CN109517023B - 一种三金制剂化学成分的分离纯化方法 - Google Patents

一种三金制剂化学成分的分离纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109517023B
CN109517023B CN201811178834.6A CN201811178834A CN109517023B CN 109517023 B CN109517023 B CN 109517023B CN 201811178834 A CN201811178834 A CN 201811178834A CN 109517023 B CN109517023 B CN 109517023B
Authority
CN
China
Prior art keywords
elution
methanol
components
acid
purifying
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811178834.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109517023A (zh
Inventor
邹节明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guilin Sanjin Pharmaceuticals Co Ltd
Original Assignee
Guilin Sanjin Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guilin Sanjin Pharmaceuticals Co Ltd filed Critical Guilin Sanjin Pharmaceuticals Co Ltd
Priority to CN201811178834.6A priority Critical patent/CN109517023B/zh
Publication of CN109517023A publication Critical patent/CN109517023A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109517023B publication Critical patent/CN109517023B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/78—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/93—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with a ring other than six-membered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/28—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only
    • C07D311/30—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only not hydrogenated in the hetero ring, e.g. flavones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/28—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only
    • C07D311/32—2,3-Dihydro derivatives, e.g. flavanones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/40—Separation, e.g. from natural material; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，属于中药质量控制技术领域，包括步骤：(1)将三金制剂药物粉末采用有机溶剂进行提取，滤过，减压浓缩制得浸膏；(2)将浸膏溶解，溶液依次采用石油醚、正丁醇进行萃取，获得正丁醇萃取浸膏；(3)取正丁醇萃取浸膏进行硅胶柱层析，采用二氯甲烷‑甲醇***进行梯度洗脱，收集各洗脱流分，合并划分为多组粗洗脱部分；(4)将各组的粗洗脱部分依次利用反相色谱柱层析、葡聚糖凝胶柱层析以及高效液相制备分离纯化，获得各个化学成分。该方法具有操作简单易行，可重复性高，对设备要求低等优点，可以明确三金制剂中的化学成分，有利于确定质量控制方法，控制产品质量。

Description

一种三金制剂化学成分的分离纯化方法
技术领域
本发明属于中药质量控制技术领域，具体地说，涉及一种三金制剂化学成分的分离纯化方法。
背景技术
三金制剂是桂林三金药业股份有限公司生产的三金片系列产品，包括有三金片、三金胶囊和三金颗粒，其中三金片系自2000年版以来，《中国药典》数个版本一部均有收录的品种，是一种清热剂。三金片为糖衣片或薄膜衣片，具有清热解毒，利湿通淋，益肾功效。主治下焦湿热所致的热淋、小便短赤、淋沥涩痛、尿急频数；急慢性肾盂肾炎、膀胱炎、***见上述证候者；慢性非细菌性***炎肾虚湿热下注证。
三金制剂由五味中药制成，分别为金樱根、菝葜、羊开口、金沙藤和积雪草。其中，菝葜祛风湿，利小便，消肿痛，羊开口清热利尿为君药；积雪草、金沙藤清热利湿为臣药；金樱根固精涩肠为佐使。全方配伍，共奏利尿通淋，清热解毒之效。
虽然针对三金制剂处方药味，开展过相关化学成分研究，但三金制剂作为中药复方制剂，其发挥药效的物质基础是复方制剂方中的化学成分，目前还没有三金制剂化学成分的可靠的分析，其中的有效的成分也有待进一步的发现。三金制剂浸膏粉为三金制剂的原料，通过分析三金制剂浸膏粉和三金制剂成品中的化学成分，并进行对比，对于寻找三金制剂的起效物质有着重大意义。
有鉴于此特提出本发明。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种三金制剂化学成分的分离纯化方法。本发明从三金制剂中的分离鉴定了多种化合物，可以明确三金制剂中的化学成分，有利于确定质量控制方法，控制产品质量。
为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：
本发明的目的是提供一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，该分离纯化方法包括以下步骤：
(1)将三金制剂药物粉末采用有机溶剂进行提取，滤过，减压浓缩制得浸膏；
(2)将浸膏溶解，溶液依次采用石油醚、正丁醇进行萃取，获得正丁醇萃取浸膏；
(3)取正丁醇萃取浸膏进行硅胶柱层析，采用二氯甲烷-甲醇***进行梯度洗脱，收集各洗脱流分，合并划分为多组粗洗脱部分；
(4)将各组的粗洗脱部分依次利用反相色谱柱层析、葡聚糖凝胶柱层析以及高效液相制备分离纯化，获得各个化学成分。
本发明中的三金制剂可以包括任何剂型，以及可以制备三金制剂的原料膏状物或者粉末等。优选的，三金制剂包括以下剂型中的一种或几种：片剂、胶囊剂、颗粒剂、凝胶剂、膜剂、浸膏剂、丸剂、粉针剂、栓剂。具体的，至少包括分散片、三金颗粒、三金胶囊等。
上述分离纯化方法中，步骤(1)中，所述的有机溶剂包括体积分数为10-100％的甲醇溶液或体积分数为10-100％的乙醇溶液；
优选的，所述的有机溶剂为体积分数为60-95％乙醇。
进一步的，提取方式为常温浸提、超声提取或回流提取。
上述分离纯化方法中，步骤(2)中，将浸膏用水溶解，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，获得正丁醇萃取浸膏；其中，水溶液与石油醚的体积比为1:1～1:5；水层与正丁醇的体积比为1:1～1:5；
优选的，水溶液与石油醚的体积比为1:1～1:3；水层与正丁醇的体积比为1:1～1:2，该比例下化合物的提取率更好。
更优选的，水溶液与石油醚的体积比为1:3；水层与正丁醇的体积比为1:2，该比例下，提取效率最高。
上述分离纯化方法中，步骤(3)中，采用二氯甲烷-甲醇***对萃取物进行梯度洗脱，二氯甲烷和甲醇的体积比为100:1-5:1，分段收集获得130份组分，通过TLC和HPLC-UV分析检测，筛选合并后分为五组粗洗脱部分，分别为组分6-9，组分20-36，组分37-51，组分66-95，组分118-130；
优选的，采用的洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1进行洗脱。
上述分离纯化方法中，步骤(4)中，进行反相色谱柱层析时，层析柱为ODS-C18，洗脱溶剂为体积分数为10％-90％的甲醇水溶液，进行梯度洗脱；洗脱溶剂的用量为2～10个柱体积；
优选的，采用的洗脱梯度中，分别依次以甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱。
进一步的方案，进行反相色谱柱层析时，组分6-9和组分20-36采用体积分数为30％-90％的甲醇水溶液进行梯度洗脱；组分37-51、组分66-95以及组分118-130采用体积分数为10％-90％的甲醇水溶液进行梯度洗脱。不同大组的成分采用不同的洗脱梯度进行洗脱，洗脱效果更好。
进一步的方案，步骤(4)中，进行葡聚糖凝胶柱层析时，层析柱为Sephades LH-20，用纯甲醇进行洗脱，洗脱剂用量为2～10个柱体积。
进一步的方案，步骤(4)中，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，按4％～80％甲醇梯度进行洗脱；
优选的，采用的洗脱梯度中，分别依次以甲醇的体积分数为80％、65％、50％、35％、20％、4％进行洗脱。
进一步的方案，高效液相制备的洗脱条件为：0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；
15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；
25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；
35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；
90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。
进一步的方案，从组分6-9分离纯化得到SJP-8P、SJP-9P，分别为丁香脂素、树脂酚；
从组分20-36中分离纯化得到三金制剂指标性成分SJP-5P、SJP-6P；分别为二氢山柰酚、山柰酚；
从组分37-51中分离纯化得到三金制剂指标性成分SJP-1P、SJP-2P、SJP-3P、SJP-4P、SJP-7P；分别为3,4-二羟基苯甲醛、4-羟基苯甲酸、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸、香豆酸；
从组分66-95中分离纯化得到三金制剂指标性成分SJP-10P、SJP-11P、SJP-12P、SJP-13P、SJP-14P、SJP-15P、SJP-18P、PSJP-19P、SJP-20P；分别为三金制剂指标性成分新的三萜皂苷化合物、2-糠酸、3-羟基-2-(4-羟基-5-甲氧基苯基)丙酸、水杨酸、槲皮素、茋木脂体、原茶儿酸、3,4-二羟基本病烯酸、3’-Di-O-甲基鞣花酸-4’-O--L-吡喃鼠李糖苷；
从组分118-130中分离纯化得到三金制剂指标性成分SJP-21P、SJP-22P；分别为没食子酸、山柰酚-3-葡萄糖苷。
更具体的方案，本发明从三金制剂中共分离纯化得到22个化合物，发现以小分子有机酸类为其主要成分，此外还包括黄酮类成分、木脂素类成分，这些化合物的发现有利于明确该成分与成品的药效作用相关性，有利于建立相应的质量控制标准。
22种化合物具体如下，以SJP-1P到SJP-22P等进行标记：
Figure BDA0001824483010000031
SJP-1P，为3,4-二羟基苯甲醛，其结构式如式1所示。3,4-二羟基苯甲醛即为原儿茶醛，是一种重要的医药中间体，可用于合成多种抗菌素和消炎药物。
Figure BDA0001824483010000041
SJP-2P，为4-羟基苯甲酸，其结构式如式2中所示。4-羟基苯甲酸是无色结晶粉末。易溶于乙醇，溶于***和丙酮，微溶于水和氯仿，几乎不溶于二硫化碳，具有杀菌作用。
SJP-3P，为3-甲氧基-4-羟基苯甲酸，其结构式如式2中所示。
SJP-4P，为4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸，其结构式如式2中所示。4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸即为丁香酸，有抗细菌和真菌的作用。
SJP-13P，为水杨酸，其结构式如式2中所示。水杨酸是一种脂溶性的有机酸，用在化妆品等产品中具有防腐杀菌作用外，还有祛除汗臭、止痒消肿、止痛消炎等功能。
SJP-18P，为原茶儿酸，其结构式如式2中所示。原茶儿酸具有抗菌作用，体外试验时对绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、产碱杆菌及枯草杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑菌作用。亦有祛痰、平喘作用。
SJP-21P，为没食子酸，其结构式如式2中所示。没食子酸具有抗炎、抗突变、抗氧化、抗自由基等多种生物学活性；同时没食子酸具有抗肿瘤作用，可以抑制肥大细胞瘤的转移，从而延长生存期；也是相对适宜的杀锥虫候选药物；对肝脏具有保护作用，可以抵抗四氯化碳诱导的肝脏生理和生化的转变；可以通过抑制内皮NO的生成诱导血管内皮依赖性收缩和对内皮依赖性松弛。
Figure BDA0001824483010000042
SJP-5P，为二氢山柰酚，其结构式如式3中所示。二氢山柰酚具有抗炎，抗氧化等作用。
Figure BDA0001824483010000051
SJP-6P，为山柰酚，其结构式如式4中所示。山柰酚具有抗癌，抗炎，抗氧化，解痉挛等作用。
SJP-14P，为槲皮素，其结构式如式4中所示。槲皮素又名栎精，槲皮黄素，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。槲皮素作为药品，具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。用于治疗慢性支气管炎。对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。
SJP-22P，为山柰酚-3-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-b-D-glucopyranoside)，其结构式如式4中所示。山柰酚-3-葡萄糖苷，又叫紫云英苷、黄芪苷、莰非醇-3-O-葡萄糖苷、百蕊草素Ⅱ，能够调节体内血糖，增强肌体免疫力，促进生长，提高肌体抗氧化能力。
Figure BDA0001824483010000052
SJP-7P，为香豆酸，其结构式如式5中所示。香豆酸具有抗氧化活性和抗菌活性，对金黄色葡萄球菌等具有良好的抑制作用。
Figure BDA0001824483010000053
SJP-8P，为丁香脂素，其结构式如式6中所示。丁香脂素及其糖苷具有抗氧化、抗抑郁、抗胃溃疡、抗炎、促进神经元生长、刺激T细胞和B细胞的增殖、选择性细胞毒作用,并对多种酶有抑制作用。
Figure BDA0001824483010000061
SJP-9P，为树脂酚((+)-Lirioresinol A)，其结构式如式7中所示。
Figure BDA0001824483010000062
SJP-11P，为2-糠酸，其结构式如式8中所示。2-糠酸用作有机合成中间体，以转化为酯、酰氯、酸酐、酰胺等衍生物，广泛用作涂料添加剂、医药、香料等的中间体。
Figure BDA0001824483010000063
SJP-10P，为一种新的三萜皂苷化合物，其结构式如式9中所示，英文名称：
3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranoside；分子式为C35H52O10。
Figure BDA0001824483010000064
SJP-12P，为3-羟基-2-(4-羟基-5-甲氧基苯基)丙酸，其结构式如式10中所示。
Figure BDA0001824483010000071
SJP-15P，为cararosin A(茋木脂体)，其结构式如式11中所示。
Figure BDA0001824483010000072
SJP-20P，为3’-Di-O-methylellagic Acid-4’-O--L-rhamnopyranoside(3’-Di-O-甲基鞣花酸-4’-O--L-吡喃鼠李糖苷)，其结构式如式12中所示。
采用上述技术方案后，本发明与现有技术相比具有以下有益效果：
1、本发明首次以三金制剂作为一个整体，作为研究对象进行研究，从三金制剂中分离鉴定了22个化合物，明确了三金制剂中化学成分，有利于三金制剂药物的质量检测及质量标准的完善。
2、本发明采用同样的方法对三金制剂不同具体产品及其干膏粉进行了分离纯化，该方法操作简单易行，可重复性高，对设备要求低，且经试验发现，三金制剂的不同产品的干膏粉及其产品药粉中含有的化学成分相同，都可以分离纯化得到22个相同的化合物，表明干膏粉和成品药粉当中化学成分相同。
3、本发明明确了三金制剂的化学成分，分析对比了原料与成品的化学成分，且获得了一个新的三萜类化合物，对寻找三金制剂的起效成分有重要意义。
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的描述。
附图说明
附图作为本发明的一部分，用来提供对本发明的进一步的理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，但不构成对本发明的不当限定。显然，下面描述中的附图仅仅是一些实施例，对于本领域普通技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。在附图中：
图1是本发明的三金制剂提取分离纯化流程图；
图2是本发明新的三萜皂苷化合物的1H-NMR谱图；
图3是本发明新的三萜皂苷化合物的13C-NMR谱图；
图4是本发明新的三萜皂苷化合物的MS谱图1；
图5是本发明新的三萜皂苷化合物的MS谱图2；
图6是本发明新的三萜皂苷化合物的HPLC纯度检查谱图；
图7是本发明新的三萜皂苷化合物的UV谱图；
图8是本发明新的三萜皂苷化合物的IR谱图。
需要说明的是，这些附图和文字描述并不旨在以任何方式限制本发明的构思范围，而是通过参考特定实施例为本领域技术人员说明本发明的概念。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实验材料与仪器
三金片干膏粉由桂林三金药业股份有限公司提供。柱色谱硅胶(100～200目，200～300目)和薄层色谱硅胶GF254(青岛海洋化工厂，中国)；ODS-C18柱(20mm×250mm,5μm)(YMC，日本)；Sephadex LH-20(法玛西亚生物技术，瑞典)；Bruker AV-500M和AV-400M型核磁共振仪(Bruker公司，德国)；LC-20A制备液相色谱仪(日本岛津公司，日本)；所用试剂均为分析纯。
化合物结构鉴定核磁共振(氢谱、碳谱)、质谱，红外、紫外光谱均由广西师范大学药用资源化学与药物分子工程国家重点实验室负责测定。
实施例1
(1)将三金片干膏粉1.5kg用95％乙醇浸泡超声提取，滤过，减压浓缩得浸膏，获得浸膏提取物。
(2)将浸膏提取物用水溶解，滤过，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，回收水层；水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；其中，溶液与石油醚的体积比为1:1；将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:1。
(3)取正丁醇萃取浸膏100g进行硅胶层析柱，采用二氯甲烷-甲醇***对萃取物进行梯度洗脱，洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1进行洗脱，分段收集样品，收集获得130组组分，采用TLC分析检测，根据TLC检测结果分为五大组粗洗脱部分(采用TLC鉴别分析时主要是根据薄层板上面点的数量和位置来确定)，分别为组分37-51，组分20-36，组分6-9，组分66-95，组分118-130。
(4)组分6-9进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得6份组分；将3-6份组分合并回收，命名为小组1；
组分20-36进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得7份组分；将2-5份组分合并回收，命名为小组2；
组分37-51进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得10份组分；将4-8份组分合并回收，命名为小组3；
组分66-95进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得11份组分；将4-7份组分合并回收，命名为小组4；
组分118-130进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得5份组分；将1-3份组分合并回收，命名为小组5；
(5)将步骤(4)中小组1到小组5的成分分别进行葡聚糖凝胶柱层析，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积，每组依次收集获得其对应的多份洗脱收集液；
(6)将步骤(5)中每组依次收集获得多份洗脱收集液分别进行高效液相制备，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，洗脱条件为：
0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；
15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；
25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；
35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；
90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。
结果如图1所示：从来自组分6-9的小组1的洗脱收集液中，分离纯化得到了SJP-8P、SJP-9P；分别为丁香脂素12mg、树脂酚5mg；
从来自组分20-36的小组2的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-5P、SJP-6P；分别为二氢山柰酚13mg、山柰酚9mg；
从来自组分37-51的小组3的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-1P、SJP-2P、SJP-3P、SJP-4P、SJP-7P；分别为3,4-二羟基苯甲醛135mg、4-羟基苯甲酸110.4mg、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸8.7mg、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸16mg、香豆酸20mg；
从来自组分66-95的小组4的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-10P、SJP-11P、SJP-12P、SJP-13P、SJP-14P、SJP-15P、SJP-18P、PSJP-19P、SJP-20P；分别为三金制剂指标性成分新的三萜皂苷化合物3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O--β-D-glucopyranoside 7.8mg、2-糠酸45mg、3-羟基-2-(4-羟基-5-甲氧基苯基)丙酸9mg、水杨酸6mg、槲皮素13.5mg、茋木脂体6.8mg、原茶儿酸108mg、3,4-二羟基本病烯酸9mg、3’-Di-O-甲基鞣花酸-4’-O--L-吡喃鼠李糖苷11.5mg；
从来自组分118-130的小组5的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-21P、SJP-22P；分别为没食子酸120mg、山柰酚-3-葡萄糖苷116mg。
实施例2
(1)将三金片粉末1.5kg用60％乙醇浸泡超声提取，滤过，减压浓缩得浸膏，获得浸膏提取物。
(2)将浸膏提取物用水溶解，滤过，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，回收水层；水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；其中，水溶液与石油醚的体积比为1:3；将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:2。
(3)取正丁醇萃取浸膏100g进行硅胶层析柱，采用二氯甲烷-甲醇***对萃取物进行梯度洗脱，洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为100:1、80:1、50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1的洗脱溶剂进行洗脱，分段收集样品，收集获得130种组分，采用TLC分析检测，根据TLC检测结果分为五大组粗洗脱部分，分别为组分37-51，组分20-36，组分6-9，组分66-95，组分118-130。
(4)组分6-9进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得6份组分；将3-6份组分合并回收，命名为小组1；
组分20-36进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得7份组分；将2-5份组分合并回收，命名为小组2；
组分37-51进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得10份组分；将4-8份组分合并回收，命名为小组3；
组分66-95进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得9份组分；将4-7份组分合并回收，命名为小组4；
组分118-130进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得5份组分；将1-3份组分合并回收，命名为小组5；
(5)将步骤(4)中小组1到小组5的成分分别进行葡聚糖凝胶柱层析，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为6个柱体积，每组依次收集获得其对应的多份洗脱收集液；
(6)将步骤(5)中每组依次收集获得多份洗脱收集液分别进行高效液相制备，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，洗脱条件为：
0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；
15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；
25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；
35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；
90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。
结果：从来自组分6-9的小组1的洗脱收集液中，分离纯化得到了SJP-8P、SJP-9P；分别为丁香脂素15mg、树脂酚4mg；
从来自组分20-36的小组2的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-5P、SJP-6P；分别为二氢山柰酚11mg、山柰酚12mg；
从来自组分37-51的小组3的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-1P、SJP-2P、SJP-3P、SJP-4P、SJP-7P；分别为3,4-二羟基苯甲醛141mg、4-羟基苯甲酸108.1mg、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸6.3mg、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸21mg、香豆酸17mg；
从来自组分66-95的小组4的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-10P、SJP-11P、SJP-12P、SJP-13P、SJP-14P、SJP-15P、SJP-18P、PSJP-19P、SJP-20P；分别为三金制剂指标性成分新的三萜皂苷化合物3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O--β-D-glucopyranoside 7.5mg、2-糠酸39mg、3-羟基-2-(4-羟基-5-甲氧基苯基)丙酸12mg、水杨酸4mg、槲皮素15mg、茋木脂体8mg、原茶儿酸99mg、3,4-二羟基本病烯酸12mg、3’-Di-O-甲基鞣花酸-4’-O--L-吡喃鼠李糖苷14mg；
从来自组分118-130的小组5的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-21P、SJP-22P；分别为没食子酸114mg、山柰酚-3-葡萄糖苷120mg。
实施例3
(1)将三金片胶囊药物粉末1.5kg用100％甲醇浸泡超声提取，滤过，减压浓缩得浸膏，获得浸膏提取物。
(2)将浸膏提取物用水溶解，滤过，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，回收水层；水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；其中，水溶液与石油醚的体积比为1:4；将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:1。
(3)取正丁醇萃取浸膏100g进行硅胶层析柱，采用二氯甲烷-甲醇***对萃取物进行梯度洗脱，洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为80:1、50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1的洗脱溶剂进行洗脱，分段收集样品，收集获得130种组分，采用TLC分析检测，根据TLC检测结果分为五大组粗洗脱部分，分别为组分37-51，组分20-36，组分6-9，组分66-95，组分118-130。
(4)组分6-9进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得6份组分；将3-6份组分合并回收，命名为小组1；
组分20-36进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得7份组分；将2-5份组分合并回收，命名为小组2；
组分37-51进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得10份组分；将4-8份组分合并回收，命名为小组3；
组分66-95进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得9份组分；将4-7份组分合并回收，命名为小组4；
组分118-130进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、25％、50％、75％、95％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得5份组分；将1-3份组分合并回收，命名为小组5；
(5)将步骤(4)中小组1到小组5的成分分别进行葡聚糖凝胶柱层析，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积，每组依次收集获得其对应的多份洗脱收集液；
(6)将步骤(5)中每组依次收集获得多份洗脱收集液分别进行高效液相制备，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，洗脱条件为：
0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；
15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；
25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；
35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；
90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。
结果：从来自组分6-9的小组1的洗脱收集液中，分离纯化得到了SJP-8P、SJP-9P；分别为丁香脂素11mg、树脂酚7mg；
从来自组分20-36的小组2的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-5P、SJP-6P；分别为二氢山柰酚14mg、山柰酚9mg；
从来自组分37-51的小组3的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-1P、SJP-2P、SJP-3P、SJP-4P、SJP-7P；分别为3,4-二羟基苯甲醛150mg、4-羟基苯甲酸114mg、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸5mg、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸28mg、香豆酸10mg；
从来自组分66-95的小组4的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-10P、SJP-11P、SJP-12P、SJP-13P、SJP-14P、SJP-15P、SJP-18P、PSJP-19P、SJP-20P；分别为三金制剂指标性成分新的三萜皂苷化合物3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O--β-D-glucopyranoside 6.6mg、2-糠酸34mg、3-羟基-2-(4-羟基-5-甲氧基苯基)丙酸17mg、水杨酸6mg、槲皮素19mg、茋木脂体5mg、原茶儿酸95mg、3,4-二羟基本病烯酸17mg、3’-Di-O-甲基鞣花酸-4’-O--L-吡喃鼠李糖苷16mg；
从来自组分118-130的小组5的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-21P、SJP-22P；分别为没食子酸114mg、山柰酚-3-葡萄糖苷104mg。
实施例4
(1)将三金颗粒干膏粉1.5kg用100％乙醇浸泡超声提取，滤过，减压浓缩得浸膏，获得浸膏提取物。
(2)将浸膏提取物用水溶解，滤过，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，回收水层；水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；其中，溶液与石油醚的体积比为1:2；将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:3。
(3)取正丁醇萃取浸膏100g进行硅胶层析柱，采用二氯甲烷-甲醇***对萃取物进行梯度洗脱，洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1的洗脱溶剂进行洗脱，分段收集样品，收集获得130组组分，采用TLC分析检测，根据TLC检测结果分为五大组粗洗脱部分，分别为组分37-51，组分20-36，组分6-9，组分66-95，组分118-130。
(4)组分6-9进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得6份组分；将3-6份组分合并回收，命名为小组1；
组分20-36进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得7份组分；将2-5份组分合并回收，命名为小组2；
组分37-51进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得10份组分；将4-8份组分合并回收，命名为小组3；
组分66-95进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得9份组分；将4-7份组分合并回收，命名为小组4；
组分118-130进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得5份组分；将1-3份组分合并回收，命名为小组5；
(5)将步骤(4)中小组1到小组5的成分分别进行葡聚糖凝胶柱层析，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积，每组依次收集获得其对应的多份洗脱收集液；
(6)将步骤(5)中每组依次收集获得多份洗脱收集液分别进行高效液相制备，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，洗脱条件为：
0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；
15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；
25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；
35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；
90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。
结果：从来自组分6-9的小组1的洗脱收集液中，分离纯化得到了SJP-8P、SJP-9P；分别为丁香脂素16mg、树脂酚6mg；
从来自组分20-36的小组2的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-5P、SJP-6P；分别为二氢山柰酚11mg、山柰酚12mg；
从来自组分37-51的小组3的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-1P、SJP-2P、SJP-3P、SJP-4P、SJP-7P；分别为3,4-二羟基苯甲醛150mg、4-羟基苯甲酸116mg、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸7mg、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸20mg、香豆酸11mg；
从来自组分66-95的小组4的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-10P、SJP-11P、SJP-12P、SJP-13P、SJP-14P、SJP-15P、SJP-18P、PSJP-19P、SJP-20P；分别为三金制剂指标性成分新的三萜皂苷化合物3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O--β-D-glucopyranoside 10.9mg、2-糠酸38mg、3-羟基-2-(4-羟基-5-甲氧基苯基)丙酸14mg、水杨酸9mg、槲皮素12mg、茋木脂体7mg、原茶儿酸98mg、3,4-二羟基本病烯酸12mg、3’-Di-O-甲基鞣花酸-4’-O--L-吡喃鼠李糖苷19mg；
从来自组分118-130的小组5的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-21P、SJP-22P；分别为没食子酸105mg、山柰酚-3-葡萄糖苷101mg。
实施例5
(1)将三金粉针剂粉末1.5kg用100％乙醇浸泡超声提取，滤过，减压浓缩得浸膏，获得浸膏提取物。
(2)将浸膏提取物用水溶解，滤过，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，回收水层；水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；其中，溶液与石油醚的体积比为1:5；将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:5。
(3)取正丁醇萃取浸膏100g进行硅胶层析柱，采用二氯甲烷-甲醇***对萃取物进行梯度洗脱，洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1进行洗脱，分段收集样品，收集获得130组组分，采用TLC分析检测，根据TLC检测结果分为五大组粗洗脱部分，分别为组分37-51，组分20-36，组分6-9，组分66-95，组分118-130。
(4)组分6-9进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得6份组分；将3-6份组分合并回收，命名为小组1；
组分20-36进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为30％、45％、60％、75％、90％进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得7份组分；将2-5份组分合并回收，命名为小组2；
组分37-51进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得10份组分；将4-8份组分合并回收，命名为小组3；
组分66-95进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得9份组分；将4-7份组分合并回收，命名为小组4；
组分118-130进行ODS-C18层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得5份组分；将1-3份组分合并回收，命名为小组5；
(5)将步骤(4)中小组1到小组5的成分分别进行葡聚糖凝胶柱层析，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积，每组依次收集获得其对应的多份洗脱收集液；
(6)将步骤(5)中每组依次收集获得多份洗脱收集液分别进行高效液相制备，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，洗脱条件为：0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；
15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；
25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；
35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；
90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。
结果：从来自组分6-9的小组1的洗脱收集液中，分离纯化得到了SJP-8P、SJP-9P；分别为丁香脂素11mg、树脂酚13mg；
从来自组分20-36的小组2的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-5P、SJP-6P；分别为二氢山柰酚14mg、山柰酚8mg；
从来自组分37-51的小组3的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-1P、SJP-2P、SJP-3P、SJP-4P、SJP-7P；分别为3,4-二羟基苯甲醛134mg、4-羟基苯甲酸109mg、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸12mg、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸24mg、香豆酸13mg；
从来自组分66-95的小组4的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-10P、SJP-11P、SJP-12P、SJP-13P、SJP-14P、SJP-15P、SJP-18P、PSJP-19P、SJP-20P；分别为三金制剂指标性成分新的三萜皂苷化合物3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O--β-D-glucopyranoside 8.9mg、2-糠酸35mg、3-羟基-2-(4-羟基-5-甲氧基苯基)丙酸15mg、水杨酸7mg、槲皮素14mg、茋木脂体8mg、原茶儿酸112mg、3,4-二羟基本病烯酸19mg、3’-Di-O-甲基鞣花酸-4’-O--L-吡喃鼠李糖苷12mg；
从来自组分118-130的小组5的洗脱收集液中，分离纯化得到了三金制剂指标性成分SJP-21P、SJP-22P；分别为没食子酸110mg、山柰酚-3-葡萄糖苷117mg。
试验例1
该试验例1对本发明实施例1所分离纯化的化合物SJP-10P的结构进行了鉴定：
实施例1分离获得的化合物SJP-10P为一种三萜皂苷化合物，英文名称：
3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranoside；
化学式为：C35H52O10。
化合物SJP-10P的HMBC相关分析如下所示：
Figure BDA0001824483010000171
化合物SJP-10P的结构和关键HMBC(→)相关结构式
化合物SJP-10P是白色无定型粉末，HRESIMS(图5)显示阴离子准分子离子峰为631.3080[M-H]-(calcd631.3482)，结合1H和13C NMR数据(表1)，确定其分子式为C35H52O10，且经计算不饱和度为10。UV谱(图7)显示在241,281andnm处有吸收峰。IR谱(图8)显示羟基(2937cm-1)，羰基(1684cm-1)吸收峰。IR谱显示羟基(3430cm-1)，羰基(1720cm-1)吸收峰。
根据1H NMR(图2)数据显示化合物SJP-10P在高场有六个单锋:δH0.68(s),0.81(s),0.85(s),0.86(s),1.35(s),1.6(s)，1个烯基：δH5.24。13C NMR和DEPT135数据显示27个信号峰，表明化合物1中应存在2个羰基：δC 193.4和δC 176.0，2个烯基：δC 143.9和δC130.6，δC122.2和δC 143.6。以及碳谱中60-95的化学位移信息可以推测化合物1应是含有一个糖基团，两个双键的齐墩果烷型的五环三萜皂苷化合物。经过仔细对照参考文献，三萜皂苷化合物与2-oxo-3β,19α-dihydroxy-olean-12-en-28-oic acidβ-D-glucopyranosyl骨架基本一致。通过分析2D NMR中HMBC谱(图3)的δH 5.23(1H，H-30)到δC 176.03(C-27)强烈的相关信号，这
证实了糖基团与C-27上O的连接。再从HMBC谱的信号H-1(δH 2.39,2.13)/C-3(δC143.9),C-4(δC 130.6)和酮羰基(δC 193.4),H-23(δH 1.75)/C-3(δC 143.9),C-4(δC130.6)这表明酮羰基位于C-2位。此外H-16(δH 3.12)与C-13，C-17和C-14，δH 3.12(δC80.2)与C-13，C-14，
C-16和C-17的相关性，说明C-15处存在一个羟基。综上所述化合物SJP-10P鉴定为3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranoside，并判定化合物10P化学结构式确定为式9：
Figure BDA0001824483010000181
该三萜皂苷化合物的1H和13CNMR数据，如表1所示。
表1化合物SJP-10P 1H和13CNMR
Figure BDA0001824483010000182
Figure BDA0001824483010000191
对其它实施例分离纯化后获得的三萜皂苷化合物的结构也进行了上述表征和鉴定，结果与上述结果相同。
试验例2
本试验例对化合物的抗炎活性进行了探索，具体方法及结果如下：
材料：
实施例1制备的三萜皂苷化合物，纯度在99％以上。
小鼠，雌雄各半，体重18～23g；Wistar大鼠，雌雄各半，130～150g。HBS-1096A酶标分析仪。
2方法
2.1急性炎症实验
取小鼠70只，随机分为7组，分别为模型组、阳性药对照组(***15mg/kg)、三萜皂苷化合物1mg/kg组、三萜皂苷化合物5mg/kg组、三萜皂苷化合物10mg/kg组、三萜皂苷化合物15mg/kg组以及、三萜皂苷化合物20mg/kg组。***用注射用生理盐水配成相应浓度，三萜皂苷化合物用0.8％羧甲基纤维素钠配成不同浓度的溶液，每日按体重对小鼠进行灌胃给药，给药体积0.3mL/10g。如此连续给药3d，末次给药后1h，每只小鼠尾静脉注射0.5％伊文斯蓝0.1mL/10g，并立即腹腔注射0.6％醋酸生理盐水溶液0.2mL/只，20min后脱颈椎处死，吸取生理盐水9mL，分3次，每次3mL，洗腹腔，轻揉腹部，吸取腹腔液，3次洗出的腹腔液合并后加生理盐水至10mL，1500r/min离心l5min，于590nm波长处测定吸光度(A)值。以A590作为各组炎症程度的指标，以t检验进行组间比较。
2.2棉球肉芽肿实验
灭菌棉球(50±2)mg/个，加入氨苄青霉素100ul/个，50℃烘干。Wistar大鼠70只，用10％水合氯醛(350mg/kg)麻醉后，消毒腹部皮肤，于两侧腹股沟部皮下分别植入2个灭菌棉球，消毒并缝合伤口，常规饲养。在植入棉球第2天，根据大鼠的体重随机分为7组，每组70只，按表2灌胃给药，连续7d。各组末次给药24h后，脱颈处死大鼠，剥取棉球及肉芽组织，剔除脂肪，于烘箱内60℃、24h烘干至恒重，称量各棉球干重，减去棉球原重即为肉芽净重。采用t检验进行组间比较，结果以(x±s)表示。
3实验结果
3.1对炎症急性时腹腔毛细血管通透性升高的抑制作用
如表2中结果所示，三萜皂苷化合物1mg/kg基本没有抑制作用，三萜皂苷化合物5mg/kg可抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性升高，对炎症急性时相的血管通透性升高有一定的抑制作用；三萜皂苷化合物10mg/kg以及15mg/kg可明显抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性升高，对炎症急性时相的血管通透性升高有显著的抑制作用，但三萜皂苷化合物20mg/kg时，抑制作用出现了平缓趋势，再增大剂量则不会再提高抑制作用。
表2三萜皂苷化合物对小鼠腹腔毛细血管通透性升高的影响(n＝10.x±s)
Figure BDA0001824483010000201
与模型组比较：1P<0.05，2P<0.01
3.2对大鼠棉球肉芽肿的影响
如表3中结果所示，三萜皂苷化合物1mg/kg基本没有抑制作用，三萜皂苷化合物5mg/kg可抑制肉芽肿的程度，10mg/kg以及15mg/kg抑制作用明显增强，表明三萜皂苷化合物对炎症的慢性增殖相具有明显的治疗作用。但三萜皂苷化合物20mg/kg时，抑制作用出现了平缓趋势，再增大剂量则不会再提高抑制作用。
表3三萜皂苷化合物对大鼠棉球肉芽肿的影响(n＝10.x±s)
Figure BDA0001824483010000202
与模型组比较：1P<0.05，2P<0.01
综上可以看出，三萜皂苷化合物对炎症有明显的治疗作用，但并非剂量越高越好，在一定剂量范围内药效达到最佳。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。

Claims (15)

1.一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，所述的分离纯化方法包括以下步骤：
(1)将三金制剂药物粉末采用有机溶剂进行提取，滤过，减压浓缩制得浸膏；
(2)将浸膏溶解，溶液依次采用石油醚、正丁醇进行萃取，获得正丁醇萃取浸膏；
(3)取正丁醇萃取浸膏进行硅胶柱层析，采用二氯甲烷-甲醇***进行梯度洗脱，收集各洗脱流分，合并划分为多组粗洗脱部分；
(4)将各组的粗洗脱部分依次利用反相色谱柱层析、葡聚糖凝胶柱层析以及高效液相制备分离纯化，获得各个化学成分；
其中，获得的化学成分包括丁香脂素、树脂酚、二氢山柰酚、山柰酚、3,4-二羟基苯甲醛、4-羟基苯甲酸、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸、香豆酸、2-糠酸、3-羟基-2-(3-甲氧基-4-羟基苯基)丙酸、水杨酸、槲皮素、茋木脂体、原茶儿酸、3,4-二羟基苯丙烯酸、3’-二-O-甲基鞣花酸-4’-O-L-吡喃鼠李糖苷、没食子酸、山柰酚-3-葡萄糖苷以及一种新的三萜皂苷化合物，其结构式为：
Figure FDA0002569567400000011
2.根据权利要求1所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的有机溶剂为体积分数为10-100％的甲醇溶液或体积分数为10-100％的乙醇溶液。
3.根据权利要求2所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的有机溶剂为体积分数为60-95％的乙醇溶液。
4.根据权利要求1所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，将浸膏用水溶解，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，获得正丁醇萃取浸膏；其中，水溶液与石油醚的体积比为1:1～1:5；水层与正丁醇的体积比为1:1～1:5。
5.根据权利要求4所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，水溶液与石油醚的体积比为1:1～1:3；水层与正丁醇的体积比为1:1～1:2。
6.根据权利要求1-5任一所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，采用二氯甲烷-甲醇***对萃取物进行梯度洗脱，二氯甲烷和甲醇的体积比为100:1-5:1，分段收集获得130份组分，通过TLC和HPLC-UV分析检测，筛选合并后分为五组粗洗脱部分，分别为组分6-9，组分20-36，组分37-51，组分66-95，组分118-130。
7.根据权利要求6所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，采用二氯甲烷-甲醇***对萃取物进行梯度洗脱时，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1进行洗脱。
8.根据权利要求1-5任一所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中，进行反相色谱柱层析时，层析柱为ODS-C18，洗脱溶剂为体积分数为10％-90％的甲醇水溶液，进行梯度洗脱；洗脱溶剂的用量为2～10个柱体积。
9.根据权利要求8所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中，进行反相色谱柱层析时，分别依次以甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱。
10.根据权利要求6所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中，进行反相色谱柱层析时，组分6-9和组分20-36采用体积分数为30％-90％的甲醇水溶液进行梯度洗脱；组分37-51、组分66-95以及组分118-130采用体积分数为10％-90％的甲醇水溶液进行梯度洗脱。
11.根据权利要求1-5任一所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中，进行葡聚糖凝胶柱层析时，层析柱为Sephades LH-20，用纯甲醇进行洗脱，洗脱剂用量为2～10个柱体积。
12.根据权利要求1-5任一所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，按4％～80％甲醇梯度进行洗脱。
13.根据权利要求12所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中，高效液相制备时，分别依次以甲醇的体积分数为80％、65％、50％、35％、20％、4％进行洗脱。
14.根据权利要求12所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，高效液相制备的洗脱条件为：0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；
15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；
25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；
35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；
90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。
15.根据权利要求6所述的一种三金制剂化学成分的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中，从组分6-9中分离纯化得到丁香脂素、树脂酚；从组分20-36中分离纯化得到二氢山柰酚、山柰酚；从组分37-51中分离纯化得到3,4-二羟基苯甲醛、4-羟基苯甲酸、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸、香豆酸；从组分66-95中分离纯化得到所述的新的三萜皂苷化合物、2-糠酸、3-羟基-2-(3-甲氧基-4-羟基苯基)丙酸、水杨酸、槲皮素、茋木脂体、原茶儿酸、3,4-二羟基苯丙烯酸、3’-二-O甲基鞣花酸-4’-O-L-吡喃鼠李糖苷；从组分118-130中分离纯化得到没食子酸、山柰酚-3-葡萄糖苷。
CN201811178834.6A 2018-10-10 2018-10-10 一种三金制剂化学成分的分离纯化方法 Active CN109517023B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811178834.6A CN109517023B (zh) 2018-10-10 2018-10-10 一种三金制剂化学成分的分离纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811178834.6A CN109517023B (zh) 2018-10-10 2018-10-10 一种三金制剂化学成分的分离纯化方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109517023A CN109517023A (zh) 2019-03-26
CN109517023B true CN109517023B (zh) 2020-08-28

Family

ID=65771875

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811178834.6A Active CN109517023B (zh) 2018-10-10 2018-10-10 一种三金制剂化学成分的分离纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109517023B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102276683A (zh) * 2010-06-08 2011-12-14 桂林三金药业股份有限公司 一种菝葜皂苷化合物
CN102532243A (zh) * 2010-12-31 2012-07-04 桂林三金药业股份有限公司 一种同时制备野蔷薇苷和蔷薇苷化合物的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102276683A (zh) * 2010-06-08 2011-12-14 桂林三金药业股份有限公司 一种菝葜皂苷化合物
CN102532243A (zh) * 2010-12-31 2012-07-04 桂林三金药业股份有限公司 一种同时制备野蔷薇苷和蔷薇苷化合物的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anti-Inflammatory Oleanolic Triterpenes from Chinese Acorns;HUANG,Jie等;《Molecules》;20160520;第21卷;第1-9页 *
Two new oxidation products obtained from the biotransformation of asiatic acid by the fungus Fusarium avenaceum AS 3.4594;HUANG,Fei-Xia等;《Journal of Asian Natural Products Research》;20121029;第14卷(第11期);第1039-1045页 *
中药复方CM活性成分和中药青黛的研究;张青松;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20070615(第6期);E057-11 *
积雪草皂苷活性成分的化学研究;刘瑜;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20100615(第6期);E057-42 *
金樱根化学成分及质量标准研究;庄彦;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》;20120915(第9期);B016-111 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109517023A (zh) 2019-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10196417B2 (en) Baicalin magnesium compound and its preparation method and application
CN113150048B (zh) 青钱柳的提取物及其抗类风湿性关节炎应用
CN102432620B (zh) 一种白藜芦醇四聚体化合物及其制备方法和应用
CN109320578B (zh) 一种三萜皂苷化合物及其提取方法
TWI432420B (zh) A compound isolated from the monascus, a process for its preparation and use
CN101704826B (zh) 一组中药芫花二萜原酸酯类化合物
CN109942385B (zh) 芭蕉根中三个新化合物及提取分离方法
CN109517023B (zh) 一种三金制剂化学成分的分离纯化方法
CN111533772A (zh) 环烯醚萜类化合物的制备方法、环烯醚萜类化合物及应用
CN114933617B (zh) 二苯甲酮二聚体化合物的制备方法
CN114213375B (zh) 一种倍半萜内酯化合物及其制备方法与应用
CN101375937A (zh) 一种柘木提取物、其制备及应用
CN110540530B (zh) 一种鸡骨香根提取物及其超临界流体提取方法、应用
CN113827629A (zh) 艾叶在治疗和预防由幽门螺旋杆菌引起的胃部疾病中的应用
CN102093380B (zh) 环淫羊藿素苷元及其制备方法和应用
CN108148105B (zh) 一种二聚环烯醚萜类化合物及其制备方法和应用
CN101574381A (zh) 草珊瑚有效部位提取物及其制备方法
CN112679481A (zh) 一种新化合物及其制备方法和镇痛用途
CN101375938A (zh) 一种柘木提取物、其制备及应用
CN114805382B (zh) 一种倍半萜色酮类化合物及其分离和在制备抗胰腺癌药物中的应用
CN108530505A (zh) 一种黄酮苷类化合物及其制备方法和应用
CN107674065A (zh) 具有抗肿瘤活性的番荔枝内酯化合物及其应用
CN108484542B (zh) 一种具有降血糖活性的叉甲基丁内酯二萜化合物及其制备方法与应用
CN111825646B (zh) 一种丁基苯肽类化合物及其制备方法和应用
CN100354292C (zh) 黄酮类新化合物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant