CN109195620B - 用死亡受体激动剂治疗胰腺炎和疼痛的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

已经开发了用于治疗胰腺炎的死亡受体5(DR5)激动剂组合物和方法。这些组合物包括肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、其类似物和抗DR5激动性抗体。在某些实施例中，TRAIL类似物和抗死亡受体5激动性抗体对胰腺具有镇痛作用和疾病缓解作用。

Description

用死亡受体激动剂治疗胰腺炎和疼痛的组合物和方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年4月7日提交的美国临时申请号62/319,454的权益和优先权，该临时申请通过引用以其全文特此并入本文。
关于联邦政府资助的研究或开发的声明
本发明是根据由美国国防部(Department of Defense，DOD)授予的W81XWH-15-1-0301和W81XWH-15-1-0302以及由美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的R21AA023855在政府支持下进行。美国政府享有本发明的一定的权利。
背景技术
肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)是一组细胞因子受体，其被表征为经由胞外富含半胱氨酸的结构域结合肿瘤坏死因子(TNF)的能力。除神经生长因子(NGF)外，所有TNF均与原型TNF-α同源。在它们的活性形式中，大多数TNF受体在质膜中形成三聚体复合物。因此，大多数TNF受体含有跨膜结构域(TMD)，尽管一些可以被切割成可溶形式(例如TNFR1)，并且一些完全缺乏TMD(例如DcR3)。此外，大多数TNF受体需要特定的衔接蛋白，如TRADD、TRAF、RIP和FADD，用于下游信号转导。TNF受体主要参与细胞凋亡和炎症，但它们也可以参与其他信号转导途径，如增殖、存活和分化。TNF受体在哺乳动物的多种组织中表达，特别是在白细胞中。
术语死亡受体是指含有死亡结构域的那些TNF受体超家族的成员，例如TNFR1、Fas受体、DR4和DR5。它们因其在细胞凋亡(程序性细胞死亡)中的作用而得名，尽管它们现在已知具有其他功能。
术语TNF受体通常用于指识别TNF-α的超家族中的原型成员，即TNFR1和TNFR2。有27个家庭成员，包括：肿瘤坏死因子受体1、肿瘤坏死因子受体2、淋巴毒素β受体、OX40、CD40、Fas受体、诱饵受体3、CD27、CD30、4-1BB、死亡受体4(DR4)、死亡受体5(DR5)、诱饵受体1、诱饵受体2、RANK、骨保护素、TWEAK受体、TACI、BAFF受体、疱疹病毒进入介体、神经生长因子受体、B细胞成熟抗原、糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白、TROY、死亡受体6、死亡受体3和外异蛋白A2受体。
根据一些调查，急性或慢性胰腺炎是美国“胃肠疾病负担”的重要原因。慢性胰腺炎(CP)是酒精滥用的严重后果，并且其特征在于胰腺结构和功能的进行性和不可逆性破坏。CP伴有胰腺纤维化和持续的腹痛。CP的疼痛一直很难治疗。对基础生物学缺乏了解导致了各种经验方法，这些方法通常基于纯粹的解剖学基础，并且通常具有高度侵入性。
因此，对治疗胰腺炎的治疗策略存在大量未满足的需求。
本发明的一个目的是提供用于治疗胰腺炎、胰腺纤维化和胰腺疼痛的组合物。
本发明的另一个目的是提供用于治疗胰腺炎、胰腺纤维化和胰腺疼痛的方法。
发明内容
已经开发了用死亡受体激动剂(例如重组人TRAIL类似物或抗死亡受体5(DR5)激动剂抗体)治疗胰腺炎和相关障碍如疼痛的方法。重组TNF(肿瘤坏死因子)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)类似物和抗DR5抗体选择性地靶向活化的胰腺星状细胞并减少炎症、纤维发生和疼痛，并改善有需要的个体中的急性和慢性胰腺炎的胰腺功能。
治疗胰腺炎或胰腺疼痛并改善胰腺功能的方法包括向患有胰腺炎、胰腺纤维化或障碍(例如胰腺疼痛)或由患有这些疾病风险的受试者施用含有有效量的死亡受体激动剂的药物组合物。合适的死亡受体激动剂包括但不限于TRAIL-R2(死亡受体5)激动剂，如重组人(rh)TRAIL、rhTRAIL类似物、工程化TRAIL类似物、用聚合物(例如像聚(乙二醇)、共聚物和支化类似物、以及生物聚合物如透明质酸)修饰的长效TRAIL蛋白。基于TRAIL的长效制剂包括TRAIL融合蛋白、激动性抗TRAIL-R2抗体和结合TRAIL-R2的激动性小分子或肽分子。如实例3中所证明的，TRAIL-R2(DR5)而非DR4是在活化的胰腺星状细胞中诱导选择性凋亡的主要受体。
在优选的实施例中，TRAIL是rhTRAIL(即，重组人TRAIL)或其功能片段或变体，例如281个氨基酸的人TRAIL的片段。在优选的实施例中，片段具有全长281个氨基酸人形式的114至281或95至281的氨基酸序列。在优选的实施例中，长效rhTRAIL是PEG化的肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白、PEG化的TRAIL衍生物、或其任何组合。在优选的实施例中，抗死亡受体抗体是抗死亡受体5激动性抗体。在示例性方面，死亡受体激动剂含有PEG化的TRAIL类似物和抗DR5激动性抗体。
本文还提供了死亡受体激动剂和一种或多种聚乙二醇(PEG)部分或其衍生物。在一些情况下，死亡受体激动剂包括PEG化的TRAIL类似物或其衍生物。
在一方面，PEG部分或衍生物选自由以下组成的组：线性PEG、支化PEG、星形PEG、梳形PEG、树枝状PEG、PEG琥珀酰亚胺基丙酸酯、PEG N-羟基琥珀酰亚胺、PEG丙醛、PEG马来酰亚胺、线性甲氧基聚(乙二醇)(mPEG)、支化mPEG、星形mPEG、梳形mPEG、树枝状mPEG、mPEG琥珀酰亚胺丙酸酯、mPEG N-羟基琥珀酰亚胺、mPEG丙醛、以及mPEG马来酰亚胺。在一些情况下，支化PEG部分或衍生物包括单体、二聚体和/或三聚体PEG部分或其衍生物。在一些情况下，PEG部分或衍生物是三聚甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺。
PEG部分具有至少1,000道尔顿的分子量，如通过尺寸排阻色谱法或MALDI-TOF质谱法所测量的。在一些情况下，PEG部分包括平均分子量在约1,000与1,000,000道尔顿之间、平均分子量在约10,000与500,000道尔顿之间、平均分子量在约1,000与100,000道尔顿之间、最优选地在5,000与50,000道尔顿之间的PEG部分。在其他情况下，PEG部分包括平均分子量在约20,000与250,000道尔顿之间、平均分子量在约30,000与100,000道尔顿之间的PEG部分，或平均分子量在约40,000与80,000道尔顿之间的PEG部分。
还提供了含有抗DR5的组合物，为坎妥木单抗(conatumumab)、替加珠单抗(tigatuzumab)、来沙木单抗(lexatumuman)、HGS-TR2J/KMTR-2、LBY135、曲兹妥单抗(drozitumab)、TAS266、DS-8273/DS-8273a、APG880或RG7386。
示例性疾病或障碍包括急性或慢性胰腺炎、胰腺炎相关疼痛和胰腺纤维化以及纤维化相关疼痛。在一些情况下，胰腺纤维化包括胰腺中肿瘤微环境下的***形成。在示例性实施例中，纤维化障碍为纤维化相关疼痛。在一些情况下，这些方法进一步包括鉴定患有纤维化相关疼痛或有发生纤维化相关疼痛风险的患者。
合适的给药方式包括注射，包括静脉内和皮下、吸入、肺、鼻和可能的眼内注射。组合物能以0.001mg/kg至100mg/kg的剂量施用，例如0.001mg/kg、0.01mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg或100mg/kg。优选地，组合物以0.2mg/kg与20mg/kg之前的剂量或0.001mg/kg与20mg/kg之间的剂量施用。制剂以有效的剂量和时段施用，以便保护胰腺组织，减少纤维化形成，逆转胰腺纤维发生，减轻疼痛，并且使健康的胰腺组织不受伤害。在一个方面，治疗纤维化疾病或障碍包括减轻炎症。
附图说明
图1是显示死亡受体(DR)激动剂(例如TRAIL类似物或抗DR激动性抗体)在胰腺炎模型中的作用的示意图。死亡受体激动剂选择性地靶向胰腺中活化的胰腺星状细胞(PSC)，同时使其他组织不受伤害。活化的PSC是胰腺纤维化和疼痛的起源之一。通过选择性地阻断PSC活化和/或根除活化的PSC，死亡受体激动剂减少纤维化和疼痛，导致胰腺组织的修复。
图2是显示当用10、100、1,000ng/mL的TRAILPEG治疗细胞时，原代人胰岛和大鼠腺泡细胞的细胞活力百分比(％)的条形图。未检测到对正常胰腺细胞，包括原代人胰岛和胰腺腺泡细胞的毒性。将TRAILPEG(10、100、1,000ng/mL)与各种细胞一起孵育24小时，并通过MTT测定法定量细胞死亡。
图3A、3B、3C、3D、3E和3F是显示在培养的第2、4和7天由培养活化的原代人PSC指示的基因的相对表达的条形图。培养活化的原代人PSC上调Acta2(α-SMA，活化的星状细胞标记物)、纤维发生性标记物和TRAIL受体(DR5/DR4)并且对TRAIL诱导的细胞凋亡变得高度敏感。静息(第2天)和活化的PSC(第4天和第7天)的qPCR分析。相对于第2天，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图4是显示在培养的第1、2、4和7天培养活化的原代人PSC中细胞死亡百分比(％)的条形图。*P<0.05
图5是显示半胱天冬酶3/7(细胞凋亡制造者)活性的变化(倍数)的条形图，将培养活化的PSC用指定浓度马帕木单抗(抗DR4激动性抗体，0-103ng/mL)或坎妥木单抗(抗DR5激动性抗体，0-103ng/mL)进行处理。只有坎妥木单抗在活化的PSC中诱导细胞凋亡。这表明DR5而非DR4在活化的星状细胞中的TRAIL信号转导中起关键作用。相对于未处理的PSC，***P<0.001。
图6A和6B是显示DR4或DR5在静息PSC(第2天)和活化的PSC(第7天)的细胞膜上的表达谱(通过使用PE标记的死亡受体抗体的流式细胞术测量)的图。与DR4相比，DR5主要在活化的PSC的细胞表面上表达。
图7A-7E是如下条形图，这些条形图显示乙醇(EtOH)活化的原代人PSC上调Acta2(α-SMA，活化的星状细胞标记物)、纤维发生性标记物和TRAIL受体(DR5/DR4)。图3描绘了对由EtOH(30和50mM)活化的PSC进行的qPCR分析。相对于未EtOH活化的PSC，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图8A和8B是如下条形图，这些条形图显示在用TRAILPEG(1μg/mL)处理EtOH(50mM)活化的PSC之后，如通过MTT测定法定量的细胞活力(％)、以及半胱天冬酶3/7活性(细胞凋亡制造者)相对比例。只有醇活化的PSC对TRAIL诱导的细胞死亡是敏感的。相对于未EtOH活化的PSC，**P<0.01，***P<0.001。
图9是显示用不同浓度的TRAILPEG、坎妥木单抗(抗DR5激动性抗体)和马帕木单抗(抗DR4激动性抗体)处理EtOH(50mM)活化的PSC之后，定量的半胱天冬酶3/7活性(细胞凋亡制造者)的线状图。只有TRAILPEG和坎妥木单抗在EtOH活化的PSC中诱导细胞凋亡。
图10A-10E显示了在从无血清条件下的活化的PSC(PSC-CM)获得的条件培养基(CM)培养中的48小时的孵育对来自体外背根神经节(DRG)的感觉神经元的兴奋性的影响，如通过全细胞膜片钳记录所证明的。图10A是显示在用PSC-CM培养的神经元中增加的自发性和诱导型动作电位的代表性示踪图。这伴随着基强度(引起动作电位所需的电流的量)的显著降低(参见图10B)。图10C显示增强的诱发型动作电位。图10D显示增加的动作电位振幅。图10E显示降低的IA电流(对维持兴奋性很重要的瞬时Kv电流)。
图11是显示TRAILPEG处理的AP大鼠中MPO+(嗜中性粒细胞标记物)细胞数量减少的条形图。TRAILPEG处理显著减少炎症和胰腺中浸润的MPO+细胞浸润的数量。相对于Cer-PBS(未处理的AP大鼠)；*P<0.05。
图12是描绘用于在慢性胰腺炎(CP)大鼠模型中测试TRAILPEG的研究设计的时间线的图。通过给SD大鼠喂食乙醇/Lieber DeCarli流质饮食持续43天并每周五次注射雨蛙素(20μg/kg)来建立醇诱导的CP模型。将乙醇从0至36％总卡路里补充到饮食中持续一周，并从第7天开始至研究结束保持最终乙醇浓度。在第14、21、28、35和41天用雨蛙素(每小时四次，腹膜内注射)处理大鼠。从第36天开始每天进行TRAILPEG(4mg/kg，静脉内)或PBS(对照)处理持续7天。
图13A和13B是如下条形图，这些条形图显示作为马松三色(Masson’s trichrome)(胶原蛋白染色)和a-SMA(活化的PSC标记物)染色的数字图像的定量的阳性区域/领域。
图14A-14I是如下条形图，这些图显示在用PBS或TRAILPEG处理的雨蛙素诱导的和乙醇/Lieber DeCarli饮食诱导的CP大鼠(EtOH-CP)中相对于GAPDH的指定基因表达。显示了TRAILPEG对多种纤维发生性标记物的作用。TRAILPEG在雨蛙素诱导的和乙醇/LieberDeCarli饮食诱导的CP大鼠(EtOH-CP)中下调多种纤维化相关分子的mRNA(基因)水平。纤维化相关标记物的基因表达水平包括：在用TRAILPEG处理后，a-SMA、胶原蛋白1、胶原蛋白3、PDGFr、TIMP1、TIMP3、纤连蛋白、Pap和TGFβ均降低。Acta2是α-SMA的mRNA名称。TIMP是MMP的抑制剂(MMP负责胶原蛋白降解)。纤连蛋白是纤维化标记物。相对于成对喂养(对照)，##P<0.01，###P<0.001；相对于EtOH-CP/PBS，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图15是显示在用PBS或TRAILPEG处理的对照和CP大鼠(EtOH-CP)的胰腺组织中的羟脯氨酸浓度(μg/g)(胶原蛋白标记物)的条形图。与未处理的EtOH-CP相比，TRAILPEG显著降低雨蛙素诱导的和乙醇/Lieber DeCarli饮食诱导的CP大鼠(EtOH-CP)中胰腺中的羟脯氨酸水平。相对于Ctrl组，#P<0.05；相对于EtOH-CP/PBS，***P<0.001。
图16是显示在用PBS或TRAILPEG处理的健康和CP大鼠(EtOH-CP)中的响应数与VFF强度的线状图。TRAILPEG可减轻胰腺炎相关疼痛。通过利用VFF(Von Frey长丝)方法测量腹部的机械敏感性，在慢性胰腺炎(CP)大鼠模型中评估TRAILPEG对伤害感受的影响。TRAILPEG在CP模型中显示出强烈的抗伤害性功效。
具体实施方式
I.定义
“改善”意指减少、压制、减弱、减轻、阻止或稳定疾病的发展或进展。
“对照”或“参考”意指比较的标准。如本文所使用的，“与对照相比变化的”样品或受试者被理解为具有与来自正常未处理的样品或对照样品的样品在统计学上不同的水平。对照样品包括例如培养中的细胞、一种或多种实验室测试动物、或一种或多种人类受试者。选择和测试对照样品的方法在本领域技术人员的能力范围内。分析物可以是由细胞或生物体特征性表达或产生的天然存在的物质(例如，抗体、蛋白质)或由报告构建体产生的物质(例如，β-半乳糖苷酶或荧光素酶)。根据用于检测的方法，变化的量和测量值可以变化。统计显著性的确定在本领域技术人员的能力范围内，例如，来自构成阳性结果的平均值的标准差的数量。
“检测”是指鉴定有待检测的分析物的存在、缺乏或者量。
如本文所使用的，术语“诊断”是指对病理或症状进行分类、确定病理的严重性(例如，级别或阶段)、监测病理进展、预测病理的后果、和/或确定恢复的前景。
术语“有效量”和“治疗有效量”的制剂或制剂组分是指提供所需的效果的足够量的制剂或组分，单独地或组合。例如，“有效量”意指相对于未治疗的患者，改善疾病或障碍的一种或多种症状所需的单独或组合的化合物的量。用于治疗性地治疗疾病的化合物的有效量随给药方式、受试者的年龄、体重以及总体健康状况而变化。最终地，主治医生或兽医会决定适当的量以及给药方案。
“调节”意指改变(增加或减少)。通过标准技术已知方法(如本文所述的那些)检测这类改变。
“纤维化疾病或障碍”是用于在修复或反应过程中在器官或组织中逐渐形成过量纤维***的一般术语。纤维化可以发生在身体的许多组织中，通常是由于炎症或损伤导致。易受纤维化影响的器官或组织的实例包括但不限于：肺、胰腺、心脏、肝、皮肤、手指、关节、脑、骨髓、***和肠。
术语“正常量”是指在已知未被诊断有疾病或障碍的个体中正常量的复合物。可以在测试样品中测量该分子的量，并且与“正常对照水平”进行比较，利用诸如参考限、鉴别限或风险限定阈值等技术来定义截止点和异常值(例如，针对胰腺炎)。“正常对照水平”意指通常在已知未患有***癌的受试者中发现的一种或多种蛋白质(或核酸)或组合的蛋白质指数(或组合的核酸指数)的水平。这样的正常对照水平和截止点可能基于分子是单独地被使用还是在公式中与其他蛋白质组合成指数而变化。可替代地，正常对照水平可以是来自先前测试的受试者的蛋白质图谱的数据库，这些测试的受试者在临床相关时间范围内未转换为疾病或障碍。
确定的水平可以与对照水平或截止水平或阈值水平相同，或者可以相对于对照水平或截止水平或阈值水平增加或减少。在一些方面，对照受试者是具有相同物种、性别、种族、年龄组、吸烟状况、体重指数(BMI)、当前治疗方案状态、病史或其组合的匹配对照，但不同于被诊断为对照没有患有有关的的疾病或没有患该疾病的风险的受试者。
短语“药学上可接受的载体”是本领域认可的，并且包括适于将化合物施用于对其有需要的个体的药学上可接受的材料、组合物或载体。
如本文所使用的术语“TNF(肿瘤坏死因子)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)受体激动剂”是指结合并激活死亡受体(DR)、TRAIL-R1(DR4)和TRAIL-R2(DR5)的那些药剂。TRAIL受体激动剂或TRA包括但不限于重组TRAIL、重组TRAIL变体、TRAIL衍生物、和结合TRAIL-R1和/或TRAIL-R2的抗TRAIL受体抗体以及结合TRAIL-R1和/或TRAIL-R2的激动性小分子或肽分子。在一些实施例中，抗TRAIL受体抗体包括针对TRAIL-R2(DR5)的抗体。
在一些实施例中，TRAIL抗体包括但不限于最初开发为用于癌症疗法的那些DR5抗体，即坎妥木单抗、替加珠单抗、来沙木单抗、HGS-TR2J/KMTR-2、LBY135、曲兹妥单抗、TAS266、DS-8273/DS-8273a、APG880、RG7386。
术语“PEG化”是指聚乙二醇(PEG)聚合物链与分子和宏观结构(如药物、治疗性蛋白质或囊泡)的共价或非共价连接或汞齐化的过程。
术语“预防(prevent/preventing/prevention)”和“预防性治疗(prophylactictreatment)”是指将药剂或组合物施用于有发展、易感或倾向患特定不良病症、障碍或疾病的风险的临床无症状个体，并因此涉及预防症状和/或其基本病因的发生。
药物组合物可以组装成试剂盒或药物***，用于阻止快速***的细胞(例如癌细胞)中的细胞周期。试剂盒或药物***可以包括载体工具，如盒、纸盒或管，这些载体工具中严格限定地具有一个或多个容器工具，如小瓶、管、安瓿、瓶子、注射器或袋子等。本公开的试剂盒或药物***还可以包括用于使用该试剂盒的相关说明书。
II.组合物
有用的组合物包括死亡受体(TRAIL受体)激动剂。死亡受体激动剂的实例包括纯化的TRAIL、分离的TRAIL、重组TRAIL、重组TRAIL变体、TRAIL衍生物、和结合TRAIL-R1和/或TRAIL-R2的抗TRAIL受体抗体以及结合TRAIL-R1和/或TRAIL-R2的激动性小分子或肽分子。在一些实施例中，抗TRAIL受体抗体包括针对TRAIL-R1(DR4)和TRAIL-R2(DR5)的抗体。
A.死亡受体激动剂
将组合物用于用死亡受体TRAIL-R1(DR4)和TRAIL-R2(DR5)激动剂(如PEG化的TNF(肿瘤坏死因子)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)类似物和抗DR5激动性抗体)治疗胰腺炎以及胰腺的纤维化疾病和障碍的方法中，用于减少炎症、纤维发生和疼痛并改善胰腺中的胰腺功能和胰腺炎。这些基于PEG化的蛋白质的药物和抗DR5抗体在胰腺炎和胰腺纤维化以及疼痛中具有疾病改善作用。它们安全、高度稳定并且有效，具有延长的半衰期。
1.TRAIL
TNF(肿瘤坏死因子)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是一种作为配体起作用的蛋白质，其诱导称为细胞凋亡的细胞死亡过程。TRAIL是由大多数正常组织细胞产生和分泌的细胞因子。它通过与某些死亡受体结合，主要在肿瘤细胞中引起细胞凋亡。TRAIL也被命名为CD253(分化簇253)和TNFSF10(肿瘤坏死因子(配体)超家族，成员10)。
在人类中，编码TRAIL的基因位于染色体3q26上，其与其他TNF家族成员不相近。TRAIL基因的基因组结构跨越约20kb，并且由222、138、42、106和1245个核苷酸的五个外显子区段和约8.2、3.2、2.3和2.3kb的四个内含子组成。TRAIL基因缺少TATA和CAAT盒，并且启动子区含有针对GATA、AP-1、C/EBP、SP-1、OCT-1、AP3、PEA3、CF-1和ISRE的推定应答元件。
TRAIL显示与肿瘤坏死因子超家族的其他成员的同源性。它由281个氨基酸组成，并且具有II型跨膜蛋白的特征(即没有前导序列和内部跨膜结构域)。N-末端胞质结构域在家族成员中不是保守的，然而C-末端胞外结构域是保守的并且可以从细胞表面被蛋白水解切割。TRAIL形成结合三种受体分子的同源三聚体。
TRAIL与死亡受体DR4(TRAIL-R1)和DR5(TRAIL-R2)结合。细胞凋亡过程是半胱天冬酶-8依赖性的。半胱天冬酶-8激活下游效应物半胱天冬酶，包括半胱天冬酶原-3、-6和-7，导致特异性激酶的活化。TRAIL还结合不含有胞质结构域(DcR1)或截短的死亡结构域(DcR2)的受体DcR1和DcR2。DcR1作为TRAIL-中和诱饵-受体起作用。DcR2的胞质结构域是功能性的并且激活NFκB。在表达DcR2的细胞中，TRAIL结合因此激活NFκB，导致已知拮抗死亡信号转导途径和/或促进炎症的基因的转录。已显示TRAIL与TNFRSF10B相互作用。
TRAIL能以天然或基因工程(重组)形式获得。TRAIL可以包括有利于三聚体形成的拉链氨基酸基序和/或促进其分离和纯化的末端基团。
合适的TRAIL蛋白包括人形式的TRAIL，其具有长度为281个氨基酸的氨基酸序列SEQ ID NO:1：
MAMMEVQGGPSLGQTCVLIVIFTVLLQSLCVAVTYVYFTNELKQMQDKYSKSGIACFLKEDDSYWDPNDEESMNSPCWQVKWQLRQLVRKMILRTSEETISTVQEKQQNISPLVRERGPQRVAAHITGTRGRSNTLSSPNSKNEKALGRKINSWESSRSGHSFLSNLHLRNGELVIHEKGFYYIYSQTYFRFQEEIKENTKNDKQMVQYIYKYTSYPDPILLMKSARNSCWSKDAEYGLYSIYQGGIFELKENDRIFVSVTNEHLIDMDHEASFFGAFLVG。
在优选的实施例中，TRAIL具有全长人形式(1-281)的从精氨酸-114(Arg，R)至甘氨酸-281(Gly，G)的氨基酸序列，并且具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列：
RERGPQRVAAHITGTRGRSNTLSSPNSKNEKALGRKINSWESSRSGHSFLSNLHLRNGELVIHEKGFYYIYSQTYFRFQEEIKENTKNDKQMVQYIYKYTSYPDPILLMKSARNSCWSKDAEYGLYSIYQGGIFELKENDRIFVSVTNEHLIDMDHEASFFGAFLVG。
通常，将TRAIL用乙二醇(EG)单元，更优选2个或更多个EG单元(即，聚乙二醇(PEG))在N-末端氨基酸残基处进行修饰。N-末端氨基酸残基包括但不限于赖氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、酪氨酸、组氨酸、苯丙氨酸或精氨酸。
通常，任何TRAIL类似物可适用于PEG化。类似物包括三聚体TRAIL，其中三种单体中的至少一种具有SEQ ID NO:1或2的氨基酸序列，伴随一个或多个氨基酸取代或缺失。TRAIL类似物可以使用常规分子生物学技术在体外产生。
TRAIL可以在其N-末端附接有亮氨酸或异亮氨酸拉链(ILZ)。在优选的实施例中，拉链基序是异亮氨酸拉链(Kim等人，BBRC，321:930-935(2004))。
2.死亡受体激动性抗体
在一些实施例中，死亡受体激动性抗体包括但不限于DR5抗体，即坎妥木单抗、替加珠单抗、来沙木单抗、HGS-TR2J/KMTR-2、LBY135、曲兹妥单抗、TAS266、DS-8273/DS-8273a、APG880、RG7386，或具有单一、双重或多重抗原或表位特异性的嵌合抗体和片段，如F(ab')2等，包括杂合片段。此类抗体和片段可以通过本领域已知的技术制备，并且可以根据产生抗体和筛选抗体的特异性和活性的一般方法筛选特异性和活性(参见，例如，Harlow和Lane.Antibodies[抗体],A Laboratory Manual.[实验室手册]Cold Spring HarborPublications[冷泉港出版社],纽约,(1988))。
许多非人抗体(例如，来源于小鼠、大鼠或兔的那些抗体)在人类中是天然抗原性的，因此当施用于人时可能产生不希望的免疫应答。因此，在本文所述的方法中使用人或人源化抗体用于减少施用于人的抗体将引起不期望的免疫应答的机会。人源化或嵌合的死亡受体激动性抗体可以包含基本上至少一个、并且典型地为两个可变结构域的全部，其中全部或基本上全部这些CDR区对应于非人免疫球蛋白(即，供体抗体)的那些，并且全部或基本上全部这些框架区是人免疫球蛋白共有序列的那些。优选地，死亡受体激动性抗体还包括免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，典型地为人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。可以相对于所提出的该抗体的功能(具体而言可能需要的效应子功能)来选择死亡受体激动性抗体的恒定结构域。在一些实施例中，死亡受体激动性抗体的恒定结构域是(或包括)人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM结构域。
抗体片段包括结合和抗体的结合特异性(并且不需要抗体恒定区的特定生物学功能)，例如对死亡受体具有特异性的结合片段。其他抗体区域可以被任何重链和轻链或其部分取代、改变或两者，期望对靶死亡受体的双特异性结合和结合特异性将被保留。对于抗体片段和肽形式，对死亡受体具有特异性的结合片段可以通过许多结合片段形式中的任何一种来体现，并且能以任何合适的方式连接，包括以用于抗体结合片段的任何多价和多特异性方式。在公开的抗体、抗体片段和多肽的情况下，这样的形式将是双特异性的而不是(或除了)多价的。结合片段形式的实例包括F(ab’)2、抗原结合片段(Fab)、半抗体、单链可变片段(scFv)、VhH结构域、V-NAR结构域、VH结构域、VL结构域、F(ab)3、双-scFv、双抗体、三抗体、四抗体和微小抗体。任何这些形式可以独立地用于体现对死亡受体具有特异性的结合片段，然后可以使用任何合适的接头或偶联来组合或连接。对死亡受体具有特异性的结合片段还可以各自用作多价和/或多特异性形式的抗体片段的结合片段部分。实例包括F(ab’)2、F(ab)3、双-scFv、双抗体、三抗体、四抗体和微小抗体。
3.死亡受体激动剂的类似物
可以修饰死亡受体激动剂以包括另外的部分，从而形成类似物。该部分可以是聚合部分、多肽、多糖、标记的示踪剂等。该部分可以与死亡受体激动剂非共价或共价连接。
在一些实施例中，该部分是聚环氧烷，如聚乙二醇(PEG)。聚乙二醇(PEG)是具有从工业制造到医药的许多应用的聚醚化合物。PEG的结构是(注意括号中的重复元素)：H-(O-CH2-CH2)n-OH。PEG也称为聚环氧乙烷(PEO)或聚氧化乙烯(POE)，这取决于其分子量。PEG、PEO或POE是指环氧乙烷的低聚物或聚合物。这三个名称在化学上是同义词，但历史上PEG在生物医学领域是优选的，而PEO在聚合物化学领域更为普遍。因为不同的应用需要不同的聚合物链长，所以PEG通常以分子量低于20,000g/mol使用，PEO以分子量高于20,000g/mol的聚合物使用，并且POE以任何分子量的聚合物使用。PEG和PEO是液体或低熔点固体，这取决于其分子量。PEG通过环氧乙烷的聚合而制备并且在300g/mol到10,000,000g/mol的宽的分子量范围内是可商购的。虽然具有不同分子量的PEG和PEO可用于不同的应用，并且由于链长效应而具有不同的物理性质(例如黏度)，但它们的化学性质几乎相同。不同形式的PEG也是可得的，这取决于聚合过程使用的引发剂-大多数常见的引发剂是单功能甲基醚PEG或甲氧基聚(乙二醇)，缩写为mPEG。较低分子量的PEG也可以作为较纯的低聚物获得，称为单分散、均匀或离散的。最近已经表明非常高纯度的PEG是结晶的，允许通过X射线衍射来确定晶体结构。由于纯低聚物的纯化和分离是困难的，因此这种质量类型的价格通常是多分散性PEG的10-1000倍。
也可获得具有不同几何结构的PEG。支化PEG具有从中央核心基团发出的三到十个PEG链。星形PEG具有从中央核心基团发出的10到100个PEG链。梳状PEG具有正常接枝到聚合物骨架上的多个PEG链。通常包含在PEG名称中的数字表示它们的平均分子量(例如，具有n＝9的PEG将具有约400道尔顿的平均分子量，并且将标记为PEG 400)。大多数PEG包括具有多个分子量分布的分子(即，它们是多分散的)。尺寸分布可以通过其重均分子量(Mw)和其数均分子量(Mn)在统计学上表征，这二者的比率称为多分散性指数(Mw/Mn)。MW和Mn可通过质谱法测量。
PEG化是将PEG结构与另一较大分子(例如治疗性蛋白质，其随后被称为PEG化蛋白质)共价偶联的行为。PEG化干扰素α-2a或-2b是通常用于丙型肝炎感染的可注射治疗剂。PEG可溶于水、甲醇、乙醇、乙腈、苯和二氯甲烷，并且不溶于二***和己烷。它与疏水分子偶联以产生非离子型表面活性剂。PEG含有潜在的有毒杂质，如环氧乙烷和1,4-二噁烷。如果应用于受损皮肤，乙二醇及其醚是肾毒性的。
聚乙二醇通过环氧乙烷与水、乙二醇或乙二醇低聚物的相互作用而产生。通过酸性或碱性催化剂来催化该反应。乙二醇及其低聚物优选作为起始材料而不是水，因为它们允许产生具有低多分散性(窄分子量分布)的聚合物。聚合物链长取决于反应物的比例。
HOCH2CH2OH+n(CH2CH2O)→HO(CH2CH2O)n+1H
取决于催化剂类型，聚合机理可以是阳离子型或阴离子型。环氧乙烷的聚合是放热过程。
PEG化(通常也称为聚乙二醇化)是聚乙二醇(PEG)聚合物链与分子和宏观结构(如药物、治疗性蛋白质或囊泡)的共价和非共价连接或汞齐化的过程，其随后被描述为PEG化的(聚乙二醇化的)。通常通过将PEG的反应性衍生物与靶分子一起孵育来实现PEG化。PEG与药物或治疗性蛋白质的共价连接可以“掩饰”药剂免受宿主免疫***的影响(降低免疫原性和抗原性)，并增加通过降低肾清除率来延长其循环时间的药剂的流体动力学尺寸(溶液中的尺寸)。PEG化还可以为疏水性药物和蛋白质提供水溶性。
PEG化是将聚合物PEG的链连接到可以提高许多治疗剂的安全性和效率的分子上的过程，这些分子最典型地是肽、蛋白质和抗体片段。它产生物理化学性质的改变，包括构象、静电结合、疏水性等的变化。这些物理和化学变化增加了治疗剂的全身性保留。而且，它可以影响治疗部分与细胞受体的结合亲和力，并且可以改变吸收和分布模式。
PEG是特别有吸引力的用于缀合的聚合物。与药物应用相关的PEG部分的具体特征是：水溶性、溶液中的高流动性、缺乏毒性和低免疫原性、易于从体内清除、以及体内分布改变。
TRAIL衍生物的生物活性可以通过选择性PEG化而增加。通过PEG化过程也可以增加药物的治疗效果。PEG化的应用增加了分子量、代谢位点的防御和免疫原性位点的抑制，从而增加了体内半衰期和稳定性并降低了免疫原性。此外，由于PEG增加肽和蛋白质的分子量，所以与PEG结合的肽和蛋白质的肾脏***减少，因此PEG化具有在药代动力学和药效学上均增加效果的优点。
优选地，聚乙二醇或其衍生物是线性或支化的，或者可以是二聚体或三聚体的形式，没有或具有对于TRAIL的接头和/或其他PEG分子。代表性的聚乙二醇衍生物包括甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯、甲氧基聚乙二醇N-羟基琥珀酰亚胺、甲氧基聚乙二醇丙醛、甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺、或这些衍生物的多重支化类型。优选地，聚乙二醇衍生物是线性甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺、分支型甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺或三聚甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺，并且更优选地是三聚甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺。
在用聚乙二醇将TRAIL衍生物PEG化或制备了其衍生物之后，可通过质谱仪、液相色谱法、X射线衍射分析、偏振测定以及构成PEG化的TRAIL的代表性元件的计算值与测量值之间的比较来确定类似物的分子结构。
4.赋形剂
TRAIL、抗体或衍生物可以被配制用于给药。通常对于注射、吸入、肺部给药或眼内给药，这将会是冻干或喷雾干燥的粉末形式，其可以用无菌水、缓冲液或其他赋形剂(如Goodman和Gilman中列出的那些)溶解用于给药。
用聚乙二醇或其衍生物PEG化的TRAIL衍生物可以制备成液体或悬浮液(任选地包括缓冲剂、悬浮剂、抑菌剂或黏度改性剂)，然后包装成安瓿或小瓶单位给药形式。通过过滤、辐照或诸如环氧乙烷等气体对组合物进行灭菌。
III.制造组合物的方法
A.制造TRAIL和PEG化的TRAIL的方法
PEG化的第一步是PEG聚合物在一个或两个末端的官能化。在每个末端用同一反应性部分活化的PEG被称为“同双功能的”，而如果存在的官能团不同，则PEG衍生物被称为“异双功能的”或“异功能的”。制备PEG聚合物的化学活性或活化衍生物以将PEG连接到所希望的分子上。
用于蛋白质缀合的整体PEG化方法可广泛地分为两种类型，即溶液相分批方法和柱上补料分批方法。简单且通常采用的分批方法包括在合适的缓冲溶液中将试剂混合在一起，优选在4℃与6℃之间的温度下，然后使用基于其物理化学性质的合适的技术(包括尺寸排阻色谱法(SEC)、离子交换色谱法(IEX)、疏水相互作用色谱法(HIC)以及膜或水两相体系)分离和纯化所需产物。
选择用于PEG衍生物的合适官能团基于与PEG偶联的分子上可用的反应性基团的类型。对于蛋白质而言，典型的反应性氨基酸包括赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。N-末端氨基基团和C-末端羧酸也可以通过与醛官能聚合物缀合而用作位点特异性位点。用于形成第一代PEG衍生物的技术通常使PEG聚合物与可与羟基基团反应的基团(典型地为酸酐、酰氯、氯甲酸酯和碳酸酯)进行反应。在第二代PEG化化学中，更有效的官能团如醛、酯、酰胺等可用于缀合。
这些异双功能PEG在连接两个实体方面非常有用，其中需要亲水性、柔性和生物相容性间隔物。异双功能PEG的优选端基是马来酰亚胺、乙烯基砜、吡啶基二硫化物、胺、羧酸和NHS酯。第三代PEG化试剂(其中聚合物的形状已经为支化、Y形或梳形的)是可得的，其显示出黏度降低和器官积聚不足。PEG化化合物的清除时间的不可预测性可能导致肝脏中大分子量化合物的积累，这产生具有未知毒理学后果的包涵体。此外，链长的改变可能导致意外的体内清除时间。
B.制作死亡受体激动剂的方法
这些抗体和抗体片段可以通过本领域中已知的用于产生多肽的任何方法(例如体外合成、重组DNA生产等)产生。这些抗体可通过重DNA技术产生。抗DR5激动性抗体可使用重组免疫球蛋白表达技术产生。免疫球蛋白分子(包括人源化抗体)的重组产生描述于美国专利号4,816,397(Boss等人)、美国专利号6,331,415和4,816,567(两者都是Cabilly等人)、英国专利GB 2,188,638(Winter等人)以及英国专利GB 2,209,757。用于免疫球蛋白(包括人源化免疫球蛋白)的重组表达的技术也可见于Goeddel等人，Gene ExpressionTechnology Methods in Enzymology[酶学基因表达技术方法]第185卷Academic Press[学术出版社](1991)，以及Borreback,Antibody Engineering[抗体工程],W.H.Freeman(1992)。涉及重组抗体的产生、设计以及表达的另外信息可以发现于Mayforth,DesigningAntibodies[设计抗体],Academic Press[学术出版社],圣地亚哥(1993)中。
还可以通过用合成或纯化的单体的、同聚的或异聚的DR5对动物进行免疫来产生抗体。将免疫血清应用于肽亲和柱以产生高度特异性的免疫试剂。
本文所述的人抗体和人源化抗体可通过任何已知技术制备。用于产生人单克隆抗体的技术的实例包括由Boerner等人,J.Immunol.[免疫学杂志],147(1),86-95(1991)描述的那些。本文所述的人抗体(及其片段)也可以使用噬菌体展示文库产生(参见，例如，Marks等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],222,581-597(1991))。本文所述的人抗体也可以从转基因动物获得。例如，已经描述了能够产生响应于免疫的全套人抗体库的转基因突变小鼠(参见，例如，Jakobovits等人,PNAS,90,2551-255(1993)；以及Jakobovits等人,Nature[自然],362,255-258(1993))。
用于人源化非人抗体的方法是本领域中已知的。例如，可以通过将啮齿动物互补决定区(CDR)或CDR序列取代为人抗体的相应序列来产生人源化抗体。详细的程序公开于Jones等人，Nature[自然],321,522-525(1986)；Riechmann等人，Nature[自然],332,323-327(1988)；Verhoeyen等人，Science[科学],239,1534-1536(1988)中。
可用于产生人源化抗体的方法还描述于美国专利4,816,567；美国专利5,565,332；美国专利5,721,367；美国专利5,837,243；美国专利5,939,598；美国专利6,130,364；以及美国专利6,180,377中。
IV.使用方法
死亡受体激动剂可用于治疗胰腺炎、胰腺纤维化、胰腺疼痛或其任何组合。死亡受体激动剂可用于在炎症过程的早期阶段减少、停止或逆转胰腺炎症，减少、停止或逆转胰腺纤维化，以及减少或阻止胰腺疼痛。
含有用聚乙二醇或其衍生物PEG化的TRAIL衍生物的药物组合物的人体剂量可以根据患者的年龄、体重、性别、给药形式、健康状况和疾病水平而变化，并且可以在医生或药剂师的决定后施用，优选剂量为0.01至200mg/kg/天。
如实例中所述，研究了TRAILPEG在原代人PSC中的作用。具体地，测试了静脉施用的TRAILPEG在不同胰腺炎大鼠模型中的抗纤维化和抗疼痛功效，这些不同的胰腺炎大鼠模型包括雨蛙素诱导的急性胰腺炎(AP)和乙醇/雨蛙素/Lieber-Decarli(LD)饮食诱导的慢性胰腺炎(CP)。如本文所述，TRAIL信号转导在胰腺纤维发生以及TGFβ调节中起关键作用，其可直接使伤害感受器敏感并诱导胰腺痛觉过敏。TRAILPEG改善了急性和慢性期两者中胰腺炎的进展。令人惊讶的是，TRAILPEG治疗显著减少了CP大鼠模型的疼痛。
如下文详细描述的，TRAILPEG选择性地阻断PSC活化并根除活化的PSC(CP的发起者)，这导致CP的逆转。此外，通过靶向经由上调TGFβ使伤害感受器敏感的PSC，TRAILPEG降低CP相关的严重疼痛而没有全身性毒性。
检查TRAIL信号转导在胰腺纤维发生和疼痛中的作用，以确定在临床中利用死亡受体激动剂(例如，TRAILPEG和抗DR5抗体)用于胰腺炎疗法的可行性。提出了TRAIL信号转导朝向胰腺炎疗法和基于TRAIL的新型方案的新方向。
A.待治疗的病症
胰腺炎是胰腺的炎症。胰腺是胃后面的产生消化酶的一个大器官。有两种主要类型，急性胰腺炎和慢性胰腺炎。胰腺炎的体征和症状包括上腹部疼痛，恶心和呕吐。疼痛常常进入背部，并且通常很严重。在急性胰腺炎中，可能发生发烧并且症状通常在几天内消退。在慢性胰腺炎中，可能发生体重减轻、脂性粪和腹泻。并发症可能包括感染、出血、糖尿病或其他器官的问题。
急性胰腺炎最常见的原因是胆结石和重度酒精使用。其他原因包括直接创伤、某些药物、感染(如腮腺炎)和肿瘤等。慢性胰腺炎可能由于急性胰腺炎而形成。最常见的原因是多年使用重度酒精使用。其他原因包括高血脂水平、高血钙、一些药物和某些遗传性障碍(如囊性纤维化)等。吸烟会增加急性和慢性胰腺炎的风险。急性胰腺炎的诊断基于血液中淀粉酶或脂肪酶增加三倍。在慢性胰腺炎中，这些测试可能是正常的。诸如超声波和CT扫描等医学成像也可是有用的。
1.急性胰腺炎
急性胰腺炎通常用静脉液体、止痛药和有时抗生素治疗。通常，不允许进食或饮水，并且可以将管放入胃中。如果阻塞，可以进行称为内窥镜逆行胰胆管造影术(ERCP)的方法来打开胰管。在患有胆结石的人中，胆囊通常也会被移除。在慢性胰腺炎中，除了上述之外，可以使用通过鼻胃管的临时喂养来提供足够的营养。可能需要长期饮食改变和胰酶替代，并且偶尔进行手术以移除部分胰腺。
每年每100,000人中就有约30人发生急性胰腺炎。每年每100,000人中有8人发生慢性胰腺炎的新病例，并且目前影响美国每100,000人中约50人。在全球范围内，2013年胰腺炎导致123,000人死亡，而1990年83,000人死亡。其在男性中比女性更常见。慢性胰腺炎通常在30与40岁之间的年龄开始，而在儿童中很少见。急性胰腺炎于1882年首次在尸检中被描述，而慢性胰腺炎于1946年首次被描述。
胰腺炎最常见的症状是向背部扩展的严重的上腹部或左上腹部灼痛、恶心以及进食时更糟的呕吐。体格检查将根据内出血的严重程度和存在而变化。血压可能因疼痛而升高，或因脱水或出血而降低。心脏和呼吸频率通常会升高。腹部通常是柔软的，但程度小于疼痛本身。如在腹部疾病中常见的，可以从反射性肠麻痹减少肠鸣音。可能存在发烧或黄疸。慢性胰腺炎可导致糖尿病或胰腺癌。由于缺乏阻碍消化的胰酶，可能会出现原因不明的体重减轻。
百分之八十的胰腺炎病例是由酒精或胆结石引起的。胆结石是急性胰腺炎的一个最常见原因。酒精是导致慢性胰腺炎的一个最常见原因。
一些药物通常与胰腺炎有关，最常见的是皮质类固醇(如***龙)，但也包括HIV药物去羟肌苷和戊烷脒、利尿剂、抗惊厥丙戊酸、化疗剂L-天冬酰胺酶和硫唑嘌呤、通过增加血液甘油三酯的***、以及抗高血糖药剂(如二甲双胍、维达列汀和西他列汀)。用于治疗本身与胰腺炎事件增加相关的病症的药物也可能偶然与胰腺炎有关。实例包括治疗血脂异常的他汀类药物和治疗糖尿病的列汀类药物。根据美国食品和药品管理局的MedWatch监测***和已发表的报告，非典型抗精神病药如氯氮平、利培酮和奥氮平也可能引起胰腺炎。
其他常见原因包括创伤、腮腺炎、自身免疫性疾病、高血钙、低体温和内窥镜逆行胰胆管造影术(ERCP)。胰腺***是胰腺常见的先天性畸形，其可能是一些复发病例的基础。2型糖尿病与高出2.8倍的风险相关。
不太常见的原因包括胰腺癌、胰管结石、血管炎(胰腺中的小血管炎症)、柯萨奇病毒感染以及卟啉症—特别是急性间歇性卟啉症和红细胞生成性原卟啉症。
存在一种导致胰腺内胰蛋白酶原的活化的遗传形式，这导致自身消化。涉及的基因可以包括编码胰蛋白酶原的胰蛋白酶1、编码胰蛋白酶抑制剂的SPINK1、或囊性纤维化跨膜传导调节蛋白。
胰腺炎的常见原因包括酒精/乙醇、胆结石、类固醇、创伤性自身免疫性胰腺炎、腮腺炎、高脂血症、低体温、甲状旁腺功能亢进、蝎螫伤、内窥镜逆行胰胆管造影术以及药物(通常是硫唑嘌呤和丙戊酸)。
许多传染剂被认为是胰腺炎的原因，包括：腮腺炎、柯萨奇病毒、乙型肝炎、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒。
胰腺炎的鉴别诊断包括但不限于胆囊炎、胆总管结石、穿孔性消化性溃疡、肠梗塞、小肠梗阻、肝炎和肠系膜缺血。诊断需要以下3个标准中的2个：可能向背部扩展的上腹部疼痛或模糊腹痛的特征性急性发作(见上述体征和症状)、血清淀粉酶或脂肪酶水平>正常上限的3倍、以及具有特征性变化的成像研究。CT、MRI、腹部超声波或内窥镜超声波可用于诊断。淀粉酶和脂肪酶是由胰腺产生的2种酶。脂肪酶的升高通常被认为是胰腺炎的更好指标，因为它具有更高的特异性并且具有更长的半衰期。对于成像，腹部超声波方便、简单、非侵入性且便宜。与其他成像方式相比，它对由胆结石造成的胰腺炎更敏感和具有特异性。然而，在25％-35％的患者中，胰腺的视野可能被肠气阻塞，使得其难以评估。通常在疼痛发作后超过48小时进行对比增强CT扫描，以评估胰腺坏死和额外的胰液以及预测疾病的严重程度。先前的CT扫描可能是虚假的安慰。如果怀疑胆汁引起胰腺炎，也可以使用ERCP或内窥镜超声波。
胰腺炎的治疗是支持性的，并且取决于严重程度。***通常适用于控制疼痛。有人声称***可能会使胆道口***收缩，但这是有争议的。没有临床研究表明***可以加重或引起胰腺炎或胆囊炎。为急性胰腺炎所接受的治疗将取决于诊断是针对不会引起并发症的轻度形式的病症，还是可能导致严重并发症的严重形式的病症。通过进入综合医院病房成功地进行了轻度急性胰腺炎的治疗。传统上，在炎症消退之前不允许人们进食，但最近的证据表明早期喂养是安全的并且改善了结果。由于胰腺炎可导致肺损伤并影响正常肺功能，因此偶尔通过经由鼻子连接的呼吸管输送氧气。一旦明确病症正在改善，那么可在几天后移除这些管。在急性胰腺炎发作期间可能导致脱水，因此将静脉内提供液体。与甚至轻度或中度急性胰腺炎病例有关的疼痛可能很严重，这意味着可能需要麻醉性止痛药。
重度胰腺炎与器官衰竭、坏死、感染性坏死、假囊肿和脓肿有关。如果被诊断患有重度急性胰腺炎，人们将需要进入高依赖病房或重症监护病房。由于其试图转移体液和营养素以修复胰腺，因此体内的液体水平可能会显著下降。液体水平的下降可导致体内血量的减少，这被称为低血容量性休克。低血容量性休克可能会危及生命，因为它可以很快使富氧血液的身体饥饿，因为身体需要生存。为避免进入低血容量性休克，将静脉内泵入液体。氧气将通过连接到鼻子上的管供应，并且通风设备可用于辅助呼吸。喂食管可用于提供营养素，连同适当的镇痛。
与轻度急性胰腺炎一样，有必要治疗基本病因—胆结石，停止服用药物，停止饮酒等。如果原因是胆结石，可能会推荐ERCP方法或去除胆囊。胆囊应在同一入院期间或胰腺炎两周内去除，以限制复发性胰腺炎的风险。如果胰腺炎的原因是酒精，则停止饮酒和治疗酒精依赖可能会改善胰腺炎。即使基本病因与饮酒无关，医生仍建议至少在六个月内避免饮酒，因为这会在恢复过程中对胰腺造成进一步的损害。口服摄入(尤其是脂肪)通常最初受到限制，但48小时内早期肠内喂养已表明可改善临床结果。静脉内更换液体和电解质。如果在最初的72-96小时治疗中没有得到改善，则经由管喂养开始营养支持以优于受分泌的胰酶影响最大的消化道的部分。
早期并发症包括休克、感染、全身炎症反应综合征、低血钙、高血糖和脱水。失血、脱水以及液体漏入腹腔(腹水)可导致肾衰竭。呼吸***并发症通常很严重。通常存在胸腔积液。疼痛导致的浅呼吸可导致肺萎缩。胰酶可能攻击肺部，导致炎症。严重的炎症可导致腹内高血压和腹腔间隔室综合征，进一步损害肾脏和呼吸功能，并可能需要用开腹术治疗来缓解压力。
晚期并发症包括复发性胰腺炎、以及胰腺假囊肿—已经被瘢痕组织围住的胰腺分泌物的集合—的发展。这些可能导致疼痛，被感染，破裂和出血，阻塞胆管并导致黄疸，或在腹部周围移动。急性坏死性胰腺炎可导致胰腺脓肿，即由坏死、液化和感染引起的脓液的集合。这种情况发生在大约3％的病例中，或者几乎60％的病例在胰腺中包含超过两个假囊肿和气体。
2.慢性胰腺炎
慢性胰腺炎是改变该器官的正常结构和功能的胰腺的长期炎症。它可以表现为先前受伤的胰腺中的急性炎症发作，或表现为伴随有持续性疼痛或吸收不良的慢性损伤。它是一种疾病过程，其特征在于对胰腺的不可逆损伤，与急性胰腺炎的可逆变化不同。慢性胰腺炎的年发病率为每100,000人中有5至12人，患病率为每100,000人中有50人。其在男性中比女性更常见。
与慢性胰腺炎一致的症状通常表现为由食物中的脂肪吸收不良引起的持续性腹痛或脂肪痢。由于吸收不良而经常发生显著的体重减轻，并且随着病症进展可能继续成为健康问题。患者也可能抱怨与食物摄入有关的疼痛，特别是那些含有高比例脂肪和蛋白质的膳食。
慢性胰腺炎的原因如下：酒精、自身免疫性障碍、导管内阻塞、特发性胰腺炎、肿瘤、缺血和钙化结石。病因因素、遗传易感性和疾病进展速度之间的关系需要进一步澄清，尽管最近的研究表明吸烟可能是发展为慢性胰腺炎的高危因素。在一小组患者中，慢性胰腺炎已表明具有遗传性。几乎所有囊性纤维化患者都确定有慢性胰腺炎，通常是从出生开始。在慢性胰腺炎患者中也鉴别出了囊性纤维化基因突变，但这些患者中没有其他囊性纤维化的表现。由于良性或恶性过程对胰管的阻塞可能导致慢性胰腺炎。
从遗传学立场看慢性胰腺炎的机制表明从儿童时期开始出现早发性严重的上腹部疼痛。它是一种常染色体显性疾病，在阳离子胰蛋白酶原基因PRSS1和突变R122H中鉴定了慢性胰腺炎疾病。R122H是遗传性慢性胰腺炎最常见的突变，在胰蛋白酶原蛋白的氨基酸位置122处用组氨酸替换精氨酸。当然，还有其他机制-酒精、营养不良和吸烟-每种机制都会对胰腺展示其自己的影响。
慢性胰腺炎的诊断基于对胰腺结构和功能的测试。在慢性胰腺炎的情况下，血清淀粉酶和脂肪酶可以适度升高，在急性病症中几乎总是发现淀粉酶和脂肪酶升高。胰泌素刺激试验被认为是诊断慢性胰腺炎的最佳试验。用于确定慢性胰腺炎的其他试验是血清胰蛋白酶原、计算机断层扫描、超声波和活组织检查。当慢性胰腺炎由遗传因素引起时，可以检测到ESR、IgG4、类风湿因子、ANA和抗平滑肌抗体的升高。
用于治疗慢性胰腺炎的不同治疗选择是医疗措施、治疗性内窥镜检查和手术。当可能时，治疗针对基本病因，并针对缓解疼痛和吸收不良。可能发生胰岛素依赖性糖尿病并且需要长期胰岛素疗法。腹痛可能非常严重，并且需要大剂量的镇痛药，有时包括阿片类。酒精戒断和饮食调整(低脂饮食)对于控制疼痛和减缓钙化过程非常重要。抗氧化剂可能有所帮助，但尚不清楚这些益处是否有意义。胰酶替代通常在治疗与慢性胰腺炎相关的吸收不良和脂肪痢方面有效。CP的治疗由给予胰酶的溶液和膳食组成。一些患者确实在酶替代下疼痛减少，并且由于它们相对安全，因此在大多数患者的治疗中，给慢性胰腺炎患者提供酶替代是可接受的步骤。在没有大导管介入的患者和患有特发性胰腺炎的患者中，治疗可更有可能成功。治疗慢性胰腺炎的手术趋于分为两个方面-切除和引流程序。选择手术的原因为是否存在假囊肿、瘘管、腹水或固定阻塞。
3.胰腺纤维化
纤维化是在修复或反应过程中在器官或组织中过量纤维***的形成。这可以是反应性、良性或病理状态。响应于损伤，这称为瘢痕化，如果纤维化由单一细胞系引起，则称为纤维瘤。在生理学上，纤维化起到沉积***的作用，***可以消除基础器官或组织的架构和功能。纤维化可用于描述纤维组织过度沉积的病理状态、以及愈合中***沉积的过程。
纤维化类似于瘢痕化的过程，其中两者都包含铺设***的受刺激的细胞，这些受刺激的细胞包含胶原蛋白和糖胺聚糖。称为巨噬细胞的免疫细胞、以及称为间质的表面之间的任何受损组织释放TGFβ。这有很多原因，包括附近组织的炎症，或伴随循环介体增加的广义炎症状态。TGFβ刺激成纤维细胞的增殖和活化，成纤维细胞沉积***。纤维化可发生在体内许多组织中，通常是由于炎症或损伤，并且实例包括：胰腺(慢性胰腺炎)，肝(肝硬化)，肺(肺纤维化、囊性纤维化、特发性肺纤维化)，心脏(心房纤维化、心内膜心肌纤维化、陈旧性心肌梗死)，脑(神经胶质瘢痕)，关节纤维化(膝、肩、其他关节)，克罗恩氏病(肠)，杜普伊特伦氏挛缩(手、手指)，瘢痕疙瘩(皮肤)，纵隔纤维化(纵隔的软组织)，骨髓纤维化(骨髓)，佩罗尼氏病(***)，肾源性***性纤维化(皮肤)，进行性大块纤维化(肺)；煤矿工人尘肺病的并发症，腹膜后纤维化(腹膜后腔的软组织)，硬皮病/***性硬化症(皮肤、肺)，以及一些形式的粘连性关节囊炎(肩部)。
4.治疗胰腺炎或胰腺疼痛障碍的方法
a.靶向PSC
病理学上，通过显著的纤维化来识别CP。胰腺纤维发生主要由胰腺星状细胞(PSC)协调(Erkan,M.等人，Gut[肠],2012.61(2):172-178；Omary,M.B.等人，J Clin Invest[临床研究杂志],2007.117(1):50-59；Pinzani,M.,Gut[肠],2006.55(1):12-14)。在胰腺损伤或疾病期间，静息PSC(qPSC)经历活化并转化为促进胶原蛋白沉积并产生纤维化组织的增殖性、纤维发生性和收缩性肌成纤维细胞。本质上，活化的PSC(aPSC)是靶向胰腺的抗纤维化疗法的主要靶标(Omary,M.B.等人，J Clin Invest[临床研究杂志],2007.117(1):50-59；Apte,M.V.等人，J Gastroenterol Hepatol[胃肠病与肝脏病学杂志],2006.21增刊3:S97-S101)。因此，根除aPSC是预防、停止和/或逆转纤维发生及其并发症疼痛的合理策略。引入能够阻断qPSC活化成aPSC并选择性诱导aPSC凋亡(而不是qPSC)的分子靶向性药剂将在CP中提供强大的抗纤维化作用，因为耗尽了胰腺纤维发生的发起者。逆转胰腺纤维化会中止/逆转CP进展，从而减少CP相关疼痛并改善胰腺功能(图1)。
b.用死亡受体激动剂靶向PSC-TGFβ轴以治疗疼痛。
从急性疼痛到慢性疼痛的转变是一个积极研究的领域(Reichling,D.B.和Levine,J.D.,Trends Neurosci[神经科学展望],2009.32(12):611-618)。组织炎症引发导致外周敏化的一系列事件，即初级传入神经元(伤害感受器)的响应性增强，该初级传入神经元的主***于背根神经节(DRG)中并且其中心端突触具有脊髓中的二级神经元。然而，当组织纤维化突出时，对炎症后期的驱动因素知之甚少。如本文所述，用TGFβ处理DRG神经元诱导了兴奋性的变化并抑制了特定的电压依赖性钾电流(IA)，这是慢性胰腺炎中伤害性兴奋性的标志(Zhu,Y.等人，Mol Pain[分子疼痛],2012.8:65)。TGFβ本身可以使伤害感受器敏感，诱导胰腺痛觉过敏，并有助于增强伴随CP的行为反应。如本文所述，PSC在活化过程中上调TGFβ并影响DRG神经元的兴奋性。关于TRAIL和TGFβ在伤害感受中的作用的新知识也对以炎症和慢性疼痛为特征的其他病症有启示-实际上，已经指出“从急性到慢性疼痛状态的转变可能是改善衰弱性疼痛的临床疗法的研究中最重要的挑战”(Reichling,D.B.和Levine,J.D.,Trends Neurosci[神经科学展望],2009.32(12):611-618)。
C.待治疗的受试者
通常，待治疗的受试者包括患有胰腺炎、胰腺纤维化和/或胰腺疼痛或有患有这些疾病的风险的受试者。
在一些实施例中，待治疗的受试者包括患有胰腺炎、胰腺纤维化和/或胰腺疼痛或有患有这些疾病的风险的受试者，这些受试者还患有其他慢性或急性病症，例如2型糖尿病、肝纤维化、肝硬化、肝癌、肺纤维化、皮肤纤维化、胰腺癌、转移癌、自身免疫性病症(包括1型糖尿病和类风湿性关节炎)。
在其他实施例中，待治疗的受试者包括患有胰腺炎、胰腺纤维化和/或胰腺疼痛或有患有这些疾病的风险的受试者，这些受试者不患有另外的慢性或急性病症，例如2型糖尿病、肝纤维化、肝硬化、肝癌、肺纤维化、皮肤纤维化、胰腺癌、转移癌、自身免疫性病症(包括1型糖尿病和类风湿性关节炎)。
D.有效量的DR5激动剂
组合物以0.001mg/kg至100mg/kg的剂量施用，例如0.001mg/kg、0.01mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg或100mg/kg。例如，组合物以0.2mg/kg与20mg/kg之前的剂量或0.001mg/kg与20mg/kg之间的剂量施用。
在一些方面，保护了胰腺组织，减少了纤维化形成，逆转了胰腺纤维发生，减轻了疼痛，并且使健康的胰腺组织不受伤害。在一个方面，治疗纤维化疾病或障碍包括减轻疼痛。受试者的疼痛减少1％-100％，例如1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％和100％。
在一个方面，治疗纤维化疾病或障碍包括减少胰腺纤维化。受试者的胰腺纤维化减少1％-100％，例如1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％和100％。
在一个方面，治疗纤维化疾病或障碍包括减少胰腺炎症。胰腺炎症减少1％-100％，例如1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％和100％。
1.组合疗法的剂量和治疗方案
这些治疗方法通常包括治疗疾病或其症状或实现所希望的生理变化的方法，包括给予哺乳动物(尤其是人类)有效量的促凋亡剂以治疗胰腺炎或其症状，或以产生该生理变化。
死亡受体激动剂的有效量可以作为单剂量一次或多次施用于受试者。施用可以是每日一次、每日两次、每日三次、每周一次、每周两次、每两周一次或每月一次。
死亡受体激动剂的有效量可以作为单个单位剂量(例如作为剂量单位)或作为在有限时间间隔内给予的亚治疗剂量而施用。可以基于每天施用这样的单位剂量持续有限的时间段，例如多达3天、或多达5天、或多达7天、或多达10天、或多达15天、或多达20天、或多达25天。
在一些实施例中，作为主要疗法施用单位剂量。在其他实施例中，将单位剂量与组合疗法中的第二药剂一起施用。
a.组合疗法
在一些实施例中，将死亡受体激动剂与另外的活性剂进行组合。死亡受体激动剂和另外的活性剂可以一起施用，例如同一组合物的一部分，或者在相同时间或不同时间单独和独立地施用(即，施用配体或激动剂和第二活性剂被一段有限的时间彼此隔开)。因此，术语“组合”或“组合的”用于指配体或激动剂和第二活性剂的伴随、同时或顺序施用。组合可以伴随地(例如，作为混合物)、单独但同时地(例如，经由单独的静脉内线进入同一受试者；一种药剂口服被给予，而另一种药剂通过输注或注射等被给予)、或者顺序地(例如，首先给予一种药剂，然后是第二种药剂)施用。
在一些实施例中，将死亡受体激动剂与第二活性剂组合施用得到比单独或孤立地施用促凋亡剂和第二活性剂时更大的结果(即，通过组合得到的结果比通过单独的各个组分所得到的结果的加和更大)。在一些实施例中，组合中使用的一种或两种药剂的有效量低于单独施用时每种药剂的有效量。在一些实施例中，在组合疗法中使用时，一种或两种药剂的量是在单独使用时亚治疗的量。
组合疗法的治疗方案可包括一次或多次施用配体或激动剂。组合疗法的治疗方案可包括一次或多次施用第二活性剂。
在一些实施例中，在第一次施用第二活性剂之前施用促凋亡剂。在其他实施例中，在第一次施用第二活性剂之后施用配体或激动剂。
可以在施用第二活性剂之前或之后至少1、2、3、5、10、15、20、24或30小时或天施用配体或激动剂。
药剂的剂量方案或周期可以完全或部分重叠，或者可以是顺序的。例如，在一些实施例中，促凋亡剂的所有这些施用发生在施用第二活性剂之前或之后。可替代地，施用一种或多种剂量的促凋亡剂可以与施用第二治疗剂在时间上交错以形成均匀或不均匀的疗程，由此施用一种或多种剂量的促凋亡剂，然后一种或多种剂量的第二活性剂，然后一种或多种剂量的死亡受体激动剂；或者施用一种或多种剂量的第二活性剂，然后一种或多种剂量的促凋亡剂，然后一种或多种剂量的第二活性剂等；所有这些都根据研究人员或临床医生选择或期望的任何时间表来施用该疗法。
V.试剂盒
还公开了医疗试剂盒。医疗试剂盒可包括例如单独的或与第二治疗剂组合的促凋亡剂(优选激动性TRAIL受体的配体或激动剂)的剂量供应。当与第二治疗剂组合时，活性剂可以单独供应(例如，冻干的)，或者在药物组合物(例如，混合物)中供应。活性剂可以处于单位剂量，或者处于施用前应稀释的原液中。在一些实施例中，试剂盒包括药学上可接受的载体的供应。试剂盒还可以包括用于施用活性剂或组合物的装置，例如注射器。试剂盒可包括用于施用如上所述用途的化合物的印刷说明书。
参考以下非限制性实例来进一步理解本发明。本申请通篇引用的所有参考文献、专利和发表的专利申请的内容以及附图均通过引用并入本文。
实例
一般方法
为了测试TRAILPEG在体内的功效，如下对生物样品进行分析。
血液化学和肝脏脂质水平：
使用IDEXX分析仪测定血清淀粉酶、脂肪酶、ALT、AST、ALP、钠、胆固醇、甘油三酯、葡萄糖、白蛋白、蛋白质和尿素氮水平。
组织学和IHC：
将固定的胰腺样品用H&E、天狼星红、α-SMA染色，并用迈尔(Mayer's)苏木精复染。使用针对α-SMA、活性半胱天冬酶-3的适当抗体进行免疫荧光(IF)双染色，并用DAPI对细胞核进行染色。还进行了对胰腺组织的TUNEL测定以确定来自凋亡信号级联的DNA损伤。
实时PCR：
使用针对DR5、α-SMA、Pdgf-r、Col1a1、Col1a2、Col1a3、Tgf-b1、Tgf-br2、Tgf-br3、Bmp7、Timp1/3、Mmp2/3/7/9/13以及Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、FLIP和cIAP的适当的引物，通过RT-PCR(ABI7500)测量基因的表达水平。
蛋白质印迹法：
对来自关键标记物的胰腺匀浆的蛋白质提取物进行蛋白质印迹分析，这些关键标记物包括但不限于DR5、α-SMA、胶原蛋白、Timp、Tgfβ、Mmps、半胱天冬酶-8/-9/-3、裂解的PARP-1、Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、FLIP、FADD和t-Bid。
使用VFF测试和电刺激的疼痛行为：
在TRAILPEG处理后，将来自每个EtOH/雨蛙素/LD饮食诱导的CP组的4只大鼠用于VFF测试和电刺激研究。
数据和统计分析：
需要每组六到十只动物用于抗纤维化疗法以及每组四只动物用于抗疼痛疗法，以观察治疗组和对照组的平均值之间的差异，显著性水平为5％，功率为90％。在没有对样品的先验知识的情况下，由病理学家分析组织切片。对染色强度和程度在0-4的可接受的评分***中进行分级。通过NIH Image J分析免疫组织化学(IHC)图像。通过双尾费希尔(Fisher)氏精确检验、单向ANOVA或卡方检验(视情况而定)进行对照和上调/下调受体、生物标记物与具有和不具有TRAILPEG处理的组之间的比较。通过各个治疗组之间的多重比较来分析所有数据集。使用Prism软件(GraphPad)来进行所有分析。在所有分析中，P值小于0.05被认为具有统计学显著性。
实例1.TRAILPEG对胰腺细胞的影响。
PEG化是延长蛋白质药物半衰期(t1/2)的金标准并且是高效的商业策略(Harris等人，Nat Rev Drug Discov[自然综述：药物发现],2(3):214-221(2003))。超过十种PEG化的生物制剂是FDA批准的，并且PEG化的蛋白质通常被认为具有较低的免疫原性(Alconcel等人，Polymer Chemistry[聚合物化学],2(7):1442-1448(2011))。极短的T1/2的TRAIL(在啮齿动物中小于5分钟，在人类中小于30分钟)(Kelley等人，JPharmacol Exp Ther[药理学与实验治疗学杂志],299(1):31-38(2001)；Ashkenazi等人，J Clin Oncol[临床肿瘤学杂志],26(21):3621-3630(2008))使得难以研究TRAIL功能并验证特别在体内的药物疗效。通过用5kDa PEG分子稳定三聚体TRAIL来产生PEG化的TRAIL(TRAILPEG)，其在每个单体的终末端包含有利于在N-末端形成三聚体的异亮氨酸-拉链氨基酸基序(iLZ)(WO 2007/145457)。相对于重组TRAIL，如杜拉乐明(Dulanermin)(基因科技公司(Genentech))，TRAILPEG显著改善了大鼠和猴子中的稳定性和更长的循环半衰期(Lemke,J.等人，Cell Death Differ[细胞死亡与分化],2014.21(9):1350-1364)，对杜拉乐明在临床中进行了研究并显示出良好的安全性但较低的疗效。
材料和方法
为了研究胰腺毒性的可能性，在胰腺腺泡细胞(AR42J，ATCC CRL-1492)(ATCC)和原代人胰岛(胰腺)(切尔普基公司(Celprogen)，托伦斯(Torrance)，加利福尼亚州)中测试了TRIALPEG。将AR42J细胞(ATCC)维持在补充有20％胎牛血清(FBS；西格玛公司(Sigma)，圣路易斯(St Louis)，密苏里州(MO))、100U/ml青霉素/链霉素的RPMI 1640培养基(康宁公司(Corning cellgro)，马纳萨斯(Manassas)，维吉尼亚州(VA)，美国)中。将人胰腺郎格罕氏岛细胞(#35002-04，切尔普基公司，托伦斯，加利福尼亚州)维持在人胰腺郎格罕氏岛原代细胞培养完全胞外基质(#E35002-04，切尔普基公司)和具有血清的培养基(切尔普基公司，#M35002-04S)中。将细胞在37℃在5％CO2的潮湿气氛中进行培养。简言之，将2×104个细胞在96孔板中培养24小时，然后用TRAILPEG(0、101、102、103ng/mL)处理3小时，并细胞死亡MTT测定法来分析细胞活力。孵育后，将MTT溶液加入各孔中并孵育4小时。使用板读数器(美国宝特仪器股份有限公司(Bio-Tek Instruments Inc)，威努斯基(Winooski)，佛蒙特州(VT))测定430nm处的吸光度。
结果
如图2所示，TRAILPEG对腺泡细胞(AR42J)和原代人胰岛不显示任何毒性。
实例2：培养活化的胰腺星状细胞对TRIAL诱导的细胞凋亡变得敏感。
结果显示，当原代人PSC被培养活化时，PSC转化为肌成纤维细胞样细胞并上调DR4和DR5以及其他纤维发生性标记物，并通过上调的DR5/DR4对TRAILPEG变得高度敏感。
活化的原代人PSC(aPSC)，而非静息PSC(qPSC)，上调DR并对TRAIL介导的细胞凋亡变得敏感。
材料和方法
测试了原代人PSC中TRAIL诱导的细胞凋亡。根据制造商的说明，使人PSC(赛恩斯赛尔研究实验室(ScienceCell Research Lab))在补充有2％FBS、1％星状细胞生长补充剂和1％青霉素/链霉素溶液的SteCM培养基(赛恩斯赛尔公司(ScienceCell))中生长。将2×105个PSC在涂有聚-L-赖氨酸的6孔板中培养并培养2天(静息)和7天(活化)，并收获用于分析。与其他细胞不同，在连续世代培养(例如培养超过5天)下，包括肝星状细胞(HSC)和胰腺星状细胞(PSC)的星状细胞可以被激活并分化成活化的星状细胞。在静息和活化细胞状态下通过蛋白质印迹法分析DR5和DR4、α-SMA、胶原蛋白和TGFβ以及PDGFR和TGFβ的表达。只需培养7天即可诱导活化。
结果
活化诱导了PSC的形态学变化并显著上调纤维发生性标记物(并且重要的是DR4和DR5)(图3A-3F)。在将细胞用静息或活化状态的TRAILPEG(1μg/mL)处理3小时的情况下，在aPSC中清楚地观察到TRAIL诱导的细胞凋亡但在qPSC中没有观察到，如通过MTT测定法测量的细胞凋亡特征和定量细胞死亡所证明的(图4)。
监测TRAIL信号分子、纤维化标记物和凋亡标记物的调节。
在活化期间在原代人PSC中监测到TRAIL信号分子、纤维化标记物和凋亡标记物的调节。在原代人胰岛和胰腺腺泡细胞中证实了安全性。
材料和方法
在原代人PSC(赛恩斯赛尔公司(ScienceCell))中以蛋白质和mRNA水平筛选代表性TRAIL信号分子和纤维化相关分子。在SteCM培养基中对PSC进行培养活化2天、4天和7天并收获。通过qPCR和蛋白质印迹法分析TRAIL信号分子(DR5、DR4和FLIP)以及纤维化标记物(α-SMA、Pdgf-r、胶原蛋白类型-1/2/3、Mmps、Timps、胶原蛋白和TGFβ)、以及凋亡和抗凋亡标记物(包括半胱天冬酶-8、-9、-3，裂解的PARP-1，BCL-2，BCL-XL，FLPI和cIAP)的表达。通过显微镜观察PSC形态的变化。一旦确认了TRAIL信号分子的表达模式，就研究了TRAIL诱导的凋亡在PSC活化期间的作用。针对分子研究，将静息和培养活化的PSC(2至7天)用1μg/mL的TRAILPEG进行处理。将活化的PSC用或不用TRAILPEG(1μg/mL)处理3小时，并通过qPCR进行分析。
结果
活化的PSC上调多种抗凋亡蛋白，如BCL-2、BCL-XL、X-IAP，但细胞仍然对TRAIL诱导的细胞凋亡敏感，如通过上调的裂解的(Cl)PARP-1、Cl Casep-8和Cl Casp-3所证明的。在大多数原发性癌细胞的情况下，这种上调的抗凋亡蛋白强烈抑制TRAIL诱导的细胞死亡，引起TRAIL抗性。还表明，当与常规毒性剂，包括癌症药物如阿霉素(DOX，100nM)、顺铂(CIS，10μM)或过氧化氢(H2O2，10μM)一起孵育时，活化的PSC难以杀死。在活化的PSC与TRAILPEG(1μg/mL)一起孵育3小时并且与毒性剂一起孵育48小时的情况下，只有TRAILPEG诱导强烈的细胞凋亡，因为TRAILPEG处理的细胞上调Cl PARP-1、Cl Casp-8、Cl Casp-3和Cl Casp-9。
培养活化的原代人PSC上调多种抗凋亡蛋白(BCL-XL、BCL-2、X-IAP)，但仍然对TRAIL诱导的细胞凋亡敏感，如通过上调的裂解的(Cl)PARP-1、Cl Casp-8(半胱天冬酶-8)和Cl Casp-3(半胱天冬酶-3)所证明的。
实例3：抗DR5抗体，而不是抗DR4抗体，在活化的胰腺星状细胞中诱导选择性细胞凋亡。
TRAIL通过结合其认知受体DR4和DR5诱导细胞凋亡。为了研究这两种TRAIL受体是否是诱导活化PSC中的细胞凋亡所必需的，通过用人抗DR4激动性抗体(马帕木单抗)或抗DR5激动性抗体(坎妥木单抗)处理活化的PSC来测量半胱天冬酶3/7活性(凋亡标记物)。针对DR4或DR5特异性抗体治疗，将PSC在96孔板(康宁公司)中培养活化7天，并添加连续浓度(0、101、102、103ng/mL)的具有蛋白G(赛默飞世尔科技公司，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，#21193)的马帕木单抗(人抗DR4抗体，创意生物实验室公司(Creative Biolabs))或坎妥木单抗(人抗DR5抗体，创意生物实验室公司)并孵育3小时，并测试细胞的半胱天冬酶活性。根据制造商的方案，通过半胱天冬酶3/7测定试剂盒(普洛麦格公司(Promega))测量半胱天冬酶3/7活性。在板读数器(美国宝特仪器股份有限公司)上测量每个样品的发光，参数为1分钟滞后时间和0.5秒/孔读取时间(n＝4)。
为了研究活化的PSC的细胞膜上的DR4和DR5表达谱，将人原代PSC培养活化2天和7天，收获细胞，用冷PBS洗涤两次，并与抗人CD261(DR4)-PE或抗人CD262(DR5)-PE(eBioscience公司，圣地亚哥，加利福尼亚州)一起孵育30分钟。将小鼠IgG1K同种型对照PE(eBioscience公司)用作同种型对照。通过流式细胞术(Accuri C6，BD生物科学公司(BDBiosciences)，圣何塞(San Jose)，加利福尼亚州)分析TRAIL受体的细胞表面表达。通过使用FlowJo软件(FlowJo有限责任公司(FlowJo LLC)，阿什兰(Ashland)，俄勒冈州(OR))分析组织图解数据和平均荧光强度(MFI)数据。
结果
如图5所示，当用坎妥木单抗(DR5抗体，103ng/mL)处理活化的PSC时，半胱天冬酶-3/7活性增加10.79±1.42倍。相反，马帕木单抗(103ng/mL)不会增加半胱天冬酶-3/7活性(1.27±0.03倍)。接下来，通过使用在静息(第2天)和活化的PSC(第7天)中标记有藻红蛋白(PE)的DR4或DR5特异性抗体进行的流式细胞术分析来研究DR4和DR5在PSC的细胞膜上的表达。出乎意料地，与DR4抗体相比，仅在DR5抗体处理的活化PSC中观察到平均荧光强度(MFI)的大的转变(图6A和6B)。该结果显示DR5主要在活化的PSC的细胞表面上表达。总之，已经表明活化的PSC中TRAIL诱导的细胞凋亡主要由DR5而不是由DR4介导。
实例4：醇活化的胰腺星状细胞对TRAIL诱导的和抗DR5抗体诱导的细胞凋亡变得敏感。
慢性胰腺炎的主要原因(约占所有病例的70％)是酒精滥用。已经表明，当被醇，乙醇(EtOH)活化时，静息PSC显著上调TRAIL受体DR4和DR5，并对TRAIL诱导的细胞凋亡变得敏感。
材料和方法
为了研究醇对PSC活化的影响，将2×105个人原代PSC在涂有聚-L-赖氨酸的6孔板中培养并培养24小时并用乙醇(EtOH)(0、30、50mM)处理48小时。在醇刺激后，收获细胞用于实时qPCR分析和蛋白质印迹。分析TRAIL信号分子(包括DR4、DR5)和纤维发生性因子(包括a-SMA(Acta2)、胶原蛋白)的表达。为了研究在醇活化的PSC中TRAIL诱导的细胞凋亡，将2×104个细胞在96孔板中培养过夜，然后用50mM EtOH活化48小时。将EtOH活化的PSC用各种浓度(0、101、102、103ng/mL)的TRAIL、TRAILPEG、马帕木单抗(人抗DR4抗体)或坎妥木单抗(人抗DR5抗体)处理，并孵育3小时。如上所述通过MTT细胞死亡测定法和半胱天冬酶3/7测定法来测量细胞凋亡。
结果
如图7A-7E所示，与未活化的PSC相比，用EtOH(50mM)处理48小时的静息PSC连续上调α-SMA(Acta2，3.7.5±0.29倍)、胶原蛋白(Col1α2，4.0±0.43)、PDGF受体(Pdgf-r，1.9±0.25倍)以及TRAIL受体(DR4，2.1±0.12倍；DR5，1.8±0.0.09倍)的mRNA水平。此外，与非活化的PSC相比，由EtOH(50mM)活化的PSC显示出针对TRAILPEG的细胞死亡(59.95％±6.37％细胞死亡)和半胱天冬酶3/7活性(细胞凋亡标记物，10.45±1.60倍)显著增加(图8A和8B)。
当用不同浓度的TRAILPEG、坎妥木单抗(抗DR5激动性抗体)和马帕木单抗(抗DR4激动性抗体)处理醇活化的PSC而培养物中仍然存在醇时，只有TRAILPEG和坎妥木单抗剂量依赖性地诱导强烈的细胞凋亡(图9)。如实例3中所述，马帕木单抗，即抗DR4抗体，在醇活化的PSC中不诱导任何毒性。研究表明，只有抗DR5激动性抗体在活化的胰腺星状细胞中诱导细胞凋亡。人TRAIL和TRIALPEG与DR4和DR5两者都结合，但抗体仅与DR4或DR5结合。这些结果证实，通过靶向胰腺中上调的DR5，人TRAIL类似物和抗DR5激动性抗体可用于治疗胰腺纤维化、疼痛和胰腺炎。
实例5：TRAIL信号转导对PSC-伤害感受器-TGFβ轴的抗伤害性作用。
已经显示活化的PSC上调TGFβ(图3B)。因此，活化的PSC可能是TGFβ的主要细胞来源，并在疼痛中的伤害性敏化中起作用。
材料和方法
通过在无血清条件培养基(PSC-CM)中用从培养活化的PSC(7天)获得的条件培养基孵育分离的大鼠DRG，测试了活化的PSC对来自DRG(背根神经节)的感觉神经元的体外兴奋性的影响。使用Axopatch 200B放大器通过全细胞膜片钳电生理记录来获得兴奋性，并用Digidata 1200进行数字化。
结果
如图10A-10E所示，PSC-CM引起DRG的显著且可比较的响应，这表明PSC活化在伤害感受器敏化中起关键作用。如慢性胰腺炎模型中所证明的，TRAILPEG治疗逆转疼痛(图16，实例6)。因此，活化的PSC通过产生TGFβ而敏化伤害感受器并促进被TRAILPEG阻断的痛觉过敏。
实例6：利用TRAILPEG进行抗纤维化和抗疼痛的CP疗法。
为了证实死亡受体是抗纤维化和抗疼痛疗法和诊断的有价值的靶标，研究了TRAILPEG作为有效的抗纤维化、抗疼痛药物的功效。TRAILPEG在急性(图11)和慢性胰腺炎(图13A-15)中均显示出强烈的抗纤维化功效。其抗痛功效在大鼠CP模型中得到证实(图16)。该研究表明，全身施用的TRAILPEG改善动物模型中的急性胰腺炎(AP)和慢性胰腺炎(CP)两者，并导致CP模型中体细胞牵涉性痛觉过敏的下降。
材料和方法
在大鼠(220-240g)中通过每小时四次腹膜内注射20μg/kg的雨蛙素来诱导急性胰腺炎(AP)，并在最后一次注射雨蛙素2小时后用PBS或TRAILPEG(静脉内，4mg/kg，单次注射)处理。用PBS或TRAILPEG处理两个对照组，而不用雨蛙素。在TRAILPEG处理后24小时处死AP大鼠。
在大鼠中诱导了实验性醇诱导的慢性胰腺炎(CP)的模型(Bertola,A.等人，NatProtoc[自然实验手册],2013.8(3):627-637；Deng,X.等人，Am J Pathol[美国病理学杂志],2005.166(1):93-106)。如图12所示，将四组大鼠(每组n＝8)喂食Lieber-Decarli(LD)液体饮食持续七天，其中EtOH浓度从0逐渐增加至36％，然后喂食36％EtOH持续长达六周。在第14、21、28、35和41天用雨蛙素(每小时四次，腹膜内注射)处理大鼠。从第36天开始每天注射TRAILPEG(4mg/kg，静脉内)或PBS(对照)持续7天。将饮食中没有酒精的两个对照组用PBS或TRAILPEG进行静脉内处理。
Von Frey Filament(VFF)方法是研究啮齿动物疼痛机制的重要工具(Zhu等人，MolPain[分子疼痛],8:65(2012))。在第43天治疗后，使用VFF测试来研究伤害感受。在VFF研究后，处死动物并收获胰腺标本，并通过IHC、qPCR和蛋白质印迹进行分析。通过羟脯氨酸测定试剂盒(西格玛公司)分析胰腺组织中的羟脯氨酸(胶原蛋白标记物)水平。
结果
用H&E染色的以及用于浸润中性粒细胞(MPO)的免疫染色的胰腺组织的照片证明了与PBS处理的AP组(Cer-PBS)相比的TRAILPEG(Cer-TRAIL)的抗炎功效。静脉内TRAILPEG(Cer-TRAIL)保护了雨蛙素诱导的AP大鼠(Cer-PBS)中的急性胰腺炎(AP)。量化的结果示于图11中。
在CP模型中，通过胶原蛋白和α-SMA(活化的PSC标记物)(图13A和13B)以及多种纤维发生性标记物(图14A-14I)的高表达证明了胰腺纤维发生。TRAILPEG处理显著减少了胶原沉积，下调了α-SMA和PDGFRβ以及其他纤维发生性和胰腺炎标记物，包括胶原蛋白(Col1a2、Col3a1)、TIMP(金属蛋白酶的组织抑制剂)、纤连蛋白、Pap(胰腺炎相关蛋白)和TGFβ(图14A-14I)。CP模型中羟脯氨酸水平高度增加。TRAILPEG处理显著降低了胰腺中的羟脯氨酸含量(图15)。裂解的半胱天冬酶-8仅在TRAILPEG处理的CP中显著上调，这表明活化的PSC的根除可能是由于TRAIL介导的细胞凋亡。重要的是，通过胰腺组织的双重免疫染色(aPSC-a-SMA染色，细胞凋亡-TUNEL染色，以及细胞核-DAPI染色)，人们能够证实在α-SMA+aPSC中特异性地发生细胞凋亡(TUNEL染色)。向正常大鼠全身施用单独的TRAILPEG不会引起任何明显的毒性。例如，与未处理的CP大鼠相比，TRAILPEG处理显著地使ALT(肝脏损伤的有用制造者)的水平正常化。
CP伴有严重且持续的腹痛。令人惊讶的是，TRAILPEG在CP模型中显示出抗伤害性功效。TRAILPEG降低了乙醇/雨蛙素/LD饮食诱导的CP大鼠中的体细胞牵涉性痛觉过敏。如通过VFF测试所测量的，TRAILPEG(4mg/kg，静脉内)处理的动物(n＝4)显示体细胞牵涉性痛觉过敏的显著下降(图16)。现在已经表明，用NGF(神经生长因子)或TGFβ处理DRG神经元诱导了其兴奋性的变化并抑制特定电压依赖性钾电流(IA)，这是CP中伤害性兴奋性的标志(Zhu等人，Mol Pain[分子疼痛],8:65(2012))。TGFβ本身可以使伤害感受器敏感，诱导胰腺痛觉过敏。在初步研究中，验证了PSC在活化过程中上调TGFβ，并且从aPSC获得的条件培养基(CM)影响DRG神经元的兴奋性。活化的PSC上调TGFβ(图3B)，并且从aPSC获得的条件培养基(CM)影响DRG神经元的兴奋性(图10)。因此，活化的PSC是应该负责胰腺中的伤害性敏化的主要细胞类型，并且PSC活化在伤害感受器敏化中起关键作用。因此，该技术通过利用死亡受体激动剂选择性地阻断PSC活化或耗尽活化的PSC(TGFβ和NGF(神经生长因子)的主要细胞来源之一)来代表缓解疼痛的新方法。
序列表
<110> 约翰霍普金斯大学（The Johns Hopkins University）
Lee, Seulki
Pomper, Martin G
Park, Okyi
Swierczewska, Magdalena
Pasricha, Pankaj J
<120> 用死亡受体激动剂治疗胰腺炎和疼痛的组合物和方法
<130> JHU C 13835
<150> 62/319,454
<151> 2016-04-07
<160> 2
<170> PatentIn 版本3.5
<210> 1
<211> 281
<212> PRT
<213> 智人 （Homo Sapiens）
<400> 1
Met Ala Met Met Glu Val Gln Gly Gly Pro Ser Leu Gly Gln Thr Cys
1 5 10 15
Val Leu Ile Val Ile Phe Thr Val Leu Leu Gln Ser Leu Cys Val Ala
20 25 30
Val Thr Tyr Val Tyr Phe Thr Asn Glu Leu Lys Gln Met Gln Asp Lys
35 40 45
Tyr Ser Lys Ser Gly Ile Ala Cys Phe Leu Lys Glu Asp Asp Ser Tyr
50 55 60
Trp Asp Pro Asn Asp Glu Glu Ser Met Asn Ser Pro Cys Trp Gln Val
65 70 75 80
Lys Trp Gln Leu Arg Gln Leu Val Arg Lys Met Ile Leu Arg Thr Ser
85 90 95
Glu Glu Thr Ile Ser Thr Val Gln Glu Lys Gln Gln Asn Ile Ser Pro
100 105 110
Leu Val Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile Thr Gly
115 120 125
Thr Arg Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser Lys Asn Glu
130 135 140
Lys Ala Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser Ser Arg Ser Gly
145 150 155 160
His Ser Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg Asn Gly Glu Leu Val Ile
165 170 175
His Glu Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr Ser Gln Thr Tyr Phe Arg Phe
180 185 190
Gln Glu Glu Ile Lys Glu Asn Thr Lys Asn Asp Lys Gln Met Val Gln
195 200 205
Tyr Ile Tyr Lys Tyr Thr Ser Tyr Pro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys
210 215 220
Ser Ala Arg Asn Ser Cys Trp Ser Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr
225 230 235 240
Ser Ile Tyr Gln Gly Gly Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile
245 250 255
Phe Val Ser Val Thr Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala
260 265 270
Ser Phe Phe Gly Ala Phe Leu Val Gly
275 280
<210> 2
<211> 167
<212> PRT
<213> 智人 （Homo Sapiens）
<400> 2
Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile Thr Gly Thr Arg
1 5 10 15
Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser Lys Asn Glu Lys Ala
20 25 30
Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser Ser Arg Ser Gly His Ser
35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
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115 120 125
Tyr Gln Gly Gly Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile Phe Val
130 135 140
Ser Val Thr Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala Ser Phe
145 150 155 160
Phe Gly Ala Phe Leu Val Gly
165

Claims (14)

1.死亡受体激动剂在制备用于在患有或有风险患有急性胰腺炎或急性胰腺疼痛障碍的受试者中治疗急性胰腺炎或急性胰腺疼痛障碍的药物的用途，其中所述死亡受体激动剂包含选自由以下组成的组的激动剂：重组人肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白、TRAIL类似物、PEG化的TRAIL、死亡受体5激动性抗体及其组合；
其中所述TRAIL类似物是三聚体TRAIL，所述三聚体TRAIL包括三种单体中的至少一种具有SEQ ID NO：1或2的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述死亡受体激动剂包含选自由以下组成的组的DR5激动剂：来沙木单抗、替加珠单抗、坎妥木单抗、曲兹妥单抗、HGSTR2J/KMTR-2和LBY-135。
3.如权利要求1所述的用途，其中所述死亡受体激动剂包含选自由以下组成的组的多价DR激动剂：TAS266和scTRAIL-RBD。
4.如权利要求1所述的用途，其中所述抗体是全长抗体、其保留结合功能性的功能片段、人源化抗体、双功能或嵌合抗体、或其组合。
5.如权利要求1所述的用途，其中所述激动剂是TRAIL或用聚环氧烷改性的TRAIL。
6.如权利要求5所述的用途，其中所述聚环氧烷是分子量在5,000与50,000道尔顿之间的线性、支链、二聚体或三聚体聚乙二醇。
7.如权利要求1-6中任一项所述的用途，其中经由注射、鼻内、肺部或眼内施用所述药物。
8.如权利要求1-6中任一项所述的用途，其中，当所述药物治疗急性胰腺炎或急性胰腺疼痛障碍时，胰腺组织受到保护，并且/或者疼痛减轻，并且使健康的胰腺组织不受伤害。
9.如权利要求1-6中任一项所述的用途，其中治疗胰腺炎或胰腺疼痛障碍包括减轻疼痛。
10.如权利要求1-6中任一项所述的用途，其中治疗胰腺炎或胰腺疼痛障碍包括减少胰腺炎症。
11.如权利要求1-6中任一项所述的用途，其中每日一次、每日两次、每日三次、每周一次、每周两次、每两周一次或每月一次向所述受试者施用有效量的所述药物。
12.有效量的死亡受体5激动剂在制备用于治疗急性胰腺炎或急性胰腺疼痛障碍的药物组合物中的应用。
13.如权利要求12所述的应用，其中所述药物组合物包含第二治疗剂、预防剂或诊断剂。
14.一种包含剂量单位的组合物在制备用于治疗急性胰腺炎或急性胰腺疼痛障碍的试剂盒中的应用，所述组合物包含单独或与第二治疗剂组合的死亡受体5激动剂。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113424795B (zh) * 2021-05-24 2022-09-09 四川大学华西医院 一种急性胰腺炎动物模型的构建方法和用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101180072A (zh) * 2005-02-18 2008-05-14 健泰科生物技术公司 使用死亡受体激动剂和egfr抑制剂的方法
CN101247825A (zh) * 2005-02-02 2008-08-20 健泰科生物技术公司 Dr5抗体及其用途
WO2015164217A1 (en) * 2014-04-21 2015-10-29 Theraly Pharmaceuticals Inc. Trail receptor agonists for treatment of fibrotic diseases

Family Cites Families (134)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
DE69120146T2 (de) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
WO1992003917A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International Homologous recombination in mammalian cells
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
US6130364A (en) 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
US5763223A (en) 1995-06-29 1998-06-09 Immunex Corporation DNA encoding a cytokine that induces apoptosis
ATE342729T1 (de) 1997-01-15 2006-11-15 Phoenix Pharmacologics Inc Modifizierter tumor-nekrosefaktor
US6342363B1 (en) 1997-01-28 2002-01-29 Human Genome Sciences, Inc. Death domain containing receptor 4 nucleic acids and methods
US6072047A (en) 1997-02-13 2000-06-06 Immunex Corporation Receptor that binds trail
IL133602A0 (en) 1997-06-26 2001-04-30 Immunex Corp Protein that binds trail
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6329148B1 (en) 1999-02-16 2001-12-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford University Combined therapy of diterpenoid triepoxides and death domain receptor ligands for synergistic killing of tumor cells
US7550143B2 (en) 2005-04-06 2009-06-23 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses
US7534866B2 (en) 2005-10-19 2009-05-19 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses
ATE252601T1 (de) 1999-05-17 2003-11-15 Conjuchem Inc Lang wirkende insulinotrope peptide
AU766984B2 (en) 1999-09-30 2003-10-30 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Trail: an inhibitor of autoimmune inflammation and cell cycle progression
IL136156A0 (en) 2000-05-16 2001-05-20 Compugen Ltd Sequences of trail variants
US20040005314A1 (en) 2001-07-27 2004-01-08 Enrique Escandon Apo-2l receptor agonist and cpt-11 synergism
KR100396983B1 (ko) 2000-07-29 2003-09-02 이강춘 고반응성의 가지 달린 고분자 유도체 및 고분자와 단백질또는 펩타이드의 접합체
CA2422076A1 (en) 2000-09-18 2002-03-21 Idec Pharmaceutical Corporation Combination therapy for treatment of autoimmune diseases using b cell depleting/immunoregulatory antibody combination
KR20020056565A (ko) 2000-12-29 2002-07-10 황규언 인간유래 세포 소멸 인자와 그 수용체의 결합체인ＴＲＡＩＬ-ｓＤＲ5 결합체의 결정화에 의한 3차원 구조및 ＴＲＡＩＬ 결실 돌연변이 단백질
US20020169123A1 (en) 2001-02-27 2002-11-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regulating apoptosis in TRAIL-resistant cancer cells, while protecting normal, non-cancerous cells
EP1275378B1 (en) 2001-07-10 2009-04-15 Canon Kabushiki Kaisha Particulate construct comprising polyhydroxyalkanoate and method for producing it
DE10144252A1 (de) 2001-08-31 2003-03-27 Fraunhofer Ges Forschung Nanopartikel mit daran immobilisiertem biologisch aktivem TNF
EP2348043A1 (en) 2001-10-02 2011-07-27 Genentech, Inc. APO-2 ligand variants and uses thereof
US6908963B2 (en) 2001-10-09 2005-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith
US7906118B2 (en) 2005-04-06 2011-03-15 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Modular method to prepare tetrameric cytokines with improved pharmacokinetics by the dock-and-lock (DNL) technology
CA2489348A1 (en) 2002-06-24 2003-12-31 Genentech, Inc. Apo-2 ligand/trail variants and uses thereof
WO2004009774A2 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Amgen Inc. Protein conjugates with a water-soluble biocompatible, biogradable polymer
JP2006501820A (ja) 2002-09-06 2006-01-19 バイエル・フアーマシユーチカルズ・コーポレーシヨン 修飾ｇｌｐ−１受容体アゴニストおよびそれらの薬理学的使用法
US20050203142A1 (en) * 2002-10-24 2005-09-15 Zeldis Jerome B. Methods of using and compositions comprising immunomodulatory compounds for treatment, modification and management of pain
AU2003269378A1 (en) 2002-10-30 2004-05-25 Pfizer Products Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating companion animal cancer
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
CA2524456A1 (en) 2003-05-09 2004-11-25 Genentech, Inc. Apo2l (trail) receptor binding peptides and uses thereof
US7186699B2 (en) 2003-06-03 2007-03-06 Cell Genesys, Inc. Method for treating cancer by vector-mediated delivery of one or more anti-angiogenic or pro-apoptotic genes
US7795404B1 (en) 2003-08-08 2010-09-14 Five Prime Therapeutics, Inc. Human soluble notch receptor ligands
GB0328261D0 (en) 2003-12-05 2004-01-07 Univ Groningen Improved cytokine design
US8003111B2 (en) 2005-04-06 2011-08-23 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dimeric alpha interferon pegylated site-specifically shows enhanced and prolonged efficacy in vivo
US8034352B2 (en) 2005-04-06 2011-10-11 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Tetrameric cytokines with improved biological activity
US20110020273A1 (en) 2005-04-06 2011-01-27 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Bispecific Immunocytokine Dock-and-Lock (DNL) Complexes and Therapeutic Use Thereof
WO2006107617A2 (en) 2005-04-06 2006-10-12 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses
ES2246694B1 (es) 2004-04-29 2007-05-01 Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. Nanoparticulas pegiladas.
AU2005264993A1 (en) 2004-06-18 2006-01-26 Genentech, Inc. Use of Apo2L receptor agonists and NK cells or NK cell activators
MX2007000216A (es) 2004-07-08 2007-03-15 Amgen Inc Peptidos terapeuticos.
US20060046961A1 (en) 2004-09-02 2006-03-02 Mckay William F Controlled and directed local delivery of anti-inflammatory compositions
MX2007002855A (es) * 2004-09-08 2007-04-27 Genentech Inc Metodos para usar ligandos de receptor de muerte y anticuerpos cd20.
EP1805216A2 (en) 2004-10-18 2007-07-11 Novo Nordisk A/S Growth hormone conjugates
EP1695717A1 (en) 2005-02-23 2006-08-30 Ludwig-Maximilians-Universität Transport of nano-and macromolecular structures into cytoplasm and nucleus of cells
US20060228352A1 (en) 2005-02-24 2006-10-12 Schoenberger Stephen P TRAIL and methods of modulating T cell activity and adaptive immune responses using TRAIL
US8158129B2 (en) 2005-04-06 2012-04-17 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dimeric alpha interferon PEGylated site-specifically shows enhanced and prolonged efficacy in vivo
AU2006232310B9 (en) 2005-04-06 2011-07-21 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Improved stably tethered structures of defined compositions with multiple functions or binding specificities
EP1745802A1 (en) 2005-07-20 2007-01-24 Kreatech Biotechnology B.V. Method of conjugating therapeutic compounds to cell targeting moieties via metal complexes
CA2607056C (en) 2005-10-19 2015-11-24 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses
GB0524316D0 (en) 2005-11-29 2006-01-04 Medical Res Council Tumour necrosis factor-related apoptosis-inducing ligands (TRAILs)
US8293869B2 (en) 2005-12-16 2012-10-23 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of GLP-1
US20090081157A1 (en) 2006-01-09 2009-03-26 Richard Syd Kornbluth Immunostimulatory Combinations for Vaccine Adjuvants
KR100784485B1 (ko) 2006-01-18 2007-12-11 한국과학기술연구원 생분해성 온도 감응성 폴리포스파젠계 하이드로젤, 그의제조방법 및 그의 용도
WO2007102690A1 (en) 2006-03-06 2007-09-13 Postech Foundation Vector including the codon-optimized dna cassette for producing secretory recombinant dodecamer trail
KR100746962B1 (ko) 2006-04-04 2007-08-07 한국과학기술연구원 온도 감응성 포스파젠계 고분자-생리 활성 물질 복합체,그의 제조방법 및 그의 용도
JO3324B1 (ar) 2006-04-21 2019-03-13 Amgen Inc مركبات علاجية مجففة بالتبريد تتعلق بالعصارة الهضمية
CN101074261A (zh) * 2006-04-30 2007-11-21 北京同为时代生物技术有限公司 Trail受体1和/或trail受体2特异性抗体及其应用
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
KR100886783B1 (ko) 2006-06-12 2009-03-04 성균관대학교산학협력단 N-말단이 수식된 peg-trail 결합체, 이의 제조방법 및 이의 용도
BRPI0712629C1 (pt) 2006-06-20 2021-07-27 Genentech Inc método para a detecção da apoptose e método para a identificação de uma célula de câncer humano
AU2007263265A1 (en) 2006-06-21 2007-12-27 Apogenix Gmbh Differential IL-4 and/or IL-10 cytokine expression in human cancer
WO2008088582A2 (en) 2006-08-04 2008-07-24 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials related to trail isoforms
CA2663047A1 (en) 2006-09-06 2008-03-13 Phase Bioscience, Inc. Therapeutic elastin-like polypeptide (elp) fusion proteins
WO2009126558A1 (en) 2008-04-10 2009-10-15 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Modular method to prepare tetrameric cytokines with improved pharmacokinetics by the dock-and-lock (dnl) technology
WO2008120832A1 (en) 2007-03-30 2008-10-09 Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University Human neural stem cell secreting a smac, preparation method and use thereof
US8420598B2 (en) 2007-04-20 2013-04-16 B & L Delipharm Corp. Mono modified exendin with polyethylene glycol or its derivatives and uses thereof
KR100968591B1 (ko) 2007-06-14 2010-07-08 한국과학기술연구원 약물전달용 폴리포스파젠계 하이드로젤, 그의 제조방법 및그의 용도
US8986684B2 (en) 2007-07-25 2015-03-24 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating autoimmune disease
CA2695991A1 (en) 2007-08-09 2009-02-12 Daiichi Sankyo Company, Limited Immunoliposome inducing apoptosis into cell expressing death domain-containing receptor
EP2214716B1 (en) 2007-10-23 2021-11-17 Nektar Therapeutics Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom
RU2010121967A (ru) 2007-10-31 2011-12-10 Медиммун, Ллк (Us) Белковые каркасные структуры
GB0723059D0 (en) 2007-11-23 2008-01-02 Nat Univ Ireland Improved cytokine design
US20090203671A1 (en) 2007-11-27 2009-08-13 Abbott Laboratories Method of treating cancer
GB0724532D0 (en) 2007-12-17 2008-01-30 Nat Univ Ireland Trail variants for treating cancer
WO2009140469A2 (en) 2008-05-14 2009-11-19 Genentech, Inc. Methods of using apo2l/trail to treat cancer
US20100068302A1 (en) 2008-09-17 2010-03-18 Traslational Cancer Drugs Pharma, S.L. Methods and compositions for the treatment of cancer
GB0818649D0 (en) 2008-10-10 2008-11-19 Nat Univ Ireland Treatment of proliferative disorders with trail
JP2012504969A (ja) 2008-10-10 2012-03-01 アナフォア インコーポレイテッド Ｔｒａｉｌ−ｒ１及びｔｒａｉｌ−ｒ２に結合するポリペプチド
CN116925238A (zh) 2009-02-03 2023-10-24 阿穆尼克斯制药公司 延伸重组多肽和包含该延伸重组多肽的组合物
EP3243527B1 (en) 2009-02-13 2019-06-05 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
CN101870728A (zh) 2009-04-23 2010-10-27 派格生物医药(苏州)有限公司 新型Exendin变体及其缀合物
CN102481348A (zh) 2009-08-31 2012-05-30 Ibc药品公司 双特异性免疫细胞因子停靠-和-加锁(dnl)复合物及其治疗性用途
WO2011079293A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Ambrx, Inc Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand polypeptides and their uses
US20130195884A1 (en) 2009-12-31 2013-08-01 Deutsches Krebsforschungszentrum Novel modulators of trail signalling
WO2011106707A2 (en) 2010-02-26 2011-09-01 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to dr3
MX341119B (es) 2010-04-13 2016-08-09 Medimmune Llc Estructuras multiméricas específicas para ligando inductor de apoptosis relacionada con el factor de necrosis tumoral r2 (trail).
US8461311B2 (en) 2010-06-08 2013-06-11 Washington University TRAIL trimers, methods and uses therefor
KR101209266B1 (ko) 2010-06-30 2012-12-06 한국과학기술연구원 생분해성 및 온도 감응성 폴리포스파젠계 자성 고분자, 그의 제조 방법 및 용도
WO2012018616A2 (en) 2010-07-26 2012-02-09 Anaphore, Inc. Polypeptides that bind trail-r1 and trail-r2
AU2011321374B2 (en) 2010-10-29 2016-04-28 Daiichi Sankyo Company,Limited Novel anti-DR5 antibody
EP2468764A1 (en) 2010-12-24 2012-06-27 Rijksuniversiteit te Groningen TNF family ligand variants
EP2670426B1 (en) 2011-01-31 2017-05-10 The General Hospital Corporation Multimodal trail molecules and uses in cellular therapies
US20140105898A1 (en) 2011-02-28 2014-04-17 Istituto Di Ricovero E Cura A Carattere Scientific Materno-Infantile Burlo Garo Apoptosis-inducing molecules and uses therefor
US20140079722A1 (en) 2011-03-09 2014-03-20 Centrose, Llc Extracellular targeted drug conjugates
CN103561771B (zh) 2011-03-17 2019-01-04 伯明翰大学 重新定向的免疫治疗
US20130101553A1 (en) 2011-04-18 2013-04-25 The Regents Of The University Of California Inducing inactivation of fibrogenic myofibroblasts
RS60186B1 (sr) 2011-04-29 2020-06-30 Penn State Res Found Indukcija malog molekula trail genom u normalnim i tumorskim ćelijama kao antikancerska terapija
JP2014513128A (ja) 2011-05-03 2014-05-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 血管破壊剤とその使用
FI20115640A0 (fi) 2011-06-22 2011-06-22 Turun Yliopisto Yhdistelmähoito
US8586020B2 (en) 2011-06-30 2013-11-19 Korea Institute Of Science And Technology Poly(organophosphazene) composition for biomaterials
AU2012278944B2 (en) 2011-07-05 2015-09-17 Bioasis Technologies Inc. p97-antibody conjugates and methods of use
CN111635462A (zh) 2011-07-06 2020-09-08 江苏靶标生物医药研究所有限公司 一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体及其应用
CN102898526A (zh) 2011-07-28 2013-01-30 山东先声麦得津生物制药有限公司 一种肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体融合蛋白及其制备和应用
GB201203442D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
CA2867631C (en) 2012-03-28 2019-06-11 Amgen Inc. Dr5 receptor agonist combinations
WO2013156054A1 (en) 2012-04-16 2013-10-24 Universität Stuttgart The igm and ige heavy chain domain 2 as covalently linked homodimerization modules for the generation of fusion proteins with dual specificity
EP2877572B1 (en) 2012-07-24 2018-11-28 The General Hospital Corporation Oncolytic virus therapy for resistant tumors
US20150038511A1 (en) 2012-08-09 2015-02-05 Celgene Corporation Treatment of immune-related and inflammatory diseases
US9605074B2 (en) 2012-08-30 2017-03-28 The General Hospital Corporation Multifunctional nanobodies for treating cancer
JP6367802B2 (ja) 2012-08-30 2018-08-01 トゥルン イリオピスト 個体別の脳がん療法を選択する方法
MA37946B1 (fr) 2012-09-20 2018-09-28 Morphosys Ag Utilisation d’un anticorps anti-gm-csf pour le traitement de la polyarthrite rhumatoïde
US20140134647A1 (en) 2012-11-01 2014-05-15 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Novel crystal structure and ligand binding sites of trail receptor
US10131682B2 (en) 2012-11-24 2018-11-20 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to a cell binding molecules
US20150301058A1 (en) 2012-11-26 2015-10-22 Caris Science, Inc. Biomarker compositions and methods
US9873747B2 (en) 2013-01-31 2018-01-23 Thomas Jefferson University Fusion proteins that facilitate cancer cell destruction
SG11201506366SA (en) 2013-02-13 2015-09-29 Agency Science Tech & Res A Polymeric System for Release of an Active Agent
CN104342444B (zh) 2013-07-23 2017-11-17 四川大学华西医院 一种重组trail蛋白及其制备方法和用途
JP6332773B2 (ja) 2013-09-02 2018-05-30 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 薬物と細胞結合分子との共役のための新規細胞毒性分子
WO2015037000A1 (en) 2013-09-11 2015-03-19 Compugen Ltd Vstm5 polypeptides and uses thereof as a drug for treatment of cancer, infectious diseases and immune related diseases
PL222795B1 (pl) 2013-12-22 2016-09-30 Univ Warszawski Rekombinowane białko fuzyjne ProSTAT do zastosowania w leczeniu
US10464955B2 (en) 2014-02-28 2019-11-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Charged linkers and their uses for conjugation
US11299528B2 (en) 2014-03-11 2022-04-12 D&D Pharmatech Inc. Long acting TRAIL receptor agonists for treatment of autoimmune diseases
US9901620B2 (en) 2014-04-21 2018-02-27 Theraly Pharmaceuticals, Inc. Trail receptor agonists for treatment of fibrotic disease
US10975112B2 (en) 2015-06-16 2021-04-13 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Linkers for conjugation of cell-binding molecules

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101247825A (zh) * 2005-02-02 2008-08-20 健泰科生物技术公司 Dr5抗体及其用途
CN101180072A (zh) * 2005-02-18 2008-05-14 健泰科生物技术公司 使用死亡受体激动剂和egfr抑制剂的方法
WO2015164217A1 (en) * 2014-04-21 2015-10-29 Theraly Pharmaceuticals Inc. Trail receptor agonists for treatment of fibrotic diseases

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Dichotomy of fates of pancreatic epithelia in chronic pancreatitis: apoptosis versus survival;Umesh Kumar Bhanot等;《TRENDS in Molecular Medicine》;20060707;第351-357页 *
TRAIL在胰腺癌研究中的进展;王亚军;《中国现代普通外科进展》;20040831;第198-200页 *

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AU2017248264B2 (en) 2020-01-30
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