CN109603212A - 一种微生物发酵液快速沉淀方法 - Google Patents

一种微生物发酵液快速沉淀方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109603212A
CN109603212A CN201811530982.XA CN201811530982A CN109603212A CN 109603212 A CN109603212 A CN 109603212A CN 201811530982 A CN201811530982 A CN 201811530982A CN 109603212 A CN109603212 A CN 109603212A
Authority
CN
China
Prior art keywords
microbial fermentation
fermentation solution
sedimentation method
rapid sedimentation
calcium salt
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811530982.XA
Other languages
English (en)
Inventor
吴道军
田立超
万涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CHONGQING LANDSCAPE AND GARDENING RESEARCH INSTITUTE
Original Assignee
CHONGQING LANDSCAPE AND GARDENING RESEARCH INSTITUTE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CHONGQING LANDSCAPE AND GARDENING RESEARCH INSTITUTE filed Critical CHONGQING LANDSCAPE AND GARDENING RESEARCH INSTITUTE
Priority to CN201811530982.XA priority Critical patent/CN109603212A/zh
Publication of CN109603212A publication Critical patent/CN109603212A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D21/00—Separation of suspended solid particles from liquids by sedimentation
    • B01D21/01—Separation of suspended solid particles from liquids by sedimentation using flocculating agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

一种微生物发酵液快速沉淀方法，包括以下步骤：S1,将微生物发酵液装入容器中；S2，向容器中加入磷酸一氢盐和钙盐混合液，且磷酸一氢盐和钙盐的混合质量占发酵液质量的5%～10%；S3，对上述溶液进行摇匀或用无菌玻璃棒搅拌均匀，静置后，放置于4℃环境中12～24小时，吸掉上清液，收集沉淀即为浓缩的菌体。本发明具有如下的优点：无毒高效、成本低廉，能将微生物发酵液中的菌体浓缩50‑68倍，细胞得率可达90％。

Description

一种微生物发酵液快速沉淀方法
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种微生物发酵液快速沉淀 方法。
背景技术
微生物菌剂是指目标微生物(有效菌)经过工业化生产扩繁后，利用 多孔的物质作为吸附剂(如草炭、蛭石)，吸附菌体的发酵液加工制成的 活菌制剂。这种菌剂用于拌种或蘸根，具有直接或间接改良土壤、恢复 地力、预防土传病害、维持根际微生物区系平衡和降解有毒害物质等作 用。农用微生物菌剂恰当使用可以提高农产品产量、改善农产品品质、 减少化肥用量、降低成本、改良土壤、保护生态环境。
由于其具有无毒副作用，无残留污染，不产生抗性等特点，在水产 养殖、有机废弃物堆肥发酵及土壤生态修复等方面起着重要作用，微生 物发酵液沉淀和浓缩可以大大压缩存储体积，降低运输成本，提高使用 效果。因此，人们对菌液常采取不同方式不同程度的浓缩；目前微生物 制剂的浓缩方法主要有两种：一是物理方法，包括离心法和过滤法，这种浓缩方法设备投入高，运行成本也高；二是化学方法：主要采用明矾、 聚铝、聚铁等高分子化合物作为絮凝剂，这些絮凝剂本身具有毒性，对 微生物产品有毒害作用，同时对微生物产品的使用对象及其环境也有不 利影响。因此，针对微生物菌剂研制出一种更好的浓缩方法是本领域技 术人员有待解决的难题之一。
发明内容
本发明的目的就是提供一种微生物发酵液快速沉淀方法，其无毒高 效、成本低廉，能将微生物发酵液中的菌体浓缩50-68倍，细胞得率可 达91％。
本发明的目的是这样实现的，一种微生物发酵液快速沉淀方法，包 括以下步骤：
S1,将微生物发酵液装入容器中；
S2，向容器中加入磷酸一氢盐和钙盐混合液，且磷酸一氢盐和钙盐 的混合质量占发酵液质量的5％～10％；
S3，对上述溶液进行摇匀或用无菌玻璃棒搅拌均匀，静置后，放置 于4℃环境中12～24小时，吸掉上清液，收集沉淀即为浓缩的菌体。
技术方案中，S2中磷酸一氢盐和钙盐分别为K2HPO4和CaCl2，质量比 为3:(1.8～2)；还可以分别为Na2HPO4和CaCl2，质量比为3:(2～2.2)。 S3中搅拌先快速搅拌12～15分钟，随后缓慢搅拌35～40分钟，在快速 反应后在进行慢速反应，使得反应更充分。
优选地，S1中容器为圆柱形容器，具体地可为广口瓶。S3中用虹吸 管吸掉上清液。
在本发明中，磷酸一氢盐优选为K2HPO4或Na2HPO4，钙盐为CaCl2；且 先加入钙盐，为了与营养基中有可能含有的磷酸一氢盐。此外，磷酸一 氢盐和钙盐均无毒，且成本低廉；磷酸一氢盐和钙盐能发生沉淀反应， 生成CaHPO4沉淀，该沉淀物质为一种网状结构，可与菌体细胞粘合在一 起，加速菌体细胞的沉淀，起到加速菌体浓缩的作用。
由于采用了上述技术方案，本发明具有如下的优点：无毒高效、成 本低廉，能将微生物发酵液中的菌体浓缩50-68倍，细胞得率可达90％。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明：
实施例1
取1mL摇床培养24小时后的枯草芽孢杆菌菌液，利用稀释涂布法测 量菌液活菌数，将500mL枯草芽孢杆菌菌液转移至1L的广口瓶中，依次 添加3％(m/V)的CaCl2和K2HPO4的混合液至菌液中，摇匀或用无菌玻璃 棒搅拌均匀，静止后放入4℃冰箱中，12小时后，取出后用虹吸管吸出 上清液，收集沉淀即为浓缩菌体。
用移液枪取1mL沉淀液采用稀释涂布法测量活菌数结果如下：
实施例2
取1mL摇床培养24小时后的枯草芽孢杆菌菌液，利用稀释涂布法测 量菌液活菌数，将500mL枯草芽孢杆菌菌液转移至1L的广口瓶中，依次 添加5％(m/V)的CaCl2和K2HPO4的混合液至菌液中，摇匀或用无菌玻璃 棒搅拌均匀，静止后放入4℃冰箱中，12小时后，取出后用虹吸管吸出 上清液，收集沉淀即为浓缩菌体。
用移液枪取1mL沉淀液采用稀释涂布法测量活菌数结果如下：
实施例3
取1mL摇床培养24小时后的枯草芽孢杆菌菌液，利用稀释涂布法测 量菌液活菌数，将500mL枯草芽孢杆菌菌液转移至1L的广口瓶中，依次 添加8％(m/V)的CaCl2和K2HPO4的混合液至菌液中，摇匀或用无菌玻璃 棒搅拌均匀，静止后放入4℃冰箱中，12小时后，取出后用虹吸管吸出 上清液，收集沉淀即为浓缩菌体。
用移液枪取1mL沉淀液采用稀释涂布法测量活菌数结果如下：
实施例4
取1mL摇床培养24小时后的枯草芽孢杆菌菌液，利用稀释涂布法测 量菌液活菌数，将500mL枯草芽孢杆菌菌液转移至1L的广口瓶中，依次 添加10％(m/V)的CaCl2和K2HPO4的混合液至菌液中，摇匀或用无菌玻璃 棒搅拌均匀，静止后放入4℃冰箱中，12小时后，取出后用虹吸管吸出 上清液，收集沉淀即为浓缩菌体。
用移液枪取1mL沉淀液采用稀释涂布法测量活菌数结果如下：
实施例5
取1mL摇床培养24小时后的枯草芽孢杆菌菌液，利用稀释涂布法测 量菌液活菌数，将500mL枯草芽孢杆菌菌液转移至1L的广口瓶中，依次 添加12％(m/V)的CaCl2和K2HPO4的混合液至菌液中，摇匀或用无菌玻璃 棒搅拌均匀，静止后放入4℃冰箱中，12小时后，取出后用虹吸管吸出 上清液，收集沉淀即为浓缩菌体。
用移液枪取1mL沉淀液采用稀释涂布法测量活菌数结果如下：
由实施例1至实施例5中的用移液枪取1mL沉淀液采用稀释涂布法 测量活菌数，实施例1中，回收率和浓缩倍数较低，而实施例5中回收 率增长不明显，且浓缩倍数增长不明显，因而磷酸一氢盐和钙盐的混合 质量占发酵液质量的5％～10％的添加量，能将微生物发酵液中的菌体浓缩 50-68倍，回收率即细胞得率可达90％。
上述实施例中，S2中磷酸一氢盐和钙盐分别为K2HPO4和CaCl2，质量 比为3:(1.8～2)；还可以分别为Na2HPO4和CaCl2，质量比为3:(2～2.2)。 S3中搅拌先快速搅拌12～15分钟，随后缓慢搅拌35～40分钟，在快速 反应后在进行慢速反应，使得反应更充分。
优选地，S1中容器为圆柱形容器，具体地可为广口瓶。S3中用虹吸 管吸掉上清液。
对实施例1至实施例5中的用移液枪取1mL上清液采用稀释涂布法 测量活菌数，有结果如下表：
由上表可知，10％～25％的沉淀剂添加量对上清液浓度由显著的降低 作用，说明该沉淀剂能较好的将菌体沉淀，25％的添加量较20％的的没有 明显减少，说明10％～20％的沉淀剂对发酵液的沉淀效果更显著。综合成 本考虑，宜采用10％～20％的沉淀剂用量。

Claims (7)

1.一种微生物发酵液快速沉淀方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1,将微生物发酵液装入容器中；
S2，向容器中先后加入钙盐和磷酸一氢盐混合液，且磷酸一氢盐和钙盐的混合质量占发酵液质量的5%～10%；
S3，对上述溶液进行摇匀或用无菌玻璃棒搅拌均匀，静置后，放置于4℃环境中12～24小时，吸掉上清液，收集沉淀即为浓缩的菌体。
2.根据权利要求1所述的一种微生物发酵液快速沉淀方法，其特征在于， S2中磷酸一氢盐和钙盐分别为K2HPO4和CaCl2，质量比为3:（1.8～2）。
3.根据权利要求1所述的一种微生物发酵液快速沉淀方法，其特征在于， S2中磷酸一氢盐和钙盐分别为Na2HPO4和CaCl2，质量比为3:（2～2.2）。
4.根据权利要求1所述的一种微生物发酵液快速沉淀方法，其特征在于， S3中搅拌先快速搅拌12～15分钟，随后缓慢搅拌35～40分钟。
5.根据权利要求1所述的一种微生物发酵液快速沉淀方法，其特征在于，S1中容器为圆柱形容器。
6.根据权利要求1所述的一种微生物发酵液快速沉淀方法，其特征在于，S1中圆柱形容器为广口瓶。
7.根据权利要求1所述的一种微生物发酵液快速沉淀方法，其特征在于， S3中用虹吸管吸掉上清液。
CN201811530982.XA 2018-12-14 2018-12-14 一种微生物发酵液快速沉淀方法 Pending CN109603212A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811530982.XA CN109603212A (zh) 2018-12-14 2018-12-14 一种微生物发酵液快速沉淀方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811530982.XA CN109603212A (zh) 2018-12-14 2018-12-14 一种微生物发酵液快速沉淀方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109603212A true CN109603212A (zh) 2019-04-12

Family

ID=66009407

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811530982.XA Pending CN109603212A (zh) 2018-12-14 2018-12-14 一种微生物发酵液快速沉淀方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109603212A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024046993A1 (en) * 2022-08-29 2024-03-07 Chr. Hansen A/S Process for the production of a purified human milk oligosaccharide derived from a microbial fermentation process

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102471755A (zh) * 2009-07-09 2012-05-23 诺维信公司 用二价盐和磷酸盐进行絮凝

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102471755A (zh) * 2009-07-09 2012-05-23 诺维信公司 用二价盐和磷酸盐进行絮凝

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杨玉: "《海悦千流：山东大学威海分校本科生科研成果汇编》", 30 April 2012, 山东大学出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024046993A1 (en) * 2022-08-29 2024-03-07 Chr. Hansen A/S Process for the production of a purified human milk oligosaccharide derived from a microbial fermentation process

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104450597B (zh) 一种石油降解菌固体菌剂的制备方法及由其制备的固体菌剂修复石油污染的土壤的方法
CN109182136B (zh) 一株具有多种难溶性磷源分解能力的黑曲霉jxz01的分离及应用
CN104911127B (zh) 一种根瘤菌及其菌剂和制备方法与应用
CN104673715B (zh) 对镉具有固定效应并能促进植物生长的肠杆菌及其应用
CN110734333A (zh) 一种微生物土壤修复剂及其制备方法
CN108485998A (zh) 一株高效活化矿质元素和重金属镉的土壤杆菌t29
CN108441450B (zh) 一种兼具溶磷和降解dehp作用的复合菌剂及其应用
CN110184225B (zh) 一株具有PAHs降解能力的根际促生细菌PHE-2及其应用
CN112342030A (zh) 一种重金属污染土壤修复剂及其制备方法
CN109576181B (zh) 一种改性伊利石粉微生物菌剂及其制备方法与应用
CN104877916B (zh) 一种副球菌及其菌剂和制备方法与应用
CN109603212A (zh) 一种微生物发酵液快速沉淀方法
CN110724535B (zh) 一种新型生态园林绿化土壤修复处理剂及其制备方法
CN115125178B (zh) 一株具有四环素类抗生素降解功能的类芽孢杆菌、方法及应用
CN107354112B (zh) 一株噻虫醛降解菌及其应用
CN116904354A (zh) Priestia aryabhattai H2及其应用
CN104496724B (zh) 用于锰矿污染土壤修复的有机菌肥及其制备方法
CN103451116A (zh) 一种荧光假单胞菌y13及制备方法和应用
CN114196570B (zh) 一种金黄杆菌及其在降解草甘膦中的应用
CN102703361A (zh) 一株具有自絮凝能力的兼性厌氧反硝化细菌及其用途
CN115465851A (zh) 改性生物质碳/腐殖质/化肥调理红壤的协同施用方法
CN110408562B (zh) 一种修复镉污染土壤并促进植物生长的复合微生物菌剂的制备方法及应用
CN114031466A (zh) 一种适用于盐碱地的复合型土壤修复剂
CN108949639B (zh) 一株降解金霉素的鲍氏不动杆菌及其应用
CN112522248A (zh) 一种包裹型阴沟肠杆菌y16固体菌剂的制备方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190412