CN109536556A - 一种均一性绿藻活性肽的制备方法 - Google Patents

一种均一性绿藻活性肽的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109536556A
CN109536556A CN201811629177.2A CN201811629177A CN109536556A CN 109536556 A CN109536556 A CN 109536556A CN 201811629177 A CN201811629177 A CN 201811629177A CN 109536556 A CN109536556 A CN 109536556A
Authority
CN
China
Prior art keywords
green alga
active peptide
preparation
homogeneity
liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201811629177.2A
Other languages
English (en)
Inventor
王鹏
单俊伟
台文静
王海华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
QINGDAO SEAWIN BIOTECH GROUP Co Ltd
Original Assignee
QINGDAO SEAWIN BIOTECH GROUP Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by QINGDAO SEAWIN BIOTECH GROUP Co Ltd filed Critical QINGDAO SEAWIN BIOTECH GROUP Co Ltd
Priority to CN201811629177.2A priority Critical patent/CN109536556A/zh
Publication of CN109536556A publication Critical patent/CN109536556A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/10—Process efficiency

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种均一性绿藻活性肽的制备方法，属于天然活性物质提取技术领域。本发明制备绿藻活性肽包括以下步骤：(1)采用绿藻浒苔粉为原料，对温度、固液比、温度、pH等关键工艺参数进行控制，通过多级逆流提取技术提取绿藻蛋白；(2)将上述提取液采用复合蛋白酶进行酶解得酶解液；(3)将上述得到的酶解液采用超滤膜纯化浓缩，高温灭酶，得到海藻活性肽液体；(4)通过喷雾干燥得到绿藻活性肽粉末。本发明的一种绿藻活性肽的制备方法，通过建立多级逆流提取‑酶解膜分离集成工艺，提取率高、可连续生产、活性肽分子量均一可控，提取蛋白后的残渣、滤液可作为原料用于生产海藻肥。

Description

一种均一性绿藻活性肽的制备方法
技术领域
本发明属于天然活性物质提取技术领域，具体涉及一种均一性绿藻活性肽的制备方法。
背景技术
多级逆流固液提取技术是一种固相物料和溶剂相对运动方向相反、连续定量加入固相物料和溶剂并导出残留物和提取液的连续分离技术。在有效成分的提取过程中，固体与液体呈反方向流动，含有有效成分的溶剂在流出体系前与新鲜的原料接触，而经过多次提取的原料在流出体系前与新鲜的溶剂接触，从而使有效成分提取完全。与传统的提取方法相比具有显著的优点：(1)有效成分浸出速率快，产品得率高；(2)可连续工作，适用于大规模生产；(3)节省溶剂用量，浸出液浓度高，同时降低了后续处理操作；(4)可有效节约能源，产量大；(5)所需提取温度低，既适合热稳定性好的物料的提取，也适用于热敏性物质的提取。综上，将多级逆流提取工艺制备活性肽是可行的。
自2007年以来，我国黄渤海海域连年爆发浒苔绿潮，对海洋运输、海水养殖及旅游观光造成严重影响。绿藻浒苔富含多种营养成分，如多糖、蛋白、不饱和脂肪酸、维生素以及矿物质等。目前海藻提取物比较局限在海藻多糖、海藻胶类产品，经济效益及资源利用率低。海藻活性肽的研究历史较短，大部分研究应集中在大豆蛋白肽、鱼蛋白肽等，主要用于降低胆固醇、降血压以及提高人体免疫力等。海藻活性肽因其特殊的生物活性，越来越受到科学家的关注，我国对于海藻活性肽研究基础较少，工业化产品更少。专利201610488495.6公开了一种从海藻中提取低聚肽制作海藻低聚肽粉的方法，具体步骤包括将海藻洗净、晒干，粉碎，得到海藻粉；加水、磨浆；将海藻浆液加热，调节pH至3.3～4.0，加入果胶酶，搅拌酶解；加入NaOH，调节pH至7.0～9.0，加入复合蛋白酶，搅拌酶解；升温灭酶，固液分离，收集液相；采用膜过滤方法处理清液，收集透过液；将透过液进行电渗析、活性炭精制、脱炭，蒸发浓缩、干燥得海藻低聚肽粉，其所得小肽的分子量大多小于2000Da。综合分析现有技术，为了提高海藻多肽的提取率，多利用酶解或复合酶解工艺将海藻蛋白降解为小肽，大多低于2000Da，而对于抗氧化活性较好小肽定向制备缺乏精准性控制技术，产品的均一性较差，因此，建立高抗氧化活性海藻小肽(如分子量3000-4000Da)的关键技术技术，提高绿藻小肽的均一性成为本行业领域亟需解决的技术问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明目的在于提供一种均一性绿藻活性肽的制备方法，通过建立的多级逆流提取-酶解膜分离集成工艺生产绿藻活性肽，提取率高、可连续生产、活性肽分子量均一可控，抗氧化能力强；提取蛋白后的残渣、滤液可作为原料用于生产海藻肥。
为实现上述目的，本发明采用如下技术手段：
本发明所述的一种均一性绿藻活性肽的制备方法，其具体包括以下步骤：
(1)以绿藻粉为原料，采用多级逆流提取技术，维持固液比1:5-1:10，温度40-60℃，pH9-11，提取绿藻蛋白；
(2)将上述提取液采用蛋白酶酶解3-6h，得到绿藻蛋白酶解液；
(3)将上述酶解液通过分子量为3KDa和4KDa的超滤膜，得浓缩液并高温灭酶；
(4)将酶解液进行喷雾干燥，控制喷雾干燥后活性肽的水分含量≦10％，即得到绿藻活性肽粉末，其中喷雾干燥的进风温度为180-200℃，流速为2-5ml/min。
上述步骤(1)中提取溶剂为氢氧化钠弱碱溶液，并添加1％的纤维素酶、0.5％果胶酶。
优选地，上述提取绿藻蛋白采用罐组式五级逆流提取技术，维持固液比1:8，温度55℃，pH10。
上述步骤(2)中所述蛋白酶为复合蛋白酶，其添加量为绿藻质量比的3％；复合蛋白酶的组成为木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，质量比为2:1。
优选的，上述步骤(2)采用复合蛋白酶酶解4h，分子量趋于稳定，采用超滤膜分离后，可以提高多肽均一稳定性。
优选地，所述步骤(3)中将绿藻蛋白酶解液加热至90℃保温15min灭酶灭菌。
本发明申请保护按照上述制备方法制备得到的绿藻活性肽。小肽含量为90％以上，分子量3-4KDa。
本发明与现有技术相比，其优势在于：
1)采用多级逆流提取-酶解膜分离集成工艺，产品得率高可达90％以上，与多糖分离率达95％以上，可连续工作，分子量均一可控，均一度高；
2)与现有技术不同的是，提取过程采用罐组式多级逆流提取技术，提取溶剂中加入一定量的纤维素酶和果胶酶，有效成分浸出速率快，产品得率高，可节省溶剂用量，可连续工作，适合大规模生产；
3)采用木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶复合酶法制备，反应条件温和，酶解过程易于控制，提取蛋白后的残渣、滤液可作为原料用于生产海藻肥，对环境友好；
4)本发明通过建立多级逆流提取-酶解膜分离集成工艺技术生产绿藻活性肽，克服了现有技术中为了提高绿藻多肽提取率而彻底降解多肽的技术弊端，本申请既实现了绿藻多肽的高提取率，而且得到了分子量均一性强、功能活性好的绿藻多肽。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细的说明。
实施例1浒苔活性肽的制备
一种浒苔活性肽的制备方法，其具体包括以下步骤：
(1)采用浒苔粉为原料，采用罐组式5级逆流提取技术，维持固液比1:8，温度55℃，pH10，提取绿藻蛋白；提取溶剂为氢氧化钠弱碱溶液，并添加1％的纤维素酶、0.5％果胶酶；(2)将上述蛋白液采用木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶复合酶解4h，得到浒苔蛋白酶解液；上述复合酶添加量为绿藻质量比的3％，其中木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，质量比为2:1；
(3)将上述提取液通过分子量为3KDa和4KDa的超滤膜，得浓缩液，加热至90℃保温15min灭酶；
(4)将酶解液进行喷雾干燥，控制喷雾干燥后活性肽的水分含量≦10％，即得到浒苔活性肽粉末，其中喷雾干燥的进风温度为200℃，流速为3ml/min；
经检测，本实施例所制得的浒苔活性肽中，提取率为92.4％，酶解率为97.2％，小肽含量达95％以上，分子量为3.25KDa。
实施例2石莼活性肽的制备方法
一种石莼活性肽的制备方法，其具体包括以下步骤：
(1)采用石莼粉为原料，采用罐组式5级逆流提取技术，维持固液比1:8，温度55℃，pH10，提取绿藻蛋白；提取溶剂为氢氧化钠弱碱溶液，并添加1％的纤维素酶、0.5％果胶酶；
(2)将上述蛋白液采用木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶复合酶解4h，得到石莼蛋白酶解液；上述复合酶添加量为绿藻质量比的3％，其中木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，质量比为2:1；
(3)将上述酶解液通过分子量为3KDa和4KDa的超滤膜，得浓缩液，加热至90℃保温15min灭酶；
(4)将酶解液进行喷雾干燥，控制喷雾干燥后活性肽的水分含量≦10％，即得到石莼活性肽粉末，其中喷雾干燥的进风温度为200℃，流速为3ml/min；
经检测，本实施例所制得的石莼活性肽中，提取率为93.7％，酶解率为97.8％，小肽含量达95％以上，分子量为3.41KDa。
实施例3活性肽抗氧化能力试验
将实施例1、2中所制备得到的绿藻活性肽作为抗氧化剂与抗坏血酸进行对比试验，测定其清除DPPH、ABTS、羟自由基能力，试验结果见表1：
表1绿藻活性肽抗氧化活性评价
由上表可知，将实施例1、2所制备得到的绿藻活性肽作为抗氧化剂用于实施例3的实验，表明本发明绿藻活性肽能有效的清除DPPH、ABTS、羟自由基，具有明显的抗氧化活性。
实施例4不同制备工艺对绿藻活性肽提取率的影响
进行不同制备工艺对绿藻活性肽提取率及抗氧化活性的影响。其中对照组不经过复合蛋白酶解直接进行膜过滤、喷雾干燥，其余工艺同实施例1；对照实施例1采用木瓜蛋白酶单一酶解，其余工艺条件同实施例1；对照实施例2采用枯草杆菌蛋白酶单一酶解，其余工艺条件同实施例1；实验结果如表2所示：
表2不同制备工艺对绿藻活性肽提取率的影响
组别 实施例1 对照组 对照实施例1 对照实施例2
提取率(％) 92.4 28.3 68.3 42.7
由表2可知本申请采用的复合酶解显著提升了绿藻多肽的提取率，说明木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶具有显著的协同增效作用。此外，在本发明创造过程中试验结果表明木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的配比对活性肽的提取率和抗氧化活性均具有显著的影响(p<0.01)。
以上实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对被发明进行了详细的说明，但对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而对这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.一种均一性绿藻活性肽的制备方法，其特征在于具体包括以下步骤：
(1)以绿藻粉为原料，采用多级逆流提取技术，维持固液比1:5-1:10，温度40-60℃，pH9-11，提取绿藻蛋白；
(2)将上述提取液采用蛋白酶酶解3-6h，得到绿藻蛋白酶解液；
(3)将上述酶解液通过分子量为3KDa和4KDa的超滤膜，得浓缩液并高温灭酶；
(4)将酶解液进行喷雾干燥，控制喷雾干燥后活性肽的水分含量≦10％，即得到绿藻活性肽粉末，其中喷雾干燥的进风温度为180-200℃，流速为2-5ml/min。
2.根据权利要求1所述的一种均一性绿藻活性肽的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中多级逆流提取的溶剂为氢氧化钠弱碱溶液，并添加1％的纤维素酶、0.5％果胶酶。
3.根据权利要求1所述的一种均一性绿藻活性肽的制备方法，其特征在于所述多级逆流提取绿藻蛋白采用罐组式五级逆流提取技术，维持固液比1:8，温度55℃，pH10。
4.根据权利要求1所述的一种均一性绿藻活性肽的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中所述蛋白酶为复合蛋白酶，其添加量为绿藻质量比的3％；复合蛋白酶的组成为木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶，质量比为2:1。
5.根据权利要求1所述的一种均一性绿藻活性肽的制备方法，其特征在于所述步骤(2)采用复合蛋白酶酶解4h。
6.根据权利要求1所述的一种均一性绿藻活性肽的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中将绿藻蛋白酶解液加热至90℃保温15min灭酶灭菌。
7.按权利要求1-6所述制备方法制备得到的绿藻活性肽，小肽含量为90％以上，分子量3-4KDa。
CN201811629177.2A 2018-12-28 2018-12-28 一种均一性绿藻活性肽的制备方法 Withdrawn CN109536556A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811629177.2A CN109536556A (zh) 2018-12-28 2018-12-28 一种均一性绿藻活性肽的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811629177.2A CN109536556A (zh) 2018-12-28 2018-12-28 一种均一性绿藻活性肽的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109536556A true CN109536556A (zh) 2019-03-29

Family

ID=65830925

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811629177.2A Withdrawn CN109536556A (zh) 2018-12-28 2018-12-28 一种均一性绿藻活性肽的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109536556A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110106218A (zh) * 2019-04-24 2019-08-09 北海生巴达生物科技有限公司 一种藻类小分子肽提取方法
CN114395607A (zh) * 2022-03-28 2022-04-26 卡力(烟台)农业发展有限公司 一种海藻低聚肽粉及其制备方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110106218A (zh) * 2019-04-24 2019-08-09 北海生巴达生物科技有限公司 一种藻类小分子肽提取方法
CN114395607A (zh) * 2022-03-28 2022-04-26 卡力(烟台)农业发展有限公司 一种海藻低聚肽粉及其制备方法
CN114395607B (zh) * 2022-03-28 2022-07-12 卡力(烟台)农业发展有限公司 一种海藻低聚肽粉及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107858393B (zh) 一种从核桃粕中提取蛋白多肽的方法
CN103755824B (zh) 一种酶法提取海藻中岩藻多糖的工艺
CN109504719A (zh) 一种提高谷氨酸产酸率及提取率的方法
CN101870722B (zh) 两级泡沫分离法浓缩大豆蛋白废水中蛋白质工艺
CN105063153B (zh) 一种食品级低盐分海洋鱼低聚肽粉的制备方法
CN103315126B (zh) 一种低分子量鱼水解蛋白粉的制备方法
CN103392902B (zh) 利用花生粕制备强抗氧化肽的方法
CN103073652B (zh) 一种螺旋藻多糖的提取方法
CN101869169B (zh) 以鱼下脚料发酵耦合膜技术制备鱼低聚肽的方法
CN102228125B (zh) 海藻活性肽的制备方法
CN103627768A (zh) 鱼皮胶原蛋白生物活性小肽及其制备方法
CN104757274A (zh) 玉米浸泡水综合利用制取饲用蛋白粉及发酵营养促进剂的方法
CN107034258A (zh) 一种昆虫蛋白质提取方法
CN109536556A (zh) 一种均一性绿藻活性肽的制备方法
CN115260334B (zh) 一种桑叶多糖的复合提取工艺
CN111642730B (zh) 一种酱油渣循环洗脱利用方法、产物及设备
CN109628513A (zh) 一种氨基酸发酵培养基及其制备方法
CN105441520A (zh) 一种以米渣为原料酶膜联合制备大米多肽的方法
CN109527196B (zh) 一种提高大豆蛋白酶解效率和产率的方法
CN117466993B (zh) 深海鱼胶原蛋白肽的膜过滤提纯方法
CN105154505B (zh) 一种饲料级海洋鱼低聚肽粉的制备方法
CN104472848A (zh) 一种基于模拟消化制备海洋低值贝类低聚肽的方法
CN109956950A (zh) 一种从猪血中提取血红蛋白肽和血红素的联产工艺
CN105362300A (zh) 一种利用海藻制备富含海藻多酚浓缩液的方法
CN108624643B (zh) 以微拟球藻渣为原料制备高附加值寡肽的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20190329