的蒸发，否则将会影响杂交效果。其中，Y1、Y2、Y3文库使用合成的单链探针(SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.57)进行杂交捕获，Y4、Y5、Y6文库使用合成的双链探针(SEQ ID NO.58～SEQ ID NO.171)进行杂交捕获，Y7、Y8、Y9文库使用采用本发明的设计方法合成的探针(SEQ ID NO.172～SEQ ID NO.228)进行捕获。杂交捕获的反应程序如表6所示。
表6杂交捕获反应程序
3、PCR扩增捕获文库
在冰上按照表7所示的反应体系配制PCR反应液，确认将含有磁珠的反应液混匀后，将管子放入PCR仪中进行扩增，反应程序如表8所示：
表7捕获文库PCR扩增反应体系
表8捕获文库PCR扩增反应程序
采用1.8倍体积的AMPure XP磁珠纯化上述PCR扩增得到的文库，用20μl无核酸酶的水洗脱，终文库分别命名为Z1-Z9(分别对应于Y1-Y9文库)，Z1-Z9文库出库情况如表9所示，结果表明，采用单链探针进行杂交捕获获得的文库的库容最低，采用双链探针进行杂交捕获和采用本发明的正反链交错单链探针进行杂交捕获获得的文库的库容接近。
表9Z1-Z9文库出库情况
| 文库编号 | 文库量 |
| Z1 | 15ng |
| Z2 | 17ng |
| Z3 | 13ng |
| Z4 | 30ng |
| Z5 | 32ng |
| Z6 | 29ng |
| Z7 | 25ng |
| Z8 | 27ng |
| Z9 | 30ng |
4、采用Illumina nextseq 500测序仪进行Z1-Z9文库的测序，测序数据分析结果如表10所示，最终的测序数据分析结果表明，在捕获效率方面，采用单链探针进行捕获(Z1-Z3)与采用本发明的探针进行捕获(Z7-Z9)的捕获效率相当，而采用双链探针进行捕获(Z4-Z6)的效率最低；在重复率方面，采用双链探针进行捕获与采用本发明的探针进行捕获的重复率相当，而采用单链探针进行捕获的重复率最高；在数据有效深度方面，采用单链探针进行捕获与采用双链探针进行捕获的数据有效深度相当，而采用本发明的探针进行捕获的数据有效深度显著提高。
表10文库测序数据分析结果
综上所述，采用本发明提供的捕获探针设计方法制备的EGFR特异性捕获探针，在进行测序文库构建和高通量测序时，能够同时实现文库库容大、捕获效率高、数据重复率低和数据有效深度高的技术效果，解决了传统的单链探针和双链探针存在的文库库容低、捕获效率低以及数据有效深度低的问题，具有很高的应用价值。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 北京优迅医学检验实验室有限公司
<120> 一种用于高通量测序检测基因突变的捕获探针及其应用
<130> KHP181118639.8
<160> 228
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tcttcgggga gcagcgatgc gaccctccgg gacggccggg gcagcgctcc tggcgctgct 60
ggctgcgctc tgcccggcga gtcgggctct ggaggaaaag aaaggtaagg gcgtgtctcg 120
<210> 2
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ctatcattcc tttgggccta ggattgcatt tatttccatg acaaaagggc ctgtctggtg 60
tttcagcaaa tgaaaacaaa aatataaagc ccatctcctt ttgaatgagc tctaaaacag 120
<210> 3
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tgtgggttcc ctccggcagg cgacctctcc gcgctgagaa ggttatccgg ataaccaagt 120
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<211> 120
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<211> 120
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<400> 24
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<400> 25
gaaagagaca tgcatgaaca tttttctcca ccttggtgca gggaccagac aactgtatcc 60
agtgtgccca ctacattgac ggcccccact gcgtcaagac ctgcccggca ggagtcatgg 120
<210> 26
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
gagaaaacaa caccctggtc tggaagtacg cagacgccgg ccatgtgtgc cacctgtgcc 60
atccaaactg cacctacggg tgagtggaaa gtgaaggaga acagaacatt tcctctcttg 120
<210> 27
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
ccaggtccta ataaatcttc actgtctgac tttagtctcc cactaaaact gcatttcctt 60
tctacaattt caatttctcc ctttgcttca aataaagtcc tgacactatt catttgacat 120
<210> 28
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
ttaggatcag attatagtgt tacaccaggg ctccccaggc ctctcacata ttgaaatgta 60
cttgtccatc tttctccagg ccaggaaatg agagtctcaa agccatgtta ttctgccttt 120
<210> 29
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
ttaaactatc atcctgtaat caaagtaatg atggcagcgt gtcccaccag agcgggagcc 60
cagctgctca ggagtcatgc ttaggatgga tcccttctct tctgccgtca gagtttcagc 120
<210> 30
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
tgggttgggg tggatgcagc cacctccatg cctggccttc tgcatctgtg atcatcacgg 60
cctcctcctg ccactgagcc tcatgccttc acgtgtctgt tccccccgct tttcctttct 120
<210> 31
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
gccacccctg cacgtgggcc gccaggttcc caagagtatc ctacccattt ccttccttcc 60
actccctttg ccagtgcctc tcaccccaac tagtagctaa ccatcacccc caggactgac 120
<210> 32
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
ctcttcctcc tcgctgccag atgattgttc aaagcacaga atttgtcaga aacctgcagg 60
gactccatgc tgccagcctt ctccgtaatt agcatggccc cagtccatgc ttctagcctt 120
<210> 33
<211> 119
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
ggttccttct gcccctctgt ttgaaattct agagccagct gtgggacaat tatctgtgtc 60
aaaagccaga tgtgaaaaca tctcaataac aaactggctg ctttgttcaa tgctagaac 119
<210> 34
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
aatgcataat aaataattaa ccaccaatcc aacatccaga cacatagtga ttttaattat 60
ttaagagtag tttagcatat attgctttat gatttaatta aaaatctcca aaatatatgc 120
<210> 35
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
agaatgagaa aaatgtatat ttctctttca cttcctacag atgcactggg ccaggtcttg 60
aaggctgtcc aacgaatggg taagtgttca cagctctgtg tcacatggac ctcgtcaaga 120
<210> 36
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
ttagaagcta catagtgtct cactttccaa gatcattcta caagatgtca gtgcactgaa 60
acatgcaggg gcgtgttgag tgccaaggcc atggaatctg tcagcaacct cacccttcct 120
<210> 37
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
ggaatctgtc agcaacctca cccttccttg ttcctccacc tcattccagg cctaagatcc 60
cgtccatcgc cactgggatg gtgggggccc tcctcttgct gctggtggtg gccctgggga 120
<210> 38
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
tcggcctctt catgcgaagg cgccacatcg ttcggaagcg cacgctgcgg aggctgctgc 60
aggagaggga ggtgagtgcc agtcctgggt gggctcagga gccctcgcac cccgacagga 120
<210> 39
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
ctttccagca tggtgagggc tgaggtgacc cttgtctctg tgttcttgtc ccccccagct 60
tgtggagcct cttacaccca gtggagaagc tcccaaccaa gctctcttga ggatcttgaa 120
<210> 40
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
ggaaactgaa ttcaaaaaga tcaaagtgct gggctccggt gcgttcggca cggtgtataa 60
ggtaaggtcc ctggcacagg cctctgggct gggccgcagg gcctctcatg gtctggtggg 120
<210> 41
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
tctgtcatag ggactctgga tcccagaagg tgagaaagtt aaaattcccg tcgctatcaa 60
ggaattaaga gaagcaacat ctccgaaagc caacaaggaa atcctcgatg tgagtttctg 120
<210> 42
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
cactgacgtg cctctccctc cctccaggaa gcctacgtga tggccagcgt ggacaacccc 60
cacgtgtgcc gcctgctggg catctgcctc acctccaccg tgcagctcat cacgcagctc 120
<210> 43
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
atgcccttcg gctgcctcct ggactatgtc cgggaacaca aagacaatat tggctcccag 60
tacctgctca actggtgtgt gcagatcgca aaggtaatca gggaagggag atacggggag 120
<210> 44
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
catgatgatc tgtccctcac agcagggtct tctctgtttc agggcatgaa ctacttggag 60
gaccgtcgct tggtgcaccg cgacctggca gccaggaacg tactggtgaa aacaccgcag 120
<210> 45
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
catgtcaaga tcacagattt tgggctggcc aaactgctgg gtgcggaaga gaaagaatac 60
catgcagaag gaggcaaagt aaggaggtgg ctttaggtca gccagcattt tcctgacacc 120
<210> 46
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
cctcatctct caccatccca aggtgcctat caagtggatg gcattggaat caattttaca 60
cagaatctat acccaccaga gtgatgtctg gagctacggt gagtcataat cctgatgcta 120
<210> 47
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
ttcattcatg atcccactgc cttcttttct tgcttcatcc tctcaggggt gactgtttgg 60
gagttgatga cctttggatc caagccatat gacggaatcc ctgccagcga gatctcctcc 120
<210> 48
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
atcctggaga aaggagaacg cctccctcag ccacccatat gtaccatcga tgtctacatg 60
atcatggtca agtgtgagtg actggtgggt ctgtccacac tgcctagctg agccttggtg 120
<210> 49
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
tccttcccca ggctggatga tagacgcaga tagtcgccca aagttccgtg agttgatcat 60
cgaattctcc aaaatggccc gagaccccca gcgctacctt gtcattcagg tacaaattgc 120
<210> 50
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
cgggccattc taatagcctc aaaatctctg caccaggggg atgaaagaat gcatttgcca 60
agtcctacag actccaactt ctaccgtgcc ctgatggatg aagaagacat ggacgacgtg 120
<210> 51
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
gtggatgccg acgagtacct catcccacag cagggcttct tcagcagccc ctccacgtca 60
cggactcccc tcctgagctc tctggtatga aatctctgtc tctctctctc tctcaagctg 120
<210> 52
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
agcattccat gggcaacttc tctgtttctt tttcagagtg caaccagcaa caattccacc 60
gtggcttgca ttgatagaaa tggggtatgt atgaacacct tataagccag aatttacagc 120
<210> 53
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
ctgcagctgc aaagctgtcc catcaaggaa gacagcttct tgcagcgata cagctcagac 60
cccacaggcg ccttgactga ggacagcata gacgacacct tcctcccagt gcctggtgag 120
<210> 54
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
atcctgcatg ggatggtgct ttgctgatta cttcacctct gatttctttc cactttcaga 60
atacataaac cagtccgttc ccaaaaggcc cgctggctct gtgcagaatc ctgtctatca 120
<210> 55
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
caatcagcct ctgaaccccg cgcccagcag agacccacac taccaggacc cccacagcac 60
tgcagtgggc aaccccgagt atctcaacac tgtccagccc acctgtgtca acagcacatt 120
<210> 56
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
cgacagccct gcccactggg cccagaaagg cagccaccaa attagcctgg acaaccctga 60
ctaccagcag gacttctttc ccaaggaagc caagccaaat ggcatcttta agggctccac 120
<210> 57
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
agctgaaaat gcagaatacc taagggtcgc gccacaaagc agtgaattta ttggagcatg 60
accacggagg atagtatgag ccctaaaaat ccagactctt tcgataccca ggaccaagcc 120
<210> 58
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
cgagacacgc ccttaccttt cttttcctcc agagcccgac tcgccgggca gagcgcagcc 60
agcagcgcca ggagcgctgc cccggccgtc ccggagggtc gcatcgctgc tccccgaaga 120
<210> 59
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
ctgttttaga gctcattcaa aaggagatgg gctttatatt tttgttttca tttgctgaaa 60
caccagacag gcccttttgt catggaaata aatgcaatcc taggcccaaa ggaatgatag 120
<210> 60
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
acttggttat ccggataacc ttctcagcgc ggagaggtcg cctgccggag ggaacccaca 60
gcaaatgcac aaccagccag cagcccagag ctccctcttg ttctgaagtc cagtggagaa 120
<210> 61
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
aacatcctct ggaggctgag aaaatgatct tcaaaagtgc ccaactgcgt gagcttgtta 60
ctcgtgcctt ggcaaactgg aagaaaaaga cagatatcac atgaaatact gagaaatgca 120
<210> 62
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
attttctcca attttatttg tgtaggaaaa tcaaagtcac caacctttaa gaaggaaaga 60
tcataattcc tctgcacata ggtaatttcc aaattcccaa ggaccacctc acagttattg 120
<210> 63
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
atatttcctc tgatgatctg caggttttcc aaaggaattc gctccactgt gttgagggca 60
atgaggacat aaccagccac ctcctggatg gtctaagaag agaaaacata aatgcgtgat 120
<210> 64
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
ccccagcctt ggcatcccag cctctcaccc tgtaaatttc tcatgggcag ctccttcagt 60
ccggttttat ttgcatcata gttagataag actgctaagg cataggaatt ttcgtagtac 120
<210> 65
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
ccactggatg ctctccacgt tgcacagggc agggttgttg ctgaaccgca cggcgccatg 60
caggatttct gcgggagaat ggaactgcgg tgagcactct ttccagctcc tttaaattcc 120
<210> 66
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
gagctgtccc ccataggagc tggaggcaga gatagtgtgt atgcgacact tacagctgcc 60
caggtggttc tggaagtcca tcgacatgtt gctgagaaag tcactgctga ctatgtcccg 120
<210> 67
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
ggtctgaggc tgttcactga cttacgtttc tggcagttct cctctcctgc accccagcag 60
ctcccattgg gacagcttgg atcacacttt tggcctgaaa tgtaaaagta atagatgcat 120
<210> 68
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
ccaggcagtc gctctcccgg gggcctgtgc agcctgcagc acactggttg tggcagcagt 60
cactggggga cttgccacgg cagcgcccgg agcactgctg ggcacagatg attttggtca 120
<210> 69
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
gtggggttgt agagcatgag tggggggcag gtgtccttgc acgtggcttc gtctcggaat 60
ttgcggcaga cctatggagg agagaggaca cgctgggcaa gtgaggtaag tacactcagc 120
<210> 70
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
cgggacaagg atgcctgacc agttagaggg cccacagagg aggactcacg gggacacttc 60
ttcacgcagg tggcaccaaa gctgtatttg ccctcggggt tcacatccat ctggtacgtg 120
<210> 71
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
cctttgcggc aaggcccttc gcacttctta cacttgcgga cgccgtcttc ctccatctca 60
tagctgtcgg ccccacaggc tcggacgcac gagccgtgat ctgtcaccac ataattacct 120
<210> 72
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
ttaatattcg tagcatttat ggagagtgag tctttaaatt caccaatacc tattccgtta 60
cacactgcag agataagaga gacgtgtatt ccgttcacat ttgttggatt aagaatagct 120
<210> 73
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
cagttaaaaa ggcagatttt gtttttcttt atacaagcaa ctgaacctgt gactcacccc 60
ctaaatgcca ccggcaggat gtggagatcg ccactgatgg aggtgcagtt tttgaagtgt 120
<210> 74
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
catgtgataa ttcagctcaa acctgtgatt tcctttacgg ttttcagaat atccagttcc 60
tgtggatcca gaggaggagt atgtgtgaag gagtcactga aacaaacaac agggtgatta 120
<210> 75
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
gaaaaatatc aaaacatcag ccattaacgg taaaatttca gaagaaatgt ttttattcca 60
agggaacagg aaatatgtcg aaaagttctc tctctaaaac actgatttcc catttatatt 120
<210> 76
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
ctgtggtcaa cttactgttg cttggtcctg ccgcgtatga tttctaggtt ctcaaaggca 60
tggaggtccg tcctgttttc aggccaagcc tgaatcagca aaaaccctgt aaggcagatg 120
<210> 77
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
gtttcctgaa attatcacat ctccatcact tatctccttg agggagcgta atcccaagga 60
tgttatgttc aggctgacga ctgcaagaga aaactgacca ctacattgga gagaagaaaa 120
<210> 78
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
aacagaaagc ggtgacttac tgcagctgtt ttcacctctg ttgcttataa ttttggtttt 60
ctgaccggag gtcccaaaca gttttttcca gtttattgta tttgcatagc acaaattttt 120
<210> 79
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
ccctgggctc cgggccccag cagccctcgg gggagcacaa ggcatggcag acctggcctg 60
tggcctctgc ggagacagag tgggtcacag cagtcagtga cagagcaggg acccgagggg 120
<210> 80
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
cctggagcct tatttttgat caacgcaagg ggattaaaga aataacctcc tacccctcca 60
gaaggttgca cttgtccacg cattccctgc ctcggctgac attccggcaa gagacgcagt 120
<210> 81
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
gcaaggggct cttacccgtc ctgtgcaggt gatgttcatg gcctgaggca ggcactctgg 60
gtggcactgt atgcactcag agttctccac aaactccctt ggctcactga gaggaggaag 120
<210> 82
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
ccatgactcc tgccgggcag gtcttgacgc agtgggggcc gtcaatgtag tgggcacact 60
ggatacagtt gtctggtccc tgcaccaagg tggagaaaaa tgttcatgca tgtctctttc 120
<210> 83
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
caagagagga aatgttctgt tctccttcac tttccactca cccgtaggtg cagtttggat 60
ggcacaggtg gcacacatgg ccggcgtctg cgtacttcca gaccagggtg ttgttttctc 120
<210> 84
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
atgtcaaatg aatagtgtca ggactttatt tgaagcaaag ggagaaattg aaattgtaga 60
aaggaaatgc agttttagtg ggagactaaa gtcagacagt gaagatttat taggacctgg 120
<210> 85
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
aaaggcagaa taacatggct ttgagactct catttcctgg cctggagaaa gatggacaag 60
tacatttcaa tatgtgagag gcctggggag ccctggtgta acactataat ctgatcctaa 120
<210> 86
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
gctgaaactc tgacggcaga agagaaggga tccatcctaa gcatgactcc tgagcagctg 60
ggctcccgct ctggtgggac acgctgccat cattactttg attacaggat gatagtttaa 120
<210> 87
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
agaaaggaaa agcgggggga acagacacgt gaaggcatga ggctcagtgg caggaggagg 60
ccgtgatgat cacagatgca gaaggccagg catggaggtg gctgcatcca ccccaaccca 120
<210> 88
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
gtcagtcctg ggggtgatgg ttagctacta gttggggtga gaggcactgg caaagggagt 60
ggaaggaagg aaatgggtag gatactcttg ggaacctggc ggcccacgtg caggggtggc 120
<210> 89
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
aaggctagaa gcatggactg gggccatgct aattacggag aaggctggca gcatggagtc 60
cctgcaggtt tctgacaaat tctgtgcttt gaacaatcat ctggcagcga ggaggaagag 120
<210> 90
<211> 119
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
gttctagcat tgaacaaagc agccagtttg ttattgagat gttttcacat ctggcttttg 60
acacagataa ttgtcccaca gctggctcta gaatttcaaa cagaggggca gaaggaacc 119
<210> 91
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
gcatatattt tggagatttt taattaaatc ataaagcaat atatgctaaa ctactcttaa 60
ataattaaaa tcactatgtg tctggatgtt ggattggtgg ttaattattt attatgcatt 120
<210> 92
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
tcttgacgag gtccatgtga cacagagctg tgaacactta cccattcgtt ggacagcctt 60
caagacctgg cccagtgcat ctgtaggaag tgaaagagaa atatacattt ttctcattct 120
<210> 93
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
aggaagggtg aggttgctga cagattccat ggccttggca ctcaacacgc ccctgcatgt 60
ttcagtgcac tgacatcttg tagaatgatc ttggaaagtg agacactatg tagcttctaa 120
<210> 94
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
tccccagggc caccaccagc agcaagagga gggcccccac catcccagtg gcgatggacg 60
ggatcttagg cctggaatga ggtggaggaa caaggaaggg tgaggttgct gacagattcc 120
<210> 95
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
tcctgtcggg gtgcgagggc tcctgagccc acccaggact ggcactcacc tccctctcct 60
gcagcagcct ccgcagcgtg cgcttccgaa cgatgtggcg ccttcgcatg aagaggccga 120
<210> 96
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
ttcaagatcc tcaagagagc ttggttggga gcttctccac tgggtgtaag aggctccaca 60
agctgggggg gacaagaaca cagagacaag ggtcacctca gccctcacca tgctggaaag 120
<210> 97
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
cccaccagac catgagaggc cctgcggccc agcccagagg cctgtgccag ggaccttacc 60
ttatacaccg tgccgaacgc accggagccc agcactttga tctttttgaa ttcagtttcc 120
<210> 98
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
cagaaactca catcgaggat ttccttgttg gctttcggag atgttgcttc tcttaattcc 60
ttgatagcga cgggaatttt aactttctca ccttctggga tccagagtcc ctatgacaga 120
<210> 99
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
gagctgcgtg atgagctgca cggtggaggt gaggcagatg cccagcaggc ggcacacgtg 60
ggggttgtcc acgctggcca tcacgtaggc ttcctggagg gagggagagg cacgtcagtg 120
<210> 100
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 100
ctccccgtat ctcccttccc tgattacctt tgcgatctgc acacaccagt tgagcaggta 60
ctgggagcca atattgtctt tgtgttcccg gacatagtcc aggaggcagc cgaagggcat 120
<210> 101
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 101
ctgcggtgtt ttcaccagta cgttcctggc tgccaggtcg cggtgcacca agcgacggtc 60
ctccaagtag ttcatgccct gaaacagaga agaccctgct gtgagggaca gatcatcatg 120
<210> 102
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 102
ggtgtcagga aaatgctggc tgacctaaag ccacctcctt actttgcctc cttctgcatg 60
gtattctttc tcttccgcac ccagcagttt ggccagccca aaatctgtga tcttgacatg 120
<210> 103
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 103
tagcatcagg attatgactc accgtagctc cagacatcac tctggtgggt atagattctg 60
tgtaaaattg attccaatgc catccacttg ataggcacct tgggatggtg agagatgagg 120
<210> 104
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 104
ggaggagatc tcgctggcag ggattccgtc atatggcttg gatccaaagg tcatcaactc 60
ccaaacagtc acccctgaga ggatgaagca agaaaagaag gcagtgggat catgaatgaa 120
<210> 105
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 105
caccaaggct cagctaggca gtgtggacag acccaccagt cactcacact tgaccatgat 60
catgtagaca tcgatggtac atatgggtgg ctgagggagg cgttctcctt tctccaggat 120
<210> 106
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 106
gcaatttgta cctgaatgac aaggtagcgc tgggggtctc gggccatttt ggagaattcg 60
atgatcaact cacggaactt tgggcgacta tctgcgtcta tcatccagcc tggggaagga 120
<210> 107
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 107
cacgtcgtcc atgtcttctt catccatcag ggcacggtag aagttggagt ctgtaggact 60
tggcaaatgc attctttcat ccccctggtg cagagatttt gaggctatta gaatggcccg 120
<210> 108
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 108
cagcttgaga gagagagaga gacagagatt tcataccaga gagctcagga ggggagtccg 60
tgacgtggag gggctgctga agaagccctg ctgtgggatg aggtactcgt cggcatccac 120
<210> 109
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 109
gctgtaaatt ctggcttata aggtgttcat acatacccca tttctatcaa tgcaagccac 60
ggtggaattg ttgctggttg cactctgaaa aagaaacaga gaagttgccc atggaatgct 120
<210> 110
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 110
ctcaccaggc actgggagga aggtgtcgtc tatgctgtcc tcagtcaagg cgcctgtggg 60
gtctgagctg tatcgctgca agaagctgtc ttccttgatg ggacagcttt gcagctgcag 120
<210> 111
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 111
tgatagacag gattctgcac agagccagcg ggccttttgg gaacggactg gtttatgtat 60
tctgaaagtg gaaagaaatc agaggtgaag taatcagcaa agcaccatcc catgcaggat 120
<210> 112
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 112
aatgtgctgt tgacacaggt gggctggaca gtgttgagat actcggggtt gcccactgca 60
gtgctgtggg ggtcctggta gtgtgggtct ctgctgggcg cggggttcag aggctgattg 120
<210> 113
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 113
gtggagccct taaagatgcc atttggcttg gcttccttgg gaaagaagtc ctgctggtag 60
tcagggttgt ccaggctaat ttggtggctg cctttctggg cccagtgggc agggctgtcg 120
<210> 114
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 114
ggcttggtcc tgggtatcga aagagtctgg atttttaggg ctcatactat cctccgtggt 60
catgctccaa taaattcact gctttgtggc gcgaccctta ggtattctgc attttcagct 120
<210> 115
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 115
tcttcgggga gcagcgatgc gaccctccgg gacggccggg gcagcgctcc tggcgctgct 60
ggctgcgctc tgcccggcga gtcgggctct ggaggaaaag aaaggtaagg gcgtgtctcg 120
<210> 116
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 116
ctatcattcc tttgggccta ggattgcatt tatttccatg acaaaagggc ctgtctggtg 60
tttcagcaaa tgaaaacaaa aatataaagc ccatctcctt ttgaatgagc tctaaaacag 120
<210> 117
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 117
ttctccactg gacttcagaa caagagggag ctctgggctg ctggctggtt gtgcatttgc 60
tgtgggttcc ctccggcagg cgacctctcc gcgctgagaa ggttatccgg ataaccaagt 120
<210> 118
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 118
tgcatttctc agtatttcat gtgatatctg tctttttctt ccagtttgcc aaggcacgag 60
taacaagctc acgcagttgg gcacttttga agatcatttt ctcagcctcc agaggatgtt 120
<210> 119
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 119
caataactgt gaggtggtcc ttgggaattt ggaaattacc tatgtgcaga ggaattatga 60
tctttccttc ttaaaggttg gtgactttga ttttcctaca caaataaaat tggagaaaat 120
<210> 120
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 120
atcacgcatt tatgttttct cttcttagac catccaggag gtggctggtt atgtcctcat 60
tgccctcaac acagtggagc gaattccttt ggaaaacctg cagatcatca gaggaaatat 120
<210> 121
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 121
gtactacgaa aattcctatg ccttagcagt cttatctaac tatgatgcaa ataaaaccgg 60
actgaaggag ctgcccatga gaaatttaca gggtgagagg ctgggatgcc aaggctgggg 120
<210> 122
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 122
ggaatttaaa ggagctggaa agagtgctca ccgcagttcc attctcccgc agaaatcctg 60
catggcgccg tgcggttcag caacaaccct gccctgtgca acgtggagag catccagtgg 120
<210> 123
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 123
cgggacatag tcagcagtga ctttctcagc aacatgtcga tggacttcca gaaccacctg 60
ggcagctgta agtgtcgcat acacactatc tctgcctcca gctcctatgg gggacagctc 120
<210> 124
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 124
atgcatctat tacttttaca tttcaggcca aaagtgtgat ccaagctgtc ccaatgggag 60
ctgctggggt gcaggagagg agaactgcca gaaacgtaag tcagtgaaca gcctcagacc 120
<210> 125
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 125
tgaccaaaat catctgtgcc cagcagtgct ccgggcgctg ccgtggcaag tcccccagtg 60
actgctgcca caaccagtgt gctgcaggct gcacaggccc ccgggagagc gactgcctgg 120
<210> 126
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 126
gctgagtgta cttacctcac ttgcccagcg tgtcctctct cctccatagg tctgccgcaa 60
attccgagac gaagccacgt gcaaggacac ctgcccccca ctcatgctct acaaccccac 120
<210> 127
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 127
cacgtaccag atggatgtga accccgaggg caaatacagc tttggtgcca cctgcgtgaa 60
gaagtgtccc cgtgagtcct cctctgtggg ccctctaact ggtcaggcat ccttgtcccg 120
<210> 128
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 128
aggtaattat gtggtgacag atcacggctc gtgcgtccga gcctgtgggg ccgacagcta 60
tgagatggag gaagacggcg tccgcaagtg taagaagtgc gaagggcctt gccgcaaagg 120
<210> 129
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 129
agctattctt aatccaacaa atgtgaacgg aatacacgtc tctcttatct ctgcagtgtg 60
taacggaata ggtattggtg aatttaaaga ctcactctcc ataaatgcta cgaatattaa 120
<210> 130
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 130
acacttcaaa aactgcacct ccatcagtgg cgatctccac atcctgccgg tggcatttag 60
ggggtgagtc acaggttcag ttgcttgtat aaagaaaaac aaaatctgcc tttttaactg 120
<210> 131
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 131
taatcaccct gttgtttgtt tcagtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca 60
ggaactggat attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggt ttgagctgaa ttatcacatg 120
<210> 132
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 132
aatataaatg ggaaatcagt gttttagaga gagaactttt cgacatattt cctgttccct 60
tggaataaaa acatttcttc tgaaatttta ccgttaatgg ctgatgtttt gatatttttc 120
<210> 133
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 133
catctgcctt acagggtttt tgctgattca ggcttggcct gaaaacagga cggacctcca 60
tgcctttgag aacctagaaa tcatacgcgg caggaccaag caacagtaag ttgaccacag 120
<210> 134
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 134
ttttcttctc tccaatgtag tggtcagttt tctcttgcag tcgtcagcct gaacataaca 60
tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag atgtgataat ttcaggaaac 120
<210> 135
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 135
aaaaatttgt gctatgcaaa tacaataaac tggaaaaaac tgtttgggac ctccggtcag 60
aaaaccaaaa ttataagcaa cagaggtgaa aacagctgca gtaagtcacc gctttctgtt 120
<210> 136
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 136
cccctcgggt ccctgctctg tcactgactg ctgtgaccca ctctgtctcc gcagaggcca 60
caggccaggt ctgccatgcc ttgtgctccc ccgagggctg ctggggcccg gagcccaggg 120
<210> 137
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 137
actgcgtctc ttgccggaat gtcagccgag gcagggaatg cgtggacaag tgcaaccttc 60
tggaggggta ggaggttatt tctttaatcc ccttgcgttg atcaaaaata aggctccagg 120
<210> 138
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 138
cttcctcctc tcagtgagcc aagggagttt gtggagaact ctgagtgcat acagtgccac 60
ccagagtgcc tgcctcaggc catgaacatc acctgcacag gacgggtaag agccccttgc 120
<210> 139
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 139
gaaagagaca tgcatgaaca tttttctcca ccttggtgca gggaccagac aactgtatcc 60
agtgtgccca ctacattgac ggcccccact gcgtcaagac ctgcccggca ggagtcatgg 120
<210> 140
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 140
gagaaaacaa caccctggtc tggaagtacg cagacgccgg ccatgtgtgc cacctgtgcc 60
atccaaactg cacctacggg tgagtggaaa gtgaaggaga acagaacatt tcctctcttg 120
<210> 141
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 141
ccaggtccta ataaatcttc actgtctgac tttagtctcc cactaaaact gcatttcctt 60
tctacaattt caatttctcc ctttgcttca aataaagtcc tgacactatt catttgacat 120
<210> 142
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 142
ttaggatcag attatagtgt tacaccaggg ctccccaggc ctctcacata ttgaaatgta 60
cttgtccatc tttctccagg ccaggaaatg agagtctcaa agccatgtta ttctgccttt 120
<210> 143
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 143
ttaaactatc atcctgtaat caaagtaatg atggcagcgt gtcccaccag agcgggagcc 60
cagctgctca ggagtcatgc ttaggatgga tcccttctct tctgccgtca gagtttcagc 120
<210> 144
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 144
tgggttgggg tggatgcagc cacctccatg cctggccttc tgcatctgtg atcatcacgg 60
cctcctcctg ccactgagcc tcatgccttc acgtgtctgt tccccccgct tttcctttct 120
<210> 145
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 145
gccacccctg cacgtgggcc gccaggttcc caagagtatc ctacccattt ccttccttcc 60
actccctttg ccagtgcctc tcaccccaac tagtagctaa ccatcacccc caggactgac 120
<210> 146
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 146
ctcttcctcc tcgctgccag atgattgttc aaagcacaga atttgtcaga aacctgcagg 60
gactccatgc tgccagcctt ctccgtaatt agcatggccc cagtccatgc ttctagcctt 120
<210> 147
<211> 119
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 147
ggttccttct gcccctctgt ttgaaattct agagccagct gtgggacaat tatctgtgtc 60
aaaagccaga tgtgaaaaca tctcaataac aaactggctg ctttgttcaa tgctagaac 119
<210> 148
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 148
aatgcataat aaataattaa ccaccaatcc aacatccaga cacatagtga ttttaattat 60
ttaagagtag tttagcatat attgctttat gatttaatta aaaatctcca aaatatatgc 120
<210> 149
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 149
agaatgagaa aaatgtatat ttctctttca cttcctacag atgcactggg ccaggtcttg 60
aaggctgtcc aacgaatggg taagtgttca cagctctgtg tcacatggac ctcgtcaaga 120
<210> 150
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 150
ttagaagcta catagtgtct cactttccaa gatcattcta caagatgtca gtgcactgaa 60
acatgcaggg gcgtgttgag tgccaaggcc atggaatctg tcagcaacct cacccttcct 120
<210> 151
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 151
ggaatctgtc agcaacctca cccttccttg ttcctccacc tcattccagg cctaagatcc 60
cgtccatcgc cactgggatg gtgggggccc tcctcttgct gctggtggtg gccctgggga 120
<210> 152
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 152
tcggcctctt catgcgaagg cgccacatcg ttcggaagcg cacgctgcgg aggctgctgc 60
aggagaggga ggtgagtgcc agtcctgggt gggctcagga gccctcgcac cccgacagga 120
<210> 153
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 153
ctttccagca tggtgagggc tgaggtgacc cttgtctctg tgttcttgtc ccccccagct 60
tgtggagcct cttacaccca gtggagaagc tcccaaccaa gctctcttga ggatcttgaa 120
<210> 154
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 154
ggaaactgaa ttcaaaaaga tcaaagtgct gggctccggt gcgttcggca cggtgtataa 60
ggtaaggtcc ctggcacagg cctctgggct gggccgcagg gcctctcatg gtctggtggg 120
<210> 155
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 155
tctgtcatag ggactctgga tcccagaagg tgagaaagtt aaaattcccg tcgctatcaa 60
ggaattaaga gaagcaacat ctccgaaagc caacaaggaa atcctcgatg tgagtttctg 120
<210> 156
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 156
cactgacgtg cctctccctc cctccaggaa gcctacgtga tggccagcgt ggacaacccc 60
cacgtgtgcc gcctgctggg catctgcctc acctccaccg tgcagctcat cacgcagctc 120
<210> 157
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 157
atgcccttcg gctgcctcct ggactatgtc cgggaacaca aagacaatat tggctcccag 60
tacctgctca actggtgtgt gcagatcgca aaggtaatca gggaagggag atacggggag 120
<210> 158
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 158
catgatgatc tgtccctcac agcagggtct tctctgtttc agggcatgaa ctacttggag 60
gaccgtcgct tggtgcaccg cgacctggca gccaggaacg tactggtgaa aacaccgcag 120
<210> 159
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 159
catgtcaaga tcacagattt tgggctggcc aaactgctgg gtgcggaaga gaaagaatac 60
catgcagaag gaggcaaagt aaggaggtgg ctttaggtca gccagcattt tcctgacacc 120
<210> 160
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 160
cctcatctct caccatccca aggtgcctat caagtggatg gcattggaat caattttaca 60
cagaatctat acccaccaga gtgatgtctg gagctacggt gagtcataat cctgatgcta 120
<210> 161
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 161
ttcattcatg atcccactgc cttcttttct tgcttcatcc tctcaggggt gactgtttgg 60
gagttgatga cctttggatc caagccatat gacggaatcc ctgccagcga gatctcctcc 120
<210> 162
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 162
atcctggaga aaggagaacg cctccctcag ccacccatat gtaccatcga tgtctacatg 60
atcatggtca agtgtgagtg actggtgggt ctgtccacac tgcctagctg agccttggtg 120
<210> 163
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 163
tccttcccca ggctggatga tagacgcaga tagtcgccca aagttccgtg agttgatcat 60
cgaattctcc aaaatggccc gagaccccca gcgctacctt gtcattcagg tacaaattgc 120
<210> 164
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 164
cgggccattc taatagcctc aaaatctctg caccaggggg atgaaagaat gcatttgcca 60
agtcctacag actccaactt ctaccgtgcc ctgatggatg aagaagacat ggacgacgtg 120
<210> 165
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 165
gtggatgccg acgagtacct catcccacag cagggcttct tcagcagccc ctccacgtca 60
cggactcccc tcctgagctc tctggtatga aatctctgtc tctctctctc tctcaagctg 120
<210> 166
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 166
agcattccat gggcaacttc tctgtttctt tttcagagtg caaccagcaa caattccacc 60
gtggcttgca ttgatagaaa tggggtatgt atgaacacct tataagccag aatttacagc 120
<210> 167
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 167
ctgcagctgc aaagctgtcc catcaaggaa gacagcttct tgcagcgata cagctcagac 60
cccacaggcg ccttgactga ggacagcata gacgacacct tcctcccagt gcctggtgag 120
<210> 168
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 168
atcctgcatg ggatggtgct ttgctgatta cttcacctct gatttctttc cactttcaga 60
atacataaac cagtccgttc ccaaaaggcc cgctggctct gtgcagaatc ctgtctatca 120
<210> 169
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 169
caatcagcct ctgaaccccg cgcccagcag agacccacac taccaggacc cccacagcac 60
tgcagtgggc aaccccgagt atctcaacac tgtccagccc acctgtgtca acagcacatt 120
<210> 179
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 179
cgacagccct gcccactggg cccagaaagg cagccaccaa attagcctgg acaaccctga 60
ctaccagcag gacttctttc ccaaggaagc caagccaaat ggcatcttta agggctccac 120
<210> 171
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 171
agctgaaaat gcagaatacc taagggtcgc gccacaaagc agtgaattta ttggagcatg 60
accacggagg atagtatgag ccctaaaaat ccagactctt tcgataccca ggaccaagcc 120
<210> 172
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 172
tcttcgggga gcagcgatgc gaccctccgg gacggccggg gcagcgctcc tggcgctgct 60
ggctgcgctc tgcccggcga gtcgggctct ggaggaaaag aaaggtaagg gcgtgtctcg 120
<210> 173
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 173
ctatcattcc tttgggccta ggattgcatt tatttccatg acaaaagggc ctgtctggtg 60
tttcagcaaa tgaaaacaaa aatataaagc ccatctcctt ttgaatgagc tctaaaacag 120
<210> 174
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 174
acttggttat ccggataacc ttctcagcgc ggagaggtcg cctgccggag ggaacccaca 60
gcaaatgcac aaccagccag cagcccagag ctccctcttg ttctgaagtc cagtggagaa 120
<210> 175
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 175
tgcatttctc agtatttcat gtgatatctg tctttttctt ccagtttgcc aaggcacgag 60
taacaagctc acgcagttgg gcacttttga agatcatttt ctcagcctcc agaggatgtt 120
<210> 176
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 176
attttctcca attttatttg tgtaggaaaa tcaaagtcac caacctttaa gaaggaaaga 60
tcataattcc tctgcacata ggtaatttcc aaattcccaa ggaccacctc acagttattg 120
<210> 177
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 177
atcacgcatt tatgttttct cttcttagac catccaggag gtggctggtt atgtcctcat 60
tgccctcaac acagtggagc gaattccttt ggaaaacctg cagatcatca gaggaaatat 120
<210> 178
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 178
ccccagcctt ggcatcccag cctctcaccc tgtaaatttc tcatgggcag ctccttcagt 60
ccggttttat ttgcatcata gttagataag actgctaagg cataggaatt ttcgtagtac 120
<210> 179
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 179
ggaatttaaa ggagctggaa agagtgctca ccgcagttcc attctcccgc agaaatcctg 60
catggcgccg tgcggttcag caacaaccct gccctgtgca acgtggagag catccagtgg 120
<210> 180
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 180
gagctgtccc ccataggagc tggaggcaga gatagtgtgt atgcgacact tacagctgcc 60
caggtggttc tggaagtcca tcgacatgtt gctgagaaag tcactgctga ctatgtcccg 120
<210> 181
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 181
atgcatctat tacttttaca tttcaggcca aaagtgtgat ccaagctgtc ccaatgggag 60
ctgctggggt gcaggagagg agaactgcca gaaacgtaag tcagtgaaca gcctcagacc 120
<210> 182
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 182
tgaccaaaat catctgtgcc cagcagtgct ccgggcgctg ccgtggcaag tcccccagtg 60
actgctgcca caaccagtgt gctgcaggct gcacaggccc ccgggagagc gactgcctgg 120
<210> 183
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 183
gctgagtgta cttacctcac ttgcccagcg tgtcctctct cctccatagg tctgccgcaa 60
attccgagac gaagccacgt gcaaggacac ctgcccccca ctcatgctct acaaccccac 120
<210> 184
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 184
cgggacaagg atgcctgacc agttagaggg cccacagagg aggactcacg gggacacttc 60
ttcacgcagg tggcaccaaa gctgtatttg ccctcggggt tcacatccat ctggtacgtg 120
<210> 185
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 185
aggtaattat gtggtgacag atcacggctc gtgcgtccga gcctgtgggg ccgacagcta 60
tgagatggag gaagacggcg tccgcaagtg taagaagtgc gaagggcctt gccgcaaagg 120
<210> 186
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 186
agctattctt aatccaacaa atgtgaacgg aatacacgtc tctcttatct ctgcagtgtg 60
taacggaata ggtattggtg aatttaaaga ctcactctcc ataaatgcta cgaatattaa 120
<210> 187
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 187
cagttaaaaa ggcagatttt gtttttcttt atacaagcaa ctgaacctgt gactcacccc 60
ctaaatgcca ccggcaggat gtggagatcg ccactgatgg aggtgcagtt tttgaagtgt 120
<210> 188
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 188
taatcaccct gttgtttgtt tcagtgactc cttcacacat actcctcctc tggatccaca 60
ggaactggat attctgaaaa ccgtaaagga aatcacaggt ttgagctgaa ttatcacatg 120
<210> 189
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 189
gaaaaatatc aaaacatcag ccattaacgg taaaatttca gaagaaatgt ttttattcca 60
agggaacagg aaatatgtcg aaaagttctc tctctaaaac actgatttcc catttatatt 120
<210> 190
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 190
catctgcctt acagggtttt tgctgattca ggcttggcct gaaaacagga cggacctcca 60
tgcctttgag aacctagaaa tcatacgcgg caggaccaag caacagtaag ttgaccacag 120
<210> 191
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 191
ttttcttctc tccaatgtag tggtcagttt tctcttgcag tcgtcagcct gaacataaca 60
tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag atgtgataat ttcaggaaac 120
<210> 192
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 192
aacagaaagc ggtgacttac tgcagctgtt ttcacctctg ttgcttataa ttttggtttt 60
ctgaccggag gtcccaaaca gttttttcca gtttattgta tttgcatagc acaaattttt 120
<210> 193
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 193
cccctcgggt ccctgctctg tcactgactg ctgtgaccca ctctgtctcc gcagaggcca 60
caggccaggt ctgccatgcc ttgtgctccc ccgagggctg ctggggcccg gagcccaggg 120
<210> 194
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 194
cctggagcct tatttttgat caacgcaagg ggattaaaga aataacctcc tacccctcca 60
gaaggttgca cttgtccacg cattccctgc ctcggctgac attccggcaa gagacgcagt 120
<210> 195
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 195
cttcctcctc tcagtgagcc aagggagttt gtggagaact ctgagtgcat acagtgccac 60
ccagagtgcc tgcctcaggc catgaacatc acctgcacag gacgggtaag agccccttgc 120
<210> 196
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 196
gaaagagaca tgcatgaaca tttttctcca ccttggtgca gggaccagac aactgtatcc 60
agtgtgccca ctacattgac ggcccccact gcgtcaagac ctgcccggca ggagtcatgg 120
<210> 197
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 197
caagagagga aatgttctgt tctccttcac tttccactca cccgtaggtg cagtttggat 60
ggcacaggtg gcacacatgg ccggcgtctg cgtacttcca gaccagggtg ttgttttctc 120
<210> 198
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 198
ccaggtccta ataaatcttc actgtctgac tttagtctcc cactaaaact gcatttcctt 60
tctacaattt caatttctcc ctttgcttca aataaagtcc tgacactatt catttgacat 120
<210> 199
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 199
ttaggatcag attatagtgt tacaccaggg ctccccaggc ctctcacata ttgaaatgta 60
cttgtccatc tttctccagg ccaggaaatg agagtctcaa agccatgtta ttctgccttt 120
<210> 200
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 200
gctgaaactc tgacggcaga agagaaggga tccatcctaa gcatgactcc tgagcagctg 60
ggctcccgct ctggtgggac acgctgccat cattactttg attacaggat gatagtttaa 120
<210> 201
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 201
tgggttgggg tggatgcagc cacctccatg cctggccttc tgcatctgtg atcatcacgg 60
cctcctcctg ccactgagcc tcatgccttc acgtgtctgt tccccccgct tttcctttct 120
<210> 202
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 202
gtcagtcctg ggggtgatgg ttagctacta gttggggtga gaggcactgg caaagggagt 60
ggaaggaagg aaatgggtag gatactcttg ggaacctggc ggcccacgtg caggggtggc 120
<210> 203
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 203
ctcttcctcc tcgctgccag atgattgttc aaagcacaga atttgtcaga aacctgcagg 60
gactccatgc tgccagcctt ctccgtaatt agcatggccc cagtccatgc ttctagcctt 120
<210> 204
<211> 119
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 204
gttctagcat tgaacaaagc agccagtttg ttattgagat gttttcacat ctggcttttg 60
acacagataa ttgtcccaca gctggctcta gaatttcaaa cagaggggca gaaggaacc 119
<210> 205
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 205
aatgcataat aaataattaa ccaccaatcc aacatccaga cacatagtga ttttaattat 60
ttaagagtag tttagcatat attgctttat gatttaatta aaaatctcca aaatatatgc 120
<210> 206
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 206
agaatgagaa aaatgtatat ttctctttca cttcctacag atgcactggg ccaggtcttg 60
aaggctgtcc aacgaatggg taagtgttca cagctctgtg tcacatggac ctcgtcaaga 120
<210> 207
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 207
ttagaagcta catagtgtct cactttccaa gatcattcta caagatgtca gtgcactgaa 60
acatgcaggg gcgtgttgag tgccaaggcc atggaatctg tcagcaacct cacccttcct 120
<210> 208
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 208
ggaatctgtc agcaacctca cccttccttg ttcctccacc tcattccagg cctaagatcc 60
cgtccatcgc cactgggatg gtgggggccc tcctcttgct gctggtggtg gccctgggga 120
<210> 209
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 209
tcctgtcggg gtgcgagggc tcctgagccc acccaggact ggcactcacc tccctctcct 60
gcagcagcct ccgcagcgtg cgcttccgaa cgatgtggcg ccttcgcatg aagaggccga 120
<210> 210
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 210
ctttccagca tggtgagggc tgaggtgacc cttgtctctg tgttcttgtc ccccccagct 60
tgtggagcct cttacaccca gtggagaagc tcccaaccaa gctctcttga ggatcttgaa 120
<210> 211
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 211
cccaccagac catgagaggc cctgcggccc agcccagagg cctgtgccag ggaccttacc 60
ttatacaccg tgccgaacgc accggagccc agcactttga tctttttgaa ttcagtttcc 120
<210> 212
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 212
tctgtcatag ggactctgga tcccagaagg tgagaaagtt aaaattcccg tcgctatcaa 60
ggaattaaga gaagcaacat ctccgaaagc caacaaggaa atcctcgatg tgagtttctg 120
<210> 213
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 213
cactgacgtg cctctccctc cctccaggaa gcctacgtga tggccagcgt ggacaacccc 60
cacgtgtgcc gcctgctggg catctgcctc acctccaccg tgcagctcat cacgcagctc 120
<210> 214
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 214
ctccccgtat ctcccttccc tgattacctt tgcgatctgc acacaccagt tgagcaggta 60
ctgggagcca atattgtctt tgtgttcccg gacatagtcc aggaggcagc cgaagggcat 120
<210> 215
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 215
catgatgatc tgtccctcac agcagggtct tctctgtttc agggcatgaa ctacttggag 60
gaccgtcgct tggtgcaccg cgacctggca gccaggaacg tactggtgaa aacaccgcag 120
<210> 216
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 216
ggtgtcagga aaatgctggc tgacctaaag ccacctcctt actttgcctc cttctgcatg 60
gtattctttc tcttccgcac ccagcagttt ggccagccca aaatctgtga tcttgacatg 120
<210> 217
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 217
cctcatctct caccatccca aggtgcctat caagtggatg gcattggaat caattttaca 60
cagaatctat acccaccaga gtgatgtctg gagctacggt gagtcataat cctgatgcta 120
<210> 218
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 218
ttcattcatg atcccactgc cttcttttct tgcttcatcc tctcaggggt gactgtttgg 60
gagttgatga cctttggatc caagccatat gacggaatcc ctgccagcga gatctcctcc 120
<210> 219
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 219
caccaaggct cagctaggca gtgtggacag acccaccagt cactcacact tgaccatgat 60
catgtagaca tcgatggtac atatgggtgg ctgagggagg cgttctcctt tctccaggat 120
<210> 220
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 220
tccttcccca ggctggatga tagacgcaga tagtcgccca aagttccgtg agttgatcat 60
cgaattctcc aaaatggccc gagaccccca gcgctacctt gtcattcagg tacaaattgc 120
<210> 221
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 221
cgggccattc taatagcctc aaaatctctg caccaggggg atgaaagaat gcatttgcca 60
agtcctacag actccaactt ctaccgtgcc ctgatggatg aagaagacat ggacgacgtg 120
<210> 222
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 222
cagcttgaga gagagagaga gacagagatt tcataccaga gagctcagga ggggagtccg 60
tgacgtggag gggctgctga agaagccctg ctgtgggatg aggtactcgt cggcatccac 120
<210> 223
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 223
agcattccat gggcaacttc tctgtttctt tttcagagtg caaccagcaa caattccacc 60
gtggcttgca ttgatagaaa tggggtatgt atgaacacct tataagccag aatttacagc 120
<210> 224
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 224
ctgcagctgc aaagctgtcc catcaaggaa gacagcttct tgcagcgata cagctcagac 60
cccacaggcg ccttgactga ggacagcata gacgacacct tcctcccagt gcctggtgag 120
<210> 225
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 225
atcctgcatg ggatggtgct ttgctgatta cttcacctct gatttctttc cactttcaga 60
atacataaac cagtccgttc ccaaaaggcc cgctggctct gtgcagaatc ctgtctatca 120
<210> 226
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 226
aatgtgctgt tgacacaggt gggctggaca gtgttgagat actcggggtt gcccactgca 60
gtgctgtggg ggtcctggta gtgtgggtct ctgctgggcg cggggttcag aggctgattg 120
<210> 227
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 227
cgacagccct gcccactggg cccagaaagg cagccaccaa attagcctgg acaaccctga 60
ctaccagcag gacttctttc ccaaggaagc caagccaaat ggcatcttta agggctccac 120
<210> 228
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 228
ggcttggtcc tgggtatcga aagagtctgg atttttaggg ctcatactat cctccgtggt 60
catgctccaa taaattcact gctttgtggc gcgaccctta ggtattctgc attttcagct 120
Claims (11)
1.一种用于高通量测序检测基因突变的捕获探针，其特征在于，所述捕获探针为单链探针混合物，所述单链探针混合物包括从待测DNA的一端开始，分别针对待测DNA的正义链和反义链的核苷酸序列，依次设计的针对正义链的探针和针对反义链的探针；每两个相邻的单链探针中，一个为针对正义链的核苷酸序列设计的单链探针，另一个为针对反义链的核苷酸序列设计的单链探针；每两个相邻的单链探针所针对的待测DNA没有重叠；所述单链探针混合物能够覆盖全部待测DNA。
2.根据权利要求1所述的捕获探针，其特征在于，所述单链探针的长度为90～120nt；所述单链探针混合物中每个单链探针以相同的摩尔比例混合。
3.根据权利要求1或2所述的捕获探针，其特征在于，所述单链探针的长度为110～120nt。
4.权利要求1～3任一项所述的捕获探针在基因组测序文库构建或非疾病诊断目的的高通量测序检测基因突变中的应用。
5.一种基因突变测序文库的构建方法，其特征在于，将基因组DNA打断，采用权利要求1～3任一项所述的捕获探针构建测序文库。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取基因组DNA，将其打断为小片段；
(2)对步骤(1)得到的小片段DNA进行文库制备；
(3)将步骤(2)得到的小片段DNA文库与权利要求1～3任一项所述的捕获探针进行杂交，捕获目的片段；
(4)对步骤(3)捕获的片段进行扩增，将扩增产物上机测序。
7.一种EGFR基因的特异性捕获探针，其特征在于，包括如SEQ ID NO.172～SEQ IDNO.228所示的单链探针。
8.一种检测EGFR基因突变的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求7所述的捕获探针。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述捕获探针由如SEQ ID NO.172～SEQID NO.228所示的单链探针等摩尔比例混合组成。
10.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述捕获探针的工作浓度为0.1pM～0.75pM。
11.权利要求7所述的捕获探针或权利要求8～10任一项所述的试剂盒在非疾病诊断目的的高通量测序检测EGFR基因突变或构建检测EGFR基因突变的测序文库中的应用。
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