CN109085363A - Akap4抗原检测的检测试剂、检测试剂盒及应用与检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了AKAP4抗原检测的检测试剂、检测试剂盒及应用与检测方法，属于生物医学检验领域。本发明提供的AKAP4抗原检测的检测试剂，检测试剂简单易得，方便配制；将检测试剂应用于制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒，方便进行检测；AKAP4抗原检测的检测方法操作简单，步骤简略；易于操作；检测结果准确可靠，具有较好的实用性。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学检验领域，具体而言，涉及AKAP4抗原检测的检测试剂、检测试剂盒及应用与检测方法。
背景技术
流式细胞术可用于检测经过荧光标记的细胞、胚胎、RNA、DNA、蛋白质颗粒、微生物、病毒等生物微粒。检测中，流式细胞术需要借助于经过整形的激光光斑照射在位于液流中心的生物微粒上，生物微粒在激光光斑的激发下发出散射光和荧光。这些散射光和荧光信号被光电倍增管、光电二极管等光电转换器件收集，再经过检测***分析，从而得出生物微粒的物理和化学信息，如细胞尺寸、表面粒度、抗原信息等。基于流式细胞术的检测原理，激光光斑的形状和质量是影响检测灵敏度、单个微粒分辨力的关键因素。
目前已有的测AKAP4抗原检测方法为酶联免疫吸附法，借助酶标仪得到的吸光度值来进一步计算其浓度。该方法操作复杂，每次检测需要通过梯度校准品建立校准曲线，不利于少量样本检测。并且检测结果准确性与校准品、酶标仪型号、精密度等关系密切。因此，急需开发一个简单、准确、易操作的检测方法。
发明内容
本发明的第一目的在于提供AKAP4抗原检测的检测试剂，该检测试剂方便用于AKAP4抗原检测。
本发明的第二目的在于提供上述的AKAP4抗原检测的检测试剂在制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒中应用。
本发明的第三目的在于提供AKAP4抗原检测的检测试剂盒，方便于检测。
本发明的第四目的在于提供AKAP4抗原检测的检测方法，操作简单，快速易行。
为了实现本发明的上述目的，采用以下技术方案：
AKAP4抗原检测的检测试剂，检测试剂主要包括PBS样本洗涤液、样本固定液、羊抗人AKAP4的抗体，荧光素标记的抗羊的二抗。
上述的AKAP4抗原检测的检测试剂在制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒中应用。
AKAP4抗原检测的检测试剂盒，检测试剂盒包括PBS样本洗涤液、样本固定液、羊抗人AKAP4的抗体，荧光素标记的抗羊的二抗，样本固定液为包括0.3％的多聚甲醛的PBS缓冲液。
AKAP4抗原检测的检测方法，检测方法包括以下步骤：
用PBS样本洗涤液洗涤细胞样本，加入1-3倍体积的样本固定液固定细胞样本，得到固定化样本，将固定化样本分成检测固定样本和对照固定样本；
在检测固定样本中加入1-100μL羊抗人AKAP4的抗体，得到待检混合样本；对照固定样本加入非特异的IgG，得到对照混合样本；
待检混合样本和对照混合样本分别进行第一孵育，然后分别用PBS样本洗涤液洗涤，加入荧光素标记的抗羊的二抗进行第二孵育，然后用PBS样本洗涤液；
通过流式细胞仪检测。
本发明的有益效果为：本发明提供的AKAP4抗原检测的检测试剂，检测试剂简单易得，方便配制；将检测试剂应用于制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒，方便进行检测；AKAP4抗原检测的检测方法操作简单，步骤简略；易于操作；检测结果准确可靠，具有较好的实用性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实验例提供的AKAP4抗原检测结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的AKAP4抗原检测的检测试剂、检测试剂盒及应用与检测方法进行具体说明。
AKAP4抗原检测的检测试剂，检测试剂主要包括PBS样本洗涤液、样本固定液、羊抗人AKAP4的抗体，荧光素标记的抗羊的二抗。
通过抗原抗体反应，以及标记在抗体上的荧光素，就能较好的检测出细胞中的AKAP4抗原。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，样本固定液为包括0.1％-0.5％的多聚甲醛的PBS缓冲液。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，PBS样本洗涤液和样本固定液的pH值为6.0-8.0。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，荧光素为FITC、PE、PI和Percp中的一种。
荧光素的使用，方便在发生抗原抗体反应后，通过荧光素的检测，进一步的得到AKAP4抗原的信息。
上述的AKAP4抗原检测的检测试剂在制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒中应用。
AKAP4抗原检测的检测试剂盒，检测试剂盒包括PBS样本洗涤液、样本固定液、羊抗人AKAP4的抗体，荧光素标记的抗羊的二抗，样本固定液为包括0.3％的多聚甲醛的PBS缓冲液。
AKAP4抗原检测的检测方法，检测方法包括以下步骤：
用PBS样本洗涤液洗涤细胞样本，加入1-3倍体积的样本固定液固定细胞样本，得到固定化样本，将固定化样本分成检测固定样本和对照固定样本；
在检测固定样本中加入1-100μL羊抗人AKAP4的抗体，得到待检混合样本；对照固定样本加入非特异的IgG，得到对照混合样本；
待检混合样本和对照混合样本分别进行第一孵育，然后分别用PBS样本洗涤液洗涤，加入荧光素标记的抗羊的二抗进行第二孵育，然后用PBS样本洗涤液；
通过流式细胞仪检测。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，细胞样本含有1×104-1×106个/mL细胞。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，固定细胞样本的温度为2-8℃，时间为4-9min。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，第一孵育的温度为2-8℃，时间为10min-24h；第二孵育的温度为2-8℃，时间为5-30min。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供AKAP4抗原检测的检测试剂，该检测试剂可以用于检测细胞样本中的AKAP4抗原。
AKAP4抗原检测的检测试剂包括PBS样本洗涤液、样本固定液、羊抗人AKAP4的抗体，荧光素FITC标记的抗羊的二抗。
样本固定液为包括0.1％的多聚甲醛的PBS缓冲液。PBS样本洗涤液和样本固定液的pH值为6.0。
本实施例提供的AKAP4抗原检测的检测试剂可以用于制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒。
本实施例还提供一种AKAP4抗原检测的检测试剂盒，该检测试剂盒包括上述的AKAP4抗原检测的检测试剂。
实施例2
本实施例提供AKAP4抗原检测的检测试剂，该检测试剂可以用于检测细胞样本中的AKAP4抗原。
AKAP4抗原检测的检测试剂包括PBS样本洗涤液、样本固定液、羊抗人AKAP4的抗体，荧光素PE标记的抗羊的二抗。
当然荧光素还可以是FITC、PI和Percp中的一种，还可以其他种类的荧光素。
样本固定液为包括0.3％的多聚甲醛的PBS缓冲液。PBS样本洗涤液和样本固定液的pH值为8.0。
本实施例提供的AKAP4抗原检测的检测试剂可以用于制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒。
本实施例还提供一种AKAP4抗原检测的检测试剂盒，该检测试剂盒包括上述的AKAP4抗原检测的检测试剂。
实施例3
本实施例提供AKAP4抗原检测的检测试剂，该检测试剂可以用于检测细胞样本中的AKAP4抗原。
AKAP4抗原检测的检测试剂包括PBS样本洗涤液、样本固定液、羊抗人AKAP4的抗体，荧光素PE标记的抗羊的二抗。
当然荧光素还可以是FITC、PI和Percp中的一种，还可以其他种类的荧光素。
样本固定液为包括0.5％的多聚甲醛的PBS缓冲液。PBS样本洗涤液和样本固定液的pH值为7.0。
本实施例提供的AKAP4抗原检测的检测试剂可以用于制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒。
本实施例还提供一种AKAP4抗原检测的检测试剂盒，该检测试剂盒包括上述的AKAP4抗原检测的检测试剂。
实施例4
本实施例还提供AKAP4抗原检测的检测方法，本实施例用实施例3提供的检测试剂进行检测，该检测方法包括以下步骤；
1.1取细胞浓度为1×104个/mL的细胞样本用PBS样本洗涤液洗涤1-3次；
1.2再用1倍的样本固定液固定经洗涤的细胞样本，固定温度2℃，时间4min，得到固定化样本；并将固定化样本分成检测固定样本和对照固定样本；
1.3检测固定样本加入1μL的羊抗人AKAP4的抗体得到待检混合样本，对照固定样本加入等量非特异的IgG得到对照混合样本；
1.4待检混合样本和对照混合样本，分别在2℃条件下进行第一孵育24h；
1.5步骤1.4中孵育过的待检混合样本和对照混合样本分别用PBS样本洗涤液洗涤1-3次；然后加入荧光素PE标记的抗羊的二抗；分别在2℃条件下进行第二孵育30min；
1.6经第二孵育的待检混合样本和对照混合样本用PBS样本洗涤液洗涤1-3次，然后通过流式细胞仪检测。
实施例5
本实施例还提供AKAP4抗原检测的检测方法，本实施例用实施例3提供的检测试剂进行检测，该检测方法包括以下步骤；
1.1取细胞浓度为1×106个/mL的细胞样本用PBS样本洗涤液洗涤1-3次；
1.2再用3倍的样本固定液固定经洗涤的细胞样本，固定温度8℃，时间9min，得到固定化样本；并将固定化样本分成检测固定样本和对照固定样本；
1.3检测固定样本加入100μL的羊抗人AKAP4的抗体得到待检混合样本，对照固定样本加入等量非特异的IgG得到对照混合样本；
1.4待检混合样本和对照混合样本，分别在8℃条件下进行第一孵育10min；
1.5步骤1.4中孵育过的待检混合样本和对照混合样本分别用PBS样本洗涤液洗涤1-3次；然后加入荧光素PE标记的抗羊的二抗；分别在8℃条件下进行第二孵育5min；
1.6经第二孵育的待检混合样本和对照混合样本用PBS样本洗涤液洗涤1-3次，然后通过流式细胞仪检测。
实施例6
本实施例还提供AKAP4抗原检测的检测方法，本实施例用实施例3提供的检测试剂进行检测，该检测方法包括以下步骤；
1.1取细胞浓度为1×105个/mL的细胞样本用PBS样本洗涤液洗涤1-3次；
1.2再用3倍的样本固定液固定经洗涤的细胞样本，固定温度6℃，时间5min，得到固定化样本；并将固定化样本分成检测固定样本和对照固定样本；
1.3检测固定样本加入50μL的羊抗人AKAP4的抗体得到待检混合样本，对照固定样本加入等量非特异的IgG得到对照混合样本；
1.4待检混合样本和对照混合样本，分别在5℃条件下进行第一孵育2h；
1.5步骤1.4中孵育过的待检混合样本和对照混合样本分别用PBS样本洗涤液洗涤1-3次；然后加入荧光素PE标记的抗羊的二抗；分别在5℃条件下进行第二孵育15min；
1.6经第二孵育的待检混合样本和对照混合样本用PBS样本洗涤液洗涤1-3次，然后通过流式细胞仪检测。
实验例
本实验例利用实施例6提供的AKAP4抗原检测的检测方法对含有AKAP4的血清样本进行检测。检测结果如图1所示。
从图1可以看出，本方法能明显区分出待检样本和对照样本，检测效果明显，准确可靠。
综上所述，本发明提供的AKAP4抗原检测的检测试剂，检测试剂简单易得，方便配制；将检测试剂应用于制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒，方便进行检测；AKAP4抗原检测的检测方法操作简单，步骤简略；易于操作；检测结果准确可靠，具有较好的实用性。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.AKAP4抗原检测的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂主要包括PBS样本洗涤液、样本固定液、羊抗人AKAP4的抗体，荧光素标记的抗羊的二抗。
2.根据权利要求1所述的AKAP4抗原检测的检测试剂，其特征在于，所述样本固定液为包括0.1％-0.5％的多聚甲醛的PBS缓冲液。
3.根据权利要求1所述的AKAP4抗原检测的检测试剂，其特征在于，所述PBS样本洗涤液和所述样本固定液的pH值为6.0-8.0。
4.根据权利要求1所述的AKAP4抗原检测的检测试剂，其特征在于，所述荧光素为FITC、PE、PI和Percp中的一种。
5.如权利要求1-4任一项所述的AKAP4抗原检测的检测试剂在制备AKAP4抗原检测的检测试剂盒中应用。
6.AKAP4抗原检测的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括PBS样本洗涤液、样本固定液、羊抗人AKAP4的抗体，荧光素标记的抗羊的二抗，样本固定液为包括0.3％的多聚甲醛的PBS缓冲液。
7.AKAP4抗原检测的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
用PBS样本洗涤液洗涤细胞样本，加入1-3倍体积的样本固定液固定所述细胞样本，得到固定化样本，将所述固定化样本分成检测固定样本和对照固定样本；
在所述检测固定样本中加入1-100μL羊抗人AKAP4的抗体，得到待检混合样本；所述对照固定样本加入等量非特异的IgG，得到对照混合样本；
所述待检混合样本和所述对照混合样本分别进行第一孵育，然后分别用所述PBS样本洗涤液洗涤，加入荧光素标记的抗羊的二抗进行第二孵育，然后用所述PBS样本洗涤液洗涤；
然后通过流式细胞仪检测。
8.根据权利要求7所述的AKAP4抗原检测的检测方法，其特征在于，所述细胞样本含有1×104-1×106个/mL细胞。
9.根据权利要求8所述的AKAP4抗原检测的检测方法，其特征在于，固定所述细胞样本的温度为2-8℃，时间为4-9min。
10.根据权利要求9所述的AKAP4抗原检测的检测方法，其特征在于，所述第一孵育的温度为2-8℃，时间为10min-24h；所述第二孵育的温度为2-8℃，时间为5-30min。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20181225 |