CN109370995B - 锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用 - Google Patents

锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109370995B
CN109370995B CN201811507518.9A CN201811507518A CN109370995B CN 109370995 B CN109370995 B CN 109370995B CN 201811507518 A CN201811507518 A CN 201811507518A CN 109370995 B CN109370995 B CN 109370995B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ala
csmnp
asp
gly
leu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811507518.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109370995A (zh
Inventor
姚斌
苏小运
王晓璐
罗会颖
黄火清
柏映国
王亚茹
孟昆
涂涛
王苑
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Animal Science of CAAS
Original Assignee
Institute of Animal Science of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Animal Science of CAAS filed Critical Institute of Animal Science of CAAS
Priority to CN201811507518.9A priority Critical patent/CN109370995B/zh
Publication of CN109370995A publication Critical patent/CN109370995A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109370995B publication Critical patent/CN109370995B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A62—LIFE-SAVING; FIRE-FIGHTING
    • A62D—CHEMICAL MEANS FOR EXTINGUISHING FIRES OR FOR COMBATING OR PROTECTING AGAINST HARMFUL CHEMICAL AGENTS; CHEMICAL MATERIALS FOR USE IN BREATHING APPARATUS
    • A62D3/00—Processes for making harmful chemical substances harmless or less harmful, by effecting a chemical change in the substances
    • A62D3/02—Processes for making harmful chemical substances harmless or less harmful, by effecting a chemical change in the substances by biological methods, i.e. processes using enzymes or microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y111/00—Oxidoreductases acting on a peroxide as acceptor (1.11)
    • C12Y111/01—Peroxidases (1.11.1)
    • C12Y111/01013—Manganese peroxidase (1.11.1.13)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A62—LIFE-SAVING; FIRE-FIGHTING
    • A62D—CHEMICAL MEANS FOR EXTINGUISHING FIRES OR FOR COMBATING OR PROTECTING AGAINST HARMFUL CHEMICAL AGENTS; CHEMICAL MATERIALS FOR USE IN BREATHING APPARATUS
    • A62D2101/00—Harmful chemical substances made harmless, or less harmful, by effecting chemical change
    • A62D2101/20—Organic substances
    • A62D2101/26—Organic substances containing nitrogen or phosphorus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A62—LIFE-SAVING; FIRE-FIGHTING
    • A62D—CHEMICAL MEANS FOR EXTINGUISHING FIRES OR FOR COMBATING OR PROTECTING AGAINST HARMFUL CHEMICAL AGENTS; CHEMICAL MATERIALS FOR USE IN BREATHING APPARATUS
    • A62D2101/00—Harmful chemical substances made harmless, or less harmful, by effecting chemical change
    • A62D2101/20—Organic substances
    • A62D2101/28—Organic substances containing oxygen, sulfur, selenium or tellurium, i.e. chalcogen

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Business, Economics & Management (AREA)
  • Emergency Management (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用。发明提供了一种锰过氧化物酶CsMnP，其氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.3所示。本发明的锰过氧化物酶能有效的降解不同结构类型的霉菌毒素，可作为一种新型的酶制剂，广泛用于食品和饲料霉菌毒素脱毒领域。

Description

锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用。
背景技术
霉菌毒素是真菌次级代谢产物，对家畜、家禽和人类的健康有害。常见的霉菌毒素包括黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)、桔霉素、赭曲霉毒素、伏马菌素、展青霉素和单端孢霉菌毒素，可以分为具环状结构和不具环状结构的两类毒素。大多数霉菌毒素，如黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮，属于具环状结构的亚组中，通常通过真菌聚酮途径进行合成。例如，黄曲霉毒素(aflatoxin)B1由黄曲霉(Aspergillus flavus)产生，具有一个核心的香豆素环和两侧的五元碳环和两个并列的二氢呋喃环，其是很强的肝脏致癌物。此外，玉米赤霉烯酮的结构是间二羟基苯甲酸酚内酯，伏马菌素则具有22碳对氨基苯酚线性骨架，侧链为两个丙三酸。
物理吸附(或灭活)以及生物转化是将食物和饲料中的霉菌毒素脱毒的两种主要方式。除此之外，使用微生物，特别是通过微生物产生的酶，进行霉菌毒素的脱毒是一种新兴的手段。现有技术中漆酶、泛解酸内酯水解酶、过氧化物酶以及一些尚不能分类的酶可通过氧化或水解机理降解黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮。来自于木质纤维素降解菌的锰过氧化物酶(MnP)是一组参与木质素氧化降解的酶。现有技术中公开的少数几个微生物产酶均只能特异性的降解黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮等一到两种霉菌毒素，因此，在实际应用中受到极大的限制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种锰过氧化物酶CsMnP。
本发明的再一目的在于提供上述锰过氧化物酶CsMnP的编码基因。
本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组表达载体。
本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组菌株。
本发明的再一目的在于提供上述锰过氧化物酶CsMnP的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述锰过氧化物酶CsMnP的应用。
本发明的野生型的锰过氧化物酶CsMnP，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示：
MAFTSFVALAALVGIASAAPTTICPDGTRVSNHACCAFIPLAEDLQKTIFMNDCGEDAHEVIRLTFHDAVAISRKLGPKAGGGADGSMLLFPTVEPNFSANNGIDDSVNNLIPFMARHPTVSAGDLVQFAGAVALSNCPGAPRLEFLAGRPNHTIAAIDGLIPEPQDDVTKILERFDDAGGFTPFEVVSLLASHTVARADKVDETIDAAPFDSTPFTFDTQVFLEVLLKGVGFPGTDNNTGEVASPLPKGSGNDTGEMRLQSDFALARDPRTACFWQGFVDEQEFMAESFKAAMAKLAILGHNRASLTDCSDVVPIPRPAVKKPASFPATTGPKDLELTCRAERFPTLTVDRGAVQALIPHCSNGGQDCPSVQFDGPA
其中，该酶基因编码379个氨基酸，N端18个氨基酸为其信号肽序列，信号肽的序列如SEQ ID No.2所示：
MAFTSFVALAALVGIASA
因此，成熟的锰过氧化物酶CsMnP的理论分子量为38.3kDa，其氨基酸序列如SEQID No.3所示：
APTTICPDGTRVSNHACCAFIPLAEDLQKTIFMNDCGEDAHEVIRLTFHDAVAISRKLGPKAGGGADGSMLLFPTVEPNFSANNGIDDSVNNLIPFMARHPTVSAGDLVQFAGAVALSNCPGAPRLEFLAGRPNHTIAAIDGLIPEPQDDVTKILERFDDAGGFTPFEVVSLLASHTVARADKVDETIDAAPFDSTPFTFDTQVFLEVLLKGVGFPGTDNNTGEVASPLPKGSGNDTGEMRLQSDFALARDPRTACFWQGFVDEQEFMAESFKAAMAKLAILGHNRASLTDCSDVVPIPRPAVKKPASFPATTGPKDLELTCRAERFPTLTVDRGAVQALIPHCSNGGQDCPSVQFDGPA
本发明还提供了编码上述锰过氧化物酶CsMnP的基因序列，其基因组序列如SEQID No.4所示：
Atggcctttaccagctttgttgcactggcagcactggttggtattgcaagcgcagcaccgaccaccatttgtccggatggcacccgtgttagcaatcatgcatgttgtgcatttattccgctggcagaagatctgcagaaaaccatttttatgaacgattgtggtgaagatgcccatgaagttattcgtctgacctttcatgatgcagttgcaattagccgtaaactgggtccgaaagccggtggtggtgcagatggtagcatgctgctgtttccgaccgttgaaccgaattttagcgcaaataatggcattgatgatagcgtgaataacctgattccgtttatggcacgtcatccgaccgtgagtgccggtgatctggttcagtttgccggtgcagttgccctgagcaattgtccgggtgcaccgcgtctggaatttctggcaggtcgtccgaatcataccattgcagcaattgatggtctgattccggaaccgcaggatgatgttaccaaaattctggaacgttttgatgatgccggtggttttaccccgtttgaagttgttagcctgctggcaagccataccgttgcacgtgccgataaagttgatgaaaccattgatgcagcaccgtttgatagcaccccgtttacctttgatacccaggtttttctggaagttctgctgaaaggtgttggttttccgggtacagataataacaccggtgaagttgcaagtccgctgccgaaaggtagcggtaatgataccggtgaaatgcgtctgcagagcgattttgccctggcacgcgatccgcgtaccgcatgtttttggcagggttttgttgatgaacaagaatttatggccgagtcctttaaagcagcaatggcaaaactggcaattctgggtcataatcgtgcaagcctgaccgattgtagtgatgttgttccgattccgcgtccggcagttaaaaaaccggcaagttttccggcaaccaccggtcctaaagatctggaactgacctgtcgtgcagaacgttttccgaccctgaccgttgatcgtggtgcagttcaggcactgattccgcattgtagcaatggtggccaggattgtccgagcgtgcagtttgatggtccggcataa
锰过氧化物酶CsMnP编码基因序列全长1137bp。其中，信号肽的碱基序列如SEQ IDNo.5所示：
Atggcctttaccagctttgttgcactggcagcactggttggtattgcaagcgca
成熟的锰过氧化物酶CsMnP的cDNA(去信号肽)序列如SEQ ID No.6所示：
Gcaccgaccaccatttgtccggatggcacccgtgttagcaatcatgcatgttgtgcatttattccgctggcagaagatctgcagaaaaccatttttatgaacgattgtggtgaagatgcccatgaagttattcgtctgacctttcatgatgcagttgcaattagccgtaaactgggtccgaaagccggtggtggtgcagatggtagcatgctgctgtttccgaccgttgaaccgaattttagcgcaaataatggcattgatgatagcgtgaataacctgattccgtttatggcacgtcatccgaccgtgagtgccggtgatctggttcagtttgccggtgcagttgccctgagcaattgtccgggtgcaccgcgtctggaatttctggcaggtcgtccgaatcataccattgcagcaattgatggtctgattccggaaccgcaggatgatgttaccaaaattctggaacgttttgatgatgccggtggttttaccccgtttgaagttgttagcctgctggcaagccataccgttgcacgtgccgataaagttgatgaaaccattgatgcagcaccgtttgatagcaccccgtttacctttgatacccaggtttttctggaagttctgctgaaaggtgttggttttccgggtacagataataacaccggtgaagttgcaagtccgctgccgaaaggtagcggtaatgataccggtgaaatgcgtctgcagagcgattttgccctggcacgcgatccgcgtaccgcatgtttttggcagggttttgttgatgaacaagaatttatggccgagtcctttaaagcagcaatggcaaaactggcaattctgggtcataatcgtgcaagcctgaccgattgtagtgatgttgttccgattccgcgtccggcagttaaaaaaccggcaagttttccggcaaccaccggtcctaaagatctggaactgacctgtcgtgcagaacgttttccgaccctgaccgttgatcgtggtgcagttcaggcactgattccgcattgtagcaatggtggccaggattgtccgagcgtgcagtttgatggtccggcataa
本发明还提供了包含上述锰过氧化物酶基因CsMnP的重组载体，优选为pCold I-CsMnP。将本发明的锰过氧化物酶基因***到表达载体合适的限制性酶切位点之间，使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接。作为本发明的一个最优选的实施方案，将本发明的锰过氧化物酶基因CsMnP***到质粒pCold I上的NdeI-BamHI限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于CSPA启动子的下游并受其调控，得到重组大肠杆菌表达质粒pCold I-CsMnP。
本发明还提供了包含上述锰过氧化物酶基因CsMnP的重组菌株，优选为重组大肠杆菌菌株BL21(DE3)/CsMnP。
本发明还提供了一种制备锰过氧化物酶CsMnP的方法，包括以下步骤：
(1)用上述的重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；
(2)培养重组菌株，诱导重组锰过氧化物酶表达了；
(3)纯化锰过氧化物酶CsMnP。
本发明提供了上述锰过氧化物酶CsMnP的应用，尤其是在降解霉菌毒素脱毒方面，其对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马菌素B1具有良好的降解率。
附图说明
图1显示重组锰过氧化物酶CsMnP对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马菌素B1的降解率；
图2显示重组锰过氧化物酶CsMnP降解黄曲霉毒素B1的HPLC分析结果；
图3显示重组锰过氧化物酶CsMnP降解玉米赤霉烯酮的HPLC分析结果；
图4显示重组锰过氧化物酶CsMnP降解呕吐毒素的HPLC分析结果；
图5显示重组锰过氧化物酶CsMnP降解伏马菌素B1的HPLC分析结果。
具体实施方式
试验材料和试剂
1、基因及载体：大肠杆菌表达载体pCold I及菌株BL21(DE3)；
2、酶类及其它生化试剂：内切酶、重组酶、黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素、伏马菌素。
3、培养基：大肠杆菌培养基LB(1％蛋白胨、0.5％酵母提取物、1％NaCl,pH7.0)。实施例1锰过氧化物酶CsMnP编码基因的克隆
本发明目的基因来源于多孔菌科真菌虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)。
设计特异性引物：
CsMnP-F:5'-CATATCGAAGGTAGGCATATGGCACCGACCACCAT-3'；
CsMnP-R:5'-GACAAGCTTGAATTCGGATCCTGCCGGACCATCAA-3'。
以带有目的基因的质粒为模板进行PCR扩增。在1％琼脂糖凝胶上电泳，切胶得到目的片段，将该片段回收后与NdeI-BamHI双酶切的pCold I载体通过同源重组的方法相连，转化TransI克隆宿主，测序验证，得到氧化物酶CsMnP编码基因。
实施例2重组锰过氧化物酶CsMnP的制备
将获得的含有锰过氧化物酶基因CsMnP的重组大肠杆菌表达质粒pCold I-CsMnP转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得重组大肠杆菌菌株BL21(DE3)/CsMnP。
以同样的方法构建含信号肽序列的锰过氧化物酶基因CsMnP的重组表达载体。
取含有重组质粒的BL21(DE3)/CsMnP菌株，接种于50mL LB培养液中，37℃ 220rpm振荡培养12h后，按2％比例转接于300mL LB培养基中，37℃ 220rpm振荡培养约2h(OD590≈0.5)。冰水浴处理后于10℃ 220rpm培养30分钟后加入60μL浓度1M的诱导剂IPTG，于10℃220rpm继续培养6h。之后9h培养过程中每小时加入33μL浓度1M的CaCl2，330μL浓度10g/L的Hemin(Hemin溶于0.1M NaOH中)。10℃ 220rpm继续培养10h后离心收集菌体。采取超声法法裂解菌体，利用镍柱进行亲和层析纯化获得单一的CsMnP蛋白。
实施例3重组锰过氧化物酶CsMnP降解黄曲霉毒素B1
将黄曲霉毒素B1溶解到二甲基亚砜中配制成50mg/L的母液，按如下反应体系：70μL丙二酸缓冲液(0.2M，pH 5.0)，20μL黄曲霉毒素B1溶液(50mg/L)，5μL硫酸锰(40mM)，100μL锰过氧化酶(1000U/L)，5μL过氧化氢(4mM)。以未加入锰过氧化物酶的体系作为对照，反应体系设3个重复。反应在30℃下进行，48h后加入三倍体积的甲醇终止反应，采用高效液相色谱(HPLC)分析黄曲霉毒素B1的降解率。液相色谱为岛津Nexera UHPLC高效液相色谱分析***，色谱分离柱为Zorbax SB-C18(4.6×250mm,5μm)，流动相A(0.06％TFA的水)，流动相B(0.05％TFA的乙腈)；梯度洗脱条件0％B洗脱4分钟，0％-100％B洗脱15分钟，100％B洗脱6分钟；检测波长365nm。
结果如图1、图2所示，可见大部分黄曲霉毒素已被降解，降解率为80.8％。
实施例4重组锰过氧化物酶CsMnP降解玉米赤霉烯酮
将玉米赤霉烯酮溶解到二甲基亚砜中配制成50mg/L的母液，按如下反应体系：70μL丙二酸缓冲液(0.2M，pH 5.0)，20μL玉米赤霉烯酮溶液(50mg/L)，5μL硫酸锰(40mM)，100μL锰过氧化酶(1000U/L)，5μL过氧化氢(4mM)。以未加入锰过氧化物酶的体系作为对照，反应体系设3个重复。反应在30℃下进行，48h后加入三倍体积的甲醇终止反应，采用高效液相色谱(HPLC)分析玉米赤霉烯酮的降解率。液相色谱为岛津Nexera UHPLC高效液相色谱分析***，色谱分离柱为Zorbax SB-C18(4.6×250mm,5μm)，流动相A(0.06％TFA的水)，流动相B(0.05％TFA的乙腈)；梯度洗脱条件0％B洗脱4分钟，0％-100％B洗脱15分钟，100％B洗脱6分钟；检测波长316nm。
结果如图1、图3所示，可见大部分玉米赤霉烯酮已被降解，降解率为78.9％。
实施例5重组锰过氧化物酶CsMnP降解呕吐毒素
将呕吐毒素溶解到甲醇中配制成100mg/L的母液，按如下反应体系：70μL丙二酸缓冲液(0.2M，pH 5.0)，20μL呕吐毒素溶液(100mg/L)，5μL硫酸锰(40mM)，100μL锰过氧化酶(1000U/L)，5μL过氧化氢(4mM)。以未加入锰过氧化物酶的体系作为对照，反应体系设3个重复。反应在30℃下进行，48h后加入三倍体积的甲醇终止反应，采用高效液相色谱(HPLC)分析呕吐毒素的降解率。液相色谱为岛津Nexera UHPLC高效液相色谱分析***，色谱分离柱为Zorbax SB-C18(4.6×250mm,5μm)，流动相A(水)，流动相B(甲醇)；梯度洗脱条件20％B洗脱20分钟，20％-100％B洗脱1分钟，100％B洗脱6分钟；检测波长220nm。
结果如图1、图4所示，可见大部分呕吐毒素已被降解，降解率为86.3％。
实施例6重组锰过氧化物酶CsMnP降解伏马菌素B1
将伏马菌素B1溶解到DMSO中配制成100mg/L的母液，按如下反应体系：70μL丙二酸缓冲液(0.2M，pH 5.0)，20μL伏马菌素B1溶液(100mg/L)，5μL硫酸锰(40mM)，100μL锰过氧化酶(1000U/L)，5μL过氧化氢(4mM)。以未加入锰过氧化物酶的体系作为对照，反应体系设3个重复。反应在30℃下进行，48h后加入三倍体积的甲醇终止反应，采用高效液相色谱(HPLC)-质谱(MS)联用分析伏马菌素B1的降解率。液相色谱为岛津Nexera UHPLC高效液相色谱分析***，色谱分离柱为Zorbax SB-C18(4.6X 250,5um)，流动相A(0.1％甲酸的水)，流动相B(乙腈:甲醇1:1)；梯度洗脱条件30％-100％B梯度洗脱10分钟，30％B洗脱18分钟，100％B洗脱2分钟；质谱为SCIEX Triple TOF分析***，质谱条件为CE：35V±15V，Ion source gas：50，TEM 500℃，ISVF 5500V，sean：m/z 100-1000(目标物721)。
结果如图1、图5所示，可见部分伏马菌素已被降解，降解率为21.3％。
序列表
<110> 中国农业科学院饲料研究所
<120> 锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 2
<211> 378
<212> PRT
<213> 多孔菌科真菌虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)
<400> 2
Met Ala Phe Thr Ser Phe Val Ala Leu Ala Ala Leu Val Gly Ile Ala
1 5 10 15
Ser Ala Ala Pro Thr Thr Ile Cys Pro Asp Gly Thr Arg Val Ser Asn
20 25 30
His Ala Cys Cys Ala Phe Ile Pro Leu Ala Glu Asp Leu Gln Lys Thr
35 40 45
Ile Phe Met Asn Asp Cys Gly Glu Asp Ala His Glu Val Ile Arg Leu
50 55 60
Thr Phe His Asp Ala Val Ala Ile Ser Arg Lys Leu Gly Pro Lys Ala
65 70 75 80
Gly Gly Gly Ala Asp Gly Ser Met Leu Leu Phe Pro Thr Val Glu Pro
85 90 95
Asn Phe Ser Ala Asn Asn Gly Ile Asp Asp Ser Val Asn Asn Leu Ile
100 105 110
Pro Phe Met Ala Arg His Pro Thr Val Ser Ala Gly Asp Leu Val Gln
115 120 125
Phe Ala Gly Ala Val Ala Leu Ser Asn Cys Pro Gly Ala Pro Arg Leu
130 135 140
Glu Phe Leu Ala Gly Arg Pro Asn His Thr Ile Ala Ala Ile Asp Gly
145 150 155 160
Leu Ile Pro Glu Pro Gln Asp Asp Val Thr Lys Ile Leu Glu Arg Phe
165 170 175
Asp Asp Ala Gly Gly Phe Thr Pro Phe Glu Val Val Ser Leu Leu Ala
180 185 190
Ser His Thr Val Ala Arg Ala Asp Lys Val Asp Glu Thr Ile Asp Ala
195 200 205
Ala Pro Phe Asp Ser Thr Pro Phe Thr Phe Asp Thr Gln Val Phe Leu
210 215 220
Glu Val Leu Leu Lys Gly Val Gly Phe Pro Gly Thr Asp Asn Asn Thr
225 230 235 240
Gly Glu Val Ala Ser Pro Leu Pro Lys Gly Ser Gly Asn Asp Thr Gly
245 250 255
Glu Met Arg Leu Gln Ser Asp Phe Ala Leu Ala Arg Asp Pro Arg Thr
260 265 270
Ala Cys Phe Trp Gln Gly Phe Val Asp Glu Gln Glu Phe Met Ala Glu
275 280 285
Ser Phe Lys Ala Ala Met Ala Lys Leu Ala Ile Leu Gly His Asn Arg
290 295 300
Ala Ser Leu Thr Asp Cys Ser Asp Val Val Pro Ile Pro Arg Pro Ala
305 310 315 320
Val Lys Lys Pro Ala Ser Phe Pro Ala Thr Thr Gly Pro Lys Asp Leu
325 330 335
Glu Leu Thr Cys Arg Ala Glu Arg Phe Pro Thr Leu Thr Val Asp Arg
340 345 350
Gly Ala Val Gln Ala Leu Ile Pro His Cys Ser Asn Gly Gly Gln Asp
355 360 365
Cys Pro Ser Val Gln Phe Asp Gly Pro Ala
370 375
<210> 2
<211> 18
<212> PRT
<213> 多孔菌科真菌虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)
<400> 2
Met Ala Phe Thr Ser Phe Val Ala Leu Ala Ala Leu Val Gly Ile Ala
1 5 10 15
Ser Ala
<210> 3
<211> 360
<212> PRT
<213> 多孔菌科真菌虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)
<400> 3
Ala Pro Thr Thr Ile Cys Pro Asp Gly Thr Arg Val Ser Asn His Ala
1 5 10 15
Cys Cys Ala Phe Ile Pro Leu Ala Glu Asp Leu Gln Lys Thr Ile Phe
20 25 30
Met Asn Asp Cys Gly Glu Asp Ala His Glu Val Ile Arg Leu Thr Phe
35 40 45
His Asp Ala Val Ala Ile Ser Arg Lys Leu Gly Pro Lys Ala Gly Gly
50 55 60
Gly Ala Asp Gly Ser Met Leu Leu Phe Pro Thr Val Glu Pro Asn Phe
65 70 75 80
Ser Ala Asn Asn Gly Ile Asp Asp Ser Val Asn Asn Leu Ile Pro Phe
85 90 95
Met Ala Arg His Pro Thr Val Ser Ala Gly Asp Leu Val Gln Phe Ala
100 105 110
Gly Ala Val Ala Leu Ser Asn Cys Pro Gly Ala Pro Arg Leu Glu Phe
115 120 125
Leu Ala Gly Arg Pro Asn His Thr Ile Ala Ala Ile Asp Gly Leu Ile
130 135 140
Pro Glu Pro Gln Asp Asp Val Thr Lys Ile Leu Glu Arg Phe Asp Asp
145 150 155 160
Ala Gly Gly Phe Thr Pro Phe Glu Val Val Ser Leu Leu Ala Ser His
165 170 175
Thr Val Ala Arg Ala Asp Lys Val Asp Glu Thr Ile Asp Ala Ala Pro
180 185 190
Phe Asp Ser Thr Pro Phe Thr Phe Asp Thr Gln Val Phe Leu Glu Val
195 200 205
Leu Leu Lys Gly Val Gly Phe Pro Gly Thr Asp Asn Asn Thr Gly Glu
210 215 220
Val Ala Ser Pro Leu Pro Lys Gly Ser Gly Asn Asp Thr Gly Glu Met
225 230 235 240
Arg Leu Gln Ser Asp Phe Ala Leu Ala Arg Asp Pro Arg Thr Ala Cys
245 250 255
Phe Trp Gln Gly Phe Val Asp Glu Gln Glu Phe Met Ala Glu Ser Phe
260 265 270
Lys Ala Ala Met Ala Lys Leu Ala Ile Leu Gly His Asn Arg Ala Ser
275 280 285
Leu Thr Asp Cys Ser Asp Val Val Pro Ile Pro Arg Pro Ala Val Lys
290 295 300
Lys Pro Ala Ser Phe Pro Ala Thr Thr Gly Pro Lys Asp Leu Glu Leu
305 310 315 320
Thr Cys Arg Ala Glu Arg Phe Pro Thr Leu Thr Val Asp Arg Gly Ala
325 330 335
Val Gln Ala Leu Ile Pro His Cys Ser Asn Gly Gly Gln Asp Cys Pro
340 345 350
Ser Val Gln Phe Asp Gly Pro Ala
355 360
<210> 4
<211> 1137
<212> DNA
<213> 多孔菌科真菌虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)
<400> 4
atggccttta ccagctttgt tgcactggca gcactggttg gtattgcaag cgcagcaccg 60
accaccattt gtccggatgg cacccgtgtt agcaatcatg catgttgtgc atttattccg 120
ctggcagaag atctgcagaa aaccattttt atgaacgatt gtggtgaaga tgcccatgaa 180
gttattcgtc tgacctttca tgatgcagtt gcaattagcc gtaaactggg tccgaaagcc 240
ggtggtggtg cagatggtag catgctgctg tttccgaccg ttgaaccgaa ttttagcgca 300
aataatggca ttgatgatag cgtgaataac ctgattccgt ttatggcacg tcatccgacc 360
gtgagtgccg gtgatctggt tcagtttgcc ggtgcagttg ccctgagcaa ttgtccgggt 420
gcaccgcgtc tggaatttct ggcaggtcgt ccgaatcata ccattgcagc aattgatggt 480
ctgattccgg aaccgcagga tgatgttacc aaaattctgg aacgttttga tgatgccggt 540
ggttttaccc cgtttgaagt tgttagcctg ctggcaagcc ataccgttgc acgtgccgat 600
aaagttgatg aaaccattga tgcagcaccg tttgatagca ccccgtttac ctttgatacc 660
caggtttttc tggaagttct gctgaaaggt gttggttttc cgggtacaga taataacacc 720
ggtgaagttg caagtccgct gccgaaaggt agcggtaatg ataccggtga aatgcgtctg 780
cagagcgatt ttgccctggc acgcgatccg cgtaccgcat gtttttggca gggttttgtt 840
gatgaacaag aatttatggc cgagtccttt aaagcagcaa tggcaaaact ggcaattctg 900
ggtcataatc gtgcaagcct gaccgattgt agtgatgttg ttccgattcc gcgtccggca 960
gttaaaaaac cggcaagttt tccggcaacc accggtccta aagatctgga actgacctgt 1020
cgtgcagaac gttttccgac cctgaccgtt gatcgtggtg cagttcaggc actgattccg 1080
cattgtagca atggtggcca ggattgtccg agcgtgcagt ttgatggtcc ggcataa 1137
<210> 5
<211> 54
<212> DNA
<213> 多孔菌科真菌虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)
<400> 5
atggccttta ccagctttgt tgcactggca gcactggttg gtattgcaag cgca 54
<210> 6
<211> 1083
<212> DNA
<213> 多孔菌科真菌虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)
<400> 6
gcaccgacca ccatttgtcc ggatggcacc cgtgttagca atcatgcatg ttgtgcattt 60
attccgctgg cagaagatct gcagaaaacc atttttatga acgattgtgg tgaagatgcc 120
catgaagtta ttcgtctgac ctttcatgat gcagttgcaa ttagccgtaa actgggtccg 180
aaagccggtg gtggtgcaga tggtagcatg ctgctgtttc cgaccgttga accgaatttt 240
agcgcaaata atggcattga tgatagcgtg aataacctga ttccgtttat ggcacgtcat 300
ccgaccgtga gtgccggtga tctggttcag tttgccggtg cagttgccct gagcaattgt 360
ccgggtgcac cgcgtctgga atttctggca ggtcgtccga atcataccat tgcagcaatt 420
gatggtctga ttccggaacc gcaggatgat gttaccaaaa ttctggaacg ttttgatgat 480
gccggtggtt ttaccccgtt tgaagttgtt agcctgctgg caagccatac cgttgcacgt 540
gccgataaag ttgatgaaac cattgatgca gcaccgtttg atagcacccc gtttaccttt 600
gatacccagg tttttctgga agttctgctg aaaggtgttg gttttccggg tacagataat 660
aacaccggtg aagttgcaag tccgctgccg aaaggtagcg gtaatgatac cggtgaaatg 720
cgtctgcaga gcgattttgc cctggcacgc gatccgcgta ccgcatgttt ttggcagggt 780
tttgttgatg aacaagaatt tatggccgag tcctttaaag cagcaatggc aaaactggca 840
attctgggtc ataatcgtgc aagcctgacc gattgtagtg atgttgttcc gattccgcgt 900
ccggcagtta aaaaaccggc aagttttccg gcaaccaccg gtcctaaaga tctggaactg 960
acctgtcgtg cagaacgttt tccgaccctg accgttgatc gtggtgcagt tcaggcactg 1020
attccgcatt gtagcaatgg tggccaggat tgtccgagcg tgcagtttga tggtccggca 1080
taa 1083

Claims (1)

1.锰过氧化物酶CsMnP用于同时降解黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和伏马菌素B1的应用，其中，所述锰过氧化物酶CsMnP的氨基酸序列如SEQ ID No. 1或SEQ ID No. 3所示。
CN201811507518.9A 2018-12-11 2018-12-11 锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用 Active CN109370995B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811507518.9A CN109370995B (zh) 2018-12-11 2018-12-11 锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811507518.9A CN109370995B (zh) 2018-12-11 2018-12-11 锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109370995A CN109370995A (zh) 2019-02-22
CN109370995B true CN109370995B (zh) 2021-05-25

Family

ID=65373245

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811507518.9A Active CN109370995B (zh) 2018-12-11 2018-12-11 锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109370995B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111154737B (zh) * 2020-01-14 2022-02-01 江南大学 一种能降解黄曲霉毒素b1的锰过氧化物酶及其应用
CN113897378B (zh) * 2021-08-20 2023-10-03 江南大学 一种白腐真菌锰过氧化物酶在聚乙烯降解中的应用

Citations (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1712526A (zh) * 2004-08-17 2005-12-28 暨南大学 一种具有转化黄曲霉毒素活性的解毒酶及编码该酶的基因
CN102417890A (zh) * 2011-12-09 2012-04-18 江南大学 一株草木樨中华根瘤菌及应用其发酵产锰过氧化物酶的方法
WO2012068236A2 (en) * 2010-11-16 2012-05-24 Dyadic International (Usa) Inc. Novel fungal oxidoreductases
WO2012068167A1 (en) * 2010-11-15 2012-05-24 Edeniq, Inc. Use of manganese peroxidase for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material
CN102791853A (zh) * 2009-09-23 2012-11-21 丹尼斯科美国公司 新型糖基水解酶及其用途
WO2016040266A1 (en) * 2014-09-08 2016-03-17 Battelle Memorial Institute Enzyme formulation and method for degradation
WO2016182855A1 (en) * 2015-05-11 2016-11-17 The Regents Of The University Of California Methods of distinguishing ischemic stroke from intracerebral hemorrhage
CN106148294A (zh) * 2016-07-26 2016-11-23 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶mnp‑1及其基因和应用
CN106434584A (zh) * 2016-07-26 2017-02-22 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶mnp‑2及其基因和应用
CN106636017A (zh) * 2017-02-27 2017-05-10 河南工业大学 复合酶制剂高效降解黄曲霉毒素b1的制备方法
CN107012131A (zh) * 2017-01-12 2017-08-04 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶及其基因和在霉菌毒素脱毒上的应用
WO2018044966A1 (en) * 2016-08-31 2018-03-08 Board Of Trustees Of Michigan State University Functionalized magnetic particle compositions and related methods
CN107815459A (zh) * 2017-12-06 2018-03-20 安徽农业大学 一种糙皮侧耳锰过氧化物酶基因及其应用
CN108251399A (zh) * 2016-12-29 2018-07-06 中粮营养健康研究院有限公司 伏马毒素降解酶、编码基因、重组载体、细胞、添加剂及其应用
WO2018218476A1 (zh) * 2017-05-31 2018-12-06 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶及其基因和在霉菌毒素脱毒上的应用
CN108949891A (zh) * 2018-06-17 2018-12-07 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 一种杨树皮木质素超声波协同混菌生物转化为多酚的方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070128707A1 (en) * 2005-11-10 2007-06-07 Oregon State University Method for making metal oxides
US20140178901A1 (en) * 2011-03-22 2014-06-26 The General Hospital Corporation Molecular Analysis of Tumor Samples

Patent Citations (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1712526A (zh) * 2004-08-17 2005-12-28 暨南大学 一种具有转化黄曲霉毒素活性的解毒酶及编码该酶的基因
CN102791853A (zh) * 2009-09-23 2012-11-21 丹尼斯科美国公司 新型糖基水解酶及其用途
WO2012068167A1 (en) * 2010-11-15 2012-05-24 Edeniq, Inc. Use of manganese peroxidase for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material
WO2012068236A2 (en) * 2010-11-16 2012-05-24 Dyadic International (Usa) Inc. Novel fungal oxidoreductases
CN102417890A (zh) * 2011-12-09 2012-04-18 江南大学 一株草木樨中华根瘤菌及应用其发酵产锰过氧化物酶的方法
WO2016040266A1 (en) * 2014-09-08 2016-03-17 Battelle Memorial Institute Enzyme formulation and method for degradation
WO2016182855A1 (en) * 2015-05-11 2016-11-17 The Regents Of The University Of California Methods of distinguishing ischemic stroke from intracerebral hemorrhage
CN106434584A (zh) * 2016-07-26 2017-02-22 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶mnp‑2及其基因和应用
CN106148294A (zh) * 2016-07-26 2016-11-23 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶mnp‑1及其基因和应用
WO2018044966A1 (en) * 2016-08-31 2018-03-08 Board Of Trustees Of Michigan State University Functionalized magnetic particle compositions and related methods
CN108251399A (zh) * 2016-12-29 2018-07-06 中粮营养健康研究院有限公司 伏马毒素降解酶、编码基因、重组载体、细胞、添加剂及其应用
CN107012131A (zh) * 2017-01-12 2017-08-04 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶及其基因和在霉菌毒素脱毒上的应用
CN106636017A (zh) * 2017-02-27 2017-05-10 河南工业大学 复合酶制剂高效降解黄曲霉毒素b1的制备方法
WO2018218476A1 (zh) * 2017-05-31 2018-12-06 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶及其基因和在霉菌毒素脱毒上的应用
CN107815459A (zh) * 2017-12-06 2018-03-20 安徽农业大学 一种糙皮侧耳锰过氧化物酶基因及其应用
CN108949891A (zh) * 2018-06-17 2018-12-07 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 一种杨树皮木质素超声波协同混菌生物转化为多酚的方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Effect of manganese on the secretion of manganese-peroxidase by the basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora;Rodrigo A. Mancilla 等;《Fungal Genetics and Biology》;20100429;第656–661页 *
Gelatoporia subvermispora MnP10 mRNA, complete cds;NCBI;《GenBank Database》;20180123;Accession No.MG190336.1 *
Gelatoporia subvermispora MnP10 mRNA，complete cds;NCBI;《GenBank Database》;20180123;Accession No.MG190336.1 *
Jianqiao Wang 等.Detoxi¢cation ofa£atoxin B1bymanganese peroxidase from the white-rot fungusPhanerochaete sordidaYK-624.《FEMS Microbiol Lett》.2010, *
抗霉菌毒素饲料添加剂对民猪仔猪生产性能的影响;王文涛 等;《黑龙江畜牧兽医》;20151120;第71-72页 *
木质素降解菌Ceriporiopsis subvermispora 的研究进展;张宇 等;《武汉理工大学学报》;20090530;第31卷(第10期);第104-108页 *
用过氧化氢、过氧化氢加核黄素或加乳过氧化物酶使牛奶中的黄曲霉毒素M1失活;喻秀梅;《乳品工业》;19830501;第31-33页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109370995A (zh) 2019-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107012131B (zh) 一种锰过氧化物酶及其基因和在霉菌毒素脱毒上的应用
CN110684748B (zh) 咖啡酸作为漆酶降解霉菌毒素的介体的应用
US11634694B2 (en) Manganese peroxidase, gene thereof, and use thereof in detoxification of mycotoxin
CN110637970B (zh) 丁香醛作为参与漆酶降解霉菌毒素的介体的应用
CN109504666B (zh) 锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用
CN109136203B (zh) 一种p450bm3突变体及其在以苯或苯酚为底物合成对苯二酚中的应用
CN109370995B (zh) 锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用
CN110669745B (zh) 一种热稳定性提高的玉米赤霉烯酮降解酶突变体及其应用
Morii et al. 3-Ketosteroid-Δ1-dehydrogenase of Rhodococcus rhodochrous: sequencing of the genomic DNA and hyperexpression, purification, and characterization of the recombinant enzyme
WO2021221418A1 (ko) 알룰로스 에피머화 효소 변이체, 이의 제조방법 및 이를 이용한 알룰로스의 제조방법
CN112322599B (zh) 一种转氨酶upta、制备方法和应用
CN112301010B (zh) 一种胺氧化酶acao、制备方法和应用
CN110684754B (zh) 一种真菌毒素zen降解酶突变体及其应用
CN109486776B (zh) 锰过氧化物酶NfMnP及其编码基因和应用
CN111394336A (zh) 一种玉米赤霉烯酮水解酶及其编码基因和应用
Plagemann et al. Isolation and characterization of wild-type lipoxygenase LOXPsa1 from Pleurotus sapidus
CN110272878A (zh) 漆酶TvLac及其编码基因和应用
CN108277210B (zh) 霉烯酮水解酶zen214及编码基因和应用
CN111549007B (zh) 一种转氨酶tsta、制备方法和应用
CN111607575B (zh) 一种转氨酶phta、制备方法和应用
KR100713103B1 (ko) 뉴로스포라 크라사 유래 ｌ-카르니틴 생합성 관련 유전자를포함하는 엔테로박테리아세 속 미생물 및 이를 이용한ｌ-카르니틴의 제조방법
CN113652408A (zh) 羰基还原酶突变体及其在(r)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯合成中的应用
CN113699127B (zh) 一种提高染料脱色过氧化物酶的霉菌毒素降解率的方法
CN113699126B (zh) 染料脱色过氧化物酶StDyP用于同时降解黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的应用
KR20120053963A (ko) 야로위아 리폴리티카 유래 펩티드-ｎ-글리코시다제 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20200826

Address after: 100193 Beijing Old Summer Palace West Road, Haidian District, No. 2

Applicant after: Beijing Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Chinese Academy of Agricultural Sciences

Address before: 100081 Beijing, Zhongguancun, South Street, No. 12, No.

Applicant before: FEED Research Institute CHINESE ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant