CN109251872A - 废弃物堆肥用复合菌剂、其制备方法及废弃物堆肥方法 - Google Patents

废弃物堆肥用复合菌剂、其制备方法及废弃物堆肥方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种废弃物堆肥用复合菌剂、其制备方法及利用复合菌剂进行废弃物堆肥的方法，复合菌剂包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)。复合菌剂的微生物具有显著的木质素及纤维素分解功能，将为从废弃物堆肥腐熟阶段分离出来的微生物按比例复配的复合菌剂进行园林绿化废弃物堆肥，显著降低了堆肥产品中木质素、纤维素的含量，提高木质素、纤维素的降解率。

Description

废弃物堆肥用复合菌剂、其制备方法及废弃物堆肥方法
技术领域
本发明涉及园林绿化废弃物堆肥化处理技术，特别涉及一种复合菌剂的制备及接种于堆肥促进木质素快速降解的方法。
背景技术
随着全国城市绿化的快速发展，园林绿化废弃物如乔灌草修剪物、枯枝落叶、杂草残花等的产生量越来越大，焚烧和填埋的处理方式易造成环境污染和资源浪费，园林绿化废弃物的高效降解及资源利用成为人们的研究热点。园林绿化废弃物的主要成分为木质纤维素，它是自然界中含量最多的可再生能源物质，主要由木质素、纤维素和半纤维素相互嵌合组成，其中木质素结构复杂而不规则，又将纤维素分子包埋其中，形成一种天然屏障，是园林绿化废弃物降解的主要限制因素之一。大量的研究表明，在园林绿化废弃物降解过程中，微生物对于木质素的降解起到了关键的作用。在自然环境中，大量微生物形成微生物群落，共同作用以分解木质纤维素，促进园林绿化废弃物降解。单一微生物菌剂只能针对木质素或者纤维素，功能性较单一。然而园林绿化废弃物中包含有大量的木质素、纤维素及半纤维素，并且相互作用形成复合体，具有很强的抗分解能力。而单一的微生物不能产生所有分解其高分子物质的酶，这就限制了单一微生物菌剂对于园林绿化废弃物的分解效果。因此一种微生物对其高分子物质的分解能力是有限的，对园林绿化废弃物进行降解需要多种微生物的协同作用。
在目前的研究中，进行二次回归正交设计以优化复合菌剂配方中多种微生物的最佳配比是比较科学的方法之一。从园林绿化废弃物堆肥的腐熟阶段分离出的具有木质素及纤维素分解功能的微生物，然后将多种微生物配比成复合菌剂，在腐熟阶段开始时加入。微生物的筛选时间及添加复合菌剂的时机是腐熟期，因为在堆肥过程中，腐熟期时间最长，温度最稳定，将复合菌剂在堆肥的腐熟期时添加可以保持其最佳适应性并尽可能长的保持复合菌剂的分解效果。
发明内容
本发明的目的是针对现有废弃物堆肥处理过程中存在的技术问题，提供一种废弃物堆肥用复合菌剂、其制备方法及利用该复合菌剂进行废弃物堆肥的方法，本发明中的复合菌剂的微生物是从园林绿化废弃物堆肥的腐熟阶段分离出来，按照科学配比进行复合配制而成，具有显著的木质素及纤维素分解功能，本发明的复合菌剂在废弃物堆肥的腐熟期添加，显著降低堆肥产品中木质素、纤维素的含量，提高木质素、纤维素的降解率。
为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种复合菌剂，用于废弃物堆肥，包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)。
其中，所述复合菌剂用于废弃物堆肥的腐熟阶段，即所述复合菌剂为废弃物堆肥腐熟阶段用菌剂。
特别是，所述废弃物选择园林废弃物。
尤其是，所述园林废弃物选择树枝、树皮、草屑、花败、落叶、麦秸、芦苇、葵花秆、茅草茎、水稻秸秆、玉米芯、玉米秸秆，桃核、杏核、李核、花生壳、葵花籽壳、棉籽壳、油茶果壳，椰糠、椰壳中的一种或多种。
其中，每1ml所述的复合菌剂中所述芽孢杆菌B1、芽孢杆菌B2、构巢曲霉的菌落数之比为(0.05-0.2)：(6-30)：1，优选为(0.08-0.165)：(6.6-22.5)：1，进一步优选为0.165:22.5:1。
特别是，每1ml所述的复合菌剂中所述微生物芽孢杆菌B1、芽孢杆菌B2、构巢曲霉的菌落数为(35-50)×107cfu，优选为(38-48)×107cfu，进一步优选为 47.33×107cfu。
本发明所述微生物芽孢杆菌经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，与genebank注册号为NR102783的细菌16s rDNA基因序列一致，同时结合生理及生化指标相同，鉴定为同一菌株；本发明的苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)，与 genebank注册号为AM293345的细菌16s rDNA基因序列一致，同时结合生理及生化指标相同，鉴定为同一菌株；本发明的构巢曲霉鉴定为构巢曲霉(Aspergillus nidulans)，与genebank注册号为FJ878643的真菌rDNA ITS基因序列一致，同时结合生理及生化指标，鉴定为同一菌株
木质素与纤维素的分解需要酶进行反应，而分解酶普遍具有专一性，即一种酶只对木质素或者纤维素的分解起作用。由单一微生物制备的菌剂往往只包含分解功能单一的酶。而先前研究已经表明，植物体内木质素与纤维素并不是独立存在的，而是木质素围绕包裹在纤维素形成木质纤维素。由于木质素的存在，纤维素分解酶无法充分的与纤维素接触反应，这就制约了园林绿化废弃物的分解效率，延长了发酵的时间。
而本发明中3株微生物，曲霉菌分泌的木质素分解酶和枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌分泌的纤维素降解酶构成分解酶酶系，木质素分解酶分解了木质纤维素中的木质素，扩大了纤维素与纤维素分解酶的接触面积，两种功能酶相互配合，可以显著提高绿化废弃物中木质素、纤维素的分解效率，降低堆肥产品中木质纤维素的含量，提高腐熟程度。
本发明另一方面提供一种复合菌剂的制备方法，包括如下步骤：
1)将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏芸金杆菌(Bacillusthuringiensis)分别接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中，进行扩繁培养，分别获得枯草芽孢杆菌菌液、苏云金杆菌菌液；
2)将构巢曲霉(Aspergillus nidulans)接种至PDA液体培养基中，进行扩繁培养，制得构巢曲霉菌液；
3)将芽孢杆菌菌液、苏云金杆菌菌液、构巢曲霉菌液混合，即得复合菌剂。
其中，步骤1)中所述的牛肉膏蛋白胨液体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g， NaCl5g，水1L，pH：天然，121℃高温灭菌30min。灭菌冷却后备用。
特别是，所述枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌的扩繁培养条件为：培养温度为 20-35℃，优选为(28±2)℃；培养时间为60-80h，优选为72h。
其中，步骤2)中所述PDA液体培养基：马铃薯滤液：1L，葡萄糖：20.0g，KH2PO4：3.0g，MgSO4·7H2O：1.5g，维生素B1：0.1g，pH：天然，121℃高温灭菌30min。灭菌冷却后备用。
特别是，所述构巢曲霉(Aspergillus nidulans)的扩繁培养条件为：培养温度为20-35℃，优选为(28±2)℃；培养时间为40-60h，优选为48h。
特别是，步骤1)中扩繁培养的枯草芽孢杆菌菌液中每克枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌菌落数为106cfu以上；每克苏云金杆菌菌液中苏云金杆菌菌落数为 108cfu以上；步骤2)中扩繁培养的构巢曲霉菌液每克构巢曲霉菌液中菌落数为 107cfu以上。
尤其是，步骤3)中所述复合菌剂中所述枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、构巢曲霉的菌落数之比为(0.05-0.2)：(6-30)：1，优选为(0.08-0.165)：(6.6-22.5)：1，进一步优选为0.165:22.5:1。。
特别是，步骤3)中所述复合菌剂中微生物枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、构巢曲霉的菌落数为(35-50)×107cfu，优选为(38-48)×107cfu，进一步优选为47.33×107cfu。
本发明又一方面提供利用上述复合菌剂进行废弃物堆肥处理方法，包括如下步骤：
A)向废弃物中添加发酵促进剂鼠李糖脂、竹醋液或木醋液，并调节废弃物含水率至60-70％后，堆置，进行第一阶段的堆肥发酵处理，其中，每3天测定一次堆体温度，当温度超过60℃时进行翻堆；如果温度未超过60℃，则5-7天翻堆一次；当连续两次测定的堆体温度等于环境温度时，获得第一阶段堆肥产品；
B)向第一阶段堆肥产品中添加复合菌剂，进行腐熟处理。
其中，步骤A)中还包括调节废弃物的C/N比为20-35之后，再添加所述的发酵促进剂。
特别是，所述发酵促进剂鼠李糖脂的添加量为每100kg干废弃物中加入鼠李糖脂100-200g，优选为150g；每100kg干废弃物加入竹醋液1-5ml，优选为2ml。
尤其是，在所述第一阶段堆肥发酵处理过程中，从堆肥开始时计时，每5-7天向堆体中施加一次发酵促进剂，优选为每6天施加一次发酵促进剂。
特别是，每次每100kg干原料(废弃物)加入鼠李糖脂100-200g，优选为150g；竹醋液或木醋液1-5ml，优选为2ml。
尤其是，将所述的鼠李糖脂与水混合，配制成鼠李糖脂溶液后，再添加到堆体中；将所述竹醋液或木醋液与水混合均匀，配制成竹醋液溶液或木醋液溶液后在添加到堆体中。
特别是，所述鼠李糖脂溶液的浓度为100-200g/L，优选为150g/L；所述竹醋液或木醋液溶液的浓度为1-5ml/L，优选为2ml/L。
尤其是，步骤A)中优选每6天翻堆一次。
其中，步骤B)中所述复合菌剂的添加量为1％-5％，按体积比计，优选为1％。
特别是，所述腐熟处理过程中每3-6天测定一次堆体温度，当连续两次测定的堆体温度等于环境温度时，腐熟处理结束。
尤其是，所述腐熟处理时间为25-35天，优选为30天，腐熟处理至连续两次测得的堆体温度与环境温度一致。腐熟后的堆体呈黑褐色，无异味。
其中，所述复合菌剂中微生物枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、构巢曲霉的菌落数为(35-50)×107cfu/ml，优选为(38-48)×107cfu，进一步优选为47.33×107cfu/ml。
特别是，所述复合菌剂中所述枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、构巢曲霉的菌落数之比为(0.05-0.2)：(6-30)：1，优选为(0.08-0.165)：(6.6-22.5)：1，进一步优选为0.165:22.5:1。
其中，所述复合菌剂按照如下方法制备而成：
1)将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏芸金杆菌(Bacillusthuringiensis)分别接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中，进行扩繁培养，分别获得枯草芽孢杆菌菌液、苏云金杆菌菌液；
2)将构巢曲霉(Aspergillus nidulans)接种至PDA液体培养基中，进行扩繁培养，制得构巢曲霉菌液；
3)将芽孢杆菌菌液、苏云金杆菌菌液、构巢曲霉菌液混合，即得复合菌剂。
特别是，步骤1)中扩繁培养的枯草芽孢杆菌菌液中每克枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌菌落数为106个以上；每克苏云金杆菌菌液中苏云金杆菌菌落数为108个以上；步骤2)中扩繁培养的构巢曲霉菌液每克构巢曲霉菌液中菌落数为107个以上。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和好处：
1、本发明的复合菌剂中的微生物从废弃物堆肥腐熟阶段分离纯化获得，具有显著的木质素及纤维素分解功能。
2、利用本发明的复合菌剂进行堆肥，对废弃物进行发酵处理过程中，复合菌剂的使用量少。
3、本发明的复合菌剂在废弃物堆肥的腐熟期添加，显著降低堆肥产品中木质素、纤维素的含量，提高木质素、纤维素的降解率。
4、本发明的复合菌剂的配制方法简单，实用条件温和，适宜推广应用。
5、本发明的复合菌剂中的微生物在自然堆肥进程中筛选获得，对环境扰动作用小。
6、本发明的复合菌剂的使用方法可以使堆体二次升温，延长了堆体的高温期，提高了木质纤维素的降解率。
附图说明
图1为本发明复合菌剂堆肥过程中堆体的温度和环境温度测定结果图；
图2为本发明复合菌剂堆肥过程中堆体的EC值测定结果图；
图3为本发明复合菌剂堆肥过程中堆体的木质素降解率测定结果图；
图4为本发明复合菌剂堆肥过程中堆体的纤维素降解率测定结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
下述实施例中的方法，无特别说明，均为常规方法。本发明实施例中所采用的竹醋液购自桂林大自然生物材料有限公司。
实施例1复合菌剂微生物的筛选
此阶段堆肥实验是为了在腐熟阶段筛选微生物。该试验于北京植物园堆肥厂进行。
1.1堆肥处理
原料主要为来自北京植物园的夏季常见树种的枝叶(包括但不限于白蜡、杨树、柳树、国槐、刺槐)。枝叶粉粹为粒径约20mm的碎料，均匀的平铺于地面上，实验用堆肥原料从碎料中收集，然后堆积至1立方米的圆锥形堆(基底面积为3平方米，高度为1米)。
子样本从堆体的顶部，中部，底部取出并混合成为一个复合样品进行化学分析(TOC，总碳)：47.8％，TN(总氮)：1.4％，C/N：34.14)。
然后使用尿素将C/N调整为25(通常为20-35)，同时将水分含量调节至60％ -70％，并保持在此水平范围内。
将150克鼠李糖脂和2毫升竹醋液分别溶于1L和2L水中，从堆肥第一天起，每6天一次，每次按照每100kg干原料加入鼠李糖脂溶液(1L)和竹醋液(2L)的比例施入，共添加6次。
堆体中心的温度由温度计每3天测定一次。温度超过60℃，则进行翻堆处理，如果温度未超过60℃，则6天翻堆一次。
当连续两次测定堆体的温度等于环境温度时，从堆体的上、中、下三个部位取样，进行后续的菌种筛选工作。
1.2微生物筛选
从堆体的上中下三个部位取样，混合均匀，称取10g置于装有90ml无菌水的锥形瓶(100ml)中，在200rpm下振荡30分钟并静置15分钟；
取上清液(即浸提液)从10倍稀释到105倍，然后吸取每个浓度的浸提液0.1ml 分别涂布在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(培养基配方：蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 5g，琼脂15g，水1L，pH：天然)和玫瑰红琼脂培养基(培养基配方：蛋白胨5g， K2HPO4 1.0g，玫瑰红钠0.0133g，MgSO4·7H2O 0.5g，葡萄糖10g，琼脂15g，水1L， pH天然)上，于28℃(通常为20-35℃)下培养。
在培养基上出现明显的菌落后，将每个形态不同的菌落转接到新培养基上培养至单菌落出现；然后将单菌落转移至液体培养基上，其中：细菌转移接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基(牛肉膏：5g，蛋白胨：10g，氯化钠：5g，水：1L，pH：天然， 121℃高温灭菌30min)；真菌转移接种至马铃薯葡萄糖液体培养基(马铃薯滤液： 1L，葡萄糖：20.0g，KH2PO4：3.0g，MgSO4·7H2O：1.5g，pH：天然)，在200rpm， 28℃的条件下培养。
液体培养基培养72h(通常为60-80h)后，每个液体培养基吸取菌液10μl，分别接种到表面分别放置有滤纸的选择性培养基A、B、C上(滤纸直径6mm)，然后将接种了微生物的培养基置于(28±2)℃条件下培养，确定不同微生物是否具有纤维素降解能力、具有分泌锰过氧化物酶能力或生产漆酶能力，其中：
选择性培养基A的配方如下：CMC-Na：10.0g，K2HPO4：1.0g，MgSO4·7H2O： 0.1g，FeSO4·7H2O：0.1g，MnSO4：5×10-4g，蛋白胨：10.0g，酵母提取物：10.0g，水：1.0L，pH：天然，121℃高温灭菌30min；
选择性培养基B的配方如下：0.1g苯胺蓝加入到1L PDA(马铃薯葡萄糖琼脂) 培养基，121℃高温灭菌30min；
选择性培养基C的配方如下：0.4ml愈创木酚加入1L PDA培养基，121℃高温灭菌30min；
每天观察所有培养基，在选择性培养基B中出现淡蓝色变色圈，或者在选择性培养基C中出现红色变色圈的微生物确认为目标微生物。继续培养2天后，将1g/L 刚果红溶液加入到选择性培养基A的菌落表面。30分钟后，培养基用1mol/L氯化钠溶液洗涤。边缘褪色的微生物则认为是目标微生物。
所有被选择出的目标微生物进行拮抗试验，即将3个直径6mm的滤纸片呈正三角形的相应位置放置在PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基，121℃高温灭菌 30min)中，两两滤纸片间隔3-5cm，从各个液体培养基吸取不同的菌液10μl，然后将其接种在滤纸片上，培养基置于(28±2)℃条件下培养，观察菌株之间是否有抑菌圈产生，验证被选择出的目标微生物之间是否存在拮抗作用。
共筛选出三株微生物，分别是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)；其中枯草芽孢杆菌记为B1菌，苏芸金杆菌记为B2菌，构巢曲霉记为A菌。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)三株微生物经鉴定均为已知菌株。
本发明所述微生物芽孢杆菌经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，与genebank注册号为NR102783的细菌16s rDNA基因序列一致，同时结合生理及生化指标相同，鉴定为同一菌株；本发明的苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)，与 genebank注册号为AM293345的细菌16s rDNA基因序列一致，同时结合生理及生化指标相同，鉴定为同一菌株；本发明的构巢曲霉鉴定为构巢曲霉(Aspergillus nidulans)，与与genebank注册号为FJ878643的真菌rDNA ITS基因序列一致，同时结合生理及生化指标，鉴定为同一菌株
所有的菌液取0.7毫升，加入体积比50％的甘油置于2毫升试管中，于-20℃以下保存。
实施例2 3株菌株的扩繁培养
1)枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌的扩繁培养
将筛选的B1菌和B2菌分别接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基(蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 5g，水1L，pH：天然，121℃高温灭菌30min)中，接种量为体积比的0.1％(即1L三角瓶中装入细菌培养液1ml)，在培养温度(28±2)℃(通常为 20-35℃)，转速180rpm的条件下，培养72h(通常为60-80h)；将培养好的液体菌种以体积比为5％的接种量接种至装有牛肉膏蛋白胨液体培养基的5L发酵罐中，通气培养，培养温度(28±2)℃(通常为20-35℃)，搅拌转速45rpm，通气量1m3/L，培养时间28h(通常为20-35h)，分别获得B1菌液、B2菌液；采用菌株计数法计算菌落数，其中每毫升B1菌液中菌落数为1×106cfu；每毫升B2菌液中菌落数为1 ×107cfu以上。
2)构巢曲霉的扩繁培养
将纯化培养的构巢曲霉接种到PDA固体培养基(马铃薯滤液：1L，葡萄糖：20.0g，KH2PO4：3.0g，MgSO4·7H2O：1.5g，维生素B1：少量，琼脂：15g，pH：天然， 121℃高温灭菌30min)。吸取真菌培养液1ml，涂布在PDA固体培养基中，在 (28±2)℃(通常为20-35℃)的条件下培养48h(通常为40-60h)。用接种针挑取部分培养好的真菌菌丝体，加入PDA液体培养基(马铃薯滤液：1L，葡萄糖：20.0g， KH2PO4：3.0g，MgSO4·7H2O：1.5g，维生素B1：0.1g)，在培养温度(28±2)℃(通常为20-35℃)，转速180rpm的条件下，培养48h(通常为40-60h)，获得A菌液，采用菌株计数法计算菌落数，其中每毫升A菌液中菌落数为1×108cfu以上。
采用菌株计数法计算扩繁培养后的三株微生物的菌落数，每克菌液的菌落数在106cfu以上，则完成了扩繁培养。
实施例3 3株菌株用量筛选
1)按照二次回归正交设计配制复合菌剂
如表1、2，按照二次回归正交试验的码值表及实验设计表确定各个实验组中三种菌液的配比添加量，菌液配比添加量如表3。
按照如表1的设计方案，进行二次正交回归实验，确定复合菌剂中三株微生物的配比用量。
表1每种稀释的菌液的码值及对应添加量
表2二次回归正交设计表
按照表1、表2设计配制的15种复合菌剂中3种微生物菌液的体积用量如表3：
表3复合菌剂中各菌液的添加量
在堆肥的高温期结束，堆体温度与室温一致时，将配置好的复合菌剂分别加入到堆体中，继续堆肥发酵，直到堆体温度与室温再次一致时，堆体达到腐熟状态，测定堆体中木质素与纤维素的整体降解率，根据测定结果确定复合菌剂中3株菌株的配比。
2)复合菌剂的堆肥处理
2-1)废弃物的预处理
收集北京植物园的夏季常见树种的枝叶(包括但不限于白蜡、杨树、柳树、国槐、刺槐)，粉粹为粒径约20mm的碎料，均匀的平铺于地面上，实验用堆肥原料从碎料中收集，然后堆积至1立方米的圆锥形堆(基底面积为3平方米，高度为1米)；
使用尿素调节废弃物碎料的C/N为25，同时水分含量至60％-70％，并保持在此水平范围内；测定废弃物中木质素、纤维素的初始含量。
2-2)第一阶段堆肥处理
将150克鼠李糖脂和2毫升竹醋液分别溶于1L和2L水中，将鼠李糖脂溶液、竹醋液溶液与废弃物混合均匀并对成堆，进行第一阶段堆肥处理，其中从堆肥第一天起，每6天添加一次鼠李糖脂溶液、竹醋液溶液，每次按照每100kg干原料加入鼠李糖脂溶液(1L)和竹醋液(2L)的比例施入，共施入6次；
堆体中心的温度由温度计每3天测定一次，温度超过60℃，则进行翻堆处理，如果温度未超过60℃，则6天(通常5-7天)翻堆一次；当连续两次测定的温度等于环境温度时，获得第一阶段堆肥产品，然后从堆体的上中下三个部位取样并混合均匀，获得第一阶段堆肥样品；
2-3)复合菌剂堆肥处理(腐熟处理)
在500ml锥形瓶中加入100g第一阶段堆肥样品，调节水分至60％-70％，按照表1及表2中的实验方法加入菌液，菌液的具体加入量如表3所示，然后放入培养箱中培养，直至连续两次测定的堆肥样品的温度与环境温度相一致，堆肥腐熟处理结束，测定堆肥结束时木质素、纤维素的含量，计算木质素和纤维素的整体降解率 (即木-纤降解率)，计算结果如表2所示；
将测定的木-纤降解率和枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、构巢曲霉的用量采用线性回归法进行拟合处理，拟合回归函数为：
Y＝11.9862+2.2599Z1+1.3334Z2+3.7161Z3+0.1302Z1*Z3+0.1555Z2*Z3-0.3604Z1 2-0.1528Z2 2-0.6669Z3 2
其中，拟合函数中Y表示木质素-纤维素的整体降解率，％；Z1，Z2，Z3分别表示枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、构巢曲霉菌菌液的用量，ml。
对拟合函数进行偏导运算，得到Z1＝3.8397ml,Z2＝6.3480ml,Z3＝3.9009ml，此时木质素-纤维素分解率最高。
二次回归正交设计确定配制复合菌剂中三种微生物菌液的用量范围如下：B1菌菌液的添加范围为3-4ml，B2菌菌液的添加范围为6-7ml，A菌菌液的添加范围为 3-5ml，即本发明复合菌剂中B1菌的浓度为106cfu/ml以上；B2菌的浓度为108cfu/ml 以上；A菌的浓度为107cfu/ml以上。
本实施例中芽孢杆菌属B1菌的添加菌液为3.84ml，芽孢杆菌属B2菌的添加菌液为6.35ml，构巢曲霉A的的添加菌液为3.90ml，配制的复合菌剂中菌浓度分别为B1＝3.3×106cfu/ml，B2＝4.5×108cfu/ml，A＝2×107cfu/ml，芽孢杆菌B1、芽孢杆菌 B2、构巢曲霉的菌落数之比为0.165:22.5:1，废弃物的木质素和纤维素降解率最高。
实施例3A复合菌剂的制备
除了配制的复合菌剂中芽孢杆菌属B1菌的添加菌液为3ml，芽孢杆菌属B2菌的添加菌液为6ml，构巢曲霉A的的添加菌液为4ml，配制的复合菌剂中菌浓度分别为B1＝2.7×106cfu/ml，B2＝4×108cfu/ml，A＝2×107cfu/ml；芽孢杆菌B1、芽孢杆菌B2、构巢曲霉的菌落数之比为0.1:30:1。
实施例3B复合菌剂的制备
除了配制的复合菌剂中芽孢杆菌属B1菌的添加菌液为5ml，芽孢杆菌属B2菌的添加菌液为6ml，构巢曲霉A的的添加菌液为2ml，配制的复合菌剂中菌浓度分别为B1＝4×106cfu/ml，B2＝3.3×108cfu/ml，A＝5×107cfu/ml；芽孢杆菌B1、芽孢杆菌B2、构巢曲霉的菌落数之比为0.2:20:1。
实施例4复合菌剂的效果评估实验
1)、绿化废弃物预处理
将收集的北京夏季常见绿化树种的枝叶(包括但不限于白蜡、杨树、柳树、国槐、刺槐)粉碎为粒径约20mm的碎料，均匀的堆在地面上，随机的收集大约15m3的碎料并充分混合均匀；然后将混合好的园林绿化废弃物碎料堆积成1立方米的圆锥形堆(底面面积为3平方米，高度为1米)；
使用尿素将废弃物碎料的C/N调整为25，同时将水分含量调节至60％-70％，并保持在此水平范围内；
本发明中除了使用尿素调节废弃物颗粒C/N比之外，还可以使用畜禽粪便(如牛粪、鸡粪、马粪等)来增加废弃物的含氮量。本发明实施例中C/N除了调整为25 之外，C/N调整为20-35均适用于本发明。
测定废弃物堆肥处理之前，废弃物中木质素、纤维素的初始含量。
2)、第一阶段堆肥处理
将鼠李糖脂、竹醋液分别溶于水中，制成鼠李糖脂溶液、竹醋液溶液，其中，鼠李糖脂溶液的浓度为150g/L，竹醋液溶液的浓度为1ml/L；即每1L水中溶解150g 鼠李糖脂；每2L水中溶解2ml竹醋液；
向废弃物堆体中加入堆肥促进剂鼠李糖脂溶液和竹醋液溶液，从堆肥开始每6 天(通常为5-7天)添加一次，按照每次每100kg废弃物(干重)加入鼠李糖脂溶液(1L)和竹醋液溶液(2L)的比例施入，即每次每100kg废弃物(干重)加入鼠李糖脂150g、竹醋液2ml，共添加6次；混合均匀后，进行第一阶段堆肥处理，采用温度计测定堆体中心温度，将温度计***堆体正中心50cm-70cm深，每3天测定一次，温度超过60℃，则进行翻堆，如果温度未超过60℃，则6天(通常为5-7天) 翻堆一次；并且在第一阶段堆肥处理过程中，从堆肥第一天起，每6天(通常为5-7 天)一次，按照每100kg废弃物(干重)加入1L鼠李糖脂溶液和2L竹醋液的比例施入发酵促进剂，共添加6次；第一阶段堆肥处理至连续两次测定的温度等于环境温度时，获得第一阶段堆肥产品；
在第一阶段堆肥处理过程中每3天从各个堆体的上、中、下三个部位取样，并充分混合，对混合均匀的样品测定其EC值、木质素、纤维素含量，并计算木质素、纤维素的降解率，测定结果如图2-4、表3-4；堆体温度和环境温度测定结果如图1 所示。
本发明实施例中处理竹醋液之外，还可以使用木醋液替换竹醋液。
本发明中鼠李糖脂溶液、竹醋液溶液的浓度分别以150g/L、1ml/L为例进行说明，其他鼠李糖脂溶液浓度100-200g/L；竹醋液溶液浓度1-5ml/L均适用于本发明。
本发明实施例中每次添加的鼠李糖脂的量以每100kg废弃物(干重)加入鼠李糖脂150g为例进行说明，其他每100kg废弃物(干重)加入鼠李糖脂100-200g均适用于本发明；每次添加的竹醋液的量以每100kg废弃物(干重)加入竹醋液2ml 为例进行说明，其他每100kg废弃物(干重)加入竹醋液1-5ml均适用于本发明。
废弃物堆肥第1天测定废弃物的其EC值、木质素、纤维素含量，记为废弃物初始EC值、木质素含量、纤维素含量；
其中，采用电导率计测定样品的EC值，具体测定方法如下：将本实施例每3天从堆体中取出的样品风干后与水采用固液比为1:10(W/V)的比例混合，振荡30min 后离心过滤，使用电导率计来测定滤液中的EC值，测定结果如图2所示；
木质素降解率的测定方法如下：
将实施例中每3天从堆体中取出的样品过0.15mm筛，去过筛样品0.075g(通常为0.05～0.1g)于50ml离心管中，同时做空白，加入质量分数1％醋酸10ml，浸泡 30min后，加质量分数1％醋酸至20ml，摇匀，8000rpm离心5min，用移液枪吸去上清液，沉淀中再加入质量分数1％醋酸至20ml刻度处，离心5min，用移液枪吸去上清液。将离心管烘干后向沉淀中加入4ml乙醇-***混合液(体积比1:1)，浸泡 8h后用移液枪吸去上清液，再向沉淀加入4ml乙醇、***混合液(体积比1:1)浸泡30min，用移液枪吸去上清液，再向沉淀中加入10ml水，摇匀静置30min后用移液枪吸去上清液。将离心管水浴蒸干，然后加入质量分数72％的硫酸3ml，摇匀后静置16h。加蒸馏水10ml，摇匀后沸水浴5min，再加5ml蒸馏水和0.5ml质量分数10％的氯化钡溶液，摇匀后离心5min，用移液枪吸去上清液。沉淀中再加入蒸馏水至20ml处，离心后用移液枪吸去上清液，重复两次。水浴蒸干。沉淀中加入10ml 质量分数为10％的硫酸、10ml 0.1mol/L重铬酸钾，直接把离心管沸水浴15min，然后全部倒入干净的锥形瓶中，用少量蒸馏水清洗离心管，洗液全部转入锥形瓶中。加入5ml质量分数20％的KI溶液，1ml质量分数0.5％的淀粉溶液，用0.2mol/L的硫代硫酸钠滴定至蓝色，按照公式(1)计算样品中木质素含量(X)，
X＝k(a-b)/(n×48) (1)
公式(1)中：k为硫代硫酸钠浓度：mol/L；a为空白滴定所消耗硫代硫酸钠体积：ml；b为溶液滴定所消耗硫代硫酸钠体积：ml；n为样品质量：g；X为木质素含量百分比；
木质素分解率按照公式(2)计算，公式(2)如下：
纤维素降解率的测定方法如下：
将实施例中每3天从堆体中取出的样品过0.15mm筛，去过筛样品0.075g(通常为0.05～0.1g)于50ml离心管中，同时做空白，加入乙酸-硝酸混合液(体积比1:1) 5ml，盖上盖子在沸水浴中加热30min，冷却后全部转移至50ml离心管中，加蒸馏水稀释至20ml刻度线，以8000rpm离心15min，用移液枪吸去上清液，再加蒸馏水至20ml刻度线，离心用移液枪吸去上清液，重复两次。将沉淀水浴蒸干，向沉淀中加入10ml质量分数为10％的硫酸、10ml0.1mol/L重铬酸钾，直接把离心管沸水浴 15min，然后全部倒入干净的锥形瓶中，用少量蒸馏水清洗离心管，洗液全部转入锥形瓶中。加入5ml质量分数20％的KI溶液，1ml质量分数0.5％的淀粉溶液，用0.2mol/L 的硫代硫酸钠滴定至蓝色；按照公式(3)计算样品中纤维素含量(Y)，
Y＝K(A-B)/(N×48) (3)
公式(1)中：K为硫代硫酸钠浓度：mol/L；A为空白滴定所消耗硫代硫酸钠体积：ml；B为溶液滴定所消耗硫代硫酸钠体积：ml；N为样品质量：g；Y为纤维素含量百分比；
纤维素分解率按照公式(4)计算，公式(4)如下：
3)、腐熟处理
当连续两次测定的温度等于环境温度(28±2)时，按体积比为1％(通常为 1％-5％)的比例加入复合菌剂，继续进行废弃物发酵处理第二阶段，即堆肥腐熟处理，其中复合菌剂中菌液浓度分别为B1＝3.3×106cfu/ml，B2＝4.5×108cfu/ml，A＝2 ×107cfu/ml；芽孢杆菌B1、芽孢杆菌B2、构巢曲霉的菌落数之比为0.165:22.5:1；
本实施例中堆肥处理第一阶段过程中，在第30天为两次测定的温度等于环境温度的第二次测定时间，从第30天向堆肥堆体中按照1％的体积比加入复合菌剂，进行废弃物堆肥的腐熟处理。
在腐熟处理过程中，堆体温度先升高后逐渐降低至与环境温度相同，当堆体温度与环境温度相一致时，堆肥处理结束，得到废弃物堆肥产品。在腐熟处理过程中采用温度计测定堆体中心温度，将温度计***堆体正中心50cm-70cm深，每3天测定一次，同时记录周围环境温度，每六天翻堆一次；堆体温度和环境温度测定结果如图1所示。每3天从堆体的上、中、下三个部位取样，并充分混合均匀，对混合均匀的样品测定其EC值、木质素含量、纤维素含量，计算木质素、纤维素分解率，测定结果如图2-4、表3-4；
本实施例中添加菌剂腐熟处理30天，直到堆体温度不在大幅度变化，与室温基本一致，堆体本身呈黑色，无异味，没有明显的昆虫活动迹象，无虫卵。
制备的废弃物堆肥产品颜色呈现黑褐色、无臭味、物理形态松散良好，堆肥成品质量高、性状稳定性好。
堆肥处理第二阶段，不加入任何接种物的CK处理作为实验对照。全部处理重复三次，实验持续60天。每三天对各个堆体测量温度，将温度计***堆体正中心 50cm-70cm深，同时记录周围环境温度，每六天翻堆一次。每三天从各个堆体的上中下三个部位充分混合后取样。用于观察温度变化、EC值变化及木质素、纤维素降解率来说明复合菌剂的优劣。
实施例5复合菌剂的效果评估实验
1)、绿化废弃物预处理
与实施例4相同。
2)、第一阶段堆肥处理
与实施例4相同。
3)、腐熟处理
除了按照3％的体积比加入复合菌剂，复合菌剂中菌液浓度分别为B1＝2.7×106cfu/ml，B2＝4×108cfu/ml，A＝2×107cfu/ml；枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、构巢曲霉的菌落数之比为0.1:30:1之外，其余与实施例3相同。
本实施例中腐熟处理30天(通常为25-40天)，直到堆体温度不在大幅度变化，与室温基本一致，堆体本身呈黑色，无异味，没有明显的昆虫活动迹象，无虫卵，制得废弃物堆肥产品。
制备的废弃物堆肥产品颜色呈现黑褐色、无臭味、物理形态松散良好，堆肥成品质量高、性状稳定性好。
制备的废弃物堆肥产品EC值为0.62；木质素分解率到达了24.05％，纤维素分解率到达了41.25％。
实施例6复合菌剂的效果评估实验
1)、绿化废弃物预处理
与实施例4相同。
2)、第一阶段堆肥处理
除了发酵促进剂使用木醋液替代竹醋液之外之外，其余与实施例4相同。
3)、腐熟处5％的体积比加入复合菌剂，复合菌剂中菌液浓度分别为B1＝4×106cfu/ml，B2＝3.3×108cfu/ml，A＝5×107cfu/ml；芽孢杆菌B1、芽孢杆菌B2、构巢曲霉的菌落数之比为0.2:20:1之外，其余与实施例3相同。
本实施例中腐熟处理30天(通常为25-40天)，直至堆体温度不在大幅度变化，与室温基本一致，堆体本身呈黑色，无异味，没有明显的昆虫活动迹象，无虫卵，制得废弃物堆肥产品。
制备的废弃物堆肥产品颜色呈现黑褐色、无臭味、物理形态松散良好，堆肥成品质量高、性状稳定性好。
制备的废弃物堆肥产品EC值为0.58；木质素分解率到达了24.10％，纤维素分解率到达了45.02％。
对照例1
除了腐熟处理过程中不添加复合菌剂之外，其余与实施例4相同。
表3废弃物堆肥处理过程中木质素分解率
表4废弃物堆肥处理过程中纤维素分解率
从测定结果可知：
在堆肥处理第一阶段(即高温期)结束后加入本发明的复合菌剂，可以观察到菌剂处理的堆体在第30天施用复合菌剂后有一个明显的温度回升过程。堆体的二次升温可以提高木质素分解酶和纤维素分解酶的酶活性，使酶促分解反应再次发生，使木质素和纤维素得到二次降解。
EC值表示可溶性盐浓度，堆肥达到腐熟后，发现添加了复合菌剂的实验组EC 值处于0-0.8ms/cm之间，说明添加了复合菌剂的堆体可溶性盐分没有过高，不会对植物产生盐分毒害作用。接种复合菌剂的堆体达到腐熟状态时，木质素分解率到达了24％，纤维素分解率到达了42％，木质素和纤维素的分解率比对照组的分解率分别高出了8％及14％。
综上所述，本实验所设计的复合菌剂接种堆肥后，可以使堆体二次升温发酵，提高木质素和纤维素分解率，且腐熟成品颜色呈现黑褐色、无臭味、物理形态松散良好，堆肥成品质量高、性状稳定性好，已经达到了无公害化和减量化的要求。
实验设计出的复合菌剂处理园林绿化废弃物，包含木质素分解菌和纤维素分解菌，对于木质素和纤维素的分解有明显的效果，可以加快废弃物堆肥进程，切实解决城市园林绿化所带来的大量园林绿化废弃物，实现资源可持续利用，具有很高的发展前景。

Claims (10)

1.一种复合菌剂，用于废弃物堆肥，其特征是，包括枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)。
2.如权利要求1所述的复合菌剂，其特征是，每1ml所述的复合菌剂中所述芽孢杆菌、苏云金杆菌、构巢曲霉的菌落数之比为(0.05-0.2)：(6-30)：1。
3.一种复合菌剂的制备方法，其特征是，包括如下步骤：
1)将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)分别接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中，进行扩繁培养，分别获得枯草芽孢杆菌菌液、苏云金杆菌菌液；
2)将构巢曲霉(Aspergillus nidulans)接种至PDA液体培养基中，进行扩繁培养，制得构巢曲霉菌液；
3)将芽孢杆菌菌液、苏云金杆菌菌液、构巢曲霉菌液混合，即得复合菌剂。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征是，每1ml由所述枯草芽孢杆菌菌液、苏云金杆菌菌液、构巢曲霉菌液混合配制的复合菌剂中所述枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、构巢曲霉的菌落数为(35-50)×107cfu。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征是，步骤3)中所述枯草芽孢杆菌菌液、苏云金杆菌菌液、构巢曲霉菌液中的菌落数之比为(0.05-0.2)：(6-30)：1。
6.一种利用如权利要求1所述复合菌剂进行废弃物堆肥处理方法，其特征是，包括如下步骤：
A)向废弃物中添加发酵促进剂鼠李糖脂、竹醋液或木醋液，并调节废弃物含水率至60-70％后，堆置发酵，其中，每3天测定一次堆体温度，当温度超过60℃时进行翻堆；如果温度未超过60℃，则5-7天翻堆一次；当连续两次测定的堆体温度等于环境温度时，获得第一阶段堆肥产品；
B)向第一阶段堆肥产品中添加复合菌剂，进行腐熟处理。
7.如权利要求6所述的方法，其特征是，步骤A)中还包括调节废弃物的C/N比为20-35之后，再添加所述的发酵促进剂。
8.如权利要求6所述的方法，其特征是，步骤A)中每5-7天向堆体中施加一次发酵促进剂。
9.如权利要求6所述的方法，其特征是，每次每100kg干原料(废弃物)加入鼠李糖脂100-200g；竹醋液或木醋液1-5ml。
10.如权利要求6所述的方法，其特征是，步骤B)中所述复合菌剂的添加量为1％-5％，按体积比计。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109608239A (zh) * 2019-02-15 2019-04-12 绵阳禾创环境艺术工程有限公司 一种环境友好型园林绿化废弃物堆肥化处理方法
CN109608274A (zh) * 2019-02-15 2019-04-12 绵阳禾创环境艺术工程有限公司 基于城市园林绿化废弃物的绿色营养基制备方法
CN110983845A (zh) * 2019-12-11 2020-04-10 江西吉润花炮新材料科技有限公司 一种生物型竹纤维素提取剂、制备方法及其应用
CN115011519A (zh) * 2022-06-13 2022-09-06 黄冈师范学院 一种降解菌糠的复合菌剂、一种菌糠肥料及其制备方法
CN115477559A (zh) * 2022-08-15 2022-12-16 北京林业大学 一种新型土壤改良微生物菌剂及制备方法和应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009009391A2 (en) * 2007-07-06 2009-01-15 Ls9, Inc. Systems and methods for the production of fatty esters
CN103642782A (zh) * 2013-11-28 2014-03-19 南京宁粮生物工程有限公司 一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂的制备方法
CN104293694A (zh) * 2014-09-03 2015-01-21 广西博世科环保科技股份有限公司 一种污泥好氧堆肥复合菌剂的制备方法
CA2941536A1 (en) * 2014-04-30 2015-11-05 Novozymes A/S Method for reducing the dna content of a fermentation broth
CN105695367A (zh) * 2016-04-06 2016-06-22 南京农业大学 一种降解秸秆的复配菌剂fx及其应用
CN106244488A (zh) * 2016-08-25 2016-12-21 仇颖超 一种高效秸秆腐熟剂的制备方法
CN106854633A (zh) * 2017-01-14 2017-06-16 杨小波 用于有机物料堆肥的复合微生物菌剂及其制备方法
CN106888834A (zh) * 2015-12-18 2017-06-27 上海天际生态农业有限公司 一种农业废弃物资源化及其发酵产物综合利用方法
CN107177537A (zh) * 2017-07-12 2017-09-19 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 细菌菌株，微生物菌剂及其应用

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009009391A2 (en) * 2007-07-06 2009-01-15 Ls9, Inc. Systems and methods for the production of fatty esters
CN103642782A (zh) * 2013-11-28 2014-03-19 南京宁粮生物工程有限公司 一种能够抑制土传病害的秸秆腐熟剂的制备方法
CA2941536A1 (en) * 2014-04-30 2015-11-05 Novozymes A/S Method for reducing the dna content of a fermentation broth
CN104293694A (zh) * 2014-09-03 2015-01-21 广西博世科环保科技股份有限公司 一种污泥好氧堆肥复合菌剂的制备方法
CN106888834A (zh) * 2015-12-18 2017-06-27 上海天际生态农业有限公司 一种农业废弃物资源化及其发酵产物综合利用方法
CN105695367A (zh) * 2016-04-06 2016-06-22 南京农业大学 一种降解秸秆的复配菌剂fx及其应用
CN106244488A (zh) * 2016-08-25 2016-12-21 仇颖超 一种高效秸秆腐熟剂的制备方法
CN106854633A (zh) * 2017-01-14 2017-06-16 杨小波 用于有机物料堆肥的复合微生物菌剂及其制备方法
CN107177537A (zh) * 2017-07-12 2017-09-19 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 细菌菌株，微生物菌剂及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"生物防治 ", 《生物技术通报》 *
CHATURVEDI S等: "Bioaugmented composting of Jatropha de-oiled cake and vegetable waste under aerobic and partial anaerobic conditions", 《J BASIC MICROBIOL》 *
李建军等: "构巢曲霉内切纤维素酶A10在毕赤酵母中的表达及重组蛋白质的表征 ", 《生物工程学报》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109608239A (zh) * 2019-02-15 2019-04-12 绵阳禾创环境艺术工程有限公司 一种环境友好型园林绿化废弃物堆肥化处理方法
CN109608274A (zh) * 2019-02-15 2019-04-12 绵阳禾创环境艺术工程有限公司 基于城市园林绿化废弃物的绿色营养基制备方法
CN110983845A (zh) * 2019-12-11 2020-04-10 江西吉润花炮新材料科技有限公司 一种生物型竹纤维素提取剂、制备方法及其应用
CN110983845B (zh) * 2019-12-11 2022-05-24 江西吉润花炮新材料科技有限公司 一种生物型竹纤维素提取剂、制备方法及其应用
CN115011519A (zh) * 2022-06-13 2022-09-06 黄冈师范学院 一种降解菌糠的复合菌剂、一种菌糠肥料及其制备方法
CN115477559A (zh) * 2022-08-15 2022-12-16 北京林业大学 一种新型土壤改良微生物菌剂及制备方法和应用
CN115477559B (zh) * 2022-08-15 2024-05-10 北京林业大学 一种土壤改良微生物菌剂及制备方法和应用

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